DE LA INFECCION MEMORANDUM DE UNA

ODELOS ANIMALES POR VII-I Y DEL SIDA: REUNION DE LA OMS

El virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) pertenece a la subfamilia lentivirus de los retrovirus. Los miembros de la familia Retrovitidae, o retrovirus, poseen viriones revestidos que contienen un genoma de ARN. La caracterstica que distingue a estos virus, y que le da el nombre a la familia, es la presencia en la partcula vrica de una polimerasa de ADN dependiente del ARN y codificada por el virus, tambin conocida como transcriptasa inversa. Al producirse la infeccin, esta enzima transcribe el genoma de ARN en un provirus de ADN, que luego queda integrado en el ADN cromosmico del husped. En este punto completa el ciclo de replicacin dirigiendo la sntesis de viriones infecciosos o bien su informacin gentica no se expresa o solo lo hace en parte y se produce as una infeccin encubierta. La existencia de los retrovirus se conoce desde hace muchos anos y se sabe que estn extensamente distribuidos en la naturaleza y que infectan a numerosas especies de vertebrados. Los retrovirus humanos se identificaron apenas a finales de los anos setenta; actualmente incluyen el virus Tlinfotrpico humano de los tipos 1 y II (VTLH-1, VTLH-II) y el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) (1). La familia Retrovitidae est dividida en tres subfamilias (Oncovirinae, Szcmavirinae y Lentivinhae), segn sus distintas caractersticas biolgicas que tambin coinciden con la diferente organizacin genmica. La subfamilia Oncovitime (del griego once = tumor), la ms extensa, incluye virus principalmente relacionados con trastornos linfoproliferativos en muchas especies animales. El genoma de los miembros de esta subfamilia consta de los genes estructurales gag, pe y env. El gen gag (sigla de antgeno especfico de grupo) codifica las protenas internas que constituyen el ncleo del virin; el gen pal (abreviatura de polimerasa), la transcriptasa inversa, y el gen env, las glucoprotenas de la envoltura del virus. Estos tres genes estn flanqueados por secuenciasrepetidas en ambos extremos del genoma, conocidas como repeticiones terminales prolongadas (RTP), que contienen elementos reguladores de la transcripcin. Desde el punto de vista morfolgico, los oncovirus se han dividido en tres grupos, denominados partculas de tipo B, C y D. En los oncovirus de tipo C estn incluidos, entre otros, los virus de leucemia/sarcoma murino, aviario y felino. Los oncovirus de tipo B estn representados por el virus del tumor mamario murino. El virus smico de Mason-Pfizer es el prototipo de los re-

Sepublica en el Bdetin oftbe UWdHedth

Organizahoz, Val. 66. No. 5, 1988, con el ttulo Animal models for HIV infection and AIDS: Memorandum from a WHO Meeting. 0 Organizacin Mundial de la Salud, 1988. La lista de participantes aparece en las pginas 786 y 787.

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trovirus de tipo D; ms recientemente otros virus de este tipo, los retrovirus smicos (RVS), se han identificado como los agentes causalesde una enfermedad mortal parecida al SIDA en macacos rhesus, conocida con el nombre de SIDA smico (SIDAS). Los otros dos retrovirus humanos conocidos (VTLH-I y VTLH-II) as como el de la leucemia bovina (VLB) y el T-linfotrpico smico tipo 1 (VTLS-I) se consideran generalmente como miembros de la subfamilia de los oncovirus, pero quiz deberan constituir una nueva subfamilia a causa de su organizacin genmica singular, que comprende la presencia de cuando menos dos genes reguladores. Los espumavirus (del latn rpuma) abarcan una serie de virus de numerosas especiesanimales, incluido el hombre, que no estn relacionados con ninguna entidad patolgica y con frecuencia se identifican por su capacidad para inducir la formacin de sincitios espumosos vacuolados en cultivos tisulares. Los lentivirus (del latn Zenti = lentos) son retrovirus no encgenos que causan enfermedades debilitantes crnicasdespus de infecciones persistentes prolongadas. La subfamilia LentivK nae comprende virus de ungulados (virus maedi-visna del carnero, virus de la artritis-encefalitis caprina (VAEC), virus de la anemia infecciosa equina (VAIE), virus de la inmunodeficiencia bovina (VIB), de felinos (virus de la inmunodeficiencia felina, VIF) y de primates humanos y no humanos (VIH y virus de la inmunodeficiencia smica, VIS). La caracterstica ms destacada del genoma de los lentivirus es la presencia de varios genes accesorioscon funciones reguladoras. Adems del gag, pod y ozv se han identificado por lo menos otros cinco genes (ta& trsl ati, SOTI 3 ORF/F y R). Algunos de estos genes acceQ, sorios son necesarios para la infecciosidad del virus y regulan la expresin de las protenas estructurales vricas. Hoy se dispone de varios sistemas de modelos animales de infeccin por VIH y SIDA, que pueden agruparse de la manera siguiente: a) infeccin de primates no humanos con lentivirus (virus de la inmunodeficiencia smica); b) infeccin de primates no humanos
con VIH;

c) infeccin de huspedes mamferos no primates con lentivirus especficos de especie; d) infeccin por otros virus (distintos de los lentivirus y los retrovirus) que inducen inmunodeficiencia, y e) posibles modelos nuevos (2, 3).

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Virus de la inmunodeficiencia

shica

(VIS)

Los virus de la inmunodeficiencia smica constituyen un grupo diverso de lentivirus de primates no humanos. Por sus caractersticas antignicas, genticas y biolgicas son los virus ms afines al VIH. El VIS se aisl por primera vez en 1985 de macacos rhesus enfermos que estaban en cautiverio en un centro de primates de los EstadosUnidos. Al aislado original se le denomin virus T-linfotrpico smico de tipo III (VTLS-III), pero hoy se conoce como wsmac. Una encuesta serolgica llevada a cabo en 1986-1987 en dicho centro de primates indic que solo estaban infectados tres de los 848 monos investigados (dos macacosrhesus y uno cynomolgus). Esta baja prevalencia de infeccin por VIS plantea dudas sobre si los virus aislados provenan realmente de los macacos salvajes o, quiz, si los animales cautivos adquirieron el VIS de alguna otra especie durante el traslado o el cautiverio (2, 4).

Aislados de VIS conocidos (4-7). Despus del descubrimiento del wsmac, se aislaron varios otros lentivirus de primates no humanos:
q en muchas especiesde macacos (Macaca), msmac; 0 en el mangabey fuliginoso (Cercoce& atys), wssm; 0 en el mono verde africano (CercopSeczrs aethiops), VWw, y q en mandriles (papio spbinx), vrsmnd. La infeccin natural de los macacos es rara en cautiverio y no ha sido comprobada en la naturaleza, aunque se requieren encuestas serolgicas ms amplias para aclarar este punto. En distintos centros de primates se han obtenido varios aislados de VISmac: macacos cynomolgus (Macaca fasCcdan>), de cola de cerdo (M. nemestrina) y de cola de mun (M. arctoiaes). Algunos de estos aislamientos se hicieron de animales inoculados experimentalmente con muestras tisulares de diferentes especies de macacosy an se desconoce su origen exacto. Con gran frecuencia, los macacosde los que se aisl VIS presentaban signos clnicos al momento de morir, y los resultados de la necropsia se asemejaban a los del SIDA; incluso se encontraron linfomas y afecciones linfoproliferativas. El wssm se identific por primera vez en macacosrhesus que manifestaron inmunodeficiencia despus de la inoculacin experimental con material obtenido de mangabeys fuliginosos. Alrededor de 75 % de los mangabeys fuliginosos de una colonia resultaron persistentemente infectados con v%sm y presentaban pocas manifestaciones morbosas que pudieran atribuirse a un lentivirus. Por otro lado, se ha comprobado la infeccin de mangabeys en su hbitat natural de Africa, lo cual plantea una vez ms la duda acerca de la procedencia de este virus. Las primeras encuestasserolgicas para determinar la presencia de anticuerpos VIS reactivos demostraron que entre

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30 y 50% de los monos verdes de Africa albergan un virus afn, aunque no se ha hecho una evaluacin sistemtica de la distribucin geogrfica de estos anticuerpos. Es curioso que los monos verdes presentes en ciertas islas del Caribe, descendientes de animales trados a Amrica en los siglos XVII y XVIII, hayan resultado seronegativos. Se ha comprobado que un presunto aislado inicial del mono verde africano (VnS-IIIagm) era en realidad un contaminante de WSmac;no obstante, se han obtenido varios aislados autnticos de WSagm de animales de Kenya y Etiopa. Los mandriles tambin se infectan en la naturaleza, y en fecha reciente se han aislado VSmnd de mandriles de Gabn. La infeccin natural o experimental con mSagm o mSmnd no parece originar enfermedad, lo que indica una falta de patogenicidad de estos virus. En varias otras especies smicas del Viejo Mundo se han hallado anticuerpos que presentan reaccin cruzada con el VIH o el VIS, lo que seala la posibilidad de que existan otros lentivirus de primates.

Afinidad

gentica de aislados de VIS (7, 8). El VISmac est ms relacionado con el VIH-2 que con el VIH-1. Comparte 75 % de los nucletidos con el VIH-2 y solo 40% con el VIH-1. Los nucletidos comunes al VIH-1 y VIH-2 son alrededor de 40%) principalmente dentro de los genes gag y pod. Los VSmac aislados de una sola colonia de primates muestran cierta variacin en la secuencia de nucletidos. El trazado de mapas genticos, por medio de la endonucleasa de restriccin, de los VISmac derivados de cinco macacos rhesus y uno cynomolgus revel que todos los aislados estaban ntimamente relacionados, pero eran distinguibles uno de otro; el aislado ms diferente fue el del macaco cynomolgus. El anlisis antignico y gentico del VISagm y vISmnd ha indicado que estos son miembros recin identificados del grupo VIH/VIS de lentivirus de primates. Los productos del gen gag del VISagmestn antignicamente relacionados con los del VIH-1, VIH-2 y VISmac. Por otro lado, sus productos del gen env guardan relacin con los del VIH-2 y WSmac,pero no (o solo escasamente)con los del VIH-1. Los anlisis de secuencia de nucletidos han indicado que el VISmac y el WSagm estn relacionados, pero son muy distintos entre s y del VIH-1 y VIH-2. El VIS de los mandriles est aproximadamente equidistante del VIH-1, VIH-2 1VISagm y VkSmac Al parecer, el VIS de . los mangabeys esdistinto del WSmacy del WSagm, pero se carecede informacin precisa. Asimismo, es poca la informacin disponible sobre la heterogeneidad de los aislados de una determinada especie o gnero hechos en localidades diferentes.

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La infeccin por VIS en macacos provoca un sndrome de inmunodeficiencia semejante al del SIDA humano y va adquiriendo cada vez ms importancia como modelo, no solo de la infeccin sino tambin de la enfermedad. Los dos sistemas que han sido ms investigados son la infeccin de macacosrhesus con WSmaco con vISsm. La inoculacin de mSmac en macacos rhesus produce una infeccin persistente que conduce a la muerte de la mayora de los animales. La mediana del tiempo en que sobrevino la muerte fue de 266 das, con un intervalo de 62 a 1 061 das. No se ha observado ninguna correlacin entre la dosis de virus y el resultado clnico, pero la capacidad de los macacos para sobrevivir se correlacion directamente con la fuerza de la respuesta de anticuerpos. Los macacos que murieron mostraron sntomas clnicos y resultados de la necropsia similares a los del SIDA en el hombre. Los animales experimentaron diarrea, consuncin y disminucin del nmero de linfocitos T4 perifricos y de las respuestas proliferativas producidas por sustancias mitgenas. Las infecciones oportunistas (por Pneumocystis carinii, citomegalovirus, Cyptospodi~m, Candida, adenovirus y Mycobacterizcm avizcm intraceZZdare) han sido una caracterstica comn. La mitad de los macacos murieron de encefalitis granulomatosa, semejante a la observada en el hombre. Un nuevo mtodo para estudiar las propiedades biolgicas de aislados de VSmac es el empleo de clones moleculares infecciosos. Se han obtenido del WSmacpor lo menos ues clones infecciosos (Wmac 251, VISmac 239 y VISmac 142) que pueden llegar a ser particularmente tiles para definir los determinantes de la patogenicidad mediante experimentos in vitre con clones moleculares y mutantes derivados de ellos. La infeccin experimental del macaco rhesus (mono asitico) con VIS de mangabey fuliginoso (primate africano) demostr que este virus, aunque no est relacionado con ninguna enfermedad en la especie de origen, puede provocar en otro husped una afeccin de inmunodefkiencia parecida en muchos aspectosal sndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) en el hombre. Ms de 70% de los monos rhesus jvenes inoculados con una cepa patgena de wssrn (cepa delta) murieron en el trmino de los primeros seis mesesde la infeccin. En general, la enfermedad smica se asemeja al SIDA, pero con algunas notables diferencias. Por lo comn, en el curso de un mes despus de la inoculacin se present linfadenopata generalizada. Este trastorno puede persistir por meses, pero de ordinario muestra una regresin antes de la muerte del animal. La causa inmediata de la muerte en la mayora de los monos infectados fue la diarrea, que no respondi a la administracin de un antibitico apropiado ni a las medidas de sostn. Gran parte de los casosde diarrea relacionados con la infeccin por wSsm fueron causadospor ShigeZZa o CampyZobacte~ agentes patgenos comunes en los monos rhesus. Una manifestacin frecuente fue una encefalitis por retrovirus morfolgicamente muy semejante a la observada en el SIDA. En los monos con inmunosupresin tambin se observaron linfomas de clulas B relacionados con un herpesvirus de tipo Epstein-Barr. Un hecho comn fue la infeccin con mltiples agentes oportunistas; el citomega-

Inoculaciones experimentales (2, 5, G, 9).

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lovirus fue el agente oportunista vrico ms frecuente y a menudo contribuy a la muerte del animal o fue la causa inmediata de esta. Se han identificado tambin varios protozoarios oportunistas, incluidos criptosporidios y I? carimi. Se encontraron clulas sincitiales con mayor frecuencia en los ganglios linfticos y el sistema nervioso central de monos infectados, pero tambin se observaron en otros tejidos. La presencia de clulas gigantes en los tejidos de individuos infectados esun marcador de infeccin por VIS y VIH, ya que en los monos y en el ser humano estas clulas expresan protenas vricas y ciertas partculas del virus. Otras lesiones observadas fueron infiltrados linfticos peribronquiolares, lesiones hepticas y una prominente erupcin cutnea eritematosa. Una observacin interesante es que diferentes aislados vricos, aun si estn relacionados, pueden variar en cuanto al potencial patgeno y la gama de trastornos que producen. Se han hallado ciertas correlaciones entre el potencial patgeno de estos aislados y su capacidad para infectar productivamente a monocitos primarios; una cepa se relacion con una elevada incidencia de infeccin del sistema nervioso central. Lo mismo que con el modelo wsmac-rhesus, la patogenicidad es relativamente independiente de la dosis. Por otro lado, las alteraciones de las subpoblaciones de linfocitos (particularmente los linfocitos T auxiliares-inductores), un descenso de los anticuerpos especficos contra el VIS y la antigenemia especfica del virus pronostican la progresin de la enfermedad. Los animales inoculados que permanecieron clnicamente sanos reaccionan a la infeccin por VIS produciendo anticuerpos contra las protenas de VIS relacionadas con los genes gag y env que persisten durante todo el curso de la infeccin. En animales infectados que mostraban alteraciones inmunitarias se observ en las fasesterminales de la enfermedad una prdida desproporcionada de anticuerpos especficos del gen gag en comparacin con los especficos del gen env. Este descenso coincidi uniformemente con la aparicin de antgeno vrico en el suero. Estos cambios se manifiestan meses antes de que pueda notarse cualquier alteracin del cuadro clnico y por ello son tiles indicadores pronsticos de la progresin de la enfermedad. Esto concuerda con observaciones hechas en seres humanos; en los pacientes que pasan del complejo relacionado con el SIDA (CRS) a este, se observa desaparicin de los anticuerpos contra el VIH especficos del gen gag coincidente con la antigenemia. Esta asombrosa falta de la respuesta de anticuerpos contra VIS previamente descrita incluye a los animales que contraen encefalopata asociada con retrovirus. El curso clnico de la enfermedad en monos con encefalopata vara desde la forma aguda (la muerte sobreviene en las ocho o nueve semanas que siguen a la inoculacin) a la crnica (supervivencia de cinco a siete meses). Los anticuerpos especficos del VIS en todos estos animales se redujeron considerablemente, en comparacin con otros animales infectados con

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VIS, o estaban notablemente ausentes, independientemente del curso temporal de la enfermedad. Ademas, la falta de anticuerpos detectables contra VIS se relaciona con niveles persistentes, recurrentes 0 progresivamente crecientes de antgeno del VIS en el suero. Estudios semejantes a los recin descritos se llevaron a cabo en otro centro de primates, utilizando un aislado distinto de vI%rn (cepa SMMYerkes). A la fecha 12 macacos rhesus han estado infectados por espacio de 20 a 33 meses; cinco animales murieron de una enfermedad de tipo SIDAen el trmino de 14 a 28 mesesdespus de la inoculacin. La enfermedad de los macacosque murieron despus de la infeccin se caracteriz por prdida de peso, diarrea, linfadenopata, neumona, hepatosplenomegalia, ataxia, anemia, neutropenia, linfopenia con prdida preferencial de clulas CD4 + , trombocitopenia e hiper e hipogammaglobulinemia. El estudio histopatolgico mostr que la mayor parte de los tejidos de ciertos animales, incluidos ganglios linfticos, bazo, pulmn y cerebro, contenan clulas gigantes multinucleadas. Despus de la inoculacin, la mayora de los animales presentaron anticuerpos contra protenas codificadas por los genes env y gag al cabo de tres a seis semanas de la inoculacin del virus y, de conformidad con lo que se ha observado en los mangabeys infectados por VIS, fueron pocos o nulos los anticuerpos neutralizantes detectados en el suero de macacos rhesus hasta 18 meses despus de la infeccin. Se identific prdida de anticuerpos contra protenas especficas, principalmente codificadas por el gen gag, pero debido al limitado nmero de animales que han muerto hasta la fecha no fue posible determinar si un patrn especfico de anticuerpos predecira una afeccin ms grave y la muerte. No obstante, se encontr que es posible recobrar el virus solo (no acompanado de clulas) del suero de animales que presentan los sntomas ms frecuentes y persistentes de la enfermedad, pero no de los que permanecen sanos o que solo manifiestan signos morbosos intermitentes. Se inocul virus wssrn a un macaco de cola de cerdo que, a diferencia de los macacosrhesus, form anticuerpos neutralizantes a los seis meses de la infeccin. Este animal no tuvo, en esencia, anticuerpos contra productos del gen gag en ningn momento despus de la infeccin y fue sacrificado a los 14 mesesde la inoculacin debido a un estado clnico deteriorante y signos de afeccin neurolgica. En el momento de la muerte se recobr el virus de clulas mononucleares de sangre perifrica (CMSP)y de mltiples tejidos, incluido el cerebro. La concenuacin de virus no acompaado de clulas aument de 10 DICT5O/ml (dosis infecciosas de cultivo tisular al 50% por mililitro) a los seis mesesdespus de la infeccin a lo2 DICT-SO/mla los 10 meses y a lo4 en el momento del sacrificio. El virus aislado al morir el animal fue utilizado para inocular a otros macacos y mangabeys seronegativos para VIS. El resultado fue la muerte, en el trmino de 13 das despus de la inoculacin, de ocho de nueve macacos y tres de cuatro mangabeys. Las muertes agudas se debieron a intensa diarrea mucoide que llev a la deshidratacin y al desequilibrio de electrlitos. Una interesante observacin fue la de que dos monos mangabeys que tenan VIS-SMM y anticuerpos contra este quedaron protegidos del efecto letal de la variante VISsm (designada SMM-PBj14). estn llevando a cabo investigaciones para Se

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demostrar definitivamente que, en realidad, es el wssrn el que mata a los animales con esta rapidez. Si esto se comprueba, el empleo de una cepa de VIS sumamente virulenta puede proporcionar un sistema para la valoracin rpida de medicamentos o vacunas eficacespara prevenir no solo la infeccin sino tambin la enfermedad.

Posibles usos del modelo VIS. Las posibilidades de uso del modelo VIS para el estudio del SIDA humano se derivan de las muchas semejanzas de estos virus con el VIH. Aquellos y este poseen la morfologa y morfognesis tpicas de los lentivirus y muestran tropismo para las clulas que poseen el antgeno CD4. La conservacin de algunos epitopos crticos de CD4 en una diversidad de especies de primates permite la infeccin in vitre de sus linfocitos con VIH. La infeccin de clulas CD4 + con VIH o VIS puede ser citoptica para estas clulas. Como ya ha sido descrito, el VIS puede causar una afeccin parecida al SIDA en ciertas especiesde primates no humanos, y la enfermedad inducida es notablemente similar al SIDA en el hombre. Sm embargo, el sarcoma de Kaposi no ha sido descrito en primates infectados con VIS, y la gama de agentes oportunistas observados despus de la inmunosupresin inducida por VIS es ligeramente distinta de la correspondiente a los seres humanos infectados con VIH. Los principales antgenos vricos de VIS y VIH conservan muchos epitopos, lo cual permiti la identificacin serolgica temprana de la existencia de virus relacionados con el VIH en primates no humanos. La secuencia de nucletidos y la organizacin genmica del VIS estn muy relacionadas con las del VIH-2. Ahora bien, el VISmacy el VSagm, as como el VIH-2, poseen un gen adicional, el X, que no est presente en el VIH-1. Este gen se expresa en el VIS, es inmungeno y, aparentemente, innecesario para la replicacin del virus in vitre. El gen R, que est presente en el VIH- 1, VIH-2 y VISmac , no aparece, por lo menos en un aislado de WSagm. Las comparaciones de la estructura genmica de aislados de VIS patgenos y no patgenos puede tener importancia para comprender la base molecular de la patogenicidad del VIH. Otra importante diferencia molecular entre el VIH-1 y el VIS es la de que a menudo este ltimo (VISmac y wsagm) tiene en el gen env un codn de terminacin prematura, lo que da por resultado una forma truncada de glucoprotena de transmembrana. Esta seal de terminacin prematura de la traduccin se observa tambin en eI VIH-2. El uso sostenido del modelo VIS ser importante en tres campos de investigacin del SIDA:
a) Para conocer mejor la historia natural y la evolucin de las infecciones por lentivirus de los primates. Se requiere informacin con respecto a especiessalvajes que albergan VIS as como de la constitucin gentica precisa de esosvirus.

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b) Para definir la patognesis del por ejemplo los mecanismos de persistencia, los tropismos en relacin con el husped y los determinantes vricos de neuropatogenicidad. c) Para elaborar vacunas contra el SIDA y estrategias para el tratamiento. La comparacin de vacunas puede lograrse ms fcilmente empleando VIS en macacos asequibles que utilizando VIH en chimpancs.
SIDA,

Los estudios en todos esoscampos dependen de una mayor investigacin fundamental, incluidos aspectos tales como las interacciones virus-husped y la caracterizacin del sistema inmunitario del husped primate no humano.

Infeccin de primates no humanos por el VIH

El modelo ideal del SIDA sera aquel en el que el VIH infectara a un animal de laboratorio comn y le provocara una enfermedad parecida al SIDA. Hasta la fecha, aparte del ser humano, solo el chimpanc y el gibn han resultado susceptibles a la infeccin por VIH. Y los investigadores no disponen ms que de un nmero muy limitado de estos animales. La capacidad del VIH de infectar in vitro los linfocitos de varias especiesde primates indica que estara justificada una investigacin ms a fondo, particularmente con primates comunes del Nuevo Mundo. Infeccin experimental de chimpancs (10, 1.2). Varios grupos han demostrado que los chimpancs pueden ser fcilmente infectados con algunas cepasde VIH-1. Las infecciones se producen sin dificultad mediante la inoculacin intravenosa de homogenados de tejido humano, CMSP infectadas con VIH- 1 o VIH- 1 sin clulas o por medio de la aplicacin de virus sin clulas a la mucosa vaginal. Solo se necesita un reducido nmero de partculas vricas para establecer la infeccin en chimpancs, pero pueden existir diferencias dependiendo de la cepa. Se ha comprobado que 40 DICT-50 de VIH-1 (cepa VTLH-IIIB) bastaron para establecer la infeccin en dos chimpancs, pero solo uno de los dos animales qued infectado con 4 DICT-50 del mismo conjunto de virus. En el trmino de dos semanas despus de la inoculacin de la cepa UV-~ de VIH-1, pueden recobrarse virus de las CMSP de chimpanc, independientemente del inculo o va de inoculacin, y una vez infectado el animal se puede recobrar virus sistemticamente de las CMSP. En cambio, el virus sin clulas solamente ha sido aislado de animales durante las primeras seis semanas de la infeccin. Tambin se ha obtenido virus de una de dos muestras de mdula sea, pero no de un nmero limitado de muestras de saliva o lquido cefalorraqudeo que fueron sometidas a prueba. Poco despus de la infeccin (los primeros dos o tres meses), pueden detectarse de lo3 a lo4 CMSP infecciosas por cada 10 CMSP. Durante los mesessiguientes, esta cifra disminuye a un nivel

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basal de 1 a 10 CMSP infecciosas por 10 CMSP, que persiste por perodos prolongados. As pues, hay una fase temprana de viremia, acompaada de un elevado nmero de clulas infecciosas, que poco a poco va desapareciendo a medida que aumentan los ttulos de anticuerpos especficos contra el VIH-1; sin embargo, no se ha demostrado todava que la reduccin de CMSP o virus sin clulas sea consecuencia de la inmunodepuracin. Aproximadamente a las cuatro semanas de la inoculacin del virus pueden detectarse anticuerpos especficos contra el VIH-1 en el suero de chimpancs mediante inmunoensayo enzimtico (IEE), inmunoelectrotransferencia y radioinmunoprecipitacin (RIP). Aproximadamente en la mitad de los chimpancs infectados se han detectado respuestas de IgM breves y de ttulos bajos (menos de 100) contra el VIH- 1, pero los ttulos de IgG determinados por IEE se desarrollaron rpidamente y se estabilizaron al cabo de unos seismesesdespus de la infeccin en ttulos que oscilaban entre 25 000 y 500 000. Los anticuerpos contra productos de los genes env y gag son detectables aproximadamente al mismo tiempo (tres a cinco semanas despus de la infeccin), mientras que los anticuerpos contra productosdel gen polse demoraron desde unas semanashasta unos pocos meses. Ms recientemente, se han detectado anticuerpos contra la supuesta protena reguladora codificada por el gen 3 ORF/F, ya sea coincidiendo con los anticuerpos contra las protenas de env y gag o incluso antes. Es interesante mencionar que la inoculacin experimental de un chimpanc con el aislado ARV-2/SF2 de VIH dio lugar a una infeccin menos eficiente, pues los virus se aislaron exclusivamente de las CMSP a los cinco meses de la inoculacin. En este animal se detectaron anticuerpos contra el producto del gen 3 ORF/F en el trmino de dos semanasdespus de la inoculacin, mientras que no se detectaron anticuerpos contra otras protenas hasta tres meses despus. En chimpancs infectados se han demostrado anticuerpos que median la lisis dependiente del complemento de clulas infectadas con VIH; estos anticuerpos se generan en etapa relativamente temprana de la infeccin y son capaces de causar la lisis de clulas infectadas con diversas cepas de VIH, de forma parecida a la reactividad cruzada que se ha observado en relacin con los anticuerpos neutralizantes. Todos los animales infectados de manera persistente poseen CMSP que proliferan e incorporan timidina cuando se incuban con antgeno purificado de VIH; esta respuesta ocurre como una reaccin dependiente de la dosis. En cambio, no todos los animales tienen clulas capacesde causar la lisis de las clulas infectadas con VIH. Empleando como blanco clulas B autlogas o heterlogas transformadas por virus de Epstein-Barr (VEB) e infectadas con virus vaccinia recombinados que expresan diversos genes de VIH, se usaron como efectores CMSP procedentes de chimpancs infectados con VIH-1 por varios perodos. Si bien las CMSP procedentes de la mayora de los animales mostraron actividad citotxica espec-

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fica de VIH, destruyeron en la misma medida las clulas autlogas y las heterlogas. Estos datos indican que las causantes de la destruccin pueden ser clulas asesinasnaturales (AN) especficaspara el antgeno no restringidas por el complejo principal de histocompatibilidad (CPH) o clulas asesinasactivadas por linfoquinas (AAL). Hasta la fecha, no se ha comprobado que ocurra ninguna enfermedad de tipo SIDA en chimpancs infectados con VIH-1. No obstante, se han observado indicios de enfermedad mnima. Durante los primeros seis meses despus de la inoculacin de chimpancs jvenes, la tasa de aumento de peso en los animales mostr una disminucin significativa. Adems de trombocitopenia leve pasajera en un animal, se observ considerable linfadenopata en dos que haban recibido dosis altas de VIH-1. El anlisis histopatolgico de material de biopsia de los ganglios linfticos inguinales de estos dos animales mostr una intensa hiperplasia folicular y centros germinales de forma irregular, semejantes a lo que se ve en cortes tisulares humanos de personas infectadas con VIH. Es interesante seiialar que un chimpanc que no mostr actividad citotxica celular (pero cuyas CMSP proliferaron en respuesta al antgeno) ha estado infectado durante cuatro anos y ha perdido anticuerpos conua p24 en la segunda mitad de este perodo. Este animal no ha presentado signos de enfermedad ni anomalas hemticas. Otro animal, infectado por ms de tres aos y medio, tambin ha perdido anticuerpos contra ~24, a juzgar por el ensayo de radioinmunoprecipitacin. Estos animales han sido vigilados muy de cerca para averiguar si la prdida de anticuerpos contra p24 en los chimpancs esparalela a la situacin en el ser humano, en el que dicho fenmeno guarda relacin con el inicio de la antigenemia y la progresin de la enfermedad. Adems, un tercer chimpanc infectado durante ms de ues anos present linfopenia persistente con prdida de clulas CD4 + . Es probable que, como ocurre en los seres humanos infectados con VIH, el principal cofactor para la aparicin del SIDA en chimpancs sea el tiempo. Algunas tentativas de infectar especies de primates no humanos con aislados de VIH-2 han tenido buenos resultados, y algunos animales han permanecido infectados por ms de un ano. Se ha comprobado la seroconversin y la recuperacin del virus, pero no hay indicaciones de anomalas hemticas ni de enfermedad. Prosiguen los esfuerzos para obtener, mediante pasesseriados, una cepa de VIH-2 capaz de proliferar en macacos. Se ha tratado de inmunizar a chimpancs con una diversidad de antgenos: virus vaccinia recombinados que expresan antgenos VIH-1, preparados a base de la subunidad glucoprotenica del VIH-1, antgenos del VIH-1 purificados expresados en diferentes sistemas eucariticos o procariticos, viriones de VIH-1 inactivados y pptidos sintticos. La vacunacin ha producido la activacin de clulas T especficaspara el VIH y la formacin de anticuerpos detectables mediante el ensayo inmunoenzimtico (ELISA), la inmunoelectrotransferencia y la radioinmunoprecipitacin. Sin embargo, los sueros de chimpancs vacunados mostraban escasa o nula actividad

Aplicacin de vacunas prototipo a chimpancs (12).

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neutralizante contra el VIH-1. Los chimpancs que ulteriormente fueron inoculados con VIH-1 no estaban protegidos contra la infeccin vrica. A continuacin se presentan unos cuantos ejemplos de los mtodos que se estn usando para elaborar vacunas prototipo, las cuales se estn evaluando en chimpancs: a) Puesto que la glucoprotena gp 120 externa seune especficamente a la molcula CD4 en la superficie de las clulas T4-positivas (el fenmeno inicial en el proceso infeccioso), se supone de un modo general que una respuesta inmunitaria contra esta protena puede servir para inhibir la replicacin del virus. Asimismo, puesto que la gpl20 se expresa en la superficie de clulas infectadas con el virus, una respuesta inmunitaria eficaz dirigida por clulas T contra ella puede eliminar las clulas infectadas con VIH. Para inmunizar chimpancs se ha utilizado gp120 nativa, obtenida de membranas de clulas infectadas con VIH-1 (cepa VTLH-IIIB) y purificada por inmunoafinidad. Los anticuerpos precipitantes llegaban al mximo dos semanasdespus de las dosis de refuerzo ulteriores, pero disminuan rpidamente despus de cada vacunacin. Se produjeron anticuerpos neuualizantes, pero solo resultaron eficaces conua el virus homlogo y no neutralizaron una cepa diferente de VIH-1 (VTLH-IIIRF). Dos semanasdespus de haber recibido una quinta dosis de gp120 preparada en alumbre, dos chimpancs fueron reinoculados con 40 6 400 DICT50. Se aisl el virus de ambos animales y los dos produjeron anticuerpos contra ~24, lo que indica una infeccin activa. b) Es probable que los anticuerpos neutralizantes contra el VIH, que han sido demostrados en ciertas personas infectadas, puedan evitar la propagacin extracelular del virus, pero este puede tambin propagarse a clulas no infectadas por fusin celular y, por lo tanto, evadir los anticuerpos neutralizantes. Recientemente se han detectado en individuos sanos seropositivos para el VIH y en enfermos de SIDA anticuerpos capacesde producir la lisis de clulas infectadas con VIH por un fenmeno de citotoxicidad celular dependiente del anticuerpo. La inmunidad mediada por clulas T, que ha resultado ser muy importante en la prevencin de la enfermedad o la muerte causadas por una diversidad de virus con envoltura en animales, puede contribuir a la erradicacin de clulas infectadas por VIH que pueden expresar antgenos de este virus antes de su propagacin a clulas no infectadas. Las clulas T auxiliares especficas para el VIH pueden producir linfoquinas, como interleuquina-2 (IL~), para expandir las clulas T citotxicas especficaspara VIH, o para activar otras clulas efectoras, tales como las clulas asesinas naturales o los macrfagos, que causan la lisis de las clulas infectadas.

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La vacunacin de primates no humanos con un virus vaccinia recombinado que expresaba glucoprotenas de la envoltura del VIH indujo la aparicin de clulas T auxiliares especficaspara VIH en macacos y chimpancs, y tambin activacin de clulas T citotxicas especficaspara el VIH en chimpancs. Las clulas T de chimpancs infectados con VIH por un perodo de tres meses a tres anos mostraron intensas respuestas prohferativas al VIH. Algunas personas sanas infectadas con VIH poseen tambin clulas T que reconocen antgenos del VIH mediante la proliferacin o lisis de clulas autlogas infectadas con VIH. A este respecto, sera interesante e importante determinar si existe una relacin inversa ene el nivel y los tipos funcionales de respuestas de las clulas T especficas para el VIH con la consecuente manifestacin de la enfermedad en sereshumanos infectados por el VIH. Si esto ocurre, reforzar el fundamento racional de la elaboracin de vacunas conua el SIDA capacesde inducir intensa inmunidad mediada por clulas T especficas para el VIH en el hombre, y justificar las tentativas de aumentar esa inmunidad en las personas ya infectadas por el virus, antes de que presenten inmunosupresin. c) Se han preparado vacunas prototipo de virus vivo recombinado preparadas mediante insercin de los genes que codifican la glucoprotena gpl60 de la envoltura del VIH-1 (cepa LAYBRU) o protenas centrales ~24, ~18, cuando no ambas, o bien la protena del gen gag ntegra o protenas no estructurales F (3 ORF/F) o Q (sor) en un genoma del virus vaccinia. Los virus recombinados as obtenidos fueron inyectados en chimpancs por va intradrmica o por escarificacin. Los animales mostraron una respuesta proliferativa pasajera pero importante al VIH o a la gpl60, pero no a la ~24, despus de dos inyecciones o de la escarificacin con virus vaccinia recombinados. Casi todos los animales resultaron tambin seropositivos al VIH-1 en la prueba ELISA. Las inmunorreacciones se intensificaron despus de una dosis de refuerzo a base de clulas infectadas por virus vaccinia recombinados. Asimismo, se generaron anticuerpos especficospara antgenos centrales del VIH. La infeccin experimental de chimpancs con VIH-1 es un modelo confiable de infeccin por el virus humano. Si se demuestra la validez de los datos que sugieren la posibilidad de que los chimpancs infectados con VIH contraigan la enfermedad, se podrn identificar factores que influyen en su progresin. Con la elaboracin del modelo de inmunodefkiencia smica, los chimpancs podran reservarsepara los ensayos de la segunda fase de vacunas experimentales ms prometedoras. Actualmente se estn evaluando, como posibles medios para inducir una respuesta inmunitaria de reaccin ms amplia que se mantenga por un perodo ms prolongado despus de la vacunacin, preparados con mayor poder inmungeno, utilizando para ello distintos vehculos de vacunacin, tales como los complejos inrnunoestimulantes (COMIE).
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Perspectivas para el futuro.

Lentivirus de huspedes mamferos no primates

El trmino lentivirus (virus lentos) se aplic por primera vez a los agentes causalesdel complejo morboso maedivisna del carnero, el ejemplo clsico de enfermedad por virus lentos. Estos agentes se caracterizan por prolongados perodos de incubacin, con un comienzo gradual y un curso lentamente progresivo que, sin excepcin, termina en caquexia y muerte. Sin embargo, el virus visna no es T-linfotrpico ni causa inmunodeficiencia. Se han identificado en la naturaleza otros virus de mamferos con propiedades biofisicas similares a las del virus maedi-visna y han sido clasificados en la subfamilia de los lentivirus. Dos recientes adiciones a esta subfamilia son el virus de tipo inmunodeficiencia bovina (VIB) y el de la inmunodeficiencia felina (VIF, anteriormente denominado LSTLF). El VIB y el VIF son distintos de los conocidos previamente como virus de la leucemia bovina (VLB) y de la leucemia felina (VB), que forman parte de la subfamilia de oncovirus. Los lentivirus de animales no primates se limitan a estos huspedes y no se tiene conocimiento de que infecten a los primates, incluido el hombre. La replicacin del virus visna ocurre en linfocitos y macrfagos in vivo, lo que da por resultado la infeccin de por vida del husped. La replicacin vrica contina durante toda la infeccin a un ritmo mnimamente productivo, fenmeno que, por definicin, destaca la ineficacia de los mecanismos inmunitarios para eliminar los agentes. Los enigmas acerca de todas las infecciones por lentivirus son la naturaleza del factor o factores que desencadenan el inicio de la enfermedad despus de prolongados perodos de infeccin subclnica y la paradoja de las interacciones virus-husped en que la replicacin del virus procede a un ritmo mnimo y, sin embargo, esto conduce en cierto modo a una enfermedad emaciante progresiva.

Mecanismos patgenos de lentivirus de animales no primates (13). Estudios realizados en los virus visna y de la artritis-encefalitis
caprina, ntimamente relacionados, indican que la infeccin de macrfagos desempea una funcin central en el mecanismo de persistencia del virus y en los sndromes clnicos que hacen sucumbir a esos animales. El VIH tambin infecta a los macrfagos y, como revelan los estudios sobre la patognesis del SIDA, estas clulas estn siendo objeto de un estudio ms profundo pues es probable que desempeen un importante papel en la enfermedad humana, como lo tienen en las de carneros y cabras. La gran similitud entre los lentivirus de los animales y el VIH indica que la interaccin

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entre los lentivirus pertinente y un geno humano.

y las clulas huspedes puede aportar informacin mejor conocimiento de la biologa del pat-

Los lentivirus acusan diferencias bien definidas en cuanto a su interaccin con los macrfagos y otros tipos de clulas. Estasltimas pueden ser fibroblastos en el sistema del virus visna o linfocitos T auxiliares en el del VIH. En el sistema visna, las interacciones entre virus y fibroblastos y virus y macrfagos pueden resumirse de la manera siguiente: a) Inteeracciones virus visna/jSoUasto. El virus visna causa fusin de fibroblastos desde fuera, de una manera independiente del pH que recuerda las interacciones paramixovirus/ clula. Esto indica que el genoma vrico se introduce en estasclulas despus de la fusin de la envoltura vrica con la membrana plasmtica de la clula. La fusin inicial enue virus y fibroblastos va seguida de fusin progresiva de clulas contiguas. Los anticuerpos que inhiben este proceso de fusin suelen neutralizar la infecciosidad del virus. Ahora bien, cuando se emplean virus con variantes antignicas en estos experimentos, los anticuerpos policlonales inducidos por el virus progenitor impiden la fusin por el virus variante pero no neutralizan la infecciosidad de este ltimo. As pues, la infeccin en fibroblastos puede ocurrir independientemente de la fusin de clulas. La maduracin de los virus descendientes en fibroblastos ocurre en la membrana plasmtica mediante un proceso de gemacin. El tratamiento de clulas con anticuerpos neutralizantes en esta fase del ciclo vital del virus da lugar a una acumulacin de partculas vricas en varias etapas de gemacin sobre la superficie celular, que en conjunto forman una especie de casquete (capping off ). b) hteracciones vims visna/macrfigo. Los lentivirus no causan fusin desde fuera de los macrfagos, independientemente de la amplitud de la inoculacin (hasta lo3 unidades formadoras de placas por clula). Ello indica que el virus se introduce en estas clulas mediante un proceso distinto de la fusin, quiz por endocitosis, despus de ligarse a un receptor especfico, o por fagocitocis aleatoria de las partculas. La endocitosis del virus preincubado con anticuerpos es ms rpida que la del virus no tratado con ellos. Tanto los anticuerpos neutralizantes como los de ouo tipo aceleran los primeros acontecimientos del ciclo vital del virus, incluida su fijacin y prdida del revestimiento dentro del macrfago. Cuando se emplean anticuerpos neutralizantes, el virus es introducido y despojado de su revestimiento rpidamente, pero no hay uanscripcin alguna de AFW. Los anticuerpos que se unen a los antgenos de la envoltura vrica pero que no neutralizan la infecciosidad intensifican la infeccin porque estas inmunoglobulinas facilitan la entrada de un gran nmero de partculas vricas infecciosas en los macrfagos. Esta disparidad en la velocidad de entrada del virus en las clulas, que se aprecia entre virus tratado con anticuerpo y virus solo, no ocurre cuando se utilizan fragmentos F(ab)2 de los anticuerpos, en lugar de inmunoglobulinas completas. Ello aporta pruebas indirectas de que cuando las partculas vricas sehacen reaccionar con molculas de anti-

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cuerpos, los complejos pueden penetrar en los macrfagos por endocitosis mediada por receptores Fc en la superficie de estasclulas. As, la infeccin del macrfago puede ocurrir mediante tres mecanismos: 1) entrada en la clula despus de la unin del virus con receptores especficos; 2) entrada en las clulas por fagocitosis de partculas vricas, y 3) entrada en las clulas mediante fagocitosis de complejos inmunitarios por conducto de los receptores Fc de la clula. La maduracin del virus en los macrfagos ocurre dentro del citoplasma mediante gemacin de membranas en las vacuolas intracitoplsmicas y acumulacin de virus dentro de esas vacuolas. En la membrana plasmtica de estasclulas solo se produce una gemacin mnima de partculas vricas. La envoltura de los lentivirus consiste en una gran estructura de glucoprotena sumamente glucosilada que est codificada por el gen env. Cadenas de oligosacridos con numerosas molculas terminales de cido silico estn unidas a la estructura bsica de la protena env por enlaces 0 y N. Estasmolculas de carbohidratos forman una corteza exterior en el virus y reducen la afinidad de enlace de los anticuerpos neutralizantes por las partculas vricas. El tratamiento de los viriones con neuraminidasa elimina las molculas de cido silico, y as se mejora la cintica de la neutralizacin. En realidad, ciertos sueros que no poseen actividad neutralizante aparente (tienen propiedades que intensifican la infeccin) neutralizaran el virus tratado con neuraminidasa. Por consiguiente, la distincin entre anticuerpos neutralizantes y no neutralizantes puede residir en la avidez de unin entre molculas de Ig y partculas vricas. Los anticuerpos neutralizantes pueden unirse ms firmemente a dichas partculas. Puesto que la neutralizacin del virus es el resultado neto de dos sistemas que compiten -fijacin del virus a las clulas y fijacin del virus a los anticuerpos-, cualquier retraso en la unin entre el virus y los anticuerpos aumentar las posibilidades de infeccin en las clulas husped. Esto reviste particular importancia porque la afinidad del virus respecto a los puntos de fijacin celular es muy alta. Por eso, la mera demostracin de anticuerpos neutralizantes en el suero no basta para indicar la presencia de propiedades protectoras, ya que esosanticuerpos pueden ser lentos para causar la neutralizacin 0 incluso intensificar la infeccin de macrfagos. Si bien la morfognesis vrica ocurre dentro del citoplasma del macrfago, estasclulas expresan antgenos vricos en la membrana plasmtica dos o ues das antes de la sntesis de partculas vricas. Uno de estos antgenos es un determinante de fusin del virus visna. En los sincitios multinucleados se obtienen fcilmente clulas con receptores para el determinante de fusin. El proceso de fusin representa un mecanismo potencial para que el macrfago disemine la infeccin mediante un mecanismo de trasfeccin. Este proceso no requiere partculas vricas para

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causar la infeccin, ya que el ARN vrico que ha pasado por transfeccin a las clulas cercanasmediante el proceso de fusin bastara para iniciar el ciclo vital del virus sin la participacin de viriones infecciosos. Experimentos recientes han sealado que las altas concentraciones de anticuerpos antifnsin (no necesariamente neutralizantes) pueden proteger a los animales contra la diseminacin masiva de virus in vivo, y de esta manera ayudarlos a permanecer clnicamente normales, si bien infectados. A este respecto, una cuestin pertinente es la siguiente: <Tienen importancia los anticuerpos antifusin en la proteccin contra la enfermedad? Este concepto puede ser importante para la obtencin de una vacuna-tratamiento, la cual no prevendra la infeccin como una verdadera vacuna, sino ms bien reforzara la produccin de anticuerpos contra protenas de fusin del virus. La finalidad sera limitar la tasa de diseminacin del virus y, de este modo, mantener la infeccin denuo de lites controlables. Los macrfagos infectados por virus presentan antgenos vricos a los linfocitos dentro de los lites de restriccin de los antgenos del complejo principal de histocompatibilidad (CPH). Uno de los antgenos vricos est relacionado con antgenos Ia en la superficie del macrfago infectado. El antgeno vrico es distinto del determinante de fusin estructural del virus visna y es reconocido por los linfocitos T de carneros y cabras como parte del sistema Ia, lo cual da lugar a la produccin de un interfern. Este interfern ejerce una serie de efectos sobre la poblacin de clulas mononucleares, incluida la induccin de expresin de Ia y la produccin de prostaglandina E2 por los macrfagos, supresin de la proliferacin de clulas mononucleares e inhibicin de la expresin de genes vricos. Se ha sealado la posibilidad de que el mantenimiento de los macrfagos en un estado de continua presentacin del antgeno aumente el potencial para producir reacciones inmunopatolgicas o posibles reacciones autoinmunitarias. En resumen, los lentivirus han desarrollado una relacin poco comn con la principal clula de defensa del organismo. El macrfago infectado no solo regula la cantidad de partculas de virus producidas durante la infeccin sino que tambin es el principal diseminador del virus en la naturaleza (se han identificado macrfagos infectados en el calostro y en exudados respiratorios inflamatorios) y dentro del cuerpo, y coadyuva en la induccin de procesos inmunopatolgicos. Las intervenciones teraputicas dirigidas a prevenir la infeccin o reducir la gravedad de las lesiones tendrn que centrarse en el macrfago infectado y su funcin como clula productora del virus y tarnbin como clula infectada que presenta el antgeno. Estas intervenciones tendrn que realizarse en el entendimiento de que este tratamiento, que puede prevenir la replicacin vrica, puede intensificar la reactividad inmunitaria y las alteraciones histopatolgicas y viceversa.

Virus de la inmunodeficiencia felina (VIF) (14).

El VIF, anteriormente conocido por lentivirus T-linfotrpico felino (IYTLF) causa un sndrome de inmunodeficiencia persistente caracterizado por trastornos orales, digestivos y de las vas respiratorias superiores. Las alteraciones observadas con ms

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frecuencia son gingivitis, periodontitis, estomatitis proliferativa y ulcerativa crnicas, anorexia y emaciacin, diarrea crnica y deshidratacin, rinitis crnica, conjuntivitis e infecciones de vas respiratorias superiores. Ouos signos clnicos que se observan en los gatos infectados son linfadenopata, anomalas neurolgicas, abscesos crnicos, fiebre e infecciones microbianas crnicas. Las encuestas serolgicas realizadas en distintas partes del mundo han indicado que entre 14 y 30 % de los gatos con antecedente de infecciones crnicas estn infectados con VIF, aunque es comn la coinfeccin con VLFe. El aislamiento inicial del VIF se logr mediante cocultivo de linfocitos de sangre perifrica (LSP) de gatos infectados y LSP estimulados con concanavalina A (Con-A) procedentes de gatos exentos de patgenos especficos(EPE). El virus indujo la aparicin de clulas gigantes y la muerte de clulas en estos cultivos. Se observ replicacin del aislado vrico en linfocitos T esplnicos primarios, as como en clulas tmicas estimuladas, estirpes celulares Tlinfoblastoides felinas (~~74, LSA-1) y clulas renales felinas de Crandell. El VIF es sumamente especfico de especie y no parece que se replique en una diversidad de estirpes celulares humanas, caninas y de roedores. El VIF tiene la morfologa tpica de los lentivirus y posee una transcriptasa inversa dependiente de Mg++. En el anlisis de inmunoelectrotransferencia, los antgenos del VIF no muestran reaccin cruzada con los del VIS, VIH-1, VIH-2, maedi-visna o virus de la encefalitis-artritis caprina. No se han hecho todava la clonacin molecular ni el anlisis detallado del genoma del VIE La infeccin experimental de cras de gato EPE origin una infeccin de por vida. A las dos semanas ya pueden detectarse anticuerpos con la prueba ELISA y la inmunoelectrotransferencia. Tres a cinco semanasdespus de la inoculacin comienza a aparecer en todos estos gatos una linfadenopata generalizada; el agrandamiento mximo de los ganglios linfticos se produce en dos a ocho semanas, y luego desaparecen paulatinamente en un plazo de dos a nueve meses. Muchos de los animales experimentan neutropenia absoluta, a menudo acompaada de leucopenia; empieza dos a cinco semanasdespus de la inoculacin y no desaparecehasta despus de cuatro a nueve semanas. El VIF puede aislarse del encfalo, bazo, mdula sea, LSP, ganglios linfticos mesentricos y submandibulares, saliva y lquido cefalorraqudeo . Durante la primera fase clnica de la enfermedad (fiebre, neutropenia) en cras de gato experimentalmente infectadas, se deprimen las respuestasblastognicas de los linfocitos T frente a los agentes mitgenos. La supresin de la mitognesis linfoctica dur varias semanas antes de desaparecer de manera espontnea. Luego, la blastognesis

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linfoctica aument por encima de los niveles normales durante los dos a nueve meses siguientes de la etapa de linfadenopata, y volvi a la normalidad al desaparecer esta. En la fase de SIDA de la enfermedad reapareci una disminucin variable de la blastognesis linfoctica. Han fracasado las tentativas de demostrar experimentalmente la transmisin horizontal, mediante contacto ntimo prolongado. Ahora bien, el VIF se transmite por mordedura (por conducto de la saliva infectada). Virus de tipo inmunodeficiencia bovina (VB) (LS). El VIB se aisl por primera vez en 1969 de leucocitos procedentes de una vaca que presentaba en forma persistente linfocitosis, linfadenopata, lesiones del sistema nervioso central, debilidad progresiva y emaciacin. Sin embargo, no se conoce an la amplitud de la infeccin natural por VIB. La infeccin experimental con VIB de terneros privados de calostro y criados en aislamiento causauna leve linfocitosis y linfadenopata en los comienzos de la infeccin (entre 3 y 12 semanas despus de la inoculacin), que se asemeja a la linfadenopata persistente y generalizada que se considera parte del complejo relacionado con el SIDA (CRS). Los ganglios subcutneos palpables son del tipo hemolinfa y se notan de manera particular en la regin cervical. El examen histolgico de estos ganglios tumefactos revela una hiperplasia folicular de los centros germinales sin signos de linfosarcoma. La hiperplasia puede atribuirse especficamente a un aumento del numero de linfocitos pequeos. El VIB puede proliferar en varios cultivos celulares primarios derivados de fetos bovinos del primer trimestre, aunque se prefieren las clulas del bazo. De momento, las estirpes celulares de origen bovino establecidas no han permitido la replicacin vrica, pero una estirpe celular de timo canino fetal (Cf2th) es susceptible y puede constituir una buena fuente de antgeno para las pruebas diagnsticas. La capacidad citoptica o inductora de sincitios del VIB es similar a la observada en el VIH y otros lentivirus en las clulas huspedes. El VIB posee una transcriptasa inversa que muestra una preferencia notable por el Mg + + . La microscopia electrnica de cultivos infectados revela la presencia de partculas vricas con morfologa de lentivirus. La electroforesis en gel de poliacrilamida del virus purificado concentrado revela una importante banda de masa molecular relativa (MI) de 26 000 (~26) que corresponde a la principal protena central. Los estudios preliminares de protenas del VIB, identificadas mediante anticuerpos bovinos de ganado infectado en forma natural o experimental, con ayuda de la radioinmunoprecipitacin y la inmunoelectrotransferencia, han mostrado una supuesta protena de transmembrana de M, de 32 000 a 42 000 y una glucoprotena de envoltura exterior como un doblete de M, de 120 000 y 160 000. Los ensayosde inmunofluorescencia de linfocitos infectados por el VIH, utilizando suero anti-VIB polivalente, demostraron la presencia de epitopos con reaccin cruzada; en la inmunoelectrotransferencia, estos determinantes compartidos se localizaron en las protenas centrales principales, p24 y p26 del VIH y el VIB, respectivamente.

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Recientemente, por medio de clonacin molecular del VIB se han obtenido dos provirus infecciosos (clones 106 y 127) para estudios minuciosos ulteriores. Se ha determinado la secuencia completa del clon 106. En conjunto, el genoma es muy parecido al del VIH, con la excepcin de que es ms reducido (8 875 pares de bases). La regin del gen env es mayor y cuenta con un nmero importante de puntos de glucosilacin. Las comparaciones de enzimas de restriccin de los dos clones infecciososindican una gran abundancia de secuenciasde WV, como se observa en otros lentivirus. Existe una regin intergnica entre los genes pal y env en la que pueden hallarse varios cuadros de lectura abierta que funcionalmente pueden corresponder a los genes so~/Q, tat y trs/art, y a los genesXobservados en el VIH, el VIS o ambos. Hay otro cuadro de lectura abierta en las 3 RTP. En la actualidad se estn llevando a cabo anlisis minuciosos de la estructura, funcin y relacin de las regiones codificadoras pronosticadas.

Posibles usos de los modelos de la infeccin por lentivirus en animales que no son primates. Estos modelos ofrecen varias ventajas, por ejemplo,
son infecciones naturales comunes en todo el mundo y, debido a su especificidad de especie, el trabajo con estos agentes no requiere el uso de medidas especialesde contencin de riesgos biolgicos para la proteccin del hombre. Son modelos potencialmente tiles para analizar la biologa compleja de la infeccin por el VIH, incluidos los mecanismos para inducir la inmunidad protectora. Una vez confirmada su validez, el modelo del VIF tendr las ventajas siguientes: bajo costo, perodo de incubacin breve, animales disponibles en abundancia, casosen diversas etapas clnicas y animales exentos de patgenos especficos. Este modelo podra tambin emplearse para la seleccin preliminar de un gran nmero de agentes antivricos potencialmente tiles.

Otros virus y modelos Virus distintos de los lentivirus que inducen inmunodeficiencia. Se
incluyen en esta categora el virus de la leucemia felina (me) y los retrovirus de tipo D del macaco (RVS) relacionados con el SIDA &-rico (SIDAS). Ademas de la infeccin subclnica y los tumores que generalmente tardan mucho en aparecer, el me puede causar en el gato una amplia gama de afecciones crnicas no neoplsicas, incluidas inmunosupresin, emaciacin, diarrea intensa y anemia. De manera anloga, se ha demostrado que los retrovirus de tipo D estn relacionados con sndromes de inmunodeficiencia y consuncin crnica, infecciones oportunistas, gingivitis necrosante y fibromatosis retroperitoneal en colonias de primates.

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La experiencia con varios retrovirus de animales respalda el fundamento lgico de la seleccin de la envoltura del VIH como el antgeno para uso en muchas de las vacunas experimentales contra el SIDA. Se est ensayando una vacuna experimental contra el virus de la leucemia bovina (VLB), y amplios estudios del virus de la leucemia murina han indicado que las vacunas que incorporan la glucoprotena de envoltura pueden prevenir la infeccin. Una vacuna comercial contra el VEe, que incluye glucoprotena de envoltura, protege a la mayora de los gatos contra la infeccin y la enfermedad por VIFe. Se ha demostrado que un preparado de virus entero muerto confiere proteccin contra la infeccin por RVS de tipo D. Esto permitira comparar en este modelo las estrategias de vacunacin, empleando vacunas experimentales a base de virus recombinados y otras subunidades vricas. Los retrovirus smicos de tipo D son comunes en las colonias de macacos, situacin que debe ser conocida y controlada a fin de desarrollar el modelo de VIS ms pertinente.

Nuevos modelos posibles: ratones transgnicos.

Un rasgo tpico de la infeccin por el VIH es la prolongada fase asintomtica posterior a la exposicin inicial al agente. Durante este perodo, una prueba serolgica positiva podra ser el nico indicio de la presencia de infeccin en un individuo sin manifestaciones clnicas. Sin embargo, esmuy probable que en personas infectadas se encuentren copias mltiples de provirus de ADN integrados, algunas de las cuales pueden experimentar represin funcional y ser incapaces de proceder a la produccin de viriones descendientes. Se ha elaborado un modelo de esta fase latente o persistente de la infeccin por el VIH mediante la creacin de dos tipos de ratones transgnicos en los que la expresin de genes est regulada por repeticiones terminales prolongadas (RTP) del VIH. El primer modelo lo constituyen RTP de VIH enlazadas con un gen bacteriano, el de la acetiltransferasa de cloranfenicol (ATC). El gen de /SC ha estado ligado a una serie de elementos promotores eucariticos y vricos y su expresin se ha vigilado despus de la transfeccin en clulas de mamfero. Se establecieron cuatro cepas fundadoras de ratones que llevaban dos a ocho copias de construccin de RTP de VIH-ATC. Se vigilaron los niveles elevados de expresin de la ATC constructiva en el timo, la cola, el corazn y los ojos de las cuatro cepas transgnicas de ratn; en el bazo, el intestino delgado y el hgado se detectaron niveles ms bajos. Aunque no se pudo detectar ninguna actividad de ATC dirigida por RTP de VIH en los linfocitos circulantes ni en macrfagos derivados de la mdula sea, se observ un aumento (de 20 a 30 veces) de la expresin cuando estas clulas fueron activadas in v&-o con agentes mitgenos o citoquinas recombinantes, tales como la 1~2, factor estimulante de colonias (FEC-1) y factor estimulante de colonias de granulocitos y macrfagos (FEC-GM). Despus de nuevo examen, la elevada expresin de ATC en la cola del ratn se localiz en la piel. El fraccionamiento de elementos constituyentes de esta revel la presencia de niveles muy altos de ATC en las clulas epidrmicas de Langerhans (CL) y no en los queratinocitos. Las primeras son clulas dendrti-

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casmuy diferenciadas del linaje de los macrfagos monocitos, que comprenden de 2 a 5 % de las clulas epidrmicas. Se considera que, funcionalmente, las CL son la rama ms perifrica del sistema inmunitario, y son el tipo de clula que primero entra en contacto con los microorganismos 0 cuerpos extraos en la puerta de entrada. Se considera que las CL son monocitos sumamente diferenciados (macrfagos que se originan en la mdula sea). En varios informes se describe la deplecin de CL en enfermos de SIDA. Merece la pena mencionar el hecho de que se produjo sntesis de ATC dirigida por RTP de VIH en animales transgnicos que nunca haban estado expuestos a la protena reguladora transactivadora (tat) del VIH. Por consiguiente, estosresultados suponen la existencia de factores reguladores especificos de tejidos capaces de modular la expresin de una RTP de VIH integrada. En otro grupo de experimentos se crearon ratones transgnicos que albergaban un clon molecular infeccioso de VIH. Se han obtenido 13 animales fundadores, cuya edad va de 7 a 16 semanas y que contienen de 2 a 60 copias del VIH. Hasta la fecha, los 13 animales se encuentran en buen estado de salud y no han mostrado manifestaciones de enfermedad. Dos animales experimentaron seroconversin y sintetizaron anticuerpos que reaccionan con protenas de los genes env y gag del VIH. Uno de ellos, una hembra, que contena dos copias del provirus de VIH, se apare con ratones machos FVBno transgnicos; se han obtenido dos camadas. Aproximadamente 50% (9/19) de los animales de la F-l contrajeron un sndrome singular y murieron. Los rasgos clinicopatolgicos de los animales afectados consisten en aspereza, descamacin y grietas en la piel de la cola, patas y orejas (en el microscopio se caracterizan por hiperqueratosis y acantosis), atrofia del timo (alrededor de 20% del tamao de este rgano en los miembros no transgnicos de la camada), linfadenopata e infiltrados linfocticos en el bazo, los pulmones y el intestino. Los animales manifestaron sntomas entre los 12 y 14 das de edad y murieron aproximadamente dos semanas despus. Los animales afectados tenan siempre provirus de VIH, mientras que los sanos no eran transgnicos.

Conclusiones y recomendaciones
La reunin de consulta indic claramente que existen varios modelos animales de la infeccin y enfermedad por el VIH potencialmente tiles. Se examinaron tres modelos principales: virus de la inmunodeficiencia smica (VIS), lentivirus de animales no primates y la infeccin por VIH de primates no humanos. Los virus de la inmunodeficiencia smica abarcan un grupo diverso de lentivirus no humanos miman-rente relacionados con el VIH. Han sido aislados de macacos, mangabeys fuliginosos, monos verdes africanos y mandriles. Se sabe que las dos ltimas especies

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fueron infectadas en su hbitat natural. El VIScomparte una serie de caractersticas moleculares y biolgicas con el VIH y causauna enfermedad semejante al SIDA en ciertos primates no humanos. El modelo del VIS ser importante para comprender la patognesis de la enfermedad y facilitar la evaluacin de las vacunas y estrategias de tratamiento experimentales para el SIDA. Los lentivirus de los animales no primates abarcan varios virus persistentes que producen enfermedades debilitantes crnicas y, a veces, inmunodeficiencia en diferentes especiesanimales. No se ha sabido que estos virus infecten a los primates, incluido el hombre. Los modelos de animales no primates, en especial los lentivirus bovino y felino, podran emplearse para elucidar la compleja biologa de la infeccin por el VIH, incluido el mecanismo de induccin de la inmunidad protectora. Una ventaja importante es que la infeccin por estos virus es comn en el mundo entero y para trabajar con ellos no se necesitan medidas especialesde contencin de riesgos biolgicos para proteccin humana. Los lentivirus de animales pequeos podran servir para la seleccin preliminar de un gran nmero de agentes antivricos potencialmente tiles. Los chimpancs son suceptibles a la infeccin por el VIH-1 y presentan una respuesta inmunitaria humoral parecida a la observada en la infeccin por VIH del hombre. A los 48 meses de la infeccin, ningn chimpanc present manifestaciones clnicas del SIDA, pero ahora se estn observando ciertos cambios en los tipos de anticuerpos contra el VIH que pronostican la enfermedad en el hombre. La aplicacin a los chimpancs de una diversidad de vacunas experimentales ha tenido por resultado la formacin de clulas T especficasdel VIH y la formacin de anticuerpos, si bien con actividad neutralizante escasao indetectable. Los chimpancs vacunados que fueron inoculados con VIH-1 no estaban protegidos y actualmente se estn evaluando inmungenos ms eficaces. Los participantes en la reunin formularon las siguientes recomendaciones a la OMS: a) Fomentar nuevas investigaciones sobre modelos animales, incluidos los del VIH, VIS y lentivirus en animales no primates, con especial atencin a los mecanismos patognicos, posibles medidas para la inmunidad protectora y el tratamiento, y estudios sobre la diversidad de los lentivirus de primates y la historia natural de la infeccin que causan. Asimismo, deben acelerarse las investigaciones bsicas y aplicadas acercadel VIS que actualmente estn en marcha e idear nuevas posibilidades de usarlas. b) Ayudar a establecer instalaciones para la investigacin de primates y a coordinar los esfuerzos de colaboracin internacional entre investigadores de distintos pases. Para este propsito es decisiva la necesidad de contar con instalaciones nuevas que ofrezcan suficiente proteccin biolgica. c) Continuar facilitando el intercambio de informacin pertinente a los modelos animales de infecciones por VIH y VIS auspiciando reuniones cientficas y tcnicas y la publicacin de informes tcnicos.

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d) Colaborar en los esfuerzos encaminados a lograr el desarrollo y uso ptimo de los modelos de lentivirus en primates y no primates, que comprendan la elaboracin de sistemas accesorios de reactivos y pruebas que sirvan como depsito de anticuerpos pertinentes para caracterizar los virus y las clulas de inters. La OMS debera facilitar la disponibilidad de estos reactivos mediante la creacin de centros de referencia de lentivirus animales. e) Formular recomendaciones sobre el uso de modelos animales apropiados de la infeccin por el VIH en la evaluacin de vacunas y agentes teraputicos experimentales.

Participantes
L. 0. Arthur, Instituto Nacional del Cncer, Centro de Investigacin sobre Cncer de Frederick, MD, Estados Unidos de Amrica. J. Desmyter, Instituto Rega, Universidad Catlica, Lovaina, Blgica. R. C. Desrosiers, Escuela de Medicina de Harvard, Centro Regional de Investigacin sobre Primates de Nueva Inglaterra, Southborough, MA, Estados Unidos (Conw/ator). G. R. Dreesman, Departamento de Virologa e Inmunologa, Fundacin ara la Investigacin Biomdica del Suroeste, San Antonio, TX, Estados Unidos (Copresr;t:ente). P N. Fultt, Centro Regional de Investigacin sobre Primates de Yerkes, Universidad Emory, Centro de Ciencias de la Salud Robert W. Woodruff, Atlanta, GA, Estados Unidos. M. Girard, Vacunas Pasteur-1. Marnes-La-Coquette, Francia. M. A. Gonda, Laboratorio de Estructura Celular y Molecular, Instituto Nacional del Cncer, Centro de Investigacin sobre Cncer de Frederick, Frederick, MD, Estados Unidos. M. Hayami, Departamento de Patologa Animal, Instituto de Ciencias Mdicas, Universidad de Tokio, Tokio, Japn. W. Koff, Programa del SIDA, Instituto Nacional sobre Alergia y Enfermedades Infecciosas, Institutos Nacionales de Salud, Rockville. MD, Estados Unidos. T Lee, Departamento de Biologa del Cncer, Escuela de Salud Pblica de Harvard, Boston, MA, Estados Unidos. M. A. Martin, Laboratorio de Microbiologa Molecular, Instituto Nacional sobre Alergia y Enfermedades Infecciosas, Institutos Nacionales de Salud, Bethesda, MD, Estados Unidos. P. A. Marx, Unidad de Virologa e Inmunologa, Centro de Investigacin sobre Primates de California, Universidad de California, Davis, CA, Estados Unidos. M. Murphey-Corb, Centro Regional de Investigacin sobre Primates del Delta, Universidad de Tulane, Covington, LA, Estados Unidos. 0. Narayan, Departamento de Medicina y Neurologa Comparadas, Escuela de Medicina de la Universidad Johns Hopkins, Baltimore, MD, Estados Unidos (Correlator). G. V. Quinnan, Divisin de Virologa, Centro de Evaluacin e Investigacin de Sustancias Biolgicas, Administracin de Alimentos y Medicamentos, Bethesda, MD, Estados Unidos (Relator) . G. C. Schild, Instituto Nacional de Normas y Regulacin de Productos Biolgicos, Potters Bar, Herts., Inglaterra (Presidente). C. Stahl-Hennig, Centro Alemn de Primates, Gotinga, Repblica Federal de Alemania. J. Weber, Departamento de Medicina, Real Escuela de Medicina para Postgraduados, Hospital Hammersmith, Londres, Inglaterra (Correlator). H. Wolf, Instituto de Higiene y Microbiologa Mdica Max von Pettenkofer, Universidad de Munich, Munich, Repblica Federal de Alemania. J. Yamamoto, Departamento de Medicina, Escuela de Medicina Veterinaria, Universidad de California, Davis, CA, Estados Unidos. J. M. Zarling, Oncogen, Seattle, WA, Estados Unidos.

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Secretatz de la OMS (Organizacin Mundial de la Salud, Ginebra, Suiza) G. Ada, Programa Especial de Investigaciones, Desarrollo y Formacin de Investigadores sobre Reproduccin Humana. T. Bektimirov, Subdirector General. D. Devlin, Oficina del Asesor Jurdico. J. Esparza, Servicio de Investigacin Biomdica, Programa Global sobre el SIDA (Secretatio). J. Gowans, Programa Global sobre el SIDA. V. Grachev. Sustancias Biolgicas. E. Karamov, Servicio de Investigacin Biomdica, Programa Global sobre el SIDA. D. Margrath, Sustancias Biolgicas. J. Mann, Programa Global sobre el SIDA. J. B. Milstien, Sustancias Biolgicas. H. Nieburgs, Divisin de Enfermedades no Transmisibles. H. Tamashiro, Servicio de Investigacin Biomdica, Programa Global sobre el SIDA. G. Torri iani, Divisin de Enfermedades Transmisibles. R. Wrd us, Programa Global sobre el SIDA. 2 P Wright, Programa Ampliado de Inmunizacin.

Referencias
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