You are on page 1of 3

LP 6 si P 7 Determinarea activitii enzimatice a -amilazei serice Amilazele sunt -1,4 glicozodaze care catalizeaz degradarea hidrolitic a amidonului i glicogenului,

acionnd asupra legturilor -1,4 glicozidice cu producere de dextrine, maltoz i cantiti mici de glucoz. Amilazele care acioneaz n tubul digestiv uman sunt -amilaze (endoamilaze). Aceste enzime sunt importante pentru digestia amidonului ingerat, rolul cel mai important revenindu-i amilazei pancreatice, deoarece amilaza salivar acioneaz numai n cavitatea bucal i este inactivat de mediul gastric puternic acid. Determinarea activitii enzimatice a -amilazei serice prin metoda Smith i Roe modificat Amilaza seric provine att din glandele salivare, ct i din pancreas, ficat (3/4 din amilaza normal), intestin, esut gras, musculatur Principiul metodei: Dozarea activitii enzimatice a -amilazei serice pe substrat de amidon se bazeaz pe determinarea cantitii de amidon nehidrolizat de ctre enzim ntr-un anumit interval de timp. n prezena iodului, amidonul formeaz un compus de culoare albastr. Se determin intensitatea coloraiei cu iodul care este proporional cu concentraia amidonului rmas nehidrolizat dup incubaie n prezena amilazei i invers proporional cu activitatea enzimatic. Calcul : EM-EP / EM x 1000 = Uniti amilazice/dl ser Valori de referin: 60-200 U amilazice/dl ser Semnificaie diagnostic: 1. Valori crescute: a) valori marcat crescute se constat n: Stimularea secreiei ce caracterizeaz sindroamele pancreatice obstructive n care apare o cretere imediat i de mari proporii a valorilor acestei enzime (de 6-10 ori normalul), dar tranzitorie (creterea dureaz aproximativ 3 zile) exemplu: pancreatita acut. Creteri ale amilazei serice ce depesc de 3-5-10 ori valorile normalese produc la circa 6 ore de la debutul acut i dureaz 3-5 zile. Atunci cnd valorile depesc de peste 10 ori pe cele normale, disgnosticul cel mai frecvent este de pancreatit acut. O cretere a amilazei la triplul valorilor normale indic o leziune inflamatorie pancreatic, iar n necroza extins a pancreasului valorile pot crete de pn la 40 ori peste valoarea normal. Creterea amilazemiei este tranzitorie; persistena creterii pe o durat de peste10 zile semnific fie agravarea procesului pancreatic, fie apariia unei complicaii. a) valori moderat crescute apar n: cancer de cap de pancreas; afeciuni abdominale acute (ulcer perforat, ocluzie intestinal, colecistit acut, apendicit acut, peritonit); parotidita acut epidemic; hepatita acut; dup intervenii chirurgicale n etajul abdominal superior; dup administrarea unor medicamente (morfin, corticoizi); n decompensarea cetoacidozic a ficatului; oc, traumatisme abdominale i cerebrale; cancer pulmonar; radioterapie n pancreatita cronic ca i n carcinomul pancreatic rezultatele pot fi destul de neltoare, amilaza crescnd n ser doar intermitent, n cursul unor pusee evolutive sau necrotice. Unele afeciuni renaleinsuficiena renal acut, insuficiena renal cronic decompensat - pot fi nsoite i de valori moderat crescute ale amilazei serice ca urmare a afectrii eliminrii enzimei;

lipsa de normalizare a amilazemiei dup 48-72 de ore de la debutul unei pancreatite acute hemoragice trebuie s atrag atenia i asupra unei alterri a capacitii rinichiului de a excreta enzima. Creteri ale amilazei serice se constat i n macroamilazemie, afeciune cu caracter familial caracterizat prin prezena unor molecule anormal de mari ale amilazei i care nu pot fi excretate de rinichi. 2.Valori sczute se constat n: atrofiile pancreatice; afectarea acut sau cronic hepatocelular. Determinarea lipazei serice Lipazele sau carboxiesterazele sunt enzime ce catalizeaz hidroliza esterilor carboxilici rezultnd o molecul de acid i una de alcool, conform reaciei R-CO-O-R HOH R-COOH R-OH Lipazele care acioneaz asupra lipidelor neutre sunt prezente n organismul uman n sucul pancreatic, snge, plmni, rinichi, stomac (numai la nou-nscut). Activitatea lipazei este favorizat de prezena activatorilor srurile de Ca2 , acizii biliari i albuminele. Lipazele sunt inhibate de metalele grele. Lipaza pancreatic are pH-ul optim 8,0 i este inhibat de chinin. Semnificaia diagnostic Concentraia lipazei serice este mai mult legat de activitatea pancreasului; n toate pancreatitele verificate posoperator lipazemia a fost crescut, n timp ce amilazemia putea s aib valori normale. In pancreatit acut, creterea lipazei serice se produce lent. Dup primele ore, lipaza se menine crescut n snge mai mult vreme, iar excreia ei urinar este mai lent. Determinarea lipazei serice este util ncepnd cu a treia zi de boal cnd amilazemia devine normal. De aceea, n urmrirea evoluiei unei pancreatite acute se recomand dozarea ambelor enzime i n dinamic (repetat). n cancerul pancreatic, hiperamilazemia este observat mai frecvent dect hiperamilazemia. Lipaza ca i amilaza se determin i n revsatele seroase pleurale i/sau peritoneale.

Lp 7 Determinarea activitii amilazei urinare prin metoda Wohlgemuth n urin exist n mod normal acele enzime a cror greutate molecular este mai mic de 60000 daltoni i care pot filtra prin membrana glomerular i nu mai sunt reabsorbite. Creterea amilazemiei are drept consecin amilazuri. Practic, se recomand asocierea determinrii determinrii amilazei serice cu cea urinar, deoarece maximum de eliminare renal este atins mai trziu i dureaz mai mult dect cel al amilazemiei, leziunile pancreatice putnd fi diagnosticate chiar i dup ce amilazemia a revenit la normal. Principiul metodei: Se apreciaz cantitatea minim de urin care mai conine suficient enzim pentru a hidroliza amidonul pn la dextrine necolorabile (acrodextrine) n reacia cu iodul. Mod de lucru: Se iau 10 eprubete numerotate n care se fac diluii de urin de la 1/1 la 1/512 cu ser fiziologic, astfel: - n eprubeta 1 se pipeteaz 2 ml de urin, iar n urmtoarele 9 eprubete cte 1 ml soluie NaCl 9/1000; - din eprubeta 1 se ia 1 ml de urincare se introduce n eprubeta 2 i se agit; - din eprubeta 2 se ia 1 ml amestec i se introduce n eprubeta 3 i se agit; - se repet operaia pn la ultima eprubet din care se ia 1ml amestec i se ndeprteaz. Diluiile de urin sunt redate in tabelul urmtor: Nr. eprubetei 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Diluia urinii 1/1 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 1/512 Activitatea enzimatic 2 4 8 16 32 64 128 256 512 1024 (UW) Dup ce s-au realizat diluiile, n fiecare eprubet se adaug cte 2ml soluie amidon 1% i se agit. Se incubeaz toate eprubetele la 370C, 30 minute. Se rcesc i apoi se adaug n fiecare eprubet cte 2-3 picturi soluie de iod 0,1N i se agit. Gradul de hidroliz a amidonului sub influena amilazei este reflectat de coloraia soluiilor din cele eprubete, astfel - eprubetele cu soluie de culoare albastr conin amidon nehidrolizat; - eprubetele cu soluie colorat violet conin amilodextrine; - eprubetele cu soluie culoare roie conin eritrodextrine; - eprubetele cu soluie culoare galben conin flavodextrine; - eprubetele cu soluie incolor conin acrodextrine i maltoz. Calcul Dac, de exemplu, culoarea albastr apare n eprubeta 4, calculul se va face pe baza diluiei din eprubeta 3 care conine cantitatea minim de enzim necesar hidrolizei totale sau pariale a intregii cantiti de amidon coninute n eprubeta respectiv. 1 unitate Wohlgemuth reprezint cantitatea de amilaz care hidrolizeaz 1 mg amidon n 30 minute, la 370C. Formula de calcul UW= 2/ 1/4= 8 UW Valori normale 8-64 UW Valorile crescute ale activitii enzimatice a amilazei n urin sunt efectul acelorai cauze patologice care determin creterea amilazemiei. Valori sczute pot s apar n insuficiena renal.

You might also like