UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO DE JANEIRO CENTRO DE CINCIAS DA SADE INSTITUTO DE BIOQUMICA MDICA - IBqM

Tcnicas de Laboratrio Turma: 2011.2 Professor: Gabriela Aluno: Ludmila Alem

Titulao; Preparo de Soluo; Dilise

Grupo: Laura Pasqualette- pasqualette@gmail.com Ludmila Alem-ludmila.alem@msn.com Luiza Bandeira-bandeira.ld@hotmail.com Isadora Zeferino- imzeferino@hotmail.com Mariana Lima-mariianaliima@gmail.com Lvia Guapyass-liviaguapyassu@hotmail.com

Rio de Janeiro, 25 de setembro de 2011.

ndice:
Introduo Geral do Trabalho................................... Preparo de Solues..................................................
*Introduo *Objetivos *Resultados e Discusso *Concluso

Titulao....................................................................
*Introduo *Objetivos *Resultados e Discusso *Concluso

Dilise.....................................................................
*Introduo *Objetivos *Resultados e Discusso *Concluso

Concluso Geral do Trabalho............................ Referncias Bibliorficas do Trabalho..............

Introduo Geral do Trabalho

Os procedimentos aqui relatados so utilizados com grande frequncia e variedade de aplicaes no cotidiano de laboratrios de bioqumica. So relatadas as experincias com as tcnicas de preparo de solues, curvas de titulao e dilise. Essas tcnicas consistem respectivamente na formao de sistemas homogneos compostos por duas partes solvente e soluto, representao grfica da variao de pH de uma soluo em funo da adio de um titulante e separao e purificao de molculas de acordo com seu peso molecular. Na realizao das prticas descritas foram utilizados mtodos matemticos (para clculo de massas de solutos), materiais especficos para cada procedimento e obtidos os resultados descritos detalhadamente neste relatrio.

Preparo de solues
I: Introduo
Uma soluo uma mistura homognea de um soluto (substncia a ser dissolvida) distribuda atravs de um solvente (substncia que efetua a dissoluo). Existem solues nos trs estados fsicos: gs, lquido ou slido. As solues mais comumente utilizadas so aquelas no estado lquido, especialmente as que usam gua como solvente. (Apesar do fato de a gua no ser um solvente universal, pois no dissolve com eficincia compostos de natureza apolar.) Para se obter uma soluo homognea necessrio que sejam pesadas/medidas quantidades previamente calculadas das espcies envolvidas soluto e solvente a fim de se obter preciso no preparo da soluo desejada.

II: Objetivos
O experimento teve como objetivo demonstrar o preparo de uma soluo de 100ml de Fosfato de Potssio Dibsico.

III: Resultados e Discusso

Dados das espcieis necessrias para o preparo da soluo: Soluto: 50mM de Fosfato de Potssio Dibsico para ser diludo em um volume total de 100 mL de soluo. Calcula-se o peso molecular do sal, cuja frmula K2HPO4. Sendo que K(40), H(1), P(15), O(16) temos que: PM(K2HPO4) = 2.(40) + 1.(1) + 1.(15) + 4.(16) = 80 + 1 + 15 + 64 = 175. Com o peso molecular do sal calculado, o prximo passo recorrer a frmula que relaciona o volume da soluo, o peso molecular do sal e a molaridade desejada para obter a massa de soluto requerida. m = M.v.PM m = 0,05.0,1.175 m = 0,875 g -> 875mg Tendo a massa de soluto necessria, o sal levado at a balana analtica para a pesagem. Tendo isso feito, a quantidade colhida do recipiente de pesagem depositada em um bquer, vidraria na qual ser preparada a soluo. Em seguida, o soluto dissolvido em uma parte do solvente com o auxlio de um agitador magntico. Quando o soluto estiver devidamente solubilizado, a soluo transferida para uma proveta com a utilizao de um funil. Ambos os recipientes so lavados com solvente para evitar que resqucios do soluto fiquem depositados nos mesmos. A proveta - por ser uma vidraria marcada com uma medio volumtrica precisa - utilizada para o ajuste final do volume da soluo. A proveta contendo a soluo vedada com papel filtro e invertida repetidas vezes at que alcance um estado homogneo.

IV: Concluso
Ao fim desta experincia foi possvel observar todas as etapas envolvidas no processo de preparo de uma soluo 50mM do sal K2HPO4.

Titulao
I: Introduo
A Curva de titulao consiste na representao grfica dos valores de pH que o titulado adquire com a adio de determinado volume de titulante, sendo comumente usada uma soluo tampo reagindo com cido ou base forte para a construo do grfico. Para obter os valores precisos dessa reao, utiliza-se o pHmetro. Pode-se tambm utilizar fitas de Tornassol ou indicador colorimtrico, que fornecero resultados menos precisos.

II: Objetivos
Ser capaz de construir um grfico de titulao a partir da discusso sobre o comportamento de uma soluo tampo com o uso do pHmetro. E comparar os resultados do pHmetro com os obtidos com o uso das fitas de Tornassol e a Fenolftalena 1%, o colormetro utilizado.

III: Resultados e Discusso

Ao incio do experimento, se tinha 100 ml de uma soluo 100mM de um tampo TRIS (PM = 121,13 g/mol) , onde foram gradativamente adicionadas pequenas quantidades de HCl em concentraes diferentes para reagir com a base dessa soluo. O pH inicial era de 10,02. Primeiramente adicionou-se 10 ul de HCl 1M e o pHmetro indicou que houve uma variao de pH para 9,91. Aps cada adio de pequenos volumes de HCl, foram retiradas lquotas da amostra e colocadas em tubos de ensaio que foram reservados para posterior anlise da variao do pH com Fenolftalena 1% ( indicador colorimtrico) e com a fita de Tornassol. No entanto, apesar das adies gradativas de HCl, no qual foram alterados o volume e/ou a molaridade do cido, observou-se que a variao de pH no era significativa. Isso ocorre porque aps a adio do HCl, esse se dissocia completamente, e assim a base presente na soluo levada a reagir com o cido para que um novo equilbrio seja restabelecido. No equilbrio, as concentraes de base e de seu cido conjugado so equivalentes e nesse momento o valor do pH igual ao seu pKa. Como a variao do pH foi pequena perante a adio de HCl na soluo, concluiu-se que a faixa de pH entre 10 e 8 correspondia a sua faixa de tamponamento. (Zona na qual o sistema se torna resistente a alteraes no pH adio das espcies H+ ou OH-). Aps isso, um pequeno volume adicionado de HCl variou drasticamente o valor do pH (2,96). Esse efeito foi observado porque a base j estava totalmente protonada e a concentrao de H+ era muito maior, no havendo ento mais base para reagir. Por fim, fez-se uso das fitas de Tornassol e da Fenolftalena 1% em todas as lquotas extradas a fim de se observar como reagiam com a variao de pH. As fitas funcionaram satisfatoriamente em uma faixa bsica e clarearam muito pouco com a diminuio do pH, fornecendo uma noo generalizada de em qual pH se encontrava cada amostra. J a Fenolftalena 1% clareou seu tom violeta intenso gradativamente at a lquota que se caracterizava por um pH cido, onde no havia pigmentao visvel. A variao gradativa e bastante perceptvel permitiu uma melhor compreenso de qual pH estava sendo medido. Entretanto, o instrumento com capacidade de fornecer um valor de pH exato foi o pHmetro. Os valores obtidos atravs deste mecanismo foram utilizados para a construo do grfico anexado a este relatrio.

IV: Concluso
Com esta prtica foi possvel observar como se comporta uma soluo de tampo TRIS com a adio gradativa de um cido forte (HCl) e as variaes de pH obtidas.

Dilise
I: Introduo
A dilise um processo que separa protenas de pequenos solutos se aproveitando do maior tamanho das protenas. um processo que separa molculas de acordo com o seu tamanho, atravs do uso de membranas semipermeveis, contendo poros menores que dimenses macromoleculares. Esses poros permitem que molculas pequenas, tais como, sais e pequenos metablitos se difundam atravs da membrana bloqueando a passagem de molculas maiores. A dilise retm grandes protenas dentro do saco ou tubo membranoso, enquanto permite que a concentrao de outros solutos na preparao de protenas mude at que entre em equilbrio com a soluo fora da membrana.

II: Objetivos
O experimento teve como objetivo demonstrar que a difuso atravs da membrana utilizada na dilise (Membrana de Dilise) se d em funo do tempo. O experimento tambm procura demonstrar que a dilise um processo de difuso utilizado para a purificao de molculas.

III: Resultados e Discusso

A preparao da dilise consiste na utilizao de um Becker contendo gua destilada, uma Membrana de Dilise, Corante (Azul de Dextran e Vermelho de Cresol), um Agitador Magntico, Barra Magntica, Fita Crepe, Tesoura, Grampo e Cordo. A Membrana de Dilise foi aberta dentro do Becker de volume mximo 2000ml contendo 1500ml de gua destilada, separando assim as paredes, formando um tubo. Uma das extremidades foi amarrada com um cordo formando assim o recipiente (saco) no qual foi depositado 5ml da soluo do corante Azul de Dextran. A outra extremidade foi amarrada. O Becker foi ento depositado sobre o Agitador Magntico e no fundo do mesmo, depositada a Barra Magntica. O saco de dilise foi preso com fita crepe na lateral do Becker, de modo a no impedir rotao da Barra Magntica. O Agitador Magntico foi ligado em velocidade mediana, suficiente para manter a gua destilada em movimento, a fim de colaborar com o processo de difuso. O experimento reservado. Aps aproximadamente duas horas, nota-se que o contedo do saco de dilise perdeu sua colorao rsea intensa, demonstrando que houve uma diminuio na concentrao do mesmo. Isso significa que as molculas do corante atravs da difuso se depositaram fora do saco de dilise. Nesse experimento no foi possvel notar colorao rsea na gua Destilada devido ao grande volume em relao a essas molculas de soluto.

IV: Concluso
Concluiu-se que devido ao movimento das molculas, o corante se distribuiu por toda a massa de gua destilada at alcanar uniformidade completa. A uniformidade ocorre porque o soluto (corante) vai se distribuindo no solvente, segundo um gradiente de concentrao em funo do tempo, at alcanar o equilbrio.

Concluso Geral do trabalho:

Ao final das prticas realizadas em grupo, foi possvel adquirir um conhecimento bsico laboratorial: o manuseio de instrumentos (balana analtica, pipetas, agitador magntico, vidrarias), preparo de solues, medies em pHmetro e com o auxlio de indicadores, pesagem de soluto. Alm de um primeiro contato com a rotina e funcionamento de um laboratrio.

Referncias bibliogrficas do trabalho:

Princpios de Bioqumica de Leghninger, David L. Nelson & Michael M. Cox, 5 edio. www.proead.unit.br/professor/wanessa/.../Pratica%2003%20Dialise.doc www.exames.org/index.php?option=com_docman...gid... (arquivo em pdf) http://sciencecompany.com/lab/test_solns.htm http://pt.shvoong.com/exact-sciences/chemistry/1767916-defini%C3%A7%C3%A3osolu%C3%A7%C3%B5es/#ixzz1Y4YRTsym vsites.unb.br/iq/lqaa/gaston/SOLUCOESfinal.doc