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Segunda Escola de Vero do Instituto do Milnio de Fluidos Complexos IFUSP, de 12 a 15 de fevereiro de 2007 Aula: Metabolismo Lipdico (LDL, HDL,

VLDL e colesterol) Dra. Mrcia Dias Teixeira Carvalho As coronariopatias que levam ao infarto do miocrdio so a causa de morte mais importante nos centros urbanos industrializados. Atualmente elas so responsveis por mais de 50% do nmero total de mortes registradas nos centros urbanos, e at o ano 2020 j sero a causa de 40% das mortes do planeta. Por esta razo, existe um grande empenho mundial para se compreender o complexo mecanismo biolgico ligado ao processo aterognico, sendo fundamental para tratar a aterosclerose que est na base desta afeco. A aterosclerose uma doena progressiva que se inicia na infncia, no costumando se manifestar antes da adolescncia ou da fase adulta. O estudo do metabolismo lipdico complexo em parte devido baixa solubilidade dos lipdios circulantes em meio aquoso. Para serem transportados no plasma os lipdios valem-se de um sistema constitudo por estruturas organizadas, chamadas lipoprotenas (LP) suprimindo os tecidos com lipdios provenientes da dieta ou sintetizados pelo prprio organismo. As LP so partculas constitudas por triacilgliceris (TAG) que formam seu ncleo hidrofbico junto com colesterol esterificado (CE) e vitaminas lipossolveis, circundada por componentes anfiflicos (fosfolipdios - FL) e colesterol livre (CL); alm de um conjunto de protenas que mantm a estabilidade e solubilidade das diferentes partculas em meio aquoso. As protenas que constituem as LP so denominadas apolipoprotenas (apoLP). Elas contribuem para a regulao do metabolismo das lipoprotenas por modularem a atividade de enzimas e interagirem com receptores celulares especficos e de alta afinidade. As principais apoLP so as apoA (A-I, A-II e AIV), apoB (B-48 e B-100), apoC (C-I, C-II e C-III), apoD e apoE. Estresse, sexo, raa, lcool, drogas, obesidade e doenas genticas afetam a concnetrao de apoLP.

As diversas LP apresentam a mesma estrutura geral, porm diferem na proporo de seus constituintes lipdicos e, sobretudo, pelo tipo de apoLP, o que lhes confere um amplo espectro de tamanho, densidade e carga eltrica. A densidade depende das caractersticas fsicas e qumicas das LP, sendo inversamente proporcional ao contedo de lipdios na partcula. De acordo com sua densidade manifestada durante a ultracentrifugao podem ser divididas em cinco classes principais: 1) quilomcrons (QM), partculas com densidade menor que 0,950 g/mL; 2) lipoprotenas de densidade muito baixa (menor que 1,006 g/mL = Very Low Density Lipoprotein - VLDL); 3) lipoprotenas de densidade intermediria (entre 1,006 e 1,019 g/mL = Intermediate Density Lipoprotein - IDL), correspondendo a maior parte dos remanescentes dos quilomcrons e VLDL; 4) lipoprotenas de densidade baixa (entre 1,019 e 1,063 g/mL = Low Density Lipoprotein - LDL); e 5) lipoprotenas de densidade alta (entre 1,063 e 1,210 g/mL = High Density Lipoprotein - HDL). Os principais lipdios plasmticos so o colesterol, os TAG e fosfolipdios. Os quilomcrons (QM) e as VLDL apresentam predominantemente TAG em sua constituio e proporcionalmente pouco fosfolipdio e protena, enquanto na outra ponta do espectro as HDL so as LP que possuem maior proporo de fosfolipdios e protenas e, portanto, menos TAG e colesterol que as outras LP. A LDL a LP mais abundante no plasma, sendo responsvel pelo transporte do colesterol para clulas em processo ativo de diviso. Caractersticas das Principais ApoLP ApoLP A-I A-II A-IV B-100 B-48 C-I C-II C-III E Funo Cofator de LCAT Diminui a atividade da LCAT Estimula LLH Atua na remoo de Col dos m Componente estrutural; Interao com o receptor LDL Componente estrutural Ativador da LCAT Cofator da LPL Inibidor da LPL e da interao com LRP Interao com o receptor B/E e LRP Ativador de LCAT PM (dalton) Intestino e fgado 28.000 Intestino e fgado 17.000 Intestino e fgado Fgado Intestino Fgado Fgado Fgado Fgado 41.000 512.000 241.000 6.500 8.800 8.700 34.000 Local de sntese

Funo Metablica das LP e Principais ApoLP Estruturais e de Superfcie LP QM Funo ApoLP Estrutural B-48 B-48 B-100 B-100 A-I/A-II A-I/A-II ApoLP de Superfcie A-I, A-IV, Cs Cs e Es Cs e Es -----Cs e Es Cs e Es

Transporte de TAG do intestino ao tecido adiposo, muscular e heptico QM-R QM aps hidrlise dos TAG VLDL Transporte de Col e TAG do fgado para outros tecidos LDL Transporte de Col para o fgado e tecidos HDL-2 Transporte de Col para o fgado pela via direta ou indireta HDL-3 Remoo do Col dos tecidos

Transporte de Lipdios Ciclo exgeno (origem alimentar) Os QM so sintetizadas no retculo endoplasmtico dos entercitos, migram para o complexo de Golgi e so liberados no espao intersticial por exocitose; conduzidos pela linfa mesentrica, atingem a circulao sangunea pelo ducto torcico. Ao atingirem o endotlio dos capilares nos tecidos perifricos, como msculo e tecido adiposo, os TAG so hidrolisados em monoglicerdio e cidos graxos, pela ao da enzima lipoprotena lpase (LPL). Esta produzida nos adipcitos, atravessa as clulas endoteliais e adere superfcie da membrana plasmtica na luz do vaso capilar. Os cidos graxos resultantes so transportados pela albumina presente no plasma aos diversos tecidos que os utilizam como fonte de energia ou para ressntese de TAG. Similarmente, na superfcie da partcula, ocorrem outros processos, com a transferncia de FL, CL e apoLP (apoA-I, apoA-II e apoC) dos QM, principalmente para a HDL. As partculas remanescentes do processo de metabolizao dos QM so menores, com contedo de TAG diminudo. Os QM remanescentes so ento rapidamente removidos do plasma pelos receptores hepticos especficos, isto , receptor LDL e o receptor relacionado a protena (LRP). Os QM e seus remanescentes desempenham um papel regulador no metabolismo corpreo do colesterol, podendo estar envolvidos no processo aterognico. A degradao dessas partculas e da LDL pelo fgado suprime a necessidade de sntese do colesterol. A captao desses remanescentes por clulas de hepatoma humano regulada pelo contedo de colesterol celular e ocorre em parte via receptor LDL.

Aps a interao dos QM remanescentes com os receptores do hepatcito, a enzima lipoprotena lpase heptica (LLH) localizada na superfcie das clulas endoteliais dos sinusides hepticos hidrolisa os TAG restantes. Ocorre ento, o catabolismo intracelular da LP com liberao de cidos graxos, glicerol, aminocios e hidlise de CE. Agora o colesterol livre pode ser reesterificado, metabolizado em cidos biliares (cerca de 95% do cido biliar total) ou usado na sntese heptica de colesterol (cerca de 50% do colesterol total). J no intestino ocorre a excreo de 50% do colesterol e de 5% dos cidos biliares, mantendo a homeostase do colesterol. O pico da quilomicronemia normalmente ocorre entre 3 a 6 horas aps a ingesto de lipdios pertencentes a alimentao. A taxa de remoo rpida, de forma que as partculas no so detectveis em indivduos normais aps um perodo de 12 horas. Transporte de Lipdios Ciclo endgeno (origem heptica) As VLDL, responsveis pelo transporte de TAG de origem heptica, so partculas grandes e tm como principal constituinte a apoB-100. Essas partculas secretadas pelo fgado so metabolizadas pela mesma via dos quilomcrons, interagindo com a LPL, transformando-se progressivamente em remanescente de VLDL, ou IDL, que so rapidamente removidas pelos receptores LDL do fgado. Porm, cerca de 70% do TAG da IDL so hidrolisados pela enzima lipoprotena LLH, transformando-se em LDL. As LDL so captadas pelas clulas em diferentes tecidos ou pelo fgado. No jejum de 12 horas, os TAG transportados no plasma porvm quase exclusivamente da sntese heptica de VLDL, a partir do aporte de cidos graxos livres do plasma, uma vez que no existe QM no plasma nesta fase. Sntese de HDL As HDL, principais responsveis pela remoo do excesso de CE, so sintetizadas no fgado e intestino ou a partir das LP ricas em TAG (QM e VLDL) pela ao da LPL perifrica. Durante o processo de reduo do volume das partculas ricas em TAG, componentes de superfcie dessas LP destacam-se como lminas ou bicamadas de CL, FL e apoLP, formando macroagregados discoidais precursores de HDL plasmtica, que so gradualmente enriquecidas

em CE pela ao da enzima lecitina-colesterol-acil-transferase (LCAT), responsvel pela esterificao do colesterol no plasma. Esse processo enriquece em CE, TAG e FL as partculas agora denominadas HDL3, dandolhes aparncia esfrica. Transporte reverso do colesterol (TRC) O transporte reverso do colesterol (TRC) um processo pelo qual o excesso de colesterol transportado das clulas perifricas, incluindo a ntima arterial, para o fgado, sendo ento excretado pela bile ou incorporado em VLDL. O TRC a nica via pela qual ocorre a eliminao do colesterol dos tecidos extra-hepticos, evitando seu acmulo. Portanto, se ocorrer alguma alterao nas etapas do TRC, a conseqncia ser um alto risco de doena arterial coronariana (DAC). A HDL3 vai progressivamente recebendo mais CE das clulas perifricas ou de QM, VLDL e LDL, aumentando o dimetro, diminuindo a densidade, e se transformando em HDL2. A protena de transferncia de CE (cholesteryl ester transfer protein CETP) transfere a maior parte do CE da frao HDL2 para as LP contendo apoB (QM, VLDL e LDL), trocando-os por seus TAG, caracterizando assim o transporte reverso do colesterol pela via indireta, responsvel por 70% do TRC. Alm disso, pela ao a LLH na circulao heptica, ocorre a hidrlise dos TAG e FL da frao HDL2, e interao desta frao com receptores SR-B1, o que caracteriza o transporte reverso do colesterol (TRC) pela via direta. Esta ltima etapa regenera HDL3, a mais abundante HDL do plasma humano. Metabolismo intracelular do colesterol Os macrfagos so as principais clulas envolvidas no metabolismo de LP. A captao de lipdios pelos macrfagos ocorre principalmente por duas vias: endocitose de lipoprotenas nativas e modificadas mediada por receptores (rLDL importante no metabolismo de LDL, interagindo com a lisina da apoB e arginina da apoE; rVLDL importante em tecido muscular liso e adiposo, sendo mais eficiente no reconhecimento de QM e VLDL; LRP liga-se a QM remanescentes pela apoE e lpase; e receptores scavenger SR que

reconhecem LP modificadas), e fagocitose de clulas, fragmentos de membrana e LDL agregada. As LDL so as principais LP transportadoras de colesterol no homem, responsveis por cerca de 60 a 70% do transporte de colesterol total (CT) plasmtico, sendo 75% esterificado. As LDL so partculas pequenas, com 150 a 300 de dimetro, constitudas por uma molcula de apoB-100, contendo principalmente CE no ncleo. As LDL so removidas da circulao mais lentamente que as outras LP, sendo preferencialmente captadas pelo receptor LDL de clulas em processo ativo de diviso (sntese de membrana) ou por tecidos que utilizam colesterol na sntese de hormnios esterides (supra-renal e gnadas) ou sais biliares. Estas partculas, devido ao seu pequeno tamanho, atravessam o endotlio e atingem a parede vascular. As funes do colesterol no organismo so definidas pelas suas caracterizadas qumicas. Mecanismos eficientes bem conhecidos so utilizados pelas clulas mantendo estvel o contedo de colesterol intracelular. A sntese de colesterol feita a partir de acetil-CoA pela ao reguladora da HMG-CoA. Envolve trs molculas de acetato para dar origem ao cido mevalnico, precursor do colesterol, encontrado na membrana do retculo endoplasmtico. Em processo ativo de diviso, as clulas aumentam a expresso de receptores LDL e da enzima hidroximetilglutaril-coenzima A redutase (HMGCoA redutase) aumentando simultaneamente a captao de colesterol a partir de lipoprotenas e sua produo. Dentro da clula, o CL diretamente, como tambm o proveniente da hidrlise do CE, garantem a homeostase do colesterol bloqueando sua sntese pela reduo da atividade da HMG-CoA redutase, e interrompendo a produo de receptores LDL. O metabolismo celular do colesterol estabilizado pela ao da enzima acil-colesterol-acil-transferase (ACAT) que reesterifica o CL com cido olico, depositado sob a forma de gotculas no citosol. Alm disso, a clula aumenta o contedo de colesterol na membrana celular externa, interagindo com a HDL. Entretanto os mecanismos de retirada do colesterol das clulas pela HDL permanecem controversos.

A LDL a mais aterognica das LP como foi demonstrado por estudos de formas genticas de hipercolesterolemia, investigaes populacionais, respostas clnicas obtidas por tratamento com drogas hipolipemisantes e estudos experimentais com animais. Outros componentes aterognicos so partculas pequenas de LDL, baixas concentraes de HDL-colesterol no soro, e altas concentraes de TAG, freqentemente associadas a concentraes elevadas de remanescentes de VLDL e QM. Estas situaes esto freqentemente associadas com hipertenso, resistncia insulina e estado clnico pr-trombtico. A LDL modificada por agregao, acetilao ou oxidao resulta na formao de clulas espumosas derivadas de macrfagos, de clulas musculares lisas e fibroblastos. Paralelamente crescem as evidncias mostrando que mecanismos imunes especficos participam do processo de formao da placa aterosclertica. A LDLox pode tornar os macrfagos mais imunoestimulatrios, modificando a expresso das molculas de classe II do complexo principal de histocompatibilidade (MHC = major histocompatibility complex); presena de clulas T e B na placa de ateroma; presena de anticorpos contra LDLox na circulao e na placa; a LDLox pode estimular as clulas T via macrfagos; a LDLox pode induzir nos macrfagos a expresso de protenas do choque trmico (HSP = heat shock protein) e de antgenos; a presena de auto-anticorpos contra LDLox ou contra a HSP considerada um fator de risco significante no desenvolvimento da aterosclerose. Resumindo, os anticorpos ou a resposta de linfcitos T contra a LDL modificada talvez sejam respostas ao aparecimento de novas espcies, originadas por mecanismos oxidativos O processo aterognico decorre de acmulo de lipdios caracterizando uma doena inflamatria. Neste sentido, o influxo de moncitos derivados de macrfagos e linfcitos T na hipercolesterolemia precedido por deposio extracelular de substncias amorfas e membranas ricas em lipdios. Outras causas da aterosclerose incluem modificaes da LDL, produo de radicais livres agravada pelo hbito de fumar, alteraes genticas, concentraes elevadas de homocistena no plasma e microorganismos.

In vitro, a LDL nativa no induz acmulo de CE em macrfagos, incluindo os moncitos / macrfagos humanos, que possuem receptor de alta afinidade para esta LP. Todavia, quando incubados com LDL modificada os macrfagos acumulam CE. GOLDSTEIN et al foram os primeiros a descrever uma LDL modificada quimicamente: a LDL acetilada capaz de transformar macrfagos em clulas espumosas in vitro, via receptor scavenger habitualmente ineficiente na captao de LDL nativa. Esse receptor tambm foi identificado em clulas de Kupffer e clulas endoteliais. Por outro lado, h evidncias de que o receptor scavenger reconhece outras formas de LDL quimicamente modificadas, como a oxidada, ou a conjugada com malonildialdedo. A oxidao de LDL vem recebendo muita ateno baseada em evidncias que indicam sua presena in vivo, em leses aterosclerticas. A peroxidao lipdica da LDL deve ser mediada por radicais livres ou por lipoxigenases produzidas por clulas endoteliais, musculares lisas, fibroblastos, moncitos e macrfagos. Os hidroperxidos resultantes interagem com os resduos de lisina da apoB-100 na LDL, modificando a protena e provocando seu reconhecimento pelos receptores scavenger. Assim, acredita-se que as modificaes da LDL por mecanismos oxidativos e enzimticos tenham potencial para gerar novas estruturas, como o caso dos peptdios da apo-B100 (neoeptopos), que podem induzir uma resposta humoral ou aumentar a resposta imune celular. Os macrfagos diminuem o nmero de receptores fisiolgicos para as lipoprotenas e passam a produzir receptores scavenger, que reconhecem lipoprotenas modificadas, principalmente a LDL oxidada. O CE captado hidrolisado por colesterol ster hidrolases e rapidamente reesterificao pela enzima ACAT, mantendo elevado o contedo celular de CE, levando formao de clulas espumosas que no abandonam a ntima. A leso aterosclertica caracterizada pelo acmulo de CE em clulas derivadas de moncitos circulantes, atradas por fatores quimiotticos das lipoprotenas modificadas, alm de fibroblastos e fibras musculares lisas da mdia. A atividade lisossmica faz com que a concentrao de colesterol livre aumente, deformando as membranas celulares do macrfago. O CE deposita-

se no citosol e nos lisossomos sob a forma de gotas, enquanto o CL, alm de se acumular nos lisossomos, tambm encontrado na membrana plasmtica e nas membranas de outras organelas intracelulares, formando as clulas espumosas. A conseqncia final o espessamento da parede arterial devido necrose celular, invaso da rea por inflamao e esclerose, levando formao do ateroma, que proporcional concentrao plasmtica de colesterol. Alm do clssico receptor scavenger outros receptores tem afinidade pela LDL oxidada. Estas protenas tem a habilidade de ligar-se a vrias estruturas no relacionadas, sendo ento denominados receptores multiligantes. Classificao dos receptores scavenger Classe A B outros Receptor SRA-I e SRA-II SRB-1 RFc Clula/Tecido macrfagos Adrenal, gnodas e fgado macrfagos Funo atribuda LDL oxidada transporte de colesterol Ligao com imunecomplexos

A complexidade da interao entre LDL oxidada e seus vrios receptores existe porque a LDLox no uma nica e bem definida partcula, mas tem uma variedade de propriedades fsicas e estruturais que dependem do tipo e da intensidade da oxidao. Oxidao com cobre, consequentemente ocorre a peroxidao dos AG poliinsaturados, decomposio de lipdios formando hidroperxidos e fragmentos aldehdicos. Outros oxidantes com: peroxidase, luz UV, radicais peroxil, formam hidroperxidos de lipdios com menor decomposio ou dano a apoB-100. A LDL modificada apresenta grau extremamente elevado de heterogeneidade (isto , apresenta vrios graus de alterao e fragmentao decorrentes do processo oxidativo). O acmulo de colesterol esterificado em moncitos favorecido por fatores quimiotticos das lipoprotenas modificadas, alm de fibroblastos e fibras musculares lisas. Isso leva ao espessamento da parede arterial, necrose celular, invaso da rea por inflamao e esclerose, formando o ateroma que proporcional a concentrao de colesterol total.

Qual a importncia da HDL? A remoo do excesso de colesterol das clulas espumosas requer trs etapas: (a) hidrlise do CE estocado, (b) transferncia de CL para a membrana plasmtica e (c) sua transferncia para a HDL. A HDL tem aes antiaterogncias (TRC) e anti-inflamatria por inibir a coagulao, diminuir a produo de PAF, fiminuir a migrao de mnocitos e aumentar a liberao do fator de relaxamanto do endotlio (PG12). O TRC envolve a captao de CL das clulas pelas HDL, sua esterificao no plasma pela LCAT e transporte direto para o fgado com captao preferencial de CE, ou transferncia do CE, mediada pela CETP, das HDL para as LP contendo apoB (VLDL, LDL e QM), portanto, um transporte indireto HDL, responsvel por 70% do TRC. Existe uma correlao inversa entre a concentrao plasmtica de HDL e o risco de infarto do miocrdio, conferindo proteo contra a aterosclerose. A HDL doadora de CE para outras LP, e aceptora de TAG das VLDL e LDL, o que facilita a ao da LH. A HDL interage diretamente com as clulas hepticas, provavelmente pela ligao da apoA-I com uma protena de ligao. O receptor scavenger SRB1, encontrado no fgado, ovrio, glndula adrenal e testculos, que tm baixa captao seletiva, porm alta afinidade para HDL, facilita a captao do CE. Resumindo, os lipdios se acumulam na ntima arterial desde os primeiros anos de vida, aparecendo inicialmente como manchas lineares amareladas, que avanam para o espeamento e fibrose, at o ateroma tpico, que em muitos casos leva a obstruo do vaso. Estudando-se a composio qumica da artria durante essa evoluo, nota-se que o contedo de colesterol aumenta progressivamente. Referncias Bibliogrficas
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