UNIVERSIDADE FEDERAL DO ABC

WAUBER MAURICIO JUNIOR

RELATRIO DE BASES EXPERIMENTAIS DA CINCIA

SANTO ANDR 2011 UNIVERSIDADE FEDERAL DO ABC

WAUBER MAURICIO JUNIOR

EXPERIMENTO 2 MICROBIOLOGIA
Relatrio apresentado disciplina de bases experimentais da cincia sob orientao da professora Maria Beatriz Fagundes.

SANTO ANDR 2011

SUMRIO

INTRODUO REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS OBJETIVOS PARTE EXPERIMENTAL MATERIAIS MTODOS PREPARO DO MEIO DE CULTURA PREPARAO DAS PLACAS RESULTADOS E DISCUSSO CONCLUSO

4 4 5 5 5 5 6 6 8 9

Introduo Faz pouco pouco mais de trezentos anos que a humanidade tem conhecimento sobre os microorganismos estudados primeira vez pelo cientista ingls Robert Hooke (1635-1703) e Antony van Leeuwenhoek (1632-1723) ambos desenvolveram o primeiro microscpio que possibilitou as primeiras observaes de bactrias e outros

micro-organismos a partir de diversas espcimes biolgicas. A microbiologia ou seja a rea da cincia que dedica-se ao estudo de organismos que somente podem ser vistos atravs do microscpio, faz uma importante contribuio para a humanidade no s para entendermos o funcionamento da vida mas tambm aplicada na industria para produo de remdios como antibiticos, na medicina pois grande parte das doenas que o homem est sujeito so melhor. Os organismos microscpicos so muito antigos, existem a mais de trs milhes de anos, e so totalmente dependente de outro organismos para sobreviver e suas reaes qumicas so essenciais para a manuteno da vida em todo o planeta pois elas so responsveis pela a reciclagem natural da vida como decomposio da matria orgnica e auxiliam intimamente para a vida do homem pois equilibram a obteno de alimentos no corpo humano.
Escherichia coli: Uma

proveniente de

microorganismos e por isso existe a grande importncia de estud-los e entend-los

das bactria usada no experimento.

Objetivos O experimento tem por objetivo, verificar a presena de micro-organismos de diferentes ambientes cultivados em meios de cultura e como proceder em experimentos laboratoriais que tenham como objetivo um meio esterilizado de trabalho, afim de evitar contaminao do meio externo.

Parte Experimental Materiais Balana Semi-Analtica Proveta de 100ml 2 Placas de Petri Esptulas de raspagem Bqueres ou erlenmeyers de 250ml Autoclave Colnia de microorganismos 1 Garrafa de vidro com tampa de rosca Caneta Retroprojetor

Filme de PVC Ampicilina (antibitico) 50mg/ml gua esterilizada Cotonetes esterilizados Tubo Falcon esterilizado Glicose Agar bacteriolgico Bico de Bunsen Mtodos
Tabela 1 Propores gar Bacteriolgico + LBBroth 1000ml (gua) 40ml 1000ml (gua) 40ml 40g (gar +LBB) x 20g (glicose) = x 0,8
=

25g + 15g = 40g 1,6g

Preparo do meio

Para o preparo do meio de cultura utilizou-se 1,6g de gar bacteriolgico + LB Broth (Caldo Lisogenia) e 0,8g de glicose e ambos foram pesados no bquer. Mediu-se 40mL de gua em proveta e foram acrescentados os reagentes (LB + gar e glicose), para dissolver os mesmos. Passamos essa mistura para uma garrafa de vidro que foi fechada e identificada, e logo aps, levada para esterilizao em autoclave por quinze minutos. Preparao das placas de petri Usamos uma lamparina para manter a temperatura elevada e baixar o risco de contaminao por meio externo, para tal todos os procedimentos foram realizados em torno da chama. Passamos o meio bacteriolgico 40 mL contido na garrafa para o tudo de falcon, onde medimos 20 mL e passamos para a placa de petri, que havia sido dividida em quatro

quadrantes, como mostra a figura 1. Posteriormente esperamos, com a tampa da placa semiaberta, que o meio se solidificasse por inteiro. Figura 1

No quadrante T1 adicionamos a bactria E-Coli que havia sido fornecida, pela tcnica, em quantidade adequada para o experimento. No quadrante T2 passamos um cotonete inicialmente esterilizado que posteriormente foi contaminado com provveis bactrias presentes na janela do laboratrio. Os quadrantes C1 e C2 foram selecionados para servirem de controle, ou seja, no os contaminamos com nenhuma bactria para posteriormente saber se o meio foi contaminado por alguma bactria indesejada. Para a fabricao da segunda placa iriamos misturar os 20 mL de meio bacteriolgico restantes no tubo de falcon com a ampicilina, porem devido a demora em disponibilizar a ampicilina, os 20 mL de meio bacteriolgico foram parcialmente solidificados, com isso possibilitando somente uma mistura parcial com a ampicilina. Passamos essa mistura para a placa de petri, que havia sido dividida em quatro quadrantes, como mostra a figura 2. Posteriormente esperamos, com a tampa da placa semiaberta, que o meio se solidificasse por inteiro. Figura 2 No quadrante T1 adicionamos a bactria E-Coli que havia sido fornecida, pela tcnica, em quantidade adequada para o experimento. No quadrante T2 passamos um cotonete inicialmente esterilizado e posteriormente contaminado com possveis bactrias presentes na janela do laboratrio. Os quadrantes C1 e C2 ,como anteriormente, foram selecionados para servirem de controle, ou seja, no os contaminamos com nenhuma bactria para posteriormente saber se o meio foi contaminado por alguma bactria indesejada. Resultados e discusso Aps o perodo de aproximadamente 72 horas, as placas de petri foram abertas e os resultados foram registrados e analizados.

Placa de petri sem ampicilina:

No quadrante T1 da placa sem ampicilina observamos uma pequena colonia de bactria, que no podemos afirmar se proveniente da contaminao pela E-Coli ou da contaminao proveniente do cotonete passado na janela, porque tanto no T1 quanto no T2 e no C2, observamos a presena de uma mesma colonia de bactrias, que apresentam forma arredondada e uma colorao branca. O quadrante T2 foi tomado por uma grande colonia de bactrias o que nos leva a pensar que essas bactrias so provenientes da contaminao pelo cotonete passado na janela. Devemos salientar que ao abrir as placas de petri existiam algumas gotculas de gua na tampa do mesmo, que podem ter auxiliado na disseminao de tal contaminao por todo a placa de petri, com exceo do quadrante C1.

Placa de petri com ampicilina: Como mencionado anteriormente, o meio estava parcialmente solidificado no tubo de falcon, antes de ser passado para a placa de petri, dificultando assim no somente a mistura com a ampicilina, mas tambm a visualizao do mesmo na placa de petri. Apesar da mistura entre o meio e a ampicilina ter sido parcial, notamos que a ampicilina, pode impedir todo e qualquer tipo de proliferao visvel de colonias de bactrias. Concluso Devido ao problema no tempo de espera do resfriamento do meio, ocorreu a solidificao parcial deste no tubo de falcon, logo s foi possvel uma mistura parcial do meio com a ampicilina, mesmo assim ficou provada, neste experimento, a eficincia da ampicilina no combate proliferao de bactrias. Quanto a placa de petri a qual permanecia o meio com ausncia de ampicilina houve proliferao das bactrias que coletamos da janela do laboratrio, porm no houve proliferao das bactrias E.coli. As bactrias coletadas na janela invadiram parcialmente o controle 2 e o teste 1. Referncias Bibliogrficas http://pt.wikipedia.org/wiki/Robert_Hooke http://vsites.unb.br/ib/cel/microbiologia/intromicro/intromicro.html