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Aula prtica

REAGENTES, CORANTES E MEIOS DE CULTURA BSICOS USADOS NA MICOLOGIA MDICA.

REAGENTES
1. SOLUO ASSPTICA Composio Qumica: lcool etlico............................70mL Acetona.................................. 30mL Tcnica de preparao: Verter 70mL de lcool etlico na proveta. Completar para 100ml com 30mL de acetona. Homogeneizar as duas substncias e verter a mistura em vidro de tampa esmerilhada de cor clara. Armazenar em vidro, rotulando com o nome da substncia e data de preparao. Uso: Utiliza-se essa substncia embebida em algodo fechados superficiais. Finalidade: Retirar suor, gordura, poeira e restos de medicamentos, alm de amortecer a regio e diminuir a quantidade de microrganismos contaminantes. 2. SOLUO CLARIFICADORA DE KOH Concentraes que podem ser utilizadas: 40 a 30% para unhas (fneros), peles e plos 10% para pele tenra de criana 06% para exame de secrees (escarro) Composio qumica para o KOH a 40%: KOH em lentilhas...................................40g gua destilada .........................60mL Tcnica de preparao: Colocar 60mL de gua destilada em um becker de vidro. Adicionar as 40g de KOH ALGODO Composio Qumica: cido fnico................................20g cido lctico...............................20g Glicerina.....................................40mL gua destilada...........................20mL Azul de Poirrierblau...................0,05g Tcnica de preparao: ou gaze estril cortado as em quadrados, acondicionados em recipientes para higienizar leses na gua destilada, debaixo da torneira com gua corrente (reao exotrmica), mexendo sempre em sentido rotatrio, at que a substncia fique clara. Colocar a substncia em balo ou proveta de vidro, continuando com a agitao at completa dissoluo das lentilhas. Completar com gua destilada at os 100mL. Armazenar em um vidro mbar, rotulado com nome da substncia e data de preparao. Obs.: Adicionar a glicerina para maior durabilidade das lminas. Uso: Em exame direto de material biolgico: pele, plo, unha, escarro, lavado brnquico, etc. Finalidade: Clarear material clnico permitindo visualizao de estruturas parasitrias. CORANTES 1. AZUL DE LACTOFENOL OU AZUL DE

Misturar os componentes tomando cuidado com os cidos. Dissolver pelo calor. Adicionar o corante (Azul de Poirrierblau ou de algodo). Esperar 24 horas e filtrar. Armazenar em recipiente rotulado com nome da substncia e data de preparao. Uso: Utilizado tanto do exame direto de material biolgico, como em cultura de fungos. Finalidade: Corar e tornar mais distintas as estruturas fngicas. 2. TINTA DA CHINA ( TINTA NANKIM) Tcnica de preparao: Misturar o material biolgico (liquor) ou fragmento de cultura, a ser examinado, com uma gota de Tinta da China e cobrir com uma lamnula. Examinar a lmina preparada sob o microscpio. Se a preparao ficar muito escura, a mesma poder ser diluda com pequena quantidade de gua. Uso.: Este corante utilizado na Micologia Mdica como contraste. Finalidade: Evidenciar cpsula de leveduras capsuladas (Cryptococcus neoformans) em material clnico (lquor, escarro, urina ou suspenso de cultura). 3. MTODO DE GRAM Uso: Material clnico com fungos suspeita de leveduras. Finalidade: Corar unicelulares (leveduras) em exame direto ou isolados de mucosa vaginal, bucal, principalmente do Gnero Cndida. MEIOS DE CULTURA Os meios de cultura so substratos naturais ou artificiais empregados no cultivo de microrganismos e dentre estes, encontramse os fungos. Existe uma grande variedade de meios para atender as exigncias nutricionais

das

diferentes

espcies

de

fungos

encontradas na natureza. Em geral os meios podem ser:

Exemplos:

Naturais, sintticos.

semi-sintticos

Gerais, seletivos, diferenciais Slidos, lquidos semi-slidos e

1. GAR SABOURAUD Uso: Meio de cultura geral, universalmente utilizado para cultivar Fungos, Actinomycetes e Algas do gnero Prototheca e Chlorella. Finalidade: Isolar ou cultivar fungos patgenos e principalmente e fungos tambm contaminantes unicelulares filamentosos (leveduras). Composio qumica: Peptona......................................10g Glicose........................................40g Agar.............................................15g gua destilada...................... 1000mL Finalidade dos componentes: Peptona: uma protena, age como fonte de nitrognio no crescimento dos fungos. Glicose: fungos. Agar: uma alga marinha de procedncia japonesa. Tem duas finalidades: 1) Dar corpo ou volume ao meio e 2) fornecer nutrientes orgnicos para os fungos. gua: age como diluente e tambm fornece fraes de sais minerais. Tcnica de preparao: fonte de carbono, fornecendo energia para o crescimento dos

Dissolver o Agar misturado a gua em fonte de calor (direta ou indireta). Adicionar os outros componentes aps a retirada da mistura do fogo. Distribuir o meio ainda quente em tubos de ensaio (10mL) ou balo ou outro recipiente autoclavvel. Tamponar os recipientes com algodo hidrfobo (cordado). Autoclavar a 1200C, 1 atm. de presso, durante 15 a 19 minutos. Retirar do autoclave, inclinar se for tubo de ensaio, deixar resfriar em temperatura ambiente e guardar na geladeira, quando no existir gotculas de gua dentro. Identificar os tubos, bales, etc com nome do meio de cultura. 2. AGAR MYCOSEL Uso: Meio seletivo para cultivar fungos. Finalidade: Utilizado especificamente para isolar e cultivar fungos patgenos. Ex.: Dermatfitos. Composio qumica: Peptona......................................10g Glicose........................................10g Agar............................................15g gua destilada...........................................1000mL Cicloheximide............................0.4g Cloranfenicol............................0,05g Finalidade dos antibiticos: Cicloheximide: Inibe o crescimento de fungos contaminantes e leveduras, com exceo de Cndida albicans. Cloranfenicol: inibe o crescimento de bactrias. Tcnica de preparao: Semelhante ao Agar Sabouraud, no entanto, haver uma exceo quanto a autoclavao, pois pela presena dos

antibiticos, o tempo dever ser apenas 15 minutos. 3. BATATA-DEXTROSE-AGAR (BDA) Uso: Meio seletivo para cultivar fungos. Finalidade: Utilizado geralmente para cultivar certos grupos de fungos filamentosos. Composio Qumica: Batata (inglesa)...................200g Glicose..................................20g Agar.......................................15g gua destilada................1000mL Tcnica de preparao: Ferver a batata, sem casca, em 500mL de gua por 30 minutos. Aps cozimento, amassar a batata e filtrar o caldo em gaze ou similar. Fundir o Agar em 500mL de gua destilada. Adicionar a glicose ao caldo de batata e adicionar tudo ao recipiente contendo o Agar fundido. Ajustar o volume, em proveta, com gua at completar 1000mL. Distribuir o meio ainda quente em tubo de ensaio, balo ou erlenmeyer, tamponar e esterilizar em autoclave a 120oC, 1 atm. de presso, durante 19 minutos. Retirar o meio da autoclave, inclinar os tubos, deixando resfriar temperatura ambiente e aps identificao, armazenar em refrigerador.