RPB v18n3

Rev. peru. biol.
ISSN 1561-0837
Universidad nacional Mayor de san Marcos
FacUltad de ciencias Biolgicas
volUMen 18 dicieMBre , 2011 nMero 3
LIMA, PER
revista
PerUana de
Biologa
2
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Dr. Pedro Atilio Cotillo Zegarra
Vicerrector de Investigacin
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Consejo Superior de Investigacin
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Decana de la Facultad de Ciencias Biolgicas
Mag. Martha Valdivia Cuya
Directora Instituto de Investigacin en Ciencias Biolgicas Antonio Raimondi
Mag. Ins Miriam Grate Camacho
La Revista Peruana de Biologa es una publicacin cientfca arbi-
trada, editada por el Instituto de Ciencias Biolgicas Antonio Raimondi,
Facultad de Ciencias Biolgicas de la Universidad Nacional Mayor
de San Marcos, Lima, Per, y auspiciada por el Consejo Superior de
Investigacin. La Revista aparece con una periodicidad semestral
(agosto y diciembre) y esta dedicada a la publicacin de artculos
cientfcos originales e inditos en las reas de Biodiversidad, Biotec-
nologa, Manejo ambiental, Ecologa y Biomedicina. La Revista publica
los trabajos realizados por acadmicos e investigadores nacionales y
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son evaluados por rbitros segn criterios internacionales de calidad,
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publicada simultneamente en la pgina web de la Universidad.
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Rev. peru. biol. - ISSN 1561-0837
Rev. peru. biol. - ISSN 1727-9933 (on line)
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Universidad Peruana Cayetano Heredia- Per
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Sergio Solari
Texas Tech University- USA
Lucia Luna
University of Michigan- USA
Maria del Carmen Ulloa Ulloa
University of Missouri- USA
Blanca Len
University of Texas at Austin - USA
Kenneth Young
University of Texas at Austin USA
Paul Velazco
American Museum of Natural History, USA
269

(Contina...)
Revista PeRuana de Biologa
Volumen 18 Diciembre, 2011 Nmero 3
Rev. peru. biol. ISSN 1561-0837
Contenido
Trabajos originales
271 Talictrum peruvianum (Ranunculaceae), una especie nueva de Lima, Per
Talictrum peruvianum (Ranunculaceae), a new species from Lima, Peru
Huber Trinidad, Asuncin Cano y Blanca Len
275 Vochysia awasensis (Vochysiaceae), nueva especie de los Bosques Montanos del Choc ecuatoriano
Vochysia awasensis (Vochysiaceae), new species from the Mountain Forests from the Ecuatorian Choc
Isau Huamantupa Chuquimaco
279 Detailed assessment of the distribution of Astrocaryum sect. Huicungo (Arecaceae) in Peru
Evaluacin detallada de la distribucin de Astrocaryum sec. Huicungo (Arecaceae) en Per
Francis Kahn, Betty Milln, Jean-Christophe Pintaud and Miguel Machahua
283 Riqueza, uso y origen de plantas medicinales expendidas en los mercados de la ciudad del Cusco
Richness, use and origin of expended medicinal plants in the markets of the Cusco City
Isau Huamantupa, Magaly Cuba, Rosa Urrunaga, Elas Paz, Nelson Ananya, Myrthia Callalli, Nadir Pallqui y Hozmary Coasaca
293 Desarrollo reproductivo del amancay Ismene amancaes (Amaryllidaceae) en su ambiente natural
Reproductive development of amancay Ismene amancaes (Amaryllidaceae) in its natural environment
Mery L. Suni, Edisson Pascual y Enoc Jara
299 Nueva especie de Mediorhynchus (Acanthocephala, Gigantorhynchidae) en Turdus chiguanco (Turdidae) de Junn, Per
New species of Mediorhynchus (Acanthocephala, Gigantorhynchidae) in Turdus chiguanco (Turdidae) from Junn, Peru
Roco Moya, Rosa Martnez y Manuel Tantalen
303 Aspectos estructurales y cuantitativos del ovario de Fulica armillata (Aves: Rallidae)
Structural and cuantitative aspects of the ovary of the Fulica armillata (Aves: Rallidae)
Mirian Bulfon y Noem Bee de Speroni
311 Anlisis de las vocalizaciones del murcilago longirrostro peruano Platalina genovensium Tomas, 1928 (Chiroptera: Phyllostomidae)
Analysis of vocalizations of Long-snouted Bat Platalina genovensium Tomas, 1928 (Chiroptera: Phyllostomidae)
Juan A. Malo de Molina, Sandra Velazco, Vctor Pacheco y Juan Carlos Robledo
319 Tres nuevos registros de asteroideos (Echinodermata: Asteroidea) de Per
Tree new records of asteroids (Echinodermata: Asteroidea) from Peru
Yuri Hooker y Francisco A. Sols-Marn
325 Estudio de la actividad fermentativa de Hansenula anomala y produccin de compuestos qumicos de importancia sensorial
Study of the fermentative activity of Hansenula anomala and production of chemical compounds of sensory importance
Waldir Estela Escalante, Mojmr Rychtera, Karel Melzoch, Elena Quillama Polo

y Beatriz Hatta Sakoda
335 Inmunogenicidad del veneno de Bothrops atrox (Ophidia: Viperidae) y su evaluacin por mtodos inmunoenzimticos
Immunogenicity of Bothrops atrox (Ophidia: Viperidae) venom and its evaluation by immunoenzymatic methods
Gustavo A. Sandoval, Julio Mendoza, William Roldn, Yrma Espinoza, Hilda Solis y Armando Yarlequ
343 Propagacin in vitro de Carica papaya var. PTM-331 a partir de meristemos apicales
In vitro propagation of Carica papaya var. PTM-331 from apical meristem
Reynaldo Solis L., Julio Olivera S. y Rafael S. La Rosa L.
349 Diagnstico e identifcacin rpidos por PCR de Yersinia ruckeri aislada de Oncorhynchus mykiss procedentes de Canta, Lima, Per
Rapid diagnosis and identifcation by PCR of Yersinia ruckeri isolated of Oncorhynchus mykiss from Canta, Lima, Peru
Susana Sirvas-Cornejo, Claudia Cecilia Snchez-Robinet y Csar Pea-Domnguez
270
355 Efecto de la adicin de materia orgnica sobre la dinmica poblacional bacteriana del suelo en cultivos de papa y maz
Efect of addition of organic matter on bacterial population dynamics of soil in potato and corn crops
David Garca Ventocilla, Gloria Mamani Gamarra, Nicols Romn Cabello, Luis Surez Salas, Ana Contreras Marn y Julio Malca Jauregui
361 Optimizacin de los medios de propagacin y enraizamiento in vitro de las variedades criollas de vid para elaborar pisco
Optimization of media for in vitro propagation and rooting of creole grapevine varieties utilized for pisco making
Eugenio Gonzlez, Diego Pignataro, Gisella Orjeda, Wilfredo L. Gonzles

y Daniel Clark
367 Colonizacin intraluminar testicular y diferenciacin de la masa celular interna en ratones (Mus musculus)
Intraluminar testicular colonization and diferentiation of the inner cell mass in mice (Mus Musculus)
Lyonal Acosta, Vctor Nez, Jose Pino y Betty Shiga
Notas cientfcas
373 Notes on the ecology of a relict population of the Lomass Lizard Microlophus tigris (Tropiduridae: Sauria) in Las Leyendas Zoological Park,
(Lima, Peru)
Notas sobre la ecologa de una poblacin relicto de la lagartija de las Lomas Microlophus tigris (Tropiduridae: Sauria)en el Parque Zoolgico
Las Leyendas (Lima, Per)
Juan Carlos Jordn Arizmendi
377 Notes on the ecology of Phyllodactylus reissi (Phyllodactylidae: Sauria) in Parque Nacional Cerros de Amotape (Tumbes, Peru)
Notas sobre la ecologa de Phyllodactylus reissi (Phyllodactylidae: Sauria) en el Parque Nacional Cerros de Amotape (Tumbes, Per)
381 Extensin de la distribucin del rango migratorio de la Dormilona de Frente Negra, Muscisaxicola frontalis (Aves: Tyrannidae) en el Per
Extension of the distribution of the migratory range of the Black-fronted Ground Tyrant Muscisaxicola frontalis (Aves: Tyrannidae) in
Peru
Renzo Alcocer, Grace P. Servat y Wilfredo Mendoza
383 Algunos acantocfalos de la familia Oligacanthorhynchidae del Per
Some acanthocephalans of the family Oligacanthorhynchidae from Peru
Luis A. Gomez-Puerta
387 Primer registro de Crepidobothrium gerrardii (Cestoda: Proteocephalidae) en el Per
First record of Crepidobothrium gerrardii (Cestoda: Proteocephalidae) in Peru
Comentarios
389 Efecto de los metales sobre microcrustceos de agua dulce. Avances metodolgicos y potencialidad de cladceros y coppodos como organismos test
Efects of metals on freshwater microcrustaceans. Metodological advances and potentiality of cladocerans and copepods as test organisms
Mara Florencia Gutierrez y Ana Mara Gagneten
271

ThalicTrum peruvianum una especie nueva
Rev. peru. biol. 18(3): 271- 274 (December 2011)
Rev. peru. biol. 18(3): 271- 274 (Diciembre 2011)
ISSN 1561-0837
Thalictrum peruvianum (Ranunculaceae), una especie nueva de
Lima, Per
Huber Trinidad
1
, Asuncin Cano
1,2
y Blanca Len
1
Thalictrum peruvianum (Ranunculaceae), a new species from Lima, Peru
1 Laboratorio de Florstica, Depar-
tamento de Dicotiledneas, Museo
de Historia Natural Universidad
Nacional Mayor de San Marcos.
Av. Arenales 1256, Lima 11, Per.
Email Huber Trinidad:
htrinidadpatricio@gmail.com
2 Instituto de Investigacin de Cien-
cias Biolgicas Antonio Raimondi
(ICBAR), Facultad de Ciencias
Biolgicas, UNMSM.
Presentado: 09/03/2011
Aceptado: 12/12/2011
Publicado online: 08/02/2012
Resumen
Se describe e ilustra una nueva especie Thalictrum peruvianum H. Trinidad & A. Cano (Ranunculaceae) del
centro de Per. Est caracterizada por presentar fores solitarias muy pequeas que nacen opuestas a las
hojas y un estigma alado. Estos caracteres diferencian este nuevo taxn del resto de especies sudamericanas.
Palabras Claves: Thalictrum peruvianum, Ranunculaceae, nueva especie, Lima, Per.
Abstract
A new species, Thalictrum peruvianum H. Trinidad & A. Cano (Ranunculaceae), is described from central Peru.
It is characterized for having very small and solitary fowers that born opposite to the leaves, and by winged
stigma. These characters distinguish this new taxon from other South American species.
Key Words: Thalictrum peruvianum, Ranunculaceae, new species, Lima, Peru.
Introduccin
Al realizar un estudio sobre la fora vascular en bosques de
Polylepis presentes en la Reserva Paisajstica Nor Yauyos Cochas
(RPNYC), se observ una pequea planta que creca comn-
mente en la zona baja del bosque, despus de una minuciosa
revisin se lleg a la conclusin de que se trataba de una especie
nueva. La muestra colectada fue estudiada en el Laboratorio de
Florstica del departamento de Dicotiledneas, Museo de His-
toria Natural de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos.
El gnero Talictrum posee alrededor de 190 especies en el
mundo (Tamura 1995), distribuido principalmente en regiones
templadas (Ziman & Keener 1989). Son pocas las especies que
encuentran su hbitat en tierras sudamericanas; Lourteig (1953)
cit cinco especies, cuatro Talictrum decipiens Boivin, T. longis-
tylum DC., T. podocarpum Kunth ex DC. y T. venturii Boivin,
representando la seccin Camptogastrum de Boivin (1944), y
una, T. cincinnatum Boivin, de la seccin Cincinneria; las tres
primeras han sido registradas para Per.
Las especies peruanas (Talictrum decipiens, T. longistylum y
T. podocarpum) se distribuyen a ambos lados de la Cordillera
de los Andes, principalmente hacia el lado oriental, entre los
1500-3800 m de altitud. Habitan suelos hmedos dentro de
matorrales y reas boscosas, y son poco frecuentes en campos
abiertos.
Tratamiento taxonmico
Thalictrum peruvianum H. Trinidad & A. Cano, sp. nov.
TIPO: Per. Depto. Lima. Prov. Yauyos. Distrito Mirafores.
Localidad: Bosque de Yauyinazo a 3 km de Pios, 121858,95S
y 755058,06W. Bosque de Polylepis, 3700 3800 m de alti-
tud, H. Trinidad 221 (Holotipo: USM). Figuras 1 y 2.
Haec species insignis foribus solitaris; sepalis viridis vel purpu-
reis; ovariis 2 5, stigmatibus alatis. Inter species generis Talictrio
ovariis paucis, sed foris solitari, opposita (versus inforescentia
paniculatis), staminum connectivum supra thecas appendiculatum,
rubeus difert.
Hierba perenne, postrada escandente, hasta 80 cm de
longitud. Races fasciculadas, engrosadas con ramifcaciones
fbrosas. Tallo cilndrico hueco de 0,2 1,2 mm de dimetro,
verde a purpreo, estras poco visibles, pubescencia glandular
distribuida de manera dispersa a lo largo del tallo; entrenudos
de 2 9 cm. Hojas alternas, 3(4) pinnadas, imparipinnadas;
lmina de 0,8 4,2 cm de largo por 1,5 6 cm de ancho, de
forma subtriangular, glandular pulverulento en la superfcie de
la lmina y con escasos pelos glandulares en las nervaduras, verde
a purpreo en los pices de los foliolos; peciolo de 0,1 2,4
cm de longitud esparcidamente glandular pubescente; vaina de
1 2 x 0,5 1,2 mm, subamplexicaule 2 auriculada, de base
purpura y borde lobulado blanquecino; foliolo asimtrico de
1,5 5 x 1 5 mm, 3 lobulado con los pices obtusos y lbulo
inferior a veces partidos, discoloras, ligeramente pecioluladas y
sin estipelas. Flores solitarias opuestas a las hojas, hermafroditas
o unisexuales (polgamo monoicas). Pednculo de 0,1 1,8
cm de longitud. Spalos 4 de 1,5 3,5 x 1,2 2 mm, 3 6
nervado, ovado de pice obtuso, verde a purpureo. Estambres
7 17, flamentos fliformes que siguen creciendo despus de la
antesis de 1 5 mm, rojizas; anteras oblongas de 1,4 2 mm,
conectivo prolongado por encima de la antera hasta 0,3 mm de
longitud, rojizas. Pistilos en fores perfectas 2 5 (en las fores
femeninas llega a tener hasta 16 pistilos); ovario comprimido
lateralmente de 0,6 1,2 x 0,3 0,8 mm; estilo corto, 0,1
0,2 mm; estigma triangular alado hasta 3,2 mm, papiloso en
toda la superfcie. Aquenios 1 3 de 3,5 4,5 x 2 2,5 mm,
cortamente estipitado, estilo persistente; nervaduras prominentes
3 (4) a cada lado, subparalelas.
Material adicional examinado
Per. Depto. Lima. Prov. Yauyos. Distrito Miraflores.
Localidad: Bosque de Yauyinazo a 3 kilometros de Pios,
121858,95S y 755058,06W. Bosque de Polylepis, 3700
3800 m de altitud, H. Trinidad 1888 (USM).
Etimologa
Esta nueva especie presenta fores muy pequeas en compa-
racin a las otras especies del continente, por su distribucin
conocida decidimos nombrarla Talictrum peruvianum.
272
Trinidad et al.
Figura 1. Thalictrum peruvianum H. Trinidad & A. Cano; a) Habito, b) Segmento de tallo en la que se observa la pubescencia, c) Vaina auri-
culada sub-amplexicaule, d) Flor perfecta que nace opuesta a la hoja, e) Spalo, f) Estambre, g) Pistilo con vista dorsal del estigma, h) Pistilo
con vista frontal del estigma, e i) Fruto.
273

ThalicTrum peruvianum una especie nueva
Figura 2. Thalictrum peruvianum H. Trinidad & A. Cano; a) Rama con for perfecta, b) Rama con for femenina, c) Vaina auriculada sub-
amplexicaule y d) Habito.
274
Trinidad et al.
Discusin taxonmica
El gnero Talictrum en Per se distingue fcilmente de los
otros gneros de la familia Ranunculaceae por presentar fores
con cuatro spalos y por sus hojas 2 4 pinnadas.
En Zuloaga et al. (2008) se considera Talictrum decipiens
como el nombre aceptado para las tres especies citadas para el
Per. Pero nosotros concordamos con Lourteig (1953) al decir
que Talictrum decipiens, T. longistylum y T. podocarpum son
morfolgicamente distintas y que deben ser consideradas como
especies diferentes.
Las especies peruanas incluyendo Talictrum peruvianum se
pueden distinguir con la siguiente clave.
1. Flores solitarias. Estilo corto de 0,1 0,2 mm; estigma triangular alado.
T. peruvianum
1. Flores en inforescencia racemosa terminal. Estilo hasta 10 mm; estigma no
triangular alado.
2. Envs de los foliolos con pubescencia glandular. T. longistylum
2. Envs de los foliolos glabrescentes.
3. Fruto ssil o sub-ssil con nerviacin sub-paralela. T. decipiens
3. Fruto estipitado con nerviacin reticulada. T. podocarpum
Talictrum peruvianum no se encuentra relacionada mor-
folgicamente con ninguna de las especies de Sudamrica; los
caracteres forales y foliares que presenta son bastante diferentes.
Talictrum peruvianum es una planta pequea y crece postrada
bajo los arbustos o algunas veces apoyada sobre estos; a diferen-
cia de las otras especies, que crecen erguidas y a veces llegan a
ser bastante grandes (2,5 m de altura). El carcter nuevo para
el gnero es que las fores solitarias nacen opuestas a las hojas,
hasta ahora se consideraba que todas las especies de este gnero
tenan inforescencias de disposicin terminal o axilar (Macbride
1936; Lourteig 1956; Tamura 1992; Park & Festerling 1997).
Ninguna especie en Sudamrica presenta fores solitarias, aun-
que como en el caso de T. venturii las inforescencias pueden
llevar pocas fores (Lourteig 1956), pero en esta las fores tienen
carpelos estipitados (de 1,5 mm), a diferencia de la especie aqu
descrita cuyo estpite es muy corto (<1 mm). Otro carcter
importante y que lo diferencia de todas las especies americanas
es la presencia de un estigma triangular alado lleno de papilas.
Posiblemente esta sea una adaptacin para facilitar la retencin
de polen debido al pequeo tamao de sus fores. Este carcter
del estigma tambin ha sido observado en especies asiticas
(Fu & Zhu 2001), pero estas especies muestran caracteres muy
diferentes a T. peruvianum.
Distribucin, ecologa y fenologa
Talictrum peruvianum ha sido colectada nicamente en
un bosque de Polylepis de la RPNYC, el cual es conocido por
la poblacin local como bosque de Yauyinazo. Este bosque se
encuentra ubicado a lado occidental de la cordillera de los An-
des, al sureste de Lima en la provincia de Yauyos; restringida a
una quebrada rocosa muy accidentada por encima de los 3700
m de altitud.
Esta especie endmica del Per se encuentra distribuida en la
parte baja del bosque hasta los 3800 m de altitud; es frecuente
ubicarla creciendo postrada en el suelo y algunas veces apoyada
sobre los arbustos presentes en la zona.
Florece y fructifca entre los meses de enero y marzo.
Estado de conservacin
Todos los individuos observados han sido hallados en la lo-
calidad original, en un bosque de Polylepis. No se ha observado
ningn individuo fuera de este bosque, ni en reas cercanas
dentro de la reserva (incluyendo otros bosques evaluados). Se
estima que el rea total donde se distribuye esta especie no so-
brepasa una hectrea de extensin. Se ha observado que existe
actividad minera muy cercana al rea en la cual se distribuye
esta especie. Por lo cual, y de acuerdo a los criterios de la UICN
(UICN 2001), se sugiere que sea considerada como una Especie
en Peligro Crtico (CR), y se tome las medidas necesarias para
poder conservarla.
Agradecimientos
Agradecemos al Jefe y los guardaparuques de la Reserva Pai-
sajstica Nor Yauyos Cochas por permitirnos realizar el trabajo
de investigacin durante el cual fue posible descubrir esta nueva
especie. Tambin nuestra gratitud a Delsy Trujillo por realizar
la ilustracin que se incluye en esta publicacin y a Jos Roque
por la revisin del manuscrito.
Literatura citada
Boivin, B. 1944. American Thalictra and their Old World
allies. Rhodora 46: 391445.
Fu, D. Z. & G. Zhu. 2001. Thalictrum. Flora of China, 6: 282302.
MacBride J. F. 1937. Ranunculaceae, Flora of Peru. Field Museum
of Natural History; Botanical Series. 13: 639661.
Lourteig, A. 1956. Ranunculceas de Sudamrica Tropical, V.
Thalictrum. Mem. Soc. Cienc.Nat. La Salle 16: 186-198.
Park, M. M. & D. Festerling. 1997. Thalictrum. Flora North America
3: 258-271.
Tamura, M. N. 1993. Ranunculaceae. In: K. Kubitzki, J. G. Rowher,
and V. Bittrich, eds. The families and genera of vascular
plants. Pp. 563-583. Springer, Berlin.
Tamura, M. N. 1995. Thalictrum. In: P. Hiepko, ed.) Nat. Pfan-
zenfam. 17a(IV): 474494. UICN. 2001. Categoras y
Criterios de la Lista Roja de la UICN. Versin 3.1. Prepa-
rado por la Comisin de Supervivencia de Especies de la
UICN. UICN, Gland, Suiza y Cambridge, Reino Unido.
Ziman, S. N. and C. S. Keener. 1989. A geographical analysis of
the family Ranunculaceae. Ann. Missouri Bot. Gard.76:
1012-1049.
Zuloaga, F. O; O. Morrone & M. J. Belgrano. 2008. Ranunculaceae,
en F. O. Zuloaga, O. Morrone & M. J. Belgrano (eds.).
Catlogo de las Plantas Vasculares del Cono Sur. Mono-
graphs in Systematic Botany from the Missouri Botanical
Garden 107 (3): 2825-2839.
275

vochysia awasensis nueva especie del Choc ecuatoriano
Rev. peru. biol. 18(3): 275 - 278 (December 2011)
Rev. peru. biol. 18(3): 275 - 278 (Diciembre 2011)
ISSN 1561-0837
Vochysia awasensis (Vochysiaceae), nueva especie de los Bosques
Montanos del Choc ecuatoriano
Vochysia awasensis (Vochysiaceae), new species from the Mountain Forests
from the Ecuatorian Choc
Herbario (CUZ), Facultad de Cien-
cias Biolgicas, Universidad Nacio-
nal San Antonio Abad del Cusco,
Prolongacin Av. de la Cultura s/n,
Cusco, Per.
Email: andeanwayna@gmail.com
Resumen
Vochysia awasensis I. Huamantupa, es descrita e ilustrada como especie nueva de la familia Vochysiaceae,
perteneciente a la sect. Ciliantha Stafeu subsect. Megalanthae Stafeu, proviene de los bosques montanos de
la regin biogeogrfca del Choc en el noroeste de Ecuador. Presenta mayor afnidad a V. megalantha y V.
duquei, pero a su vez se distingue de estas por presentar el peciolo ssil poco conspicuo y decurrente, limbo
foliar de 17-33,5 (-35) x 4,5-10 cm; ptalos forales entre 2,4-3 x 0,6-0,9 cm.
Palabras clave: Vochysia, Reserva tnica, Aw-Camumb, Choc, Ecuador
Abstract
Vochysia awasensis I. Huamantupa, is described and illustrated as new species of the family Vochysiaceae,
belonging to the sect. Stafeu Ciliantha subsect. Megalanthae Stafeu, which comes from the montane forests
of the Choco biogeographical region in the northwestern of Ecuador. The new species differs from its relatives
V. megalantha and V. duquei, by its inconspicuous and recurrent petiole, blade 17-33,5 (-35) x 4,5-10 cm, and
petals 2,4-3 x 0,6 to 0,9 cm.
Keywords: Vochysia, Reserva tnica, Aw-Camumb, Choc, Ecuador
Introduccin
Gran parte del noroeste de Ecuador est comprendido en la
regin biogeogrfca del Choc, rea que se extiende a lo largo
de la costa pacfca de Suramrica, desde el sur de Panam hasta
el noroccidente ecuatoriano. Esta regin contiene los bosques
ms hmedos de Amrica y es reconocida como una de las reas
de mayor diversidad biolgica en el planeta (Myers et al. 2000),
y una de las ms amenazadas por el potencial de recursos que
representa para los intereses econmicos (Plan de salvaguarda
tnica del pueblo indgena Aw 2010). En el lado ecuatoriano
el territorio Aw comprende aproximadamente 116640 ha.
Segn Sierra (1999), la reserva tnica del Aw-Camumbi se
ubica dentro del bosque siempre verde piemontano, sector de
las estribaciones de la cordillera occidental en la subregin norte;
caracterizada por presentar alta humedad con precipitaciones
anuales de 4000 a 5000 mm (Guzman 2011). Entre los pocos
estudios forsticos destaca el de rboles silvestres manejados en
reas de potreros por Guzmn (2011) quin registra 122 espe-
cies en 26 ha, siendo las Lauraceae, Melastomataceae, Moraceae,
Urticaceae y Fabaceae las familias ms ricas; en cuanto a especies
sobresalen el Cedro (Cedrela odorata), Copal (cf. Dacryodes - cf.
Protium), Pepa Mono (cf. Hippocrateaceae - cf. Sapotaceae),
Chanul (cf. Humiriastrum), Corocillo (cf. Sloanea), Corozo (Pou-
teria sp.), Caimitillo (Pouteria sp.) y Puegunde (Pseudolemdia
cf. laevis). Ms para la familia Vochysiaceae se menciona a (cf.
Vochysiaceae), con poca importancia.
El gnero neotropical Vochysia abarca alrededor de 135 espe-
cies (Stafeui 1958, Litt 2004, Marcano-Berti 2005), con 12 es-
pecies registradas para Ecuador (Jrgensen & Len-Ynez 1999,
Neill & Ulloa 2011). La especie nueva descrita a continuacin
es la segunda especie de Vochysia a ser descrita sobre la base de
colecciones provenientes de Ecuador.
Taxonoma
Vochysia awasensis I. Huamantupa, sp. nov.
(Figs. 1 y 2)
TIPO: ECUADOR. Provincia, Carchi. Cantn. Tulcan-
Chical. Parroquia. Tobar Donoso, reserva tnica Aw-Camumb.
Bosque montano bajo pluvial, suelo pantanoso. 20-29 Julio
1991; Mara Teuig, entre 1700 1900 m, 7816'S, 0053'N;
C. Quelal, C. Aulestia y F. Nastacuz 224 (Holotipo: MO; Iso-
tipo: QCNE).
Vochysiae duquei afnis, sed stipulis majoribus, foliis in quoque
verticillo quatuor, plus 15 cm longioribus, decurrentibus et infores-
centiis quam 15 cm majoribus recedit; a V. megalantha stipulis ma-
joribus, foliis subtus glabris (nec ferrugineo-pubescentibus) difert.
rbol de 8 20 m. Ramas jvenes glabras a tenuemente
ciliado-hispdulas en los pices, tetrgonas o subtetragonas hasta
levemente anguladas, ramas viejas se muestra en subteretes con la
corteza persistente banquecino-marrn. Estpula 3 5 mm de
largo, 2,5 4 mm de largo en la base, blanquecino, glabro, tri-
angular-sagitado levemente acuminada. Hojas 4 6 verticiladas,
mayormente 4; peciolo inconspicuo, acanalado, decurrente con
el limbo foliar; limbo espatulado, elptico u obovado, 17 33,5
(-35) x 4,5 10 cm; pice redondeado, levemente acuminado a
veces retuso; base aguda decurrente con el pecolo; haz glabro,
hasta con cilios escasamente esparcidos; envs glabro; vena me-
dia impresa por la haz con cilios cortos ralamente esparcidos,
sobresaliente en el envs, cilios rojizos dispuestos ralamente,
hasta 3,5 mm de ancho en la base de la hoja; venas laterales
19 28 en cada semilimbo, con 0,8 1,9 cm de separacin
276
Huamantupa
Figura 1. Vochysia awasensis I. Huamantupa. sp nov. A. Rama forfera, B. Flor, C. Fruto, D. Estpula, E. Ptalos y F. Estilo, Estambre y
Estaminodios. Ilustracin de M. Pacorina y G. Calatayud, basado en el tipo, Quelal et al. 224.
277

vochysia awasensis nueva especie del Choc ecuatoriano
entre ambas en la zona media del limbo, 3 7 mm en la base y
pice del limbo, forman ngulo de 60 90 con la vena media,
subimpresas por la haz, notorias por el envs, casi inconspicuas
en los bordes del envs, cilios cortos ralamente dispuestos, venas
laterales secundarias entre las primarias de 1 2, con frecuencia
1; vnulas abundantes; vena marginal poco conspicua en haz y
envs, de 1 3 mm del borde. Inforescencia terminal solitaria,
cilndrica mayor a 15 cm, poco densa a paucifora, eje foral
ralamente villloso a ciliado-tomentuloso; cincinos con 1 for,
pednculo y pedicelo 1,5 4 cm de longitud, glabrescentes a
muy escasamente ciliadas. Yema foral 0,8 1,5 cm, subcurvado,
pice acuminado obtuso, ralamente ciliado. Flores amarillas en
conjunto con el spalo espolonado 2,8 5,2 x 0,6 1,2 cm, cur-
vado abarquillado incluyendo al spalo dorsal; espoln cilndrico
curvado, pice redondeado, 1,4 2,2 cm de longitud, forman
un ngulo de 40 80 con el pedicelo, muy ralamente ciliado;
spalo dorsal 2 2,8 cm, escasamente ciliado mayormente en
los bordes, spalos menores 2 2 x 1,9 4 mm, borde ciliado;
ptalos 3, desiguales; oblongo lanceolados, glabros en general,
ralamente ciliado-piloso en la cara abaxial de la vnula media
y los bordes, ptalo central mayor 2,4 3 x 0,6 0,9 cm, en
la antesis raramente excede al spalo dorsal, ptalos menores
2,4 cm de longitud, glabros en general, cilios en la base, son
menores en tamao al spalo dorsal. Estambre 2,4 2,8 cm
de longitud, levemente curvado; flamento corto 3 4 mm de
longitud, ralamente ciliado especialmente en la base; anteras
2 2,4 cm, conduplicadas, levemente incurvadas ms anchas
en pice, cada lado de la antera al exponerse 2,5 mm, glabras
en general con cilios esparcidos especialmente en los bordes.
Estaminodios 2, lanceolado elpticos 3 4,1 mm, en la base con
agrupacin de cilios. Ovario triloculado 2 3,5 mm, glabro.
Estilo 2,3 2,65 cm; estigma terminal capitado. Fruto capsula
verruculosa, glabra, oblongo obovada 3,9 7 x 1,2 2,4 cm.
Material adicional analizado
ECUADOR. Provincia, Carchi. Cantn, Tulcan. Parroquia,
Tobar Donoso, Sector Sabalera. Reserva tnica Aw-Camumb.
Bosque muy hmedo pre montano. Mara Teuig. 19 28 junio
1992. G. Tipaz, J. Zuleta & N. Guanga 1330 (MO, QCNE);
Figura 2. Vochysia awasensis I. Huamantupa sp. nov. Rama forfera.
Foto, I. Huamantupa.
278
Huamantupa
Sector Sabalera. Reserva tnica Aw-Camumb. Bosque muy
hmedo pre montano. Orilla del ro botella. Mara teuig,
1928 junio 1992. G. Tipaz, J. Zuleta & N. Guanga 1353
(MO, QCNE).
Se compara con las especies afnes a V. duquei Pil. y V. me-
galantha Staf, diferencindose de V. awasensis por lo siguiente:
V. duquei, rboles generalmente de gran tamao, estipulas 0,5
1,8 mm. Hojas en verticilos tetrmeros; limbo foliar no excede
los 15 cm de longitud; pecolo 0,5 1,5 cm; venas primaria
y secundarias bastante marcadas en la haz y el envs, en cada
semilimbo el nmero de venas principales no excede 20 nervios.
Inforescencias cortas menos de 15 cm, pnduloides. Flores en
conjunto con el espoln 1,5 3 cm; espoln mximo 1,6 cm;
ptalos pilosos pubescentes el mayor mximo 2 cm. Ovario
piloso ferrugneo. Fruto hasta 3,8 cm.
V. megalantha, ramas con estipulas y peciolos ferrugino-
pubrulos; estipulas hasta 2 mm. Hojas elpticas obovadas;
peciolo hasta 1,5 cm; limbo foliar mximo hasta 15 cm; base
cuneada; envs ferrugneo hirsuto, ms abundante en las ner-
vaduras primaria y laterales; en conjunto las ramitas al secar se
tornan oscuras con las hojas rojizas. Flores, incluido el espoln
2,5 3,5 cm, pednculo y pedicelo foral mximo 2,5 cm; fla-
mento hasta 1 mm de longitud, antera 0,3 0,4 cm.
De acuerdo con el esquema taxonmico de Vochysia de Stafeu
(1948) Vochysia awasensis se ubica en Vochysia sect. Ciliantha,
subsect. Megalanthae (Stafeu 1948) y la subsect. Megalanthae,
se caracteriza por presentar la corteza (epidermis vieja) no exfoli-
ante, hojas en verticilos tetrmeros a ms, glabras; inforescencia
terminal pilosa; fores espolonadas de 1,5 3,5 cm de longitud,
espoln nunca ms largo que el estandarte (4to spalo); ptalos
3; flamento muy corto de 0,1 0,3 cm, estaminodios largos
y desarrollados.
Ecologa y distribucin
Hasta la fecha Vochysia awasensis est registrada solamente
para los bosques montanos del Choc en el noroeste de Ecuador,
en la reserva tnica y Forestal Aw, ubicada entre las provincias
de Esmeraldas y Carchi, y colinda con su similar en Colombia
que posee el mismo nombre. Por tanto V. awasensis, muy posible-
mente tambin se encuentre en el lado del Choc colombiano,
entre 1500 2500 m de altitud. Se observ foracin entre los
meses de junio a julio y la fructifcacin entre julio y agosto.
Conservacin
Afortunadamente Vochysia awasensis habita en los bosques del
Choc ecuatoriano, dentro de la reserva forestal y tnica Aw,
la cual forma parte de la iniciativa de conservacin del corredor
Choc-Manab, conllevada por Conservacin Internacional.
Cabe resaltar que aproximadamente el 65% de los bosques de
la reserva tnica Aw son primarios, por lo cual el hbitat de
V. awasensis se encuentra con buen estado de conservacin. Sin
embargo estos bosques no son ajenos a amenazas propiciadas por
el hombre, siendo las principales la extraccin ilegal de madera,
la ampliacin de zonas agrcolas y confictos sociales entre los
indgenas, los negros y mestizos (Guzman 2011). De acuerdo
a los datos conocidos de V. awasensis, y los criterios dispuestos
por la Lista Roja de la UICN (2001), consideramos que esta
especie debe ser listada en la categora Casi Amenazada (NT).
Etimologa
El epteto est dedicado en honor al grupo tnico Aw, au-
todenominado Gente de la montaa o la selva, que ha habitado
milenariamente gran parte de la regin biogeogrfca del Choc
en Ecuador y Colombia.
Agradecimientos
Al herbario nacional de Ecuador QCNE, que a travs de
la Blga. Elsa Toapanta nos brind las facilidades de acceso a
las colecciones. A Robin Foster por su apoyo en la obtencin
de una pasanta en el Field Museum de Chicago y el MO,
igualmente a Tyana Watcher y Juliana Phillips, con su apoyo
logstico durante mi estada en USA. A Olga Martha Montiel y
al Dr. Ronald Liesner, por su apoyo logstico y en la revisin de
las Vochysiaceae en el MO. A Janeth Santiana y Jess Muoz
por la bibliografa facilitada; Al Dr. Henk Van der Werf, por su
apoyo en la diagnosis del latn.
Literatura Citada
Guzman N. L. 2011. Los rboles aislados en el territorio del pueblo
indgena Inkal Aw: Un estudio de caso en la frontera entre
Colombia y Ecuador. Tesis para optar el grado de Mster
en Conservacin y Gestin del Medio Natural. Universidad
Internacional de Andaluca UNIA. Huelva, Espaa. pp 57.
Jrgensen P.M. & S. Len-Ynez (eds.) 1999. Catalogue of the
vascular plants of Ecuador. Monogr. Syst. Bot. Missouri
Bot. Gard. 75: 1-1181.
Litt A. 2004. Vochysiaceae. Pp. 396-398 En: Smith, N., S. A. Mori,
A. Henderson, D.W. Stevenson & S.V. Heald (eds.).
Flowering Plants of the Neotropics. New York Botanical
Garden, New York.
Marcano-Berti L. 2005. Vochysiaceae. Pp. 500-524 En 191 En
Berry, P.E., K. Yatskievych & B.K. Holst, (eds). Flora
of the Venezuelan Guayana. Vol. 9. Missouri Botanical
Garden Press, St. Louis.
Myers N., Mittermeier, R.A., Mittermeier, C.G., et al. (2000) Bio-
diversity hotspots for conservation priorities. Nature 403,
853858.
Neill D. & C. Ulloa 2011. Adiciones a la fora del Ecuador: segundo
suplemento, 2005-2010. Fundacin Jatum Sacha. Quito-
Ecuador. pp 202.
Plan de salvaguarda tnica del pueblo indgena Aw. 2010. Docu-
mento promulgado por el Auto 004 del 26 de enero de
2009. pp 80.
Sierra R. 1999. Propuesta preliminar de un sistema de clasifcacin
de la vegetacin para el Ecuador continental. Proyecto
INEFAN/GEF-BIRF y EcoCiencia. pp 192.
Stafeu F. A. 1948. A monograph of the Vochysiaceae. I. Salvertia
and Vochysia. Recueil des Travaux Botanique Nerlan-
daise 41: 398540.
UICN. 2001. Categoras y Criterios de la Lista Roja de la UICN.
Versin 3.1. Preparado por la Comisin de Supervivencia
de Especies de la UICN. UICN, Gland, Suiza y Cambridge,
Reino Unido.
279

Distribution of asTrocaryum sect. huicungo in Peru
ISSN 1561-0837
Detailed assessment of the distribution of Astrocaryum sect. Huicungo
(Arecaceae) in Peru
Francis Kahn
1
, Betty Milln
2
, Jean-Christophe Pintaud
1
, Miguel Machahua
2
Evaluacin detallada de la distribucin de Astrocaryum sec. Huicungo
(Arecaceae) en Per
1 IRD, UMR DIADE, DYNADIV,
Casilla 18-1209, Lima 18, Per
Email Francis Kahn:
francis.kahn@ird.fr
2 Museo de Historia Natural, Uni-
versidad Nacional Mayor de San
Marcos, Av. Arenales 1256, Jess
Mara, Lima 11, Per
Abstract
Detailed distribution of Astrocaryum sect. Huicungo (Arecaceae) in Peru is presented and discussed. Twelve
out of the 15 species that compose this section are found in the Peruvian territory from North to South in the
eastern Andean foothills and western Amazonian lowlands. All these species have a parapatric distribution,
except for Astrocaryum macrocalyx and A. urostachys, which share a very limited area. Limits of distribution
areas may be related to geographical, geomorphological and ecological barriers (river, geological rising, soil
drainage). In some cases, however, the contact between species is almost contiguous; no natural barrier could
be detected in the feld.
Keywords: biogeography, palms, Astrocaryum, western Amazonia, Peru
Resumen
Se presenta y se discute la distribucin detallada de las especies de Astrocaryum sect. Huicungo (Arecaceae)
en Per. Doce de las 15 especies que componen esta seccin se encuentran en el territorio peruano, del Norte
al Sur en el piedemonte de los Andes orientales y en la llanura amaznica. Todas las especies presentan una
distribucin paraptrica, salvo Astrocaryum macrocalyx y A. urostachys que se superponen en una franja muy
reducida. Las reas de distribucin son separadas por pasillos estrechos, que se pueden relacionar a barreras
geogrfcas, geomorfolgicas y ecolgicas (ros, levantamientos geolgicos, drenaje del suelo). En algunos
casos, las especies se suceden en el espacio sin que se haya podido identifcar barreras naturales separndolas.
Palabras claves: biogeografa, palmeras, Astrocaryum, Amazona occidental, Per
Introduction
High diversity of the palms in the western Amazon has been
reported in several works (Kahn & Granville 1992, Montufar &
Pintaud 2006, Pintaud et al. 2008a, Galeano & Bernal 2010,
Balslev et al. 2011). Te section Huicungo of the genus Astro-
caryum illustrates this fact, with 14 out of 15 species present in
the western Amazon, most of them endemic to this area, with
only one species growing in the eastern Amazon and in the
Guianas (Kahn 2008). Previous studies of the genus Astrocaryum
have demonstrated that most species (12 of 15) of the sect.
Huicungo are found in Peru (Kahn & Milln 1992, Kahn 2008,
Vargas & Pintaud 2008, Kahn & Milln 2009), with four species
being endemic to Peru (Milln 2006). In bordering regions the
number of species is notably lower (5 in western Brasil States
of Amazonas, Acre, and Rondonia, 5 in Colombia, 3 in Bolivia,
and 1 in Ecuador).
In order to obtain a detailed distribution of species as a sup-
port to phylogenetic and biogeographical studies in the section
Huicungo, Peruvian species have been collected throughout
their distribution areas since 2008. It is now possible to draw
the geographical limits between species and analyze in more
detail their distribution patterns. Data and maps are presented
and discussed here.
Material and methods
Material studied. The Neotropical genus Astrocaryum
includes 40 species (excluded Astrocaryum mexicanum and A.
alatum, treated as Hexopetion by Pintaud et al. 2008b); 39 species
are found in South America, 2 in Central America.
Te genus is divided into three subgenera: Astrocaryum with
16 species, Munbaca with four species, and Monogynanthus with
20 species. Te section Huicungo in the subgenus Monogynanthus
groups 15 species distributed in three subsections: (i) Huicungo
with 7 species, 6 of them are found in Peru; Sachacungo with
5 species, 4 of them in Peru; and Murumuru with 3 species, 2
of them in Peru.
Te species of the section Huicungo grow in tropical rain
forests. Tey are distributed in the low fuvial terraces on swampy
soils or on periodically fooded alluvial soils, as well as in the
upper terraces and hills on terra frme forests on well-drained
and poorly-drained soils. Tese species tolerate deforestation
rather well and are frequently found in open areas. Ecology of
the genus was reviewed in Kahn (2008).
Study area. Te vast Peruvian region commonly known as
Amazonia was visited using road networks and waterways for
four years. It includes the Amazonian lowlands, the eastern
Andean foothills and the central Andean valleys whose rivers
run towards the Amazon basin (Fig. 1).
Data sample. Palms were generally sampled at a distance
of 1 to 20 km between each other, according to the frequency
of the species and the accessibility of the plants. Te shortest
distance between two individuals was 200 m. For each speci-
men, elevation and coordinates of latitude and longitude were
reported with a Garmin GPS, and dry leaf material was collected
for further DNA analysis. Herbarium vouchers were collected
from fowering and/or fruiting individuals. At least one her-
barium voucher with fertile material was collected per locality.
When no fertile material was available, the locality was visited
again until fowers and fruits for appropriate identifcation of
the species were obtained. Herbarium vouchers were deposited
at USM, Lima.
280
Kahn et al.
Te total number of points used for mapping includes (i) all
the palms sampled during the study, (ii) the data from vouch-
ers collected by other members of the FP7-Palm project team
(H. Balslev), and (iii) the data in schedula at USM, where most
vouchers of Astrocaryum formerly collected in Peru are conserved.
Te number of points varies among species. Tese depend on
(i) the total area covered by the species (e.g. Astrocaryum carno-
sum distribution is clearly smaller than that of A. faranae), (ii)
the accessibility of the region, and (iii) the number of previous
collections available at the herbarium.
Astrocaryum carnosum 39 points
Herbarium specimen Kahn 1839-40, 1933-34, 2031,
4476, Milln & Kahn 629, 636-37, 1483-84, 1679, 1681A,
1683, 1683A, Milln et al. 1377.
Astrocaryum chonta 39 points
Herbarium specimen Balslev et al. 7658-59, 7852, 7870,
7873, Gentry 26925, Kahn 2081, Kahn & Mejia 1782, 1823,
Mejia 106, Milln 141, Milln & Albn 149, 164, Milln &
Meja 60, 61, Milln & Canayo 63, 97, 99, 107, 109-10, 112,
Milln & Kahn 1704, Milln & Vargas 1461, Milln et al.
706-11, 718.
Astrocaryum ciliatum 1 point
Te species is only known from one place in Peru; it was
identifed by FK from a photograph sent by Robin Foster.
Astrocaryum faranae 90 points
Herbarium specimen Balslev et al. 7885, 7897, 7929,
7971, 7998, 8005, 8012, 8056, 8092, Kahn 4442-44, 4451-
55, 4475, 4477, 4489, 4490, 4492, Milln 173, 174, Milln &
Clavo 1525, 1527, 1529, Milln & Kahn 627, 638, 642, 645,
647-48, 1692, 1694, Milln & Machahua 1697-98, Milln et
al. 1385, 1387, 1399.
Astrocaryum gratum 70 points
Herbarium specimen Alexiades & Pesha 357, Kahn 4456-
58, 4467, 4473-74, Kahn & Llosa 2128, 2143, 2144, 2147, Kahn
et al. 4479, Milln & Couturier 118-20, Milln & Kahn 1703,
Milln & Pintaud 558, Nuez et al. 21798, Vargas 18574, 18718.
Astrocaryum huicungo 35 points
Herbarium specimen Kahn 4493, 4497-99, Kahn & Borch-
senius 2654-55, Kahn & Moussa 3203-04, 3206-08, 3211-12,
Killip & Smith 28840, 28698, Milln & Kahn 655-56, 1709,
Milln & Pintaud 447, 449, Weberbauer s.n.
Astrocaryum javarense 51 points
Herbarium specimen Fleck SWF 371, Gentry & Revilla
20873, Gentry et al. 56347, 76490, Kahn 2340, Kahn & Mejia
1776-77, 1780, 1786, 1858, 1971, 2055, 2057, 2069, Kahn
& Moussa 3201-02, Kahn et al. 2408, Meja 96, Milln 89, 90,
Milln & Canayo 114, Millan et al. 32, 746, 888, 894, 1078-81,
1082-83, 1087-89, 1096, 1108.
Astrocaryum macrocalyx 40 points
Herbarium specimen Gentry et al. 54253, 55618, 65743,
Kahn 2296, Kahn & Couturier 3334, Milln 664, 674 Milln
& Meja 49, 50, Milln & Pereyra 64, Milln et al. 523, 906,
912-13, 916, 919-21, 922, 933-34, 1005-07, Moore et al. 8420,
8482, Pintaud 593, 595, Pipoly et al. 13685, 13839, Ruokolainen
et al. 5461, Tessmann 5117, Vsquez & Jaramillo 544, Vsquez
et al. 2360.
Astrocaryum perangustatum 69 points
Herbarium specimen Kahn 3230-32, 4436-39, 4445,
4450, 4501-02, Milln 830, 839, 846, Milln & Kahn 1592,
1597, 1600, 1696, 1706-07, Smith 4045.
Astrocaryum scopatum 56 points
Herbarium specimen Berlin 831, Kahn 4484-88, Kahn &
Borchsenius 2563, Kahn & Machahua 4480-83, Milln & Kahn
526-29, 543-544, 556, 571, 577-79, 610.
Astrocaryum ulei 32 points
Herbarium specimen Kahn 4459-63, 4465, 4466, 4469-
72, Milln 386.
Astrocaryum urostachys 29 points
Herbarium specimen Albn 14039, Kahn 4139, 4140,
Milln 925, 934, 982, Milln & Vargas 762, Milln et al. 1001-
03, Pintaud 587-92.
Map design Maps were designed using ArcMap 9.3,
Environmental Systems Resource Institut (2008), Redlands,
California.
Results and discussion
Distribution of Astrocaryum sect. Huicungo species in the
Peruvian Amazonia forms a mosaic of rather contiguous areas
from North to South and East to West (Fig. 1).
Two species are strictly limited to the subandean region:
(i) Astrocaryum carnosum grows in the upper Huallaga valley
between Tocache and Tingo Mara. (ii) Astrocaryum perangus-
tatum grows in the Pozuzo, Palcazu and Pichis valleys, reaches
the Amazonian lowlands to the Pachitea valley northeastwards,
but does not extend into it, and follows the Perene and Ene
River (Apurimac) valleys in Junn and Cusco-La Convencin
southwards.
Five species extend from subandean foothills to Amazonian
lowlands: (i) Astrocaryum scopatum grows in the upper Maraon
river valleys, from Cenepa valley northwest to San Lorenzo
southeast. It is found along Nieva, lower Morona and Santiago
river valleys. (ii) Astrocaryum huicungo is found in the Rioja-
Moyobamba region and extends to the Huallaga valleys in the
Amazonian lowlands southeastwards. (iii) Astrocaryum faranae
grows from the river Huallaga to Acre in Brazil, from South of
Tarapoto to southern Huanuco department. Te northeastern
limit in the Ucayali river valley is not well defned yet. (iv) As-
trocaryum gratum extends from the Urubamba valley (Cusco)
northwestwards to the upper Tambopata valley southwestwards,
it does not cross the Madre de Dios river eastwards. (v) Astro-
caryum urostachys covers the northern region of the Amazonian
lowlands, limited to the Morona river valley westwards and to
the western border of Iquitos Arch southeastwards.
Five species are strictly found in the Amazonian lowlands: (i)
Astrocaryum javarense grows in the region between the southern
margin of Ucayali and Amazonas rivers northwards and the
Jauari river basin southwards. (ii) Astrocaryum macrocalyx covers
281

Distribution of asTrocaryum sect. huicungo in Peru
the eastern part of the Amazonas northern margin, along Iquitos
Arch eastern border. (iii) Astrocaryum ciliatum is known from
the Maijuna area, north of Sucusari, halfway between the Napo
and Algodon rivers, near the Colombian border. Te species is
rather frequent in the neighboring Colombia (Galeano & Bernal
2010). (iv) Astrocaryum chonta follows the terraces along the
Amazonas-Ucayali-lower Urubamba and lower Tambo rivers; it
is punctually found in the lower Maraon and the Manu river
valley. (v) Astrocaryum ulei extends from the eastern margin of
Madre de Dios river to Brazil and Bolivia eastwards.
All species are usually found below 1000 m elevation, except
for Astrocaryum faranae collected in Peru from 167 to 1650 m.
Te species of the subsection Huicungo (represented by
rounds in Fig. 1 A. carnosum, A. ciliatum, A. faranae, A.
huicungo, A. javarense, A. scopatum) are grouped together in
the northeastern half of the country. Tose of the subsection
Sachacungo (triangles) form two groups, two species (Astrocaryum
macrocalyx and A. urostachys) in the northern part and two species
(Astrocaryum gratum and A. perangustatum) in the southern part.
Te two species of the subsection Murumuru (stars A. chonta
Figure 1. Distribution of Astrocaryum sect. Huicungo (Arecaceae) in Peru.
282
Kahn et al.
and A. ulei) are located in the southeastern half of the country
in Amazonian lowlands.
All the Peruvian species of the section Huicungo have a
parapatric distribution, except for Astrocaryum macrocalyx and
A. urostachys which share a very limited area (Vargas & Pintaud
2008). Such contact was not observed with the other species.
Several limits of the distribution areas may be related to geo-
graphical, geomorphological and ecological barriers. Tese are (i)
rivers Ucayali and Amazonas rivers in the case of Astrocaryum
javarense/A. macrocalyx or Madre de Dios river in the case of
Astrocaryum gratum/A. ulei, (ii) geological rising in the case
of the Iquitos Arch for Astrocaryum macrocalyx/A. urostachys
(Vargas & Pintaud 2008), and of the Cordillera Vilcabamba
(northern part) for Astrocaryum perangustatum/A. gratum, (iii)
geomorphological location with diferences in soil drainage
and vegetation the case of Astrocaryum javarense/A. chonta
(A. javarense grows in terra frme forest on high terraces, while
A. chonta grows in restinga forest, which covers low terraces on
periodically fooded alluvial soils), or of Astrocaryum carnosum/A.
faranae (A. carnosum being strictly restricted to the bottom of
the Huallaga river valley, A. faranae is found on the slopes of
Cordillera Azul). In other cases no barrier could be detected in
the feld e.g. between Astrocaryum scopatum and A. urostachys
along Santiago and Morona rivers, between Astrocaryum hui-
cungo and A. faranae in Tarapoto region, or between Astrocaryum
faranae and A. perangustatum in the Pachitea river valley. Tese
last cases need further study to reach more detailed conclusions
regarding their distribution.
Acknowledgments
Tis work was done under the agreement between UNMSM/
San Marcos National University, Peru and IRD/Research In-
stitute for Development (UMR DIADE/DYNADIV), France,
and supported by the PALMS project funded by the European
Community, 7
th
Framework Programme, Grant Agreement
N212631. We are indebted to Catherine Sahley for her valuable
comments on the manuscript.
Literature cited
Balslev H., F. Kahn, B. Millan, J. Svenning, T. Kristiansen, F.
Borchsenius, D. Pedersen & W.L. Eiserhardt. 2011. Spe-
cies diversity and growth forms in tropical American palm
communities. The Botanical Review (Junio). doi:10.1007/
s12229-011-9084-x.
Galeano G. & R. Bernal. 2010. Palmas de Colombia. Univ. Nac. De
Colombia, Bogot.
Kahn F. 2008. The genus Astrocaryum. Rev. peru. biol. 15, supl.1:
31-48.
Kahn F. & J.-J. de Granville. 1992. Palms in forest ecosystems of
Amazonia. Springer Verlag, Berlin.
Kahn F. & B. Milln. 1992. Astrocaryum (Palmae) in Amazonia.
A preliminary treatment. Bull. Inst. fr. t. and. 21 (2):
459531.
Kahn F. & B. Milln. 2009. Astrocaryum ulei (Arecaceae) newly
discovered in Peru. Rev. peru. biol., 16 (2): 161-164.
Milln B. 2006. Arecaceae endmicas del Per. en: Len B. et al.
(ed.), El Libro Rojo de las Plantas Endmicas del Per.
Rev. peru. biol., Nmero especial, 13 (2): 706-707.
Montufar R. & J.-C. Pintaud. 2006. Variation in species composition,
abundance and microhabitat preferences among western
Amazonian terra frme palm communities. Bot. J. Linnean
Soc., 151: 127-140.
Pintaud J.-C., G. Galeano, H. Balslev, R. Bernal, F. Borchsenius,
E. Ferreira, J.-J. de Granville, K. Meja, B. Milln, M.
Moraes, L. Noblick, F.W. Stauffer & F. Kahn. 2008a. Las
palmeras de Amrica del Sur: diversidad, distribucin e
historia evolutiva. Rev. peru. biol., 15, supl. 1: 729.
Pintaud J.-C., B. Milln & F. Kahn. 2008b. The genus Hexopetion.
Rev. peru. biol. 15, supl. 1: 4954.
Vargas V. & J.-C. Pintaud. 2008. Caracterizacin de un contacto
parapatrico entre Astrocaryum macrocalyx y A. urostachys
en el limite de la planicie de Maran-Pastaza con el Arco
de Iquitos. Rev. peru. biol. 15, supl. 1: 79-83.
283

Plantas medicinales en los mercados de la ciudad del Cusco
ISSN 1561-0837
Riqueza, uso y origen de plantas medicinales expendidas en los
mercados de la ciudad del Cusco
Isau Huamantupa, Magaly Cuba, Rosa Urrunaga, Elas Paz, Nelson Ananya,
Myrthia Callalli, Nadir Pallqui y Hozmary Coasaca
Richness, use and origin of expended medicinal plants in the markets of
the Cusco City
1 Herbario Vargas CUZ, Universi-
dad Nacional San Antonio Abad del
Cusco. Cusco Per
2 Universidad Nacional de San Luis
Gonzaga, Ica Per
3 Grupo Tcnico de Biodiversidad
de la Comisin Ambiental Regional
CAR-Cusco. Per.
Email Isau Huamantupa:
achuntaquiro@yahoo.es
Introduccin
Los andes del Per son grandes centros de diversidad donde
desde la existencia de las culturas pre colombinas, el hombre
andino ha convivido en estrecha relacin con su medio y re-
cursos, aprendiendo a manejarla para obtener sus alimentos,
vestimenta, vivienda y salud.
En los ltimos aos un 80% de la poblacin mundial ha
recurrido a las plantas medicinales para tratar diversas enfer-
medades o afecciones, porque son accesibles y ms baratos que
los productos farmaceuticos (UICN et al. 1993). En el Per la
riqueza de las plantas medicinales es muy amplia y est enmar-
cada dentro de ms de 4400 especies de usos conocidos por las
poblaciones locales, de las cuales un gran porcentaje se presenta
en la regin andina (Brack 1999).
En la ciudad del Cusco considerada como la capital de la
cultura americana (ttulo otorgado por la organizacin capital
americana de la cultura en el 2007), se contina con la prctica
del uso y manejo de especies de plantas medicinales que en su
mayora son provenientes del conocimiento ancestral, a pesar de
las etapas de cambios marcados, vividos durante la colonizacin
y republicana. Una de estas prcticas que an se mantienen es
lo que durante las culturas pre-incas e inca se realizaban como
el intercambio o trueque de recursos provenientes de las zonas
andinas, amaznicas y de la costa, las cuales tambin eran llevadas
a importantes mercados de ciudades grandes como el Cusco y
Cajamarca (Garcilaso 1971).
En el Per se tuvieron diversos estudios etnobotnicos empe-
zndose con los naturalistas espaoles Ruiz y Pavn, continuando
con los de Alexander Von Humboldt, y Antonio Raimondi
quin quiz para este tiempo fue el que ms especies referencio
para el departamento del Cusco. El Inca Garcilaso de la Vega
en su obra de Los Comentarios Reales de los Incas menciona
algunas especies de uso frecuente durante el incanato, pero in-
dudablemente los trabajos del botnico cusqueo Fortunato L.
Herrera, dieron a conocer muchas especies medicinales (Herrera
1923), y de otros usos de la regin andina principalmente del sur
peruano, a estos se suman tambin varios trabajos del botnico
cusqueo Cesar Vargas quin incluye adems documentos de
la etnobotnica de varias etnias poco o nada conocidas hasta
Resumen
Se estudiaron las plantas medicinales expendidas en cinco mercados principales de la ciudad del Cusco: San
Pedro, San Jernimo, TTio, Wanchaq y Rosaspata y cuatro zonales de San Sebastin, Molino II, Huancaro
y Santa Rosa. Se realizaron encuestas y colectas para identifcar las especies de plantas medicinales, modo
de utilizacin, afecciones tratadas, lugar de procedencia y origen. Registramos 152 especies, con 45 familias,
las ms ricas en especies fueron: Asteraceae con 36 y Lamiaceae (12); las especies con la mayor frecuencia
de venta y compra fueron: Muehlenbeckia volcanica (Benth.) Endl. mullaca, Perezia virens (D. Don) Hook.
& Arn. valeriana, Matricaria recutita L. manzanilla e Hypochaeris taraxacoides (Walp.) B. & H. pilli pilli; el
hbito herbceo represento el 75% del total; de las partes utilizadas 81% corresponden a toda la planta; las
infusiones o mates calientes abarcaron el 69% del modo de preparacin y las afecciones tratadas con mayor
frecuencia fueron las infamaciones renales y hepticas, dolencias gastrointestinales y afecciones broncopul-
monares. Las especies nativas representaron el 83% del total, de estas 78%, son procedentes de la regin
andina principalmente de localidades aledaas al departamento Cusco. Consideramos que esta alta riqueza
de plantas medicinales expendidas en los mercados de la ciudad del Cusco es similar a otros registros en
mercados andinos importantes de Sudamrica como en Bolivia y Ecuador, las que a su vez estn arraigadas
a conocimientos ancestrales, principalmente de la cultura Quechua.
Palabras clave. Riqueza, Andes, Plantas medicinales, Uso y Cultura Quechua.
Abstract
We studied medicinal plants expended in fve major markets, San Pedro, San Jernimo, Ttio, Wanchaq and four
small zonal, Rosaspata, San Sebastian, Molino II, Huancaro and Santa Rosa, in the city of Cusco. It was aimed
to know the richness, how to use treated conditions, place of origin, distributions and source. We recorded 152
species into 45 families, the families more riches were Asteraceae with 36 species and Lamiaceae (12), species
most frequently bought and sold in all markets were Muehlenbeckia volcanica (Benth.) Endl. "Mullaca" Perezia
virens (D. Don) Hook. & Arn. "Valeriana", Matricaria recutita L. "Manzanilla" and Hypochaeris taraxacoides
(Walp.) B. & H. "Pilli pilli", the herbaceous habit represent 75%,the total of the parts used, 81% correspond to
the entire plant, the infusions or "mates calientes" with 69% of the mode of preparation and conditions treated
most frequently were the bronchopulmonary, kidney and infammations, liver and gastrointestinal ailments. Na-
tive species accounted for 83% of the total, these 78% are from the Andean region surrounding towns mainly
Cusco department. We believe that this great wealth of medicinal plants expended in the markets of the city of
Cusco is similar to other important records in Andean South American markets such as Bolivia and Ecuador,
which in turn are rooted in ancient knowledge, mainly Quechua culture.
Keywords. Richness, Andes, Medicinal Plants, Use and Quechua Culture.
284
Huamantupa et al.
entonces. Reportes recientes indican que se han realizado con
bastante auge estudios etnobotnicos en el departamento del
Cusco, siendo el mbito donde ms investigaciones etnobot-
nicas se realizaron en el Per, con 40 publicaciones (La Torre
et al. 2006).
Los mercados en todo pueblo o ciudad son lugares donde
se expenden y/o intercambian productos, como es el caso de
las plantas medicinales; en la ciudad del Cusco diariamente se
expenden no solo especies medicinales sino tambin junto a estas
aromticas y para hacer pagos a la tierra. Entre las especies de
uso medicinal ampliamente expendidas estn: Stachys herrerae
cncer qora, Hypochaeris taraxacoides pilli pilli y Matrica-
ria recutita L. manzanilla (Mantilla & Olazbal 2004). Por
otro lado, varias especies que se expenden son provenientes de
Europa y Asia, los que no solo son encontradas en mercados
sino tambin son cultivadas en chacras y huertas de las casas;
por ejemplo: la sbila, manzanilla, cedroncillo, retama
y la hierba buena.
El rea de nuestro estudio est enmarcada dentro de la ciudad
del Cusco, en diferentes mercados donde a diario se comercia-
lizan numerosas especies medicinales, as como tambin en las
llamadas ferias dominicales y sabatinas.
Los objetivos planteados fueron los siguientes: a) conocer las
especies de plantas medicinales expendidas en los mercados de
Cusco, b) conocer el modo de uso y empleo en las afecciones
tratadas y c) conocer el origen, distribucin y procedencia.
Material y mtodos
Se seleccionaron cinco mercados principales, donde se pre-
senta la mayor afuencia de pobladores, estas fueron: San Pedro,
San Jernimo, TTio, Wanchaq y Rosaspata; y los mercados
zonales pequeos fueron: Santa Rosa, San Sebastin, Molino
II y Huancaro.
Las visitas a los mercados ya mencionados se realizaron
en la temporada de lluvias (diciembre-abril) y secas (mayo-
setiembre) del 2006. Se realizaron encuestas a 32 expendedores
y 74 compradores, mediante fchas etnobotnicas elaboradas,
considerando los siguientes datos, las afecciones tratadas, partes
de las plantas utilizadas, modos de preparacin y aplicacin, pro-
cedencia, nombre vernacular y otros. Para determinar el origen
de las especies ya sea como nativas o introducidas (exticas), se
consult el Catlogo de las Angiospermas y Gimnospermas del
Per de Brako & Zarucchi (1993).
Tambin se consider encuestas a los compradores y las
preferencias de estos frente a las afecciones tratadas.
Para las identifcaciones botnicas en muchos de los casos se
procedieron a la compra de plantas con rganos reproductivos
completos, adems de un registro fotogrfco de cada una de ellas;
las identifcaciones taxonmicas se hicieron en el Herbario CUZ
de la Universidad Nacional de San Antonio Abad del Cusco y
adems se consult de bibliografa especializada. La clasifcacin
taxonmica se bas en el sistema de clasifcacin propuesta por
el APG-III (2009).
Resultados
Riqueza de plantas medicinales
En los cinco mercados principales de San Pedro, San Je-
rnimo, TTio, Wanchaq y Rosaspata y mercados zonales de
San Sebastin, Molino II, Huancaro y Santa Rosa, no se tuvo
diferencia en cuanto al nmero de especies expendidas en ambas
temporadas, pero si en trminos de abundancia (Fig. 1).
Se registraron 152 especies, pertenecientes a 45 familias, las
de mayor riqueza fueron: Asteraceae con 36 especies, Lamiaceae
(12), Plantaginaceae (6), Poaceae (5), Apiaceae, Malvaceae,
Fabaceae y Polypodiaceae con 4 especies (Fig. 2), estas suman
71 especies (49,3% del total).
Las especies que se expenden con mayor frecuencia en los
nueve mercados (Figs. 6 y 7), fueron: Muehlenbeckia volcanica
mullaca, Perezia virens valeriana, M. recutita manzanilla,
H. taraxacoides pilli pilli, Taraxacum ofcinale diente de
len y Persicaria hydropiperoides duraznillo.
Los hbitos de crecimiento (Fig. 3), fueron representados
en su mayora por las hierbas con el 75% y arbustos 8% y los
menos diversos fueron los de liana y arbreo.
En cuanto a la riqueza mostrada para cada mercado (Fig. 1),
en San Pedro se registr 68 especies, seguida de San Jernimo
(62), estos dos mercados principales muestran casi la mitad de
las especies muestreadas para todos los mercados, cabe sealar
que San Pedro (68 spp.), es el ms antiguo y ms grande de esta
ciudad, aqu ya existen proveedores establecidos, por ende existe
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Figura 1. Distribucin de especies en los mercados de la ciudad
de Cusco.
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Figura 2. Distribucin de las ocho familias botnicas ms importantes
para los nueve mercados de la ciudad de Cusco.
285

mayor afuencia de compradores que obtienen mejor garanta y
seguridad; lo mismo acontece en el mercado de San Jernimo
que abarca un alto nmero de especies (62), y est relacionada
principalmente a que un importante porcentaje de la poblacin
urbana del extremo sur de la ciudad recurre a este mercado por
ser mayorista, prioritariamente los das domingos o das de ferias;
el mercado de Wanchaq con 45 especies es otro importante en
la zona central del valle de Cusco.
Los mercados zonales no muestran amplia diversidad de plan-
tas medicinales pero si expenden algunas especies importantes y
poco conocidas, al igual que en las ferias dominicales y sabticas,
siendo dichas especies: Bowlesia tropaeolifolia upuysuru, Caly-
cera sp estrella kiska y Barnadesia horrida llaulli.
Modos de uso
Segn las encuestas realizadas a expendedores y comprado-
res, el uso y manejo de las especies medicinales nativas, estn
relacionados y arraigados al conocimiento ancestral transmitido
de padres a hijos, este conocimiento es mayormente expresado
en las zonas rurales.
De las partes utilizadas de la planta, el 75% corresponde al
empleo de toda la planta, es decir incluyendo las races, tallos,
hojas y fores, 10% solamente hojas, 4% races y el 11% mixtura
de fores, frutos y tallos.
La forma de preparacin (Fig. 4), se da en gran proporcin en
las infusiones o los llamados comnmente mates calientes con
69%, en forma de baos realizando la decoccin de las partes
15%, emplastos 5% y consumidas directamente 4%, siendo para
esta las ms requeridas: diente de len T. ofcinale; pilli, pilli
pilli H. taraxacoides; H. echegaraii, Paranaphelius sp; en forma
de sahumerios, frotaciones e inhalaciones 7%, empleando varias
especies de chillcas Baccharis spp.
Las afecciones que son tratadas con mayor incidencia, son
las infamaciones hepticas y renales, consumindose para esto
ms del 40% del total de especies medicinales, luego las referidas
a problemas gstrico-estomacales (30%) y para las afecciones
broncopulmonares y respiratorias (20%).
De acuerdo a la encuesta realizada a pobladores, comprado-
res y expendedores de los mercados, las plantas ms requeridas
fueron: S. herrerae cancer cora, P. virens valeriana, H. taraxa-
coides, H. echegaraii pillis y M. volcnica mullaka Otras pocas
especies pero importantes las constituyen aquellas que producen
resinas, ltex y aceites, que son frecuentes de hallar como en el
mercado San Pedro, estas son: Croton lechleri sangre de grado,
Ficus inspida oj, Ficus trigona cf. matapalo.
Otro de los rubros importantes son las usadas en el trata-
miento de torceduras, desgarres e infamaciones musculares y
problemas del sistema seo, destacando entre ellas Phoradendron
spp suelda que suelda, Grindelia boliviana chiri chiri y Piper
elongatum matico, que son aplicados de forma directa en la
zona afectada en los llamados emplastos.
Vale destacar la mencin de algunos usos poco conocidos en
la farmacopea regular como por ejemplo a Otholobium pubescens
hualhua especie requerida frecuentemente, como regulador
del ciclo menstrual, corroborado por personas encuestadas del
grado de efectividad, en preparados de los mates y agua de
tiempo. Tambin se hall especies consideradas prohibidas
para la venta, porque son utilizadas en las prcticas de aborto,
donde destaca Xanthium spinosum alco kiska.
Origen, distribucin y procedencia
El 83% del total (126 spp.), de las plantas medicinales ex-
pendidas en los mercados de la ciudad de Cusco son de origen
nativo, la mayora de ellos pertenecen a las familias Asteraceae
y Lamiaceae, las cuales estn ampliamente distribuidas en la
zonas altoandinas y los bosques de montaa o ceja de selva,
sin embargo una buena proporcin tambin son procedentes
de zonas aledaas a zonas marginales de la ciudad de Cusco.
De acuerdo a las encuestas a los compradores, gran parte de
estas especies nativas actualmente se vienen cultivando en los
bordes de chacras, huertos, jardines de los hogares, acequias y
pequeas quebradas.
Tomando en cuenta la procedencia de las tres regiones na-
turales, la andina, amaznica y costera (Fig. 5), se muestra que
el 78% (119 spp.) son de procedencia andina, el 9% costero y
especies amaznicas (8%), de esta ltima las especies con mayor
demanda son: Uncaria tomentosa ua de gato, Phyllanthus
niruri chanca piedra, C. lechlerii sangre de grado, F. insipida
rbol
%
77
11
8
2
2
0 20 40 60 80
Hierba
Arbusto
Liana
Hemiparsita
Figura 3. Proporcin de las formas de crecimiento, segn las especies
muestreadas en los mercados de la ciudad de Cusco.
0 10 20 30 40 50 60 70
Consumo directo
Emplastos
Sahumerios y otros
Baos calientes
Mates calientes
%
Figura 4. Distribucin de las formas de uso de las especies de
plantas medicinales
0 20 40 60 80
Costero
Andino, Amaznico, Costero
Amaznico
Andino, Costero
Andino
%
Figura 5. Distribucin de las especies medicinales expendidas en
los mercados de Cusco, segn la regin de su proveniencia, An =
Andino, Am = Amaznico y Co = Costero.
286
Huamantupa et al.
Figura 6. (A) Puesto de venta, (B) Vendedora de mates, (C) Forma de empaques y combinaciones entre especies. (D) Rodaja de tallo de
Cyathea caracasana sano sano, (E) Campiloneurum bogotense cala huala, (F) Perezia sp. cncer ccora.
(A)
(B)
(C)
(D)
(E) (F)
287

Figura 6. , (G) Calceolaria scapifora zapatito, H). Eryngium weberbauerii yanahuma, (I) Hypochaeris echegarai pilli-pilli, (J) Muehlem-
beckia volcanica mullaka, (K) Hypochaeris sp. pilli, (L) Leucheria sp. escorzonera,
(H)
(I )
(J )
(K)
(L)
(G)
288
Huamantupa et al.
matapalo Stachytarpheta cayennensis yanahuacta. En general
se comparten pocas especies entre la regin andina y costera,
tambin entre la amazonia y la regin andina.
El 17% (26 spp.), son de origen extico principalmente del
continente europeo y asitico, entre ellas destacan M. recutita
manzanilla, Mentha viridis hierba buena, Aloe vera sabila
y Rosmarinus ofcinalis el romero.
Discusiones
De la Riqueza
Las 152 especies de plantas medicinales expendidas en los
mercados de Cusco representan una alta cifra, comparada con
otros mercados grandes, pero debemos resaltar, que fuera de
los mercados muestreados en este estudio existen otros lugares
de venta como las hierberas, pachamama hampis (lugares
donde se comercian especies utilizadas en los rituales de pagos
a la tierra y de chamaneria), adems de otros mercados zonales,
los cuales por razones de tiempo no se consideraron, y que a
nuestro concepto tambin son lugares importantes donde se
expenden otras especies poco conocidas.
Para el Per se calcula aproximadamente 1400 especies de
plantas medicinales conocidas (Brack 1999), nuestro estudio
representa el 11% de estas. Comparando las cifras de especies
medicinales expendidas en otros mercados peruanos, podemos
citar una realizada en el norte del Per, en dos mercados ma-
yoristas, el de Hermelindas en Chiclayo y Moshoqueque en
Chiclayo, donde se reportan cerca de 400 especies (Bussmann
et al. 2007), donde a diferencia de nuestro estudio, se consider
a tiendas o puestos donde se expenden especies de uso mgico
religioso y otros. Consideramos que el nmero de especies me-
dicinales comercializadas en estas ciudades es similar o mayor
a los del Cusco, debido en gran parte a que provienen de otras
unidades fsiogrfcas vegetacionales diferentes como la Jalca y
Pramos (Sanchez & Dillon 2006), diferentes de la puna seca y
hmeda caractersticas de la zona sur del Per y norte de Bolivia.
No se cuenta con datos publicados sobre la comercializacin
de plantas medicinales en otros mercados de ciudades peruanas
andinas, pero si podemos mencionar algunos como los expuestos
en congresos de botnica y biologa, por ejemplo en un estudio
realizado en la ciudad de Puno en cuatro mercados, se registraron
102 especies, donde las Lamiaceae y Asteraceae fueron las ms
representativas, los que tambin en nuestro estudio fueron los
ms diversos.
Para el Cusco, Mantilla (2004) recopil informacin en
comunidades campesinas aledaas de Viacha y Ampay (distrito
Pisac), y cataloga 20 especies andinisadas refrindose a espe-
cies introducidas, tambin registra 97 especies nativas andinas
utilizadas comnmente en estas comunidades, cabe resaltar que
la totalidad de estas especies catalogadas son expendidas en los
mercados de Cusco y la mayora de ellas en los mercados de San
Pedro y San Jernimo.
Otras fuentes de informacin importante las constituyen las
proporcionadas por Moscoso (2001) y Urrunaga (2002, 2003),
quienes describen los usos de especies medicinales nativas e
introducidas compilando ms de 250 especies, de estas para
nuestro estudio se hall que el 50% son expendidas, de las que
90% son nativas.
La riqueza de especies obtenida en el presente estudio es
similar a mercados andinos estudiados en otros pases como en
Ecuador (Quito, Riobamba e Ibarra), que varan entre 69 y 175
especies (Cern 2006), quin tambin hace mencin a mercados
de Mxico donde la riqueza oscila entre las 135 especies, prin-
cipalmente en las llamadas hierberas relacionadas a mercados
mayoristas. Por otro lado en mercados de Bolivia, Vidaurre
(2006), basndose en datos de Maca et al. (2005) y Vandebroek
et al, (2003); cataloga la venta diaria entre 129 - 171 especies,
correspondientes a 54-56 familias botnicas., especfcamente
en el mercado del alto La Paz, considerando todos los puestos
donde se venden plantas medicinales se catalog 129 especies
correspondientes a 55 familias, de estas las ms diversas fueron
Asteraceae, Fabaceae y Solanaceae (Maca et al. 2004), que a
diferencia de nuestro estudio las dos ltimas presentan menos
especies.
El nmero de especies comercializadas en los mercados
andinos e inclusive del norte peruano son similares, porque
en cada zona los conocimientos sobre las plantas medicinales
estuvieron directamente relacionadas al conocimiento ancestral,
esto por ejemplo se puede notar en la nomenclatura vernacular
de algunas especies del norte peruano, donde algunas de ellas
son aparentemente de origen moche, otras ya combinadas entre
moche y quechua y varias otras solamente quechua. Esta carac-
terstica similar se aprecia en el sur de Per y norte de Bolivia
con la nomenclatura quechua entremezclada con la aymara, al
mismo tiempo esto se corrobora que entre los andes de Bolivia,
Ecuador y Per se comparten varias especies (Tabla 1), pero
algunas varan en la nomenclatura vernacular, ms las formas
de uso y las afecciones tratadas son las mismas.
Las Asteraceae, Lamiaceae y Plantaginaceae en nuestro estudio
presentaron la mayor riqueza, esto se corrobora con otros mer-
cados andinos como La Paz y Cochabamba en Bolivia (Vidaurre
2006) y Quito, Cuenca en Ecuador (Cern 2006).
La venta de especies medicinales en mercados de estos tres
pases andinos es compartida en alto nmero variando de 40 a
70 (Tabla 1), donde Asteraceae comprende varias especies, del
mismo modo casi el total de especies introducidas son tambin
compartidas entre estos mercados andinos importantes.
El grupo de las Lamiaceae comparte muchas especies especial-
mente con mercados de Bolivia, ms en mercados de Ecuador
diferen con ms especies pero signifcativamente se tienen equi-
valentes en cuanto a especies diferentes pero del mismo gnero.
De los modos de uso
En nuestro estudio en cuanto a las formas de utilizacin 75%
corresponden al uso toda la planta considerndose las races,
tallos, hojas, y fores, debido a que en su mayora (72%), lo
constituyen las hierbas los que son colectados normalmente
desde la raz. Este empleo mayoritario difere con otras zonas
como en los mercados de Bolivia donde las partes utilizadas
son mayormente las hojas (Vidaurre 2006, Maca et al. 2004),
seguidas por las fores, frutos, semillas y cortezas.
As mismo el modo de preparacin es parecido a mercados de
Bolivia y Ecuador en los llamados mates o infusiones que en la
ciudad de Cusco frecuentemente son expendido en las calles de la
ciudad por los llamados emolienteros y materos (Fig. 6). Para
los mercados de Cusco otras formas de aplicacin importante son
289

Especie Nombre vernacular Afecciones tratadas
Adoxaceae
Sambucus peruviana Kunth Sauco, Tilo Nervios, resfros
Amaranthaceae
Chenopodium ambrosiodes L. Paico Vermfuga
Amarillydaceae
Aloe vera L.* Sabila Males del cuero cabelludo
Anacardiaceae
Schinus molle L. Molle Baos contra infamaciones internas
Apiaceae
Apium graveolens L.* Apio Infamaciones estomacales y resfros
Foeniculum vulgare Mill.* Hinojo, Eneldo Infamaciones gastrointestinales
Asteraceae
Ambrosia arborescens Mill. Altamisa, Marku, Marco Limpiados de infamaciones internas, insecticida
Baccharis genistelloides (Lam.) Pers. Kinsakucho, Tres flos Infamaciones gastrointestinales e hgado
Chuquiraga spinosa Less. Chuquiraga Infamaciones del hgado
Cynara scolymus L.* Alkachofa Estimulaciones al funcionamiento normal de la vescula
Gnaphalium americanum Mill. Queto-queto, lechuguilla Digestiva, desinfecciones oculares
Grindelia boliviana Rusby Chiri-chiri Para fracturas y lucsaciones
Hypochaeris taraxacoides (Walp.) Benth. & Hook. f. Pilli-pilli, achicoria Problemas hepticos y biliares
Matricaria recutita L.* Manzanilla Antiespasmdicos y limpiezas gastrointestinales
Mutisia acuminata Ruiz & Pav. Chinchirkuma Baos contra problemas nerviosos
Sonchus oleraceus L. Ccahua, Cashacerraja Infamaciones vesiculares
Taraxacum offcinale L* Diente de len, Taraxaco Infamaciones vesiculares y diurticos
Brassicaceae
Matthiola incana (L.) R. Br. Aleli, Alel morado Problemas cardiacos
Ephedraceae
Ephedra rupestris Benth. Pinco-pinco Limpieza renal y de prstata
Equisetaceae
Equisetum bogotense Kunth
Cola de caballo,
Caballochupa
Infamaciones internas estomacales y renales
Erythroxylaceae
Erythroxylum coca Lam. Coca
Chacchado, limpieza estomacal, reumatismo y
problemas de altura
Euphorbiaceae
Croton lechleri Mll. Arg. Sangre de grado
Cicatrizante de heridas y quemaduras, hemorroides
internos
Fabaceae
Otholobium pubescens (Poir.) J.W. Huallhua, trinitaria Correcciones de atrasos menstruales
Spartium junceum L.* Retama, retamo Purgantes, limpieza de clculos renales
Lamiaceae
Lepechinia meyenii (Walpers) Epling Salvereal, Puna salvia Dolores estomacales
Melissa offcinalis L.* Torongil Digestivo y problemas del tejido cardiaco
Mentha X piperita L. (pro sp.) * Menta Digestiva
Minthosthachys spicata (Benth.) Epling Mua Digestiva e insecticida
Rosmarinus offcinalis L * Romero Baos antiinfamatorios
Salvia offcinalis L. * Salvia Baos antiinfamatorios
Moraceae
Ficus carica L.* Higo Digestiva
Myrtaceae
Eucalyptus globulus Labill.* Eucalypto Problemas bronco pulmonares
Tabla 1. Especies de pantas medicinales frecuentemente expendidas y compartidas entre mercados andinos importantes de Sudamrica,
Bolivia, Ecuador y Per. Especie introducida (*).
290
Huamantupa et al.
los emplastos, frotaciones y baos con decocciones de diferentes
partes de las plantas; adems muchas de estas aplicaciones o
formas de suministro van combinadas entre varias especies, estas
formas de aplicacin son compartidas con mercados de Bolivia
y en menor proporcin con mercados de Ecuador.
En el presente estudio las principales afecciones tratadas fue-
ron las infamaciones hepticas y renales; esto tambien se observ
en los mercados de ciudades andinas de Ecuador (Cern 2006).
Considerando el estudio de Bussmann & Sharon (2006), para
todo el norte peruano con un inventario general de especies me-
dicinales catalogaron un total de 510 especies, de estas 207 son
empleadas en prcticas de curaciones mgico-religiosas, 95 son
empleadas en afecciones relacionadas al sistema respiratorio, 85
a desordenes de las vas urinarias, comparados a nuestro estudio
difere notablemente dado que las afecciones respiratorias y las de
vas urinarias no fueron consideradas con mayor relevancia. En
Cusco, otras afecciones tratadas son las digestivas y broncopul-
monares, esta ltima relacionada principalmente a los cambios
entre la estacin seca y lluviosa.
Por otra parte segn los encuestados del pblico y expendedo-
res, mencionan que es frecuente el consumo de especies contra
problemas digestivos como: Minthosthachys spicata mua,
Menta viridis hierba buena y Matricaria recutita manzanilla,
especialmente despus de consumir los alimentos
Hallamos algunas especies que consideramos necesitan de
mayor investigacin por parte de la industria farmacolgica, estas
constituyen Perezia virens y P. coerulescens, las llamadas valeriana
y valeriana macho, que segn los encuestados presenta una
efectividad en afecciones de este tipo. Otra especie interesante
que viene siendo estudiada recientemente es Valeriana spp. la
qata, la cual es bastante utilizada tambin en las zonas rurales
contra afecciones del sistema nervioso y cardiaco.
Del origen, distribucin y precedencia
El 83% (126 spp.), son de origen nativo, de estas el 78% son
procedentes de la regin andina, donde especies de las familias
Asteraceae, Lamiaceae, Plantaginaceae, Fabaceae y Poaceae, son
las mejor adaptadas a estos ecosistemas, por tanto las ms di-
versas, estas especies proceden principalmente de las localidades
altoandinas aledaas al valle del Cusco como son Pisac, Uru-
bamba, Calca, Limatambo, San Jernimo, Pachatusan, Qorao
y Saylla-Huasao. Tambin en menor cantidad son tradas de los
departamentos de Puno, Apurimac y Ayacucho.
Las especies provenientes de la regin costa son en menor n-
mero y la casi la totalidad de ellas son compartidas con la regin
andina y las otras corresponden a especies exticas provenientes
del continente europeo y asitico.
Cabe resaltar que algunos expendedores mencionan que el
cultivo de especies medicinales exticas es de gran rentabilidad y
de buen rendimiento por su fcil adaptacin a diferentes hbitats,
por ello es comn su cultivo en jardines y huertos de casas tanto
en urbes y zonas rurales.
Las especies provenientes de la Amazona son principalmente
las ms conocidas y utilizadas en varios departamentos principal-
Passiforaceae
Passifora ligularis Cav. Granadilla Digestivo
Piperaceae
Piper aduncum L. Matico Antiinfamatorio y cicatrizante
Plantaginaceae
Plantago major L. Llanten Infamaciones intestinales, hemorragias internas
Poaceae
Cymbopogon citratus (DC) Stapf * Hierba luisa Digestivo y saborizante
Zea mays L. Maz Infamaciones intestinales
Polemoniaceae
Cantua buxifolia Juss. ex Lam. Cantu, cantuta Febrfugo
Polygonaceae
Muehlenbeckia volcanica (Benth.) Endl. Mullaca, Angoyuyo Infamaciones hepticas
Rosaceae
Rosa canina L.* Rosa Irritaciones del ojo, infamaciones internas
Rutaceae
Citrus medica L.* Sidra Infamaciones estomacales y hepticas
Ruta graveolens L.* Ruda Vermfuga y anti nerviosa
Smilacaceae
Smilax poeppigii Kunth Zarza parrila Alteraciones sanguneas, hemorragias internas
Rubiaceae
Uncaria guianensis (Aubl.) J.F. Gmel. Ua de gato Desinfamante artrtico, febrfugo anti cancergeno
Violaceae
Viola odorata L. * Violeta Problemas broncopulmonares
Tabla 1. Continuacin.
291

mente en Iquitos, Madre de Dios y Pucallpa (Ducke & Vasquez
1994), para el mbito de Cusco, las especies provienen en gran
nmero de los valles amaznicos de la Convencin, Quincemil,
Yanatile y Kosipata.
Conclusiones
El presente estudio de las especies medicinales, expendidas en
los mercados de Cusco, constituye un aporte importante para
el conocimiento local y regional considerando que en la regin
andina, la poblacin local usa directamente este recurso. La ri-
queza de taxas, modos de uso, afecciones o dolencias tratadas y
el origen de las plantas medicinales expendidas en los mercados
de Cusco muestra patrones similares a otros mercados andinos
como Puno en Per, algunos importantes de la costa como Lam-
bayeque y la Libertad; Cochabamba y La Paz en Bolivia y Quito,
Riobamba e Ibarra en Ecuador, lugares con los que a su vez se
comparte conocimientos ancestrales proveniente de las culturas
Quechua y Aymara principalmente, y que estos a su vez estn
directamente relacionados a que tambin se comparten varios
ecosistemas y hbitats naturales similares o parecidos. Tambin
las especies exticas o introducidas en su totalidad son compar-
tidas y utilizadas ampliamente en todos los mercados andinos.
Agradecimientos
Los autores hacen el agradecimiento especial a los poblado-
res, expendedores de los diferentes mercados de la ciudad de
Cusco, ya que desinteresadamente nos facilitaron el acceso a
informacin del conocimiento que poseen que en la mayora
de casos no estn documentas en fuente alguna. Igualmente a
los profesionales encargados en el herbario Vargas CUZ, de la
facultad de ciencias biolgicas de la UNSAAC, por brindarnos
las facilidades de acceso a dicha institucin.
Literatura citada
Angiosperm Phylogeny Group (APG III). 2003. An update of the
Angiosperm Phylogeny Group, Classifcation for the or-
ders and families of Flowering plants. Botanical Journal
of the Linnean Society, 141, 399436.
Brack, A. 1999. Diccionario enciclopdico de plantas tiles del
Per. Programa de las Naciones Unidas para el Desarrollo,
Centro Bartolom de las Casas, Cuzco. pp. 550.
Brako, L. & J. Zarucchi. 1993. Catalogue of the Flowering Plants
and Gymnosperms of Peru. Monographs in Systematic
Botany of the Missouri Botanical Garden 45: 414-425.
Bermdez, A. & Velzquez, D. 2002. Etnobotnica mdica de una
comunidad campesina del estado Trujillo, Venezuela: un
estudio preliminar usando tcnicas cuantitativas. Revista
de la facultad de farmacia 44(2): 1-6.
Bussmann

R, W & Sharon, D. 2006. Traditional medicinal plant use
in Northern Peru: tracking two thousand years of healing
culture.Journal of Ethnobiology and thnomedicine. DOI
10.1186/1746-4269-2-47
Bussmann R, W., D. Sharon., I. Vandebroek., A. Jones & Z. Revene.
2007. Health for sale: the medicinal plant markets in Truji-
llo and Chiclayo, Northern Peru. Journal of Ethnobiology
and Ethnomedicine. DOI 10.1186/1746-4269-3-37.
Cern, C. E. 2006. Plantas medicinales de los Andes Ecuatorianos.
En: Ed. M. Moraes et al. Botnica Econmica de los andes
Centrales. La Paz Bolivia. pp: 285 293.
De la Torre, L., P. Muriel & H. Bslev. 2006. Etnobotnica de los
Andes del Ecuador. En: Ed. M. Moraes et al. Botnica
Econmica de los andes Centrales. La Paz Bolivia.
pp:146 - 267.
Ducke, D & R. Vsquez, 1994. Amazonian Ethnobotanical Dictio-
nary. CRC Press. Usa. Pgs.215.
Garcilaso de La Vega El Inca. 1971(1609). Comentarios Reales.
Edit. Mercurio, Lima. pp. 702.
Herrera, F. 1923. Fitolatria indgena. Plantas y fores simblicas de
los Inkas. Inca, 1, 2, Lima. pp.446.
INEI. 2007. Per: Censos Nacionales 2007, XI de Poblacin y VI de
vivienda. Per crecimiento y distribucin de la poblacin
2007. Instituto Nacional de estadstica e informtica. pp.
46.
La Torre-Cuadros, M. A & J. Albn. 2006. Etnobotnica de los Andes
del Per. En: Ed. M. Moraes et al. Botnica Econmica
de los andes Centrales. La Paz Bolivia. pp 239 245.
Maca J.M., E. Garca & P. J. Vidaurre.2004. An ethnobotanical
survey of medicinal plants commercialized in the markets
of La Paz and El Alto, Bolivia. Journal of Ethnopharma-
cology. pp 337350.
Mantilla, H. M. & O. Olazbal C. 2004. Pachamama Hampi Qho-
ranchiskuna: Las Plantas Medicinales de nuestra Madre
Tierra. Instituto de Ecologa y Plantas Medicinales IE-
PLAM, Cusco Per. II. Edicin. pp 167.
Moscoso, C. M. 2001. Secretos medicinales de la fora peruana
y Gua de la Maternidad. Edit. Bartolom de las Casas.
Cusco Per. pp 230.
Snchez, V. I. & M. Dillon. 2006. Jalcas. En: Ed. M. Moraes et al.
Botnica Econmica de los andes Centrales. La Paz
Bolivia. pp 77 - 90.
UICN-OMS-WWF. 1993. Directrices sobre Conservacin de plantas
medicinales. Organizacin Mundial de la Salud (OMS).
Unin internacional para la Conservacin de la Naturaleza
(UICN) and Worldlife Fund (WWF), Gland. pp 55.
Urrunaga, R. 2002. Prospeccin del Conocimiento Tradicional de
Manejo y Uso de los Cultivos Nativos y sus Parientes
Silvestres. Proyecto Conservacin In Situ. 145 pp. ARA-
RIWA. CESA. INIA. Cusco.
Urrunaga R. 2003. Participacin Comunitaria en el rescate y revalo-
rizacin de los conocimientos tradicionales de las plantas
medicinales en el rea Andina de la Reserva de Biosfera
del Manu. INRENA. Cusco. pp 30.
Vidaurre, R. P. 2006. Plantas Medicinales de los Andes de Bolivia.
En: Ed. M. Moraes et al. Botnica Econmica de los andes
Centrales. La Paz Bolivia. pp 268 284.
Weberbauer, A. 1945. El mundo vegetal de los Andes peruanos.
Estudio Fitogeogrfco. Lima Estacin Experimental Agr-
cola de la Molina. Direccin de Agricultura. Ministerio de
Agricultura, Lima. pp 776.
292
Huamantupa et al.
293

Desarrollo reproductivo del amancay ismene amancaes
ISSN 1561-0837
Desarrollo reproductivo del amancay Ismene amancaes
(Amaryllidaceae) en su ambiente natural
Mery L. Suni, Edisson Pascual, Enoc Jara
Reproductive development of amancay Ismene amancaes (Amaryllidaceae)
in its natural environment
Laboratorio de Fisiologa Vegetal,
Facultad de Ciencias Biolgicas,
Universidad Nacional Mayor de
San Marcos. Apartado 11058. Lima
11, Per.
Email Mery Suni:
msunin@gmail.com
Email Enoc Jara:
ejarap@gmail.com
Email Edisson Pacual:
e.di.sson22@hotmail.com
Resumen
Ismene amancaes amancay es una especie bulbosa caracterstica de las formaciones vegetales denominadas
Lomas de la costa central del Per. Emerge al iniciar el periodo de neblina que ocurre en junio, durante el
invierno. Presenta fores grandes amarillas y con agradable aroma, muy apreciadas y de valor ornamental. A
fn de conocer el desarrollo reproductivo de Ismene amancaes en su ambiente natural se hicieron muestreos
mensuales de sus bulbos durante todo un ao. Se realizaron observaciones del interior del bulbo para deter-
minar el inicio de la formacin y desarrollo de las yemas forales y se relacion con la formacin de sus hojas
y la humedad edfca. Se puede indicar que las primeras yemas forales se hacen evidentes el ao anterior a
su emergencia, en el mes de diciembre, alcanzando el mximo nmero de yemas forales en febrero (periodo
de verano). La diferenciacin de las yemas forales se inicia luego de haberse formado las hojas que saldrn el
siguiente ao y en el periodo de mximo descenso de la humedad edfca y de incremento de la temperatura
(noviembre). La inforescencia es la nica ramifcacin que se forma mientras que la yema apical continua
formando hojitas. En junio, la pequea inforescencia alcanza el cuello del bulbo y avanza seguido por las hojas
formadas antes de la inforescencia siendo envolventes a la inforescencia misma y a la yema foliar apical. La
yema foliar continuar su desarrollo y en julio dos de sus hojas salen del bulbo, las siguientes aun pequeas
quedan dentro y brotarn en el periodo de Lomas del siguiente ao. Se puede sealar que el xito reproductivo
de Ismene amancaes en su etapa inicial es dependiente de los fotoasimilados acumulados como biomasa del
bulbo en el periodo de Lomas anterior.
Palabras clave: Santuario de Amancay, Lima, Desierto costero peruano, bulbo, Lomas
Abstract
Ismene amancaes amancay is a bulbose species typical of the central coast vegetation of Peru called lomas.
This species sprouts in June during the beginning of the winter-fog period. It has large yellow, aromatic fowers
valued for their ornamental value. Our goal was to examine the reproductive development of Ismene amancaes
in its natural environment, and we recorded monthly observations during a yearlong study. Observations of
the interior of the bulbs allowed recording of the beginning of foral bud formation and development, relating
them to leaf formation and edaphic humidity. We found that the frst foral buds develop the year before their
emergence in December, reaching a maximum number of foral buds in February, during the Summer. Floral
bud differentiation starts after leaves that will emerge the following year have developed. This occurs during a
period of maximum decrease in edaphic humidity and an increase in air temperature (November). The info-
rescence is the only branching that develops while the apical bud continues developing leaves. In June, the
small inforescence reaches the neck of the bulb and surpasses it followed by those leaves developed before
the inforescence that surround both the inforescence and the apical foliar bud. The foliar bud will continue
its development, and in July two of the leaves expand, while the smaller ones remain inside the bulb until the
following years Lomas season. It can be noted that the reproductive success of Ismene amancaes in its initial
development depends on the photoreserves accumulated in the bulb the previous growth period.
Keywords: Amancay Sanctuary, Lima, Peruvian Coastal Desert, bulb, Lomas.
Introduccin
Ismene amancaes (Ruiz & Pav) Herb. amancay es una planta
bulbosa que se desarrolla en la costa central de Per y es un com-
ponente caracterstico del ecosistema de Lomas. Su desarrollo
es dependiente de la humedad ambiental que se presenta en los
meses de invierno. Es una especie cuya inforescencia emerge
con el inicio del periodo de Lomas seguido del desarrollo foliar,
foracin, fructifcacin, produccin de semillas y germinacin
hasta el desarrollo del bulbillo que ocurre al fnal del periodo
de humedad.
La for de I. amancaes, es apreciada por su color, buen tamao,
forma y fragancia. Su nico medio de propagacin natural es
por semilla, produciendo hasta 13 semillas por for y 7 fores
por planta (dependiendo del tamao del bulbo) (Agero &
Suni 1999). Cambios climticos como los ocasionados por el
evento El Nio afectan negativamente los procesos de foracin
y fructifcacin, disminuyendo su tasa de propagacin. Se estima
que slo el 30% de las plantas forecen bajo estas condiciones
(Agero & Suni 1999). Tambin la actividad extractiva del
poblador de las zonas aledaas a las Lomas o los visitantes que
las recolectan, as como el pastoreo y la expansin de las zonas
urbanas y agrcolas, han ocasionado en los ltimos aos la dis-
minucin de su rea de distribucin y nmero de individuos
en su medio ambiente natural, lo cual ha llevado a considerarla
como una especie vulnerable (Len et al. 2006).
Pese a su importancia y situacin de amenaza son escasos los
estudios realizados en esta especie. Es por ello que en el presente
trabajo examinamos el desarrollo reproductivo de I. amancaes
amancay en las Lomas del Santuario de Amancay, Pachacmac
(Lima) y evaluamos cmo la temperatura y disponibilidad de
agua en el suelo afectan su ciclo de vida. El conocimiento de las
condiciones de temperatura y humedad de almacenamiento de
los bulbos permitiran el uso y manejo I. amancaes como planta
ornamental.
294
Suni et al.
rea de estudio
A fnes de octubre del 2003, en la etapa de senescencia foliar
de Ismene amancaes, se delimitaron tres parcelas de estudio de
4x5 m
2
dentro del Santuario de Amancay, Pachacmac, Lima.
Se marc con estacas la ubicacin de 20 bulbos por parcela que
presentaban de 5 a 9 hojas (el nmero de hojas tiene relacin
con el desarrollo del bulbo y su madurez reproductiva, Suni, M.,
pers. obs.). Este marcado permiti ubicar los bulbos y realizar
los muestreos en el periodo sin desarrollo de la parte area (9
meses) (Fig. 1).
Material y mtodos
De enero del 2004 a enero del 2005 se realizaron muestreos
mensuales de bulbos y suelo por un total de 13 muestreos.
En cada fecha se retiraron de cada parcela 2 bulbos marcados,
material que fue transportado al laboratorio para su posterior
anlisis. Se registr el peso y caractersticas internas del bulbo
Figura 1. rea de estudio. Vista de una de las parcelas de estudio
(30 de enero del 2004). Ntese la ausencia aparente de amancaes
y en detalle las caractersticas del bulbo extrado y del suelo donde
fue ubicado.
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Figura 2. Variacin del nmero de yemas forales en el curso del ao
y su correlacin negativa signifcativa con el contenido de humedad
del suelo.
Figura 3. Vistas del de-
sarrollo de la pequea
inforescencia con algu-
nas yemas forales, en el
interior de bulbos colec-
tados en diciembre del
2004 (izquierda) y enero
del 2005 (derecha).
observando la presencia o ausencia de las estructuras reproducti-
vas as como observaciones sobre la formacin de hojas y fores.
Para la medicin de la humedad edfca, mensualmente se
colect una muestra de suelo de cada una de las tres parcelas a los
20 cm de profundidad, las que se introdujeron inmediatamente
a tubos plsticos hermticos y rotulados para su transporte al
laboratorio donde fueron pesadas y secadas a 110 C hasta peso
constante. El porcentaje de humedad (porcentaje de humedad
equivalente) fue determinado por diferencia entre el peso h-
medo y peso seco dividido entre el peso seco de la muestra del
suelo, multiplicado por 100.
Resultados
Caracterizacin del desarrollo de las estructuras repro-
ductivas
En enero de 2004 se observ en el interior hacia la base
del bulbo la presencia de 1 a 2 yemas forales muy pequeas
(3mm). Este nmero de yemas en la pequea inforescencia se
incrementa en el mes de febrero, despus de lo cual se mantiene
constante (4 yemas en promedio para el material evaluado) hasta
el periodo de Lomas en que emergen y se inicia la foracin. La
pequea inforescencia va incrementando su longitud gradual-
mente (Figs. 2, 3) hasta marzo para posteriormente elongarse
295

Figura 4. Variacin de la longitud de la pequea inforescencia en el interior del bulbo de Ismene amancaes en relacin a la altura del bulbo.
Ntese que para mayo, cuando la tasa de crecimiento se incrementa, alcanza la altura del cuello del bulbo, para continuar en los meses
de julio y agosto con un crecimiento exponencial. Vista corresponde a la inforescencia presente en el interior del bulbo en mayo del 2004.
Figura 5. Caractersticas del desarrollo de los rganos foliares y forales en el interior del bulbo de Ismene amancaes en junio del 2004, en la
parte central sobre el disco basal se observa la inforescencia y la yema foliar. Ntese la apariencia del bulbo antes de su diseccin (foto de
la izquierda). Asimismo se muestra las pequeas hojas desplegadas a ambos lados segn su posicin en el bulbo.
Figura 6. Comparacin del tamao del escapo en corte transversal a nivel medio del bulbo en julio (izquierda) y septiembre (derecha) del
2004. Ntese la reduccin de sus dimensiones (vase las lneas).
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500
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ene feb mar abr may jun jul ago sep nov dic ene
Long inf (mm)
Altura de bulbo (mm)
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Suni et al.
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Figura 8. Relacin directa entre el contenido de humedad del suelo y el peso fresco de la planta (izquierda) y con el rea foliar (derecha) de
Ismene amancaes.
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Figura 9. Relacin inversa entre el contenido de humedad del suelo con el porcentaje de materia seca (ps) del bulbo y de la planta en relacin
a la biomasa total (pf) de Ismene amancaes.
Figura 7. Caractersticas del interior del bulbo (foto izquierda), observado en noviembre 2004, ntese la presencia de una hojita (vaina y l-
mina). Se seala con el puntero el meristemo apical de la yema foliar (visto al microscopio estereoscpico 80X), no fue evidente la presencia
de estructuras reproductivas.
297

muy rpidamente alcanzando en el mes de mayo la altura del
cuello del bulbo (Fig. 4) y en junio su emergencia (Fig. 5). El
cuello del bulbo se constituye externamente por las vainas de
las ltimas hojas que emergieron el periodo anterior de Lomas
y que formaban parte de la yema foliar que estuvo presente
contigua a la inforescencia en el periodo de mayo-junio. Se-
guido hacia el interior por las hojas (vainas y lminas) que se
formaron luego, cuyas vainas tienen un arreglo concntrico. Y
ms hacia el interior se presenta la hoja (sin vaina) adyacente a
la inforescencia, la inforescencia y nueva yema foliar apical. La
diferenciacin de las yemas forales se inicia luego que se han
formado las hojas que saldrn el siguiente ao y en un periodo
de mximo descenso de la humedad edfca (noviembre). Llegan
a constituir una pequea inforescencia que resulta ser la nica
ramifcacin que formar la yema apical que luego continuar
formando hojitas. La yema foliar continuar su crecimiento pero
en menor grado que la inforescencia, la misma que en el periodo
de Lomas emerger primero. En julio slo las primeras dos hojas
de la yema foliar emergen y se pudo notar el gran grosor del
escapo foral (Fig. 6) en este mes y que va disminuyendo hacia
el periodo de fructifcacin para fnalmente formar parte de los
cataflos del bulbo.
Luego de la senescencia foliar (septiembre a noviembre), en
el interior del bulbo slo se observ la presencia de pequeas
hojas y hacia la parte central del disco basal, una yema foliar
apical (Fig. 7). En diciembre se hace evidente la presencia de
las pequeas yemas forales rodeadas de pequeas brcteas. Se
observa tambin la yema foliar.
Evaluacin de las caractersticas del bulbo
El contenido de humedad de la planta y del bulbo en peso
fresco (pf ) y peso seco (ps) y el rea foliar tienen una relacin
directa con el contenido de humedad del suelo (Fig. 8), por lo
que se puede sealar que el contenido de humedad del suelo in-
fuye positivamente en el desarrollo del rea foliar y el contenido
de humedad de toda la planta. Mientras que tiene una relacin
inversa con el porcentaje de materia seca del bulbo y de la planta
(Fig. 9) lo cual refeja una alta absorcin de agua que coincide
con el mximo desarrollo de sus hojas (en agosto). Se observ
asimismo que el grosor de los cataflos (que originalmente fueron
las vainas de las hojas) variaba de 0,5 a 1,9 mm. Siendo el grosor
de los catflos externos menor que los internos.
Contenido de humedad del suelo
A 20 cm de profundidad, nivel aproximado de ubicacin
del bulbo, los valores ms bajos de contenido de humedad del
suelo se presentaron de febrero a abril del 2004. En los meses
siguientes se observ un incremento de la humedad hasta que
en los meses de agosto y septiembre de obtuvieron los mayores
valores para declinar precipitadamente en noviembre, periodo en
que se considera se inicia la diferenciacin de las yemas forales.
Paralelamente se realiz a partir del mes de junio la evaluacin
del contenido de humedad del suelo a 5 cm de profundidad. A
este nivel, el contenido de humedad del suelo est ms sujeto a
los cambios medio ambientales, este llega a tener en los meses
hmedos mayores valores y en verano valores menores que a 20
cm de profundidad.
Discusin
Ismene amancaes presenta actividad a lo largo de todo el ao.
Al inicio del periodo no Lomas, cuando declina precipitada-
mente el contenido de humedad en el suelo (Agero 2002) y se
incrementa la temperatura (noviembre), ocurre el inicio de la
diferenciacin de las yemas forales. El desarrollo de la pequea
inforescencia dentro del bulbo, continua en los meses de vera-
no, como se ha observado en algunos bulbos (Noy-Porat et al.
2009). Se encontr una relacin inversa entre el contenido de
humedad del suelo y la presencia de yemas forales. Esta es una
etapa que depende de los recursos almacenados en el mismo
bulbo (Boeken 1989). En aos con incremento de temperatura
en verano (evento El Nio) no se espera que se afecte el inicio de
la diferenciacin de las yemas forales, ms bien por el retraso del
periodo de humedad se prolonga este periodo de desarrollo den-
tro del bulbo, consumiendo reservas nutricias y disminuyendo
la posibilidad de xito reproductivo (Agero & Suni 1999). El
desarrollo foliar en el periodo de Lomas present una relacin
directa con el contenido de humedad edfca. Agero y Suni
(1999) reportaron un resultado semejante para plantas juveniles.
El periodo de diferenciacin y desarrollo de las estructuras repro-
ductivas hasta la foracin abarca ocho meses (noviembre a julio);
mientras que la acumulacin de fotoasimilados, los cuales son
traslocados a la vaina de las hojas retornando e incrementando
biomasa al bulbo, solamente dos meses (agosto, setiembre). Sin
embargo este periodo es determinante para el xito reproductivo
del siguiente periodo.
Agradecimientos
Los autores expresan su profundo agradecimiento especial-
mente a PRODENA-AREQUIPA, CEMENTOS LIMA por el
apoyo recibido, al Ingeniero M.Sc. Felipe Mendiburu por los
anlisis estadsticos de los datos con el programa estadstico R.
Literatura citada
Agero S. & M. Suni. 1999. Infuencia del evento El Nio 1997-
1998 en el desarrollo de Ismene amancaes (Amaryllida-
ceae, Liliopsidae). En: El Nio 1997-98 y su Impacto sobre
los Ecosistemas Marino y Terrestre. J. Tarazona y E. Cas-
tillo. (Eds.) Rev. peru. biol. Vol Extraordinario: 118-124.
Agero S. 2002. Efecto de la humedad edfca en el desarrollo
y propagacin de Ismene amancaes (R. & P.) Herbert
amancaes (Amaryllidaceae) en condiciones insitu y
ex situ. Tesis para optar el ttulo profesional de Bilogo,
Universidad Nacional Mayor de San Marcos.
Boeken B. 1989. Life histories of desert geophytes the demogra-
phic consequences of reproductive biomass partitioning
patterns. Oecologia 80(2):278-283.
Len B., A. Sagstegui, I. Snchez, M. Zapata, A. Meerow & A.
Cano. 2006. Amaryllidaceae endmicas del Per. En:
El libro rojo de las plantas endmicas del Per. Blanca
Len et al. (Eds.). Rev. peru. biol. Nmero especial
13(2):690s-697s
Noy-Porat T., M.A. Flaishman, A. Eshel, D. Sandler-Ziv & R. Kame-
netsky. 2009. Florogenesis of the Mediterranean geophyte
Narcissus tazetta and temperature requirements for fower
initiation and differentiation. Scientia Horticulturae. Sci.
Hortic. 120(1):138-142.
298
Suni et al.
299

Nueva especie de mediorhynchus (Acanthocephala, Gigantorhynchidae)
ISSN 1561-0837
Nueva especie de Mediorhynchus (Acanthocephala, Gigantorhynchidae)
en Turdus chiguanco (Turdidae) de Junn, Per
Roco Moya
1
, Rosa Martnez
1
, Manuel Tantalen
2
New species of Mediorhynchus (Acanthocephala, Gigantorhynchidae) in
Turdus chiguanco (Turdidae) from Junn, Peru
1 Laboratorio de Parasitologa
de Fauna Silvestre y Zoonosis,
Facultad de Ciencias Biolgicas,
San Marcos. Apartado 110058,
Lima 11, Per.
2 Laboratorio de Parasitologa, Fa-
cultad de Veterinaria y Zootecnia,
Universidad Peruana Cayetano
Heredia. Lima, Per.
E-mail Roco Moya:
rocio.moya@gmail.com
E-mail Rosa Martnez:
rmartinezr@unmsm.edu.pe
E-mail Manuel Tantalen:
mtantaleanv@hotmail.com
Resumen
Se describe una nueva especie de Mediorhynchus (Acanthocephala, Gigantorhynchidae) basada en 36 es-
pecmenes colectados de 4 individuos de Turdus chiguanco (Lafresnaye & DOrbigny, 1837). Las aves fueron
capturadas en el distrito de Muqui, provincia de Jauja, Junn, Per. La nueva especie, Mediorhynchus peruensis
se caracteriza por la armadura de la probscide y la longitud de los lemniscos que se extienden hasta la parte
media o posterior del testculo anterior en el macho y hasta la parte media anterior del cuerpo en la hembra.
Palabras clave: Mediorhynchus, Acanthocephala, Turdus, Turdidae, Per.
Abstract
A new species of Mediorhynchus (Acanthocephala, Gigantorhynchidae) is described based on 36
specimens collected from 4 individuals of Turdus chiguanco (Lafresnaye & DOrbigny, 1837). The
birds were captured in the district of Muqui, Jauja Province, Junn, Peru. The new species, Mediorhyn-
chus peruensis is characterized by the armature of the proboscis and lemnisci length extending to
the middle or back of the anterior testis in the male and to the middle front of the body in the female.
Keywords: Mediorhynchus, Acanthocephala, Turdus, Turdidae, Peru.
Introduccin
Turdus chiguanco (Lafresnaye & DOrbigny, 1837) es un ave
no migratoria residente en el Per que se encuentra ampliamente
distribuida en Sudamrica donde se le puede encontrar en zonas
semiridas, entre los 2000 y 4300 m de altura, pero tambin en
la orilla de los ros; se distribuye a lo largo de los Andes desde
Ecuador hasta la sierra del Per, norte de Chile, Bolivia y Ar-
gentina (Blancas 1959, Fjeldsa & Krabbe 1990).
Poco se conoce de los parsitos de T. chiguanco en el Per.
Salinas et al. (1999) mencionan la presencia de cstodos, nem-
todos y acantocfalos sin indicar gnero o especie en T. chiguanco
procedentes de Lima; Tantalen y Chvez (2004) aislaron de
los ojos de T. chiguanco del Cusco dos nemtodos del gnero
Aprocta sp.
En el presente trabajo se describe a Mediorhynchus peruensis
n. sp. obtenido del intestino de Turdus chiguanco capturados en
el distrito de Muqui, provincia de Jauja (Junn).
Material y mtodos
En enero del 2007, se capturaron cuatro especmenes de T. chi-
guanco utilizando redes de niebla colocadas en corrales de las aves
domsticas y jardines de las viviendas del distrito de Muqui (3322
m de altitud, margen derecha del valle del Mantaro), provincia
de Jauja, departamento de Junn. En total fueron colectados 36
acantocfalos del intestino delgado de las aves. Los acantocfalos
fueron lavados en solucin salina, se prensaron entre 2 lminas
portaobjetos y fjaron en alcohol etlico de 70. Para el estudio
morfolgico y anatmico se colorearon con carmn clorhdrico
alcohlico, de acuerdo a la metodologa convencional.
Para observar la distribucin de los ganchos, previamente
se seccionaron las probscides de 5 machos y 5 hembras y se
transparentaron en una mezcla de alcohol-fenol, en algunas se
hicieron cortes transversales. Las medidas corporales se expresan
en milmetros y la de los ganchos en micras (promedio y rango en
parntesis). Los dibujos se prepararon con ayuda de una cmara
lcida Carl Zeiss. Los especmenes tipo fueron depositados en
la Coleccin Helmintolgica del Laboratorio de Fauna Silvestre
y Zoonosis de la Facultad de Ciencias Biolgicas UNMSM.
Resultados
Mediorhynchus peruensis nov. sp.
(Figuras 1 4)
Descripcin: basada en 7 machos y 7 hembras.
De color blanco cremoso recin obtenidos del intestino,
probscide cnica, truncada y de pared gruesa y dividida en 2
partes, la anterior con ganchos y la posterior con espinas; con
marcado dimorfsmo sexual pues la hembra, de mayor tamao
que el macho, tiene diferente nmero de ganchos en la probs-
cide; lemniscos largos y delgados.
Macho.- Mide 11,15 (8,72 14,0) de largo por 1,49
(1,251,78) de ancho. El tamao total de la probscide es de
0,57 (0,53 0,64), la longitud de la probscide anterior es
de 0,34 (0,30 0,43) por 0,40 (0,36 0,45) de ancho y de
la posterior es de 0,23 (0,20 0,27) por 0,54 (0,41 0,73)
de ancho. La probscide anterior se encuentra armada de 77
(62 84) ganchos distribuidos en 13 14 flas cada una con
4-6 elementos, la probscide posterior tiene 116 (104 120)
espinas. Los lemniscos miden 4,61 (3,1 6,31) de longitud por
0,79 (0,7 1,0) de ancho, extendindose hasta la parte media
y/o posterior del testculo anterior. Los testculos se ubican
ligeramente en la mitad posterior del cuerpo uno detrs del
otro, sin unirse entre ellos ni con las glndulas de cemento, son
ovalados, ligeramente angulosos y de bordes irregulares, miden
1,43 (1,07 1,80) de dimetro mayor con 0,47 (0,4 0,75) el
menor. Con 8 glndulas de cemento, separadas en 2 grupos de
cuatro. Poro genital terminal.
300
Moya et al.
Hembra.- Generalmente de mayor tamao que el macho,
mide 17,04 (14,0 21,0) de largo por 1,77 (1,52 2,10) de an-
cho. La longitud total de la probscide es de 0,69 (0,57 0,78);
la longitud de la probscide anterior es de 0,40 (0,35 0,45) por
0,50 (0,43 0,55) de ancho y el largo de la probscide posterior
es de 0,24 (0,22 0,35) por 0,71 (0,57 0,80) de ancho. La
parte anterior de la probscide se encuentra armada con 94
(74 96) ganchos, distribuidos en 15-16 flas conteniendo cada
una 5 6 ganchos; la parte posterior de la probscide lleva 128
(110 134) espinas. Los lemniscos miden 6,80 (5,52 8,21)
de largo por 0,84 (0,65 1,0). En la parte posterior del cuerpo
se observa la campana uterina muscular seguida por clulas del
aparato selector, con esfnter y el poro genital terminal (Fig. 3).
El huevo es ovalado y mide 0,056 (0,052 0,060) de dimetro
mayor por 0,031 (0,027 0,035) de dimetro menor (Fig. 4).
Localizacin: Intestino delgado.
Holotipo macho: Col. PAS-FCB N 257
1
2
3
4
Figuras. (1) Mediorhynchus peruensis nov. sp. Ejemplar adulto. (2) Proboscide armada de ganchos y espinas. (3) Parte posterior de un
macho. (4) Huevos.
301

Nueva especie de mediorhynchus (Acanthocephala, Gigantorhynchidae)
Alotipo hembra: Col. PAS-FCB N 258
Paratipos: Col. PAS-FCB N 259 a-d
Discusin
El gnero Mediorhynchus Van Cleave, 1916 (Gigantorhyn-
chidae) agrupa a especies que son parsitas de aves de diferentes
regiones del mundo; segn Schmidt & Kuntz (1977) y Petrot-
chenko (1958) se caracteriza por tener la probscide truncada,
armada de ganchos y espinas, lemniscos largos y delgados,
testculos en la mitad posterior del cuerpo, ocho glndulas de
cemento y huevos ovalados.
En la actualidad se conocen alrededor de 41 especies de
Mediorhynchus a nivel mundial (Golvan 1994, Smales 2002).
Travassos (1924) ha revisado las especies brasileras, M. oswaldo-
cruzi Travassos, 1923 parsita de Turdus sp., M. pintoi Travassos,
1923 del intestino de Nothura sp. y M. emberizae (Rudolphi
1819) de varias especies de aves; esta ltima tambin ha sido
registrada en Puerto Rico (Golvan 1994). La nica especie de
Mediorhynchus conocida para el Per es M. pauciucinatus descrita
por Dollfus (1959) del intestino de Saltator albicollis peruvianus
de Cajamarca.
La nueva especie que aqu se describe fue comparada con las
que ms se asemejan morfolgicamente y que son M. pintoi, M.
emberizae y M. oswaldocruzi (ver Tabla 1).
La hembra de Mediorhynchus peruensis n. sp. se diferencia
de las especies anteriores del mismo sexo por el tamao de los
lemniscos pues son de mayor longitud (5,52 8,21) que los de
M. pintoi (4,4) y M. emberizae (4,0 5,0); entre los machos no
encontramos diferencias notables en el tamao de los lemniscos.
En cuanto al tamao de la probscide (Fig. 2), Mediorhyn-
chus peruensis n. sp. tiene mayor longitud (0,57 0,78) que
la de M. pintoi (0,34) y la de M. oswaldocruzi (0,43); adems,
presenta 74 96 ganchos diferencindose de M. emberizae y
de M. oswaldocruzi que tienen 132 y 120 respectivamente. La
nueva especie tambin difere de M. pauciuncinatus en el nmero
(74 96) y tamao (109 135) de los ganchos frente a los 56
que miden 25; 19,5 y 11. Tambin encontramos diferencias en
los huevos que son de menor tamao (0,052 0,06) que los
de M. pintoi (0,076) pero de mayores dimensiones que los de
M. oswaldocruzi (0,048).
Por lo antes mencionado consideramos a nuestro espcimen
como una especie nueva.
Agradecimientos
Al Dr. Jos Luis Venero Gonzales de la Universidad San
Antonio Abad del Cusco, por la identifcacin de las aves y por
habernos proporcionado referencias bibliogrfcas, y al Ing. Csar
Pea (Univ. Federico Villarreal) por permitirnos consultar en
su biblioteca personal.
Literatura citada
Blancas F. 1959. Comunidades y Campos de vida de Acolla y sus
alrededores, (Prov. Jauja, Dpto. Junn) con estudio espe-
cial de vertebrados. Mem. Mus. Hist. Nat. Javier Prado
N 7, 160 pp.
Dollfus R. 1959. Cestodes et Acanthocphale Doiseaux Rcolts
Au Prou Par le Docteur Jean Dorst. Bull. Soc. Zool.
France, 5-6: 384-395.
Fjeldsa J. & Krabbe N. 1990. Birds of the high Andes. Published
by Zoological Museum, University of Copenhagen and
Apollo Books, Svendborg, Denmark., 558-559 p.
Brasil y
Puerto Rico
Brasil Per
M
.

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Hospedero Icteridae Turdidae Tinamidae Cardinalidae Turdidae
Estructuras (mm)
Cuerpo
largo 20 55 35 35 70 20 11,5 14,0 21,0
ancho 1 1,5 0,87 0,77 1,5 1,5 0,5 1,52 2,1
Lemnisco 4 5 6,5 6,5 4,4 4,4 5,52 8,21
Probscide
total
largo 0,43 0,43 0,34 0,34 0,57 0,78
ancho* 0,26 0,26 0,34 0,34 0,57 0,80
Receptculo Probscide 0,4 0,61 0,85
Huevo
(diametro)
mayor 0,06 0,068 0,048 0,076 0,076 0,052 0,06
menor 0, 04 0,05 0,021 0,044 0,044 0,027 0,035
Nmero de ganchos 132 120 120 72 72 56 74 96
Nmeros de espinas 110 134
Tamao de los ganchos (m) 53 78 37 122 78 25; 19,5 y 11 109 135
Tabla 1. Comparacin morfomtrica de las hembras de diferentes especies de Mediorhynchus
** nico individuo hembra inmaduro
* Probscide posterior
302
Moya et al.
Golvan Y. 1994. Nomenclature of the Acanthocephala. Res. rev.
parasitol. 54: 135-205.
Petrochenko V. 1958. Acanthocephala of domestic and wild animals.
Academy of Sciences of the USSR. All-Union Society of
Helminthologists. Edit. Skrjabin. Vol.II, 478 pp.
Salinas L., Samam M. & Franke I. (1999). Parasitismo de la avifau-
na del bosque de Zrate: Implicancias en su Conservacin.
Biota, 99: 59-66.
Schmidt G. & Kuntz R. 1977. Revision of Mediorhynchus Van
Cleave 1916 (Acanthocephala) with a key to species. J.
Parasitol., 63:500-507.
Smales L. R. 2002. Species of Mediorhynchus (Acanthocephala:
Gigantorhynchidae) in Australia birds with the descrip-
tion of Mediorhynchus colluricinclae n. sp. J. Parasitol.,
88: 375-381.
Tantalen M. & Chvez, J. 2004. Endoparsitos (Nemathelminthes
y Platyhelminthes) de animales de vida silvestre de la
Reserva de Bisfera del Manu, Per. Rev. peru. biol. 11:
219-222.
Travassos L. 1924. Contribues para o conhecimento da fauna hel-
minthologica brasileira. XVII. Reviso dos acanthocepha-
los brazileiros. 1. Famil. Gigantorhynchidae Hamann, 1892
Suplemento. Mem. Inst. Oswaldo Cruz, 17: 365-387.
303

Aspectos estructurales y cuantitativos del ovario de Fulica armillaTa
ISSN 1561-0837
Aspectos estructurales y cuantitativos del ovario de Fulica armillata
(Aves: Rallidae)
Structural and cuantitative aspects of the ovary of the Fulica armillata
(Aves: Rallidae)
Ctedra de Anatoma Comparada.
Facultad de Ciencias Exactas,
Fsicas y Naturales. Universidad
Nacional de Crdoba. Avda. Vlez
Srsfeld 299.Crdoba, CP. 5000.
Repblica Argentina.
Email Mirian Bulfon:
mbulfon@com.uncor.edu.
Resumen
Se estudiaron los aspectos morfohistolgicos y cuantitativos del ovario de Fulica armillata durante la fase de
recrudescencia gonadal. Se utilizaron 5 hembras adultas. El anlisis morfohistolgico revel la presencia de
numerosos folculos en diferentes estadios de desarrollo y regresin. El epitelio simple de clulas granulosas
caracteriz a los ovocitos primordiales y el pseudoestratifcado a los folculos previtelognicos, ambos tipos
foliculares exhibieron un notorio cuerpo de Balbiani. En los folculos vitelognicos blancos y amarillos (> de 1
mm) se evidenci una compleja pared folicular formada por la zona radiada, el epitelio folicular estratifcado y
las envolturas tecales bien delimitadas, mientras que, en los vitelognicos amarillos (> de 3 mm) fue observado
un epitelio simple con clulas cbicas muy basflas. Se identifcaron dos tipos de atresia folicular: 1) pared
folicular intacta o no bursting, la involucin se realiza en el interior del folculo, comprende a la atresia lipoidal
(Ovocitos primordiales) y lipoglandular (folculos previtelognicos y vitelognicos pequeos) y 2) atresia por
ruptura de la pared o bursting con extrusin del contenido ovoplsmico (folculos vitelognicos > 1 mm). El
anlisis cuantitativo revel una diferencia signifcativa (p <0,05), entre los folculos en desarrollo (< de 2 mm)
y los folculos mayores e idntica diferencia entre lo folculos atrsicos pequeos (lipoidales y lipoglandulares)
y los folculos bursting. Los procesos de crecimiento y diferenciacin (foliculognesis y vitelognesis) y el de
atresia folicular se desarrollan normalmente durante la fase de recrudescencia gonadal, contribuyendo a la
homeostasis del ovario de esta ave.
Palabras clave: Ovario; estructura; morfometra; foliculognesis; vitelognesis; atresia folicular.
Abstract
Morfohistologic and quantitative aspects were studied of the ovary of the Fulica armillata during gonadal recrudes-
cence phase. Were used 5 adult females. Morfohistologic analysis revealed the presence of numerous follicles
at different stages of development and regression. The simple epithelium of granulosa cells characterized the
primary oocytes and the pseudostratifed granulosa cells the previtellogenic follicle, both types showed a marked
Balbiani body. In the white and yellow vitellogenic follicles > 1 mm evidenced a complex follicular wall formed by
the radiated area, stratifed follicular epithelium and well-defned thecal enveloped, while the vitellogenic yellow
> 3 mm, was observed a simple epithelium with basophilic cuboidal cells. We identifed two types of follicular
atresia:1)intact follicle wall or non-bursting, the involution takes place inside the follicle,comprising the lipoidal
atresia (primary oocytes) and lipoglandular (previtellogenic and vitellogenic follicles small), 2) atresia by wall
rupture or bursting (vitellogenic follicles> 1 mm), extrusion of the yolk. Quantitative analysis revealed a statisti-
cally signifcant difference (p <0,05) among the developing follicles <2 mm and larger follicles and the same
difference between the small atretic follicles (lipoidal and lipoglandulares) and bursting follicles. The processes
of growth and differentiation (folliculogenesis and vitellogenesis) and follicular atresia develop normally during
the gonadal recrudescence, contributing to the homeostasis of the ovary of this bird.
Keywords: Ovary; structure; morphometry; folliculogenesis; Vitellogenesis; follicular atresia.
Introduccin
Los factores desencadenantes de la reproduccin en las aves
silvestres son varios, algunos internos, los cuales estn regidos por
la hipfsis, y otros externos, relacionados con el medio ambiente;
entre otros, el fotoperodo, las precipitaciones, la temperatura
y la cantidad de alimento disponible. La interaccin de estos
factores confere la regularidad caracterstica de cada especie y
determina que la poca de reproduccin coincida con el ptimo
ecolgico para cada especie (Dorst 1976).
El ovario de las aves es una estructura muy compleja, pro-
fusamente irrigada y constituida por una zona cortical y una
interna o mdula. En la periferia se localizan numerosos tipos
foliculares en distintos estadios de maduracin, entre los cuales,
los folculos en desarrollo son los ms abundantes durante todo
el ciclo reproductivo. Estn formados por el ovocito y la pared
folicular, estructuras ovocitarias que exhiben las notorias modi-
fcaciones producidas durante la maduracin de los mismos. Los
procesos de foliculognesis y vitelognesis han sido estudiados
en el ovario de diferentes especies silvestres (Chalana & Guraya
1979, Guraya 1989a, Madekuroswa & Kimaro 2006).
Bulfon y Bee de Speroni (2003, 2009) y Bulfon (2008)
analizaron las variaciones estructurales y cuantitativas durante el
perodo reproductivo anual de aves estacionales como Spheniscus
magellanicus, Myiopsitta monachus, e Himantopus melanurus.
Adems se estudiaron similares aspectos en aves con ciclos de
postura prolongada que caracterizan a algunos colmbidos como
Columba maculosa maculosa (Maron 2007), Zenaida auriculata
(Bulfon 2008) y Columbina picui (Altamirano et al. 2009).
En el ovario de aves domsticas y silvestres, se encuentra otro
tipo de folculos los cuales estn afectados por un mecanismo
degenerativo muy complejo denominado atresia folicular. Esta
ltima es un proceso normal que remueve del ovario a numerosos
folculos en cualquier etapa de su desarrollo. Su naturaleza y
evolucin ha sido estudiado por numerosos autores (Gilbert et
304
Bulfon & Bee de Speroni
al. 1981, 1983, Halse 1985, Gupta y Mait 1986, Forg et al.
1988, Guraya 1989b, Bulfon & Bee de Speroni 2001, 2003,
Bulfon 2008, Maderuskowa 2006, Claver et al. 2008, Bulfon
& Bee de Speroni 2009).
En consideracin que, la informacin morfolgica bsica
del ovario proporciona datos valiosos al estudio de la biologa
reproductiva en especies silvestres, la gallareta de ligas rojas
Fulica armillata constituye un interesante grupo entre las aves
acuticas. Esta especie forma parte del paisaje de las lagunas o
ros con vegetacin densa. Vive en grupos y su nombre proviene
de las franjas o ligas rojas en la tibia, sobre patas de coloracin
amarillentas. Nidifca desde mayo a noviembre y ovipone de 4
a 7 huevos de color crema olivceo con pintas pardo oscuras
(Nores & Izurieta 1980).
En este trabajo se realiza un anlisis estructural y cuantitativo,
a fn de aportar conocimientos bsicos acerca de los procesos de
crecimiento, diferenciacin y regresin folicular que se desarro-
llan en el ovario recrudescente de esta ave.
Materiales y metodos
Ejemplares.- Cinco hembras adultas de Fulica armillata
(Viellot) se capturaron en el Arroyo Chucul (330752S,
633505W), Crdoba, Repblica Argentina, entre agosto y
noviembre de los aos 2009 y 2010. En el laboratorio, las aves
se anestesiaron y perfundieron intracardacamente con formalina
Neutra (pH 7, 4%) luego se disecaron y removieron las gnadas.
La ausencia de la Bursa de Fabricius, indic del estado adulto de
las mismas (Wight 1959).
Histologa.- Las muestras de ovario se postfjaron en formol
tamponado pH 7,0 y procesaron de acuerdo a la tcnica de
inclusin en parafna. Los cortes seriados de 6 m de espesor se
colorearon con hematoxilina eosina y tricrmico de Mallory
(Romeis 1928). Los folculos atrsicos se distinguieron de los
folculos normales y postovulatorios de acuerdo a Bulfon y Bee
de Speroni (2003).
Histomorfometra.- De cada gnada se extrajeron 10 sec-
ciones histolgicas mediales y se midieron y contaron todos los
folculos ovricos en desarrollo (FD) y atrsicos (FA), para lo
cual se emple el software ImageJ 1.4 (http://rsbweb.nih.gov/
ij/index.html). En las lecturas se consider un intervalo de 80
secciones histolgicas Las imgenes fueron captadas a travs
de una Cmara Nikon Digital Sight DS -Fi1 acoplada a un
microscopio Nikon Eclipse 50i.
Anlisis estadstico.- Se estimaron los porcentajes de los
folculos en desarrollo y folculos atrsicos en base al promedio
de lecturas realizadas en cada ovario durante la recrudescencia
gonadal. Los datos se analizaron y compararon estadsticamente
a travs del anlisis de la varianza (ANAVA). Para estudiar las
diferencias entre grupos se utiliz el test de Tukey. Un valor de
p <0,05, fue considerado signifcativo (Programa Infostat 2011).
Resultados
Aspectos morfolgicos
El aparato genital femenino de F. armillata es asimtrico y
lo constituye el ovario izquierdo que representa la gnada fun-
cional y el oviducto del mismo lado con forma de largo tubo.
Durante la recrudescencia gonadal el ovario adquiere un aspecto
arracimado por la presencia de cuatro o cinco folculos de color
amarillo, folculos postovulatorios y folculos atrsicos (Fig. 1).
Caractersticas histolgicas del ovario
El anlisis del ovario durante la fase de recrudescencia permite
reconocer en la zona cortical de la gnada, a los Ovocitos pri-
mordiales, folculos en desarrollo, que comprenden a los folculos
previtelognicos, vitelognicos,preovulatorios y postovulatorios
y a los folculos atrsicos (Fig. 2).
Los ovocitos primordiales dispuestos en forma de cordones
(60 a 100 m de dimetro), estn constituidos por el ovocito
o clula germinal y rodeados por una capa simple y aplanada
de clulas foliculares. Las envolturas tecales an estn ausentes.
Figura 1. Norma ventral del ovario en fase de recrudescencia. Se
destacan los folculos ovricos en diferentes estadios de desarrollo
y diferenciacin. Barra: 1 cm.
Figura 2. Vista general del ovario. En la corteza se observan cordo-
nes de O.P, F.P.V y F.V.B y en el estroma medular numerosos vasos
sanguneos (V.S).Tincin: Hematoxilina Eosina. Barra: 250 m.
305

El ncleo ovocitario presenta un prominente (nucleolo y los
cromosomas en confguracin diplotene o lampbrush.(Fig. 3).
Folculos en desarrollo.- Entre los folculos en desarrollo,
los folculos previtelognicos (100 a 1000 m de dimetro)
presentan clulas foliculares o granulosas que forman un epite-
lio columnar alto, pseudoestratifcado e incipientes envolturas
tecales. En estos folculos se destaca el cuerpo de Balbiani y las
granulaciones citoplasmticas dispuestas en la zona cortical del
ovoplasma.
Los folculos vitelognicos blancos (1000 y 2000 m de di-
metro), exhiben una capa pluriestratifcada de clulas foliculares
y envolturas tecales bien diferenciadas. Se visualiza la zona radia-
da y en el interior del ovoplasma notorias estriaciones y grnulos
de aspecto lipdico de variadas formas y tamaos (Fig. 4).
A medida que se incrementa el dimetro de los folculos
vitelognicos amarillos (> de 2 mm), las clulas foliculares se
comprimen y constituyen una capa de clulas cuboidales con
ncleos muy basflos, mientras que las tecas se observan engro-
sadas y fbrosas. En el ovoplasma se incorporan gran cantidad
de grnulos de vitelo pigmentados proveyndole la coloracin
amarilla caracterstica. Se destacan 4 5 folculos (> de 5 mm)
de los cuales los ms grandes (entre 13 y 17 mm de dimetro).
Se convierten en folculos preovulatorios. Estos ltimos se
destacan por el tamao la presencia del estigma o zona de rup-
tura durante la ovulacin. A posteriori de la misma, las paredes
colapsan, visualizndose la abertura que queda en la superfcie
folicular. En el interior del recientemente formado folculo
postovulatorio quedan restos de epitelio folicular y abundantes
clulas de aspecto luteal. Las envolturas tecales estn muy en-
grosadas y notablemente irrigadas. (Fig. 5).
Estroma medular.- En esta fase de desarrollo la zona interna
del ovario est compuesta por tejido conectivo que exhibe espa-
cios o lagunas y una notoria vascularizacin. (Fig. 2)
Folculos atrsicos.- Durante la recrudescencia gonadal se
observa, adems, en la corteza ovrica de F. armillata a numerosos
folculos atrsicos. El mecanismo involutivo o atresia folicular
afecta desde los ovocitos primordiales hasta los folculos previ-
telognicos y las caractersticas ms notorias corresponden a la
desintegracin del epitelio folicular, la destruccin del ncleo
o cariolisis y la fragmentacin citoplasmtica. Los cambios es-
tructurales exhibidos permiten identifcar dos tipos involutivos:
1) Atresia no bursting: las paredes foliculares se mantienen
intactas y el contenido ovoplsmico se absorbe in situ por las
clulas foliculares, comprende:
1a) Atresia lipoidal: afecta a los ovocitos primordiales. Los
ovocitos atrsicos se contraen, en el ovoplasma se observan
gran cantidad de gotas lipdicas que comprimen al ncleo
y las clulas granulosas comienzan a desprenderse de la
membrana basal. Por la apariencia de burbuja que ofrece
el ovocito en esta etapa de regresin recibe el nombre de
atresia lipoidal.(Fig. 6).
Figura 3. Ovocito Primordial. Las clulas foliculares (C.F) se dispo-
nen en una capa simple y en el ovoplasma (O) se localiza el cuerpo
vitelino de Balbiani (c.B); N: ncleo. Tincin Hematoxilina-Eosina.
Barra: 25 m.
Figura 4. Pared folicular de un FVB < 2 mm. Epitelio folicular estrati-
fcado; (C.F) clulas foliculares; teca interna (T.I); teca externa (T.E);
(O) ovoplasma. Tincin Hematoxilina-Eosina. Barra: 16 m.
Figura 5. Folculo postovulatorio (FPO) con aspecto de un saco
aplanado. Se observan las envolturas tecales (E.T), muy engrosadas,
escasas clulas luteales (C.L) y abundante irrigacin en el interior
del folculo. (V.S) vasos sanguneos. Tincin Hematoxilina - Eosina.
Barra: 0,25 mm.
306
1b) Atresia lipoglandular: Este proceso involutivo
comprende a los folculos previtelognicos y vitelognicos
blancos entre 1500 y 2000 m. El folculo se observa defor-
mado y de contorno irregular. En las envolturas foliculares
se evidencia el incremento de la irrigacin sangunea como
as tambin la desorganizacin citoplasmtica del epitelio
folicular. La hiperestratifcacin y la intensa vacuolizacin
del ovoplasma le proveen al folculo una apariencia glan-
dular, que caracteriza la denominacin de esta regresin
folicular (Figs. 7 y 8).
En un estadio ms avanzado de involucin, notorios cor-
dones colagenizados revelados con Tricrmico de Mallory,
constituyen una fbrosa red azulada que paulatinamente se
extiende por toda la superfcie folicular. A medida que se
incrementa la migracin de las fbras conectivas el folculo
lipoglandular disminuye de tamao hasta convertirse en
una pequea cicatriz.
2) Atresia por ruptura o bursting: Este tipo de atresia afecta a
los folculos vitelognicos amarillos, algunos pequeos (2 mm) y
a otros de mayores dimensiones. La caracterstica de este proceso
involutivo es la ruptura de las paredes foliculares y la posterior
extrusin del contenido ovoplsmico al exterior del folculo.
Al inicio del proceso regresivo los folculos bursting o por
ruptura se colapsan y contraen y el polimrfco e hipertrofado
Figura 6. Ovocito Primordial Atrsico (OPA). Gran cantidad de
vacuolas (v) distribudas en el ovoplasma (O) rodean al ncleo (N).
Las fechas indican el desprendimiento de las clulas foliculares de
la membrana basal. Vaso sanguneo (V.S). Tincin Hematoxilina -
Eosina. Barra: 25 m.
Figura 7. Folculo previtelognico atrsico. Se observa el desprendi-
miento de las celulas foliculares (C.F) de la membrana basal (fechas)
y la vacuolizacin del ovoplasma. N (ncleo); cB (cuerpo vitelino de
Balbiani; E.T (eenvolturas tecales). Tincin Hematoxilina - Eosina.
Barra: 60 m.
Figura 8. Atresia lipoglandular. En el folculo vitelognico se visualiza
una marcada hiperplasia de las clulas foliculares (C.F). Envolturas
tecales (E.T) engrosadas y abundante irrigacin, (V.S) vasos sangu-
neos. Ovocito primordial (O.P). Hematoxilina - Eosina. Barra: 0,4 mm.
Figura 9. Atresia bursting. En el folculo vitelognico amarillo, se
destaca la zona de ruptura (fechas) por donde se libera el vitelo. V
(vitelo); C.F (Clulas foliculares); E.T (envolturas tecales); Hematoxi-
lina - Eosina. Barra: 0,4 mm.
307

epitelio folicular ocupa paulatinamente el rea de la cavidad
folicular de un modo similar al que ocurre con los folculos
lipoglandulares. Posteriormente la pared folicular se escinde
formando en la proximidad del tallo folicular una abertura sim-
ple y pequea, a travs de la cual el contenido del ovoplasma se
libera al exterior del folculo. La masa ectpica, constituda por
vitelo y clulas de diferente naturaleza cae sobre el estroma del
ovario ocupando los espacios lacunares o en la cavidad perito-
neal. Luego de la extrusin, se observan pequeas hemorragias
en el centro del folculo como consecuencia de la ruptura de la
pared folicular. Las tecas se colagenizan formando un cordn
trabeculado azulado, revelado con Tricrmico de Mallory,
mientras que, el interior del folculo es ocupado por clulas muy
vacuoladas, similares a las luteales. Finalmente fbras conectivas
ocupan paulatinamente toda la superfcie folicular, al igual que
en los folculos lipoglandulares (Fig. 9 y 10).
Anlisis cuantitativo y estadstico
Los ovocitos primordiales (48% 4,30), folculos previte-
lognicos (23% 3,80) y vitelognicos blancos (16% 3,30)
son los ms abundantes en la gnada recrudescente, los folculos
vitelognicos amarillos entre 2 y 4 mm (8,5% 2,60) y los
mayores a 4mm (5,5% 1,90) presentan valores porcentuales
menores que los folculos anteriores. Las variaciones estimadas
entre folculos son estadsticamente signifcativas entre los pri-
meros folculos y los amarillos (Fig. 11).
Los porcentajes de atresia lipoidal durante esta fase es de
(37,60% 15,90), la lipoglandular (49% 3,20) y la bursting
(13,40% 1,80). Las variaciones estimadas entre los folculos
atrsicos lipoidal y lipoglandular no revelan diferencias, mientras
que, entre estos ltimos y los atrsicos bursting o por ruptura, las
variaciones estadsticas son signifcativas (Fig. 12).
Discusin
El anlisis morfohistolgico del ovario de F. armillata rea-
lizado durante la fase de recrudescencia revela que, durante el
desarrollo y diferenciacin folicular, la gnada exhibe importan-
tes variaciones en la forma y tamao que la convierten en una
estructura cambiante y polimrfca.
En esta fase del ciclo, la maduracin de un elevado porcentaje
de folculos ovricos se asocia estrechamente a la formacin del
epitelio folicular. La foliculognesis se inicia en etapas tempranas
de desarrollo desde los ovocitos primordiales y culmina con la
formacin del folculo preovulatorio. Este proceso evidenciado
por modifcaciones en la morfologa y distribucin de las clulas
de la granulosa, el incremento en la irrigacin de la pared folicu-
lar y los componentes ovocitarios entre otros, refeja los cambios
Figura 10. Folculo atrsico bursting. Espacios lacunares (E.L) en
las proximidades del folculo (F.A), conteniendo abundante vitelo (V).
Hematoxilina - Eosina. Barra: 0,45 mm.
a
ab
ab
b
b
OP FPV FVB FVA FVA //
0,00
11,00
22,00
33,00
44,00
55,00
P
o
r
c
e
n
t
a
j
e
s
Figura 11. Variaciones porcentuales de los folculos ovricos en
desarrollo de F.armillata durante la recrudescencia gonadal. N = 20.
Las barras representan (x DS).Letras distintas indican diferencias
signifcativas (p<=0,05).
a
a
b
Lipoidal lipoglandular bursting
Tipos de atresia
0,00
11,00
22,00
33,00
44,00
55,00
P
o
r
c
e
n
t
a
j
e
s
Figura 12. Variaciones porcentuales de los folculos atrsicos de
F.armillata durante la recrudescencia gonadal. N = 20. Las barras
representan (x DS). Letras distintas indican diferencias signifca-
tivas (p<=0,05).
308
estructurales inherentes a la diferenciacin folicular. Asimismo,
la proximidad de las clulas foliculares con la membrana plas-
mtica del ovocito y la formacin de la zona radiada, permite
que las diversas macromolculas y precursores del vitelo sean
transportados a travs de los vasos sanguneos para constituir el
vitelo. Este proceso denominado vitelognesis es bien conocido
en el ovario de Gallus domesticus y ha sido descrito por numerosos
autores (Wallace 1985, Guraya 1989a, Etches 1990). La misma
se desarrolla en varias etapas, la ltima deposicin vitelognica
o fase de rpido crecimiento se realiza durante la recrudescencia
gonadal incrementando notoriamente de tamao a algunos
folculos amarillos en pocos das. En F. armillata este grupo o
cohorte comprende de 4 a 5 folculos los cuales exhiben una
jerarqua morfolgica de acuerdo al tamao y de la cual surgirn
los folculos dominantes para ovular a posteriori.
Las caractersticas morfohistolgicas de la gnada femenina
de esta ave, son similares a las analizadas en G. domesticus por
(Gilbert et al. 1981, 1983, Etches 1990), en Anser anser (Forg
et al. 1988, Kovacks et al. 1992) y tambin en especies silvestres
como Passer domesticus (Guraya & Chalana 1976), Columba
livia (Guraya 1989a), Spheniscus magellanicus (Bulfon & Bee
de Speroni 2003), Struthio camelus (Madekuroswa & Kimaro
2006), Columbina picui (Altamirano et al. 2009).
En F. armillata los ovocitos primordiales, los folculos pre-
vitelognicos y vitelognicos blancos son los ms abundantes
durante la fase analizada, el signifcado de estas ponderaciones
se asocia a la formacin de un importante reservorio folicular.
Asimismo el bajo porcentaje de folculos vitelognicos amarillos
indica que slo lo ms aptos son reclutados y seleccionados en
cada ciclo reproductivo para la posterior maduracin y ovipos-
tura; en ovarios de aves silvestres estos eventos an no estn
claramente dilucidados.
Contrariamente a los mecanismos de desarrollo y diferencia-
cin, la atresia folicular produce en el ovario de F. armillata, la
degeneracin y ulterior eliminacin de una gran cantidad de fol-
culos ovricos en diferentes estadios de diferenciacin y desarrollo.
Las caractersticas morfohistolgicas de los folculos lipoidales
y lipoglandulares y las secuencias en la involucin de los mismos
concuerdan con las descripciones realizadas en los folculos ovri-
cos de aves silvestres como Passer domesticus (Guraya & Chalana
1976), Zonotrichia leucophrys gambelii (Kern 1972), Columba
livia (Guraya 1989a), Struthio camelus (Madekuroswa & Kimaro
2006), Nothura maculosa (Claver et al. 2008), Vanellus chilensis e
Himantopus melanurus (Bulfon & Bee de Speroni 2009).
El otro proceso regresivo visualizado en los folculos ovricos
amarillos mayores de 2 mm de F. armillata corresponde a la
formacin de la ruptura de la pared folicular o bursting. As,
mediante un efciente mecanismo estas aves remueven de los
folculos vitelognicos grandes una cantidad importante de
vitelo. La involucin se facilita porque esta masa ectpica es
digerida posteriormente fuera del folculo, ya sea en los espacios
lacunares ubicados en la proximidad de los folculos atrsicos
como tambin en la cavidad peritoneal.
Nili y Kely (1996) han demostrado que, el sistema lacunar
del ovario de G. domesticus provee a los folculos bursting de un
espacio voluminoso para que el vitelo all depositado sea luego
metabolizado por las clulas fagocticas.
La atresia folicular de F. armillata muestra similitudes mor-
folgicas con las descriptas en el ovario de diferentes especies
de aves silvestres por diferentes autores (Halse 1985, Gupta &
Mait 1986, Gupta et al. 1988, Guraya 1989b, Bulfon & Bee
de Speroni 2003, 2009, Madekuroswa & Kimaro 2006, Claver
et al. 2008).
El papel que desempea la atresia no bursting (lipoidal y
lipoglandular) en el ovario de F. armillata, se relaciona con
un mecanismo temprano de seleccin folicular debido a que
involucra a los folculos ovricos pequeos y presenta un alto
porcentaje durante la recrudescencia, mientras que debido a la
atresia bursting o por ruptura se eliminan los folculos vitelog-
nicos amarillos no aptos para ovular.
De este estudio se concluye que, durante la fase de recrudes-
cencia gonadal de F. armillata, el desarrollo y diferenciacin y la
atresia folicular son procesos normales y dinmicos que contri-
buyen a la homeostasis del ovario de esta ave de hbitat acutico.
Agradecimientos
Los autores agradecen a la Dra. Mara Helena Samar por
las sugerencias y lectura crtica del manuscrito, al Prof. Jorge
Dongiovani por la colaboracin en los trabajos de campo y a la
SECYT- UNC. Resol-214/10 por la fnanciacin de este trabajo.
Literatura citada
Altamirano E., M.Bulfon & N. Bee de Speroni. 2009. Histologa
del ovario y ciclo reproductivo de Columbina picui
(Temminck, 1813)(Aves: Columbidae). Rev.peru.bio.16
(1): 61-66.
Bulfon M. & N. Bee de Speroni. 2003. Atresia folicular de Sphe-
niscus magellanicus Forster 1871 (Aves:Spheniscidae).
Ararajuba 11(2):189-194.
Bulfon M. 2008. Caractersticas ultraestructurales, histoqumicas e
inmunohistoqumicas de la atresia folicular de Myiopsitta
monachus y Zenaida auriculata (Psittacidae y Colum-
bidae). Tesis de Doctorado. F.C.E.F.y N. Universidad
Nacional de Crdoba.
Bulfon M. & N. Bee de Speroni. 2009. Anlisis estructural e inmu-
nohistoqumico de la atresia folicular de Vanellus chilenis
e Himantopus melanurus. Rev.peru.bio. 16 (2):169-174.
Claver J., J. Rosa, D. Lombardo et al. 2008. Histological seasonal
change in ovaries of spotted Tinamous, related to gona-
dotrope population. Int. J. Morphol. <http: www.scielo.cl/
scielo.php. Acceso 21-06-2011.
Chalana, R. y S. Guraya. 1978. Histophysiological studies on the
postovulatory follicles of the fowl ovary. Poult. Sci.
57:814 817.
Chalana R. & S. Guraya. 1979. Morphological and histochemical
observations on the primordial and early growing oocytes
of crow (Corvus splendens) and myna (Acridotheres tris-
tis). Poult. Sci 58 (1): 225 231.
Dorst J. 1976. Las modalidades y el ciclo de la reproduccin. En:
Ediciones Destino, Barcelona. La vida de las aves. Tomo
II. Pp. 401 422
Etches R. 1990. The ovulatory cycle of the hen. In: CRC
Press,Inc.,edits. Critical Reviews in Poultry Bioogyl. 2
(4) Pp. 293 - 318.
Forg V., G. Afanasiev & P. Pczely. 1988. Light microscopic,
enzime biochemical and steroid analytical investigations
of follicular atresia in the ovary of domestic goose. Acta
Biol. Hung. 39 (4): 377 - 401.
Gilbert A., M. Davidson, M. Hardie et al.1981.The induction of
atresia in the domestic fowl (Gallus domesticus). Gen.
Comp. Endocrinol. 44: 344 - 349.
309

Gilbert A., M. Perry, D. Waddington et al. 1983. Role of atresia in
establishing the follicular hierarchy in the ovary of the
domestic hen Gallus domesticus. J. Reprod. Fertil. 69:
221 228.
Gupta S. & B. Mait. 1986. Study of atresia in the ovary during the
annual reproductive cycle of the pied myna. J. Morph.
190 (3): 285 - 296.
Gupta S., A. Gilbert & A, Walker. 1988. Histological study of fo-
llicular atresia in the ovary of the domestic hen (Gallus
domesticus). J.Reprod. Fert. 82: 219-225.
Guraya S. 1989a. Follicle wall. In: W.Burggren, S.Ishii. H.Langer,
G.Neuweilery, D-Randall(eds).Zoophysiology, Volumen
24. Springer - Verlag Berlin. Pp. 116 -146.
Guraya S. 1989b.Follicular atresia. En: W.Burggren, S.Ishii. H.
Langer, G. Neuweiler y D-Randall (eds.). Zoophysiology,
Volumen 24. Springer - Verlag Berlin. Pp 201-270.
Guraya S. & R. Chalana. 1976. Histochemical observations on the
seasonal fuctuations in the follicular atresia and interstitial
gland tissue in the House Sparrow ovary. Poult. Sci. 55:
1881 - 1885.
Halse S. 1985. Gonadal cycles and levels of luteinizing hormone
in Wild Spur-winged geese, Plectropterus gambensis. J.
Zool. Lond. (A) 205: 335 - 355.
Kern M. 1972. Seasonal changes in the reproductive system of the
female White-crowned sparrow, Zonotrichia leucophrys
gambelli, in captivity and in the field. I. The ovary.
Z.Zellforsch. Mikrosk. Anat. 126: 297-319.
Kovcs J., V. Forg & P. Pczely. 1992. The fne structure of the
follicular cells in growing and atretic ovarian follicles of
the domestic goose. Cell Tissue Res. 267: 561 - 589.
Madekurozwa M. & W. Kimaro. 2006. A morphological and inmu-
nohistochemical study of healthy and atretic follicles in the
ovary of the sexually inmature Ostrich (Struthio camelus).
Anat. Histol.Embryiol. 35, 253-258.
Maron C. 2007. Caractersticas estructurales y cuantitativas del ciclo
reproductivo femenino en relacin al rgimen alimentario
de Columba maculosa maculosa (Temminck, 1813) (Aves:
Columbidae).Tesina de Grado. Indito. Facultad de Cien-
cias Exactas,Fsicas y Naturales. UNC. 2007.
Nili H. & R.Kelly. 1996. Form and function of lacunae in the ovary
of the laying Hen. Anat.Rec. 244: 165-174.
Nores M. & D.Izurieta. 1980. Aves de ambientes acuticos de
Crdoba y Centro de Argentina. Secretara de Estado de
Agricultura y Ganadera. Academia Nacional de Ciencias
de Crdoba. Pp. 86.
Romeis B. 1928. La coloracin. En: Editorial Labor S.A. Gua
Formulario de Tcnicas Histolgicas. Barcelona - Madrid-
Buenos Aires. Pp. 39-184.
Wallace R. 1985. Vitellogenesis and oocyte growth. En nonmam-
malian vertebrates. In: L. W.Browder, Plenum Press,Eds.
Development biology. Vol 1. New York. Pp. 127-177.
Wight H. 1959. A feld technique for bursal inspection or mourning
doves. J. Wildl. Mgmt. 20 (1): 94 - 95.
310
311

Vocalizaciones de plaTalina genovensium
ISSN 1561-0837
Anlisis de las vocalizaciones del murcilago longirrostro peruano
Platalina genovensium Thomas, 1928 (Chiroptera: Phyllostomidae)
Juan A. Malo de Molina
1
, Sandra Velazco
2
, Vctor Pacheco
2,3
y Juan Carlos Robledo
4
Analysis of vocalizations of Long-snouted Bat Platalina genovensium Thomas,
1928 (Chiroptera: Phyllostomidae)
1 ECONIMA, Consultora Ambien-
tal. Batalla de Bailn, 24, 28400
Madrid, Espaa.
jmalomolina@econima.com
2 Departamento de Mastozoo-
loga, Museo de Historia Natural
UNMSM. Aptdo. 14-0434, Lima
14, Per.
3 Instituto de Ciencias Biolgicas
Antonio Raimondi, Facultad de
Ciencias Biolgicas de la Uni-
Marcos. Lima 1, Per.
4 DBBASICO. Avda. Toledo 31, 3
P, L22. 45600 Talavera de la Reina
(Toledo, Espaa).
Resumen
Se presentan los primeros datos sobre las emisiones acsticas del murcilago longirrostro peruano Platalina
genovensium, siendo este el primer estudio que se publica sobre anlisis de los ultrasonidos emitidos por
murcilagos en el Per. Las emisiones acsticas analizadas fueron grabadas de individuos volando en condi-
ciones de confnamiento dentro de sus propios refugios, en dos localidades relativamente prximas a la ciudad
de Lima. La seal acstica de P. genovensium est compuesta por pulsos de 1,30 ms de duracin media, en
frecuencia modulada, de niveles sonoros extremadamente bajos (aprox. -10 a -35 dB a 1 m de distancia), en
secuencias de 12,90 pulsos/segundo, con ancho de banda promedio de 28,58 kHz, discontinuo, con interpulso
promedio de 67,56 ms y con mxima energa en 89,21 kHz. Presentan adems un armnico en frecuencias
superiores a190 kHz. El uso de la Transformada de Fourier para Seales Discretas y el posterior Anlisis de
la Distribucin de Energa en bandas de frecuencia han permitido establecer una ecuacin predictiva sobre el
tiempo de duracin del pulso en funcin de las bandas 70-80 kHz, 90-100 kHz y 110-120 kHz. Aumentos de
un 4% de la Energa en la banda de 110-120 kHz implican una disminucin de hasta 0,2 ms en la duracin
del pulso, mientras que el mismo aumento en las bandas de 70-80 y 90-100 kHz incrementan 0,1 ms dicha
duracin. Esta ecuacin de prediccin podra ser de utilidad para la identifcacin de la especie, su monitoreo,
y servir de base para conocer cmo P. genovensium adapta la emisin energtica en sus bandas de frecuencia
evitando que pulso y eco se solapen y enmascaren la seal emitida.
Palabras clave: Platalina genovensium, Phyllostomidae, Lonchophyllinae, Emisiones acsticas, Vertiente
occidental del Per, Transformada de Fourier.
Abstract
This paper presents the frst data on vocalizations of the Long-snouted Bat Platalina genovensium. It is also the
frst published study on ultrasound analysis of any bat from Peru. The recordings of vocalizations were obtained
from fying bats while in their roosts. These roosts were found in two locations near the city of Lima. Each
echolocation call was composed of FM fast pulses of 1.30 ms of extremely low intensity (-10 to -35 dB one m
away from the recording device), in sequences of 12.90 pulses per second, with 28.58 kHz bandwidth in aver-
age, discontinuous, average interpulse of 67.56 ms, and an energy peak in 89.21 kHz. The pulses present a
harmonic above 190 kHz. Both, Discrete Fourier Transform and Analysis of the Energy Distribution in frequency
bands were used to obtain a predictive equation. This equation is able to predict duration call for 70-80 kHz,
90-100 kHz, and 110-120 kHz energy frequency bands. So, if 110-120 kHz frequency band increases 4%, then
duration call decreases 0.2 ms, whereas if 70-80 y 90-100 kHz frequency band increases, then duration call also
does it in 0.1 ms. This equation can be used to identify and monitor this species. It also allows us to determine
how P. genovensium adapts its energy frequency bands in order to avoid overlap between pulse and echoes.
Keywords: Platalina genovensium, Phyllostomidae, Lonchophyllinae, Acoustic signals, Western slope of Peru,
Fourier transform.
Introduccin
El murcilago longirrostro peruano Platalina genovensium
es una especie nectarvora de la subfamilia Lonchophyllinae
(Grifth 1982) catalogada en peligro crtico por la legislacin
peruana (Ministerio de Agricultura 2004) y como casi amenazada
por UICN desde el ao 2008 (Pacheco et al. 2008) porque su
poblacin global se encuentra declinando signifcativamente,
aunque se estima que a una tasa inferior al 30% en 10 aos.
UICN reconoce que est prxima a califcar como vulnerable
debido a la extensa y rpida prdida de su hbitat en gran parte
de su rea de distribucin. En su proceso de enrarecimiento se
sealan tambin otros factores como la captura de ejemplares
para su uso en la medicina tradicional (Zeballos-Patrn et al.
2001). En cuanto a su tamao poblacional, se considera una
especie rara; en un hbitat favorable del SW del Per se ha
estimado una densidad poblacional de 0,0684 individuos/km
2
(Sahley 1995, Sahley & Baraybar 1996). La falta ocasional de
alimento por prolongadas sequas u otras razones puede oca-
sionar mortandades o movimientos dispersivos (Graham 1987,
Eisenberg & Redford 1999, Sahley 1995).
Se refugia principalmente en cuevas de dimensin variable.
Se han registrado casos en los que descansa durante el da bajo
cornisas naturales de grandes rocas (M. Aguirre, com. pers.).
Excepcionalmente lo hace tambin en refugios artifciales como
se demuestra en este trabajo. Presentan un sistema complejo de
organizacin dentro de las colonias, donde machos y hembras
preadas se encuentran formando grupos separados (S. Velazco,
com. pers.) con un promedio de 10 individuos por refugio,
aunque se ha reportado un refugio que albergaba alrededor de
50 ejemplares (Sahley & Baraybar 1996).
Esta especie se encuentra a lo largo de la costa comprendida
entre Piura (Per) (Aragn & Aguirre 2007) y Tarapac (Chile)
(Galaz et al. 1999). Su distribucin est vinculada a la presencia
de cactceas como Neoraimondia arequipensis, Corryocactus bre-
vistylus (Aragn & Aguirre 2007), Weberbauerocereus weberbaueri
(Sahley 1995 & 1996) y Stenocereus thurberi (Sahley 2001), de
312
Malo de Molina et al.
las que obtiene su alimento. Para ello, P. genovensium probable-
mente combina sus capacidades olfativa, visual y ecoacstica
para explotar los recursos forales quiropterflos, al igual que
otros murcilagos nectarvoros (von Helversen & von Helversen
1999, von Helversen et al. 2003, Simon et al. 2006).
La subfamilia Lonchophyllinae, a la que pertenece Platalina, fue
separada de Glossophaginae por Grifths (1982) sobre la base de
diferencias linguales que inducen a pensar que ambas subfamilias
han alcanzado el nectarivorismo por rutas evolutivas diferentes; sin
embargo, las afnidades evolutivas y adaptativas con Glossophaginae
son notables, aunque se desconoce si ambas subfamilias presentan
similares seales de ecolocacin (Helversen et al. 2003).
Las vocalizaciones de la familia Phyllostomidae, entre los que
se encuentra el gnero Platalina, se emiten desde las narinas, a
diferencia de la mayora de quirpteros que lo hacen por la boca;
rasgo que es compartido con Megadermatidae, de su mismo
suborden Yangochiroptera, y con Rhinolophidae, Nycteridae e
Hipposideridae del suborden Yinpterochiroptera (Teeling et al.
2002, Vaughan et al. 2010). P. genovensium, al igual que otros
quirpteros, tienen estructuras drmicas en el rea naso-bucal,
como pliegues y proyecciones, que les permiten modular el
ultrasonido (Mergell et al. 1999).
El objetivo de este trabajo es dar a conocer por primera vez
las caractersticas de las vocalizaciones de P. genovensium. Este
estudio es tambin el primero que presenta un anlisis de las
emisiones acsticas de una especie de murcilago en Per. Se
pretende contribuir a facilitar la identifcacin de la especie
emisora a partir de la grabacin y posterior anlisis de sus emi-
siones de ultrasonidos. Esta tcnica, novedosa an en el Per,
se viene aplicando desde hace dcadas en otras regiones aunque
presenta algunas limitaciones (Ahln & Baage 1999, Russo &
Jones 2002). Este estudio se centra en las emisiones durante el
vuelo en condiciones de confnamiento en sus propios refugios.
rea de estudio
El trabajo de campo se realiz durante marzo y octubre de
2010 en las cuencas de los ros Chilln y Chancay, departamento
de Lima, Per (Fig. 1). Ambas se encuentran dentro de la zona
de vida del matorral desrtico subtropical (md-ST) el cual se
ubica entre los 800 y 2100 m. El clima en ambas zonas es rido
y semiclido hasta los 2000 m, con un gradiente de precipitacin
que aumenta con la altitud (Cabrera et al. 2001, Novoa et al.
2005). La temperatura media en la cuenca del ro Chilln es de
18 C con una precipitacin media anual de ms de 125 mm,
cerca de cuatro veces ms de lo que recibe la cuenca del ro
Chancay a similar altitud (36 mm/ao) (Novoa et al. 2005). Al
igual que en las dems cuencas de la costa del Pacfco, el relieve
se caracteriza por ser una hoya hidrogrfca alargada, profunda y
de fuertes pendientes, que se ensancha hacia los valles (Cabrera
et al. 2001). A continuacin se detallan las caractersticas de los
dos refugios evaluados de P. genovensium.
Refugio de Acos
Se localiza en la cuenca del ro Chancay, en el segundo piso
de una vivienda de dos plantas a medio construir con ladrillos
y temporalmente abandonada de la localidad de Acos, distrito
de San Miguel de Acos, provincia de Huaral, departamento
de Lima, Per. El refugio se ubica a 1571 m de altitud, en las
coordenadas 111625.62S; 764916.13W. En las laderas des-
rticas de los cerros circundantes crecen las cactceas columnares
Neoraimondia arequipensis de las que probablemente se alimenta
P. genovensium (Fig. 2). Durante el muestreo del 20 de marzo de
2010 (estacin hmeda) se encontraron 3 ejemplares: un macho
muy joven, posiblemente recin independizado, y un macho
adulto (Fig. 3). El tercero, tambin adulto, no se captur y no
se pudo verifcar su sexo.
Refugio de Santa Rosa de Quives
El segundo refugio se ubica a 1320 m de altitud, con coorde-
nadas 114007.99S y 764645.39W, en la localidad de Santa
Rosa de Quives, distrito de Santa Rosa de Quives, provincia de
Figura 1. Ubicacin de las localidades del estudio de vocalizacin
de Platalina genovensium en el departamento de Lima: 1 = Refugio
de Acos, 2 = Refugio de Santa Rosa de Quives.
Figura 2. Hbitat de Platalina genovensium en una comunidad de
cactceas de Neoraimondia arequipensis en la localidad de Acos,
departamento de Lima.
313

Canta, departamento de Lima, Per. El refugio es una pequea
gruta de unos 5 m de profundidad por 2,5 m de ancho y 4 m de
alto, cuya entrada se encuentra reducida por un portn construi-
do de barro y piedra. La entrada est orientada al oeste junto a
una pequea quebrada seca que desemboca sobre el ro Chilln.
En la evaluacin del 9 de octubre de 2010 se encontraron dos
ejemplares, ambos machos adultos.
Material y mtodos
En este trabajo se describen los anchos de banda, duracin
de pulso, picos de frecuencia e interpulsos de las seales acs-
ticas. Se demuestra que las bandas de frecuencia consideradas
estn relacionadas con la duracin del pulso. La distribucin en
frecuencias de la energa puede resultar til como herramienta
a la hora de identifcar la especie debido a la relacin de estas
con las adaptaciones discriminatorias de la seal (Signal Overlap
Zone (SOZ) y Distance Of Focus (DOF)) y por lo tanto con la
adaptacin evolutiva de cada especie a su hbitat.
Grabacin de las seales de ultrafrecuencia
Una vez localizados los refugios, estos fueron inspeccionados
para verifcar que no residan otras especies cuyas emisiones
pudiesen confundirse con las de P. genovensium. Se tomaron
grabaciones en el interior del refugio durante un perodo de 20
minutos, evitando prolongar el tiempo para no estresar a los
individuos. En el refugio de Acos se obtuvieron unas 30 graba-
ciones pero en general resultaron defcientes por la baja presin
sonora de emisin de las vocalizaciones, de modo que solo se
aprovecharon 12 pulsos a efectos de este estudio. En Santa Rosa
de Quives se obtuvieron 200 pulsos de sufciente calidad como
para ser estudiados.
Las grabaciones se realizaron en horario diurno y crepuscular.
En el curso del estudio se comprob que en horas diurnas P.
genovensium es muy reacio a abandonar el refugio incluso aunque
se sienta seriamente amenazado en su interior. No obstante, para
realizar algunas de las grabaciones se cerraron todas las posibles
salidas con redes de neblina asegurando que no se produjeran
escapes que habran sido tan perjudiciales para la obtencin
de registros sonoros como para la propia supervivencia de los
murcilagos.
Para la deteccin de las emisiones se utiliz un detector Pet-
tersson D240x, el cual permite su uso en funcin heterodina y
de expansin de frecuencia. Para este estudio se utiliz en primer
lugar la funcin heterodina para asegurarse de que no existieran
otros quirpteros ocultos en grietas del refugio, cuyas emisiones
pudiesen interferir con las de P. genovensium; mientras que se
aplic la expansin de frecuencia para la grabacin y el anlisis
de vocalizaciones. Cada secuencia de ultrasonido registrada en
expansin de frecuencia se grab con una TASCAM DR-08
confgurada en PCM wav 44,1 kHz/16 bits/mono, cumpliendo
las especifcaciones del fabricante del detector. El procedimiento
es muy similar al empleado en muchos estudios con equipos de
similares condiciones (e.g. Russo & Jones 2002). Para ello, se
grabaron 41 secuencias de sonido de 1,7 y de 3,4 segundos, y se
expandieron a 17 y 34 segundos respectivamente para examinar
y medir con precisin sus caractersticas tras refejarlas grfca-
mente en un sonograma.
Anlisis
Las grabaciones fueron analizadas con los programas
BatSound y Audacity. Se seleccionaron las de mejor calidad y
se analizaron los siguientes parmetros: Descripcin del pulso,
descripcin de la secuencia de pulsos, frecuencia de mxima
energa, duracin del pulso e interpulso (tiempo entre pulsos)
(Tablas 1 y 2).
Figura 3. Dos ejemplares de murcilago longirrostro peruano,
Platalina genovensium en el refugio de Acos. A la izquierda macho
subadulto, con coloracin gris plomo, y a la derecha ejemplar adulto,
probablemente macho, de color pardo.
Promedio
Intervalo de
Confanza (95 % )
Mediana Mnimo Mximo Rango InterCuartil
Frecuencia de mxima energa (kHz) 89,21 88,66 - 89,75 89,42 86,90 91,20 1,91
Duracin (ms) 1,30 1,25 - 1,34 1,30 1,10 1,50 0,10
Ancho de banda (kHz) 28,58 27,86- 29,29 28,41 26,12 32,18 2,11
Interpulso (ms) 67,56 52,93-99,08 55,97 32,46 138,61 31,73
Pulsos por segundo (N/s) 12,90 5,65-20,15 13,54 6,41 28,49 8,29
Tabla 1. Anlisis descriptivo de las frecuencias que componen la seal acstica de Platalina genovensium: Promedio, Intervalos de Confanza
con un nivel de signifcancia de 0,05, Mediana, Mnimo y Mximo y Rango entre Cuartil 25 y Cuartil 75.
314
Muchos de los pulsos grabados se utilizaron para verifcar
ritmos (duracin del pulso e interpulso); mientras que se realiz
una seleccin de los de mejor calidad con el fn de medir en
cada uno de ellos los parmetros indicados. En la seleccin se
tuvo en cuenta la posibilidad de que modifquen levemente sus
frecuencias cuando coexisten dos o ms individuos en un espacio
en el que sus emisiones pueden interferir (Airas 2003). De hecho,
en este estudio se comprob que las emisiones simultneas de
dos ejemplares de P. genovensium se pueden diferenciar entre s
levemente tanto en estructura como en frecuencia.
Se analiz la seal de P. genovensium con la aplicacin Mat-
lab 7.7., calculndose la Transformada de Fourier mediante el
algoritmo:

dt e t x F X
Ft
=
2
) ( ) (
Las Energas por bandas de Frecuencia de la seal se calcula-
ron mediante la Ecuacin de Paserval (Oppenheim & Schafer
1999) para las bandas de frecuencias < 50Khz, entre 50-60
kHz, entre 50-60 kHz, entre 60-70 kHz, entre 70-80 kHz,
entre 80-90 kHz, entre 90-100 kHz, entre 100-110 kHz, entre
110-120 kHz, entre 120-130 kHz y > 130 kHz. El Teorema de
Paserval relaciona la energa de la seal en el dominio temporal
y frecuencial de la forma:

dF F X dt t x E
x
2 2
) ( ) (

Los intervalos entre pulsos y la duracin del pulso fueron
determinados usando el oscilograma. Mximos y mnimos
de frecuencias en la seal fueron determinados para el clculo
del ancho de banda utilizando el pico de frecuencia de la serie
como mximo y el mnimo el valor por debajo de 15 dB con
el fn de eliminar el efecto del ruido de fondo y la distancia a P.
genovensium (Surlykke & Moss 2000).
Los datos en porcentajes por bandas de frecuencias se analiza-
ron previamente para identifcar el ruido de fondo descartndose
aquellos valores defnidos como atpicos:
UBV + 1,5*(UBV-LBV)
Siendo UBV el valor de la media ms el cuartil 75%, LBV la
media menos el cuartil 25% y 1,5 el coefciente outlier o valor
atpico (Tukey 1977).
El anlisis estadstico sigui dos objetivos; el primero, la carac-
terizacin de una seal tpica y representativa de P. genovensium
a travs de la distribucin frecuencial de su energa, anchos de
banda, picos de frecuencia, duracin del pulso y tiempo de
interpulsos. El segundo objetivo fue analizar la distribucin en
frecuencias de la energa como herramienta causal en el tiempo
de duracin del pulso. Los murcilagos acortan la duracin del
pulso cuando se aproximan al objetivo como consecuencia de
optimizar la Signal Overlap Zone (SOZ) (Jones & Holderied
2007) por lo que la distribucin en frecuencias de la energa po-
dra ser un indicador de dicha adaptacin. Las variables asociadas
al anlisis descriptivo de la seal de murcilagos no cumplen,
segn diversos autores, el supuesto de normalidad (Ratclife &
Dawson 2003). Con el objeto de cumplir con dicho supuesto se
transformaron los datos de porcentajes con la raz cuadrada y la
duracin del pulso mediante la transformacin logartmica (Zar
1999). Posteriormente se valor la normalidad mediante el Test
de Shapiro-Wilk (Shapiro et al. 1968). Finalmente, se utiliz
un anlisis de regresin por pasos para determinar qu bandas
de frecuencia estaban relacionadas con la duracin del pulso.
Resultados
La seal emitida por P. genovensium es de tipo modulado,
variando las amplitudes de la misma en intervalos de tiempo
muy breves con interpulsos de duracin variable (Fig. 4). Estas
vocalizaciones registradas tienen en comn la presencia de
armnicos emitidos a partir de 190 kHz hacia frecuencias ms
elevadas. Cada uno de los pulsos pueden descomponerse en
una serie de armnicos distribuidos en el rango de frecuencias
comprendidas entre 50 y 120 kHz, teniendo como consecuencia
un sonograma caracterstico (Fig. 5).
El rango de frecuencias de los pulsos de P. genovensium es una
variable de escaso inters porque depende de las condiciones
de grabacin. En condiciones ptimas puede extenderse en un
rango de 25-225 kHz pero con el aumento de la distancia se
pierden rpidamente las altas frecuencias y tambin aquellas
frecuencias asociadas a los niveles de presin sonora ms bajas.
Intervalos de
Frecuencia (kHz)
Test Shapiro-Wilk
N
seales
Media
(%)
Mediana
(%)
Intervalo de
Confanza (95%)
Mn. (%) Mx. (%)
Desviacin
Estndar
Cuartil
Superior
<50 W=0,90678, p<0,0554 20 1,86 1,63 (1,39- 2,33) 0,65 4,41 1,01 2,28
50 a 60 W=0,95431, p<0,4373 20 3,23 3,11 (2,73- 3,74) 1,47 6,13 1,08 4,00
60 a 70 W=0,93297, p<0,1761 20 3,67 3,35 (3,15- 4,19) 2,06 6,32 1,11 4,36
70 a 80 W=0,82480, p<0,061 20 5,56 4,66 (4,38- 6,74) 3,04 12,26 2,52 6,22
80 a 90 W=0,93252, p<0,1726 20 42,42 44,46 (39,53- 45,32) 28,26 52,11 6,19 46,30
90 a 100 W=0,96615, p<0,6724 20 27,11 27,61 (22,79- 31,43) 10,41 44,51 9,23 32,14
100 a 110 W=0,95888, p<0,5218 20 9,89 9,07 (8,67- 11,10) 5,89 15,43 2,60 11,86
110 a 120 W=0,95687, p<0,4833 20 4,24 4,09 (3,90- 4,57) 3,09 5,61 0,72 4,87
120 a 130 W=0,96387, p<0,6238 20 0,25 0,26 (0,21- 0,29) 0,12 0,41 0,08 0,32
>130 W=0,95519, p<0,4527 20 1,77 1,74 (1,68 1,87) 1,48 2,16 0,20 1,92
Tabla 2. Anlisis descriptivo de la Distribucin de Energa por Bandas de Frecuencia en porcentajes (%) para la seal acstica de Platalina
genovensium. Test de Shapiro-Wilk para la comprobacin de la asuncin de Normalidad, Media, Mediana, Intervalos de Confanza con un
nivel de signifcancia de 0,05, Mediana, Mnimo y Mximo, Desviacin estndar y Rango entre Cuartil 25 y Cuartil 75.
315

La seal de Platalina genovensium tiene una duracin media
de 1,3 segundos (Fig. 6) . Las frecuencias en las cuales los coef-
cientes de Fourier presentan amplitudes mximas son 60, 90 y
110 kHz como puede observarse en la Figura 7, lo que demuestra
la modulacin de la seal por parte de Platalina genovensium
frente a otras especies que emiten en frecuencias constantes.
Las Figuras 6 y 7 presentan distintos aspectos de un pulso
caracterstico de P. genovensium. Para la caracterizacin de la seal
se ha utilizado la muestra que ms se correlaciona con los valores
de la mediana (Muestra 1, r=0,999) con el fn de defnir la seal
ms caracterstica. Por otro lado, las Tablas 1 y 2, y la Figura 8
sintetizan los resultados obtenidos en el anlisis de los pulsos.
Se han obtenido valores medios de duracin de la seal de 1,3
ms, con interpulsos en intervalos de 67,56 ms y valores mximos
de energa a 89,21 Hz (Tabla 1). La comprobacin de los Test
de Normalidad (Shapiro-Wilk) para la distribucin de energas
en la seal permite utilizar indiscriminadamente la media o la
mediana para la interpretacin de la distribucin de la energa
con el fn de poder comparar su seal con la de otras especies
en trabajos posteriores (Tabla 2).
Figura 4. Sonograma que muestra la Secuencia de pulsos caracterstica de Platalina genovensium. Se aprecian interpulsos de duracin variable.
Figura 5. Sonograma que muestra las bandas de frecuencia en un pulso caracterstico de Platalina genovensium.
Figura 6. Oscilograma correspondiente a un pulso caracterstico
de la seal de Platalina genovensium. La duracin de la seal es
1,300,05 ms.
316
Relacin energa en bandas de frecuencia con el tiempo
de duracin de la seal
Al analizar mediante el Anlisis de Regresin Forward se
comprob que la dependencia entre los residuos no tenan co-
linealidad mediante el Test de Durban-Watson (d= 2,44) entre
las variables consideradas.
Los resultados del Modelo de Regresin indican que existe
una relacin signifcativa entre la concentracin de energa en
las bandas de frecuencia 80 90, 90 100 y 110 120 kHz
(F= 5,451; p<0,00893; R= 0,71; R= 0,51) y la duracin del
pulso, resultando la ecuacin predictiva observada en la Figura 9.
La mayor contribucin a las variaciones en la duracin del
pulso se debe a la banda de frecuencia 110 120 kHz. Un
incremento energtico en esta banda de frecuencia implicar
una disminucin en la duracin del pulso en P. genovensium.
A medida que aumenta la concentracin de energa en la
banda de frecuencia 110 120 kHz, P. genovensium estara
reduciendo el tiempo de duracin del pulso y a su vez la Signal
Overlap Zone (SOZ) corrigiendo los posibles errores introducidos
por el eco de la seal conforme con la Teora Distance Of Focus
(DOF) (Holderied et al. 2006).
Figura 7. Espectrograma de la seal discreta de Platalina genovensium mediante la Transformada de Fourier en tiempo discreto (DTFT) de
F/2 a F/2. Se puede observar cmo aparecen armnicos en frecuencias prximas a los 220 kHz con un aumento en la amplitud de la seal.
kHz
<50 50-60 60-70 70-80 80-90 90-100 100-110 110-120 120-130 >130
0
10
20
30
40
50
Figura 8. Representacin de la Media Desviacin Estndar y Media Error Estndar. Como puede observarse en la fgura la Concentracin
de la Energa se centra entre 80 kHz y 100 kHz, representando prcticamente el 70% de la Energa de la seal de Platalina genovensium.
t = 1,143 + 0,0196 * (E
70-80 kHz
) + 0,0106 * (E
90-100 kHz
) 0,0559 * (E
110-120 kHz
)
(0,16) (0,011) (0,0031) (0,021)

Figura 9. Ecuacin predictiva del tiempo de duracin del pulso a travs de los porcentajes de energa en las bandas de frecuencia signifcativas
del modelo (70-80, 90-100 y 110-120), error standard de intercepto y de los coefcientes predictivos de la regresin.
317

Discusin
Al igual que sucede en otras especies simptricas de la familia
Phyllostomidae grabadas en Lima, como Glossophaga soricina
o Artibeus fraterculus (J. A. Malo de Molina, com. pers.), las
emisiones sonoras de P. genovensium son de presin sonora ex-
tremadamente dbil, concordando con lo publicado para otros
miembros de la familia Phyllostomidae (Fenton et al. 1992),
como los glossofaginos que presentan emisiones sonoras muy
breves (0,5-3 ms) y dbiles, as como multiarmnicas, de banda
ancha y frecuencia modulada (von Helversen et al. 2003). En
consecuencia, P. genovensium no es detectable con el equipo
utilizado en este trabajo a ms de 3 m de distancia, mientras
que en el mismo entorno y condiciones, especies insectvoras
como Tadarida brasiliensis, por ejemplo, son ntidamente regis-
trables a distancias de 40 m o incluso superiores (J. A. Malo de
Molina, com. pers.). No obstante, la posibilidad de discriminar
la seal acstica de Platalina genovensium de la de otras especies
ser especialmente til en prospecciones con grabaciones no
presenciales y en otras situaciones en que no se pueda identif-
car la especie de visu. Para que esto sea factible sern necesarios
ulteriores estudios para caracterizar las vocalizaciones de especies
simptricas estableciendo criterios de discriminacin acstica.
Es de esperar que la subfamilia Lonchophyllinae muestre
una menor dependencia de la ecolocacin que las especies
insectvoras, como Bogdanowicz el al. (1997) sugiri para los
Glossophaginae, constituida tambin por especies bsicamente
nectarvoras. Afrmacin basada en el hecho que muchas especies
de la familia Phyllostomidae localizan sus recursos alimenticios
principalmente con el olfato y la visin en horario crepuscu-
lar, reservando la ecolocacin para la aproximacin fnal a la
for (Korine & Kalko 2005, von Helversen & von Helversen
2003). Esto, adems de la escasa presin sonora de emisin en
etapas preliminares de este estudio, podra justifcar los escasos
y defcientes registros que se obtuvieron para P. genovensium en
condiciones de no confnamiento. Estas difcultades se muestran
en muchas especies de flostmidos y fueron ya descritas por
Grifn (1958), lo que induce a estudiar sus vocalizaciones en
laboratorio (Macas et al. 2006). Howell (1974) describe cmo
muchos flostmidos, a los que denominaban murcilagos su-
surrantes, whispering bats, emiten seales con intensidades 50
veces menores que las especies insectvoras.
En contraste con los murcilagos de la familia Molossidae, el
conocimiento acstico de los murcilagos de la familia Phyllos-
tomidae an es limitado, por la difcultad de registrar las bajas
intensidades y las altas frecuencias de sus seales de ecolocacin
emitidas en frecuencia modulada (Kalko 2004). No obstante,
se tiene informacin de algunas especies, por ejemplo Desmodus
rotundus (Schmidt et al. 1991), Carollia perspicillata (Koay et
al. 2003, Sterbing 2002), los gneros Lophostoma, Micronycteris,
Chiroderma, Artibeus (Kalko 2004, Jennings et al. 2004) y Glos-
sophaga, Anoura y Leptonycteris (Howell 1974, von Helversen
et al. 2003). A ellos se aade Platalina en el presente estudio.
Agradecimientos
Nuestro agradecimiento a Catherine Sahley por la mejora en
la preparacin del abstract. Un especial reconocimiento a Kathrin
Barboza por sus comentarios y sugerencias, y a un rferi annimo
por revisar el manuscrito del presente trabajo.
Literatura citada
Ahln I. & H.J. Baage. 1999. Use of ultrasound detectors for bat studies
in Europe: experiences from feld identifcation, surveys, and
monitoring. Acta Chiropterologica 1 (2): 137-150.
Airas M. 2003. Echolocation in bats. In: Proceedings of spatial sound
perception and reproduction. The postgrad seminar course
of HUT Acoustics Laboratory. Pp 1-25.
Aragn G. & M. Aguirre. 2007. Conservacin, distribucin y densi-
dad poblacional de Platalina genovensium (Thomas, 1928)
en las Lomas del Morro Sama, distrito de Sama, Provincia
de Tacna. Zonas ridas 11 (1): 219-232.
Bogdanowicz W., R. D. Csada & M. B. fenton. 1997. Structure
of noseleaf, echolocation, and foraging behavior in the
Phyllostomidae (Chiroptera). Journal of Mammalogy
78(3): 942-953.
Cabrera C., R. Villanueva, M. Espino et al. 2001. Anlisis integrado
de trabajo de Campo, aplicado a la cuenca media y baja del
ro Chilln, Lima. Revista del Instituto de Investigacin de
la Facultad de Ingeniera Geolgica, Minera, Metalrgica
y Geogrfca 4(7): 7-12.
Eisenberg J.F. & K.H. Redford. 1999. Mammals of the Neotropics:
The Central Neotropics. The University of Chicago Press,
Chicago, USA.
Fenton M.B., D. Acharya, M.B.C. Audet, et al. 1992. Phyllostomid
bats (Chiroptera: Phyllostomidae) as indicators of habitat
disruption in the Neotropics. Biotropica 24(3): 440-446.
Galaz J.L., J.C. Torres Mura & J. Yez. 1999. Platalina genoven-
sium (Thomas, 1928), un quirptero nuevo para la fauna
de Chile (Phyllostomatidae: Glossophaginae). Noticiario
Mensual del Museo Nacional de Historia Natural (Chile)
337: 6-12.
Graham G. L. 1987. Seasonality of reproduction in Peruvian bats. In:
B. D. Patterson and R. M. Timm. (eds.), Studies in Neotro-
pical mammalogy. Essays in honor of Philip Hershkovitz.
Fieldiana: Zoology New Series 39: 173186.
Griffn D. R. 1958. Listening in the dark. New Haven, Yale Uni-
versity Press.
Griffths T. A. 1982. Systematics of the New World nectar-feeding
bats (Mammalia, Phyllostomidae) based on the morpho-
logy of the hyoid and lingual regions. American Museum
Novitates 2742:145.
Holderied M. W., G. Jones & O. Von Helversen. 2006. Flight and
echolocation behaviour of whiskered bats commuting
along a hedgerow: range-dependent sonar signal design,
doppler tolerance and evidence for acoustic focussing. The
Journal of Experimental Biology 209: 1816-1826.
Howell D.J. 1974. Acoustic behavior and feeding in Glossophagine
bats. Journal of Mammalogy 55 (2): 293-308.
Jennings N. V., V. S. Parsons, K. E. Barlow & M.R.Gannon. 2004.
Echolocation calls and wing morphology of bats from the
West Indies. Acta Chiropterologica 6: 75-90.
Jones G. & M.W. Holderied. 2007. Bat echolocation calls: adapta-
tion and convergent evolution. Proceedings of the Royal
Society B 274: 905-912.
Kalko E.K.V. 2004. Neotropical leaf-nosed bats (Phyllostomidae):
Whispering bats as candidates for acoustic surveys?. In:
Brigham M, Jones G, Kalko EKV (eds) Proceedings of a
workshop on identifcation and acoustic monitoring of bats.
Bat Conservation International, Austin, Texas, pp 63-69.
Koay G., R.S. Heffner, K.S. Bitter & H.E. Heffner. 2003. Hearing
in American leaf-nosed bats. II : Carollia perspicillata.
Hearing Research 178: 27-34.
Korine K. & E. K. V. Kalko. 2005. Fruit detection by small fruit-
eating bats (Phyllostomidae): echolocation call design
and olfaction. Behavioral Ecology and Sociobiology 59
(1): 12-23.
318
Macas S., E. Mora, A. Garca & Y. Macas. 2006. Echolocation be-
havior in Brachyphylla nana (Chiroptera: Phyllostomidae)
under laboratory conditions. Caribbean Journal of Science
42 (1): 114-120.
Mergell P., W. T. Fitch & H. Herzel. 1999. Modeling the role of
nonhuman vocal membranes in phonation. Journal of
Acoustical Society of America 105(3): 20202028.
Ministerio de Agricultura. 2004. Decreto Supremo No. 034-2004-
AG. El Peruano. Pp: 276853-276855.
Novoa S., A. Ceroni & C. Arellano. 2005. Contribucin al cono-
cimiento de la fenologa de Neoraimondia arequipensis
ssp. roseifora (Werdermann y Backeberg) Ostolaza (Cac-
taceae) en el valle del ro Chilln, Lima-Per. Ecologa
Aplicada: 4(1-2): 35-40.
Oppenheim A. & R. Schafer. 1999. Discrete-Time Signal Processing.
2nd Edition. Prentice-Hall, New Jersey.
Pacheco V., L. Aguirre & H. Mantilla. 2008. Platalina genovensium.
In: IUCN 2010. IUCN Red List of Threatened Species.
Versin 2010.4. <www.iucnredlist.org>. [Acceso 29 de
Noviembre del 2010].
Ratcliffe J. M. & J.W. Dawson. 2003. Behavioural fexibility: the
little brown bat, Myotis lucifugus, and the northern long-
eared bat, M. septentrionalis, both glean and hawk prey.
Animal Behaviour 66: 847856.
Russo D. & G. Jones. 2002. Identifcation of twenty-two bat species
(Mammalia: Chiroptera) from Italy by analysis of time-
expanded recordings of echolocation calls. Journal of
Zoology, London 258 (91-103).
Sahley C.T. 1995. Bat and hummingbird pollination of two species
of columnar cacti: effects on fruit production and pollen
dispersal. Thesis, Doctor of Philosophy. University of
Miami, USA. 126 pp.
Sahley C.T. 1996. Bat and hummingbird pollination of an autote-
traploid columnar cactus, Weberbauerocereus weberbaueri
(Cactaceae). American Journal of Botany 83(10):1329-
1336.
Sahley C.T. 2001. Vertebrate pollination, fruit production and po-
llen dispersal of Stenocereus thurberi (Cactaceae). The
Southwestern Naturalist 46 (3) 261-271.
Sahley C. T. & L. Baraybar. 1996. Natural History of the long-
snouted bat, Platalina genovensium (Phyllostomidae:
Glossophaginae) in Southwestern Per. Vida Silvestre
Neotropical 5(2): 101-109.
Shapiro S.S., M. B. Wilk & H. J. Chen. 1968. A comparative study
of various tests of normality. Journal of the American
Statistical Association 63: 1343-1372.
Simon R., M. W. Holderied & O. von Helversen. 2006. Size dis-
crimination of hollow hemispheres by echolocation in a
nectar feeding bat. The Journal of Experimental Biology
209: 3599-3609.
Surlykke A. & C.F. Moss. 2000. Echolocation behavior of big brown
bats, Eptesicus fuscus, in the feld and the laboratory. Jour-
nal of the Acoustical Society of America 108: 2419-2429.
Schmidt U. P., Schlegel, H. Schweizer & G. Neuweiler. 1991.
Audition in vampire bats, Desmodus rotundus. Journal of
Comparative Physiology A 168: 45-51.
Sterbing S. J. 2002. Postnatal development of vocalizations and
hearing in the phyllostomid bat, Carollia perspicillata.
Journal of Mammalogy 83: 516-525.
Teeling E.C., O. Madsen, R.A. van den Bussche, et. al. 2002.
Microbat paraphyly and the convergent evolution of a
key innovation in Old World rhinolophoid microbats.
Proceedings of the National Academy of Sciences of the
USA. 99: 1431-1436.
Tukey J. 1977. Exploratory Data Analysis, Addison-Wesley.
Vaughan T. A., J.M. Ryan, J. Nicholas & N.J. Czaplewski. 2010.
Mammalogy. Jones y Bartlett Learning. 750 pp.
Von Helversen D. & O Von Helversen. 1999. Acoustic guide in bat-
pollinated fower. Nature 398: 759-760.
Von Helversen D. & O. Von Helversen. 2003. Object recognition by
echolocation: a nectar-feeding bat exploiting the fowers
of a rain forest wine. Journal of Comparative Physiology
A. 189:327-336.
Von Helversen D., M. Holderied & O. Von Helversen. 2003. Echoes
of bat-pollinated bell-shaped fowers: conspicuous for
nectar-feeding bats?. Journal of Experimental Biology
206: 1025-1034.
Zar J. H. 1999. Biostatistical analysis. 4th edition. Prentice Hall,
Englewood Cliffs, New Jersey. 663 pp.
Zeballos-Patrn H., V. Pacheco & L. Baraybar. 2001 (2002). Diver-
sidad y conservacin de los mamferos de Arequipa, Per.
Revista Peruana de Biologa 8(2): 94-104.
319

Nuevos registros de asteroideos (Echinodermata: Asteroidea) de Per
ISSN 1561-0837
Tres nuevos registros de asteroideos (Echinodermata: Asteroidea)
de Per
Yuri Hooker
1,2
y Francisco A. Sols-Marn
3
Three new records of asteroids (Echinodermata: Asteroidea) from Peru
(1) Laboratorio de Biologa Marina,
Facultad de Ciencias y Fisiologa,
Heredia. Av. Honorio Delgado 430,
Urb. Ingeniera, S.M.P. Lima - Per.
Email: hookery@yahoo.com
(2) Unidad Marino Costera, Servicio
Nacional de reas Naturales Pro-
tegidas por el Estado (SERNANP),
Ministerio del Ambiente, Per.
(3) Coleccin Nacional de Equi-
nodermos, Instituto de Ciencias
del Mar y Limnologa, Universidad
Nacional Autnoma de Mxico.
Resumen
En el presente trabajo se registran 3 nuevos asteroideos (Echinodermata: Asteroidea) de aguas someras
(4 - >50 m) para el Per: Astropecten regalis Gray, 1840, Paulia horrida Gray 1840 y Meyenaster gelatinosus
(Meyen, 1834). Astropecten regalis se conoca desde el Golfo de California hasta Panam, en el presente
trabajo, se ampla su distribucin hasta Mncora, Per. La distribucin geogrfca de Paulia horrida era cono-
cida desde Baja California, hasta Isla Cocos, Costa Rica, en este estudio se ampla su distribucin geogr-
fca hasta Punta Sal, Per. A Meyenaster gelatinosus se le conoca solo de Chile, en el presente trabajo se
registra y confrma su presencia en el Per, ampliando su distribucin norte hasta San Juan de Marcona. Se
proporciona informacin morfolgica de las especies, caractersticas del hbitat y fotografas in situ y de los
especmenes recin recolectados.
Palabras clave: nuevos registros, estrellas de mar, Per.
Abstract
The aim of this work is to present three new shallow water (4 - >50 m) records of asteroids (Echinodermata:
Asteroidea) for the Peruvian fauna: Astropecten regalis Gray, 1840, Paulia horrida Gray 1840 and Meyenaster
gelatinosus (Meyen, 1834). Astropecten regalis geographical distribution is known that ranges from Gulf of
California to Panama, this discovery extends its distribution to Mancora, Peru. Paulia horrida is known from
Baja California to Isla Cocos, Costa Rica, and this record extends its southern distribution limit to Punta Sal,
Peru. Meyenaster gelatinosus was considered endemic to Chilean waters, however, this record confrm its
presence in Peru extending its northern distribution limit to San Juan de Marcona, Peru. Morphological and
habitat information on this four species is provided, together with live pictures.
Keywords: new records, sea star, Peru.
Introduccin
Los equinodermos, a pesar de su gran importancia ecolgica,
son un grupo poco estudiado en el Per. Los trabajos de Clark
(1910), Madsen (1956), Hooker et al. (2005), Paredes y Gamarra
(2006) y Prieto (2010) son publicaciones donde se tratan a los
equinodermos del Per desde el punto de vista taxonmico y
ecolgico. Otros autores han registrado algunas especies re-
colectadas en aguas peruanas durante cruceros o investigaciones
en reas geogrfcas amplias (Aggassiz 1881, Deichmann 1941,
1958, Bluhm & Gebruk 1999).
El conocimiento de la diversidad de estrella de mar en un
ecosistema o rea geogrfca es de relevancia pues son especies
clave en las comunidades tanto de sustratos duros como blandos
y en toda la gradiente batimtrica de los ocanos. Howell et al.
(2003) los clasifca en 3 grupos trfcos: suspensvoros, depre-
dadores/carroeros y sedimentvoros. La mayora de estrellas de
mar son carnvoras y pueden ser los mayores depredadores en
algunos hbitats (Gil & Zaixso 2008, Himmelman et al. 2005).
Los nuevos registros de asteroideos para el Per se constituyen
como un importante aporte al conocimiento de la biodiversidad
de equinodermos del mar peruano y componentes importantes
de la estructura comunitaria a las que pertenecen, contribuyendo
adems a la mejor comprensin biogeogrfca del Pacfco Ori-
ental tropical y del Pacfco Sur Oriental templado.
Material y mtodos
Se realizaron colectas directas por medio de buceo SCUBA y
utilizando artes de pesca. Los especmenes fueron fotografados
in situ, tomando el dato batimtrico por medio de un com-
putador de buceo. La recolecta fue directa, transportndose los
especmenes vivos hasta el laboratorio de campo. Un espcimen
de Astropecten regalis fue colectado con red de arrastre de playa
(chinchorro) y otro fue encontrado varado en la playa. Todos los
especmenes, excepto Paulia horrida, fueron fjados en formalina
neutralizada por 24 horas, enjuagados y desecados al medio am-
biente y posteriormente en estufa. P. horrida fue directamente
fjada en alcohol al 96% y conservada de manera permanente
en alcohol al 70%. Los especmenes se encuentran depositados
en la Coleccin de Zoologa Acutica (CZA) de la Universidad
Peruana Cayetano Heredia y en IMARPE. La medida R o radio
mayor proporcionada fue tomada desde el centro del disco del
espcimen hasta la punta del brazo ms largo.
Todos los especmenes fueron recolectados por el autor, ex-
cepto un ejemplar de Meyenaster gelatinosus que fue recolectado
por el Blgo. Marco Rios.
Resultados
Se registra por primera vez para el Per a Meyenaster gelatinosus
(Meyen, 1834), Paulia horrida Gray 1840, Astropecten regalis
Gray, 1840 y Luidia superba Clark, 1917.
Clase asteroidea
orden Paxillosida Perrier, 1884
Familia astroPeCtinidae Gray, 1840
Astropecten regalis Gray, 1840
Figura 1
Material examinado: 2 especmenes: 1 espcimen (CZM-
58), R= 51 mm, recolectado en Isla del Amor, manglares de
tumbes (32920,67S 802314,85W) y 1 espcimen (CZM-
320
Hooker & Sols-Marn
Figura 1. Astropecten regalis: A. Espcimen vivo en regeneracin (CZM-58); B. Espcimen desecado (CZM-59); C. Placas speromargina-
les; D. Superfcie abactinal del brazo; E. Placas nferomarginales y surco ambulacral; F. Madreporito rodeado de espinas paxilares; G. Boca,
espinas orales y ambulacros.
321

59), R= 53 mm, encontrado varado en Mncora (4636,95S
81355,60W).
Caracteres diagnsticos: Cuerpo plano, brazos cortos y
anchos, ligeramente constrictos hacia la base, ensanchndose
ligeramente y luego adelgazndose homogneamente hasta el
extremo. Discos y brazos cubiertos completamente por espinas
paxilares romas, con 1 a 8 grnulos en la parte central y rodeada
por ms de 12 espinillas marginales. Placas speromarginales
cubiertas por grnulos redondos, varios de ellos ms grandes,
formando una fla. Placas nferomarginales planas, cubiertas por
grnulos planos, y a uno de sus lados y en el margen externo,
una fla de espinas aplanadas. Borde de las placas marginales
con grandes espinas planas con puntas aguzadas. Madreporita
esfrica, con tabiques longitudinales.
Color: Anaranjado intenso en vida, especmenes secos
amarillentos.
Hbitat: En fondo arenoso, cerca del intermareal. Se le
menciona como fauna acompaante de la pesca de arrastre de
langostino en Per (hasta unos 50 m de profundidad).
Distribucin: Conocida del Golfo de California hasta Pan-
am (Caso 1979). Se ampla su distribucin hasta Mncora,
Per.
orden ValVatida Perrier, 1884
Familia asterodisCididae rowe, 1977
Paulia horrida Gray 1840
Figura 2
Material examinado: 1 espcimen (CZM-62) R= 84 mm,
recolectado en Punta Sal (035632S 805646,3O) a 33
m de profundidad.
Caracteres diagnsticos: Disco bien desarrollado y poco
elevado, regin ventral aplanada; con 5 brazos anchos, trian-
gulares. Fuertes espinas cnicas cubren la superfcie abactinal
(aboral), las placas abactinales con numerosos poros a travs de
los cuales salen las ppulas. Superfcie actinal con placas actinales
teseladas, cada una con una protuberancia rodeada por pequeos
grnulos. Placas speromarginales con grandes espinas esfricas
distintivas de la especie (Figura 3B). Surco ambulacral estrecho,
las placas interambulacrales tienen una hilera de espinas internas
pequeas, digitiformes, varias en cada placa, y una serie externa
de espinas ms grandes, dos en cada placa.
Color: en vida es rojo bermelln intenso.
Hbitat: se le ha encontrado sobre un arrecife rocoso a 33 m
de profundidad, con abundantes plipos de corales ahermatpi-
cos y depsitos de sedimento orgnico.
Distribucin: Se le conoca de Punta Santa Elena, Ecuador
y en las Islas Galpagos (Clark 1910), tambin en Todos Santos
(Baja California), Isla Cocos e Isla Clarin (A. M. Clark 1993),
se ampla su distribucin hasta Punta Sal, Per.
orden ForCiPulatida Perrier, 1884
Familia asteriidae Gray, 1840
Meyenaster gelatinosus (Meyen, 1834)
Figura 3
Material examinado: 2 especmenes: 1 espcimen (UPCH
CZM-56) R= 141 mm, recolectado el 5 de diciembre del 2008
en el islote El Avin, San Juan de Marcona (152326,02S -
751045,02W) a 19 m de profundidad; 1 espcimen, R= 185
mm, recolectado en Punta Picata, Tacna, en el 2006 (Recolector:
Marco Ros).
Caracteres diagnsticos: 5 o 6 brazos (comnmente 6).
Esqueleto abactinal (aboral) reticulado, poco calcifcaco. Brazos
con una fla de espinas carinales a lo largo del radio y dos flas de
espinas marginales, todas bien desarrolladas. Espinas rodeadas
de grandes cojines de pedicelarios, abundantes y minsculos.
Poros papulares grandes, reunidos en grupos; ppulas bien
desarrolladas.
Color: blanco amarillento en vida, tambin desecadas. Un
juvenil observado present color marrn-ocre.
Hbitat: sobre fondos rocosos y aguas bien oxigenadas. Se
le ha observado entre 4 y 19 m de profundidad.
Distribucin: Anteriormente solo conocida en Chile, sin
embargo H. L. Clark (1910) supona su presencia en el sur del
Per. En el presente trabajo se registra y confrma su presencia
en el Per, ampliando su distribucin norte hasta San Juan de
Marcona.
Observaciones
Mutschke y Mah (2009) indican que Meyenaster gelatinosus
se encuentra en Per basndose en la publicacin de Madsen
(1956). Al revisar la citada publicacin, Per no se menciona
dentro del rango de distribucin de la especie, sin embargo en
un grfco de grupos faunsticos de la misma publicacin, se
incluye errneamente a M. gelatinosus en Per lo que puede
haber generado la confusin. Este registro no se considera vlido.
En la publicacin de H. L. Clark (1910) Te Echinoderms of
Peru, a pesar del ttulo, hay algunas especies que no las registra
para Per y solo supone su presencia en este pas. Ese el es caso de
Paulia horrrida Rowe (1977) menciona a Per dentro de las loca-
lidades de registro de la especie, muy probablemente basndose
en la publicacin de H. L. Clark (1910), ya que no menciona
haber revisado algn espcimen recolectado en aguas peruanas.
Adems, actualmente no se conoce ningn espcimen de P.
horrida recolectado en Per y depositado en alguna coleccin
cientfca, por lo que suponemos que este es el primer ejemplar
realmente registrado para Per. El registro tiene adems el valor
de haber obtenido, hasta donde sabemos, la primera fotografa
de esta especie en su hbitat natural.
Los hallazgos mencionados en el presente trabajo son parte
de los esfuerzos que se vienen realizando por inventariar la diver-
sidad acutica de las reas marinas protegidas del Per as como
para identifcar y priorizar localidades con alta biodiversidad
que deben ser protegidas dentro del Sistema Nacional de reas
Naturales Protegidas, siendo Punta Sal, localidad de colecta de
Paulia horrida, uno de los lugares que ya se encuentra propuesto
para su proteccin.
Literatura citada
Agassiz A. 1881. Report of the Echinoidea dredged by the H.M.S.
Challenger during the year 1873-1876. Zool. 3(9): 1-321.
Bluhm H. & A. Gebruk. 1999. Holothuroidea (Echinodermata) of the
Peru Basin - Eco logical and Taxonomic Remarks Based on
Underwater Images. Mar.Ecol., 20(2): 167-195.
322
Hooker & Sols-Marn
Figura 2. Paulia horrida: A. Espcimen in situ; B. Espinas superomarginales esfricas; C. Madreporito, espinas abactinales y ppulas; D.
Espcimen desecado; E. Boca, ambulacros y espinas interambulacrales ; F. Superfcie actinal.
323

Figura 3. Meyenaster gelatinosus: A. Adulto in situ; B. Juvenil in situ; C. Espcimen desecado; D. Boca, espinas orales y surcos ambula-
crales; E. Espinas carinales y marginales rodeadas de cogines de pedicelarios, se observa poros y ppulas; F. Madreporito.
324
Hooker & Sols-Marn
Caso M.E. 1979. Los Equinodermos de la Baha de Mazatln,
Sinaloa. An. Cent. Cienc. Mar y Limnol. UNAM. Mxico.
6: 197-368.
Clark H.L. 1910. The Echinoderms of Peru. Bulletin of the Mu-
seum of Comparative Zoology at Harvard University.
52(17):321-358.
Clark A.M. 1993. An index of names of recent Asteroidea, part 2:
Valvatida, in: Jangoux, M.; Lawrence, J.M. (Ed.) (1993).
Echinoderm Studies, 4: pp. 187-366
Deichmann E. 1941. The holothuroidea collected by the Velero III
during the years 1932 to 1938. Part I. Dendrochirota. All.
Hanc.Pac.Exped., 8(3):61-195.
Deichmann E. 1958. The Holothuroidea collected by the Velero III
and IV during the years 1932 to 1954. Part. II Aspidochi-
rota. All.Hanc.Pac. Exped., 11(2):253-348.
Gil D. & H. Zaixso, 2008. Feeding ecology of the subantarctic sea
star Anasterias minuta within tide pools in Patagonia,
Argentina. Rev. Biol. Trop. Vol. 56 (Suppl. 3): 311-328
Himmelman J., C. Dutil & C. Gaymer. 2005. Foraging behavior
and activity budgets of sea stars on a subti dal sediment
bottom community. J. Exp. Mar. Biol. Ecol. 322: 153-165.
Hooker Y., Sols-Marn F.A. & M. Lleellish. 2005. Equinodermos
de las Islas Lobos de Afuera (Lambayeque, Per). Rev.
Peru.Biol. 12(1):77-82.
Howell K., D. Pond, D. Billett, & P. Tyler, 2003. Feeding ecology of
deep-sea seastars (Echinodermata: Asteroidea): a fatty-acid
biomarker approach. Marine Ecology - Progress Series,
255, 193-206.
Mutschke E. & C. Mah, 2009. Asteroideos-Estrellas de Mar. En:
Hussermann, V., G. Frsterra (eds). Fauna Marina
bentnica de la Patagonia Chilena, gua de identifcacin
ilustrada. Nature in Focus, Chile. 801-830 p.
Prieto-Ros E. 2010. Taxonoma de Holothuroidea (Echinodermata)
del mar del Per. Tesis para optar el Titulo Profesional.
Facultad de Ciencias Biolgicas. Escuela Acadmico
Profesional de Ciencias Biolgicas. Universidad Nacional
Mayor de San Marcos, Lima, Peru. 71 p.
Rowe F. 1977. A new family of Asteroidea (Echinodermata), with
the description of fve new species and one new subspe-
cies of Asterodiscides. Records of the Australian Museum
31(5): 187233.
325

Actividad fermentativa de hansenula anomala y compuestos qumicos de importancia sensorial
ISSN 1561-0837
Estudio de la actividad fermentativa de Hansenula anomala y
produccin de compuestos qumicos de importancia sensorial
Waldir Estela Escalante
1,4
, Mojmr Rychtera
1
, Karel Melzoch
1
, Elena Quillama Polo
2
y
Beatriz Hatta Sakoda
3
Study of the fermentative activity of Hansenula anomala and production of
chemical compounds of sensory importance
1Department of Fermentati on
Chemistry and Bioengineering,
Faculty of Food and Biochemical
Engineering. Institute of Chemical
Technology Prague. Technick 5,
166 28. Praha 6, Dejvice. Czech
Republic.
Email:Waldir.Desiderio.Estela.
Escalante@vscht.cz
2Laboratorio de Microbiologa
Industrial, Facultad de Ciencias
Biologicas, Universidad Nacional
Mayor de San Marcos. Apartado
postal 110058, Lima 11, Per.
Email: equillamap@unmsm.edu.pe
3Facultad de Ingeniera de Indus-
trias Alimentarias, Universidad
Nacional Agraria La Molina. Av. La
Molina s/n, La Molina, Lima, Per.
Email: bhs@lamolina.edu.pe
4Laboratorio de Biotecnologa
Agroindustrial, Escuela de Inge-
niera Agroindustrial, Universidad
Nacional Micaela Bastidas de
Apurmac. Av. Arenas 121, Aban-
cayApurimac, Per.
Resumen
Se ha estudiado la actividad fermentativa de Hansenula anomala RIVE 7-1-5 con el objetivo de evaluar la
produccin de compuestos qumicos de importancia sensorial. Los resultados mostraron que fermenta bien
monosacridos y tambin sucrosa y maltosa. Su actividad fermentativa es inhibida a concentraciones de
100,0mg/L de metabisulfto de sodio en el medio. Adems, es capaz de producir 5,810,1 % v/v de etanol. La
agitacin del medio de cultivo incrementa la produccin de alcoholes superiores (679,2 mg/L) y etil acetato
(206,08,0 mg/L), por el contrario disminuye la produccin de cido actico (196,07,0 mg/L). La produccin de
glicerol fue similiar tanto en cultivo esttico (sin agitacin) como agitado. Durante el cultivo batch en biorreactor
a condiciones aireadas la tasa de crecimiento () alcanz el valor de 0,13 h
-1
y se observ la produccin de
cido actico hasta 4,20,3 g/L. La concentracin de oxgeno en el medio afecta su metabolismo, as cantidades
insufcientes de oxgeno provocara un metabolismo respirofermentativo con la produccin de etanol, alcoholes
superiores, steres y cido actico. El control de la aireacin al medio de fermentacin es una herramienta
til para controlar el balance entre la actividad respiratoria y fermentativa y as la sntesis de compuestos de
importancia sensorial en la produccin de bebidas fermentadas no tradicionales.
Palabras clave: Hansenula anomala, fermentacin alcohlica, alcoholes superiores, etil acetato, cultivo por lote.
Abstract
The fermentative behaviour of Hansenula anomala RIVE 7-1-5 was studied in order to evaluate the production
of chemical compounds of sensory importance. The results demonstrated that the strain ferments very well
monosaccharides and also sucrose and maltose. Its fermentative activity was inhibited at concentrations of 100
mg/L of sodium metabisulphite in the medium. Furthermore, it was able to produce 5,810,1% (v/v) of ethanol.
Agitation of the culture medium increases the production of higher alcohols (679,2 mg/L) and ethyl acetate
(206,08,0 mg/L), but on the contrary affects the production of acetic acid (196,07,0mg/L). Glycerol production
was similar in static (without agitation) and shaken cultivation. During batch cultivation carried out in biorreactor
under aerated conditions the growth rate () reached value of 0,13 h
-1
and, it was also observed production of
acetic acid at levels of 4,20,3 g/L. The oxygen concentration in the medium affects its metabolism, thus insuf-
fcient amounts of oxygen would provoke a respirofermentative metabolism with production of ethanol, higher
alcohols, esters and acetic acid. The control of aeration during fermentation is a useful tool to control the balance
between the respiratory and fermentative activity and thus; synthesis of compounds of sensory importance in
the production of non-traditional fermented beverages.
Keywords: Hansenula anomala, alcoholic fermentation, higher alcohols, ethyl acetate, batch cultivation.
Introduccin
Hansenula anomala Pichia es una levadura no-Saccharomyces
que frecuentemente es referida como contaminante en la pro-
duccin de bebidas fermentadas ya que produce compuestos
qumicos en cantidades que afectan la calidad organolptica
(Tomas 1993). Sin embargo, en ciertas bebidas no tradicionales
su presencia es benefcioso ya que los metabolitos que produce
contribuye al aroma y sabor del producto fnal (Fleet 1992).
Por ejemplo, Hansenula anomala forma parte de la microfora
en la fermentacin espontnea de un tipo de vino de arroz
consumido en Vietnam (Dung et al. 2006). Adems es tambin
responsable del aroma y sabor caracterstico del takju, bebida
alcohlica consumida en Corea del sur, hecha a base de arroz
(Shin & Cho 1970).
Hansenula anomala es una levadura osmotolerante, ha sido
aislada de productos con baja actividad de agua como por ejem-
plo en mermeladas de fruta (Tokuoka et al. 1992) y adems de
lugares con bajo contenido de oxgeno (Naito 1984). H. anomala
frecuentemente forma parte anque no es predominante de la
microfora de uvas y mostos y, participa en la etapa temprana
de la fermentacin alcohlica espontnea hasta que el oxgeno
se agote y el etanol alcance niveles de 56% (a los 3 4 das) y
consecuentemente mueren (Fleet & Heard 1993; Torija et al.
2001). Subsecuentemente, las cepas resistentes al etanol como
Saccharomyces cerevisiae predominan y completan la fermenta-
cin (Ribereau-Gayon 1985).
Metabolismo de azcares en Hansenula anomala.- Los
azcares fermentables son la fuente de energa ms importante
en el metabolismo de levaduras. Hansenula anomala al igual
que las dems levaduras utiliza vas metablicas comnes para
la degradacin de azcares, llmese gluclisis, ciclo de krebs
y va de la pentosa fosfato. Estos para ser utilizados deben ser
transportados hacia el interior de la clula mediante mecanismos
de transporte especfcos (Kruckeberg 1996, Flores et al. 2000).
La velocidad de utilizacin de azcares esta infuenciada por la
concentracin y el tipo de azcar, la concentracin de oxgeno
disuelto en el medio as como de la temperatura, el pH entre
otros factores (van Dijken

et al. 1993, Bisson 1993, Gofrini et
al. 2002). Hansenula anomala puede crecer a valores bajos de
pH, baja actividad de agua, y alta presin osmtica (Fredlund
et al. 2002). Adems, no requiere adicin externa de vitaminas
para su crecimiento. Es una levadura Crabtree negativa, oxida-
tiva, debido a que altas concentraciones de glucosa no reprime
su respiracin a condiciones aerobias (De Deken 1966a,b).
326
Escalante et al.
Durante su crecimiento totalmente aerobio produce cantidades
pequeas de etanol y glicerol, es decir tiene preferencialmente
un metabolismo respiratorio (De Deken 1966b, Fredlund et
al. 2004a). A condiciones anaerobias su crecimiento se inhibe
(Fredlund et al. 2004b).
A condiciones aerobias la glucosa-6-fosfato se metaboliza
mayormente (50%) va gluclisis y otra parte (30%) va pen-
tosa fosfato. As mismo, a estas condiciones la mayor parte del
piruvato entra a la mitocondria para su oxidacin en el ciclo
de Krebs, el cual funciona como un ciclo completo (Fredlund
et al. 2004a). La limitacin de oxgeno activa las enzimas de
la va fermentativa, como resultado se producen considerables
cantidades de etanol y glicerol y, la tasa especfca de toma de
glucosa incrementa sustancialmente comparado con la tasa de
toma de glucosa a condiciones aerobias. A estas condiciones, la
oxidacin de la glucosa-6-fosfato por la va pentosa fosfato se
reduce a solo 10% y el ciclo de Krebs funciona como una va
ramifcada (Fredlund et al. 2004a). El fujo metablico de Han-
senula anomala en estas condiciones es similar al metabolismo
fermentativo de Saccharomycescerevisiae (Gombert et al. 2001,
Fiaux et al. 2003). Condiciones de limitacin de oxgeno causa
una mayor produccin de etanol y tambin la acumulacin de
glicerol dentro de la clula y en el medio externo comparado a
condiciones aerobias (Fredlund et al. 2004a y b). La produccin
de glicerol a condiciones de limitacin de oxgeno esta relaciona-
do a la necesidad de reoxidar los equivalentes redox producidos
durante la sntesis de aminocidos (Gancedo & Serrano 1989).
cido actico tambin es producido durante su crecimiento
respiratorio y respirofermentativo, pero no a condiciones severas
de limitacin de oxgeno (Fredlund et al. 2004a yb).
En levaduras Crabtree negativas cultivadas a condiciones
aerobias, el piruvato se metaboliza preferentemente va piruva-
to deshidrogenasa hasta acetil-CoA y luego ste entra al ciclo
de Krebs para su oxidacin completa (van Dijken et al. 1993,
Gancedo & Serrano 1989); esto se debe a que presentan bajos
niveles de piruvato descarboxilasa y una alta actividad de enzimas
respiratorias como la piruvato deshidrogenasa, acetaldehdo
deshidrogenasa y acetil-CoA sintetasa (Postma

et al. 1989).
La ausencia de oxgeno en el medio es crucial y conduce a la
cesacin del crecimiento (Bulder 1964, van Dijken

et al. 1993).
La produccin de acetato, glicerol y etanol se debera a una baja
actividad de las enzimas respiratorias especialmente la piruvato
deshidrogenasa, acetaldehdo deshidrogenasa y la acetil-CoA
sintetasa como resultado de la limitacin de oxgeno en el
medio (van Dijken et al. 1993), lo que a la vez conduce a una
disminucin de la tasa de respiracin y a la estimulacin del
metabolismo fermentativo.
La produccin de glicerol en medios con alta concentracin
de azcar tambin estara conectado al mecanismo de adaptacin
que utiliza la levadura frente al estrs osmtico y as prevenir su
deshidratacin (Andre et al. 1988). Sin embargo, tambin ha
sido sugerido que la produccin de glicerol no siempre es un
factor relacionado a la osmorregulacin (Tokuoka et al. 1992).
As mismo, la formacin de glicerol esta acoplado a la oxidacin
de NADH a NAD
+
, lo que causa un desbalance redox en el
citosol (NADH:NAD
+
) el cual es corregido con la produccin
de cido actico cuya sntesis reconvierte nuevamente NAD
+

a NADH (Blomberg & Alder 1992; Remize et al. 1999).
Finalmente, la produccin de glicerol tambin esta ligado a la
necesidad de reoxidar el NADH generado durante la gluclisis
(Prior y Hohmann 1997).
En la Figura 1 se presenta en forma general el metabolismo
respiratorio y respirofermentativo de Hansenula anomala en la
degradacin de glucosa.
Las levaduras no-Saccharomyces no son muy tolerantes a bajas
concentraciones de oxgeno, especialmente comparado con S.
cerevisiae (Hansen et al. 2001). A condiciones de limitacin de
oxgeno se estimulara la fermentacin (van Dijken 1993), as
entonces el piruvato es convertido a acetaldehdo por la piruvato
descarboxilasa, y luego es reducido bien a etanol por la alcohol
deshidrogenasa (Bisson 1993), u oxidado a cido actico por
la acetaldehdo deshidrogenasa NADP-dependiente (Jacobson
& Bernofsky 1974). El acetaldehdo funciona como receptor
terminal de electrones cuya reduccin por el NADH genera
etanol (Bisson 1993, Boulton et al. 1996). En levaduras Crabtree
negativas en presencia de oxgeno, el acetaldehdo es preferente-
mente oxidado a acetato por la aldehdo deshidrogenasa y luego
convertido en acetil CoA por la acetil-CoA sintetasa (van Urk et
al. 1990, Remize et al. 2000). Sin embargo, la acumulacin de
cido actico bajo condiciones de limitacin de oxgeno resultara
de la insufciente actividad de la acetil-CoA sintetasa requerida
para la oxidacin completa del acetato (van Urk et al. 1990).
Figura 1. Metabolismo tpico de levaduras Crabtree negativas como
Hansenula anomala: Respiratorio () y respirofermentativo (----).
1: Transporte de piruvato a la mitocondria, 2: Complejo piruvato
deshidrogenasa, 3: Piruvato descarboxilasa, 4: Alcohol deshidroge-
nasa, 5: Acetaldehdo deshidrogenasa, 6: Acetil CoA sintetasa (ci-
toplasmtico), 7: Acetil CoA sintetasa (mitocondrial), 8: Transporte
de acetil CoA mediado por la va carnitina. Formacin de steres,
9: Acetiltransferasa, 10: ster sintasa, (adaptado de Fredlund et al.
2004a,b y van Dijken et al. 1993).
327

Efecto del etanol y sulfto en Hansenula anomala.- Hanse-
nula anomala no es una levadura tolerante a altas concentraciones
de etanol y cido actico (Kalathenos et al. 1995, Fredlund et
al. 2002). El etanol inhibe la viabilidad de las clulas, la tasa de
crecimiento especfco, y la tasa especfca de fermentacin (Sa-
Correia & Van Uden 1983, Pina et al. 2004, Ricci et al. 2004).
Se considera que el etanol provoca la disminucin del contenido
de esteroles en la membrana celular y esto afecta el transporte
de azcares. As mismo, se cree que el etanol tendra un efecto
inhibidor sobre la actividad del sistema hexoquinasa, enzimas
responsables de transferir grupos fosfato de una molcula a otra
en la gluclisis (Nagodawithana et al. 1977, DAmore et al.
1990, Ricci et al. 2004).
En general, la tolerancia al etanol depende de la habilidad de
la clula de levadura para exportar el etanol producido hacia el
exterior, un proceso que depende de la composicin y fuidez
de la membrana citoplasmtica (Nagodawithana & Steinkraus
1976). El dioxido de azufre se ha utilizado desde hace mucho
tiempo como agente antimicorbiano durante la elaboracin
de vinos y otras bebidas fermentadas. Este compuesto inhibe
el crecimiento de bacterias y ciertas levaduras, entre ellas las
no-Saccharomyces (Beech 1979). La capacidad inhibitoria del
SO
2
esta infuenciada por el pH del medio. El pH determina el
equilibrio entre tres compuestos, el SO
2
, HSO
-
3
, y SO
=
3
. El SO
2

es el responsable del efecto txico y su concentracin en medio
acuoso es favorecido a valores bajos de pH ya que provoca el des-
balance del equilibrio hacia este compuesto (Jarvis & Lea 2000).
Los sulftos tienen actividad a nivel del metabolismo energ-
tico, afectan la gluclisis, as bajas concentraciones conducen a
una rpida reduccin del contenido de ATP en la clula a bajos
valores de pH. Las enzimas ms afectadas seran la gliceraldehdo-
3-fosfato deshidrogenasa y la alcohol deshidrogenasa (Maier et al.
1985). As mismo, el sulfto sera responsable de la inhibicin de
la alcohol deshidrogenasa, enzima responsable de la reduccin de
acetaldehdo a etanol durante la fermentacin (Maier et al. 1985).
Produccin de compuestos sensoriales por Hansenula
anomala.- Hansenula anomala durante su crecimiento aerobio
produce una variedad de compuestos voltiles. Esta especie es
conocida por producir altas concentraciones de etil acetato y
cido actico (Romano et al. 1992, Grbin 1999, Plata et al.
2003). Los steres representan el mayor grupo de componentes
aromticos en bebidas alcohlicas fermentadas (Suomalainen
1981), y son producidos mediante reaccin enzimtica dentro
de la clula. La principal enzima que cataliza la reaccin es una
acetiltransferasa (Malcorps

et al. 1991, Yoshioka & Hashimoto

1984, Mason & Dufour 2000). En S.cerevisiae la sntesis de
steres de acetato ha sido atribudo a la actividad de al menos
tres acetiltransferasas: alcohol acetiltransferasa (AATasa), etanol
acetiltransferasa e isomail alcohol acetiltransferasa (Lilly et al.
2000). La alcohol acetiltransferasa cataliza la reaccin: acetil
CoA + alcohol CoA + acetil ster. Acta sobre un rango
de alcoholes alifticos de cadena corta incluyendo metanol y
etanol. La AATasa reacciona con la acetil-CoA y dependiendo
del grado de afnidad con una variedad de alcoholes (Fujii et al.
1994). Por ejemplo, etil acetato es principalmente producido a
partir de acetil CoA y etanol (Yoshioka & Hashimoto 1981).
La AATasa de S. cerevisiae es fuertemente reprimida bajo con-
diciones aerobias y por la adicin de cidos grasos insaturados
en el medio (Malcorps et al. 1991, Fujii et al. 1997). Por otra
parte, se ha reportado que la actividad de la ster sintasa (esterasa
reversa) en la sntesis de steres en S. cerevisiae es limitada. Etil
caprilato y etil acetato seran producidos a partir de etanol y los
respectivos cidos grasos (Hilary & Peddie 1990, Plata et al.
1998, Rojas et al. 2002).
La va de sntesis de steres en Hansenula anomala difere de
la va usada por S. cerevisiae. As, etil acetato se sintetiza preferen-
temente a partir de cido actico y etanol mediante una reaccin
reversa de esterasa (Yoshioka & Hashimoto 1981, Rojas et al.
2002). Etil acetato se produce durante el crecimiento en glucosa y
a diferentes niveles de aireacin. El incremento de la oxigenacin
del medio reduce la produccin de etil acetato (Tabachnick &
Joslyn 1953, Fredlund et al. 2004a). Sin embargo, Rojas et al.
(2001) han reportado menor produccin de etil e isoamil acetato
a condiciones de limitacin de oxgeno comparado a condiciones
aerobias. Mucho antes ya se haba reportado que la produccin de
etil acetato requiere la presencia de pequeas cantidades de oxge-
no, y que su sintess se inhibe a condiciones totalmente anxicas
(Davies et al. 1951, Tabachnick & Joslyn 1953). Los steres de
acetato se forman en altas concentraciones durante la fermenta-
cin temprana (Henschke & Jiranek 1993). Hansenula anomala
tambin produce otros steres como etil propanoato y 2-feniletil
acetato (Westall 1999). Debido a la solubilidad de los steres en
lpidos, estos pueden atravezar de manera relativamente fcil la
membrana celular. Sin embargo, la tasa de difusin depende de
la longitud de la cadena, as por ejemplo el etil acetato se excreta
rpida y completamente, mientras que la excrecin de los dems
steres etlicos disminuye dramticamente a medida que incre-
menta la longitud de la cadena, desde 100% para etil hexanoato
hasta 54 68% para etil octanoato y 8 17% para etil decanoato
(Nykanen & Nykanen 1977). Finalmente, la tasa de formacin
de steres depende de la concentracin de sus precursores y de
la actividad de las enzimas incolucradas en la sntesis e hidrlisis
(Swiegers & Pretorius 2005). De ah que todos los parmetros
que afectan la concentracin de los precursores o la actividad de
las enzimas involucradas pueden afectar la produccin de steres.
Sin embargo, la produccin de steres vara tambin entre cepas
de una misma especie de levadura.
Las levaduras no-Sacccharomyces tambin producen diferentes
niveles de alcoholes superiores. Altas concentraciones de estos
afectan negativamente la calidad organolptica por ejemplo en
vinos, pero bajas concentraciones ms bien conferen comple-
jidad (Romano & Suzzi 1993). Estas levaduras frecuentemente
producen bajas concentraciones de alcoholes superiores compa-
rado a S. cerevisiae, pero hay una gran variabilidad entre cepas
(Romano et al. 1992, Zironi et al. 1993).
Los alcoholes superiores son formados a partir de -cetocidos,
los cuales derivan de la desaminacin de los correspondientes
aminocidos (valina, leucina, isoleucina, fenilalanina, etc.) a
travez de la va de Ehrlich a partir del metabolismo de la glu-
cosa como precursores en la sntesis de aminocidos (Ouchi et
al. 1980, Mauricio et al. 1997). Concentraciones de alcoholes
superiores a 400 mg/L contribuiran negativamente a la cali-
dad organolptica especialmente en vinos (Rapp & Mandery
1987). A excepcin de 2-feniletanol el cual presenta aroma foral
(Ribereau-Gayon et al. 2006a), cuyo valor umbral de percepcin
es 10 mg/L (Rous

et al. 1983), los dems alcoholes superiores
imparten caractersticas sensoriales desagradables (Rapp &
Mandery 1987, Ribereau-Gayon et al. 2006a).
328
Escalante et al.
El presente estudio descriptivo se realiz con la fnalidad de
contribuir al entendimiento del comportamiento fermentativo
de Hansenula anomala RIVE 7-1-5 y la produccin de com-
puestos qumicos de inters organolptico como potencial para
su aprovechamiento en la produccin de bebidas fermentadas.
As mismo, se discute la infuencia del oxgeno en la actividad
metablica y fermentativa y su repercusin en la sntesis de
compuestos qumicos de importancia sensorial.
Material y mtodos
Microorganismo.- Se utiliz Hansenula anomala RIVE
7-1-5 adquirido de la coleccin de levaduras del Instituto de
Investigacin de Viticultura y Enologa, Bratislava-Repblica
Eslovaca, y fue mantenido en agar extracto de malta a 7
o
C con
renovacin peridica cada 3 meses.
Fermentacin de azcares y tolerancia al metabisulfto de
sodio.- En los ensayos de fermentacin de azcares se utiliz
caldo tipo Saboraud 2% como medio de cultivo base en el cual se
sustituy slo la fuente de carbono. La actividad fermentativa se
determin visualmente mediante la produccin de gas, para ello
se us la tcnica de tubos Durham. Los ensayos se realizaron por
triplicado a 28
o
C durante 96 horas. En los ensayos de tolerancia
al metabisulfto de sodio se utiliz medio sinttico de la siguiente
composicin: glucosa 50,0 g/L; KH
2
PO
4
5,0 g/L; MgSO
4
.7H
2
O
0,4 g/L; (NH
4
)
2
SO
4
2,0 g/L y extracto de levadura 1,0 g/L. La tole-
rancia al metabisulfto de sodio (Na
2
S
2
O
5
) se determin mediante
la capacidad de fermentar glucosa a diferentes concentraciones de
Na
2
S
2
O
5
en el medio. El Na
2
S
2
O
5
se adicion de acuerdo al pH
del medio: 100 mg/L al medio de pH 3,3; 150 mg/L al medio de
pH 3,65 y 200 mg/L al medio de pH 4,24. En la evaluacin de la
fermentacin se utilizaron tubos Durham y se observ visualmente
la produccin de CO
2
hasta las 72 horas. Todos los ensayos se
realizaron a 28
o
C y por triplicado.
Produccin de etanol.- Para los ensayos de produccin de
etanol se adquiri jugo de manzana concentrado, esterilizado
por ultrafltracin y aroma removido de Severofrukt a.s., Terezin,
Repblica Checa. La remocin del aroma se realiz durante
el proceso de concentrado en un evaporador provisto de una
columna de separacin de voltiles. El jugo concentrado as
como el aroma obtenido fue entregado por separado al grupo
de investigacin. El jugo concentrado se reconstituy con agua
desionizada estril hasta una concentracin de azcares totales
de 12,8% w/v y pH 3,8 para utilizarlo como medio de fermen-
tacin. Los ensayos se realizaron en frascos Erlenmeyer de 1 L
conteniendo 0,5 L de medio de cultivo. Las fermentaciones se
llevaron a cabo en cultivo esttico y agitado a 16
o
C y 28
o
C
respectivamente. Las fermentaciones en cultivo agitado se reali-
zaron en frascos agitados a 200 min
-1
en un agitador orbital. Las
fermentaciones en cultivo esttico se consideraron terminadas
cuando no se observ produccin de CO
2
y aquellas en cultivo
agitado, el tiempo de cultivo fue el equivalente al tiempo utili-
zado durante la fermentacin en cultivo esttico.
El inculo se propag utilizando medio de cultivo de la
misma composicin. Los frascos Erlenmeyer se agitaron a 200
min
-1
, durante 48 horas, la temperatura de cultivo fue 28
o
C.
As, el medio de fermentacin se inocul con 14,0 % v/v de
inculo. Finalmente, el contenido de etanol producido se de-
termin mediante picnometra. Todos los ensayos se realizaron
por triplicado.
Sntesis de compuestos de importancia sensorial
Preparacin de inculo y condiciones de fermentacin.-
Jugo de manzana reconstituido y aroma removido (explicado
anteriormente) se ha utilizado como medio de fermentacin.
Las fermentaciones se realizaron en cultivo agitado y esttico
en frascos Erlenmeyer de 0,5 L conteniendo 250 mL de medio.
En las fermentaciones en cultivo agitado los frascos se agitaron
a 200 min
-1
durante 8 das y, aquellos en cultivo esttico el
tiempo de fermentacin fue de 15 das. Los experimentos se
realizaron a 28
o
C.
La propagacin del inculo se llevo a cabo en 100 mL de
jugo de manzana estril a 28
o
C durante 24 horas, los frascos
se agitaron a 200 min
-1
en un agitador orbital. Las clulas se
separaron por centrifugacin (3000 min
-1
durante 10 minutos)
y se lavaron tres veces con solucin fsiolgica estril. Los me-
dios de fermentacin se inocularon con 1,00,1 g de clulas en
peso hmedo.
Cultivo batch en biorreactor.- Como medio de cultivo se
utiliz jugo de manzana variedad Rubin con un contenido de
azcares totales de 13% en peso y pH 3,8. Las manzanas fueron
adquiridas de la distribuidora de frutas y hortalizas Fruit-CZ,
Praga, Repblica Checa. Luego de la extraccin, el jugo se verti
en envases estriles de 10 L y se pasteuriz en un termostato a
65 70
o
C durante 12 horas (incluyendo el tiempo de enfriado)
con la fnalidad de eliminar la fora microbiana y adems todos
los compuestos voltiles varietales (El-Nemra et al. 1988, Su &
Wiley 1998). Al jugo de manzana se suplement con KH
2
PO
4

1,2 g/L y (NH
4
)
2
SO
4
1,2 g/L como fuente de fsforo y amonio
para promover el crecimiento de la levadura.
Los cultivos se realizaron en un biorreactor (BIOSTATB.
Braun International, Alemania) de 2 L conteniendo 1,5 L de
medio de cultivo. El biorreactor estuvo conectado a una unidad
de regulacin y medicin micro-DCU-300 y adems estuvo
equipado con un agitador, medidor de pH, termmetro y un
electrodo de medicin de oxgeno disuelto. Los parmetros con-
siderados en el cultivo los cuales fueron mantenidos constante
a lo largo del proceso fueron: temperatura 18
o
C, frecuencia de
agitacin 300 min
-1
y fujo de aire 25 L/h (0,2 moles O
2
/h). El
tiempo de cultivo se dej hasta el incremento de la concentracin
de oxgeno disuelto en el medio a su valor inicial.
El inculo se propag en 80 mL de medio sinttico de la
siguiente composicin: glucosa 8,0 g/L; peptona 10,0 g/L; KH-
2
PO
4
1,2 g/L; (NH
4
)
2
SO
4
1,2 g/L y extracto de levadura 10,0 g/L,
el pH se ajust a 3,6. La propagacin de clulas se llevo a cabo
en un agitador orbital a 150 min
-1
durante 48 horas a 28
o
C. Las
clulas se separaron por centrifugaron (3000 min
-1
durante 10
minutos), se lavaron tres veces con solucin fsiolgica estril y,
fnalmente las clulas obtenidas se inocularon en el biorreactor.
Mtodos analticos y presentacin de resultados
Los compuestos voltiles producidos durante la fermentacin
(alcoholes superiores y steres) se analizaron en un cromatgrafo
de gas (Hewlett-Packard 5890II), equipado con una columna
HP5 (30m x 0,32mm) y un detector FID.
Las muestras fermentadas por triplicado se centrifugaron y
fltraron en una membrana de microfltracin de 0,45 m de
porosidad, luego se extrajeron los compuestos voltiles mediante
el mtodo de microextraccin con diclorometano (Ortega et
329

al. 2001). Finalmente, 1 L de cada extracto se inyect en el
cromatgrafo.
El cido actico, succnico, mlico, etanol, glicerol, fruc-
tosa y glucosa se analizaron en un HPLC (Pump LCP 4000),
equipado con una columna Watrex 250 x 8mm (Ostion LGKS
0800 H
+
) y un detector RID. En el anlisis se utiliz 0,005M
de H
2
SO
4
como fase mbil a una tasa de fujo de 1 mL/min.
Las muestras fermentadas por triplicado luego de ser fltradas y
centrifugadas se diluyeron con agua desmineralizada (1:3) y se
inyectaron al equipo.
La biomasa celular se determin mediante gravimetra. Las
clulas se separaron por centrifugacin a 3000 min
-1
durante 10
minutos, se lavaron 3 veces con agua destilada luego se secaron
a 110 C durante 2 horas y fnalmente se pesaron. Adems, se
determinaron el coefciente global de rendimiento de biomasa
Y
X/S
y la tasa de crecimiento () respectivamente (van Hoek et
al. 1998). Los ensayos y anlisis se realizaron por triplicado,
los resultados se presentan como los promedios y su desviacin
estandard.
Resultados y discusin
Fermentabilidad de azcares y tolerancia al etanol y me-
tabisulfto de sodio.- Las levaduras diferen en su capacidad de
fermentar azcares, esta caracterstica es fundamental para defnir
su utilidad en procesos fermentativos. Como se muestra en la
Tabla 1, Hansenula anomala RIVE 7-1-5 es capaz de fermentar
glucosa, fructosa y manosa. Estos azcares generalmente estan
presentes en los jugos de fruta. La fermentacin de sucrosa y
maltosa es una caracterstica interesante ya que puede fermentar
tambin medios que contengan estos azcares, por ejemplo
mostos a base de cereales.
La capacidad inhibitoria del SO
2
esta infuenciada por el pH
del medio (Jarvis & Lea 2000). Como se observa en la Tabla 1,
la actividad fermentativa de Hansenula anomala RIVE 7-1-5 ha
sido inhibida totalmente a concentraciones de metabisulfto de
sodio (precursor de SO
2
) incluso hasta 100 mg/L. La utilizacin
de dioxido de azufre (SO
2
) en el caso de la produccin de vinos
esta regulado debido a los posibles efectos txicos que produce.
La OIV (Organizacin Internacional de la Via y el Vino) re-
comienda dosis entre 150400 mg/L de sulfto, dependiendo
del tipo de vino (Ribereau-Gayon et al. 2006b).
Produccin de etanol.- Las levaduras oxidativas cultiva-
das bajo limitacin de oxgeno producen etanol debido a la
interrupcin de su actividad respiratoria. La respiracin y la
fermentacin suceden simultaneamente, la concentracin de
oxgeno determina el balance entre ambos metabolismos. Sin
embargo, en un metabolismo mixto la generacin de energa
disminuye y como resultado tambin la tasa de crecimiento,
para dar formacin a compuestos tpicos de la fermentacin
alcohlica. En la Tabla 2 se muestra las concentraciones de
etanol producido por Hansenula anomala RIVE 7-1-5. Se ha
observado una mayor produccin de etanol en cultivo esttico
(5.810,1% v/v) a 28
o
C. La agitacin del medio disminuy la
produccin de etanol dramticamente en cultivos a 28
o
C y un
efecto contrario se observ a 16
o
C. As mismo, la diminucin
de la temperatura afect sustancialmente la produccin de eta-
nol en cultivo esttico, sin embargo esto no sucedi en cultivo
agitado donde la produccin de etanol increment de 2,350,1
a 4,690,1% v/v. Esta cepa es capaz de producir hasta 5,80,1%
v/v de etanol que es una cantidad sufciente para producir
bebidas con contenido medio de etanol (por ejemplo cidras).
Nuestros resultados demuestran que algunas cepas de Hansenula
anomala pueden producir concentraciones de etanol por encima
de 5% v/v contrariamente a lo encontrado por Kalathenos et al.
(1995) y Fredlund et al. (2002). La disminucin de produccin
de etanol en cultivo agitado (al menos a 28
o
C) se debera al
efecto del oxgeno incorporado al medio durante la agitacin.
Esto explica que Hansenula anomala RIVE 7-1-5 prefere oxidar
la glucosa en presencia de oxgeno antes que fermentarla. Para
casos prcticos la produccin de etanol podra ser controlado
mediante la tasa de aireacin.
La temperatura juega un rol importante en la produccin
de compuestos secundarios durante la fermentacin. En la
produccin de vinos blancos y cervezas por ejemplo se prefere
temperaturas bajas de fermentacin ya que infuye positivamente
en la sntesis de compuestos qumicos de importancia sensorial
(Torija et al. 2003). Para casos prcticos la produccin de etanol
por Hansenula anomala RIVE 7-1-5 podra ser controlado ajus-
tando la temperarura y la aireacin del medio de fermentacin.
Sntesis de compuestos de importancia sensorial.- La varia-
cin de parmetros que dan paso a la fermentacin conducen a
la produccin de etanol y otros compuestos qumicos de impor-
tancia sensorial. En la Tabla 3 se muestra las concentraciones de
los compuestos producidos por Hansenula anomala RIVE 7-1-5
durante cultivo esttico y agitado, as mismo se muestra con
fnes de comparacin los principales compuestos encontrados
en cidras y jugo de manzana. Un ligero incremento de glicerol
Concentracin de azcar, etanol y metabisulfto de sodio
Tipo de azcar (2%)
glucosa galactosa fructosa maltosa sucrosa rafnosa almidn xilosa manosa
+++ + +++ ++ ++ +++
Fermentacin en Na
2
S
2
O
5
(mg/L)
Control (sin Na
2
S
2
O
5
) 100 mg/L (pH: 3,3 ) 150 mg/L (pH: 3,65 ) 200 mg/L (pH: 4,24)
+++
Tabla 1. Fermentacin de azcares, y tolerancia al metabisulfto de sodio por Hansenula anomala RIVE 7-1-5 cultivado en medio sinttico a
28
o
C. Produccin de CO2: intenso: +++, moderado: ++, dbil: +
Tipo de cultivo
Temperatura de
fermentacion (
o
C)
Etanol producido
(%v/v)
Agitado 16 4,69 0,1
Agitado 28 2,35 0,1
Esttico 16 3,05 0,1
Esttico 28 5,81 0,1
Tabla 2. Produccin de etanol por Hansenula anomala RIVE 7-1-5
en cultivo esttico y agitado en jugo de manzana a 16
o
C y 28
o
C.
330
Escalante et al.
se observ en cultivo esttico (1,50,4 g/L), comparado con el
cultivo agitado (1,40,15 g/L). La disminucin se debera en
parte a que el metabolismo aerobio promueve la respiracin
celular disminuyendo as la produccin de glicerol. Sin embargo,
su produccin tambin sera una respuesta al estrs osmtico
del medio de fermentacin debido a la alta concentracin de
azcar. Una mayor produccin de glicerol sera favorable para
el perfl sensorial de la bebida fermentada ya que impartira un
ligero sabor dulce (Nieuwoudt et al. 2002).
Con respecto a la produccin total de alcoholes superiores
se observa que en cultivo agitado se produjo mayor cantidad
(679,2 mg/L) comparado al cultivo esttico (247,7 mg/L); la
mayor produccin se debera al efecto del oxgeno incorporado
al medio durante la agitacin. El oxgeno promueve el meta-
bolismo respiratorio y como consecuencia un mayor fujo de
glucosa y aminocidos, cuya degradacin produce compuestos
intermediarios (cetocidos) de la sntesis de alcoholes superiores
(Ribereau-Gayon et al. 1975; Valero et al. 2002). Otros factores
que incrementan la produccin de alcoholes superiores incluyen
la clarifcacin del mosto, la madurez de la fruta, la temperatura
entre otros (Ough et al. 1966; Blanco et al. 1992; Mangas et
al. 1994).
Los steres imparten el aroma frutal en las bebidas fermen-
tadas, por esta razon su presencia determina en parte la calidad
sensorial. El etil acetado es el ster de mayor importancia por
su concentracin. Como se muestra en la Tabla 3, la mayor
produccin de etil acetado por Hansenula anomala RIVE 7-1-5
se observ en cultivo agitado (206,08,0 mg/L). La tasa de for-
macin de etil acetato estara relacionado con la disponibilidad
de cido actico, etanol y, adems de la actividad de la ester
sintasa necesarios para su formacin (Yoshioka & Hashimoto
1981, Rojas et al. 2002). Por otro lado, la concentracin de cido
actico en cultivo agitado (196,010,0mg/L) result ser menor
comparado al cultivo esttico (366,010,0mg/L), lo que indi-
cara que la tasa de formacin de etil acetato en cultivo agitado
ha sido sufcientemente alta para convertir el cido actico en
etil acetato. El incremento de la sntesis de cido actico tam-
bin esta unido a la produccin de glicerol (Prior et al. 2000).
Nuestros resultados concuerdan con lo reportado por Rojas et
al. (2001) quienes reportaron que la aireacin promueve una
mayor sntesis de etil acetato e isoamil acetato. Sin embargo
Fredlund et al. (2004a) reportaron un efecto contrario de la
aireacin en Hansenula anomala. La mayor formacin de etil
acetado en cultivo agitado con Hansenula anomala RIVE 7-1-
5 involucrara otros factores propios de la cepa. Por otra parte,
tambin se ha observado la produccin de isoamil acetato y etil
decanoato en concentraciones menores. La produccin de estos
steres es ventajosa si se desea producir bebidas no tradicionales
con aromas especiales. En el caso de la fermentacin de vinos la
presencia de etil acetato en concentraciones menores a 80 mg/L
contribuye positivamente al aroma y sabor (Ribereau-Gayon
1978). Altas concentraciones de etil acetato sobre 200 mg/L
imparte un sabor a vinagre (Dequin et al. 2003).
As mismo, se ha observado la formacin de cido succni-
co tanto en cultivo agitado (0,740,10 mg/L) como esttico
(0,70,12 mg/L). Este cido contribuye a la acidez total de la
bebida. En presencia de oxgeno el cido succnico se produce
normalmente como un intermediario del ciclo de Krebs bien
por la actividad de las enzimas relacionadas al ciclo de Krebs cuya
sntesis no sera inducida por el oxgeno (Arikawa et al. 1999).
Los cultivos agitados

en frascos Erlenmeyer presentan limita-
ciones en la transferencia de oxgeno (Gupta & Rao 2003, Tolosa
et al. 2002), esto provocara un metabolismo respirofermentativo
mixto en Hansenula anomala RIVE 7-1-5 con la consecuente
variabilidad en la produccin de productos de la fermentacin.
Los factores que infuyen en la transferencia de oxgeno incluyen
la relacin volumen del frasco Erlenmeyer/volumen del medio
de cultivo, diametro del cuello del frasco e inclusive el tipo y las
caractersticas del tapn (Nikakhtari & Hill 2006).
Cultivo batch en biorreactor.- La Figura 2 muestra el
transcurso del consumo de oxgeno, el crecimiento celular y la
variacin del pH durante 11 das de cultivo de Hansenula ano-
mala RIVE 7-1-5. El oxgeno es el factor ms importante que
determina el balance entre la actividad respiratoria y fermentativa
en esta levadura. A concentraciones inferiores a la concentracin
Compuestos(mg/L)
Tipo de cultivo de Hansenula
anomala RIVE 7-1-5
a
Compuestos analizados en cidras
fermentadas con Saccharomyces
cerevisiae
Compuestos analizados en jugos
de manzana
Agitado Esttico
Glicerol * 1,4 0,15 1,5 0,4 4,05 0,13
1
; 2,59 1,7
2
0,0
5
1-Propanol 19,0 3,0 41,0 4,0 20,01 0,35
1
; 27,3 13,0
2
7,0
6
1-Butanol 23,2 1,2 9,7 1,2 6,99 0,04
1
; 6,1 0,7
2
4,50 0,23
4
2-Butanol 3,0 1,0 1,0 0,3
2-Metil-propanol 218,0 8,0 83,0 6,0 22,17 0,08
1
; 34,8 8,9
2
0,75 0,04
4
3-Metil-butanol 228,0 9,0 54,0 6,0 232,00 13,80
3
2,11 0,11
4
2-Metil-butanol 162,0 5,0 28,0 3,0 94,8 0,2
+
; 173,0 41,1
+
9,0
6
2-feniletanol 26,0 4,0 31,0 3,0 7,8 0,39
1
; 131,5 55,3
2
0,46 0,02
4

Etil acetato 206,0 8,0 102,0 6,0 231,06 33,09
1
; 114,6 35,5
2
0,57 0,03
4
Butil acetato n.d tr 0,27 0,02
4
0,58 0,03
4
Isoamilacetato 1,7 0,4 n.d 16,66 1,0
4
2,48 0,12
4
Etil decanoato 2,3 0,5 4,6 0,8 1,50 0,09
4
0,01 0,002
4
Acido acetico 196,0 7,0 366,0 10,0 900,0 140,0
1
; 282,93 16,9
4
0,0
5
Acido succinico* 0,74 0,10 0,7 0,12 200,0 30,0
1
; 0,5 0,06
2
0,0
5
Tabla 3. Compuestos de importancia sensorial producidos por Hansenula anomala RIVE 7-1-5 cultivado en jugo de manzana a 28
o
C en cultivo
esttico y agitado, adems compuestos tpicos encontrados en cidras y jugos de manzana.
*g/L., tr.: trazas., n.d: no detectado.,
a
Resultados obtenidos en este estudio.
1
Valores de cidras fermentadas con S.cerevisiae (Suarez et al. 2005).
2
Valores de cidras analizados en el ao
1998 (Picinelli et al. 2000).
3
Valores de cidras fermentadas con S.cerevisiae (Jarvis et al. 1995).
4
Valores promedios (Wang et al. 2004).
5
Valores promedios (Cabranes et al. 1998).
6
Valores
promedios (Souci et al. 2000).
+
Contenido de alcoholes amlicos: 3-Metil-butanol+2-Metil-butanol (Suarez et al. 2005; Picinelli et al. 2000). Compuestos no reportados ().
331

crtica la velocidad de respiracin es dependiente de la concentra-
cin de oxgeno, por el contrario a concentraciones superiores es
independiente (Johnson 1976). En presencia de oxgeno como
subtrato, la relacin entre la tasa de crecimiento y concentracin
de oxgeno en el medio sigue la cintica de Michaelis Menten
(Johnson 1976). La concentracin crtica de oxgeno para leva-
duras es muy baja, en el orden de 0,12mg/L a 20
o
C.
Como se observa en la Figura 2 luego de las 10 horas la
concentracin de oxgeno disuelto en el medio cay a cero y as
permaneci hasta las 250 horas. Esto signifca que el oxgeno
transferido al medio ha sido consumido en su totalidad, sin
embargo este valor no da informacin de la tasa de consumo
de oxgeno. El oxgeno es poco soluble en agua pura (9,1 mg/L,
20
o
C) y a medida que la temperatura y la viscocidad del medio
incrementa la solubilidad disminuye. La tranferencia de oxgeno
al medio es crucial y depende de muchos factores, entre ellos, el
fujo de aire, la velocidad de agitacin, la composicin qumica
del medio, la geometra del biorreactor, entre otros. El oxgeno
consumido es utilizado mayormente en la respiracin es decir en
la oxidacin de la glucosa, pero tambin en vas no respiratorias
como en la sntesis de esteroles y cidos grasos insaturados que
son componentes esenciales de la membrana celular (Rosenfeld
& Beauvoit 2003).
El agotamiento rpido del oxgeno indica que esta cepa
manifesta un metabolismo aerobio pero que probablemente
experimenta limitacin de oxgeno, en este caso se recomienda
trabajar a concentraciones de saturacin o exceso de oxgeno si
se desea suprimir al mximo la actividad fermentativa. En este
caso la produccin de etanol se acercara a cero.
Adems, se observa un incremento gradual de biomasa celu-
lar alcanzando un valor de 11,5 g/L al fnal del cultivo (Tabla
4). Estequiomtricamente este valor es inferior a lo esperado,
esto sugiere que la fuente de carbono no solamente habra sido
utilizado para el crecimiento, sino en algn otro proceso como
en maintenance (Beeftink et al. 1990), o en la formacin de
productos de la fermentacin. Sin embargo en los compuestos
residuales al fnal del cultivo no reporta etanol, adems bajos
niveles de glicerol (0,910,05 g/L) y alta concentracin de
cido actico (4,20,3 g/L). La produccin de cido actico
a condiciones aerobias ha sido reportado por Fredlund et al.
(2004 a,b), sin embargo concentraciones tan elevadas sera una
caracterstica an no reportada.
As mismo, no se ha observado una variacin signifcante del
pH (de 3,64 a 3,09) al fnal del proceso. La variacin del pH esta
asociado con el proceso de crecimiento celular y la actividad me-
tablica como la principal causa del intercambio de protones en el
medio. Tambin no se ha observado una disminucin signifcante
del contenido de cido mlico, lo que signifcara que esta cepa uti-
liza limitadamente este cido en presencia de oxgeno. Sin embargo,
Corte-Real et al. (1990) y Corte-Real y Leao (1990) reportaron
la utilizacin de cido mlico por Hansenula anomala. Desde el
punto de vista prctico concentraciones de oxgeno que conducen
principalmente al metabolismo respiratorio debe ser evitado.
La ausencia de muchos compuestos de la fermentacin como
por ejemplo alcoholes superiores y adems la baja cantidad de
algunos de ellos indicaran que el metabolismo ha sido predomi-
nantemente respiratorio (Tabla 4). En todo caso, el etanol pro-
bablemente producido durante el cultivo podra haber servido
como fuente de carbono al agotarse los azcares fermentables. Al
fnal del cultivo, el incremento del porcentaje de oxgeno disuelto
estara conectado al agotamiento de la fuente de carbono que
limitara el crecimiento y as el consumo de oxgeno.
Reportes anteriores mostraron la utilizacin de Hansenula
anomala junto a otras levaduras no-Saccharomyces en la produc-
cin de vinos de bajo contenido alcohlico (3% v/v) en envases
0
2
4
6
8
10
12
14
16
0
20
40
60
80
100
120
0 50 100 150 200 250
p
H
,

b
i
o
m
a
s
a

s
e
c
a

(
g
/
L
)
%
p
O
2
tiempo (h)
%pO2 pH biomass g/L
Figura 2. Cultivo batch de Hansenula anomala RIVE 7-1-5 en bior-
reactor a 18 C y con fujo de aire 25 L/h.
Concentracin inicial de componentes (g/L)
fructosa glucosa sucrosa c. mlico
70,95 22,6 35,5 5,02
Compuestos fnales (g/L)
fructosa glucosa etanol glicerol c. actico c. sucnico c. mlico
0,240,04 1,90,2 0,0 0,910,05 4,20,3 0,260,05 4,60,5
Alcoholes superiores y etil acetato producidos (mg/L)
1-propanol propil acetato 2-metil propanol 3-metil butanol 2-metil butanol Etil acetato
1,00,2 0,0 0,0 0,0 0,0 9,70,5
Azcar utilizado (S), biomasa fnal (X), rendimiento (Y
X/S
, Y
E/S
), tasa de crecimiento ()
S X Y
X/S
Y
E/S
127,0 11,5 0,11 0,0 0,13

Tabla 4. Compuestos utilizados y producidos por Hansenula anomala RIVE 7-1-5 durante el cultivo batch en biorreactor a 18
o
C.
Y
X/S
: g. de biomasa/gr. azcar; Y
E/S
: g. de etanol/gr. azcar; : tasa de crecimiento (h
-1
); X: biomasa seca fnal (g/l); S: azcar total consumido (g/L).
332
Escalante et al.
aireados. Sin embargo, la agitacin result en el incremento de
biomasa celular y la disminucin de la produccin de etanol
(Erten & Campbell 2001).
Conclusiones
Hansenula anomala RIVE 7-1-5 tiene una gran capacidad
de fermentar azcares comunmente encontrados en frutas y en
mostos preparados a base de cereales, caracterstica que la hace
interesante para su aprovechamiento y utilizacin en fermen-
tacin de bebidas. Su sensibilidad al SO
2
es importante ya que
concentraciones de 100 mg/L sera sufciente para inhibibir su
actividad fermentativa en caso que sea necesario. As mismo,
su capacidad de producir etanol hasta 5,810,1 % v/v la hace
adecuada para producir bebidas con bajo contenido alcohlico.
Sin embargo, la produccin de etanol puede ser controlada
mediante la tasa de agitacin y la temperatura. Temperaturas
de 16
o
C con agitacin de 200 min
-1
o menos se recomienda.
Por otro parte, la aireacin promueve una mayor produccin
de alcoholes superiores y etil acetato, lo que no sucede con cido
actico. As mismo, la tasa de agitacin puede utilizarse para
controlar la tasa de aireacin y as balancear la produccin de
compuestos de importancia sensorial. Con la fnalidad de pro-
ducir bebidas fermentadas no tradicionales se recomienda airear
intermitentemente el medio de fermentacin para conseguir la
mayor produccin de compuestos voltiles de inters sensorial.
La demanda por bebidas fermentadas con caractersticas
sensoriales particulares hace a las levaduras no-Saccharomyces
oxidativas aprovechables. El suministro constante y controlado
de oxgeno (0,2 moles/h) desva el metabolismo fermentativo
hacia el oxidativo, sin embargo el oxgeno disuelto bajo estas
condiciones no provoca un metabolismo enteramente oxidativo.
La concentracin de oxgeno es el factor clave que determina
la formacin de compuestos de la fermentacin alcohlica al
menos en esta cepa de levadura.
Finalmente, bebidas fermentadas no tradicionales con altas
concentraciones de compuestos aparentemente indeseables
pueden parecer placenteros para algunos y lo opuesto para otros.
Agradecimientos
Los autores agradecen a la coleccin de levaduras del Instituto
de Investigacin de Viticultura y Enologa, Bratislava, Repblica
Eslovaca por proporcionarnos la cepa de levadura estudiada.
Literatura citada
Andre L., A. Nilsson & L. Adler. 1988. The role of glycerol in os-
motolerance of the yeast Debaryomyces hansenii. Journal
of General Microbiology, 134: 669677.
Arikawa Y., T. Kuroyanagi, M. Shimosaka, et al. 1999. Effect of gene
disruptions of the TCA cycle on production of succinic
acid in Saccharomyces cerevisiae. Journal of Bioscience
and Bioengineering, 87(1): 2836.
Beech, F.W., L.F. Burroughs, C.F. Timberlake, et al. 1979. Cu-
rrent progress in the chemical aspects and antimicrobial
effects of sulphur dioxide (SO
2
). Bulletin de LO.I.V., 52:
10011022.
Beeftink H.H., R.T.J.M. van der Heijden & J.J. Heijnen. 1990. Main-
tenance requirements: Energy supply from simultaneous
endogenous respiration and substrate consumption. FEMS
Microbiology Letters, 73(3): 203209.
Bisson L.F. 1993. Yeasts metabolism of sugars. In: G.H Fleet, eds.
Wine Microbiology and Biotechnology. Harwood Acade-
mic Publishers, Chur, Switzerland., pp. 5557.
Blanco D., M.J. Moran, M.D, et al. 1992. Biochemical study of
the ripening of cider apple varietes. Zeitschrift-fuer-Le-
bensmittel-Untersuchung und Forschung, 194(1): 3337.
Blomberg A. & L. Alder. 1992. Physiology of osmotolerance in
fungi. Advances in Microbial Physiology, 33: 145212.
Boulton B., V.L. Singleton, L.F. Bisson, et al. 1996. Yeast and bio-
chemistry of ethanol fermentation. In: B. Boulton, B.L.
Singleton, L.F. Bisson and R.E. Kunkee, eds. Principles
and Practices of Winemaking. Chapman and Hall Publis-
hers, New York., pp. 139172.
Bulder C.J.E.A. 1964. Induction of petite mutation and inhibition of
synthesis of respiratory enzymes in various yeasts. Antonie
van Leeuwenhoek, 30: 19.
Cabranes C., J. Moreno & J.J. Mangas. 1998. Cider production with
immobilized Leuconostoc oenos. Journal of the Institute
of Brewing, 4: 127130.
Corte-Real M. & C. Leao. 1990. Transport of malic acid and other di-
carboxylic acids in the yeast Hansenula anomala. Applied
and Environmental Microbiology, 56: 11091113.
Corte-Real M., C. Leao & N. Van Uden. 1990. Inverse diauxy in the
yeast Hansenula anomala: Mutants derepressed for malic
acid utilization in the presence of glucose. Applied and
Environmental Microbiology, 56(11): 34023404.
Davies R., E.A. Falkiner, J.F. Wilkinson, et al. 1951. Ester formation
by yeast. 1. Ethyl acetate formation by Hansenula species.
Biochemical Journal, 49: 5860.
DAmore T., C.J. Panchal, I. Russell, et al. 1990. Ethanol tolerance
in yeasts. Critical Reviews in Biotechnology, 9: 287304.
De Deken, R.H. 1966a. The Crabtree effect and its relation to the petite
mutation. Journal of Genetic Microbiology, 44: 157165.
De Deken R.H. 1966b. The Crabtree effect: a regulatory system
in yeast. Journal of Genetic Microbiology, 44: 149156.
Dequin S., J.M. Salmon, H.V. Nguyen, et al. 2003. Wine yeasts. In:
T. Boekhout and V. Robert, eds. Yeasts in FoodBenefcial
and Detrimental Aspects. Behrs Verlag, Hamburg., pp.
389412.
Dung N.T.P., F.M. Rombouts & M.J.R. Nout. 2006. Functionality
of selected strains of moulds and yeasts from Vietnamese
rice wine starters. Food Microbiology, 23(4): 331340.
El-Nemra S.E., I.A. Ismaila & A. Askar. 1988. Aroma changes in
mango juice during processing and storage. Food Chemis-
try, 30(4): 269275.
Erten H. & I. Campbell. 2001. The production of low-alcohol wines
by aerobic yeasts. Journal of the Institute of Brewing,
107: 207215.
Fiaux J., P. Cakar, M. Sonderegger, et al. 2003. Metabolic-fux pro-
fling of the yeasts Saccharomyces cerevisiae and Pichia
stipitis. Eukaryotic Cell, 2: 170180.
Fleet G.H. 1992. Spoilage yeasts. Critical Reviews in Biotechno-
logy, 12: 144.
Fleet G.H. & G.M. Heard. 1993. Yeastsgrowth during fermentation.
In: G.H. Fleet, eds. Wine Microbiology and Biotechnology.
(Harwood Academic Publishers, Switzerland., pp. 2754.
Flores C.L., C. Rodriguez, T. Petit, et al. 2000. Carbohydrate and
energy-yielding metabolism in non-conventional yeasts.
FEMS Microbiology Reviews, 24: 507529.
Fredlund E., U. Druvefors, M.E. Boysen, et al. 2002. Physiological
characteristics of the biocontrol yeast Pichia anomala J121.
FEMS Yeast Research, 2: 395402.
Fredlund E., L.M. Blank, U. Sauer, et al. 2004a. Oxygen and glucose
dependent regulation of central carbon metabolism in Pi-
chia anomala. Applied and Environmental Microbiology,
70: 59055911.
Fredlund E., A. Broberg, M.E. Boysen, et al. 2004b. Metabolite
profles of the biocontrol yeast Pichia anomala J121 grown
under oxygen limitation. Applied Microbiology and Bio-
technology, 64: 403409.
333

Fujii T., N. Nagasawa, A. Iwamatsu, et al. 1994. Molecular cloning,
sequence analysis, and expression of the yeast alcohol
acetyltransferase gene. Applied and Environmental Mi-
crobiology, 60: 27862792.
Fujii T., O. Kobayashi, H. Yoshomoto, et al. 1997. Effect of aeration
and unsaturated fatty acids on expression of the Saccha-
romyces cerevisiae alcohol acetyltransferase gene. Applied
and Environmental Microbiology, 63(3): 910915.
Gancedo C. & R. Serrano. 1989. Energy yielding metabolism. In:
A.H. Rose and J.S. Harrison, eds. The Yeasts. Academic
Press, London., pp. 205259.
Goffrini P., I. Ferrero & C. Donnini. 2002. Respiration-dependent
utilization of sugars in yeasts: A determinant role for sugar
transporters. Journal of bacteriology, 184(2): 427432.
Gombert A.K., M.M. dos Santos, B. Christensen, et al. 2001. Net-
work identifcation and fux quantifcation in the central
metabolism of Saccharomyces cerevisiae under different
conditions of glucose repression. Journal of Bacteriology,
183: 14411451.
Grbin P.R. 1999. Are indigenous yeast that important to wine produc-
tion?. Australian Grapegrow and Winemaker, 427: 4243.
Gupta A. & G.A. Rao. 2003. Study of oxygen transfer in shake fasks
using a non-invasive oxygen sensor. Biotechnology and
Bioengineering, 84(3): 351358.
Hansen E.H., P. Nissen, P. Sommer, et al. 2001. The effect of oxygen
on the survival of non-Saccharomyces yeasts during mixed
culture fermentations of grape juice with Saccharomyces
cerevisiae. Journal of Applied Microbiology, 91: 541547.
Henschke P.A. & V. Jiranek. 1993. Yeasts-metabolism of nitrogen
compounds. In: G.H. Fleet, eds. Wine Microbiology and
Biotechnology. Harwood Academic Publishers, Langhor-
ne., pp. 77164.
Hilary A. & B. Peddie. 1990. Ester formation in brewery fermenta-
tions. Journal of Institute of Brewing, 96: 327331.
Jacobson M.K. & C. Bernofsky. 1974. Mitochondrial acetaldehyde
dehydrogenase from Saccharomyces cerevisiae. Biochi-
mica et Biophysica Acta, 350: 277291.
Jarvis B., M.J. Forster & W.P. Kinsella. 1995. Factors affecting the
development of cider favour. Journal of Applied Bacte-
riology, 79: 5S18S.
Jarvis B. & A.G.H. Lea. 2000. Sulphite binding in ciders. Internatio-
nal Journal of Food Science and Technology, 35: 113127.
Johnson M.J. 1976. Aerobic microbial growth at low oxygen con-
centrations. Journal of Bacteriology, 94(1): 101108.
Kalathenos P., J.P. Sutherland & T.A. Roberts. 1995. Resistance of
some wine spoilage yeasts to combinations of ethanol and
acids present in wine. Journal of Applied Bacteriology,
78: 245250.
Kruckeberg A.L. 1996. The hexose transporter family of Saccharomy-
ces cerevisiae. Archives of Microbiology, 166: 283292.
Lilly M., M.G. Lambrechts & I.S. Pretorius. 2000. Effect of increased
yeast alcohol acetyltransferase activity on favor profles
of wine and distillates. Applied and Environmental Mi-
crobiology, 66: 744753.
Maier K., H. Hinze & L. Leuschel. 1985. Mechanism of sulfte action
on the energy metabolism of Saccaromyces cerevisiae.
Biochimica et Biophysica Acta, 848: 120130.
Malcorps P., J.M. Cheval, S. Jamil, et al. 1991. A new model for the
regulation of ester synthesis by alcohol acetyltransferase
in Saccharomyces cerevisiae during fermentation. Journal
of the American Society of Brewing Chemists, 49: 4753.
Mangas J.J., C. Cabranes, J. Moreno, et al. 1994. Infuence of cider
making technology on cider taste. Lebensmittel und Wis-
senschaft Technologie, 27: 583586.
Mason A.B. & J.P. Dufour. 2000. Alcohol acetyltransferases and
the signifcance of ester synthesis in yeast. Yeast, 16(4):
12871298.
Mauricio J.C., J. Moreno, L. Zea, et al. 1997. The effects of grape
must fermentation conditions on volatile alcohols and
esters. Journal of the Science of Food and Agriculture,
75: 155160.
Nagodawithana T.W. & K. Steinkraus. 1976. Infuence of the rate
ethanol production and accumulation on the viability of
Saccharomyces cerevisiae in rapid fermentation. Applied
and Environmental Microbiology, 31: 158162.
Nagodawithana T.W., J.T. Whitt & A.J. Cutaia. 1977. Study of the
feedback effect of ethanol on selected enzymes of the
glycolytic pathway. Journal of the American Society of
Brewing Chemist, 35: 179193.
Naito S. 1984. Identifcation of some yeasts isolated from white
spotted cake and some examination of tolerance on sugar
and salt. Annual Report of the Food Research Institute,
Aichi Prefecture (Japan), 7684.
Nieuwoudt H.H., B.A. Prior, I.S. Pretorius, et al. 2002. Glycerol in
South African table wines: an assessment of its relationship
to wine quality. South African Journal of Enology and
Viticulture, 23: 2230.
Nikakhtari H. & G. Hill. 2006. Closure effects on oxygen transfer
and aerobic growth in shake fasks. Biotechnology and
Bioengineering, 95(1): 1521.
Nykanen L. & I. Nykanen. 1977. Production of esters by different
yeast strains in sugar fermentations. Journal of the Institute
of Brewing, 83:3031.
Ortega C., R. Lopez, J. Cacho, et al. 2001. Fast analysis of important
wine volatile compounds: Development and validation of
a new method based on gas chromatography-fame ioniza-
tion detection analysis of dichloromethane micro extracts.
Journal of Chromatography A, 923: 205214.
Ouchi K., Y. Yamamoto, M. Takagishi, et al. 1980. Regulation of
isoamyl alcohol formation via Ehrlich pathway in Saccha-
romyces cerevisiae. Journal of Fermentation Technology,
58: 301309.
Ough C.S., J.F. Guymon & E.A. Crowell. 1966. Formation of higher
alcohols during grape juice fermentation at various tempe-
ratures. Journal of Food Science, 31: 620625.
Picinelli A., B. Suarez, J. Moreno, et al. 2000. Chemical characteri-
zation of Asturian cider. Journal of Agricultural and Food
Chemistry, 48: 39974002.
Pina C., J.A. Couto & T. Hogg. 2004. Inferring ethanol tolerance
of Saccharomyces and non-Saccharomyces yeasts by
progressive inactivation. Biotechnology Letters 26:
15211527.
Plata M.C., J.C. Mauricio, C. Millan, et al. 1998. In vitro specifc
activity of alcohol acetyltransferase and esterase in two
for yeast strains during biological aging of Sherry wines.
Journal of Fermentation and Bioengineering, 85: 369374.
Plata C., C. Millan, J.C. Mauricio. 2003. Formation of ethyl acetate
and isoamyl acetate by various species of wine yeasts. Food
Microbiology, 20: 217 224.
Postma E., C. Verduyn, W.A. Scheffers, et al. 1989. Enzymic analysis
of the Crabtree effect in glucose-limited chemostat cultures
of Saccharomyces cerevisiae. Applied and Environmental
Microbiology, 55: 468477.
Prior B.A. & S. Hohmann. 1997. Glycerol production and osmoregula-
tion. In: F.K. Zimmermann and K.D. Entian, eds. Yeast Sugar
Metabolism. Technomic Publishing, Lancaster., pp. 313337.
Prior B.A., T.H. Toh, N. Jolly, et al. 2000. Impact of yeast breeding
for elevated glycerol production on fermentation activity
and metabolite formation in Chardonnay. South African
Journal of Enology and Viticulture, 21: 9299.
Rapp A. & H. Mandery. 1987. New progress in wine and wine
research. Experientia 42(8): 873884.
334
Escalante et al.
Remize F., J.L. Roustan, J.M. Sablayrolles, et al. 1999. Glycerol
overproduction by engineered Saccharomyces cerevisiae
wine yeast strains leads to substantial changes in byproduct
formation and to a stimulation of fermentation rate in sta-
tionary phase. Applied and Environmental Microbiology,
65: 143149.
Remize F., E. Andrieu & S. Dequin. 2000. Engineering of the
pyruvate dehydrogenase bypass in Saccharomyces cere-
visiae: Role of the cytosolic Mg
2+
and mitochondrial K(+)
acetaldehyde dehydrogenases Ald6p and Ald4p in acetate
formation during alcoholic fermentation. Applied and
Environmental Microbiology, 66: 31513159.
Ribereau-Gayon J., E. Peynaud, P. Ribereau-Gayon, et al. 1975. Trai-
te doenolgie: Sciences et techniques du vin. Dunod, Paris.
Ribereau-Gayon P. 1978. Wine aroma. In: G. Charalambous and G.E.
Inglett, eds. Flavour of Foods and Beverages. Academic
Press, NewYork., pp. 362371.
Ribereau-Gayon P. 1985. New developments in wine microbiology.
American Journal of Enology and Viticulture, 36: 110.
Ribereau-Gayon P., D. Dubourdieu, B. Doneche, et al. 2006a.
Biochemistry of alcoholic fermentation and metabolic
pathways of wine yeasts. In: Handbook of Enology. The
Microbiology of Wine and Vinifcations, (2
nd
edition)
7477 (John Wiley and Sons, Ltd. The Atrium, Southern
Gate, Chichester, England).
Ribereau-Gayon P., D. Dubourdieu, B. Doneche, et al. 2006b. The
use of sulfur dioxide in must and wine treatment. In:
Handbook of Enology. The Microbiology of Wine and
Vinifcations, (2
nd
edition) 193197 (John Wiley and Sons,
Ltd. The Atrium, Southern Gate, Chichester, England).
Ricci M., S. Martini, C. Bonechi, et al. 2004. Inhibition effects
of ethanol on the kinetics of glucose metabolism by S.
cerevisiae: NMR and modelling study. Chemical Physics
Letter, 387(4-6): 377382.
Rojas V., J.V. Gil, F. Pinaga, et al. 2001. Studies on acetate ester pro-
duction by non-Saccharomyces wine yeasts. International
Journal of Food Microbiology, 70: 283289.
Rojas V., J.V. Gil, P. Manzanares, et al. 2002. Measurement of alcohol
acetyltransferase and ester hydrolase activities in yeast
extracts. Enzyme and Microbial Technology, 30: 224230.
Romano P., G. Suzzi, G. Comi, et al. 1992. Higher alcohol and
acetic acid production by apiculate wine yeasts. Journal
of Applied Bacteriology, 73: 126 130.
Romano P. & G. Suzzi. 1993. Higher alcohol and acetoin production
by Zygosaccharomyces wine yeasts. Journal of Applied
Bacteriology, 75: 541545.
Rosenfeld E. & B. Beauvoit. 2003. Role of the non-respiratory
pathways in the utilization of molecular oxygen by Sac-
charomyces cerevisiae. Yeast, 20: 11151144.
Rous C.V., R. Snow & R.E. Kunkee. 1983. Reduction of higher
alcohols by fermentation with a leucine-auxotrophic
mutant of wine yeast. Journal of the Institute of Brewing,
89(4): 274278.
Sa-Correia I. & N. Van Uden. 1983. Temperature profles of ethanol
tolerance: Effects of ethanol on the minimum and maxi-
mum temperature for growth of Saccharomyces cerevisiae
and Kluyveromyces fragilis. Biotechnology and Bioengi-
neering 25: 16651667.
Shin Y.D. & D.H. Cho. 1970. A study on the microfora changes
during takju brewing. Korean Journal of Microbiology,
8: 5354.
Souci S.W., W. Fachmann & H. Kraut. 2000. Juices from fruits and
berries: Food composition and nutrition tables. (6
th
ed.),
Stuttgart: Scientifc publishers., pp. 1352.
Suarez Valles B., R. Pando Bedrinana, N. Fernandez Tascon, et al.
2005. Analytical differentiation of cider inoculated with
yeast (Saccharomyces cerevisiae) isolated fromAsturian
(Spain) apple juice. LWT, 38: 455461.
Su S.K. & R.C. Wiley. 1998. Changes in apple juice favor com-
pounds during processing. Journal of Food Science, 63(4):
688691.
Suomalainen, H. 1981. Yeast esterase and aroma esters in alcoho-
lic beverages. Journal of the Institute of Brewing, 87:
296300.
Swiegers J.H. & I.S. Pretorius. 2005. Yeast modulation of wine
favour. Advances in Applied Microbiology, 57: 131175.
Tabachnick J. & M.A. Joslyn. 1953. Formation of esters of yeast.
I. The production of ethyl acetate by standing surface
cultures of Hansenula anomala. Journal of Bacteriology,
65: 19.
Thomas D.S. 1993. Yeasts as spoilage organisms in beverages. In:
A.H. Rose and J.S. Harrison, eds. The Yeasts (Vol. 5).
Academic Press, New York., pp. 517561.
Tokuoka K., T. Ishitani & W.C. Chung. 1992. Accumulation of po-
lyols and sugars in some sugar-tolerant yeasts. Journal of
General and Applied Microbiology, 38: 3546.
Tolosa L., Y. Kostov, P. Harms, et al. 2002. Noninvasive measure-
ment of dissolved oxygen in shake fasks. Biotechnology
and Bioengineering, 80(5): 594597.
Torija M.J., N. Rozes, M. Poblet, et al. 2001. Yeast population dyna-
mics in spontaneous fermentations: Comparison between
two different wine-producing areas over a period of three
years, Antonie van Leeuwenhoek, 79: 345352.
Torija M.J., G. Beltran, M. Novo, et al. 2003. Effects of fermentation
temperature and Saccharomyces species on the cell fatty
acid composition and presence of volatile compounds in
wine. International Journal of Food Microbiology, 85:
127136.
Valero E., L. Moyano, M.C. Millan, et al. 2002. Higher alcohols
and esters production by Saccharomyces cerevisiae. In-
fuence of the initial oxygenation of the grape must. Food
Chemistry, 78: 5761.
van Dijken J.R., R.A. Weusthuis & J.T. Pronk. 1993. Kinetics of
growth and sugar consumption in yeasts. Antonie van
Leeuwenhoek, 63: 343352.
van Hoek P., J.P. van Dijken & J.T. Pronk. 1998. Effect of spe-
cifc growth rate on fermentative capacity of Bakers
yeast. Applied and Environmental Microbiology 64(11):
42264233.
van Urk H., W.S.L. Voll, W.A. Scheffers, et al. 1990. Transient-
state analysis of metabolic fuxes in Crabtree-positive
and Crabtree-negative yeasts. Applied and Environmental
Microbiology, 56: 281287.
Wang L., Y. Xu, G. Zhao, et al. 2004. Rapid analysis of favor vola-
tiles in apple wine using Headspace Solid-Phase microex-
traction. Journal of the Institute of Brewing, 110(1): 5765.
Westall S. 1999. Characteristics of yeast species by their produc-
tion of volatile metabolites. Journal of Food Mycology,
1: 187201.
Yoshioka K. & N. Hashimoto. 1981. Ester formation by alcohol
acetyltransferase from brewers yeast. Agricultural and
Biological Chemistry, 45: 21832190.
Yoshioka K. & N. Hashimoto. 1984. Acetyl-CoA of brewers yeast
and formation of acetate esters. Agricultural and Biological
Chemistry, 48: 207209.
Zironi R., P. Romano, G. Suzzi, et al. 1993. Volatile metabolites
produced in wine by mixed and sequential cultures of
Hanseniaspora guilliermondii or Kloeckera apiculata and
Saccharomyces cerevisiae. Biotechnology Letters, 15:
235238.
335

Inmunogenicidad del veneno de BoThrops aTrox
ISSN 1561-0837
Inmunogenicidad del veneno de Bothrops atrox (Ophidia: Viperidae) y
su evaluacin por mtodos inmunoenzimticos
Gustavo A. Sandoval
1
, Julio Mendoza
1
, William Roldn
2
, Yrma Espinoza
2
, Hilda
Solis
2
, Armando Yarlequ*
1
Immunogenicity of Bothrops atrox (Ophidia: Viperidae) venom and its eva-
luation by immunoenzymatic methods
1Laboratorio de Biologa Molecular.
Facultad de Ciencias Biolgicas.
Universidad Nacional Mayor de San
Marcos. Lima Per.
2Instituto de Medicina Tropical
Daniel Alcides Carrin. Facultad
de Medicina Humana. Universidad
Lima - Per.
*Correspondencia: Dr. Armando
Yarlequ, Laboratorio de Biologa
Molecular, Facultad de Ciencias
Biolgicas, Universidad Nacional
Mayor de San Marcos, apartado
postal 110058, Lima 11, Per.
E-mail: ayarleque48@gmail.com
Resumen
Se estudi la inmunogenicidad del veneno de la serpiente Bothrops atrox, jergn, utilizando los mtodos
inmunoenzimticos de ELISA y Western Blot, as como los patrones de reactividad cruzada empleando los
venenos de las serpientes Bothrops brazili, Lachesis muta y Crotalus durissus. Para este fn se inmunizaron
conejos albinos Nueva Zelanda (2 kg aprox) con cuatro dosis de 500 g del veneno de B. atrox en un periodo
de 90 das. La produccin de anticuerpos fue monitoreada mediante la tcnica de ELISA, determinndose
el ttulo del suero hiperinmune obtenido al fnal del protocolo de inmunizacin. Adicionalmente se analizaron
los patrones electroforticos de los venenos en estudio mediante PAGE-SDS y su reactividad frente al suero
obtenido mediante ELISA y Western Blot. El esquema de inmunizacin utilizado permiti una produccin sos-
tenida de anticuerpos a partir del da 20 del protocolo. Finalizado este proceso, el ttulo del suero fue calculado
en 256000, lo cual mostr la efcacia y practicidad del procedimiento desarrollado. Por otro lado, los venenos
estudiados mostraron una heterogeneidad en su composicin proteica a partir del anlisis de sus patrones
electroforticos, mientras que a partir de los estudios inmunoenzimticos, se pudo obtener valores de reactivi-
dad cruzada entre el veneno de B. atrox y los venenos de B. brazili, L. muta y C. durissus, de 23,7%, 4,0% y
1,8%, respectivamente. Los resultados obtenidos constituyen el paso inicial para posteriores ensayos dirigidos
a la optimizacin en la produccin de inmunosueros para el tratamiento del envenenamiento, as como para el
desarrollo de kits de diagnstico e identifcacin de especies de serpiente.
Palabras claves: inmunogenicidad, veneno, Bothrops atrox, ELISA, Western Blot, reactividad cruzada.
Abstract
The immunogenicity of Bothrops atrox, jergn, venom was studied using ELISA and Western Blot methods,
as well as cross-reactivity patterns against venoms of Bothrops brazili, Lachesis muta and Crotalus durissus.
For this purpose, New Zealand white rabbits (2 kg aprox) were immunized with four 500 g doses of B. atrox
venom in a period of 90 days. Antibody production was followed using ELISA technique, and title of hiper-immune
serum was determined at the end of immunization protocol. Additionally, electrophoretic patterns of venoms were
analyzed by SDS-PAGE and venom reactivity against obtained serum by ELISA and Western Blot. Immuniza-
tion schedule allowed a pronounced antibody production since day 20 of protocol. At the end of process, serum
title was 256000, which demonstrated both effcacy and usefulness of the developed procedure. On the other
hand, studied venoms showed a heterogenic protein composition according to their electrophoretic patterns,
whereas cross-reactivity values of 23,7%, 4,0% and 1,8% were obtained between B. atrox venom and B. brazili,
L. muta and C. durissus venoms, respectively, using immunoenzymatic methods. According to our results, this
procedure constitutes an initial step for further assays directed to optimization in immunoserum production for
envenoming treatment and development of kits for diagnosis and species identifcation of snakes.
Keywords: immunogenicity, venom, Bothrops atrox, ELISA, Western Blot, cross-reactivity.
Introduccin
Los venenos de serpientes son mezclas complejas de sustan-
cias, principalmente protenas, producidas por una glndula
sero mucosa, e inoculados mediante un aparato especializado
compuesto por colmillos acanalados los cuales ingresan por
presin en los tejidos. Debido a su accin txica, estas pro-
tenas han sido clasifcadas como miotoxinas, hemorraginas,
nefrotoxinas, neurotoxinas y toxinas coagulantes; sin embargo,
debido a su variada accin farmacolgica y a sus propiedades
farmacocinticas, Chippaux y Goyfon (1998) agruparon estas
sustancias en dos categoras: a) toxinas, que son polipptidos
con un peso molecular menor a 30 kDa, abundantes en los
venenos de serpientes de la familia Elapidae; y b) enzimas, las
cuales poseen un peso molecular mayor a 30 kDa y constituyen
el componente principal del veneno de serpientes de la familia
Viperidae.
Las ponzoas procedentes de la familia Viperidae causan
principalmente hemorragia, edema, mionecrosis y disturbios
en la coagulacin, siendo la incidencia mundial anual de mor-
dedura por serpientes de 5 millones de habitantes (Chippaux
y Goyfon, 1991) con clculos de muertes estimados entre 60
a 80 mil (Warrell, 1996). Por ello, el ofdismo constituye un
problema de salud pblica para los pases que cuentan con
una fauna ponzoosa muy variada, tal como ocurre en el Per
(Yarlequ 2000).
En nuestro pas, las mordeduras por serpientes se producen
en su mayora en las zonas silvestres de selva alta y baja y en
numerosos reportes se consigna a los especmenes de la familia
Viperidae como las principales agresoras (Lvano & Fernndez
2004). Dentro de stas, se considera a la especie Bothrops atrox
jergn como la ms comn para la zonas selvticas, B. brazili
jergn shushupe localizada principalmente en la selva norte,
Lachesis muta shushupe, que habita diversas regiones de la selva
amaznica y Crotalus durissus cascabel restringida al valle de
Sandia, provincia de Puno. De estas serpientes, es de especial
inters la especie B. atrox por ser la serpiente de mayor peligro y
la causante entre el 88 y 92% de accidentes ofdicos registrados
en el pas (Loja, 2000).
336
Sandoval et al.
Frente al envenenamiento ofdico, la seroterapia es la nica
alternativa especfca para contrarrestar su accin, por ello se
producen antivenenos mediante hiperinmunizacin de animales
seroproductores (por ejemplo, caballos, ovejas, cabras, etc.),
usando venenos de especies de serpientes taxonmicamente
cercanas (Teakston et al. 2003). A pesar de la efectividad en
el tratamiento, se pueden presentar reacciones alrgicas tardas
producto de la inoculacin del antiveneno. En el caso de los
antivenenos producidos en el Per, el Instituto Nacional de
Salud elabora un antiveneno botrpico polivalente mediante
la inoculacin de caballos con una mezcla de venenos de las
serpientes B. atrox, B. brazili, B. pictus, B. barnetti y B. hyo-
prora, el cual resulta efectivo en la neutralizacin de los daos
locales producidos durante el envenenamiento, pero presenta
propiedades limitadas para reducir el edema y la necrosis (Rojas
et al. 2005). As, se requiere de un mejor conocimiento de las
propiedades inmunognicas de los componentes proteicos de los
venenos de serpientes, la cual puede lograrse con la aplicacin
de tcnicas inmunoenzimticas como el anlisis por Western
Blot y el ELISA (EnzymeLinked Immunosorbent Assay), en las
cuales la reactividad de un antgeno es valorada cualitativa y
cuantitativamente.
Por este motivo, en el presente trabajo se ha realizado un
estudio de la inmunogenicidad del veneno de la serpiente Bo-
throps atrox (Linnaeus, 1758), y luego se evalu la reactividad
cruzada del suero hiperinmune producido contra los venenos
de otras serpientes peruanas de la familia Viperidae, mediante
tcnicas inmunoenzimticas. Estos resultados contribuirn al
mejoramiento de la calidad de los antivenenos polivalentes
comerciales producidos en el Per.
Materiales y mtodos
Material biolgico.- Se emple el veneno de la serpiente
Bothrops atrox obtenido a partir de ejemplares procedentes de
Pucallpa Ucayali y mantenidos en el Serpentario Oswaldo
Meneses Museo de Historia Natural UNMSM. El veneno
fue extrado por presin manual, despus lioflizado y mantenido
a 4 C hasta su uso. Para evaluar la reactividad cruzada se em-
plearon venenos de las especies: B. brazili, L. muta y C. durissus,
procedentes de ejemplares mantenidos en el mismo serpentario.
Para la obtencin del suero hiperinmune se emplearon cone-
jos albinos machos Nueva Zelanda (2,5 kg de peso aprox.), los
cuales fueron mantenidos en el Instituto de Medicina Tropical
Daniel Alcides Carrin de la Universidad Nacional Mayor de
San Marcos.
Cuantifcacin de protenas.- La cantidad de protena
fue calculada midiendo la absorbancia de luz UV a 280 nm
(Warburg & Christian 1944) y por el mtodo de Lowry et al.
(1951) modifcado en nuestro laboratorio (Loayza et al. 1985)
empleando albmina srica bovina como protena estndar.
Protocolo de inmunizacin.- El veneno crudo de B. atrox (1
mg/mL) preparado en PBS, fue emulsifcado con un volumen
equivalente de Adyuvante Completo de Freund (CFA) e inyec-
tado por va intradrmica, en cada uno de los conejos albinos en
volmenes de 0,25 mL seleccionando cuatro lugares del dorso.
Luego de 10 das se aplicaron tres dosis de refuerzo preparadas
en Adyuvante Incompleto de Freund (IFA) a intervalos de 30
das. Diez das despus de aplicada cada dosis de refuerzo, se
extrajo sangre a partir de la vena marginal de la oreja y al fnali-
zar el protocolo de inmunizacin, la sangre se obtuvo mediante
puncin cardiaca, a fn de evaluar la presencia de anticuerpos
reactivos en el suero contra el veneno en estudio.
Deteccin de anticuerpos contra el veneno de B. atrox
y clculo del ttulo de anticuerpos.- Se realiz mediante la
tcnica de ELISA (Engvall & Perlmann 1971), siguiendo el
mtodo de titulacin a punto fnal (Alzamora et al. 2002). Para
ello se emplearon placas de 96 pocillos (Nunc ImmunoTM,
Dinamarca) cubiertas con 100 L/pocillo de veneno de B. atrox
(0,25 g/mL) disuelto en bufer de cubierta (carbonato de sodio
0,015 M; bicarbonato de sodio 0,035 M; pH 7,6), durante una
noche a 4 C. Despus de tres lavados sucesivos empleando bufer
de lavado (NaCl 0,15 M, Tween-20 0,05%), se aplic en los
pocillos bufer de bloqueo (leche descremada al 3%, Tween-20
0,05% en PBS pH 7,4) por 1 h a 37 C. Luego de tres lavados, se
aplicaron 100 L/pocillo de suero de conejo obtenido a los das
0, 10, 40, 70, as como al fnal del protocolo de inmunizacin
(da 90), diluido seriadamente con factor 2 a partir de 1/1000
en el bufer de bloqueo, e incubados durante 1 h a 37 C. Las
placas fueron lavadas nuevamente y los anticuerpos unidos fue-
ron detectados empleando anti-IgG de conejo conjugado con
fosfatasa alcalina (1/4000 en bufer de bloqueo) seguido de la
adicin del sustrato respectivo (100 L/pocillo de p-nitrofenil
fosfato disuelto en bufer Tris). Despus de 30 min a 20 22
C, la reaccin se detuvo mediante la adicin de 50 L/pocillo
de NaOH 3 M registrndose la absorbancia a 405 nm en un
lector de placas Titertek Multiskan PLUS MKII. El ttulo del
suero correspondi a la inversa de la dilucin del mismo que
produjo un 50% de la mxima absorbancia registrada.
Evaluacin de la reactividad cruzada entre el suero anti-B.
atrox y otros venenos de serpientes peruanas.- La reactividad
cruzada del suero anti-B. atrox contra los venenos de B. brazili,
L. muta y C. durissus fue evaluada mediante la tcnica de ELISA
para lo cual se emplearon placas de 96 pocillos cubiertas con
100 L/pocillo de los respectivos venenos (0,25 g/mL). Luego
se siguieron los pasos establecidos en el procedimiento anterior,
empleando el mismo suero de conejo diluido a partir de 1/1000.
La reactividad cruzada fue expresada como porcentaje de las den-
sidades pticas resultantes de la reaccin entre los mencionados
venenos y el suero anti-B. atrox considerando como 100% el
valor de absorbancia obtenido entre el veneno de B. atrox y su
respectivo suero a una dilucin equivalente al ttulo obtenido.
Anlisis electrofortico de los venenos en estudio.- Los
venenos en estudio (20 25 g) fueron tratados con bufer de
muestra bajo condiciones no reductoras (Tris HCl 0,05 M,
pH 6,8; SDS 2%, azul de bromofenol 0,1%, glicerol 10%) du-
rante 5 min a 100 C para luego ser sometidos a PAGE SDS
al 12% durante 1 h a 100 voltios constantes (Laemmli 1970).
Se utilizaron como protenas patrones de peso molecular: fosfo-
rilasa b (97 kDa), albmina (66 kDa), ovoalbmina (45 kDa),
anhidrasa carbnica (29 kDa), inhibidor de tripsina (20,1 kDa)
y lisozima (14,3 kDa). Despus de la corrida, los geles fueron
teidos con azul de Coomassie R-250 0,1% durante 2 h y lavados
con solucin decolorante conteniendo metanol, cido actico y
agua (4:3:4) hasta evidenciar las bandas proteicas.
Anlisis por Western Blot.- Los venenos en estudio (10
15 g) separados previamente mediante PAGE SDS, fueron
transferidos a membranas de polifuoruro de vinilideno (PVDF)
en bufer de transferencia (Tris 0,02 M, pH 8,3; glicina 0,192
337

M, SDS 0,1%, metanol 20%) durante 50 min a 100 voltios
(Towbin et al. 1979). Las membranas fueron bloqueadas usando
el bufer respectivo (leche descremada al 5% en Tris-HCl 0,02
M, NaCl 0,15 M, pH 7,5, Tween-20 1%) durante una noche a
4 C. Despus se procedi al lavado con bufer de lavado (NaCl
0,15 M, Tween-20 0,05%) y luego las membranas fueron en-
frentadas con el suero hiperinmune de conejo (1/1000) diluido
en bufer de bloqueo. Luego de 1 h de exposicin a 20 22 C,
las membranas fueron lavadas nuevamente y esta vez expuestas
a anti-IgG de conejo ligada a fosfatasa alcalina (1/4000) durante
1 h a 20 22 C, para luego de lavados sucesivos incubarlas
con una solucin de revelado (NBT [nitro-azul tetrazolio] y
BCIP [bromo-cloro indolil sulfato] en bufer Tris-HCl 0,1 M;
NaCl 0,1 M; MgCl
2
0,005 M; pH 9,5). Posteriormente, las
membranas fueron sumergidas en agua destilada para detener
el desarrollo de color y fnalmente se procedi al anlisis visual
de los patrones de reactividad del suero hiperinmune, obtenido
experimentalmente contra los diferentes venenos.
Resultados
Deteccin y ttulo de anticuerpos contra el veneno de
B. atrox.- Se realiz el seguimiento de la respuesta inmune de
los conejos albinos mediante la tcnica de ELISA desde el da
0 hasta el da 90 del protocolo de inmunizacin (Fig. 1). Los
resultaron muestran los niveles de produccin de anticuerpos
IgG especfcos contra el veneno de B. atrox, los cuales alcanzan
su mximo valor despus de la tercera dosis de refuerzo (da 70),
y se mantuvieron hasta el fnal del protocolo de inmunizacin.
Asimismo, el ttulo de anticuerpos anti-B. atrox en el suero
obtenido al fnal del protocolo de inmunizacin correspondi
al valor de 256000 (Fig. 2).
Reactividad cruzada determinada por ELISA.- Al evaluarse
la reactividad de los cuatro venenos en estudio contra el suero
hiperinmune anti-B. atrox mediante la tcnica de ELISA; se
alcanzaron diversos valores de densidad ptica a 405 nm, donde
el mximo valor correspondi a la reaccin entre el veneno de
B. atrox y su correspondiente suero (Fig. 3). Adems, se observ
que el suero reaccion de forma cruzada con los otros venenos
de serpientes, pero con diferente intensidad, siendo los valores
de reactividad cruzada para los venenos de B. brazili, L. muta y
C. durissus, de 23,7, 4,0 y 1,8%, respectivamente.
Comparacin de los perfles de veneno de serpiente me-
diante PAGE-SDS.- La Figura 4a muestra los patrones proteicos
obtenidos para los venenos de B. atrox, B. brazili, L. muta y C.
durissus mediante PAGE SDS en condiciones no reductoras.
En todos los casos, se detect un mnimo de 10 bandas proteicas,
observndose que cada veneno presenta un patrn caractersti-
co. Adems se pudieron detectar varios componentes de pesos
moleculares similares en todos los venenos dentro del rango de
14,3 y 66 kDa. Sin embargo tambin se visualizaron bandas
especfcas entre los 25 y 60 kDa especialmente en el veneno
de B. atrox. En el caso del veneno de B. brazili se distinguieron
protenas en el rango de 30 a 45 kDa y componentes de bajo peso
molecular alrededor de los 14,3 kDa. Para el veneno de L. muta
se pudieron apreciar bandas proteicas en un rango mucho mayor
(14,3 97 kDa) donde las ms abundantes se concentraron en
el rango de los 30 kDa. En cambio, para el caso del veneno de
C. durissus se observaron bandas mayormente agrupadas en el
rango de los 14,3 a 30 kDa.
Reactividad cruzada determinada por Western Blot.- La
Figura 4b muestra que el suero anti B. atrox reaccion con los
Figura 1. Deteccin de IgG anti-B. atrox en el suero de conejos
inmunizados mediante la tcnica de ELISA.
Figura 2. Determinacin del ttulo de anticuerpos contra el veneno
de B. atrox.
Figura 3. Evaluacin de la reaccin inmunolgica cruzada del suero
anti-B. atrox con otros venenos de serpientes peruanas mediante la
tcnica de ELISA.
338
Sandoval et al.
componentes proteicos de los venenos de B. atrox, B. brazili,
L. muta y C. durissus lo cual se evidencia por la formacin de
bandas coloreadas. Para el caso del veneno de B. atrox se obtuvo
una intensa reactividad comprendiendo bandas en el rango de
14,3 a 97 kDa, lo cual indica que la mayora de sus componentes
son inmunognicos. Por otro lado el suero reaccion de forma
cruzada con los componentes del veneno de B. brazili abarcan-
do un rango de pesos moleculares similar al anterior, pero con
menor intensidad y a su vez mostrando un nmero menor de
bandas coloreadas. Los venenos de L. muta y C. durissus reac-
cionaron con menor intensidad frente al suero anti-B. atrox,
donde la reactividad de este ltimo se limit a componentes
alrededor de los 66 kDa y a otros comprendidos en el rango de
14,4 a 20,1 kDa.
Discusin
Los venenos de serpientes peruanas han sido durante muchos
aos, objeto de estudio mediante el empleo de herramientas
bioqumicas dirigidas principalmente al anlisis de su actividad
enzimtica, tanto en sistemas in vitro como su actividad biol-
gica mediante el empleo de animales de experimentacin, cuyos
efectos semejan a los mostrados por las personas envenenadas
(Yarlequ 2000). Como resultado de estos estudios, se ha po-
dido clasifcar a estos venenos como proteolticos, coagulantes,
hemorrgicos, nefrotxicos, neurotxicos y miotxicos, lo cual
se puede correlacionar con la sintomatologa manifestada por
las personas accidentadas producto de la mordedura de estos
animales (Lvano & Fernndez 2004).
La principal herramienta teraputica contra estos accidentes
es el empleo de antivenenos producidos en caballos, ovejas,
cabras y conejos, elaborados con sueros obtenidos a partir de la
inoculacin de estos animales con el veneno de las serpientes
de mayor importancia en salud pblica de un pas, tomando
como punto de partida la incidencia de su mordedura en una
determinada poblacin (Teakston et al. 2003). En Per, el
Instituto Nacional de Salud, mediante el Centro Nacional de
Productos Biolgicos, es el encargado de elaborar diferentes tipos
de antivenenos como el botrpico polivalente (el cual utiliza
los venenos de B. atrox jergn de la selva, B. brazili jergn
shushupe, B. pictus jergn de la costa, B. barnetti macanche
y B. hyoprora jergn), el laqusico monovalente (empleando
el veneno de L. muta shushupe) y el crotlido monovalente
(obtenido a partir del veneno de C. durissus cascabel sudameri-
cana). A pesar de la efectividad mostrada por estas preparacio-
nes biolgicas en el tratamiento de mordeduras ofdicas, existe
escasa informacin sobre las caractersticas inmunoqumicas de
los venenos utilizados para su produccin, por lo que resulta
crucial estudiar la potencial reactividad inmunolgica cruzada
presente entre estos venenos a fn de optimizar la produccin de
tales inmunobiolgicos, as como para el desarrollo de sistemas
de deteccin de venenos para la identifcacin de la especie de
serpiente responsable de un envenenamiento a fn de seguir el
tratamiento apropiado (Van Dong et al. 2003).
Para la produccin de anticuerpos se siguen diversos esquemas
o protocolos de inmunizacin, los cuales consideran diferentes
parmetros para su desarrollo (Christensen 1979); entre ellos se
considera el tiempo necesario para obtener un ttulo aceptable
de anticuerpos, la edad del animal inmunizado y el empleo de
adyuvantes. Adems se debe tener en cuenta la naturaleza del an-
tgeno y su toxicidad, as como la del antiveneno que se pretende
producir (Heneine & Heneine 1998). En el presente estudio se
utilizaron conejos albinos de raza Nueva Zelanda como animales
de experimentacin, los cuales fueron inmunizados con una
cantidad de veneno de B. atrox que se encuentra por debajo del
valor de toxicidad (DL50) reportado (Laing et al. 2004, Rojas
et al. 2005) por lo que no se observaron reacciones secundarias
en los animales que pudieran interferir con la produccin de
anticuerpos. A fn de garantizar la produccin de altos ttulos de
Figura 4. Anlisis electrofortico de los venenos en estudio y su reactividad cruzada con el suero anti-B. atrox determinada mediante Western
Blot. (A) Venenos de las serpientes B. atrox (1), B. brazili (2), L. muta (3) y C. durissus (4) (2025 g) fraccionados mediante PAGESDS
y teidos con azul brillante de Coomassie. (B) Venenos de las serpientes B. atrox (1), B. brazili (2), L. muta (3) y C. durissus (4) (1015 g)
transferidos a membranas de PVDF e incubadas con suero antiB. atrox (1/1000). Se visualizan los inmunocomplejos formados utilizando
antiIgG de conejo conjugado con fosfatasa alcalina (1/4000).
339

anticuerpos en el suero, el veneno fue emulsifcado previamente
con adyuvante completo de Freund (CFA) para la inmunizacin
primaria y adyuvante incompleto de Freund (IFA) para las
dosis de refuerzo, co-adyuvantes ampliamente utilizados por su
capacidad de localizar a los antgenos en la zona de inoculacin
durante un periodo de tiempo prolongado. La efcacia de este
mtodo puede ser monitoreada por diversos mtodos inmuno-
qumicos tales como inmunodifusin, inmunoelectroforesis,
inmunofuorescencia, hemaglutinacin, radioinmunoensayo
(RIA), etc. (Teakston 1983). Sin embargo, se ha encontrado
que la tcnica de ELISA es el mtodo ms usado para la deteccin
especfca de venenos de serpientes y sus respectivos anticuerpos
(Selvanayagam & Gopalakrishnakone 1999). La respuesta in-
mune de los conejos inoculados fue monitoreada mediante la
tcnica de ELISA (Fig. 1) donde el aumento de la absorbancia a
405 nm, indica el aumento en la cantidad de inmunocomplejos
formados producto del reconocimiento entre el antgeno y los
anticuerpos IgG especfcos presentes en el suero de los conejos
inmunizados. A partir de estos resultados se considera que el
procedimiento empleado resulta prctico, efciente y de corta
duracin, convirtindolo en un mtodo til para la obtencin
de anticuerpos contra el veneno de B. atrox.
Para la obtencin del ttulo de los antivenenos estudiados
existen diversos mtodos, siendo el ms til el de la titulacin
a punto fnal (Alzamora et al. 2002). Este mtodo consiste en
analizar los sueros problema en diluciones seriadas con factor 2
partiendo de una dilucin inicial fja. En nuestro esquema expe-
rimental se eligi como ttulo la dilucin de suero que produce
un 50% de la absorbancia mxima, siendo el ttulo anti-B. atrox
correspondiente al valor de 256000 (Fig. 2), el cual muestra que
el veneno analizado es altamente inmunognico. En el caso de
los venenos de serpientes y los protocolos de inmunizacin para
la obtencin de anticuerpos especfcos, se considera que el ttulo
de anticuerpos para un antiveneno es alto cuando su valor es
mayor a 32000 (Van Dong et al. 2003). Sin embargo tambin se
han observado ttulos que alcanzan valores de 2048000 para los
venenos de B. atrox y L. muta provenientes de Brazil (Colombini
et al. 2001). Si bien estos valores estn muy por encima de los
hallados en la presente investigacin, hay que tener en cuenta el
tipo de conjugado empleado en ambos tipos de ensayos, el cual
basa la sensibilidad de su deteccin en la enzima acoplada que
realiza la hidrlisis del sustrato respectivo. En el presente trabajo
se utiliz un conjugado acoplado a la enzima fosfatasa alcalina el
cual reaccion sobre el sustrato p-nitrofenil fosfato para dar una
coloracin amarilla cuya absorbancia es registrada a 405 nm.
A fn de realizar un anlisis comparativo de los venenos de
serpientes en estudio: B. atrox, B. brazili, L. muta y C. durissus,
se analiz el patrn electrofortico de sus protenas mediante
PAGE SDS en condiciones no reductoras (Fig. 4a). En el caso
del veneno de B. atrox se pueden observar bandas especfcas
entre los 25 y 60 kDa, las cuales corresponderan a protenas
tales como la miotoxina (27 kDa; Huatuco et al. 2004) y la
L-aminocido oxidasa (60 kDa; Lazo et al. 2007). As mismo
podra notarse la presencia de la atroxina, una metaloproteinasa
dependiente de Ca2+, principal responsable del efecto proteo-
ltico y hemorrgico de este veneno (19,9 kDa, Pantigoso et al.
1996). En el perfl electrofortico del veneno de B. brazili, se
distinguen bandas proteicas dentro del rango de 30 a 45 kDa
que corresponderan a la miotoxina (30 kDa, Pantigoso et al.
2001), incluyendo una L-aminocido oxidasa (59,9 kDa, Solis
et al. 1999). Adems de las protenas mencionadas, se pueden
distinguir componentes de bajo peso molecular como es el caso
para una fbrinogenasa (22 kDa, Azaero et al. 2000) y una
fosfolipasa A2 (21,2 kDa, Zeballos et al. 1999) previamente
reportadas. Ambos venenos tuvieron un nmero similar de
componentes, si bien la distribucin de bandas de sus perfles
electroforticos es claramente diferente. Con respecto al patrn
de bandas para el veneno de L. muta, ste presenta un rango
mucho mayor abarcando protenas desde los 14,4 kDa hasta
los 97 kDa como se ha reportado para el caso de la fosfolipasa
A2 (19,2 kDa, Mejia et al. 2006), la proteinasa I (25,1 kDa,
Rodriguez & Yarlequ 1991), la enzima similar a trombina (40,0
kDa, Yarlequ et al. 1989) y la L-aminocido oxidasa (60,6 kDa,
Cisneros et al. 2006). En el caso del veneno de C. durissus, se
observa un menor nmero de bandas, donde las protenas se
encuentran agrupadas en el rango de 14,4 a 30 kDa, sin embargo
slo se ha reportado la presencia de ciertas actividades enzim-
ticas como la proteoltica, amidoltica, coagulante, fosfolipasa
A2 y L-aminocido oxidasa (Remuzgo et al. 2000). A partir de
este anlisis, los componentes de los venenos en estudio pueden
dividirse en dos grupos basados en sus pesos moleculares; por
un lado los de alto y mediano peso molecular (mayor a 15 kDa)
y por otro los de bajo peso molecular (menor a 15 kDa). Esta
heterogeneidad en los perfles obtenidos ha sido reportada para
venenos de otras especies sudamericanas, como B. alternatus, B.
atrox, B. cotiara, B. erythromelas, B. jararaca, B. jararacussus, B.
moojeni, B. neuwiedi y B. pradoi de Brazil (da Silva et al. 1990);
centroamericanas, incluyendo a L. muta stenophrys y C. durissus
durissus de Costa Rica (Anderson et al.1993); norteamericanas
como C. atrox, C. viridis viridis, C. adamanteus y C. horridus
horridus (Ownby & Colberg 1990) y asiticas como Naja naja
siamensis, Ophiophagus hannah, Bungarus fasciatus, Vipera russelli,
Calloselasma rhodostoma y Trimeresurus albolabris (Chinonavanig
et al. 1988).
Para el anlisis de la reactividad inmunolgica de los venenos
de serpientes estudiados contra el suero anti-B. atrox, se emple
en primer lugar el mtodo de ELISA. Mediante esta tcnica
se pudo determinar que los anticuerpos presentes en el suero
hiperinmune reaccionaron con los venenos de serpientes, donde
la densidad ptica ms fuerte fue la obtenida entre el veneno
de B. atrox y su antiveneno homlogo (Fig. 3). En estos expe-
rimentos de titulacin, se pudo observar tambin reactividad
cruzada con los otros venenos de serpientes, donde el mayor
valor correspondi a la reaccin del suero hiperinmune con
el veneno de B. brazili, seguido por ttulos bajos contra los
venenos de L. muta y C. durissus. Estos resultados indican que
los venenos en estudio contienen protenas estructuralmente
relacionadas con los componentes del veneno de B. atrox, los
cuales varan tanto en intensidad como en abundancia. Estos
resultados deben ser correlacionados con los de otros mtodos
inmunoenzimticos, siendo el ms idneo el de Western Blot (Li
& Ownby 1994), ya que si slo se utiliza un mtodo para este
tipo de anlisis, se podra llegar a conclusiones e interpretaciones
errneas sobre la reactividad entre los venenos y antivenenos
(Siigur et al. 2000). Por esta razn se evalu de forma adicional
la inmunogenicidad de los componentes de los venenos en
estudio utilizando el ensayo de Western Blot, el cual consiste
en primer lugar en la separacin de los componentes proteicos
del veneno mediante PAGE SDS, para luego ser transferidos
a membranas de nitrocelulosa y puedan as ser detectadas por
340
Sandoval et al.
los anticuerpos presentes en el suero hiperinmune obtenido. De
este modo, la formacin de inmunocomplejos es detectada de
forma similar que en un ELISA indirecto. La Fig. 4b muestra el
patrn caracterstico de coloracin de bandas correspondiente
a los componentes inmunorreactivos de los venenos en estudio
analizados previamente por PAGE SDS (Fig. 4a). Esta meto-
dologa permite la visualizacin directa y la comparacin de la
reaccin de un mismo suero con los componentes del veneno
homlogo y los venenos heterlogos bajo las mismas condi-
ciones. De esta manera se pudo observar que las protenas de
los venenos reaccionaron con el suero hiperinmune producido
contra el veneno de B. atrox lo cual indica que la mayor parte de
los componentes proteicos son potencialmente inmunognicos.
Estos resultados pueden correlacionarse con los de Chinonavanig
et al. (1988), quien trabajando con el veneno de serpientes de
Tailandia, encontr que los componentes de alto peso molecular
fueron inmunognicos, donde adems otros componentes de
menor peso molecular tambin lo fueron. En los dems carriles
se pudo observar una reactividad inmunolgica cruzada entre
los anticuerpos del suero hiperinmune con las protenas de los
venenos de B. brazili (carril 2), L. muta (carril 3) y C. durissus
(carril 4). La mayora de estas bandas de reaccin correspon-
den a protenas de alto y mediano peso molecular y con una
elevada inmunorreactividad. Tales reacciones cruzadas entre
los venenos de vipridos han sido descritas antes para el caso
de un antiveneno anti-C. atrox y los venenos de C. adamenteus,
C. h. horridus y C. v. viridis de norteamerica (Minton 1979).
En nuestro estudio, se obtuvieron resultados mediante ELISA,
pero con esta tcnica no se pudieron determinar los componen-
tes especfcos que contribuyen a la reactividad cruzada. En el
caso del veneno de B. brazili (Fig. 6b, carril 2), las reacciones
cruzadas ocurren con una intensidad casi similar a la del veneno
homlogo, lo que indicara un alto grado de conservacin en
la estructura de sus protenas con las del veneno de B. atrox lo
cual se correlaciona con los datos obtenidos por ELISA. Para
el veneno de L. muta (Fig. 6b, carril 3), la mayor reactividad se
concentr en componentes de alto y mediano peso molecular
(20 60 kDa), donde se encuentran agrupados componentes
como proteasas y otras toxinas hemorrgicas. Finalmente, el
veneno de C. durissus (Fig. 6b, carril 4), reaccion pobremente
con el antiveneno, donde la mayor reactividad se concentr en
un componente de alto peso molecular (>66 kDa) que podra
corresponder a su L-aminocido oxidasa.
En el desarrollo de pruebas de inmunodiagnstico para
identifcacin rpida de la especie responsable de un envene-
namiento, los componentes del veneno que reaccionan cruza-
damente podran dar lugar a ambigedad o inclusive error en
el diagnstico (Marshall & Herrmann 1984, McCarthy 1984,
Ho et al. 1986). Los anticuerpos producidos contra el veneno
de B. atrox mostraron una reactividad cruzada con los tres
venenos heterlogos, por lo que sera necesaria la preparacin
de anticuerpos especfcos de especie como paso preliminar en
el desarrollo del kit de diagnstico. Una aproximacin para la
obtencin de tales anticuerpos ha sido reportada en el trabajo de
Sandoval et al. (2006), donde utilizando columnas de afnidad
con el veneno inmovilizado de B. atrox se pudieron capturar
los anticuerpos IgG especfcos a partir del suero hiperinmune.
Queda por analizar si estos anticuerpos reaccionan de forma
cruzada o no contra otros venenos de serpientes empleando las
tcnicas descritas en este trabajo.
Agradecimientos
El presente trabajo fue desarrollado gracias al apoyo recibido
en marco del Convenio frmado entre la Universidad Nacional
Mayor de San Marcos (Per) y las Universidad de Liverpool y
Oxford (Inglaterra).
Literatura citada
Alzamora L., E. Colona, M. Vizcarra. 2002. Manual de prcticas de
inmunoserologa. Primera Edicin. Universidad Nacional
Mayor de San Marcos. Facultad de Ciencias Biolgicas.
Anderson S.G., J.M. Gutierrez & C.L. Ownby. 1993. Comparison
of the immunogenicity and antigenic composition of ten
Central American snake venoms. Toxicon 31(8):1051 9.
Azaero A., E. Escobar & A. Yarlequ. 2000. Purifcacin de una
enzima proteoltica del veneno de Bothrops brazili y es-
tudio de su actividad sobre fbringeno. Revista Peruana
de Biologa. 7(1): 55-66.
Chinonavanig L., P.B. Billings, P. Matangkasombut & K. Ratana-
banangkoon. 1988. Antigenic relationships and relative
immunogenicities of venom proteins from six poisonous
snakes of Thailand. Toxicon 26(9):883 90.
Chippaux J.P. & Goyffon M. 1998. Venoms, antivenoms and immu-
notherapy. Toxicon 36(6):823 46.
Chippaux J.P., V. Williams & J. White. 1991. Snake venom variabi-
lity: methods of study, results and interpretation. Toxicon
29(11):1279 303.
Christensen P.A. 1979. Production and standardization of antivenin.
In: Lee, C.Y. (Ed.). Handbook of Experimental Pharmaco-
logy, vol. 52. Springer, Berlin, pp. 825 47.
Cisneros Y., F. Lazo, S. Gutierrez, A. Yarlequ. 2006. Caracters-
ticas bioqumicas de una protena antibacteriana aislada
del veneno de Lachesis muta Shushupe. Rev Soc Quim
Per 72(4):187 96.
Colombini M., I. Fernandes, D.F. Cardoso & A.M. Moura da
Silva. 2001. Lachesis muta muta venom: immunolo-
gical differences compared with Bothrops atrox venom
and importance of specifc antivenom therapy. Toxicon
39(5):711 9.
da Silva A.M., M.R. Lima, A.K. Nishikawa, et al. 1990. Antigenic
cross reactivity of venoms obtained from snakes of genus
Bothrops. Toxicon.;28(2):181 8.
Engvall E. & P. Perlman. 1971. Enzyme linked immunosorbent
assay (ELISA). Quantitative assay of immunoglobulin G.
Immunochemistry 8(9):871 4.
Heneine I.F. & L.G. Heneine. 1998. Stepwise iodination. A general
procedure for detoxifcation of proteins suitable for vac-
cine development and antiserum production. Biologicals
26(1):25 32.
Ho M., M.J. Warrell, D.A. Warrell, D. Bidwell, A. Voller. 1986.
A critical reappraisal of the use of enzyme linked im-
munosorbent assays in the study of snake bite. Toxicon
24(3):211 21.
Huatuco S., E. Escobar, A. Yarlequ. 2004. Aislamiento y carac-
terizacin parcial de una miotoxina del veneno de la
serpiente Bothrops atrox (Ophidia: Viperidae). Rev Peru
Biol. 11(1):79 86.
Laemmli U.K. 1970. Cleavage of structural proteins during the
assembly of the head of bacteriophage T4. Nature
227(5259):680 5.
Laing G.D., A. Yarleque, A. Marcelo, et al. 2004. Preclinical testing
of three South American antivenoms against the venoms
of fve medically important Peruvian snake venoms.
Toxicon 44(1):103 6.
Lazo F., O. Mlaga, A. Yarlequ & R. Severino. 2007. Algunas
propiedades bioqumicas de una L aminocido oxidasa
aislada del veneno de la serpiente Bothrops atrox. Rev Soc
Quim Per 73(3):131 41.
341

Lvano J. & R. Fernndez. 2004. Diagnstico y tratamiento de los
accidentes por animales ponzoosos. Instituto Nacional
de Salud, Ministerio de Salud, Lima, Per. 1era edicin.
74 Pp.
Li Q. & C.L. Ownby. 1994. Cross reactivities of monoclonal anti-
bodies against hemorrhagic toxins of Prairie rattlesnake
(Crotalus viridis viridis) venom. Comp Biochem Physiol
B Biochem Mol Biol. 107(1):51 9.
Loayza S., Y. Morante, S. Campos & A. Yarlequ. 1985. Enzimas
proteolticas en el veneno de las serpientes peruanas
Lachesis muta y Bothrops atrox. Bol Soc Quim Per.
52(3):151 63.
Loja .D, R. Aviles, Y. Necochea, M. Vilca, J. Castro. 2000. Ofdismo
por Bothrops atrox: estudio clnico epidemiolgico.
Diagnstico 39(5):261 5.
Lowry O.H., N.J. Rosebrough, A.L. Farr & R.J. Randall. 1951.
Protein measurement with the Folin phenol reagent. J Biol
Chem. 193(1):265 75.
Marshall L.R. & R.P. Herrmann. 1984. Cross reactivity of bardick
snake venom with death adder antivenom. Med J Aust.
140(9):541 2.
McCarthy N.J. 1984. Snake venom detection kit. Med J Aust.
140(9):518.
Mejia J., R. Inga, F. Lazo, et al. 2006. Purifcacin y propiedades
bioqumicas de una fosfolipasa A del veneno de la ser-
piente Lachesis muta Shushupe. Rev. Soc. Quim. Per.
72(2):86 95.
Minton, S.A., Jr. 1979. Common antigens in snake venoms. In: Lee,
C.Y. (Ed.). Handbook of Experimental Pharmacology, vol.
52. Springer, Berlin, pp. 847 862.
Ownby C.L., T.R. Colberg. 1990. Comparison of the immunogenicity
and antigenic composition of several venoms of snakes in
the family Crotalidae. Toxicon 28(2):189 99.
Pantigoso C., E. Escobar, O. Mlaga, A. Yarlequ. 1996. Isolation
and some properties of the proteinase atroxin from the
venom of the snake Bothrops atrox. Acta Cient Venez.
47(1):67 73.
Pantigoso C., E. Escobar & A. Yarlequ. 2001. Aislamiento y ca-
racterizacin de una miotoxina del veneno de la serpiente
Bothrops brazili Hoge ,1953 (Ophidia: Viperidae). Rev
Peru Biol. 8(2):136 48.
Remuzgo C., M.P. Alvarez, F. Lazo, A. Yarlequ. 2000. Caracteri-
zacin parcial del veneno de la serpiente cascabel peruana
Crotalus durissus terrifcus. Rev Peru Biol. 7(1):67 73.
Rodrguez E., A. Yarlequ. 1991. Isolation and various properties of
proteinase I from the venom of the Peruvian snake Lachesis
muta. Acta Cient Venez. 42(4):219 25.
Rojas E., L. Quesada, V. Arce, et al. 2005. Neutralization of four
Peruvian Bothrops sp. snake venoms by polyvalent an-
tivenoms produced in Per and Costa Rica: preclinical
assessment. Acta Trop. 93(1):85 95.
Sandoval G., L. Lerma, E. Rodrguez, et al. 2006. Purifcacin de
anticuerpos policlonales contra el veneno de la serpiente
peruana Bothrops atrox (Jergn). Rev Soc Quim Per.
72(3):140 9.
Selvanayagam Z.E. & P. Gopalakrishnakone. 1999. Tests for detec-
tion of snake venoms, toxins and venom antibodies: review
on recent trends (1987 1997). Toxicon. 37(4):565 86.
Siigur E., M. Samel, K. Tnismgi, J. Siigur. 2000. Cross reacti-
vities of polyclonal antibodies against factor V activating
enzyme, a serine proteinase from Vipera lebetina (snake)
venom. Comp Biochem Physiol B Biochem Mol Biol.
126(3):377 82.
Solis C., E. Escobar, A. Yarlequ, S. Gutierrez. 1999. Purifcacin
y caracterizacin de la Laminocido oxidasa del veneno
de la serpiente Bothrops brazili Jergn shushupe. Rev
Peru Biol. 6(1):75 84.
Theakston R.D., D.A. Warrell & E. Griffths. 2003. Report of a
WHO workshop on the standardization and control of
antivenoms. Toxicon 41(5):541 57.
Theakston R.D. 1983. The application of immunoassay techniques,
including enzymelinked immunosorbent assay (ELISA), to
snake venom research. Toxicon 21(3):341 52.
Towbin H., T. Staehelin, J. Gordon. 1979. Electrophoretic transfer
of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose
sheets: procedure and some applications. Proc Natl Acad
Sci U S A. 76(9):4350 4.
Van Dong L., Quyen le K, Eng KH, Gopalakrishnakone P. 2003.
Immunogenicity of venoms from four common snakes in
the South of Vietnam and development of ELISA kit for
venom detection. J Immunol Methods 282(1 2):13 31.
Warrell D.A. 1996. Clinical features of envenoming. In: Envenoming
and their treatments. cd. Bon, C.; Goyffon, M. pp. 63 76.
Fond. Marcel Mrieux, Lyon.
Yarleque A., S. Campos, E. Escobar, et al. 1989. Butterworth PJ,
Price RG. Isolation and characterization of a fbrinogen
clotting enzyme from venom of the snake, Lachesis muta
muta (Peruvian bushmaster). Toxicon 27(11):1189 97.
Yarlequ A. 2000. Las serpientes peruanas y sus venenos. Lima:
Fondo Editorial UNMSM.
Zeballos J., E. Escobar, A. Yarlequ. 1999. Aislamiento y algunas
propiedades de una fosfolipasa del veneno de la serpiente
Bothrops brazili. Bol Soc Quim Per 65(1):10 20.
342
Sandoval et al.
343

Propagacin in vitro de carica papaya variedad PTM-331
ISSN 1561-0837
Propagacin in vitro de Carica papaya var. PTM-331 a partir de
meristemos apicales
Reynaldo Solis L.
1
*, Julio Olivera S.
2
y Rafael S. La Rosa L.
1
1 Universidad Nacional Federico
Villarreal - Facultad de Ciencias
Naturales y Matemtica. Jr. Rio
Chepen N 110, 114 y 290 El
Agustino.
*Email Reynaldo Solis Leyva: rso-
lisleyva@yahoo.com.pe
2 Estacin Experimental Agraria
DONOSO -Instituto Nacional de
Innovacin Agraria. Altura Km. 5,4
de la Carretera Chancay Huaral.
Resumen
El trabajo consisti en desarrollar un protocolo de propagacin in vitro de la variedad de papaya PTM-331
a partir de meristemos apicales, con la fnalidad de obtener plntulas vigorosas y libres de enfermedades,
empleando la tcnica del cultivo de tejidos. Las yemas apicales empleadas fueron obtenidas de plantas culti-
vadas en invernadero, los cuales fueron usados como explantes para la extraccin de meristemos. La mejor
diferenciacin de meristemos se logr en el medio basal MS suplementado con 0,5 mg.L
-1
de BAP, 0,5 mg.L
-1

de AIA y 10 mg.L
-1
de adenina. La mejor multiplicacin se logr con el medio MS suplementado con 0,5 mg.L
-1
de BAP, 0,5 mg.L
-1
de

AIA y 0,3 mg.L
-1
de AG
3
, con un coefciente de multiplicacin de 3,42; mientras que el
mejor medio para el enraizamiento fue la combinacin del medio MS, 3 mg.L
-1
de AIB y 5 mg.L
-1
de adenina,
donde se obtuvo 83,33% de plantas enraizadas.
Palabras claves: Carica papaya, Propagacin in vitro, meristemos apicales, invernadero, explantes.
Abstract
An in vitro protocol was develop to propagate variety of papaya PTM-331 from apical meristems, with the
objective of obtaining vigorous and disease-free seedlings, using tissue culture techniques. Apical buds were
obtained from seedlings cultivated in greenhouse and used as explants for meristem dissection. Meristems
were cultured on MS basal medium supplemented with 0,5 mg.L
-1
of BAP, 0,5 mg.L
-1
of AIA and 10 mg.L
-1
of
adenine for their differentiation. The best multiplication of explants was achieved with the combination of MS
medium supplemented with 0,5 mg.L
-1
of BAP, 0,5 mg.L
-1
of

AIA and 0,3 mg.L
-1
of AG
3
, where largest seedlings,
with more shoots were obtained. The best medium for rooting was the combination of MS, 3 mg.L
-1
of AIB and
5 mg.L
-1
of adenine, where 83,33% of rooted plants were obtained.
Keywords: Carica papaya, in vitro propagation, apical meristem, greenhouse, explants.
Introduccin
En el Per, la papaya (Carica papaya L.) es una especie im-
portante en la economa del poblador amaznico debido a su
fruta de alto rendimiento y valor nutritivo. Su cultivo presenta
una serie de ventajas como calidad de su fruto, desarrollo ve-
getativo corto y la cosecha semanal luego de haber iniciado la
produccin, permitiendo el rpido retorno del capital invertido.
Segn Carbajal y Remuzgo (2007), en los ltimos diez aos la
Amazona Peruana se ha constituido en el principal productor
y abastecedor de papaya al mercado de Lima e involucra a ms
del 35% de los agricultores en las distintas etapas de la cadena
productiva.
El Instituto de Investigacin de la Amazona Peruana (IIAP)
viene trabajando en el programa de mejoramiento gentico de la
papaya, teniendo como objetivos principales mejorar la calidad
del fruto, incrementar el rendimiento y desarrollar variedades
tolerantes a enfermedades limitativas al cultivo (Carbajal &
Remuzgo 2007); as se ha logrado obtener la variedad PTM-331.
Existen diversas formas de propagar la papaya, sin embargo,
desde el punto de vista comercial, el uso de semilla sexual es el
ms generalizado (Franciosi 1992) a pesar de las difcultades que
se presentan al obtenerse plantas de diferente sexo y que a veces
las plantas resultantes no reproducen exactamente las caractersti-
cas de la planta originaria (Ibar 1979). La propagacin vegetativa
por medio de estacas o injertos no brindan los efectos deseados,
las primeras son de lento desarrollo y las segundas degeneran y
no mantienen las caractersticas (Posada 2005).
Una forma de obtener plantas libres de patgenos es a travs
del cultivo in vitro de meristemos que se fundamenta en el hecho
de que la distribucin de los microorganismos (virus, bacterias y
micoplasmas) en los tejidos de la planta no es uniforme y su con-
centracin tiende a disminuir progresivamente hacia el pice del
tallo (Jimnez 1998). Con el estudio de los procesos que ocurren
en el cultivo de tejidos de la papaya se han desarrollado tcnicas
de micropropagacin por organognesis (Alvarado 1992, Baca
2002, Gallardo et al. 2002) y embriognesis somtica (Jimenez
1999, Ascencio et al. 2008) pero en ninguno de estos casos se
trabaj con la variedad PTM-331.
El desarrollo de una metodologa de micropropagacin a
partir de meristemos apicales es importante para conocer el com-
portamiento in vitro de esta variedad y apoyar la multiplicacin
de plantas lite de sexo femenino seleccionadas en campo por
sus caractersticas fenotpicas especiales; adems se puede realizar
una cuidadosa seleccin del material gentico, manejar grandes
volmenes de plntulas en espacios reducidos y mantener un
stock de plantas libres de enfermedades. Este trabajo tuvo como
objetivo determinar los requerimientos nutricionales y hormo-
nales de Carica papaya var. PTM-331 en los medios de cultivo
durante las fases de establecimiento de meristemos apicales,
multiplicacin y enraizamiento de las plntulas.
344
Solis et al.
Materiales y mtodos
El presente trabajo se desarroll en el Laboratorio de Biotec-
nologa de la Estacin Experimental DONOSO del Instituto
Nacional de Innovacin Agraria del Per. Los meristemos fue-
ron extrados de yemas apicales obtenidas de plantas de 45 das
provenientes de invernadero. Para la desinfeccin, los explantes
fueron lavados con abundante agua y jabn y luego fueron
transportados a la cmara de fujo laminar en donde fueron
sumergidos en alcohol 70% durante 30 segundos y enjuagados
tres veces con agua destilada estril, luego fueron sumergidos
en hipoclorito de sodio 1% durante 10 minutos y enjuagados
tres veces con agua destilada estril.
Fase de establecimiento de meristemos.- Luego de desin-
fectar las yemas apicales, con la ayuda de un microscopio este-
reoscopio se realiz la diseccin de meristemos. Los explantes
vegetales se colocaron sobre una placa Petri (148 x 120 mm.),
se sujetaron con pinzas y con ayuda del bistur se eliminaron los
primordios foliares hasta dejar el meristemo descubierto. Des-
pus se realiz un corte en la base del meristemo y se introdujo
al tubo de ensayo que contena el medio de cultivo.
Con la fnalidad de obtener el medio de cultivo adecuado que
nos permita la diferenciacin de los meristemos se formularon
diversos tratamientos considerando los resultados obtenidos
por Alvarado (1992) y Baca (2002), empleando el medio de
cultivo basal Murashige y Skoog (MS-1962) con diferentes
concentraciones de BAP, ANA, AIA, AG
3
y adenina (Tabla 1).
El pH del medio de cultivo fue ajustado a 5,6. Se realizaron
evaluaciones cada 7 das y la evaluacin fnal se realiz 49 das
despus de la siembra.
Fase de multiplicacin.- Para determinar el medio de cul-
tivo ms adecuado para la multiplicacin de las plntulas, los
tratamientos planteados consistieron en medio de cultivo base
MS con diferentes concentraciones de BAP, KIN, ANA, AIA,
AG
3
y adenina (Tabla 2). Se realizaron evaluaciones cada 7 das
y la evaluacin fnal se realiz 35 das despus de la siembra.
Fase de enraizamiento.- Para determinar el medio de cultivo
adecuado para el enraizamiento de las plntulas se formularon
diversos tratamientos empleando el medio base MS con dife-
rentes concentraciones de IBA, BAP, ANA y adenina (Tabla 3).
La evaluacin se realiz 21 das despus de la siembra.
Tratamiento Medio + Hormonas
TR0 MS
TR1 MS + BAP 0,5 mg.L
-1
+ ANA 0,3 mg.L
-1
-1
+ ANA 0,3 mg.L
-1
+ AG
3
0,3 mg.L
-1
-1
+ ANA 0,3 mg.L
-1
+ Adenina 10 mg.L
-1
-1
+ AIA 0,5 mg.L
-1
-1
+ AIA 0,5 mg.L
-1
+ AG
3
0,3 mg.L
-1
-1
+ AIA 0,5 mg.L
-1
+ Adenina 10 mg.L
-1
Tabla 1. Medios de cultivo para la fase de establecimiento de meristemos.
TA 0 MS
TA 1 MS + BAP 0,5 mg.L
-1
+ AIA 0,3 mg.L
-1
+ AG
3
0,3 mg.L
-1
+ Adenina 5 mg.L
-1
-1
+ AIA 0,5 mg.L
-1
+ AG
3
0,3 mg.L
-1
-1
+ ANA 0,3 mg.L
-1
+ AG
3
0,3 mg.L
-1
+ Adenina 5 mg.L
-1
-1
+ ANA 0,5 mg.L
-1
+ AG
3
0,3 mg.L
-1
TA 5 MS + KIN 1 mg.L
-1
+ AIA 0,3 mg.L
-1
+ AG
3
0,3 mg.L
-1
+ Adenina 5 mg.L
-1
-1
+ AIA 0,5 mg.L
-1
+ AG
3
0,3 mg.L
-1
-1
+ ANA 0,3 mg.L
-1
+ AG
3
0,3 mg.L
-1
+ Adenina 5 mg.L
-1
-1
+ ANA 0,5 mg.L
-1
+ AG
3
0,3 mg.L
-1
Tabla 2. Medios de cultivo para la fase de multiplicacin.
TM0 MS
TM1 MS + IBA 3 mg.L
-1
+ ANA 0,5 mg.L
-1
TM2 MS + ANA 1 mg.L
-1
TM3 MS + IBA 3 mg.L
-1
TM4 MS + IBA 3 mg.L
-1
+ Adenina 5 mg.L
-1
TM5 MS + IBA 2 mg.L
-1
+ BAP 0,5 mg.L
-1
+ AIA 0,5 mg.L
-1
TM6 MS + IBA 2 mg.L
-1
+ BAP 0,5 mg.L
-1
+ ANA 0,5 mg.L
-1
Tabla 3. Medios de cultivo para la fase de enraizamiento.
345

Fase de establecimiento.- En el 2002, Baca determin que
el explante ms adecuado para el establecimiento in vitro de
papaya eran los meristemos.
No se observ contaminacin en la introduccin in vitro de
meristemos apicales de papaya. El uso de alcohol (70%) durante
30 segundos y NaOCl (1%) durante 10 minutos result ser muy
efectivo en la desinfeccin de explantes, pero es muy importante
considerar que la introduccin de meristemos se hizo a partir
de plntulas provenientes de invernadero.
En la Tabla 4 se observa el porcentaje de meristemos diferen-
ciados a los 49 das, las variaciones encontradas entre los distintos
tratamientos se debieron bsicamente a la manipulacin de las
yemas apicales durante la diseccin de los meristemos.
El anlisis de los resultados a los 49 das despus de la siembra
nos indica que el tratamiento TR6 presenta mayor altura de
plntula y mayor nmero de brotes (Tabla 4), estos datos nos
indican que la combinacin de los reguladores de crecimiento
empleados en TR6 son ptimos para el establecimiento in vitro
de meristemos apicales de papaya var. PTM-331.
Un balance apropiado entre auxinas y citoquininas en el me-
dio de cultivo es necesario para la formacin de plantas a partir
de meristemos, pices o yemas. Usualmente en los meristemos y
pices la citoquininas endgena es baja debido a que el principal
sitio de sntesis son las races, por lo que la adicin exgena de
citoquininas en los medios de establecimiento es generalizada
(Jimnez 1998). El tratamiento TR6, el cual result ser el ms
ptimo para el establecimiento in vitro de meristemos apicales
de la variedad de papaya PTM-331, contiene en su formulacin
0,5 mg.L
-1
de BAP, resultados congruentes a los obtenidos por
Baca (2002) quien reporta una mayor proliferacin de brotes
de papaya empleando BAP como fuente de citoquininas.
Jimnez (1998) indica que los pices y meristemos que son
empleados como material inicial para el cultivo in vitro, son
reas de sntesis de auxinas por lo que la concentracin end-
gena es alta y que normalmente cuando se emplean pices no
se adicionan auxinas al medio de cultivo aunque estos pueden
estimular el crecimiento, pero cuando se emplean meristemos
es frecuente que no exista sufciente auxina endgena siendo
necesaria la adicin exgena. Se puede observar que para el es-
tablecimiento in vitro de meristemos apicales de la variedad de
papaya PTM-331, nuestra mejor fuente de auxinas fue el AIA
a diferencia de los resultados obtenidos por Baca (2002) donde
el ANA como fuente de auxinas result ser ms efectivo para
la diferenciacin de meristemos de papaya criolla. En la tabla
4 se observa que los tratamientos que contienen ANA como
fuente de auxinas (TR1, TR2 y TR3), presentaron porcentajes
altos de diferenciacin pero los explantes obtenidos presentaron
menor altura de plntula y menor nmero de brotes que los
explantes obtenidos con el tratamiento TR6. Alvarado (1992)
indica que la utilizacin del AIA como fuente de auxina resulta
ms favorable que el ANA para el establecimiento in vitro de
explantes de papaya.
Tratamientos
49 das
Meristemos diferenciados (%) Altura de plntulas (mm) Nmero de brotes
TR 0 87,5 2,3929 d 1,0000 d
TR 1 87,5 7,6667 b 1,1667 bcd
TR 2 93,75 5,3000 c 1,0667 cd
TR 3 93,75 5,8000 c 1,1333 bcd
TR 4 100 8,5313 ab 1,4375 b
TR 5 100 7,8750 ab 1,3750 bc
TR 6 100 9,1875 a 2,1875 a
Tabla 4. Infuencia de los diferentes medios de cultivo en la diferenciacin de meristemos apicales.
Tratamientos
35 das
Altura de la plntula (mm) Nmero de brotes
TA0 5,5833 g 1,0000 e
TA1 13,6667 b 2,1667 b
TA2 15,4167 a 3,4167 a
TA3 11,8333 cd 2,0833 b
TA4 11,3333 d 2,0000 bc
TA5 13,7500 b 2,0833 b
TA6 12,1667 c 1,8333 bc
TA7 8,8333 e 1,5833 cd
TA8 7,1667 f 1,1667 de
Tabla 5. Altura de las plntulas (mm) y nmero de brotes en la fase de multiplicacin.
* Medias con diferentes letras en la misma columna diferen para p<0,05 (Notacin Duncan)
346
Solis et al.
Fase de multiplicacin.- El anlisis de los resultados ob-
tenidos al comparar el efecto de diferentes combinaciones de
reguladores de crecimiento demostr que TA2 nos permiti
obtener plntulas de mayor tamao y con mayor nmero de
brotes, con diferencias signifcativas frente al resto de los trata-
mientos (Tabla 5). La Figura 1 muestra las plntulas obtenidas
en TA2. TA1 y TA5 tambin mostraron buenos resultados, sin
diferencias signifcativas entre ellas, pero son signifcativamente
diferentes al resto de tratamientos.
Al analizar la composicin de los reguladores de crecimiento
en TA1, TA2 y TA5 se observa que los tres tratamientos pre-
sentan AIA como fuente de auxina y estos son superiores a los
tratamientos que presentan ANA como fuente de auxina.
En los tratamientos TA1 y TA2 la fuente de citoquininas es
BAP y en el tratamiento TA5 la fuente de citoquininas es KIN,
estos resultados nos indican que tanto BAP y KIN nos pueden
proporcionar buenos resultados en la fase de multiplicacin.
Todos los tratamientos contienen AG
3
en su composicin debido
a que esta hormona induce el alargamiento de los brotes. Baca
(2002) obtuvo un mayor alargamiento de tallos empleando un
medio basal MS al que se le adicion 0,5 mg.L
-1
de AG
3
y 10
mg.L
-1
de adenina.
El nmero de brotes es una variable importante en la fase
de multiplicacin ya que a mayor nmero de brotes se tendr
una mayor tasa de multiplicacin. Orellana (1998) indica que
la proliferacin de brotes axilares se logra con la adicin de
citoquininas en el medio de cultivo para romper la dominancia
apical y estimular la brotacin de las yemas que se encuentran
en las axilas de las hojas. El BAP result ser la citoquinina ms
efectiva para la multiplicacin de brotes. Alvarado (1992) con-
cluy que la interaccin de 0,05 mg.L
-1
de AIA, 1,5 mg.L
-1
de
KIN y 100 mg.L
-1
de cido nicotnico permite la mayor proli-
feracin de nudos y desarrollo de abundante de follaje, mientras
que Baca (2002) obtuvo mayor proliferacin de brotes, mayor
nmero de nudos y menor presencia de callos en un medio MS
suplementado con 0,5 mg.L
-1
de BAP, 0,1 mg.L
-1
de AG
3
, 0,01
mg.L
-1
de AIA y 10 mg.L
-1
de adenina; en ambos casos el AIA
fue la mejor fuente de auxinas.
Gallardo et al. (2002) reportaron que el medio de cultivo
MS suplementado con 0,14 mg.L
-1
de ANA y 0,45 mg.L
-1
de
BAP permite obtener mayores coefcientes de multiplicacin.
La diferencia en la fuente de auxina ms efectiva en la
multiplicacin in vitro se debe principalmente a la variedad de
papaya empleada en cada caso, en el presente trabajo se emple la
variedad PTM-331; Alvarado (1992) emple la variedad Pauna,
Baca (2002) emple la variedad Criollo y Gallardo et al. (2002)
emplearon el hbrido IBP-4299.
Fase de enraizamiento.- El enraizamiento se caracteriza por
ser la fase ms voluminosa de todo el proceso, pues en ella cada
brote, esqueje o yema de forma individual que se ha formado du-
rante la fase de multiplicacin, debe ser cultivada y manipulada
in vitro para que, adems de crecer y desarrollar un seudotallo o
tallo con las primeras hojas, forme y desarrolle varias races que
le permitan comenzar la absorcin de nutrientes al transplan-
tarse sobre un sustrato enriquecido y convertirse en vitroplanta
aclimatizada lista para llevarse al campo (Orellana 1998).
Previamente al anlisis estadstico de las variables nmero y
longitud de races se determin el porcentaje de enraizamiento
en cada tratamiento. Se observ que TM0, TM2 y TM6 no
presentaron enraizamiento por lo que estos tratamientos no
fueron tomados en cuenta para el anlisis estadstico. Se al-
canzaron mejores resultados en TM4 con 83,33% de plantas
enraizadas (Tabla 6).
Figura 1. Plntulas provenientes de TA2, despus de 35 das de siembra.
347

Al realizarse el anlisis para las variables nmero y longitud
de races, los tratamientos TM3 y TM4 presentan los mayores
promedios, estos tratamientos no presentan diferencias signif-
cativas entre si de acuerdo a la prueba de Duncan realizada con
un nivel de signifcancia de p<0,05 (Tabla 6). Estas variables son
de mucha importancia en la fase de aclimatacin, debido a que
es necesaria que una planta tenga el soporte de las races para un
mejor desarrollo en el sustrato estril. Si bien las races no son
del todo funcionales debido a la escasez de pelos absorbentes que
no se desarrollan in vitro, un mayor tamao y un mayor nmero
de races inducen la formacin ex vitro de nuevas races y pelos
absorbentes, que extraern del suelo los nutrientes necesarios
para el desarrollo de la plntula.
Al comparar los diferentes tratamientos, se observa que TM4
presenta el mayor porcentaje de enraizamiento, mayor nmero
de races y mayor longitud de races; este tratamiento contiene
el medio basal MS al que se le adicion 3 mg.L
-1
de IBA y 5
mg.L
-1
de adenina. Estos resultados se asemejan a los obtenidos
por Baca (2002) que obtuvo mayor proliferacin de races en un
medio que contena 2 mg.L
-1
de IBA y 10 mg.L
-1
de adenina.
En el tratamiento TM3 que contiene 3 mg l
-1
IBA se observa
un menor porcentaje de enraizamiento, pero las respuestas en el
nmero de races y longitud de races no presentan diferencias
signifcativas con las respuestas obtenidas en el tratamiento
TM4. Reuveni et al. (1990) lograron enraizar plantas in vitro
en un medio MS que contena 1 mg.L
-1
de IBA, mientras que
Alvarado (1992) seala que el enraizamiento de plntulas de
papaya se obtiene en un medio que contenga 5 mg.L
-1
de IBA.
Jimnez (1999), seala que el mtodo de Drew (1993) induce
el enraizamiento de los brotes en proliferacin, es decir una con-
centracin de 0,2 mg.L
-1
de IBA y 11,3 mg.L
-1
de Ribofavina.
Posada (2005) indica que para el enraizamiento de plntulas
de papaya, los explantes se subcultivan en un medio de cultivo
compuesto por el 50% de las sales MS y concentraciones entre
3 y 5 mg.L
-1
de IBA durante 10 das, luego se transferen a un
medio de cultivo compuesto por sales MS sin reguladores de
crecimiento por espacio de 20 das proporcionando un 80 %
de plantas enraizadas.
A manera de sumario puede sealarse que:
En la fase de establecimiento, el tratamiento donde se obtuvo
una mayor diferenciacin de meristemos a los 49 das fue TR6
(MS + 0,5 mg.L
-1
de BAP + 0,5 mg.L
-1
de AIA + 10 mg.L
-1
de
Adenina) y por lo tanto proporcion plntulas ms vigorosas
para iniciar la fase de multiplicacin.
El medio TA2 que contiene MS + 0,5 mg.L
-1
de BAP + 0,5
mg.L
-1
de AIA + 0,3 mg.L
-1
de AG
3
, permiti obtener a los 35
das plntulas ms grandes y con mayor nmero de brotes.
El uso de AIA como fuente de auxina nos permiti obtener
mejores resultados que el uso del ANA en el establecimiento in
vitro de meristemos y la multiplicacin de explantes.
El tratamiento TM4 que posee MS + 3 mg.L
-1
de IBA + 5
mg.L
-1
de adenina permiti obtener un mayor porcentaje de
enraizamiento (83,33%).
Literatura citada
Alvarado M. 1992. Propagacin vegetativa in vitro del papayo
(Carica papaya L.). Tesis Bilogo. Universidad Nacional
Agraria La Molina. Lima, Per. 60 pp.
Ascencio A., H. Gutirrez, B. Rodrguez, et al. 2008. Plant regene-
ration of Carica papaya L. through somatic embryogenesis
in response to light quality, gelling agent and phloridzin.
Scientia Horticulturae. 118 (2): 155-160.
Baca A. 2002. Optimizacin de la micropropagacin in vitro de Ca-
rica papaya L. Tesis Ing. Agrnomo. Universidad Nacional
Agraria La Molina. Lima, Per. 107 pp.
Carbajal T. & R. Remuzgo. 2007. Gua tcnica del cultivo del papa-
yo. Instituto de Investigaciones de la Amazona Peruana.
Programa de Biodiversidad. Tingo Mara, Per. 40 pp.
Franciosi R. 1992. El cultivo del papayo en el Per. Ediciones
Fundeagro. Lima, Per. 87 pp.
Gallardo J., L. Posada, R. Gmez, et al. 2002. Micropropagacin
del hbrido cubano de Papaya IBP 42-99. Biotecnologa
Vegetal. 2 (4): 211-215.
Ibar L. 1979. Aguacate, Chirimoyo, Mango y Papaya. Editorial
Aedos. Barcelona, Espaa. 173 pp.
Jimnez E. 1998. Cultivo de pices y meristemos. En J. Prez (Ed.),
Propagacin y mejora gentica de plantas por biotecnolo-
ga (pp. 45-56). Cuba. Ediciones GEO.
Jimnez C. 1999. Induccin de embriognesis somtica en papayo
(Carica papaya Linnaeus) cultivar PT-101-B. Tesis Bi-
logo. Universidad Nacional Agraria La Molina. Lima,
Per. 82 pp.
Murashige T. & F. Skoog. 1962. A revised medium for rapid growth
and bioassays with tobacco tissue culture. Physiology
plantarum. 15: 473-497.
Orellana P. 1998. Propagacin va organognesis. En J. Prez (Ed.),
Propagacin y mejora gentica de plantas por biotecnolo-
ga (pp. 151-178). Cuba. Ediciones GEO.
Posada L. 2005. Aplicaciones de la biotecnologa a la propagacin
de la papaya. Biotecnologa Vegetal. 5 (2): 67-79.
Reuveni D., D. Shlesinger & U. Lavi. 1990. In vitro clonal propa-
gation of dioecious Carica papaya L. Plant cell, tissue and
organ culture. 20 (1): 41-46.
Tratamientos
21 das
Porcentaje de enraizamiento Nmero de races Longitud de races (mm)
TM1 50 % 6,3333 b 5,1667 b
TM3 66,67 % 8,5000 a 6,9375 a
TM4 83,33 % 8,6000 a 7,4000 a
TM5 33,33 % 4,2500 c 4,1250 c
Tabla 6. Nmero y longitud de races (21 das despus de siembra).
348
Solis et al.
349

Diagnstico e identificacin de yersinia ruckeri por PCR
ISSN 1561-0837
Diagnstico e identifcacin rpidos por PCR de Yersinia ruckeri aisla-
da de Oncorhynchus mykiss procedentes de Canta, Lima, Per
Susana Sirvas-Cornejo*, Claudia Cecilia Snchez-Robinet y Csar Pea-Domnguez
Rapid diagnosis and identifcation by PCR of Yersinia ruckeri isolated of
Oncorhynchus mykiss from Canta, Lima, Peru
Laboratorio de Biologa Molecular;
Departamento Acadmico de
Acuicultura, Facultad de Oceano-
grafa, Pesquera y Ciencias
Alimentarias; Universidad Nacional
Federico Villarreal. Calle Roma
350, Mirafores, Lima 18, Per.
Email Susana Sirvas Cornejo:
sirvascornejo@yahoo.com
Email Claudia Snchez Robinet:
sanchezrobinet@hotmail.com
*Autor para correspondencia
Resumen
Se muestrearon 20 ejemplares (alevines y juveniles) de trucha arco iris cultivados en la piscifactora Acochinchn
(Canta, Lima, Per), y se les aplico la tcnica de la Reaccin en Cadena de la Polimerasa (PCR) con la fnalidad
de obtener una identifcacin rpida del agente patgeno Yersinia ruckeri que produce la enfermedad entrica
de la boca roja (ERM) y genera elevadas tasas de mortalidad. Nueve ejemplares fueron asintomticos mientras
que 11 presentaron signos de ERM. Se aislaron 22 cepas bacterianas del hgado, bazo y rin. Se emple la
tcnica de la PCR para la amplifcacin y cebadores especfcos (ARNr 16S), que permitieron amplifcar un
fragmento de ADN de 575 pb de Yersinia ruckeri. Diecinueve cepas fueron identifcadas como Yersinia ruckeri
mediante la PCR, tanto en peces sintomticos como asintomticos. Se estableci un tiempo de diagnstico de
26 horas, en comparacin con los 2 3 das que durara el diagnstico empleando las pruebas bioqumicas.
Palabras Clave: Yersinia ruckeri, Oncorhynchus mykiss, PCR, diagnstico, Enfermedad Entrica de la Boca
Roja.
Abstract
Twenty individuals of rainbow trout were sampled (fry and juveniles) from Acochinchan Fishfarm (Canta, Lima
- Peru), and analyzed with the Polimerase Chain Reaction test (PCR ) in order to achieve a rapid identifcation
of Yersinia ruckeri, which is the pathogen agent that causes the enteric red mouth disease (ERM) and produces
high rates of mortality. Nine fsh samples were asymptomatic, while 11 of them showed signs of ERM. In addi-
tion, 22 bacterial strains were isolated from the liver, spleen and kidney. PCR and specifc primers (16S rRNA),
were used to amplifed a specifc 575 bp DNA fragment of Yersinia ruckeri. Nineteen strains were identifed as
Yersinia ruckeri by PCR in symptomatic and asymptomatic fshes. It was established a diagnosis time of 26
hours, compared with the 2 or 3 days that would take the diagnosis using biochemical tests.
Keywords: Yersinia ruckeri, Oncorhynchus mykiss, PCR, diagnosis, Enteric Red Mouth Disease.
Introduccin
La Enfermedad Entrica de la Boca Roja, ERM (Enteric
Redmouth Disease), es una infeccin sistmica de curso crnico
y agudo y que afecta principalmente a la trucha arco iris, On-
corhynchus mykiss (Rodgers 1991), y genera elevadas tasas de mor-
talidad ocasionando importantes prdidas econmicas(Austin
1993). Esta infeccin es producida por Yersinia ruckeri aislada
por primera vez, en el Valle Hagerman (USA) a principios del
1950 (Rucker 1966, Ross et al. 1966). Adems ha sido reportada
en Australia (Bullock et al. 1977), Iran (Soltani et al. 1999),
Turqua (Timur & Timur 1991), Portugal (Sousa et al. 1996),
Sudfrica (Bragg & Henton 1986, Bragg 1991), China (Raidal
et al. 2004), Francia (Lesel et al. 1983), Reino Unido (Austin
et al. 2003) entre otros pases. En Per, Y. ruckeri fue aislada
de 34 piscifactoras del departamento de Junn en el ao 2004
utilizando procedimientos bioqumicos estndares (Bravo &
Kojagura 2004). En ese trabajo, inicialmente se realizaron iden-
tifcaciones presuntivas a travs de tincin Gram, actividad de la
oxidasa, motilidad, y reaccin a la prueba O/F; posteriormente
la confrmacin de Y. ruckeri se realiz en Chile mediante una
reaccin de aglutinacin con el antisuero Tipo I.
El cultivo de trucha arco iris es una actividad econmica
importante en el Per, segn reporte del Ministerio de la Produc-
cin (2010). De las 17,320 TM procedentes de la acuicultura
continental, 14,250 TM corresponden al cultivo de trucha
(PRODUCE 2010).
Yersinia ruckeri se transmite de manera horizontal es decir
a travs del agua, por las deyecciones de los peces infectados o
portadores al pez susceptible (Rodger 1991). La ERM se car-
acteriza por hemorragias en la boca y alrededores, presencia de
zonas hemorrgicas en la superfcie del cuerpo e infamacin
en la base de las aletas, oprculos, paladar (Bullock & Cipriano
1990). La ERM tambin ha sido referida como Yersiniosis ya que
no siempre los peces afectados presentan las caractersticas reas
enrojecidas de la boca (Frerichs et al. 1985, Inglis et al. 1993).
Asimismo, este trmino es usado para distinguir una infeccin
crnica en comparacin con la ERM que se muestra de forma
aguda (Carson & Wilson 2009).
Tambin se puede presentar exoftalmia con hemorragias
en el orbital (Rucker 1966, Horne & Barnes 1999, Avci &
Birinciolu 2005). Adems, presentan un oscurecimiento de la
piel y distensin abdominal, se pueden observar cambios en el
comportamiento de los peces, como nado cerca de la superfcie
y movimientos lentos. Con frecuencia, los peces afectados se
encuentran en estado de letargo y en reas con bajo fujo de agua,
adems a menudo pierden el apetito. Esta enfermedad puede
afectar a los peces de todas las etapas de cultivo, pero es ms
aguda en alevinos. En peces de mayor tamao, la enfermedad
aparece de manera crnica (Avci & Birinciolu 2005).
El cultivo de peces en condiciones intensivas genera factores
de estrs, ligados a las propias condiciones de produccin, a las
altas densidades del cultivo y a la calidad del agua, favoreciendo
350
Sirvas-Cornejo et al.
as la aparicin de enfermedades infecciosas y toxicolgicas
(Reno 1998).
La sintomatologa y lesiones de las enfermedades infecciosas
de los peces carecen de la especifcidad sufciente como para
establecer un diagnstico defnitivo del posible agente patgeno
(Gibello et al. 2001).
La identifcacin defnitiva de Y. ruckeri por los mtodos
microbiolgicos tradicionales (como siembra en placa e incu-
bacin para obtener un cultivo joven, luego siembra en medios
de cultivo conteniendo sustratos especfcos como aminocidos,
carbohidratos, entre otros, para observar las reacciones bioqumi-
cas de la cepa) duran de 2 a 3 das. Adems la identifcacin
con el sistema API 20E debe ser interpretada con precaucin
porque en ocasiones se ha confundido con el perfl de Hafnia
alvei (Furones et al. 1993). Por otro lado, la tcnica de PCR es
un sistema de diagnstico clnico que permite la identifcacin
fable y especfca del agente etiolgico Y. ruckeri en menor
tiempo (Gibello et al. 2001).
El presente trabajo reporta la presencia de Y. ruckeri en On-
corhynchus mykiss en piscigranjas de Canta, Lima, utilizando la
tcnica de la PCR.
Materiales y mtodos
Muestreo.- Se recolectaron 20 ejemplares (8 alevines y 12
juveniles) de trucha arco iris provenientes de los estanques de
cultivo de la Piscigranja Acochinchan, Lima (Distrito de Huaros,
Canta, 3333 m de altitud), de los cuales 11 ejemplares presen-
taron signos de enfermedad (Yersiniosis o ERM) mientras que
9 ejemplares asintomticos fueron muestreados como control.
Asimismo, se determin la temperatura y pH del agua.
Aislamiento de cepas.- Con el fn de aislar al patgeno se
realizaron disecciones aspticas de los peces. Se emple el mtodo
de estras para aislar cepas bacterianas del hgado, bazo y rin.
Estas cepas fueron incubadas en placas con Agar Tripticasa de
Soya (TSA). Los parmetros ptimos de temperatura y tiempo
de incubacin en placa fueron de 20 a 22 C durante 18 horas.
Yersinia ruckeri.- El rea de Investigacin Experimental
de Patobiologa Acutica, de la Universidad Nacional Federico
Villarreal (UNFV) perteneciente a la Facultad de Oceanografa,
Pesquera y Ciencias Alimentarias (FOPCA), cedi una cepa de
Yersinia ruckeri, la cual haba sido aislada de truchas arco iris de
la laguna de Paucarcocha, Lima, Distrito de Tanta - Provincia
de Yauyos, a una altitud de 4284 m. La identifcacin de esta
cepa fue confrmada por pruebas bioqumicas y empleada como
control positivo.
Extraccin de ADN.- Las extracciones de ADN se efec-
tuaron en el Laboratorio de Biologa Molecular de la Facultad
de Oceanografa, Pesquera y Ciencias Alimentarias, UNFV,
empleando el Kit AxyPrep Bacterial Genomic DNA. El ADN
de cada cepa aislada se obtuvo incubando previamente la cepa
en Caldo Tripticasa de Soya (TSB). Adems, en cada lote de
reaccin se emple un blanco de extraccin del Kit. Por otro
lado, se escogi al azar una cepa identifcada como Yersinia
ruckeri por la tcnica de PCR y se cultiv a diferentes tiempos
de incubacin (6, 8, 10, 12, 14, 16 y 18 h). Luego se realizaron
extracciones de ADN y PCR a cada uno de los cultivos con el
objeto de determinar el menor tiempo de diagnstico.
Amplifcacin de ADN (PCR).- Se utilizaron los cebadores
YER8 (5-GCGAGGAGGAAGGGTTAAGTG- 3) y YER10
(5-GAAGGCACCAAGGCATCTCTG- 3) correspondientes al
ADN del gen que codifca la subunidad 16S del ARN ribosomal
bacteriano (ARN 16S) (Gibello et al. 1999). Las amplifca-
ciones fueron realizadas en un volumen de 25 L de reaccin
conteniendo: 1 L de ADN (diluido 1/100) extrado de la cepa
bacteriana, 10 m de cada primer (Eurofns MWG Operon), 2
mM de cada desoxinucletido trifosfato (Fermentas), 5 L del
Figura 1. Signos externos. Oscurecimiento de la piel (a); boca roja (b); distencin abdominal (c); secreciones (d); exoftalmia (e).
(a) (b) (c)
(d) (e)
351

Figura 2. Hgado plido y hemorrgico (a); bazo normal (b); bazo
esplnico (c).
bufer Taq polimerasa (Fermentas) y 5 U/L de Taq polimerasa
(Fermentas). La reaccin de amplifcacin se llev acabo en el
termociclador Applied Biosystems (Modelo M-201) por 35
ciclos de desnaturalizacin a 94 C por 1 min, anillamiento a
61,8 C por 1 min, elongacin a 72 C por 1 min. Previamente
una desnaturalizacin inicial a 92 C por 5 min y posteriormente
una elongacin fnal a 72 C por 8 min. En cada lote de reac-
cin de PCR se emple como control negativo a las cepas de
Aeromonas salmonicida (proveda por el rea de Investigacin
de Patobiologa Acutica FOPCA, UNFV), Flavobacterium sp.
(proveda por el Laboratorio de Biologa Molecular FOPCA,
UNFV) y Escherichia coli (proveda por el Laboratorio de Mi-
crobiologa FOPCA, UNFV).
Resultados
Signos patolgicos.- Los especmenes enfermos (alevines y
juveniles) de trucha arco iris analizados en este estudio mostraron
signos evidentes y frecuentes como exoftalmia y oscurecimiento
de la piel (Fig. 1a y e), distencin abdominal (Fig. 1c) y secre-
ciones (Fig. 1d) as como infamacin en la base de las aletas y
paladar. Sin embargo, la caracterstica ms distintiva de la ERM,
fue la clsica
boca roja
(Fig. 1b).
Otras caractersticas adicionales fueron inapetencia, letargia,
nado cerca de la superfcie con movimientos lentos o permanen-
cia cerca de la salida del agua. La Figura 2 muestra los signos
clnicos ms relevantes que afectan a los rganos internos como:
esplenomegalia del bazo, palidez y hemorragias en el hgado.
Caractersticas del cultivo bacteriano.- A partir de las
muestras patolgicas se lograron aislar en el medio de cultivo
TSA un total de 22 cepas, las cuales mostraron caractersticas de
colonia algo similares. Dichas colonias presentaron un tamao
comprendido entre 0,5 a 2 mm de dimetro, circulares, lisas,
ligeramente convexas, y translcidas ante la luz natural con un
color blanco cremoso.
Amplifcacin de ADN.- Las muestras que mostraron la
amplifcacin de un fragmento de ADN de 575 pb, de acuerdo
con el tamao esperado, fueron consideradas positivas.
Se confrm la presencia de Y. ruckeri en 19 truchas arco iris de
un total de 20 ejemplares colectados, de los cuales 11 ejemplares
presentaron signos patolgicos siendo los dems asintomticos.
La especifcidad de esta prueba fue corroborada con la PCR de
Aeromonas salmonicida, Flavobacterium sp. y Escherichia coli,
ninguna de las cuales mostr ADN amplifcado con los cebadores
descritos YER8 y YER10 (Fig. 3) confrmndose su especifcidad
para amplifcar Y. ruckeri.
La fgura 4 muestra ADN amplifcado de Y. ruckeri, donde se
puede apreciar que una de las muestras result negativa producto
de una trucha asintomtica.
La tcnica de PCR es tan sensible que an habiendo dis-
minuido el tiempo de incubacin de la cepa de 18 a 6 horas, se
pudo detectar el patgeno en las muestras estudiadas (Fig. 5).
BeAS M Y23 AS F BeF EC Y23 BL BeEC
575 pb
1500 pb
1000 pb
700 pb
500 pb
300 pb
Figura 3. M: Ladder, Y23: Yersinia ruckeri (control positivo), AS:
Aeromonas salmonicida, BeAS: Blanco de extraccin (Kit) para A.
salmonicida, F: Flavobacterium sp., BeF: Blanco de extraccin (Kit)
para Flavobacterium sp., EC: Escherichia coli, BeEC: Blanco de
extraccin (kit) para E. coli, BL: Blanco de PCR.
(a)
(b)
(c)
352
Discusin
A pesar que han sido descritos mtodos de PCR de alta
sensibilidad capaces de detectar menos de 20 UFC por gramo
de rgano (Gustafson et al. 1992, Wiklund et al. 2000) esta
sensibilidad es bastante menor a la obtenida a partir de ADN
purifcado o de microorganismos aislados. Esta reduccin en la
sensibilidad de la tcnica se atribuye a la existencia de sustancias
inhibidoras en los tejidos y rganos de los animales como la
hemoglobina y protenas sricas de la sangre, grasas y glicgeno,
as como tambin determinados reactivos aadidos durante el
procesado de la muestra (Wilson 1997). No obstante, las sus-
tancias que inhiben la reaccin de PCR actan interfriendo la
lisis del microorganismo necesaria para la liberacin del cido
nucleico a amplifcar, degradando o capturndolo e inhibiendo
la actividad de la polimerasa. En el presente estudio se amplifc
el ADN total a partir de cepas bacterianas aisladas, mientras que
otros autores como Gibello et al. (1999) y Kirkan et al. (2006),
amplifcaron el ADN a partir de tejidos homogenizados.
Los ensayos de PCR no diferencian entre ADN procedente
de clulas vivas o muertas (Hiney & Smith 1998), como la am-
plifcacin del ADN de bacterias muertas tras un tratamiento
efectivo con un antibitico o en animales vacunados con micro-
organismos inactivados. El mtodo de diagnstico del presente
estudio se puede realizar en peces previamente vacunados o en
tratamiento con cualquier tipo de antibitico ya que la deteccin
es a partir de cepas aisladas en vez de tejidos y se confrma la
presencia de la bacteria patgena en su forma viable.
La deteccin de portadores asintomticos es muy importante
para prevenir la transmisin y propagacin de la ERM (Leclercq
et al. 1989). Diferentes investigadores (Bush & Lingg 1975,
Hunter et al. 1980) han demostrado exitosamente la deteccin
de patgenos en peces infectados asintomticos. En los estudios
realizados por Gibello et al. (1999), Altinok et al. (2001), Kirkan
et al. (2006), se utiliz la PCR para detectar la presencia de Y.
ruckeri en peces infectados natural y artifcialmente, y en nuestro
estudio se emple adems de la PCR, mtodos microbiolgicos
para aislamiento de cepas logrando detectar Y. ruckeri tanto en
peces con signos de la Enfermedad Entrica de la Boca Roja,
como en peces asintomticos.
Agradecimientos
Los autores agradecen al IRD (Institut de Recherche pour le
Dveloppement) por el apoyo brindado dentro del marco del
convenio UNFV-IRD. Adems un especial agradecimiento a
la Piscigranja Acochinchan, al Dr. Fernando Carvajal V. por su
valioso aporte, a Edmundo Guzmn y a todos los colaboradores
que hicieron posible la ejecucin del presente estudio.
Literatura citada
Altinok I., J.M. Grizzle & Z. Liu. 2001. Detection of Yersinia ruckeri
in rainbow trout blood by use of the polymerase chain
reaction. Diseases of Aquatic Organisms 44: 29-34.
Austin B. & Austin D. A.1993.Bacterial fsh pathogens: diseases in
farmed and wild fsh (Ellis Horwood Limited, Chichester
United kingdom, 2
nd
ed. pp 208 216.
Austin D.A., P.A.W Robertson & B. Austin. 2003. Recovery of a
new biogroup of Yersinia ruckeri from diseased rainbow
trout (Oncorhynchus mykiss, Walbaum). Systematic and
Applied Microbiology 26: 127-131.
Avci H. & S.S. Birinciolu. 2005. Pathological fndings in rainbow
trout (Oncorhynchus mykiss, Walbaum 1792) experimen-
tally infected with Yersinia ruckeri. Turkish Journal of
Veterinary and Animal Sciences 29: 1321-1328.
Bragg R.R. 1991. Health status of salmonids in river systems in Natal
(South Africa). III. Isolation and identifcation of bacteria.
Onderstepoort J. Vest. Res. 58: 67-70.
Bragg R.R. & M.M Henton. 1986. Isolation of Yersinia ruckeri from
rainbow trout in South Africa. Bulletin European Associa-
tion of Fish Pathologist 6: 5-6.
Bullock G. L. and R. C. Cipriano. 1990. Enteric Redmouth Disease
of Salmonids. Fish Disease Leafet 82. UNITED STATES
DEPARTMENT OF THE INTERIOR Fish and Wildlife
Service: 1-4.
Bullock G.L., H.M. Struckey & E.B.Jr. Shotts. 1977. Early records
of Noth American and Australian outbreaks of enteric
redmouth disease. Fish Health News 6(2): 96.
Bravo S., & V. Kojagura. 2004. First isolation of Yersinia ruckeri
from rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) in Peru. Bull.
Eur. Ass. Fish Pathol. 24: 104-108.
Carson J. & T. Wilson. 2009. Australia and New Zealand Standard
Diagnostic Procedure Manual. Pp: 1-18.
Frerichs G.N., J.A. Stewart & R.O. Collens. 1985. Atypical infec- 1985. Atypical infec-
tion of rainbow trout, (Salmo gairdneri, Richardson), with
Yersinia ruckeri. Journal of Fish Diseases 8: 383-387.
Furones M.D., Rodgers C.J. & C.B. Munn. 1993. Yersinia ruckeri,
the causal agent of enteric redmouth disease (ERM) in fsh.
Annual Review of Fish Disease 3: 105-125.
Gibello A., M.M. Blanco, M.A Moreno, M.T. Cutuli, A. Domenech,
L. Dominguez & J.F. Fernndez-Garayzabal. 1999. Devel-
opment of a PCR assay for detection of Yersinia ruckeri in
tissues of inoculated and naturally infected trout. Applied
and Environmental Microbiology 65: 346350.
BeAS M Y23 AS Be Y13 Y14 Y15 Y16 Y17 BL
1500 pb
1000 pb
700 pb
500 pb
300 pb
Figura 4. M: Ladder, Y23: Yersinia ruckeri (control positivo), AS:
Aeromonas salmonicida, BeAS: Blanco de extraccin (kit) para A.
salmonicida, Be: Blanco de extraccin para muestras (kit), Y13 al
Y15: Muestras (+): Yersinia ruckeri, Y16: Muestra (-): No identifcada,
Y17: Muestra (+): Yersinia ruckeri, BL: Blanco de PCR.
M 18h(Y23) 16h 14h 12h 10h 8h 6h BL
1500 pb
1000 pb
700 pb
500 pb
300 pb
Figura 5. M: Ladder, 18h(Y23): control positivo (18h de incubacin),
16h: Y. ruckeri (16 h de incubacin), 14h: Y. ruckeri (14 h de incuba-
cin), 12h: Y. ruckeri (12 h de incubacin), 10h: Y. ruckeri (10 h de
incubacin) 8h: Y. ruckeri (8h de incubacin), 6h: Y. ruckeri (6h de
incubacin), BL: Blanco de PCR.
353

Gibello A., M.M. Blanco, M.A. Moreno, L. Domnguez, L. & J.F.
Fernndez-Garayzabal. 2001. Utilizacin de la PCR para
el diagnstico en Ictiopatologa. Revista AquaTiC 15: 1-16
Gustafson C.E., C.J. Thomas & T.J. Trust. 1992. Detection of
Aeromonas salmonicida from fsh by using polymerase
chain reaction amplifcation of the virulence surface array
protein gene. Applied and Environmental Microbiology
58: 3816-3825.
Hiney M.P. & P.R. Smith. 1998. Validation of polymerase chain
reaction-based techniques for proxy detection of bacte-
rial fsh pathogens: framework, problems and possible
solutions for environmental applications. Aquaculture
162: 4168.
Horne M.T. & A.C. Barnes. 1999. Enteric redmouth disease (Y.
ruckeri). In: Fish Diseases and Disorders, Volume 3: Viral,
Bacterial and Fungal Infections (ed. by P.T.K. Woo & D. W.
Bruno), Pp. 455-477. CABI Publishing, Oxfordshire, U. K.
Hunter V.A., M.D. Knittel & J.L. Fryer. 1980. Stress-induced
transmission of Yersinia ruckeri infection from carriers
to recipient steelhead trout (Salmo gairdneri, Richardson).
Journal of Fish Diseases 3: 467-472.
Inglis V., R.J. Roberts & N.R. Bromage. 1993. Enteric redmouth
(ERM) and other enterobacterial infections of fsh. In:
Bacterial Diseases of Fish. Pp: 80 -105.
Kirkan ., E.O. Gksoy, S. Tekbiyik, & O. Kaya. 2006. Detection of
Yersinia ruckeri by PCR in rainbow trout (Oncorhynchus
mykiss Walbaum) hatchery farms in the west of Turkey.
J. Fac. Vet. Med. Istanbul Univ. 32(3): 21-30.
Leclereq A., G. Wauters, J. Decallonne, M. El-Lioui & J. Viveg-
nis. 1996. Usefulness of celluler fatty acid patterns for
identifcation and pathogenicity of Yersinia species. Med.
Microbiol. Let. 5: 182194.
Lesel R., M. Lesel, F. Gavini & A. Vuillaume. 1983. Outbreak of
enteric redmouth disease in rainbow trout. Salmo gairdneri
Richardson, in France. J. Fish Dis. 6: 385-387.
PRODUCE (Ministerio de la Produccin, Per). 2010. Viceministe-
rio de Pesquera. Informacin Anual de Pesca. Acuicultura.
Cosecha de recursos hidrobiolgicos procedentes de la
actividad de acuicultura segn mbito y especie, 2010.
Raidal S., G. Cross, S. Fenwick, P. Nicholls, B. Nowak, K. Ellard &
E. Stephens. 2004. Aquatic Animal Health: Exotic Disease
Training Manual. FRDC Project 2002/645. Pp: 4042.
Reno P.W. 1998. Factors involved in the dissemination of disease
in fsh populations. Journal of Aquatic Animal Health 10:
160-171.
Rodgers C.J. 1991. The Control of enteric redmouth disease in Fish.
Trouts News 12: 27-30.
Ross A.J, R.R. Rucker & W.H. Ewing. 1966. Description of a bac-
terium associated with redmouth disease of rainbow trout
(Salmo gairdneri). Canadian Journal of Microbiology.
12: 763-770.
Rucker R. 1966. Redmouth disease of rainbow trout (Salmo gaird-
neri). Bulletin de LOffce International des Epizooties
65: 825-830.
Soltani M., F. Fadaiifard & M.R. Mehrabi. 1999. First report of
yersiniosis-like infection in farmed rainbow trout. Bull.
Eur. Assoc. Fish Pathol. 23: 173-176.
Sousa J.A., J.L. Romalde, A. Ledo, J.C. Eiras, J.L. Barja & A.E.
Toranzo. 1996. Health status of salmonid aquaculture in
North Portugal. First detection of IPN virus. Journal of
Fish Diseases 19: 83-89.
Timur G. & M. Timur. 1991. An outbreak of enteric redmouth disease
in farmed rainbow trout (Oncorynchus mykiss) in Turkey.
Bull. Eur. Ass. Fish Pathol. 11: 182-183.
White T.J., R. Madej & D.H. Persing. 1992. The polymerase chain re-
action: clinical applications. Adv. Clin. Chem. 29: 161-196.
Wilson I.G. 1997. Inhibition and facilitation of nucleid acid ampli-
fcation. Applied and Environmental Microbiology 63:
37413751.
Wiklund T., L. Madsen, M.S. Bruun & L. Dalsgaard. 2000. Detec- Detec-
tion of Flavobacterium psychrophilum from fsh tissue and
water samples by PCR amplifcation. Journal of Applied
Microbiology 88: 299307.
354
355

Materia orgnica y dinmica bacteriana de suelos de cultivos de papa y maz
ISSN 1561-0837
Efecto de la adicin de materia orgnica sobre la dinmica poblacional
bacteriana del suelo en cultivos de papa y maz
David Garca Ventocilla
1
, Gloria Mamani Gamarra
1
, Nicols Romn Cabello
1
,
Luis Surez Salas
2
, Ana Contreras Marn
2
, Julio Malca Jauregui
2
Effect of addition of organic matter on bacterial population dynamics of
soil in potato and corn crops
1 Instituto de Biotecnologa e
Ingeniera Gentica - Universidad
Nacional del Centro del Per.
Ciudad Universitaria, Av. Mariscal
Castilla N 3909 - 4089, El Tambo,
Huancayo, Per. Email David Gar-
cia Ventocilla: d2_gv@hotmail.com
2 Instituto de Investigaciones para
el Desarrollo Tecnolgico (ININ-
DETEC)
Resumen
Se determin el efecto de la fertilizacin orgnica sobre las poblaciones bacterianas del suelo en cultivos de
papa y maz durante la campaa agrcola 2008-2009 en terrenos de cuatro localidades del Valle del Mantaro:
INIA Santa Ana (Huancayo), en la EEA El Mantaro (Jauja), Vista Alegre y Huayao (ambos en Chupaca). En
estos lugares se instalaron parcelas experimentales de papa (Solanum tuberosum L. Var. Canchan) y maz
(Zea maz L. Var. Cusco mejorado) bajo abonamiento orgnico (vacuno, ovino, cuy), fertilizacin qumica y sin
fertilizacin alguna (testigo). Para dicho efecto se emple las tcnicas de la Electroforesis en Gel de Gradiente
Desnaturalizante (DGGE) con amplifcacin de la regin 968 1401 del rDNA 16S. Los resultados obtenidos
muestran que la variabilidad de las poblaciones bacterianas en los suelos est afectado directamente por el
tipo de cultivo mas no por el tipo de fertilizacin ya que el efecto de este ltimo resulta variable para cada
zona experimental y cultivo encontrndose solo en la zona experimental de Chupaca - Maz una segregacin
de los tratamientos con fertilizacin orgnica de los tratamientos qumicos. Tambin se ha encontrado que
la variacin de las comunidades microbianas no sufre variaciones signifcativas en los suelos con cultivos de
maz obtenindose coefcientes de similaridad para todos los tratamientos por encima del 80% mientras que
para los tratamientos en los cultivos de papa dicho coefciente fue de tan solo del 60%.
Palabras clave: Materia orgnica, papa, maz, DGGE.
Abstract
The effect of organic fertilization on soil bacterial populations in potato and corn crops during the crop season
2008-2009 at four sites in the Mantaro Valley locations: INIA Santa Ana (Huancayo), the EEA El Mantaro
(Jauja), Vista Alegre and Huayao (both in Chupaca). In these places were set up experimental plots of potato
(Solanum tuberosum L. var. Canchan) and corn (Zea maize L. Var. Cusco enhanced) under organic manure
(cattle, sheep, guinea pig), chemical fertilizer and no fertilizer at all (control) . To do this we used the techniques
of electrophoresis Denaturing Gradient Gel (DGGE) with amplifcation of the region from 968 to 1401 of 16S
rDNA. The results show that the variability of bacterial populations in soil is directly affected by crop type but
not by the type of fertilization and the effect of the latter is variable for each experimental area and culture found
only in the experimental area of Chupaca - Corn segregation of treatments with organic fertilization of chemical
treatments. We have also found that the variation of the microbial communities did not suffer signifcant varia-
tions in soils with maize similarity coeffcients obtained for all treatments above 80% while for the treatments
in potato crops that rate was only 60%.
Keywords: Organic matter, potato, corn, DGGE.
Introduccin
Se considera que entre el 80 y 90% de los procesos que ocu-
rren en los suelos, son reacciones mediadas por los microorga-
nismos (Nannipieri et al. 2003). Los microorganismos han sido
descritos como el motor de los ecosistemas terrestres (Killham
1994), dado su papel en la mineralizacin y transformacin
de la materia orgnica, adems de infuir directamente en el
metabolismo de las plantas, ya que tambin fjan nitrgeno,
producen metabolitos, actan como controladores biolgicos
e inclusive pueden descomponer productos txicos (Azevedo
1998), tambin ayudan a mantener la estructura del suelo, ya que
actan como agentes cementantes que estabilizan los agregados
del mismo (Elliott et al. 1996). Es por ello que la biomasa micro-
biana toma un papel crtico en todos los ecosistemas naturales y
manipulados por el hombre. Algunas prcticas agrcolas pueden
producir alteraciones crticas en la comunidad microbiana del
suelo. Una de estas prcticas es el uso de excesivos fertilizantes
inorgnicos y pesticidas que causan cambios en las densidades de
hongos y bacterias, la supresin o la promocin del crecimiento,
y la actividad microbiana. Estos cambios pueden contribuir a la
prdida de la diversidad y o funcin de la comunidad microbiana
(Heilmann et al. 1995, Girvan et al. 2004). En cuanto a las prc-
ticas agrcolas que infuyen positivamente en el mantenimiento
de la calidad de los suelos, tenemos el uso de la materia orgnica
como fertilizante, la cual mejora las diversas propiedades del
suelo como la capacidad de intercambio cationico, retencin del
agua y estructura del suelo, pero el aporte probablemente mayor
de este tipo de fertilizacin es el desarrollo y promocin de una
gran actividad biolgica (Felipe-Morales 2002).
Dado a estos antecedentes el objetivo de este estudio fue
determinar el efecto del tipo de fertilizacin orgnica sobre la
distribucin bacteriana en los suelos al fnalizar los cultivos de
papa y maz. Para ello se emple las tcnicas de la Electroforesis
en Gel de Gradiente Desnaturalizante (DGGE), tcnica amplia-
mente utilizada en ecologa microbiana para determinar la com-
posicin y estructura de comunidades microbianas dominantes
permitiendo estudiar las comunidades microbianas en trminos
ecolgico moleculares defnidos por el nmero y/o forma de la
distribucin del material gentico extrado de las poblaciones
bacterianas directamente del suelo (Garbeva et al. 2004).
356
Garca Ventocilla et al.
Material y mtodos
reas de estudio y recoleccin de muestras
La investigacin se realiz durante la campaa agrcola 2008-
2009 en terrenos de cuatro localidades del Valle del Mantaro:
INIA Santa Ana (Huancayo), en la EEA El Mantaro (Jauja),
Vista Alegre y Huayao (ambos en Chupaca). Los anlisis fsico-
qumicos se realizaron en el Laboratorio de Anlisis de Suelos,
Aguas y Plantas (LASAP) y el anlisis molecular para evaluar el
efecto de fertilizacin orgnica sobre las poblaciones bacterianas
en el suelo se realizaron en los laboratorios del Instituto de Bio-
tecnologa e Ingeniera Gentica (IBIG), ambos pertenecientes
a la Universidad Nacional del Centro del Per.
Se instalaron parcelas experimentales de papa (Solanum
tuberosum L. Var. Canchan) y maz (Zea maz L. Var. Cusco
mejorado) en las cuatro zonas anteriormente mencionadas bajo
abonamiento orgnico (ovino (T1), cuy (T2), vacuno (T3)),
fertilizacin qumica (T4) y sin fertilizacin alguna (testigo,
T5). La cantidad de estircol fue de 15 t.ha
-1
para cultivo de
papa y de 10 t.ha
-1
para cultivo de maz. Las dosis de fertilizante
qumico fueron de 0,180 0,120 0,080 tm.ha-1 de N-P-K,
respectivamente (Ver tabla 1).
Optimizacin de las condiciones de desarrollo de la elec-
troforesis en geles de gradiente desnaturalizante.
Extraccin y purifcacin de DNA microbiano de suelo
Se evaluaron tres mtodos de extraccin de DNA microbiano
a partir muestras de suelo. Estos mtodos corresponden a las
metodologas empleadas por Seishi et al. (2004), Quirino et
al. (2006) y Grifths et al. (2000), las cuales fueron adaptadas
a las condiciones del laboratorio en cuanto a equipamiento e
insumos en algunos casos. Para la purifcacin del DNA se hizo
uso de los kits Wizard DNA Clean Up System de la empresa
comercial Promega USA y AxyPrep Multisource DNA Mini
de la empresa comercial Axigen USA. Tanto la concentracin
y pureza de DNA fueron determinados mediante visualizacin
en geles de agarosa.
Amplifcacin de la regin 968 1401 del rDNA 16S
Para la amplifcacin de la regin 968 1401 del rDNA 16S
se emple los iniciadores 968F 1401R y el kit GoTaq DNA
Polymerase (catalogo#: M3005). Se probaron 12 programas
en las que se variaron temperaturas y tiempos de alineamiento,
adems se experimentaron con 12 concentraciones diferentes de
insumos de PCR tales como MgCl2, dNTPs, Taq, y primers.
Electroforesis en geles de gradiente desnaturalizante
(DGGE)
Se prepar geles de polacrilamida al 6% (w/v) con gradiente
de desnaturalizacin de 40-70% (urea formamida). Para la
formacin del gradiente y corrida de los geles se hizo uso del
sistema de electroforesis vertical Denaturing Gradiente Gel
Electophoresis System 2001 de la empresa C.B.S. Scientifc
Compay, Inc. En este equipo se evalu el tiempo y el voltaje a
aplicar en la corrida para la obtencin de bandas con la reso-
lucin deseada. La temperatura y bufer de corrida empleado
en todos los casos fue de 60 C y TAE 0.5X respectivamente.
Para la tincin de los geles se emple el protocolo para tincin
de geles de poliacrilamida con nitrato de plata propuesta por
Embrapa solos (2004).
Efecto de la adicin de la materia orgnica en la diversidad
poblacional bacteriana del suelo
Los perfles de bandas que se obtuvieron a partir de las corri-
das electroforticas (DGGE) fueron convertidos en una matriz
binaria de acuerdo a la presencia o ausencia de bandas. Esta
matriz fue procesada en el software NTSYSpc 2.1 con coefciente
de similaridad DICE y agrupado con el algoritmo UPGMA.
Optimizacin de las condiciones de desarrollo de la elec-
troforesis en geles de gradiente desnaturalizante
De los resultados de la evaluacin de los mtodos para la
extraccin de DNA del suelo, se opt por la metodologa pro-
puesta por Quirino et al. (2006), debido a que se obtiene DNA
de buena calidad y sin presencia de RNA con peso de aproxima-
damente 12000 bp visualizados en gel de agarosa al 1%, cuyo
valor coincide al que reporta Silva (2004) y Bresolin (2006).
Del proceso de estandarizacin de la PCR para la ampli-
fcacin de la regin de 968 1401 del rDNA 16S se logr
obtener amplifcados satisfactorios con el siguiente programa
y formulacin: desnaturalizacin inicial de 3 min a 94 C; 35
tm ha
-1
; n=3
Zona Maz
T1 T2 T3 T4 T5
Huayao 10 10 10 0,18-0,12-0,08 0
Mantaro 10 10 10 0,18-0,12-0,08 0
Santa Ana 10 10 10 0,18-0,12-0,08 0
Chupaca 10 10 10 0,18-0,12-0,08 0
Papa
T1 T2 T3 T4 T5
Huayao 15 15 15 0,18-0,12-0,08 0
Mantaro 15 15 15 0,18-0,12-0,08 0
Santa Ana 15 15 15 0,18-0,12-0,08 0
Chupaca 15 15 15 0,18-0,12-0,08 0
Tabla 1. Dosis de abono orgnico y fertilizante qumico aplicadas a
cada cultivo. Tratamientos: T1: ovino, T2: cuy, T3: vacuno, T4: ferti-
lizacin qumica N-P-K: (T4), Testigo: T5.
Los anlisis se realizaron antes del experimento y al fnal
de los cultivos. La instalacin de las parcelas experimentales
sigui un diseo de bloques completamente randomizado con
tres repeticiones por tratamiento. Se cogieron 100 g de suelo
entre plantas de cada repeticin y cada tratamiento, para ello se
emple una pequea lampa, la cual sirvi para remover la parte
superfcial del suelo tomando de esta manera la alcuota a una
profundidad aproximada entre 5 y 10 cm.
Las muestras recolectadas fueron trasladadas en refrigeracin
al laboratorio para el procesamiento de las mismas que consisti
en la eliminacin del exceso de humedad, tamizado en mallas
de 2 mm de tamao de luz y mezcla de las tres muestras de un
mismo tratamiento para obtener una sola muestra representativa,
la cual sirvi para los anlisis respectivos. Las muestras para los
anlisis moleculares se almacenaron a -40 C.
357

ciclos (desnaturalizacin 94 C x 1 min; alineamiento: 58 C x 1
min; polimerizacin: 72 C x 1 min); extensin fnal de 10 min
a 72 C. La concentracin de los insumos de la PCR fueron:
dNTPs: 0,2 mM; MgCl
2
: 0 mM; Green GoTaq Bufer: 1X;
968 (forward): 0,5 M; 1401 (reverse): 0,5 M; GoTaq DNA
polymerasa: 0,025 U/L.
Para las corridas de los geles DGGE se determin que a las
20 horas, a 70 V y 60 C se obtienen bandas con la separacin
y resolucin adecuada para la interpretacin de los geles.
En el proceso de extraccin y purifcacin de DNA microbia-
no de las muestras de suelo de los tratamientos para cada lugar
y cultivo se pudo apreciar bandas con intensidades diferentes,
esto debido probablemente a la cantidad de material extrado y
origen de estas segn lo reporta Silva (2004). De este ltimo se
resalta la pobre extraccin de DNA de las muestras provenientes
de zona experimental de Santa Ana, logrando extraer DNA a
partir de los suelos con tratamientos T1, T3 y T4 con cultivos
de papa y T5 con cultivos de maz. Esto presumiblemente a la
disminucin de la concentracin de las poblaciones bacterianas
debido a la acidifcacin y salinizacin de los suelos en cultivos
de maz (Tabla 2 y 3).
En cuanto a la amplifcacin de la regin 968 1401 de las
muestras de DNA extrado se obtuvo bandas con peso aproxi-
mado de 450 bp presentando intensidades adecuadas para el
empleo de la tcnica del DGGE. Estos resultados coinciden con
lo reportado por Bresolin (2006).
Efecto de la adicin de la materia orgnica en la diversidad
poblacional bacteriana del suelo
Poblaciones bacterianas antes de la instalacin de los cultivos
Los suelos de las zonas experimentales de Huayao y Chu-
paca presentaron poblaciones bacterianas muy similares cuyo
coefciente de similaridad (CS) alcanz un mximo del 65%.
Adems estos suelos albergaron a una gran cantidad de especies
bacterianas representados por el nmero de bandas presentes en
los geles DGGE (Muyzer & Smalla 1998), encontrndose 64 y
50 bandas para los suelos de Huayao y Chupaca respectivamente.
En los suelos del El Mantaro y Santa Ana el nmero de bandas
presentes fue mucho menor (21 para Mantaro y 20 para Santa
Localidad
Suelo
Trat. pH P CE CaCO
3
(ppm) dS/m %
Chupaca T1 8,03 21,62 0,324 2,34
T2 8,07 0,424 2,34
T3 8,02 0,394 2,56
T4 8,00 0,325 2,45
T5 8,04 0,356 2,46
Santa Ana T1 6,02 23,97 0,157 -
T2 5,94 0,132 -
T3 6,00 0,103 -
T4 6,03 0,106 -
T5 6,18 0,106 -
Mantaro T1 7,37 46,35 0,176 0,37
T2 7,42 0,186 0,35
T3 7,29 0,275 0,23
T4 7,55 0,163 0,45
T5 7,87 0,195 0,46
Huayao T1 7,52 43,41 0,420 0,74
T2 8,06 0,459 1,34
T3 7,55 0,465 1,34
T4 7,84 0,435 2,30
T5 7,87 0,643 2,46
Tabla 2. Propiedades, qumicas del suelo en las cuatro localidades
experimentales antes de aplicar los tratamientos. (Noviembre de
2008). Fosforo (P), Conductividad Elctrica (CE), Carbonato de
calcio (CaCO3).
Localidad/suelo Trat. Cultivo de papa Cultivo de maz
pH P CE pH P CE
(ppm) dS/m (ppm) dS/m
Chupaca T1 -0,03 84,28 0,560 0,37 106,50 -0,106
T2 0,03 71,08 0,530 0,43 59,22 -0,222
T3 0,08 69,48 0,393 0,48 65,05 -0,195
T4 -0,10 75,08 0,471 0,50 90,91 0,046
T5 0,16 72,88 0,440 0,46 65,05 -0,159
Santa Ana T1 0,08 24,93 0,213 -0,42 22,86 0,214
T2 0,36 17,53 0,149 -0,34 34,27 0,393
T3 0,00 26,63 0,252 -0,30 50,82 0,304
T4 -0,63 16,53 0,237 -0,43 27,28 0,224
T5 -0,48 16,33 0,122 -0,68 14,24 0,317
Mantaro T1 -0,07 31,25 0,144 0,73 -13,61 0,090
T2 -0,12 29,35 0,117 0,78 17,63 0,066
T3 0,01 27,95 0,067 0,81 19,75 -0,009
T4 -0,25 -0,35 0,265 0,25 25,03 0,056
T5 -0,57 19,55 0,097 0,23 -19,32 0,062
Huayao T1 0,38 45,09 -0,010 0,68 8,08 -0,156
T2 -0,06 24,59 -0,087 0,24 16,40 -0,204
T3 0,35 13,99 -0,065 0,75 36,13 -0,218
T4 0,06 25,39 0,081 0,46 24,65 -0,176
T5 0,03 5,29 -0,242 0,33 -7,34 -0,382
Tabla 3. Variacin real de los valores correspondientes a las propiedades fsico-qumicas del suelo en las cuatro localidades experimentales
al fnal de los cultivos de papa y maz tratados con cinco tipos de abonamiento. Fosforo (P), Conductividad Elctrica (CE).
358
Ana) resaltando poblaciones bacterianas diferentes de la zona
experimental de Santa Ana en comparacin de las dems zonas
experimentales. Esto se observa en la Figura 1B donde la simi-
laridad de las poblaciones bacterianas de las muestras de suelo
de Santa Ana se separan del resto formando un grupo con una
similaridad del 36%. De estos resultados se evidencia la pobre
fertilizacin biolgica encontrada en los suelos experimentales
del El Mantaro y Santa Ana.
Poblaciones bacterianas despus de la siembra
Chupaca.- En los suelos donde se desarrollaron los cultivos
de papa se encontr un coefciente de similaridad mximo del
89% para los tratamientos T2 y T4. Esto nos indica que ambos
tratamientos favorecen el desarrollo de poblaciones bacterianas
similares. Tambin se puede observar que los grupos T5T3
y T1-T2-T3 proporcionan poblaciones bacterianas con una
similaridad del 79% cuyo valor es un indicativo de la no varia-
cin dramtica en cuanto al manejo de los suelos con diferentes
opciones de fertilizacin. En cuanto a la riqueza de especies
bacterianas representadas por el nmero de bandas presentes
en los geles DGGE se encontr que los tratamientos T1, T3 y
T5 generaron la mayor cantidad de bandas (55, 53 y 50 bandas
respectivamente), mientras que los tratamientos T2 y T4 fueron
los que produjeron el menor nmero de bandas (43 y 42 bandas
respectivamente). Tambin se pudieron apreciar bandas nicas en
los tratamientos T1, T3 y T5 (5, 5 y 3 bandas respectivamente).
En los suelos en donde se desarrollaron los cultivos de maz
se encontr un CS mximo del 93% para los tratamientos T1
y T3 y un CS mnimo del 83% entre los grupos T1-T3-T2 y
T4-T5. Estos valores diferen dramticamente a los obtenidos
en los suelos con cultivo papa, mostrando una relacin directa
entre la distribucin de las poblaciones bacterianas versus la
fertilizacin orgnica, la no fertilizacin y la fertilizacin qu-
mica. En cuanto a la riqueza de especies bacterianas se encontr
que el tratamiento T5 genera una cantidad un poco mayor de
bandas (47 bandas) comparado a los dems tratamientos que
produjeron 44, 44, 42 y 43 en los tratamientos T1, T2, T3 y
T4 respectivamente. En cuanto a la produccin de bandas nicas
el T5 produjo 4 bandas nicas, mientras que el T1, T2 y T4
produjeron 2, 2 y 1 banda respectivamente. El T3 es el nico
que no presenta bandas nicas.
Mantaro.- En los suelos en donde se desarrollaron los cultivos
de papa se encontr un CS mximo del 96% para los trata-
mientos T4 y T5. Los grupos T3 y T1-T2-T4-T5 proporcionan
poblaciones bacterianas con una similaridad del 78%. En cuanto
a la riqueza de especies bacterianas, los tratamientos T1, T2, T4
y T5 generaron la mayor cantidad de bandas (30, 31, 33 y 34
bandas respectivamente), mientras que el tratamiento T3 un
nmero de bandas menor (22 bandas). Solo el tratamiento T4
produjo una banda indita.
se encontr un CS mximo del 98% para los tratamientos T3
y T4 y un CS mnimo del 88% entre los grupos T5 y T1-T2-
T3-T4 mostrando una relacin directa entre la distribucin de
poblaciones bacterianas versus la fertilizacin y la no fertilizacin.
En cuanto a la riqueza de especies bacterianas se encontr que los
tratamientos T3 y T4 presentaron un nmero mayor de bandas
(32 y 31 bandas respectivamente) comparado a los tratamientos
T1, T2 y T5 que produjeron 27, 27 y 23 bandas respectivamente.
El T3 fue el nico que produjo una banda nica.
Huayao.- En los suelos donde se desarrollaron los cultivos de
papa se encontr un CS mximo del 74% para los tratamientos
T1 y T3. Los grupos T2 y T1-T3 proporcionan poblaciones
bacterianas con una similaridad del 78%. En cuanto a la riqueza
de especies bacterianas, los tratamientos T1, T2, T3 generaron
19, 23 y 19 bandas con 2, 7 y 3 bandas nicas respectivamente.
se encontr un CS mximo del 94% para los tratamientos T1 y
T4 y un CS mnimo del 80% entre los grupos T2 y T1-T4-T5
mostrando una relacin directa entre la distribucin de pobla-
ciones bacterianas versus la fertilizacin y la no fertilizacin. En
cuanto a la riqueza de especies bacterianas, los tratamientos T1,
T2, T4 y T5 generaron 25, 19, 25 y 23 bandas con 0, 1, 1, 0
bandas nicas respectivamente.
Santa Ana.- En los suelos en donde se desarrollaron los
cultivos de papa se encontr un CS mximo del 70% para los
tratamientos T1 y T4. Los grupos T3 y T1-T4 proporcionan
poblaciones bacterianas con una similaridad del 60%. En cuanto
a la riqueza de especies bacterianas, los tratamientos T1, T3, T4
generaron 33, 32, 36 con 6, 4, 3 bandas nicas respectivamente.
A partir de estos resultados para ambos cultivos se destaca
que las poblaciones bacterianas en los suelos est afectado di-
rectamente por el tipo de cultivo albergado. Esto concuerda con
los reportado por (Garbeva et al. 2004) quien menciona que
el tipo de planta es el factor determinante en la estructura de
comunidades microbianas del suelo debido a que estos son los
mayores contenedores de formas especfcas de carbono y energa.
Los resultados tambin muestran la poca variacin de las pobla-
ciones bacterianas en los suelos instalados con maz an en los
diferentes manejos que fueron aplicados. Esto se deduce a partir
de los CS por encima del 80%. Estos resultados concuerdan con
lo reportado por RidderDuine et al. (2005) demostrando que
los cultivos de maz no ejercen un efecto consistente en las co-
Coefficient
0,36 0,43 0,50 0,58 0,65
SA
M
H
CH
SA
Figura 1. A: Fotografia de Gel 16S rDNA-DGGE de muestras
recolectadas antes de la instalacin de los cultivos. Mantaro (M),
Huayao (H), Chupaca (CH), Santa Ana (SA). B: Dendograma respec-
tivo de la fgura 1.a generado por el algoritmo UPGMA y coefciente
de similaridad DICE.
359

Chupaca
Papa
Maz
Huayao
Santa Ana
Papa Papa
Maz Maz
Figura 2. Geles 16S rDNA-DGGE. Muestras recolectadas al trmino del cultivo (semana antes de cosecha). Zonas experimentales: Huayao
(H), Chupaca (CH), Santa Ana (SA), Cultivos: papa (P) y maz (M), Tratamientos: T1: ovino, T2: cuy, T3: vacuno, T4: qumico, T5: testigo.
Chupaca
Papa
Maz
Huayao
Mantaro
Papa Papa
Maz Maz
Coefficient
0.79 0.82 0.84 0.87 0.89
CHPT1
CHPT2
CHPT4
CHPT3
CHPT5
Coefficient
0.84 0.86 0.88 0.91 0.93
CHMT1
CHMT3
CHMT2
CHMT4
CHMT5
Coefficient
0.45 0.51 0.58 0.65 0.71
HMT4
HMT4
HMT2
HMT3
Coefficient
0.64 0.67 0.69 0.71 0.74
HPT1
HPT3
HPT2
Coefficient
0.78 0.82 0.87 0.91 0.96
MPT5
MPT4
MPT2
MPT1
MPT3
Coefficient
0.88 0.91 0.93 0.96 0.98
MMT5
MMT4
MMT3
MMT2
MMT1
Figura 3. Anlisis de poblaciones bacterianas a travs de 16S rDNA-DGGE empleando iniciadores 16S (968 1401). Dendograma generado
por el algoritmo UPGMA y coefciente de similaridad DICE. Muestras recolectadas al trmino del cultivo (semana antes de cosecha). Zonas
experimentales: Mantaro (M), Huayao (H), Chupaca (CH), Cultivos: papa (P) y maz (M), Tratamientos: T1: ovino, T2: cuy, T3: vacuno, T4:
qumico, T5: testigo.
360
munidades microbianas de su rizsfera cuando se le compara a lo
largo de un amplio grupo de suelos. Este efecto no ocurre en los
suelos instalados con papa en las cuales los CS estn por encima
del 60%. Otro punto a considerar es la relacin ente el tipo de
fertilizacin con la variabilidad y abundancia de poblaciones
bacterianas se ha encontrado en todos los casos un solo clusters
(Chupaca) que segregan los tratamientos con fertilizacin or-
gnica de los tratamientos qumicos. Con respecto a las dems
zonas experimentales este efecto no result igual. Adeboye et al.
(2006) demostraron que la fertilizacin qumica no presenta un
efecto signifcativo sobre la biomasa microbiana del suelo, pero
si la rotacin del cultivo. Tambin demostraron que el fujo de
la biomasa microbiana del suelo est determinado por el pH y
el carbono orgnico presente en el suelo. Suzuki et al. (2005)
sealan adems que la fertilizacin orgnica tiene poco impacto
en las comunidades microbianas mientras que la inorgnica con
amonio ejerce un fuerte efecto sobre la abundancia relativa de
los diferentes grupos microbianos. Esto queda demostrado en
el trabajo ya que en todos los casos se encontr que la riqueza
de especies microbianas (nmero de bandas) en el tratamiento
qumico result estar a la par o por encima de los tratamientos
con materia orgnica.
Conclusiones.- El efecto del tipo de fertilizacin en la di-
nmica poblacional de las bacterias en el suelo result variable
para cada zona experimental y cultivo. No se ha encontrado
una relacin directa concluyente entre el tipo de fertilizacin
con la distribucin de las comunidades bacterianas. En lugar de
ello se pudo determinar que la variabilidad de las poblaciones
bacterianas en los suelos est afectado directamente por el tipo
de cultivo mas no por el tipo de fertilizacin.
Agradecimientos
Al Programa de Ciencia y Tecnologa-FINCyT por el f-
nanciamiento del presente estudio. As mismo nuestro sincero
agradecimiento a la biloga Milagros Zavaleta Apstegui.
Literatura citada
Adeboye, M.K.A., E.N.O. Iwuafor y J.O. Agbenin. 2006. The effects
of crop rotation and nitrogen fertilization on soil chemical
and microbial properties in a Guinea Savanna Alfsol of
Nigeria. Plant Soil 281: 97107.
Azevedo, J.L. 1998. Biodiversidade Microbiana e Potencial Biotec-
nolgico. In: Melo, I.S.de e Azevedo, J.L.(ed.). Ecologia
Microbiana. EMBRAPA CNPMA, Jaguarina.
Bresolin J.D. 2006. Comparao da comunidade microbiana de
solos sob vegetao nativa e sob os diferentes sistemas
agrcolas em reas de plantio comercial na regio central
do Cerrado. Dissertation (mestrado), Universidade de
Braslia, Instituto de Cincias Biolgicas http://repositorio.
bce.unb.br/handle/10482/6287.
Elliott LF, Lynch JM, Papendick RI. 1996. The microbial component
of soil quality. In: Stotzky G, Bollag JM (eds) Soil bioche-
mistry. Marcel Dekker, New York, pp 121
EMBRAPA. (2004). Avaliao de Diversidade Microbiana em
Amostras de Solos: Tcnica do PCR/DGGE (Protocolo
Laboratorial). Rio de Janeiro: Embrapa Solos (Embrapa
Solos. Documentos, n. 68) pp 31. ISSN 1517-2627
Felipe-Morales, C., 2002. Manejo agro ecolgico del suelo en
sistemas andinos. En Agroecologia: el camino hacia una
agricultura sustentable, Ediciones Cientfcas Americana,
Argentina.
Garbeva, P., veen, J. A. van e Elsas, J. D. van. 2004. Microbial di-
versity in soil: Selection of microbial populations by plant
and soil type and implications for disease suppressiveness.
Annual Review of Phytopathology. 42: 243-270.
Girvan MS, Bullimore J, Pretty JN, Osborn AM, Ball AS (2003)
Soil type is the primary determinant of the composition of
the total and active bacterial communities in arable soils.
Appl Environ Microbiol 69:1800-1809.
Griffths, R.I., Whiteley, A.S., ODonnell, A.G., and M.J. Bailey.
2000. Rapid method for coextraction of DNA and RNA
from natural environments for analysis of ribosomal DNA-
and rRNA-based microbial community composition. Appl.
Environ. Microb. 66:5488-5491.
Heilmann, B. Lebuhn, M. e Beese, F. 1995. Methods for investigation
of metabolic activity and shifts in the microbial community
in soil treated with a fungicide. Biology and Fertility of
Soils. 19: 186-192.
Killham, K. 1994. Soil Ecology. Cambridge University Press, United
Kingdom, pp 242.
Muyzer, G. e Smalla, K. 1998. Application of denaturing gradient
gel electrophoresis (DGGE) and temperature gradient gel
electrophoresis (TGGE) in microbial ecology. Antonie van
Leeuwenhoek 73:127-141;
Nannipieri, P.; Ascher, J.; Ceccherini, M.T.; Landi, L.; Pietra-
mellara, G. E Renella, G. 2003. Microbial Diversity
and Soil Functions. European Journal of Soil Science
54(4):655670
Quirino B.F., Pappas G.J., Tagliaferro A.C., Collevatti R.G., Neto
E.L., da Silva M.R.S.S., Bustamante M.M.C., Kruger R.H.
Molecular phylogenetic diversity of bacteria associated
with soil of the savanna-like Cerrado vegetation (2009)
Microbiological Research, 164 (1), pp. 59-70.
Ridder-Duine, A.S., G.A. Kowalchuk, P.J. Klein Gunnewiek, W.
Smant, J.A. van Veen y W. de Boer. 2005. Rhizosphere
bacterial community composition in natural stands of
Carex arenaria (sand sedge) is determined by bulk soil
community composition. Soil Biol. Bioch. 37: 349-357.
Seishi Ikeda, Kazuo N. Watanabe, Kiwamu Minamisawa and No-
zomi Ytow (2004). Evaluation of Soil DNA from Arable
Land in Japan Using a Modifed Direct-extraction Method.
Microbes Environ. Vol. 19, No. 4, 301309, 2004, URL
[http://wwwsoc.nii.ac.jp/jsme2/].
Silva, M. R. S., 2004: Produo de serapilheira, biomassa e diver-
sidade de comunidades bacterianas do solo em reas de
Cerrado sob diferentes usos e manejos. M.Sc. dissertation,
Departamento de Ecologia, Universidade de Braslia, 77
pp.
Suzuki, C., T. Kunito, T. Aono, C.T Liu y H. Oyaizu. 2005. Microbial
indices of soil fertility. Journal of Applied Microbiology
98: 1062-1074. Alfsol of Nigeria. Plant Soil 281: 97107.
361

Medios de propagacin y enraizamiento in vitro de vid para elaborar pisco
ISSN 1561-0837
Optimizacin de los medios de propagacin y enraizamiento in
vitro de las variedades criollas de vid para elaborar pisco
Eugenio Gonzlez
1
, Diego Pignataro
1
, Gisella Orjeda
1
, Wilfredo L. Gonzles
2
y
Daniel Clark*
1
Optimization of media for in vitro propagation and rooting of creole
grapevine varieties utilized for pisco making
1 Unidad de Genmica, Facultad
de Ciencias y Filosofa, Universidad
Peruana Cayetano Heredia
Avenida Honorio Delgado 430, San
Martn de Porres, (Apartado Postal
4314, Lima 100), Per
2 Laboratorio de Ecologa Evoluti-
va, Facultad de Ciencias y Filosofa,
Heredia
Email Eugenio Gonzlez:
egoncla@gmail.com
Email Diego Pignataro:
jose.pignataro.l@upch.pe
Email Gisella Orjeda:
gisella.orjeda@upch.pe
Email Wilfredo Gonzles:
wilfredo.gonzales@upch.pe
*Autor para correspondencia
Email Daniel Clark:
daniel.clark@upch.pe
Resumen
Los protocolos y medios disponibles para la propagacin y enraizamiento in vitro de la vid no han sido ajus-
tados todava a las variedades criollas con las que se elabora el pisco. En este trabajo se explor el uso de
medios para la propagacin de las variedades Quebranta, Negra Criolla, Albilla, Italia y Torontel, as como para
el enraizamiento de las variedades Quebranta, Albilla y Torontel, a partir de los medios estndares reportados
en la literatura cientfca. Para ello, se pusieron a prueba 11 variantes del medio estndar de propagacin de
vid (medio Murashige y Skoog 1X, 3% de sucrosa, 1 mg/L de benzilaminopurina y 0,8% de agar) en las que
se combinaron reducciones en la fuerza del medio con reducciones en la concentracin de hormona. Para el
enraizamiento posterior, se probaron el cido naftalen actico y el cido indol actico a 5 concentraciones dis-
tintas por cada hormona. Los resultados mostraron que el mejor medio para la propagacin de las variedades
Quebranta, Albilla e Italia es el estndar; las variedades Negra Criolla y Torontel tuvieron mejor desempeo
con una reduccin de la concentracin de benzilaminopurina a 0,25 y 0,5 mg/L, respectivamente. El mejor
enraizamiento en la variedad Quebranta ocurri con 80 g/L de cido naftalen actico y 2 mg/L de cido indol
actico; las variedades Albilla y Torontel tuvieron una mejor respuesta al cido indol actico a concentraciones
de 2 y 1 mg/L, respectivamente.
Palabras clave: Cultivo in vitro, propagacin, enraizamiento, vides criollas, pisco.
Abstract
The protocols and culture media available for in vitro propagation and rooting of grapevine have not yet been
adjusted to the creole varieties used for pisco making. In this paper we explored the use of culture media for
the propagation of varieties Quebranta, Negra Criolla, Albilla, Italia and Torontel and for rooting varieties of
Quebranta, Albilla and Torontel based on known standard culture media.To address this issue, 11 media derived
from the standard propagation medium for grapevine (1X Murashige & Skoog medium, 3% sucrose, 1 mg/L
benzilaminopurine, and 0,8% agar) with diminished medium strength and/or hormone concentration were tested.
In addition, 5 concentrations of naphtalen acetic acid or indol acetic acid were tested for rooting. We found that
Quebranta, Albilla, and Italia varieties show a better growth in the standard propagation medium; by contrast,
Negra Criolla and Torontel grew better in media with diminished benzilaminopurine concentrations (0,25 and
0,5 mg/L, respectively). Quebranta rooted better with 80 g/L naphtalen acetic acid or 2 mg/L indol acetic
acid, while Albilla and Torontel showed better rooting results with 2 and 1 mg/L indol acetic acid, respectively.
Keywords: Tissue culture, propagation, rooting, creole grapevines, pisco
Introduccin
La vid (Vitis vinifera) es una dicotilednea leosa cuyos frutos
se utilizan tanto para consumo directo como para la elaboracin
de bebidas alcohlicas. El cultivo de la vid fue introducido en
el Per por los espaoles durante el siglo XVI (Lacaste 2004)
para la elaboracin de vinos. A partir del siglo XVII se empez
a producir un destilado que se denomin pisco, nombre de la
localidad en la que se produca el destilado de mayor calidad. En
la actualidad el pisco es uno de los productos bandera del Per
y su produccin ha venido creciendo de forma sostenida hasta
llegar a los 6,67 millones de litros en el ao 2009 (CONAPISCO
2010). El pisco se produce a partir de un grupo de variedades
criollas de vid que se dividen en aromticas (Albilla, Italia,
Moscatel y Torontel) y no aromticas (Mollar, Negra Criolla,
Quebranta y Uvina). De todas ellas, la nica variedad que se
distingue genticamente de aquellas cultivadas en otros pases
es la Quebranta (Pignataro y Orjeda, resultados no publicados).
Un paso importante para mejorar el rendimiento cualitativo
y cuantitativo del viedo es la seleccin clonal de los mejores
especmenes. Ello implica una evaluacin de las plantas en un
territorio determinado, la seleccin de los mejores individuos
de acuerdo a criterios sanitarios y productivos, la evaluacin
de clones de estos individuos en parcelas experimentales y del
producto obtenido a partir de ellos, y la propagacin vegetativa a
escala masiva para reemplazar las plantas de menor rendimiento
en el campo (Muoz-Organero et al. 2001). Una estrategia
utilizada para la multiplicacin a gran escala de clones de vid
en condiciones aspticas es la propagacin in vitro (Chee et al.
1984). Ella consiste en introducir yemas apicales o axilares este-
rilizadas de forma superfcial en un medio slido suplementado
con hormonas vegetales que inducen la formacin de nuevos
brotes, cada uno de los cuales puede, a su vez, originar una nueva
planta. La metodologa permite entonces una multiplicacin
geomtrica cuyo lmite es impuesto por la eventual prdida de
vigor de los nuevos brotes. El procedimiento se completa con el
enraizamiento de los brotes en medio slido, la transferencia de
las plntulas a un substrato nutritivo y su posterior adaptacin
a las condiciones de vivero (Chee et al. 1984).
362
Gonzlez et al.
Las investigaciones realizadas en los ltimos 30 aos con
variedades de vid para consumo de mesa o para la elaboracin
de vinos han permitido defnir medios y condiciones de cultivo
estndares para la propagacin in vitro (Chee et al. 1984; Sim
2006). Si bien la mayora de variedades estudiadas muestran
una buena respuesta con los medios estndares, algunas crecen
de manera anormal o son incapaces de desarrollar los nuevos
brotes indispensables para la propagacin. En estos casos es
necesario cambiar la composicin del medio para optimizar el
procedimiento (Sim 2006).
Los esfuerzos por introducir y propagar in vitro las variedades
criollas utilizadas para la elaboracin del pisco en el Per han
sido aislados y poco sistemticos, por lo que en la actualidad no
se dispone de protocolos para llevar a cabo este trabajo. Ello debe
subsanarse si es que se pretende mejorar el viedo destinado a la
produccin de pisco a travs de un proceso de seleccin clonal.
En este trabajo hemos llevado a cabo la optimizacin del medio
para la propagacin de las variedades Quebranta, Negra Criolla,
Albilla, Italia y Torontel, as como para el enraizamiento de las
variedades Quebranta, Albilla y Torontel, a partir de los medios
estndares reportados en la literatura cientfca.
Material y mtodos
Material vegetal
Se trabaj con una planta adulta de cada una de las variedades
Quebranta, Negra Criolla, Albilla, Italia y Torontel, donadas
por el Centro de Innovacin Tecnolgica Vitivincola (CITE-
vid). La identidad varietal fue confrmada por tipifcacin con
9 marcadores de microsatlites (Tis et al. 2004; Pignataro y
Orjeda, resultados no publicados) y las plantas se mantuvieron
en condiciones de vivero con aplicacin mensual de insecticidas,
fungicidas y estimulantes foliares.
Preparacin de las yemas y obtencin de brotes por propagacin
in vitro
Con un escalpelo se cortaron fragmentos de 1,5 2 cm que
contenan una yema apical o una yema axilar a partir de brotes
vigorosos. Estos fragmentos fueron colocados en agua, llevados
inmediatamente al laboratorio y lavados en agua corriente con
detergente lquido para vajilla (1 gota por litro) y 1,5 g/L de
FARMATE (fungicida) en un frasco bajo agitacin por 10
min. Luego de enjuagarlos en agua corriente fueron tratados
por 10 min con hipoclorito de sodio (leja comercial) al 2%
en un frasco bajo agitacin. Los fragmentos se lavaron 3 veces
con agua desionizada estril por 10 min bajo agitacin y fueron
colocados en placas petri (2 cm de altura x 9 cm de dimetro)
con medio estndar slido (macronutrientes, micronutrientes
y vitaminas de Murashige y Skoog [MS], suplementados con
3% de sucrosa, 1 mg/L de benzilaminopurina [BA] y 0,8% de
agar). Las placas se colocaron en un cuarto de cultivo bajo 4000
lux (tubos fuorescentes de 36 watt Eco Lumilux Osram), con
un fotoperiodo de 16 horas de luz por 8 de obscuridad y a una
temperatura de 24 C. Los fragmentos fueron transferidos a me-
dio fresco cada 2 semanas. Los brotes generados a partir de cada
fragmento fueron utilizados para llevar a cabo los experimentos
de optimizacin de medios.
Optimizacin de los medios de propagacin
Para aproximarse al medio ptimo para la propagacin de
cada variedad, se probaron 12 medios de propagacin en los que
se vari la composicin del medio estndar tal como se describe
a continuacin:
Medio MSX BA (mg/L)
1* 1 1
2 1 0,5
3 1 0,25
4 1 0
5 0,5 1
6 0,5 0,5
7 0,5 0,25
8 0,5 0
9 0,25 1
10 0,25 0,5
11 0,25 0,25
12 0,25 0
*Medio estndar
Todos los medios contuvieron 3% de sucrosa y 0,8% de
agar. Cinco brotes de entre 0,5 y 1,6 cm de longitud obtenidos
a partir de cultivos in vitro (ver seccin anterior) se colocaron
en placas con cada uno de los medios a ser probados. Las placas
fueron colocadas en un cuarto de cultivo bajo 4000 lux, con
un fotoperiodo de 16 horas de luz por 8 de obscuridad y a una
temperatura de 24 C. Adems de evaluarse la evolucin en el
tiempo de su apariencia general, se midieron 3 parmetros aso-
ciados al xito de la propagacin: (1) crecimiento del explante
(diferencia entre la longitud fnal y la longitud inicial); (2)
nmero de hojas; y (3) el producto del nmero de brotes por
la longitud de los mismos. Se excluyeron del anlisis los brotes
contaminados durante el experimento. Los tiempos de evalua-
cin se establecieron en funcin a la velocidad de crecimiento
de cada variedad.
Optimizacin de los medios de enraizamiento
Para el enraizamiento se pusieron a prueba 10 medios que
consistieron de las concentraciones estndar de medio MS
suplementadas con 3% de sucrosa y 0,8% de agar a las que se
aadieron las concentraciones de cido naftalen actico (NAA)
o cido indol actico (IAA) de acuerdo al esquema siguiente:
NAA IAA
Medio 1: 40 g/L Medio 6: 0,5 mg/L
Medio 3: 80 g/L Medio 8: 1 mg/L
Medio 5: 120 g/L Medio10: 2 mg/L
Las concentraciones de NAA de 80 g/L y de IAA de 1 mg/L
son las que se utilizan con mayor frecuencia para el enraizamiento
in vitro de la vid. En cada medio se probaron 5 brotes obtenidos
en medio estndar de propagacin (ver seccin anterior), los
cuales fueron colocados individualmente en tubos que contu-
vieron 10 mL del medio de enraizamiento. El parmetro que
se midi en el tiempo fue el producto del nmero de races por
la longitud de las mismas; adems, se registr el porcentaje de
plantas enraizadas. Como en el caso de los medios de propaga-
cin, se excluyeron del anlisis los brotes contaminados durante
el experimento y los tiempos de evaluacin se establecieron en
funcin a la velocidad de crecimiento de cada variedad.
Anlisis estadstico
Se realizaron los anlisis para cada tipo de cada variedad por
separado. En el caso de los medios de propagacin, se realiz un
363

anlisis de varianza de 2 factores con el propsito de evaluar el
efecto de los cambios en las concentraciones de MS y BA sobre
la propagacin de los brotes (crecimiento del explante, nmero
de hojas y el producto del nmero de brotes por la longitud de
los mismos). Para los medios de enraizamiento, se utiliz un
anlisis de varianza anidado considerando como factores las
hormonas (NAA e IAA) y las diferentes concentraciones de hor-
mona en el medio (anidadas dentro de cada tipo de hormona).
De esta manera se calcul el efecto del tipo de hormona y su
concentracin sobre el crecimiento radicular (nmero de races
por longitud de las mismas).
Optimizacin de medios de propagacin
Los experimentos de optimizacin de medios de propagacin
tuvieron duraciones distintas segn la velocidad de crecimiento
in vitro de cada variedad: 30 das para Quebranta, 17 das para
Albilla, 19 das para Italia, 16 das para Negra Criolla y 23 das
para Torontel. Los resultados se muestran en la Figura 1 y en la
Tabla 1. El comportamiento de los parmetros cuantifcados en
relacin a las variaciones de fuerza del medio MS y de concen-
tracin de BA permiten distinguir 2 grupos de variedades: (1)
las variedades Quebranta, Albilla e Italia, en las cuales el medio
estndar favoreci con claridad un mejor desempeo y en las que
las variaciones de fuerza de MS o concentracin de BA hechas en
el resto de medios dieron resultados similares y de menor efcacia
(Fig. 1 A, C y D); y (2) las variedades Negra Criolla y Torontel,
en las que se observ un efecto mayor de la fuerza del medio
MS, y un efecto variable y ms modesto de la concentracin de
BA (Fig. 1B y E). En la variedad Negra Criolla la infuencia de la
fuerza del medio MS sobre el crecimiento del explante fue clara
en las 4 concentraciones de BA, en tanto lo fue sobre el nmero
de hojas y el producto del nmero de brotes por la longitud de
los mismos con las concentraciones de 1, 0,5 y 0,25 mg/L de
BA (Fig. 1B); en la variedad Torontel la infuencia de la fuerza
del medio MS sobre el crecimiento del explante y el nmero
de hojas fue evidente con 1, 0,5 y 0,25 mg/L de BA, y sobre el
producto del nmero de brotes por la longitud de los mismos
con 1 y 0,5 mg/L de BA (Fig. 1E). Por otro lado, los efectos de
la concentracin de BA muestran que, con una fuerza de medio
1X MS, una concentracin de 0,25 mg/L de BA permite obtener
los mejores resultados para el conjunto de los 3 parmetros en
la variedad Negra Criolla (Fig. 1B), mientras que en la variedad
Torontel la mejor concentracin fue de 0,5 mg/mL (Fig. 1E).
Se ha reportado que la disminucin de la fuerza del medio MS
puede aumentar el nmero de brotes en algunas especies y por
ello suele probarse su efecto en los experimentos de optimizacin
de medios (Frett 1987). Si bien en el caso de las variedades Negra
Criolla y Torontel la disminucin de la fuerza del medio MS
tuvo un efecto en el nmero de brotes (datos no mostrados y
producto del nmero de brotes por la longitud de los mismos),
el efecto fue opuesto al reportado, es decir, se observ un ma-
yor nmero de brotes conforme mayor era la fuerza del medio.
En cuanto al uso de citoquininas como la BA, su efecto en la
Crecimiento del explante N de hojas N de brotes x longitud.
G L MS F P MS F P MS F P
Quebranta
MS 1 0,36 6,81 0,0125 9,03 7,36 0,0096 0,51 3,27 0,0779
BA 2 0,04 0,72 0,4929 32,33 26,38 <0,0001 1,92 12,37 0,0001
MS X BA 5 0,05 1,00 0.4287 21,81 17,80 <0,0001 2,42 15,58 <0,0001
Error 42 0,05 1,23 0,16
Negra criolla
MS 2 2,22 130,14 <0,0001 39,22 30,96 <0,0001 8,95 42,96 <0,0001
BA 3 0,07 4,29 0,0092 13,39 10,57 <0,0001 3,00 14,39 <0,0001
MS X BA 6 0,03 1,67 0,1493 1,86 1,47 0,2088 0,95 4,58 0,0009
Error 48 0,02 1,27 0,21
Albilla
MS 2 1,83 48,92 <0,0001 24,12 13,04 <0,0001 1,85 18,33 <0,0001
BA 3 0,33 8,93 0,0001 19,79 10,70 <0,0001 4,14 41,06 <0,0001
MS X BA 6 0,39 10,56 <0,0001 41,96 22,68 <0,0001 5,21 51,64 <0,0001
Error 48 0,04 1,85 0,10
Italia
MS 2 0,28 14,23 <0,0001 12,95 9,59 0,0003 1,19 10,98 0,0001
BA 3 0,08 4,28 0,0093 5,53 4,10 0,0114 0,03 0,29 0,8356
MS X BA 6 0,05 2,78 0,0210 17,55 13,00 <0,0001 0,39 3,63 0,0047
Error 48 0,02 1,35 0,11
Torontel
MS 2 2,25 12,14 <0,0001 3,29 115,91 <0,0001 54,05 25,42 <0,0001
BA 3 1,28 6,91 0,0006 0,39 13,84 <0,0001 19,33 9,09 0,0001
MS X BA 6 0,40 2,14 0,0657 0,13 4,55 0,0010 5,45 2,56 0,0314
Error 47 0,19 0,03 2,13
Tabla 1. Anlisis de varianza de dos factores del efecto de la fuerza del medio MS y la concentracin de benzilaminopurina (BA) sobre el
crecimiento del explante, el nmero de hojas y el producto del nmero de brotes por su longitud en las variedades criollas de vid estudiadas.
364
Gonzlez et al.
proliferacin de brotes axilares ha sido demostrado en mltiples
trabajos de propagacin in vitro (van Staden et al. 2008). En
general, las variedades criollas con las que hemos trabajado
mostraron un mayor nmero de brotes con la concentracin
ms alta de BA (1 mg/L), con excepcin de los casos ya sea-
lados de las variedades Negra Criolla y Torontel. No obstante,
debemos sealar que cuando la fuerza del medio MS fue menor
a 1X, el efecto de dicha concentracin de BA en el nmero de
brotes no fue evidente, lo que sugiere una fuerte dependencia
de la respuesta a BA en relacin a la fuerza del medio en estas
variedades de vid. En su conjunto, estos hallazgos confrman la
complejidad de la respuesta de las distintas especies o variedades
a las variaciones en la composicin del medio y la difcultad para
establecer patrones generales.
Nuestros resultados permiten concluir que para las variedades
Quebranta, Albilla e Italia, el medio ptimo de propagacin fue
el estndar (medio 1), en tanto el medio 3 lo fue para la variedad
Negra Criolla y el medio 2 para la variedad Torontel. Si bien la
contaminacin de los fragmentos nos impidi tener resultados
para el medio 7 en la variedad Quebranta, mediciones hechas an-
tes de que ocurriera la contaminacin (20 das luego de iniciado
el experimento) revelaban ya una menor efcacia en relacin al
medio estndar (datos no mostrados). Se debe enfatizar tambin
que no se han considerado medios de propagacin con fuerza de
medio MS o concentraciones de BA superiores a las del medio
estndar por 2 razones: (1) est reportado que medios de cultivo
con alto contenido de sales suelen estar asociados a la formacin
de tejidos rgidos y de formas distorsionadas (vitrifcacin) y que
las concentraciones altas de BA promueven una formacin no
deseada de callos (Sim 2006); y (2) en experimentos prelimi-
nares hechos en nuestro laboratorio con la variedad Quebranta
se encontr que el crecimiento en medios con 2X MS, 2 mg/L
de BA o ambos a la vez , era muy pobre en relacin al medio
estndar (datos no mostrados).
Optimizacin de los medios de enraizamiento
El tiempo para los experimentos de optimizacin de los me-
dios de enraizamiento se empez a contar a partir de la aparicin
de las primeras races en cada experimento, lo cual ocurri entre
los 10 y 18 das de colocados los brotes en los medios con las 3
variedades evaluadas. La duracin de los experimentos fue de 18
das para Quebranta, 14 das para Albilla y 22 das para Torontel.
Los resultados se muestran en la Figura 2 y la Tabla 2. Un primer
examen revela que el efecto de las hormonas y los tratamientos
utilizados fue distinto en las 3 variedades. El ANOVA anidado no
indic diferencias signifcativas entre el tratamiento con ambas
hormonas ni permiti identifcar un mejor tratamiento entre
todos los administrados en la variedad Quebranta. No obstante,
los mejores promedios para el parmetro medido se obtuvieron
con 80 g/L de NAA y con 2 mg/L de IAA (Fig. 2A). En la va-
riedad Albilla el anlisis no establece una diferencia signifcativa
entre el grupo de tratamientos con NAA y el grupo con IAA, pero
s identifca al tratamiento con 2 mg/L de IAA como el mejor
(Fig. 2B). En la variedad Torontel hay una diferencia signifca-
tiva entre los tratamientos con NAA y aquellos con IAA, estos
ltimos con mejores resultados. No obstante no identifcarse
un tratamiento signifcativamente superior en el anlisis, fue el
medio con 1 mg/L de IAA el que permiti obtener los mejores
Figura 1. Efecto de la fuerza del medio MS (macronutrientes, micronutrientes y vitaminas de Murashige y Skoog) y la concentracin de
benzilaminopurina (BA, mg/L) sobre el crecimiento del explante, el nmero de hojas y el producto del nmero de brotes por la longitud de 5
variedades criollas de vid: (A) Quebranta, (B) Negra criolla, (C) Albilla, (D) Italia y (E) Torontel. Las fuerzas de MS fueron 1X (cuadrado),
0,5X (crculo) y 0,25X (triangulo). Se muestra el promedio 1EE.

0
2
4
6
8
10
0
1
2
3
4
Concentracin de BA (mg/L)
N

d
e

b
r
o
t
e
s

x

l
o
n
g
i
t
u
d

(
c
m
)
N

d
e

h
o
j
a
s
C
r
e
c
i
m
i
e
n
t
o

(
c
m
)
A. Quebranta B. Negra criolla C. Albilla D. Italia E. Torontel
1,5
1,0
0,5
0,0
0 0,25 0,5 1 0 0,25 0,5 1 0 0,25 0,5 1 0 0,25 0,5 1 0 0,25 0,5 1
365

promedios para el parmetro medido (Fig. 2C). El porcentaje
de plantas enraizadas observado con los mejores medios para
cada variedad fue de 100%, excepto para la variedad Torontel
en la que se lleg a un 75%.
En trminos generales, se obtuvieron mejores resultados con
IAA en 2 de las 3 variedades estudiadas (Albilla y Torontel); en
la variedad Quebranta, el desempeo con las 2 hormonas fue
comparable (Fig. 2 y Tabla 2). Cabe sealar que los mejores
resultados con IAA en las variedades Quebranta y Torontel se
obtuvieron con una concentracin que fue el doble de la que
se suele utilizar (1 mg/mL). A diferencia del NAA, que es una
auxina sinttica muy estable en el medio de cultivo, el IAA es
una auxina natural cuya concentracin tiende a caer al oxidarse
bajo condiciones de cultivo. Esta propiedad ha sido aprovechada
en casos como el enraizamiento de micro-cortes de manzana,
en el que se ha determinado que la formacin de las races re-
quiere concentraciones de auxina mayores que las que requiere
el posterior crecimiento de las mismas (Machakova et al. 2008).
Nuestros resultados sugieren que un fenmeno similar podra
ocurrir con las variedades criollas de vid evaluadas.
La concentracin de sucrosa utilizada en el medio de enrai-
zamiento en este trabajo fue de 3%. Dado que algunos medios
utilizados para el enraizamiento de otro tipo de vides tienen
concentraciones algo menores (1 1,5%) (Chee et al. 1984; Sim
2006), ser importante determinar en un futuro si este factor
ejerce una infuencia signifcativa en el enraizamiento de las va-
riedades criollas de vid y en su respuesta a los 2 tipos de auxina.
Consideraciones fnales
El trabajo que se presenta debe considerarse como un estu-
dio preliminar por el nmero limitado de plantas de las que se
obtuvo el material de partida y por no abarcar la totalidad de
Figura 2. Comparacin del efecto de diferentes concentraciones de cido naftalen actico (NAA) o cido indol actico (IAA) sobre el crecimiento
radicular de 3 variedades criollas de vid: (A) Quebranta, (B) Albilla y (C) Torontel. Se muestra el promedio 1EE.
0
5
10
15
20
25
N

d
e

r
e
a
c
e
s

x

l
o
n
g
i
t
u
d

(
c
m
)
0
5
10
15
20
Acido naftalen actico (NAA, g/L)
20 40 60 80 100 120
0
2
4
6
8
10
cido indol actico (IAA, mg/L)
0,5 0,75 1,0 1,5 2,0
A. Quebranta
B. Albilla
C. Torontel
366
Gonzlez et al.
las variedades criollas de vid utilizadas en la elaboracin del
pisco. No obstante, consideramos que la informacin incluida
es una importante contribucin para el manejo in vitro de estas
variedades y deber complementarse con estudios posteriores en
los que se tenga acceso a una mayor cantidad de especmenes.
Agradecimientos
Agradecemos al Centro de Innovacin Tecnolgica Vitivin-
cola (CITEvid) por las facilidades brindadas para el desarrollo
de este trabajo, en particular a los ingenieros Manuel Morn y
Manuel Gmez, y a la biloga Hanna Cceres. La realizacin
de este trabajo fue posible gracias a los fondos otorgados por el
Programa de Ciencia y Tecnologa (Contrato N 004-FINCyT-
PIBAP-2007) y por el Consejo Nacional de Ciencia, Tecnologa
e Innovacin Tecnolgica (Contrato 266-2007-CONCYTEC-
OAJ).
Literatura citada
Chee R., R.M. Pool & D. Bucher. 1984. A method for large scale
in vitro propagation of Vitis. New Yorks Food and Life
Sciences Bulletin. (109): 1-9.
CONAPISCO. 2010. (en lnea). Estadsticas de la Comisin Nacio-
nal del Pisco. <http://www.conapisco.org.pe/estadisticas.
htm>. Acceso 17/02/2011.
Frett J.F. 1987. Infuence of nutrient salts, auxins and cytokinins on
the in vitro growth of Salvia greggii. Plant Cell, Tissue
and Organ Culture. 9: 89-93.
Lacaste P. 2004. La vid y el vino en Amrica del Sur: el despla-
zamiento de los polos vitivincolas (siglos XVI al XX).
Revista Universum. 2(19): 62-93.
Machakova I., E. Zazimalova & E.F. George. 2008. Plant growth
regulators I: Introduction; Auxins, their analogues and
inhibitors. In E.F. George, M.A. Hall, and G-J. De Klerk,
eds. Plant propagation by tissue culture. Springer, Dor-
drecht. Pp. 205-226.
Muoz-Organero G., I. Rodrguez-Torres & F. Cabello. 2001.
Importancia de la seleccin clonal de variedades de vid.
Acenologa. (12).
Sim S.T. 2006. Virus elimination from grape selections using tissue
culture. FPS Grape Program Newsletter. Pp. 30-31.
This P., A. Jung, P. Bocacci, et al. 2004. Development of a standard
set of microsatellite reference alleles for identifcation
of grape cultivars. Theor. Appl. Genet. 109: 1448-1458.
van Staden J., E. Zazimalova & E.F. George. 2008. Plant growth
regulators II: Cytokinins, their analogues and antagonists.
In E.F. George, M.A. Hall, and G-J. De Klerk, eds. Plant
propagation by tissue culture. Springer, Dordrecht. Pp.
205-226.
GL MS F P
Quebranta
Hormona 1 10,6 0,19 0,6653
Medio(Hormona) 8 95,6 1,72 0,1257
Error 37 55,5
Albilla
Hormona 1 0,2 0,03 0,8704
Medio(Hormona) 8 77,8 9,39 <0,0001
Error 38 8,3
Torontel
Hormona 1 63,5 8,44 0,0063
Medio(Hormona) 8 10,6 1,41 0,2260
Error 35 7,5
Tabla 2. Anlisis de varianza anidado del efecto de las auxinas cido
naftalen actico (NAA) y cido indol actico (IAA) sobre el crecimiento
radicular de 3 variedades criollas de vid.
367

Colonizacin intraluminar testicular y diferenciacin de la masa celular interna
ISSN 1561-0837
Colonizacin intraluminar testicular y diferenciacin de la masa
celular interna en ratones (Mus musculus)
Lyonal Acosta*, Vctor Nez, Jose Pino, Betty Shiga
Intraluminar testicular colonization and differentiation of the inner cell
mass in mice (Mus Musculus)
Laboratorio de Reproduccin y
Biologa del Desarrollo, Facultad
de Ciencias Biolgicas, Universidad
Lima, Per. Casilla 11-0058, Lima
11, Per. Tel.: +51 6 197000 1529;
fax: +51 6 197000 1509.
*Autor para las correspondencias,
email Lyonal Acosta:
acostaclg@gmail.com
Resumen
Cuando las clulas germinales primordiales (CGPs) son trasplantadas al testculo de otro individuo de la
misma especie; colonizan el lumen de los tbulos seminferos, buscando su nicho para diferenciarse en es-
permatozoides. Nuestro objetivo fue evaluar la colonizacin intraluminal de una suspensin de clulas de la
masa celular interna (MCI) obtenidas de blastocistos de ratones. Una suspensin de MCI obtenidos mediante
una inmunociruga en la red testicular de animales tratados previamente con ciclofosfamida para disminuir su
propia espermatognesis fueron trasladados a animales receptores. Se comprob la presencia de minitbulos
intraluminales en 2 de 100 tbulos seminferos, lo que demuestra que el trasplante de una suspensin de clulas
de la masa celular interna pueden colonizar los tbulos seminferos y adems mantener una espermatognesis
xenognica de manera sincrnica con el receptor.
Palabras Clave: Clulas madre pluripotentes, clulas madre germinales, testculo, minitbulos, espermato-
gnesis.
Abstract
Primordial germ cells (PGC`s) are transplanted to testicle of other individual of the same species, they colonize
the lumen of the seminiferous tubules, seeking a niche to differentiate into sperm. Our objective was to evalu-
ate the intraluminal colonization of a suspension of cells in the inner cell mass (IMC`s) of blastocysts obtained
from mice, using a novel technique. It was transplanted a suspension of ICM by mean of inmunosurgery into
the rete testis of recipient animals which were previously treated with cyclophosphamide to reduce their own
spermatogenesis. We confrmed the presence of intraluminal minitubules in 2 of 100 seminiferous tubules,
demonstrating that transplantation of a suspension of cells from the inner cell mass can colonize the seminifer-
ous tubules and also maintain a synchronously xenogenic spermatogenesis with the receiver.
Keywords: Pluripotent stem cells, germ stem cells, testes, minitubules, spermatogenesis.
Introduccin
Durante el desarrollo temprano normal del embrin, sus
blastmeros son totipotentes y por lo tanto capaces de generar
un nuevo individuo por s solas. Posteriormente, el desarrollo
embrionario contina y las clulas embrionarias empiezan a
diferenciarse estableciendo su destino celular. En ratones, al
sptimo da posterior a la copula, aproximadamente 100 clulas
de la regin del epiblasto se constituyen en las clulas germinales
primordiales (PGCs), identifcadas por su actividad fosfatasa
alcalina (Chiquoine 1954). Las PGC`s migran hacia las crestas
gonadales, formando los gonocitos a los 11,5 das posterior a
la copula (Loefer & Pottern 1997, McLaren 1998). Esta ca-
pacidad de las clulas germinales para participar en el proceso
de desarrollo embrionario una y otra vez, indican que las CGPs
son potencialmente inmortales (Donovan et al. 1997, Donovan
1998, Tsang et al. 2001).
La Terapia celular es una nueva herramienta para la medicina
regenerativa, que hoy en da tiene su base en el uso de clulas
madre. Una clula madre o stem cell se defne como una clula
progenitora, autorrenovable, capaz de regenerar uno o ms tipos
celulares diferenciados. Las clulas madres tienen la capacidad
de llegar a convertirse en cualquiera de los ms de 200 tipos
de clulas diferentes del cuerpo y juegan un importante rol en
reparar rganos y tejidos (Johnson & Williams 2006).
Las clulas madre pluripotentes o embrionarias son las que
derivan de la masa celular interna (MCI) de un embrin de
mamfero en el estado de blastocisto, esto es dependiendo de
la especie, 4 7 das despus de la fecundacin y pueden ser
expandidas sin lmite in vitro (Evans & Kaufman 1981, Martin
1981, Tomson et al. 1998).
Los gonocitos en los vertebrados pueden diferenciarse in vitro
(Geijsen et al. 2004, Lacham-Kaplan et al. 2006, Nayernia et
al. 2006); Asimismo, tambin se ha demostrado en el ratn que
las clulas madres embrionarias (CME) pueden diferenciarse in
vitro a clulas madres espermatogoniales (CME) con ayuda de
un promotor y stas son capaces de generar gametos haploides
masculinos funcionales (Nayernia et al. 2007). Se ha podido
demostrar que las clulas madres somticas adultas pueden llegar
a generar CMG, pero no tienen la capacidad de entrar a meiosis
(Nayernia et al. 2007).
El transplante exitoso de clulas germinales, desde un indivi-
duo adulto a otro individuo adulto, fue descrito por primera vez
en 1994 entre ratones inmunocompatibles (Brinster & Abarbock
1994, Brinster & Zimmermann 1994). El transplante consisti
en recolectar clulas germinales desde un animal donador e
inyectarlas en los tbulos seminferos del animal receptor, con
el objetivo de que la espermatognesis del animal donador se
realice en los testculos del animal receptor. De esta manera al
transplantar intraespecfcamente las clulas germinales, stas
368
Acosta et al.
colonizan la membrana basal de los tbulos seminferos del ani-
mal receptor en busca del nicho donde se desarrollan las clulas
madre. Se ha reportado que en transplantes de PGCs en ratas
muestran una colonizacin atpica la cual se ha denominado
como espermatognesis intraluminal. Guzmn (2002) evalu la
colonizacin intraluminal de una suspensin cruda de PGC`s
de fetos de ratn de la cepa Balb C en los tbulos seminferos
de ratones adultos, obteniendo una colonizacin intraluminal
en 1 de cada 100 tbulos seminferos evaluados
El objetivo del presente estudio fue evaluar la colonizacin
intraluminal de una suspensin de clulas de la masa celular
interna (MCI) obtenidas de blastocistos de ratones.
Material y mtodos
Animales.- Se utilizaron ratones de la cepa albina Swiss
Rockefeller; machos (N= 8) de 10 a 12 semanas de edad y de
fertilidad comprobada y hembras vrgenes (N= 8) de 6 a 8 se-
manas de edad. Los ratones machos receptores (N= 8) fueron de
la cepa C57BL (8 a 10 semanas). Ambas cepas se mantuvieron
en condiciones de laboratorio (temperatura ambiental 22 24
C, 14 h luz: 10 h oscuridad), con acceso libre a una dieta con
pellets (Purina, Per) y agua ad libitum. Los protocolos siguieron
los lineamientos del Consejo Nacional de Investigacin para el
cuidado y uso de animales de laboratorio (NRC 1996). Para la
obtencin de suero anti ratn se utiliz un conejo macho de la
raza Nueva Zelanda y para la obtencin del complemento, un
cobayo macho de la raza criolla.
Qumicos.- Ciclofosfamida (NEOPHOS), medio HTF
suplementado con HEPES (LifeGlobal), solucin Tyrodes
cido, solucin salina fosfatada (PBS) (pH 7,4), solucin
Tripsina-EDTA, Azul de Trypn, Ketamina, suero fsiolgico,
fjador Bouin.
Obtencin de embriones preimplantacionales en el estadio
de blastocisto.- Ratonas Swiss en etapa de estro o proestro,
fueron cruzadas con un macho semental toda la noche y la pre-
sencia del tapn vaginal al da siguiente fue seal de que ocurri
la cpula y fue tomado como da 1 de la preez. Las ratonas
fueron posteriormente (96 h posterior a la copula) eutanizadas
por dislocacin cervical, se procedi a extraer los cuernos ute-
rinos para la obtencin de los embriones mediante un lavado
con una solucin de PBS (pH 7,4).
Obtencin de anticuerpos de conejo anti-bazo de ratn
y complemento de cobayo.- Para la obtencin de anticuerpos
anti-ratn, se utiliz un conejo macho de la raza Nueva Zelanda
al cual se le inyect una concentracin de 4x10
8
clulas/mL del
bazo de ratn, va vena marginal de la oreja. Se recuper 15
mL de sangre por sangra parcial, se coloc 3mL en cada tubo
Vacutainer de 15mL con gel de slica y se llev a centrifugacin
a 2500 rpm. El suero obtenido fue colocado en tubos Eppendorf
a volumen de 15L y mantenido a -20 C hasta su posterior uso.
Antes de utilizar el suero, fue calentado en bao mara a 56 C
por 30 min. para su descomplementacin y diluido 1:10. Para la
obtencin de complemento se utiliz un cobayo macho, al cual
se le realiz una sangra total. La sangre obtenida fue colocada
en tubos Vacutainer con gel de slica y centrifugada a 2500 rpm.
El suero obtenido fue colocado en tubos Eppendorf a volumen
de 15L y mantenidos a -20 C.
Inmunociruga.- La inmunociruga de blastocistos de ratn
fue realizada con algunas modifcaciones al procedimiento de-
sarrollado por Solter y Knowles (1975). La zona pelcida fue
removida utilizando la solucin cida de Tyrodes por 5 min.
luego los embriones fueron lavados por 3 min., tres veces con
PBS. Antes de la exposicin del antisuero, los blastocistos fueron
incubados a 37 C en medio HTF suplementado con HEPES
(LifeGlobal) por 30 min. Los blastocistos libres de zona pelcida
fueron expuestos a los anticuerpos de conejo anti-bazo de ratn
diluido 1:10 por 30 min. y luego lavados tres veces con PBS, 5
min. cada uno. A continuacin, los blastocistos fueron transferi-
dos al complemento de cobayo (diluido a 1:10) con medio HTF
suplementado con HEPES e incubado por 20 minutos a 37 C.
Seguidamente la MCI fue colocada en gotas de solucin Tripsina-
EDTA e incubada por 5 minutos para permitir la disgregacin de
las clulas de la MCI. Las clulas de la MCI fueron lavadas tres
veces con PBS y luego colocadas en medio HTF con HEPES y
coloreadas con Azul de Trypn, con el objetivo de visualizar el
ingreso de las clulas en el interior de los tbulos seminferos.
La suspensin de clulas a una concentracin de 3 x 10
3
clulas
por mL fue cargada en la pipeta de inyeccin.
Tratamiento con Ciclofosfamida (CP) y transplan-
te de clulas madre pluripotentes.- La Ciclofosfamida
(NEOPHOS), fue disuelta en solucin salina 0,9% obteniendo
una concentracin fnal de 220 mg/kg [dosis equivalente a la
dosis teraputica en humanos (750 mg/kg)]. Se utilizaron 8
ratones machos de la cepa C57BL como receptores, a cada uno
se les inyecto intraperitonealmente una dosis nica de CP 4
das antes del transplante de las clulas madre. Para la reali-
zacin de la microinyeccin, los ratones fueron anestesiados
con 0,15 mL de Ketamina ms 0,15mL de suero fsiolgico
(0,9%), una vez anestesiado el ratn se prosigui a remover los
testculos de la cavidad corporal para localizar la zona craneal
del pedculo vascular donde llega el conducto eferente a la
superfcie del testculo. Cargada la pipeta de inyeccin con las
clulas de la MCI y coloreadas con Azul de Trypn se inyect
directamente a la rete testis del testculo izquierdo del ratn, el
testculo derecho fue usado como control al cual se le inyecto
slo medio HTF con HEPES ms Azul de Trypn. Para la
inyeccin en la rete testis, se utiliz una micropipeta de 50 a
80 m de dimetro la cual se insert en un ngulo de 30 y
una profundidad no mayor a 2 mm. El llenado de los tbulos
seminferos sigui un camino al azar. La presin en la pipeta
fue aplicada suavemente para evitar una ruptura interna de los
lmites de la rete testis. El volumen a inyectar en cada testculo
fue de 50L. Al fnal del procedimiento, se cerr la abertura
con hilos de sutura convencionales.
Anlisis histolgico.- Despus de 35 das, los ratones fueron
sacrifcados por dislocacin cervical, extrayndoles los testculos
y fjados con solucin de Bouin por aproximadamente 16 h,
luego sigui la deshidratacin y el parafnado de las muestras.
Se procedi a obtener los cortes histolgicos de 5 m de espesor
con ayuda de un micrtomo rotativo Minot, los cuales fueron
coloreados con hematoxilina y eosina Y.
Resultados
Inmunociruga.- Con la solucin cida de Tyrodes se
destruy exitosamente la zona pelcida (Fig. 1), para luego
enfrentar a la masa celular interna a los anticuerpos anti-ratn
y complemento de cobayo (Fig. 2A) y fnalmente mediante pi-
peteo suave obtener las clulas de la MCI disgregadas (Fig. 2B).
369

Inyeccin a la rete testis.- Se inyecto exitosamente la sus-
pensin de clulas disgregadas de la MCI a nivel de la rete testis
(Fig. 3A), esto se evidencio por el patrn de coloracin de los
tbulos seminferos con azul de Trypan (Fig. 3B).
Anlisis del transplante de la MCI.- No se evidencio pre-
sencia de tumoracin en los cortes histolgicos evaluados. Se
encontr que el 62,5% de los receptores evaluados presentaban
colonizacin intraluminal, siendo esta colonizacin aleatoria
en los tbulos seminferos; en promedio se observ que slo el
2% de los tbulos seminferos muestran minitbulos (Figs. 4
Figura 1. Blastocisto. A) Con zona pelcida (Flecha) (250X). B) Sin
zona pelcida (100X).
Figura 2. Masa celular interna sin zona pelcida A) antes de expo-
nerse a los anticuerpos anti-ratn; B. Despus de exponerse a los
anticuerpos anti-ratn. (250X).
Figura 3. Testculos de ratn seleccionados para el transplante. A)
Antes de la inoculacin, mostrando el conducto eferente (Flecha)
(15X); B) inoculacin exitosa de la suspensin celular de la MCI
mezclada con el colorante (20X).
Figura 4. Colonizacin intraluminal y diferenciacin de las clulas de la MCI y sincronizacin de los minitbulos con respecto al epitelio
seminfero con el receptor. Las fechas indican la formacin de los minitbulos en el lumen de los tbulos seminferos del animal receptor A
(100X); B (400X); C (630X); D (630X).
370
Acosta et al.
A - D). Los minitbulos formados en el lumen de los tbulos
seminferos muestran una sincronizacin de la espermatognesis
con respecto al epitelio seminfero del animal receptor (Fig. 4B,
C y D; Fig. 5), Los testculos que solo fueron inyectados con
medio HTF con HEPES ms Azul de Trypn, no presentaron
minitbulos (Fig. 6).
Discusin
En el presente trabajo los resultados sugieren que las clulas
de la MCI tienen la capacidad de diferenciarse in vivo a clulas
de la lnea germinal, presentndose en forma de minitbulos.
Segn Ogawa et al. (1997), de los diferentes procedimientos
de inyeccin de clulas donadoras dentro de los tbulos semin-
feros de un receptor, la tcnica de inyeccin a nivel de rete testis
ha demostrado ser un mtodo sencillo, efciente y reproducible.
Utilizando esta tcnica y clulas de la MCI, nosotros obtuvimos
resultados en los que se observ la presencia de una colonizacin
intraluminal en forma de minitbulos con presencia de clulas
espermatognicas siendo estos resultados similares a los hallados
por Jiang y Short (1995) en ratas y los de Guzmn (2005) en
ratones, utilizando CGPs. Los minitbulos slo fueron obser-
vados en los testculos que recibieron el transplante de clulas
donadoras, ms no en los testculos controles en los que slo se
les inyecto medio HTF con HEPES ms el colorante vital, por
tanto este nuevo epitelio seminfero hallado no sera un efecto
ocasionado por el tratamiento previo con CP ni un artefacto pro-
ducido por el procedimiento de la inyeccin, esto fue observado
tambin por Jiang y Short (1995) y Guzmn (2005), quienes
obtuvieron resultados congruentes a los nuestros utilizando el
frmaco Busulfn en lugar de CP. La no presencia de tumo-
raciones (teratomas) discrepa con los resultados de Brinster y
Avanbock (1994) quienes al inyectar clulas madre embrionarias
de ratones a tbulos seminferos de receptores estriles tuvieron
como resultado la presencia de tumores.
La diferenciacin obtenida in vivo de las clulas de la MCI, se
debe a que stas presentan un estado de memoria para su dife-
renciacin, que se puede observar desde las etapas de divisiones
tempranas cuando el primer blastmero dividido se encuentra
destinado a formar predominantemente la estructura embrio-
naria, tal como lo demostr Piotrowska et al. (2001), adems
algunas de estas CMP estn destinadas a ser parte de los tbulos
seminferos como clulas de Sertoli, es por ello que podemos
encontrar a estas clulas dentro de los minitbulos (Fig. 6).
Otra explicacin seria que la ciclofosfamida elimin todos
los estadios espermatogenicos, con excepcin de algunas clulas
madre altamente resistentes como report Bucci y Meistrich
(1987) utilizando Busulfan. Por otro lado, las CMP y las CGP
comparten un gran nmero de marcadores moleculares similares
y si se aplican estmulos apropiados puede diferenciarse de CMP
a CGP in vitro, tal como explican Geijsen et al. (2004), Hub-
ner et al. (2003) y Toyooka et al. (2003), e inclusive las CMP
pueden llegar a formar gametos masculinos capaces de fecundar
y desarrollar un individuo tal como lo demostr Nayernia et
al. (2006) en ratones. Las clulas de Sertoli pueden sintetizar
estmulos adecuados como el cido retinoico (AR), tal como lo
determino Cavazzini et al. (1996) en ratas, haciendo posible
la activacin del gen Stra8 para que pueda iniciarse la diferen-
ciacin de las CMP (Oulad-Abdelghani et al. 2006), bajo este
mecanismo nuestras clulas transplantadas pueden diferenciarse
en CGPs y estas a su vez en CMG in vivo.
Figura 5. Colonizacin intraluminal y diferenciacin de las clulas de
la MCI (MB: estructura similar a membrana basal, S: clula de Sertoli,
E: Espermatocito primario, ES: espermtide (630X).
Figura 6. Testculo control. A) (250X) y B) (400X).
371

Otro de los factores importantes y necesarios para que pueda
desarrollarse la espermatognesis es la existencia de una interac-
cin entre las clulas de Sertoli y las CMG, la cual hace posible
la activacin de estas ltimas para iniciar la espermatognesis tal
como lo comprob Rossi et al. (1993) y Kanatsu-Shinohara et al.
(2005) en ratones. En el presente trabajo, la presencia de minit-
bulos nos sugiere que ha existido una diferenciacin de la MCI,
algunas de estas, a clulas de Sertoli y otras a CMG lo cual ha
hecho posible un nicho con interaccin, activacin y desarrollo
de una espermatognesis intraluminal. Segn Guzmn (2005),
la colonizacin xenognica del lumen de los tbulos seminferos
se debera a que la suspensin cruda de PGCs tienen adems
de las clulas ya mencionadas, clulas precursoras somticas
testiculares que al co-transplantarse formaran los minitbulos
en los tbulos seminferos de los ratones receptores capaces de
soportar proceso completo de espermatognesis.
Los resultados muestran que el ciclo espermatognico de-
sarrollado en los minitbulos a partir de la diferenciacin de
clulas de la MCI, se encuentra en sincronizacin con los tbulos
hospederos, siendo este resultado concordante con lo obtenido
por Jiang y Short (1995) y Guzmn (2005) que utilizaron en
sus transplantes a las CGPs, es as que se puede sugerir que el
microambiente tubular microambiente tubular se encuentra
regulando tanto al epitelio seminfero tubular e intraluminal. Por
otro lado no se ha observado la presencia de clulas de Leydig
en asociacin con el epitelio donador (minitbulos), debido a
que estas clulas no pueden sobrevivir en este microambiente
Jiang y Short (1995).
Bajo las condiciones de la investigacin, se encontr una
frecuencia de 2% de desarrollo minitbulos, por ratn receptor
ya que las clulas donadoras presentan poca probabilidad de
colonizar e interactuar, esto debido a que se ha utilizado una baja
concentracin de clulas, estos resultados son discordantes a los
de Jiang y Short (1995) y Guzmn (2005) que encontraron 5 y
1% de minitbulos, respectivamente en sus trabajos utilizando
una concentracin de clulas 10
6
veces mayor.
Podemos sealar que la inyeccin de las clulas pluripotentes
de la MCI ha demostrado ser una tcnica adecuada para el es-
tudio de la espermatognesis en todos sus niveles demostrando
que puede ser utilizada en las tcnicas de reproduccin asistida
en humanos, para la recuperacin del epitelio seminfero en
varones que presentan una patologa testicular y como un gran
potencial en las terapias del futuro (McLaren 1998).
Agradecimiento
Al Consejo Superior de Investigacin de la Universidad Na-
cional Mayor de San Marcos por el apoyo fnanciero (Estudio
Fondo de Promocin de trabajo de Tesis de Pregrado, cdigo
081001077).
Literatura citada
Brinster R.L. & R.L. Avarbock. 1994. Germline transmission of
donor haplotipe following spermatogonial transplation.
Proceedings of the National Academy of Sciences. 91:
11303 7.
Brinster R.L. & J.W. Zimmermann 1994. Spermatogenesis following
male germ-cell transplantation. Proceedings of the Natio-
nal Academy of Sciences. 91: 11298-11302.
Bucci L.R. & M.L. Meistrich. 1987. Effects of busulfan on
murine spermatogenesis: cytotoxicity, sterility, sperm
abnormalities, and dominant lethal mutations. Mutat
Res.176:259268.
Cavazzini D., M. Galdieri, S. Ottonello. 1996. Retinoic acid synthesis
in the somatic cells of rat seminiferous tubules. Bioche-
mical Biophysical Acta. 1313: 139145.
Chiquoine A. 1954. The identifcation, origin, and migration of the
primordial germ cells in the mouse embryo. Anatomical
Record 118: 135 -146.
Donovan P., J. Resnick, L. Cheng, L. Lock. 1997. Towards the use
of primordial germ cells for germline modifcation. In:
Transgenic animals generation and use, Ed Houdebine
L.M. Harwood academic publishers
Donovan P. 1998. The germ cell: The mother of all stem cells. In-
ternational Journal of Development Biology. 42: 1043-50.
Evans M. & M. Kaufman 1981. Establishment in culture of pluri-
potential cells from Mouse embryos. Nature. 292: 154-6.
Geijsen N., M. Horoschak, K. Kim. 2004. Derivation of embryonic
germ cells and male gametes from embryonic stem cells.
Nature. 427: 148154.
Guzmn L. 2005. Colonizacin intraluminal de los tbulos semin-
feros de ratones post-transplante intraespecfco de clulas
germinales primordiales. Tesis Profesional UNMSM,
E.A.P Ciencias Biolgicas, Lima.
Hubner K., G. Fuhrmann, L.K. Christenson. 2003. Derivation
of oocytes from mouse embryonic stem cells. Science
300:12516.
Jiang F. & R. Short. 1995. Male germ cell transplantation in rat:
apparent synchronization of spermatogenesis between
host and seminiferous epithelia. International Journal of
Andrology. vol. 18: 326 330.
Johnson A., E. Williams. 2006. Stem Cell Research., CRS Report
for Congreso.
Kanatsu-Shinohara M., H. Miki, K. Inoue, et al. 2005. Germline
niche transplantation restores fertility in infertile mice.
Human Reproduction 9:2376-2380.
Lacham-Kaplan O, Chy H, Trounson A. 2006. Testicular cell con-
ditioned medium supports differentiation of embryonic
stem cells into ovarian structures containing oocytes. Stem
Cells. vol. 24:266273.
Loeffer M. & C.S. Pottern. 1997. Stem cells and cellular pedigree
conceptual introduction. In: CS Potten (Ed), Stem Cells.
New York: Acad Press; p. 1-27.
Martin G. 1981. Isolation of a pluripotent cell line from early mouse
embryos cultured in medium conditioned by teratocarci-
noma stem cells. Proceeding of the National Academic of
Science. USA. 78: 7634-7638.
McLaren A. 1998. Germ Cells and Germ Cell Transplantation. In-
ternational Journal of Development Biology. 42: 855-860.
Nayernia K., J. Nolte, H.W. Michelmann, et al. 2006. In vitro-
differentiated embryonic stem cells give rise to male
gametes that can generate offspring mice. Development
Cell. vol. 11:125-132.
Nayernia K., L.J. Ho, W. Engel, et al. 2007. From stem cells to germ
cells and from germ cells to stem cells. Iranian Journal of
Reproductive Medicine 5(2):41-4.
NRC, National Research Council. 1996. Guide for the Care and Use
of Laboratory Animals, 7th Edition. National Academy
Press, Washington, DC.
Ogawa T., J. Archaga, M. Avarbock, R. Brinster. 1997. Transplan-
tation of testis germinal cells into mouse seminiferous
tubules. International Journal of Development Biology,
vol.41:111- 122.
372
Acosta et al.
Oulad-Abdelghani M., P. Bouillet, D. Decimo, et al. 1996. Charac-
terization of a premeiotic germ cell-specifc cytoplasmic
protein encoded by Stra8, a novel retinoic acid-responsive
gene. Journal of Cellular Biology. vol. 135:469 477.
Piotrowska K, Wianny F, Pedersen RA, Zernicka-Goetz M. 2001.
Blastomeres arising from the frst cleavage division have
distinguishable fates in normal mouse development. De-
velopment. vol.128: 37393748.
Rossi P., S. Dolci, C. Albanesi, P. Grimaldi, R. Ricca. 1993. Follicle-
stimulating hormone induction of steel factor (SLF) mRNA
in mouse Sertoli cells and stimulation of DNA synthesis
in spermatogonia by soluble SLF. Development Biology.
vol. 155: 6874.
Solter D. & B. Knowles. 1975. Immunosurgery of mouse blastocyst.
Proceeding of the National Academic Science USA., vol.
72: 5099-5102.
Thomson J., J. Itskovitz-Eldor, S. Shapiro, et al. 1998. Embryonic
stem cell lines derived from human blastocysts. Science.
vol. 282:1145-1147.
Toyooka Y., N. Tsunekawa, R. Akasu. 2003. Embryonic stem cells
can form germ cells in vitro. PNAS 100:1145711462.
Tsang T., P. Khoo, R. Jamieson, et al. 2001. The allocation and di-
fferentiation of mouse primordial germ cells. Int. Journal
of Developmental Biology. vol. 45: 549-55.
373

microlophus Tigris in Las Leyendas Zoological Park
ISSN 1561-0837
Notes on the ecology of a relict population of the Lomass Lizard
Microlophus tigris (Tropiduridae: Sauria) in Las Leyendas Zoological
Park, (Lima, Peru)
1,2
Notas sobre la ecologa de una poblacin relicto de la lagartija de las
Lomas Microlophus tigris (Tropiduridae: Sauria)en el Parque Zoolgico
1Departamento de Herpetologa,
Museo de Historia Natural, Uni-
Marcos, Museo de Historia Natural,
San Marcos. Av. Arenales 1256,
Jess Mara Apdo. 14-0434, Lima
14, Per.
2 Laboratorio de Estudios en Biodi-
versidad (LEB). Departamento de
Ciencias Biolgicas y Fisiolgicas.
Facultad de Ciencias y Filosofa.
Heredia (UPCH).
E-mail: juan.jordan@gmail.com
NOTA CIENTFICA
Abstract
I studied activity patterns, microhabitat use and thermal ecology of a small-wild population of the Lomas lizard,
Microlophus tigris in Parque Las Leyendas Zoo, from April to October of 2006. Microlophus tigris individuals were
active in a variety of microhabitats, from bushes and vegetation debris to prehispanic bricks (adobes) and litter,
during the hottest hour of the day. Mean body temperature (29,4 C) was similar to body temperature observed
in a natural population from Lomas de Lachay, although in Parque de Las Leyendas, substrate temperature
was higher than air temperature, probably related to thermal properties of materials used as microhabitats and
to seasonal differences. We encouraged the Zoo to takes conservation measures to protect this endangered
wild population of lizard in Lima city.
Keywords: Lomas lizard, Microlophus tigris, Parque de Las Leyendas, ecology, conservation
Resumen
Evalu algunos aspectos de la ecologa de una pequea poblacin silvestre de Microlophus tigris en el Zoolgico
Parque de Las Leyendas, desde abril a octubre del 2006. Microlophus tigris fue observado en una variedad de
microhbitats, desde arbustos y restos vegetales hasta ladrillos prehispnicos (adobes) y desperdicios, durante
las horas ms calientes del da. La temperatura corporal promedio (29,4 C) fue similar a la reportada para una
poblacin natural de esta especie en Lomas de Lachay, aunque en el Parque de Las Leyendas, la temperatura
del sustrato fue ms alta que la temperatura del aire, probablemente relacionado a las propiedades termales
de los materiales usados como microhbitats y diferencias estacionales. Recomendamos al zoolgico tomar
medidas de conservacin para proteger a esta poblacin de lagartijas amenazada dentro de la ciudad de Lima.
Palabras clave: Lagartija de las Lomas, Microlophus tigris, Parque de Las Leyendas, ecologa, conservacin.
Zoological parks have become the last refuge of several wild
species that are endangered due to high levels of exploitation
(hunting for subsistence or illegal trafc, etc.), fragmentation and
destruction of their natural habitats (deforestation for croplands,
highways development, urban expansion, among others; Rabb
1994). Te Parque de Las Leyendas Zoo, located in the San
Miguel district of Lima, is the main zoo in Peru with permanent
exhibition of representative species from all over the country (as
well as several species from other countries), promoting wildlife
conservation and educating people about its importance for the
next generations. Tis area (ca. 64 ha) is occupated by ffty-three
archaeological sites belonging to Lima culture (0 600 A.C.)
and Curacazgo de Maranga (1100 1532 A.C.). Since 1964, is
devoted to conservation of Peruvian biological heritage (http://
www.leyendas.gob.pe/nosotros.html).
A small population of the Peruvian endemic Lomass Lizard,
Microlophus tigris Tschudi 1845, lives in the archaeological and
abandoned croplands areas located within the zoological park
area (Fig. 1). Tis lizard species occurs from Trujillo to Arequipa,
inhabiting the foothills of the Pacifc slopes of the Andes and
lomas formations (Carrillo & Icochea 1995, Dixon & Wright
1975, Prez 2005). Dixon and Wright (1975) examined indi-
viduals registered in Lima and Callao city so; it is highly probably
this population could be a relict one rather than an introduced
population. Actually, this species shared its habitat with another
endangered local wild lizard, Phyllodactylus sentosus, recorded in
the zoo area (Prez 2010).
Microlophus tigris has been categorized as Endangered by
peruvian law (D.S. N 034-2004-AG/INRENA). Although
this lizard species is abundant in some locations (Jordn pers.
obs.), its metapopulation pattern of distribution associated to
loss of habitat, particularly in lomas around Lima (due to urban
expansion, Mena et al. 2007), place M. tigris in serious risks
for its conservation in the long term. To date, there is only one
study on the ecology of Microlophus tigris from Lomas de Lachay
National Reserve (Prez 2005). In this study, I present data for
the frst time on microhabitat use, activity patterns and thermal
ecology from an isolated population of Microlophus tigris in an
artifcial habitat inside Parque de las Leyendas Zoo.
The study site (120404.74, 770514.40, 53 m) en-
compasses a large archaeological area, abandoned cropland
(around 40 years) and open deposits of construction and
organic material (vegetation debris from parks and gardens)
(Fig. 2). Natural vegetation is scarce, with some bouganvilla
(Bougainvilleaspp.), huarango (Prosopis spp.), pines (Pinus spp.)
disseminated throughout the area. Field work was conducted
from April to October of 2006. All data on microhabitat use,
activity patterns and thermal ecology was combined regardless
of seasonality because of low sample size. Microhabitats were
374
Jordn Arizmendi
classifed as follows: 1) bushes/vegetation debris, 2) pre-hispanic
ruins (also named huacas: pre-hispanic constructions made
from hand-made mud bricks), 3) construction debris, 4) stones
and 5) other (metal material, garbage). Visual encounter surveys
(Crump & Scott 1994) with no time limits where employed to
collect data on activity time and microhabitat use of individual
lizards, from 09:00 to 17:00 during 25 days (200 hours/man).
Individuals were captured by hand or with a custom-made noose
to record their body temperature with a cloacal thermometer
Miller and Weber within 30 seconds after captured. Individuals
were caught by legs to avoid heat transfer from the investigator.
Substrate temperature was recorded at the exact place where
the lizard had been captured by pressing the bulb against the
substrate. Air temperature was recorded one centimeter above
the substrate at the same place.
Spatial and temporal niche breadths were calculated from the
inverse formula of Simpson (Pianka 1973, Vitt & Zani 1996):
B = 1/ i
2
where i is the proportional use of resource i and n is the
number of categories (resources) employed by the species.
ANOVA analysis was used to test diferences among thermal
variables. Data were tested for normality and variances homo-
geneity with Kolmogorov-Smirnov and Barlet test (Zar 1999),
respectively. All statistical analysis was performed with Statistica
software with a -level of 0, 05.
Individuals of Microlophus tigris (n=83) was mostly recorded
on vegetal debris (39% and 43% respectively), others (metal,
Figure 1. Microlophus tigris (female) basking on a plastic cylinder on Las Leyendas Zoological Park.
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
vegetal
debris
pre-hispanic
ruins
construction
debris
stones other
P
e
r
c
e
n
t
a
g
e

o
f

i
n
d
i
v
i
d
u
a
l
s

(
%
)
Microhabitats
Figure 2. Microhabitat use by Microlophus tigris in Parque de Las
Leyendas.
0
10
20
30
40
10 11 12 13 14 15 16
P
e
r
c
e
n
t
a
g
e

o
f

i
n
d
i
v
i
d
u
a
l
s

(
%
)
Hours
Figure 3. Activity patterns of Microlophus tigris in Parque de Las
Leyendas.
375

microlophus Tigris in Las Leyendas Zoological Park
garbage among others; 23,9%) and in less proportion in other
categories (Fig. 2).
Spatial niche breadth was 3,92. Active individuals (n=99)
were observed between 10:00 and 16:00 h, with an activity peak
around midday (Fig. 3). Activity niche breadth was of 4.94.
Mean lizard body temperature (T
b
) was 29,4 4,6C, mean air
temperature (T
a
) was 25,4 3,03 C and mean substrate tem-
perature (T
s
) was 30,6 6,7 C. Ranges are presented in Table 1.
T
a
and T
s
were related to T
b
and both variables interact to afect
lizard body temperature (Table 1, Fig. 2). T
b
was not diferent
from T
s
and T
a
, but T
s
was higher than T
a
(F
1,32
= 8,43; p=0,006).
Microlophus tigris used a broad range of substrates in our study
site in contrast with fndings by Prez (2005) in the Lomas de
Lachay population. In Lomas de Lachay, M. tigris uses rocks as
perches (73%) even when rocks are sparse (Prez 2005). Despite
such high substrate selectivity in the lomas, individuals of M.
tigris at our study site seemed to use a wide range of substrates,
from prehispanic bricks to plastic and metal materials. Tese
substrates could provide shelter and appropriate thermal micro-
habitats, although this hypothesis has not been tested directly
in this study. Overall, these lizards in Parque de las Leyendas
were mostly observed near vegetation debris which act as food
sources since vegetation (i.e. primary production) is practically
absent in the entire study site.
Similarly to what observed at Lomas de Lachay (Prez 2005),
lizards in the zoo starts their activity late in the morning (~10:00
h.) and stay active throughout the early afternoon (~16:00 h).
Tese two populations exhibit similar activity niche breadths.
Tis could be related to variation in environmental temperatures
along the day, with lizards delaying activity to times of the day
when temperatures are near their thermal optimum (Huey
1974, Castilla et al. 1999). Body temperatures of Microlophus
tigris were similar in Lomas de Lachay (natural site) and Parque
de Las Leyendas (artifcial site). However, there were diferences
in microhabitat temperature: while in the lomas T
s
and T
a
were
similar, in Parque de Las Leyendas, T
s
was higher than T
a
. Tis
diference may be related to the thermal properties of materials
used as microhabitats by M. tigris in the zoo, like metals, clothes,
prehispanic bricks (hand-made with mud) and to seasonal difer-
ences in data recording: summer (from December 2003 to May
2004) in Prez (2005) and a whole year (2005) in this study.
However, our data support the hypothesis that M. tigris its a
thermoconformist (Prez 2005). Additional studies are needed
to test this hypothesis.
Tere are not healthy microhabitats available for lizards as
had been observed by the author: plastics, metals and garbage
constitute the habitat of these lizards. Also, the presence of rats
and feral cats could enhance conservation risks for this lizard
(and also for the critical endangered gekkonid Phyllodactylus
sentosus) inside Parque de Las Leyendas Zoo, acting as potential
predators of both lizards species. Additionally, two observations
might be examples of the actual state of lizards in the Zoo: a very
low weight male M. tigris (observed in August, 28
th
, 2006) and
other very low weigth juvenile individual observed in August,
6
th
, 2010. Low food availability and/or habitat quality related to
unhealthy habitat could account for this observation.
Conservation measures are needed to ensure the protection of
this endangered and endemic lizard living isolated in an urban
environment inside Parque de las Leyendas. A recommended
strategy is habitat restoration including construction of healthy
artifcial microhabitats along with the recovery of archaeological
heritage and increasing availability of vegetation patches over the
actual distribution range of lizards inside Parque de Las Leyendas
Zoo as healthy food sources for them.
Acknoledgements
JCJ thanks to the Parque de Las Leyendas Zoo staf for logistic
support and granted research permit. Dra. Imma Oliveras (Ox-
ford University), Dr. Alessandro Catenazzi (Florida International
University) and an anonymus referees reviewed the manuscript
critically improving it with valuable comments.
Literature cited
Bergallo H.G. y C.F.D. Rocha. 1994. Spatial and trophic niche dif- 1994. Spatial and trophic niche dif-
ferentiation in two sympatric lizards (Tropidurus torquatus
and Cnemidophorus ocellifer) with different foraging
tactics. Australian Journal of Ecology. 19: 7275.
Carrillo N. & J. Icochea. 1995. Lista taxonmica preliminar de los
reptiles vivientes del Per. Publicaciones del Museo de
Historia Natural, UNMSM (A). 49: 1-27
Castilla A., R. Van Damme & D. Bauwens. 1999. Field body tem-
peratures, mechanisms of thermoregulation and evolution
of thermal characteristics in lacertid lizards. Nat. Croa
8(3):253-274
Dixon J & J. Wright. 1975. A review of the lizards of the iguanid
genus Tropidurus in Peru. Contribution in Science, The
Natural History Museum of Los Angeles. 1-40
Huey R. 1974. Winter thermal ecology of the iguanid lizard Tropi-
durus peruvianus. Copeia (1):149-155.
Huey R. & E.R. Pianka. 1981. Ecological consequences of foraging
mode. Ecology 62 (4): 991-999
Mena J., M. Williams, C. Gazzolo & F. Montero. 2007. Estado de
conservacin de Melanomys zunigae (Sanborn 1949) y de
los mamferos pequeos en las Lomas de Lima. Rev.peru.
biol. 14(2): 201-207
Parque de Las Leyendas.2011. http://www.leyendas.gob.pe/nosotros.
html
Prez Z.J. 2005. Ecologia de Duas Espcies de Lagartos Simpatricos
em uma Formao Vegetal de Lomas no Deserto Costeiro
Peruano Central. Dissertao de Mestrado. Universidade
do Estado do Rio de Janeiro (UERJ). Rio de Janeiro. Brasil.
Variables Tb Ta Ts Ta vs. Ts
X SD 29,4 4,6 25,4 3,03 30,6 6,7 -
Range 19,6-36,4 19,6-36,4 18,4-43 -
R
2
0,47 0,30 0, 47
F 13,57 6,61 6,35
P <0,002 <0,02 <0,01
Table 1. Multiple regression values among temperature variables from Microlophus tigris (n=17).
376
Jordn Arizmendi
Pianka E. 1973. The structure of lizard communities. Annual Review
of Ecology and Systematics 4: 53-74
Rabb G. 1994. The changing roles of zoological parks in conserving
biological diversity. Integrative and Compative Biology
34: 159-164.
Vitt, L.J. and C.M. de Carvalho. 1995. Niche partitioning in a Tropi- Niche partitioning in a Tropi-
cal Wet Season: Lizards in the Lavrado Area of Northern
Brazil. Copeia 2: 305-329
Vitt & Zani. 1996. Organization of a taxonomically diverse lizard
assemblage in Amazonian Ecuador. Canadian Journal of
Zoology 74: 1313-1335
377

phyllodacTylus reissi in Parque Nacional Cerros de Amotape
ISSN 1561-0837
Notes on the ecology of Phyllodactylus reissi (Phyllodactylidae:
Sauria) in Parque Nacional Cerros de Amotape (Tumbes, Peru)
1,2
Notas sobre la ecologa de Phyllodactylus reissi (Phyllodactylidae: Sauria)
en el Parque Nacional Cerros de Amotape (Tumbes, Per)
1Departamento de Herpetologa,
Museo de Historia Natural, Uni-
Marcos, Museo de Historia Natural,
San Marcos. Av. Arenales 1256,
Jess Mara Apdo. 14-0434, Lima
14, Per.
2 Laboratorio de Estudios en Bio-
diversidad (LEB). Departamento de
Ciencias Biolgicas y Fisiolgicas.
Facultad de Ciencias y Filosofa.
Heredia (UPCH).
E-mail: juan.jordan@gmail.com
NOTA CIENTFICA
Abstract
Some basics aspects on the ecology of the nocturnal gecko Phyllodactylus reissi from Parque Nacional Cer-
ros de Amotape (Tumbes, Peru) are described. This species used rock boulders (57,4%) and trees (31,9%)
as microhabitats primarily, exhibiting a nocturnal activity pattern, with a peak between 2100-2200 hours,
remaining active until midnight. Body temperature (mean 24,4 C) was correlated with both air and substrate
temperature, with the last variable affecting in higher degree (47%) the body temperature of this species. The
slightly high body temperature of Phyllodactylus reissi, compared to other Phyllodactylus geckos, could be
related to nocturnal microhabitat use and diurnal retreat site selection. More studies on lizard ecology from this
endangered ecosystem are needed.
Keywords: Phyllodactylus reissi, northewestern dry forest, lizard ecology, Parque Nacional Cerros de Amotape.
Resumen
Se describen algunos aspectos bsicos de la ecologa de Phyllodactylus reisii en el Parque Nacional Cerros
de Amotape (Tumbes, Peru). Esta especie emplea paredes rocosas (57,4%) y rboles (31,9%) como micro-
hbitats principalmente, exhibiendo un patrn de actividad nocturno, con un pico entre las 2100-2200 horas,
permaneciendo activos hasta la medianoche. La temperatura corporal (promedio 24,4C) se correlacion
con la temperatura del aire y la del substrato, donde esta ltima variable afecta en un mayor grado (47%)
la temperatura corporal de esta especie. La ligeramente alta temperatura corporal de Phyllodactylus reissi,
comparado con otros Phyllodactylus, podra estar relacionada con la seleccin de microhbitats nocturnos y
refugios diurnos. Estudios sobre la ecologa de los saurios en este ecosistema amenazado son necesarios.
Palabras clave: Phyllodactylus reissi, bosques secos del noroeste, ecologa de lagartijas, Parque Nacional
Cerros de Amotape.
Phyllodactylus Gray 1828, is a widespread genus of nocturnal
lizards in Peru, with 13 species currently recognized (Dixon &
Huey 1970, Venegas et al. 2008). Tese geckos occur in des-
erts, foothills, dry forests, and inter-Andean valleys ecosystems
(Dixon & Huey 1970, Prez 2005, Jordn 2006, Venegas et
al. 2008).
Phyllodactylus reissi Peters 1862 is a common gecko in desert,
dry and tropical forests in northwestern Peru (Dixon & Huey
1970, Huey 1979, Jordn 2006, Catenazzi & Donnelly 2007,
Venegas et al. 2008) and also occurs in northeastern inter-
Andean valleys (Venegas et al. 2008). Locally named jaape
or saltojo, this species occurs in sympatry with other species
of Phyllodactylus along its geographic range (Dixon & Huey
1970). For example, in Piura region (northwestern Peru) P. reissi
is sympatric with P. kofordi, P. clinatus, P. microphyllus (Dixon
& Huey 1970, Huey 1979, Catenazzi & Donnelly 2007) and
in Amazonas region with P. thompsoni and P. delsolari (Venegas
et al. 2008).
To date, there are few data on P. reissi ecology (Jordn 2006,
Werner et al. 1996). In this study, I present information about
microhabitat use, activity patterns, and thermal ecology of Phyl-
lodactylus reissi living in the dry forest at Cerros de Amotape
National Park.
I carried out this study in the area surrounding Quebrada
Faical Biological Station (0348 23.3S, 0801600.4W, eleva-
tion 651 m), located inside Cerros de Amotape National Park.
A team of two herpetologists conducted feld observations on
P. reissi during 05 days at the dry season (October - December
2006), yielding an efective sampling efort of 18 hours/man.
Te area has dense deciduous forest, with great portions of sec-
ondary forest in lower areas and transitional vegetation between
dry forest and Tropical Pacifc forest (Wust 1998, Pacheco et
al. 2007). I used trails already established in the forest to reg-
ister data about activity pattern, microhabitat use and thermal
ecology of active Phyllodactylus reissi individuals. All trails were
visited between 19:00 and 24:00 hours each night recording
the hour when lizard was frst observed and the substrate and
perch height and width.
Body, substrate and air temperatures (1 cm above substrate)
were registered with Miller and Weber quick-reading cloacal
thermometer. Histograms of microhabitat use and activity pat-
terns were constructed for further analysis. Termal data were
tested with a one-way ANOVA and with a simple and multiple
regressions. Data normality was assessed with Levenes test. All
statistical analysis were performed with the software Statistica
v. 5.0 for Windows with a -level of 0,05.
378
Jordn Arizmendi
Fourty-eight individuals of Phyllodactylus reissi were observed
during feld work. Tey were found primarily on rock walls
(57,4%) and trees (31,9%; Fig. 1). Some individuals were seen
in leaf litter (6,4%) and walking on the ground (4,3%), appar-
ently moving between perches. Mean perch height (rocks) was
84.36 cm (10-260) while mean perch height and diameter (trees)
were 101.7 cm (12-186) and 96.71 cm (7 259), respectively.
Mean body temperatures of Phyllodactylus reissi was 24 C
1,04 (n= 38). Mean air and substrate temperature were 23,
2 C and 23,7 C, respectively (Table 1). Body temperatures
of P. reissi difered signifcantly from air temperature (F
1,74

=10,58, p=0,001) but not from substrate temperature (F
1,74

=1,89, p=0,17).
Air temperature was not diferent from substrate tempera-
ture in the study site (F
1,74
=2,70, p=0,10). Body temperature
was signifcantly correlated with air temperature and substrate
temperature (Table 1). Both, substrate and air temperature
interacted with body temperature of P. reissi (Fig. 2 and 3) with
substrate temperature accounting for 47% of the variation in
lizard body temperature.
Individuals were registered active from 19:30 to 00:00 hours.
Peak activity was observed between 21:00 and 22:00 (Fig. 4).
Use of rocks as microhabitats is common in Phyllodactylus
geckos in Peru (Dixon & Huey 1970). For example, two recently
described species of Phyllodactylus use boulders in canyons and
stones as microhabitats (Venegas et al. 2008). P. lepydopigus use
mainly tara trees (Caesalpinia sp.) and, in a lesser percentage,
pircas (pre-hispanic or contemporary stone walls for cattle
raise) in Lomas de Lachay National Reserve (Prez 2005). Phyl-
lodactylus reissi is a scansorial gecko, using primarily vertical rock
boulders and, to a lesser extent, trees as perches in the study area.
However, Huey (1979) reported P. reissi as an arboreal species,
using primarily mesquite trees (Prosopis spp.) as perches in
Cerro Illescas (Piura). Indeed, Catenazzi and Donnelly (2007)
confrmed this trend with a substantial increase in geckos and
mesquite trees abundance in the same study area at Cerro Illescas,
where rock boulders are not abundant (Jordn, pers. comm.).
Other study recorded P. reissi as common in human construc-
tions inside Cerros de Amotape National Park (Jordan 2006).
Phyllodactylus reissi presents morphological characteristics typi-
cally of scansorial lizards, as fat heads and bodies, similar-sized
extremities and large toe pads (Miles 1994, Vanhooydonck et
al. 1999, Zaaf & van Damme 2001), that allow them to occupy
vertical surfaces (J. Jordn, unpublished data). No other species
of nocturnal gecko were registered in the study area, except the
Figure 1. Microhabitat use by Phyllodactylus reissi in Cerros de
Amotape National Park.
21
22
23
24
25
26
27
20 21 22 23 24 25 26 27
B
o
d
y

t
e
m
p
e
r
a
t
u
r
e

(
C
)
Air temperature ( C)
Figure 2. Relationship between air temperature and body tempera-
ture at the study site for Phyllodactylus reissi (y = 0,640x + 9,382,
n=38, p = 0,036).
21
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21 22 23 24 25 26 27 28
B
o
d
y

t
e
m
p
e
r
a
t
u
r
e

(
C
)
Substrate temperature ( C)
Figure 3. Relationship among body temperature and substrate
temperature for Phyllodactylus reissi in Parque Nacional Cerros de
Amotape (y = 0,514x + 11,89, n=38, p < 0,001).
Figure 4. Activity pattern of Phyllodactylus reissi in Cerros de Amotape
National Park.
0
2
4
6
8
10
12
19:30 20:00 20:30 21:00 21:30 22:00 22:30 23:00 23:30
N
u
m
b
e
r

o
f

l
i
z
a
r
d
s
Time of activity
379

phyllodacTylus reissi in Parque Nacional Cerros de Amotape
diurnal Gonatodes caudiscutatus (Sphaerodactylinae), which ap-
parently, occupies similar microhabitats (J. Jordn, pers. observ.).
Phyllodactylus reissi presents nocturnal activity similar to other
species of the same genus (Dixon & Huey 1970, Huey 1979,
Prez 2005, Catenazzi & Donnelly 2007, Venegas et al. 2008).
Te activity period of P. reissi may extend beyond 00:00 h, as
other nocturnal geckoes which present an extended activity
pattern, even crepuscular (Cooper et al. 1985, Kingsbury 1989,
Vitt & Zani 1997). However, more sampling between 00:00
h and sunrise is needed to determine the extent of nocturnal
activity in P. reissi.
Low body temperatures are common among nocturnal species
compared to diurnal lizards (Huey et al. 1989, Autumn et al.
1997, Kearney & Predavec 2000). Phyllodactylus geckos present
a range of temperatures between 21.9 C and 22.3 C, usually
higher than environmental temperatures (Werner et al. 1996,
Prez 2005). In Parque Nacional Cerros de Amotape, P. reissi
present high body temperatures similar to those reported for the
genus and this species in Peru by Werner et al. (1996). Termal
data collected by Prez (2005) from Phyllodactylus lepidopygus, a
scansorial species from central Peru, which used trees and rocks as
microhabitats, showed a similar body temperature with P. reissi.
However, diferences in environmental temperatures related to
geographic patterns, probably afects body temperature of these
two gecko species. In this case, both Phyllodactylus species main-
tain high body temperatures, may be via selection for warmer
nocturnal microhabitats and retreat diurnal sites as have been
reported for other nocturnal geckos (Schlesinger & Shine 1994)
rather than local physiological adaptations.
More studies concerning the ecology of lizard community
in Cerros de Amotape National Park are needed as there are
very few contributions in lizard ecology from this endangered
ecosystem (Jordn 2010).
Acknowledgements
JCJ thanks to Parque Nacional Cerros de Amotape staf for
granted collection permits, to Alejandro Mendoza for feld as-
sistance and to Danny Castro for data transcription. Also, to Dr.
Rudolf von May (Florida International University, Dr. Inmacu-
lada Oliveras (Oxford University) and an anonymus referee for
critical revision of the manuscript. Jesus H. Cordova, curator
of Department of Herpetology (MUSM), kindly permit access
to the Department for individuals and prey analysis.
Literature cited
Autumn K. C.T. Farely, M. Emshwiller & R.J. Full. 1997. Low cost of
locomotion in the banded gecko: a test of the nocturnality
hiypothesis. Physiological Zoology 67: 238-262
Catenazzi A. & M. Donnelly. 2007. Distribution of geckos in northen
Peru: Long-term effect of strong ENSO events? Journal
of Arid Environments 71:327-332
Catenazzi A. J. Carrillo & M. Donelly. 2005. Seasonal and geo-
graphic eurythermy in a coastal Peruvian lizard. Copeia
42005: 713-723
Cooper W., C. Caffrey & L.J. Vitt. 1985. Diel activity patterns in the
banded gecko, Coleonyx variegatus. Journal of Herpetol-
ogy 19(2):308-311
Dixon, J. & R.B. Huey. 1970. Systematics of the lizards of the gek-
konid genus Phyllodactylus of mainland South America.
Los Angeles County Museum, Contributions in Science.
192:1-78
Duellman W. & E. R. Pianka. 1990. Biogeography of nocturnal in-
sectivores: historical events and ecological flters. Annual
Review of Ecology and Systematics 21: 57-68
Huey R.B. 1979. Parapatry and niche complementary of Peruvian
desert geckos (Phyllodactylus): the ambiguous role of
competition. Oecologia 38:249-259
Huey R., P. Niewiaroski, J. Kauffmann & J. Herron. 1989. Thermal
biology of nocturnal ectotherms: is sprint performance of
geckos maximal at low body temperatures? Physiological
Zoology 62:488-504
Jordn J.C. 2006. Dieta de Phyllodactylus reissi en la Zona Reservada
de Tumbes. Revista Peruana de Biologa 13(1):121-123
Jordn J. 2010. Reparticin de recursos en dos especies simptridas
de Ameiva (Sauria: Teiidae) en el Parque Nacional Cer-
ros de Amotapes, Tumbes, Per. Tesis para optar al ttulo
profesional de Bilogo, Universidad Nacional Mayor de
San Marcos, Lima, Per. 64 p.
Kearney M. & M. Predavec. 2000. Do nocturnal ectotherms ther-
moregulate? a study of the temperate gecko Christinus
marmoratus. Ecology 8(11):2984-2996
Kingsbury B. 1989. Factors infuencing activity in Coleonyx varie-
gatus. Journal of Herpetology 23(4):399-404.
Leal-Pinedo J. & R. Linares-Palomino. 2005. Los bosques secos
de la Reserva de Biosfera del Noroeste (Per): Diversidad
arbrea y estado de conservacin. Caldasia 27(2):195-211.
Pacheco V., R. Cadenillas, S. Velasco & U. Fajardo. 2007. Note-
worthy bat records from the Pacifc Tropical rainforest
region and adjacent dry forest in northwestern Peru. Acta
Chiropterologica 9 (2): 409-422
Prez J. 2005. Ecologia de duas espcies de lagartos simptricos em
uma formao vegetal de lomas no deserto costeiro perua-
no central. Orientador: Carlos Frederico Duarte da Rocha
Dissertao apresentada para obteno do grau de Mestre
em Biologia (Ecologia). Universidade do estado do Rio de
Janeiro, Ro de Janeiro, Brasil.
Schlesinger, C. & R. Shine. 1994. Selection of diurnal retreat sites
by the nocturnal gekkonid lizard Oedura lesuerii. Herpe-
tologica 50(2):156-163
Venegas P. J. Townsend, C. Koch & W. Bhme. 2008. Two new
sympatric species of leaf-toed geckos (Gekkonidae: Phyl-
lodactylus) from the Balsas region of the upper Maran
Valley, Peru. Journal of Herpetology 42(2):386-396.
Variables Tb Ta Ts Ta vs. Ts
X SD 24 C 1,04 23,2 C 1,2 23,7 C 1,26 -
Range 21,8-26,6 21,1-28 21,6-27 -
R
2
0,12 0,47 0, 47
F 4,93 32,50 15,91
p <0,03 <0,001 <0,01
Table 1. Multiple regression values among temperature variables from Phyllodactylus reissi (n=38).
380
Jordn Arizmendi
Vitt L. & P. Zani. 1997. Ecology of the nocturnal lizard Thecadactylus
rapicauda (Sauria: Gekkonidae) in the Amazon region.
Herpetologica 53(2):165-179
Werner Y., N. Carrillo de Espinoza, R.B. Huey, D. Rothenstein, A.W.
Salas & F. Vilela. 1996. Observations on body tempera-
tures of some neotropical desert geckos (Reptilia: Sauria:
Gekkoninae). Cuadernos de Herpetologa 10 (1-2): 62-67
Wust W. 1998. La Zona Reservada de Tumbes: Biodiversidad y Diag-
nstico Socioeconmico. En: W. H. WUST, (ed.). The John
D. and Catherine C. McArthur Foundation, PROFONANPE,
INRENA. p. 180
Zaaf A. & R. van Damme. 2001. Limb proportions in climbing and
ground-dwelling geckos (Lepidosauria, Gekkonidae):
a phylogenetically informed analysis. Zoomorphology
121(1):45-53
381

Distribucin del rango migratorio de muscisaxicola FronTalis en el Per
ISSN 1561-0837
Extensin de la distribucin del rango migratorio de la Dormilona de
Frente Negra, Muscisaxicola frontalis (Aves: Tyrannidae) en el Per
Renzo Alcocer
1
, Grace P. Servat
2
y Wilfredo Mendoza
3
Extension of the distribution of the migratory range of the Black-fronted
Ground Tyrant Muscisaxicola frontalis (Aves: Tyrannidae) in Peru
1 rea de Ornitologa, Coleccin
Cientfca, Museo de Historia Na-
tural, Universidad Nacional San
Agustn de Arequipa. Arequipa,
Per. Email: renzopaul@hotmail.
com
2 Smithsonian Conservation Bio-
logy Institute, CCES-NZP; 1100
Jefferson Drive, Suite 3139, Was-
hington, DC 20013-7012. E-mail:
grace.servat@gmail.com
3 Laboratorio de Florstica, Mu-
seo de Historia Natural-UNMSM.
Av. Arenales 1256, Jess Mara,
Lima. Per. Email: wilfredomen@
gmail.com
NOTA CIENTFICA
Resumen
Extendemos el rango migratorio, altitudinal y de distribucin norte de Muscisaxicola frontalis (Dormilona de
Frente Negra), migrante Austral previamente reportado para el sur del pas. La especie fue observada en
laderas pedregosas cerca a remanentes de bosque de Queoa (Polylepis favipilla, Rosaceae) a 4450 m de
altitud, en el Departamento de Huancavelica.
Palabras clave: Muscisaxicola frontalis, distribucin, Huancavelica, ladera rocosa, bosque de Queoa, mi-
gratoria Austral.
Abstract
We extent the migratory range of distribution and elevation of Muscisaxicola frontalis (Black-fronted Ground-
tyrant), Austral migrant reported previously only in the Southern region of the country. The species was observed
in rocky slopes near Polylepis favipilla (Rosaceae) woodlands at 4450 m of altitude, in the Huancavelica
Department.
Keywords: Muscisaxicola frontalis, distribution, Huancavelica, rocky slopes, Polylepis woodlands, Austral
migrant.
La Dormilona de Frente Negra (Muscisaxicola frontalis (Bur-
meister, 1860), Tyrannidae), esta distribuida en regiones alto
andinas (> 2900 m de altitud) desde Santiago de Chile hasta
Antofagasta (Chile) y de Mendoza hasta Ro Negro (oeste de
Argentina). En invierno migra hasta Jujuy (noroeste de Argenti-
na) llegando hasta el Altiplano de Bolivia (> 3600 m) (Fjelds et
al. 1990) (Fig. 1a). En el Per, M. frontalis ha sido registrada en
periodo no reproductivo (Plenge 2010), desde abril a septiembre,
en los Departamentos de Arequipa, Moquegua y Puno (Fig. 1b,
1c), de 3750 a 4300 m de altitud, donde se le encuentra asociada
con pastizales, humedales, laderas pedregosas y rocosas (Fjelds
y Krabbe 1990, Jaramillo et al. 2003, Schulenberg et al. 2007).
Un individuo de M. frontalis fue observado el 17 de mayo del
2010, durante una visita al remanente de bosque de Queoa (Po-
lylepis favipila (Bitter) M. Kessler & Schmidt-Leb., Rosaceae),
en el rea cercana a la localidad de Huaytar, en el kilmetro 153
de la carretera Los Libertadores-Wari (Departamento de Huan-
cavelica, Provincia de Huaytar, 1330'08.01"S; 7509'22.60"W,
4450 m) (Fig. 1c). El individuo fue observado posado sobre el
suelo de una ladera pedregosa, con vegetacin dispersa constitui-
da principalmente por Jarava ichu (Poaceae), arbustos de Senecio
spp., Chuquiraga spinosa (Asteraceae) y pequeos arbolillos de P.
favipila. El individuo presentaba coloracin negra en la regin
frontal que se prolongaba hasta la corona o regin pileal central
que contrastaba con la coloracin gris plida de la regin pileal
lateral y la regin loral de color blanco (Fig. 2).
El 18 de mayo, capturamos un individuo mediante el uso
de redes de neblina, el cual fue preparado como ejemplar de
estudio para su posterior identifcacin. El estado del plumaje,
la coloracin defnida del pileo y lorum; Adems, de la ausencia
de color ante (canela claro) en los bordes de las plumas cober-
toras alares (Jaramillo et al. 2003), revelan de que se trata de
un individuo macho adulto (testes 1x1 mm), aunque presenta
Figura 1. Distribucin de Muscisaxicola frontalis en Sudamrica (a)
(Ridgely, et al. 2007) y en el Per (b y c). En c) Los crculos negros
corresponden a registros confrmados, los crculos blancos son regis-
tros por confrmar (Schulenberg et al. 2006). El crculo gris representa
el nuevo reporte para la localidad de Huaytar (Huancavelica).
N
220 km
Huancavelica
Cusco
Puno
Arequipa
Moquegua
382
Alcocer et al.
un porcentaje de osifcacin del crneo del 25%. Una posterior
revisin de la literatura y comparacin con especmenes de las
colecciones ornitolgicas de los Museos de Historia Natural de
la Universidad Nacional de San Agustn de Arequipa (MUSA) y
de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos (MUSM) nos
permitieron confrmar que se trata de la especie M. frontalis. El
espcimen (junto con el contenido estomacal y tejidos preserva-
dos) se encuentra depositado en la coleccin del MUSM (GSV
2010-85). Con este reporte extendemos el rango migratorio de
distribucin norte de la especie hasta Huancavelica y su rango
altitudinal hasta los 4450 m para el Per.
Agradecimientos
Agradecemos a E. Lpez Tejada, Director del Museo de
Historia Natural de la Universidad de San Agustn de Arequipa
(MUSA) y a L. Salinas, Curadora de la Coleccin Ornitolgica
del Museo de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos
(MUSM) por facilitarnos el acceso a las colecciones a su cargo.
As mismo agradecemos a las autoridades respectivas de la
Direccin General de Gestin Forestal y de Fauna Silvestre
por el permiso otorgado para el presente estudio (RD No.
0130-2010-AG-DGFFS-DGEFFS del 26/3/2010).
Literatura citada
Fjelds J. & N. Krabbe. 1990. Birds of the High Andes. Copenha-
gen. Zoology Museum, University of Copenhagen and
Svendborg, Apollo Books.
Gonzales N., H. Zeballos P. & E. Lpez T. 2001. Aves del Valle del
Colca y de la Reserva de Salinas y Aguada Blanca. Pro-
yecto Araucaria Valle del Colca. AECI. Arequipa.
INRENA. 2001. Plan Maestro de la Reserva de Salinas y Aguada
Blanca, Instituto Nacional de Recursos Naturales, Minis-
terio de Agricultura. Arequipa
Jaramillo, A., P. Burke & D. Beadle. 2003. Field Guide to the Birds
of Chile, Christopher Helm, London.
Plenge, M. A. 2010. Lista de las Aves de Per. Lima, Per. <https://
sites.google.com/site/boletinunop/checklist> (acceso
27/07/2010)
Remsen, J. V., Jr., C. D. Cadena, A. Jaramillo, M. Nores, J. F. Pa-
checo, J. Prez-Emn, M. B. Robbins, F. G. Stiles, D. F.
Stotz & K. J. Zimmer. 2010. A classifcation of the bird
species of South America. American Ornithologists' Union.
<http://www.museum.lsu.edu/~Remsen/SACCBaseline.
html> (acceso 27/07/2010)
Ridgely, R. S., T. F. Allnutt, T. Brooks, D. K. McNicol, D. W. Mehl-
man, B. E. Young, and J. R. Zook. 2007. Digital Distribu-
tion Maps of the Birds of the Western Hemisphere, version
3.0. NatureServe, Arlington, Virginia, USA.
Schulenberg, T. S., D. F. Stotz & L. Rico. 2006. Distribution maps
of the birds of Peru, version 1.0. Environment, Culture &
Conservation (ECCo). The Field Museum of Natural His-
tory. <http://fm2.feldmuseum.org/uw_test/birdsofperu>
(acceso 27/07/2010)
Schulenberg T., D. F. Stotz, D. F. Lane, J. P. ONeill & T. A. Parker
III. 2007. Birds of Peru. Princeton Field Guides.
Figura 2. Muscisaxicola frontalis, ntese la coloracin negra en la regin frontal que se prolonga hasta la regin pileal central (corona) y la
regin loral de color blanco (Foto: R. Alcocer).
383

Acantocfalos Oligacanthorhynchidae del Per
ISSN 1561-0837
Algunos acantocfalos de la familia Oligacanthorhynchidae del Per
Laboratorio de Medicina Vete-
rinaria Preventiva. Facultad de
Medicina Veterinaria. Universidad
Av. Circunvalacin 2800, San Borja.
Lima, Per.
E-mail: lucho92@yahoo.com
NOTA CIENTFICA
Resumen
Cuatro especies de acantocfalos pertenecientes a la familia Oligacanthorhynchidae son estudiados. Dos de
ellas corresponden a nuevos hallazgos geogrfcos. Adicionalmente se registra por primera vez en el Per a
Oligacanthorhynchus carinii y Oligacanthorhynchus major.
Palabras clave: Acantocefalos, Oligacanthorhynchidae, Per.
Abstract
Four species of acanthocephalan (Oligacanthorhynchidae) were studied. Two species are new geographical
records. Additionally, Oligacanthorhynchus carinii and Oligacanthorhynchus major are registered for the frst
time in Peru.
Keywords: Acanthocephala, Oligacanthorhynchidae, Per.
Introduccin
Los acantocfalos son un grupo de parsitos intestinales que
infectan una variedad de vertebrados. Presentan un ciclo de vida
indirecto, necesitando de un invertebrado como hospedador in-
termediario, en ellos se desarrollara la forma larvaria denominada
cystacantho (Petrochenko 1956).
Los estudios sobre acantocfalos en el Per son limitados.
La gran mayora de especies conocidas hasta ahora han sido
registradas en peces y aves silvestres (Tantalen et al. 2005). En
el presente trabajo se dan a conocer nuevos acantocfalos para el
Per, as como nuevos hallazgos geogrfcos para algunas especies
ya registradas en estudios anteriores.
Material y mtodos
Los acantocfalos se colectaron directamente de los hospede-
ros y fueron relajados en agua destilada hasta que la proboscis
estuvo completamente evertida. Luego, los parsitos se fjaron
y preservaron en etanol al 70%. Para el estudio morfolgico,
los acantocfalos fueron aclarados en una solucin de alcohol-
fenol (1:2 V/V) y coloreados con carmn de Semichon. Algunos
parsitos fueron disectados para el estudio anatmico de sus
rganos genitales. Las medidas y fotografas se realizaron usando
un microscopio Carl Zeiss Axioskiop-40.
Para la identifcacin de los especmenes se utilizaron las
claves propuestas por Travassos (1917), Petrochenko (1956) y
Richardson y Barger (2006). La nomenclatura taxonmica sigue
a Amin (1985). Parte de las muestras examinadas se encuentran
depositadas en la Coleccin Helmintolgica y de Invertebrados
Relacionados del Museo de Historia Natural de la UNMSM
(MUSM) Lima, Per.
Resultados
Familia oliGaCanthorhynChidae outhwell & maCFie, 1925
1. Oligacanthorhynchus carinii (Travassos, 1917)
Schmidt, 1972
(Fig. 1)
Hospedero: Dasypus novemcinctus (Dasypopidae).
Localidad: Iquitos (34500S, 731500W), Loreto
Deposito N: MUSM 3016
Comentario: Oligacanthorhynchus carinii mide de 140 a 220
mm de longitud por 2 a 2,5 mm de ancho. Fue descrito por
vez primera en el Brasil por Travassos (1917) como Haman-
niella carinii; posteriormente, Meyer (1932 o 1933? revisar en
bibliografa) consider la especie dentro del gnero Travassosia.
Schmidt (1972) realiz una revisin de la familia Oligacanthor-
hynchidae y consider a los gneros Hamaniella y Travassosia
como sinnimos del genero Oligacanthorhynchus.
Esta especie ha sido descrita en mamferos dasipdidos
(Dasypodidae): Dasypus novemcinctus de Brasil (Travassos, 1917;
Lent y Freitas, 1938); en Tolypeutus tricinctus conurus de Bolivia
(Meyer, 1933); en Chaetophractus vellerosus y Tolypeutus mataco
procedentes de Argentina (Martnez, 1984) y en Tolypeutes mata-
Figura 1. Oligacanthorhynchus carinii. Probscide de un espcimen
adulto. Escala 0,2 mm
384
Gomez-Puerta
cus de Paraguay. Con nuestro registro, ampliamos la distribucin
geogrfca de esta especie de acantocfalo.
2. Oligacanthorhynchus major (Machado-Filho,
1963) Schmidt, 1972
(Fig. 2)
Hospedero: Tayassu pecari (Tayassuidae)
Localidad: Tambopata (123536S, 691035W), Madre
de Dios.
Comentario: Acantocfalos relativamente grandes, los ma-
chos pueden llegar a medir hasta 498 mm y las hembras hasta
697 mm. Machado-Filho (1963) describe a Macracanthorhyn-
chus major parasitando el intestino delgado del pecar de collar
(Tayassu tajacu) proveniente de Brasil. Posteriormente, Schmidt
(1972) transfere esta especie de acantocfalo dentro del gnero
Oligacanthorhynchus. La especie O. major ha sido descrita pa-
rasitando el intestino delgado de pecares (Tayassu pecari y T.
tajacu) provenientes de Brasil y Bolivia. Este hallazgo representa
el primero registro de O. major para el Per.
3. Macracanthorhynchus hirudinaceus (Pallas, 1781)
Hospedero: Sus scrofa f. domestica (Suidae)
Localidad: Capitn Hoyle (040500S, 805300W),
Tumbes.
Comentario: M. hirudinaceus es un parasito del intestino
delgado del cerdo que presenta una distribucin cosmopoli-
ta. Actualmente en el Per, se conoce su distribucin en las
localidades de: Cajamarca, Cajabamba, Celendn, Hualgayoc,
San Marcos, San Pablo (Cajamarca); Huanuco, Leoncio Prado
(Hunuco); Chiclayo, Ferreafe (Lambayeque); Pucallpa (Uca-
yali); con este hallazgo ampliamos su distribucin en el Per.
Las infecciones en los cerdos causan diversos cuadros patol-
gicos. Las infestaciones medias por M. hirudinaceus no son muy
peligrosas, pero las infestaciones intensas pueden provocar retraso
en el crecimiento y emaciacin, as como cuadros de peritonitis
ocasionada por la perforacin de la pared intestinal por parte del
parasito. En lo que respecta a Salud Publica, se han reportado
casos humanos de acantocefalosis por M. hirudinaceus en diversas
partes del mundo (Radomyos et al. 1989, Barnish y Misch 1987,
Hemsrichart et al. 1983, Leng et al. 1983).
4. Prosthenorchis elegans (Diesing, 1851)
Hospedero: Saimiri sciureus (Cebidae)
Localidad: Lima.
Comentario: P. elegans es un parasito comn de primates
del nuevo mundo. Fue reportado por primera vez en el Per en
el primate Saimiri sciureus (Dunn, 1963). Posteriores estudios
ampliaron la lista de hospederos defnitivos, registrndose hasta
ahora en Saguinus labiatus, S. mystax, Saimiri boliviensis y S.
sciureus provenientes de Loreto (Michaud et al., 2003); y en S.
sciureus de la reserva Tambopata en Madre de Dios (Phillips et
al. 2004). En el presente estudio el acantocfalo fue colectado
de un ejemplar de S. sciureus criado como mascota en la ciudad
de Lima.
Este acantocfalo se propaga fcilmente en colonias de monos
en cautiverio, utilizando a las cucarachas o a algunos escarabajos
como hospederos intermediarios (Stunkard 1965). La acanto-
cefalosis ocasionada por P. elegans presenta dos sndromes: un
sndrome crnico y uno agudo. El curso crnico se caracteriza
por una diarrea acuosa por varios meses, con cuadros de anorexia
y caquexia. El curso agudo dura menos de un da produciendo
la muerte del animal a causa de una peritonitis bacteriana por
perforacin de la pared intestinal por la proboscis del parasito.
Los registros sobre acantocfalos en el Per son principalmen-
te por hallazgos accidentales en las necropsias de animales, tales
como en el presente trabajo. El registro por primera vez en el
Per de los acantocfalos O. carinii y O. major puede deberse a
la escasez de estudios parasitolgicos en mamferos dasipdidos
y tayasuidos peruanos.
Con los nuevos registros de los acantocfalos O. carinii y
O. major, el estatus de las familia Oligacanthorhynchidae en el
Per pasara a conformarse por seis especies incluyendo a M.
hirudinaceus, P. elegans, Oncicola spirula y Oncicola canis.
Literatura citada
Amin O.M. 1985. Classifcation. In: D. W. T. Crompton and B. B.
Nickol, eds. Biology of the Acanthocephala. Cambridge
University Press, Cambridge, U.K. Pages 2772
Barnish G. & K.A. Misch. 1987. Unusual cases of parasitic infections
in Papua New Guinea. Am. J. Trop. Med. Hyg. 37:585-587.
Dunn F.L. 1963. Acanthocephalans and cestodes of South American
monkeys and marmosets. J. Parasitol, v. 47, p.717 722.
Hemsrichart V., C. Pichyangkura, S. Chitchang & U. Vutichamnong.
1983. Eosinophilic enteritis due to Macracanthorhynchus
hirudinaceus infection: report of 3 cases. J. Med. Assoc.
Thai. 66: 303-310.
Figura 2. Oligacanthorhynchus major. (A) Macho adulto. (B) Macho
inmaduro. Escala 1,0 cm.
385

Acantocfalos Oligacanthorhynchidae del Per
Leng Y.J., W.D. Huang & P.N. Liang. 1983. Human infection with
Macracanthorhynchus hirudinaceus Travassos, 1916 in
Guangdong Province, with notes on its prevalence in
China. Ann. Trop. Med. Parasitol. 77: 107-109.
Lent H. & Freitas J.F. 1938. Pesquisas helmintologicas realisadas no
Estado do Para. VI Acanthocephala. Mem. Inst. Oswaldo
Cruz. 33: 455
Machado-Filho D.A. 1963. Nova espcie do gnero Macracanthor-
hynchus Travassos, 1916, parasito de Tayassu Tajacu
(L., 1758) (Archiacanthocephala, Oligacanthorhynchidae).
Rev. Bras. Biol. 23: 409412.
Martnez F.A. 1984. Hamanniella carinii Travassos, 1916 (Acan-
thocephalo; Gigantorhynchidae) en Dasipodideos de
Argentina. Bol. Chil. Parasitol. 39: 37-38.
Meyer A. 1933. Acanthocephala. Bronn's Klassen und Ordnungen
des Tierreichs Vol. 4 (11,2).
Michaud C., M. Tantalean, C. Ique, E. Montoya & A. Gozalo.
2003. A survey for helminth parasites in feral New World
non-human primate populations and its comparison with
parasitological data from man in the regin. J. Med. Pri-
matol. 32: 341345
Petrochenko V.I. 1956. Acanthocephala of domestic and wild
animals. Izdatelstvo Akademii Nauk SSSR, Moscow,
Russia, 465 p.
Phillips K.A., M.E. Haas, B.W. Grafton & M. Yrivarren. 2004.
Survey of the gastrointestinal parasites of the primate
community at Tambopata National Reserve, Peru. J. Zool.
Lond. 264, 149151
Radomyos P., A. Chobchuanchom & A. Tungtrongchitr. 1989. Intes-
tinal perforation due to Macracanthorhynchus hirudinaceus
infection in Thailand. Trop. Med. Parasitol. 40: 476-477.
Richardson D.J. & M.A. Barger. 2006. Redescription of Oliga-
canthorhynchus major (Machado-Filho, 1963) Schmidt,
1972 (Acanthocephala: Oligacanthorhynchidae) from the
white-lipped peccary (Tayassu pecari) in Bolivia. Comp.
Parasitol. 73: 157160.
Schmidt G.D. 1972. Revision of the class Archiacanthocephala
Meyer, 1931 (Phylum Acanthocephala), with emphasis
on Oligacanthorhynchidae Southwell et Macfe, 1925. J.
Parasitol. 58: 290297.
Stunkard H.W. 1965. New intermediate hosts in the life cycle of
Prosthenorchis elegans (Diesing, 1851), an acanthocepha-
lan parasite of primates. J. Parasitol. 51: 645-649.
Tantalen M., L. Sanchez, L. Gomez & A. Huiza. 2005. Acantoc-
falos del Per. Rev. Peru. biol. 12: 83-92.
Travassos L. 1917. Contribuicoes para o conhecimento da fauna
helmintologica brasileira. VI. Revisao dos acantocefalos
brasileiros. Parte 1. Fam. Gigantorhynchidae Hamann,
1892. Mem. Inst. Oswaldo Cruz. 9: 5-62.
386
Gomez-Puerta
387

Primer registro del cestodo crepidoBoThrium gerrardii en el Per
ISSN 1561-0837
Primer registro de Crepidobothrium gerrardii (Cestoda: Proteocephalidae)
en el Per
First record of Crepidobothrium gerrardii (Cestoda: Proteocephalidae) in
Peru
Laboratorio de Medicina Vete-
rinaria Preventiva. Facultad de
Medicina Veterinaria. Universidad
Av. Circunvalacin 2800, San Borja.
Lima, Per.
E-mail: lucho92@yahoo.com
NOTA CIENTFICA
Resumen
Se registra por primera vez la presencia en el Per del cestodo Crepidobothrium gerrardii parasitando el intestino
de una boa constrictora (Boa constrictor) procedente del departamento de Loreto. Cuatro especmenes fueron
estudiados e identifcados como C. gerrardii.
Palabras clave: Crepidobothrium gerrardii, cestodo, Boa constrictor, Per.
Abstract
It is the frst record of cestode Crepidobothrium gerrardii in Peru, parasitizing the intestine of a boa constrictor
(Boa constrictor) from Loreto. Four tapeworms were studied and identifed as C. gerrardii.
Keywords: Crepidobothrium gerrardii, cestode, Boa constrictor, Peru.
Introduccin
El grupo de cestodos ms destacable en serpientes es la familia
Proteocephalidae La Rue, 1911, encontrada en una lista amplia
de hospederos del viejo y nuevo mundo (Freze 1965, Rego 1994,
Ernst y Ernst 2006). Dentro de esta familia, el gnero Crepi-
dobothrium Monticelli, 1900; parasita nicamente a serpientes
sudamericanas (Rego 1994).
Actualmente, los registros sobre cestodos de serpientes
peruanas son escasos, nicamente es conocida Ophiotaenia sp.
parasitando a las serpientes Bothrops atrox Linnaeus, 1758, Boa
constrictor Linnaeus, 1758, Epicrates cenchria Linnaeus, 1758
y Corallus caninus Linnaeus, 1758(Tantalan y Gozalo 1985,
Snchez et al. 2004). En el presente trabajo se reporta a Crepi-
dobothrium gerrardii Baird, 1860 como nuevo cestodo para la
fauna parasitaria de Per.
Material y mtodos
En Mayo del 2004, se examin el sistema digestivo de una
boa constrictora (B. constrictor) procedente de la localidad de
Nauta (42909.00S 733540.96W), provincia de Iquitos,
Loreto, en la amazona del Per. Se colectaron 4 cestodos, los
cuales fueron fjados y preservados en etanol al 70%. Para el
estudio taxonmico, los cestodos fueron teidos con acetocar-
min ferrico, clarifcados en eugenol y montados en Blsamo
de Canad (Georgiev et al. 1986). Las medidas y fotografas se
realizaron en un microscopio Carl Zeiss Axioskop 40, equipado
con un ocular micromtrico. Las medidas se expresan como
rango en milmetros.
Para la identifcacin se utilizaron las claves morfolgicas
propuestas por Rego (1994) y de Chambrier (1989a). La no-
menclatura taxonmica se realizo de acuerdo a Rego (2003).
Parte de las muestras examinadas se encuentran depositadas en
la Coleccin Helmintolgica y de Invertebrados Relacionados
del Museo de Historia Natural de la UNMSM (MUSM 2978)
Lima, Per.
Resultados
Clase: Cestoda
orden: ProteoCePhalidea mola, 1928
Familia: ProteoCePhalidae la rue, 1911
Gnero: CREPIDOBOTHRIUM montiCelli, 1900
Crepidobothrium gerrardii Baird, 1860
Cestode de 320 540 mm de largo con un ancho mximo
de 4 mm. El escolex presenta cuatro ventosas prominentes que
miden de 0,60 0,72 mm de dimetro. Los proglotidos maduros
(Figura 1) miden de 2500 4800 mm de largo por 2450 3000
mm de ancho. Los proglotidos grvidos miden de 4020 4750
mm de largo por 1420 1680 mm de ancho. El poro genital es
irregularmente alternado. Los testculos son numerosos (312
360), se encuentran agrupados en dos flas laterales. La vagina se
encuentra posterior al saco del cirro. El ovario es bilobulado con
un ancho que oscila de 0,99 1,30 mm de largo y se encuentra
Figura 1. Proglotis maduro de Crepidobothrium gerrardii. Escala
0,5mm.
388
Gomez-Puerta
localizado en el margen posterior de los proglotis. Los proglotis
grvidos presentan el tero medial con ramas laterales.
Coincidiendo con las descripciones de Chambrier (1989a)
concluimos que la especie corresponde a C. gerrardii.
Discusin
Durante muchos aos las especies correspondientes al gnero
Crepidobothrium han tenido controversias en lo que respecta
a su nomenclatura. Meggitt (1927) considera que el gnero
Crepidobothrium se encuentra conformado por ms de 7 espe-
cies. Freze (1965) considera cuatro especies para este gnero.
Schmidt (1986) menciona que el gnero est conformado por
solo 5 especies. Finalmente, de Chambrier en 1989 (a y b), re-
aliz una revisin del gnero Crepidobothrium concluyendo que
est representado por 5 especies validas: C. gerrardii para la boa
constrictora; C. dollusi y C. lachesidis parsitos de la anaconda
(Eunectes murinus Linnaeus, 1758); C. viperis y C. garzonii
para Bothrops alternatus Dumril, Bibron & Dumril, 1854 (de
Chambrier 1988, de Chambrier 1989a, de Chambrier 1989b).
Crepidobothrium gerrardii fue descrita por vez primera por
Baird (1860) parasitando una boa constrictora procedente de
Sudamrica. Posteriormente fueron descritas otras especies de
cestodos Proteocephalideos para la boa constrictora. MacCal-
lum (1921) describe a Tetrabothrius boiae parasitando a una B.
constrictor proveniente de Brasil y a Tetrabothrius brevis para una
B. constrictor de Mxico. De Chambrier (1988 a y b) realiz una
revisin del material tipo de estos especmenes y concluye que
T. boiae y T. brevis son sinnimos de C. gerrardii.
La distribucin de C. gerrardii es nicamente para pases
tropicales (Rego 1967). Los registros en otros pases se deben
exclusivamente a hallazgos en zoolgicos (de Chambrier 1989a).
El hallazgo de C. gerrardii en Per permite ampliar el rea de
distribucin del parsito.
Literatura citada
Baird W. 1860. Description of some new species of intestinal worms
(entozoa) in the collection of the British Museum. Proc.
Zool. Soc. Lond. 28: 446-448.
de Chambrier A. 1988. Crepidobothrium garzonii n. sp. (Cestoda:
Proteocephalidae) parasite de Bothrops alternatus Dum.
Bibr. & Dum., 1854 (Serpentes: Viperidae) au Paraguay.
Rev. Suisse Zool. 95: 1163-1170.
de Chambrier A. 1989a. Revision du genre Crepidobothrium
Monticelli, 1900 (Cestoda: Proteocephalidae) parasite
dOphidiens notropicaux. I. C. gerrardii (Baird, 1860) et
C. viperis (Beddard, 1913). Rev. Suisse Zool. 96: 191-217.
de Chambrier A. 1989b. Revision du genre Crepidobothrium
Monticelli, 1900 (Cestoda; Proteocephalidae) parasite
dOphidiens notropicaux. II. C. dollfusi Freze, 1965, C.
lachesidis (MacCallum, 1921) et conclusions. Rev. Suisse
Zool. 96: 345-380.
Ernst C.H. & E.M. Ernst. 2006. Synopsis of helminthes endopara- Synopsis of helminthes endopara-
sitic in snakes of the United States and Canada. Society
for the study of amphibians and reptiles. Herpetological
Survival No 34. 86pp
Freze V.I. 1965. Essentials of cestodology, vol. V. Proteocephalata in
fsh, amphibians and reptiles. Nauka, Moscow, 538 p. (In
Russian: English translation, Israel Program of Scientifc
Translation.
Georgiev B., V. Biserkov & T. Genov. 1986. In toto staining method
for cestodes with iron acetocarmine. Helminthologia. 23:
279-281.
MacCallum G.A. 1921. Studies in helminthology. Zoopathologica.
1: 137-284.
Meggitt F.J. 1927. Remarks on the Cestode families Monticellidae
and Ichthyotaeniidae. Ann. Trop. Med. Parasitol. 21: 69-87
Rego A.A. 1967. Sobre alguns cestdeos parasitos de rpteis. Rev.
Brasil. Biol. 27: 181-187.
Rego A.A. 1994. The order Proteocephalidea. In Keys to the cestode
parasites of vertebrates, L. Khalil, A. Jones, and R.A. Bray
(eds.). Commonwealth Agricultural Bureaux, Wallingford,
U.K., p. 257-293.
Rego A.A. 2003. Problems of classifcation of South American
Proteocephalids (Cestoda). On a new classifcation for the
group. Acta Scientiarum, 25 (1) : 15-22.
Snchez N., M. Tantalen, R. Richards & H. Glvez. 2004. Parsitos
helmintos en Boa constrictor, Epicrates cenchria y Corallus
caninus (Ophidia: Boidae) criadas en cautiverio. Rev. Inv.
Vet. Per. 15: 166-169.
Schmidt G.D. 1986. Handbook of tapeworm identifcation. CRC
Press, Boca Raton, Florida.
Tantalan, M. & A. Gozalo. 1985. Parsitos de Bothrops atrox (Vi-
peridae) de la Amazona peruana. AMVEAP. 20: 11-12.
389

Efecto de los metales sobre microcrustceos de agua dulce
ISSN 1561-0837
Efecto de los metales sobre microcrustceos de agua dulce.
Avances metodolgicos y potencialidad de cladceros y coppo-
dos como organismos test
Mara Florencia Gutierrez
1
y Ana Mara Gagneten
2
Effects of metals on freshwater microcrustaceans. Metodological advan-
ces and potentiality of cladocerans and copepods as test organisms
1 Instituto Nacional de Limnologa
(CONICET- UNL). Ciudad Univer-
sitaria. Santa Fe, Argentina. Email:
fgutierrez@inali.unl.edu.ar
2 Facultad de Humanidades y
Ciencias, Universidad Nacional del
Litoral, Ciudad Universitaria. Santa
Fe, Argentina. Email: amgagnet@
fhuc.unl.edu.ar
COMENTARIO
Resumen
El incremento de los metales en los cuerpos de agua dulce a causa de las actividades antropognicas genera
importantes alteraciones sobre la biota. Esta revisin analiza los efectos adversos de varios metales de re-
levancia ecotoxicolgica sobre los microcrustceos zooplanctnicos (cladceros y coppodos), los avances
experimentales en esta lnea y las ventajas de cada grupo como organismos test. En general, la necesidad
de obtener indicadores ms sensibles y representativos que los tradicionales, promovi lineamientos hacia
estudios subcrnicos, interspecfcos y multigeneracionales. Por otra parte, la tendencia actual hacia el estudio
de mezclas de sustancias y los efectos indirectos permite adquirir una visin ms integral del problema. El
impacto sobre las poblaciones es muy variable, dependiendo de la naturaleza del metal, las caractersticas
del medio, el tiempo de exposicin, las condiciones de cultivo y aspectos genticos. Sin embargo, la mayora
de los trabajos se centran en pocas especies, dejando vacancias en el conocimiento de las representantes de
cada regin particular. Si bien algunos atributos de los cladceros y coppodos como el tamao, la morfologa
y el rol ecolgico los tornan buenos indicadores, las diferencias en el desarrollo, reproduccin y estrategias de
perpetuacin conferen ventajas a un grupo sobre otro.
Palabras clave: ecotoxicologa; metales; microcrustceos zooplanctnicos; diseos experimentales.
Abstract
The increase of metals in fresh water systems due to anthropogenic activities cause important alterations
on the biota. The present review analyze the adverse effects of various metals of ecotoxicological relevance
on microcrustaceans zooplankton species (cladocerans and copepods), the experimental advances and the
advantages of each group as test organisms. In general, the need to obtain more sensitive and representative
indicators than the tradicional ones leads to subchronic, interespecifc and multigenerational studies. Addition-
ally, the analysis of mixtures as well as their indirect effects allows to acquire more integral knowledges of the
impact of contaminants. The toxic effects are different, depending on the nature of metals, the physicochemical
characteristics of the water, exposutre time and genetic traits. However, most works are focused on few spe-
cies, leading vacant areas on the knowledge of the representatives of every particular region. Despite some
cladocerans and copepods atributes make them good bioindicators (size, morphology and ecological role), dif-
ferences of development, reproduction and perpetuation strategies bring advantages to one group on another.
Keyword: ecotoxicology metals zooplanktonic microcrustaceans; experimental designs.
Introduccin
Los metales constituyen componentes comunes de la litosfera
y forman parte de numerosos ciclos biolgicos y geolgicos
naturales. No obstante, se ha demostrado que la creciente in-
dustrializacin y actividades agrcolas suelen generar importantes
modifcaciones en estos ciclos, causando el incremento de las
concentraciones normales en los cuerpos de agua continentales
(Chen & Folt 2000). Estos ecosistemas constituyen los ambientes
ms sensibles a dichos cambios y sus alteraciones tienden a reper-
cutir directamente sobre las poblaciones humanas que los utilizan
como fuente de recursos. Una de las principales medidas para su
conservacin implica evaluar los efectos de estas sustancias sobre
la biota que los habita y desarrollar normas de gestin adecuadas
en base a los niveles gua determinados en campo y laboratorio
(Baudouin & Scoppa 1974).
Entre los integrantes de los mencionados ecosistemas, el zoo-
plancton constituye una comunidad clave. Sus componentes po-
seen un rol central en las tramas trfcas, y su elevada sensibilidad
a los cambios fsicos y qumicos del medio los tornan adecuados
para su utilizacin como bioindicadores de contaminacin por
metales. Si bien pertenecen a diversos grupos funcionales, en
conjunto contribuyen al transporte de materia y energa desde
los niveles trfcos inferiores hacia los superiores. Intervienen
activamente en el reciclado de materia orgnica disuelta, se
alimentan de algas, detritos u otros microorganismos y son el
principal recurso de numerosos peces e invertebrados acuticos
(Ortaz et al. 2006).
Los cladceros y coppodos pertenecen al grupo de los
microcrustceos del zooplancton y dada su gran sensibilidad,
son los ms utilizados en estudios ecotoxicolgicos si se los
compara con otros miembros de dicha comunidad. Adems,
su pequeo tamao, cortos perodos generacionales y facilidad
para los cultivos les otorgan relevancia y practicidad para estu-
dios experimentales y de impacto ambiental (Gaete & Paredes
1996). En este sentido, permiten evaluar no slo los efectos
directos, sino tambin el impacto indirecto de los contaminantes
o estresores ambientales, otorgando mayor representatividad
a los resultados obtenidos y estimaciones a largo plazo (Boyd
2010). Esto se debe a que dicho anlisis requiere frecuentemente
observaciones a mayor escala, o bien sobre las interacciones con
los niveles trfcos adyacentes, lo cual resultara difcultoso con
organismos de mayor talla o tiempo generacional.
390
Gutierrez & Gagneten
El objetivo de esta revisin es analizar los trabajos ms rel-
evantes sobre los efectos negativos de los metales de importancia
ecotoxicolgica en cladceros y coppodos de agua dulce. Esta
breve revisin no intenta cubrir toda la literatura existente,
sino proveer informacin til a partir de las investigaciones
experimentales importantes para el mbito acadmico, y sugerir
posibles vas para futuros estudios. Adicionalmente, dado que
al presente la mayora de las revisiones en esta temtica referen
a estudios de campo (Ferdous 2009, Boyd 2010), este trabajo
pretende adems aportar informacin para una base de datos
de trabajos experimentales de referencia.
En primera instancia, se detallarn los avances metodolgicos
en estudios de laboratorio resaltando los cambios ocurridos.
Luego, se identifcarn los efectos adversos de varios metales
sobre cladceros y coppodos y, fnalmente se mencionarn
las ventajas y desventajas de cada grupo como organismos test.
Diseos experimentales y avances metodolgicos en es-
tudios de laboratorio.
Los primeros conocimientos sobre los efectos de los me-
tales en los organismos acuticos se inician a principios del
siglo XX (Norwood et al. 2003). stos provienen de estudios
experimentales basados en ensayos de toxicidad aguda y
crnica, mediante los cuales se obtienen las concentraciones
letales o efectivas para el 50% de la poblacin analizada (LC
50
;
EC
50
) y las concentraciones de efecto mnimo y de efecto
no observables (CEM; CENO). A partir de estos valores las
agencias internacionales suelen establecer los niveles gua
para la proteccin de la biota (OECD 1981, EPA 1984,
APHA 1989). Sin embargo, numerosas investigaciones han
cuestionado la representatividad de tales mtodos (Heugens
2001, Cairns 1986). Esto se debe, en primera instancia, a
que las concentraciones determinadas por ellos son frecuent-
emente mayores a las presentes en los ambientes naturales.
En segundo lugar, no contemplan los efectos ms sutiles de
los contaminantes sobre los organismos. Es decir, aquellos
efectos inducidos por concentraciones an ms bajas, capaces
de generar estrs y alterar la efcacia biolgica de las espe-
cies o la estabilidad de las poblaciones a largo plazo (Sibly
& Calow 1989, Cohen & Forward 2005). Finalmente, no
suelen analizar la existencia de los efectos indirectos de los
contaminantes, subestimando de este modo su toxicidad real.
La necesidad de obtener indicadores ms sensibles y repre-
sentativos promovi entonces los primeros lineamientos hacia
estudios subcrnicos, interespecfcos y en ocasiones, multigen-
eracionales utilizando generalmente concentraciones menores
a las empleadas en los ensayos tradicionales. En esta lnea, los
cladceros y coppodos son uno de los principales represent-
antes, lo cual se refeja en la extensa literatura existente hasta
el momento (De Cohen & Janssen 1997, Reichwaldt & Stibor
2005, Snchez-Ortz et al. 2010).
Numerosos ejemplos de estos avances se observan en dife-
rentes niveles de organizacin biolgica. Desde el punto de
vista fsiolgico, Barata et al. (2004) propusieron diseos que
permiten reconocer disrupciones endocrinas en coppodos
mediante el anlisis de los ciclos de vida y posibles desvos del
patrn de desarrollo normal. Esta metodologa fue utilizada
por Gutierrez et al. (2010) quienes analizaron los efectos
del cobre y cromo sobre el coppodo Notodiaptomus conifer
y detectaron importantes alteraciones con concentraciones
an mas bajas que las que produjeron daos reproductivos.
Por otra parte, el estudio del comportamiento se ha propuesto
como otro indicador subcrnico altamente sensible y repre-
sentativo para cladceros y coppodos. En este sentido, los
comportamientos de escape (Sullivan et al., 1983; West et
al., 1998), alimentacin (Sharp y Stearns, 1997), fototaxismo
(Stearns y Sharp, 1994) y natacin (Sullivan et al., 1983) entre
otros, han demostrado gran sensibilidad y efciencia en la
deteccin temprana de contaminantes. Adems, su facilidad
de medicin los constituyen herramientas complementarias
de gran potencial para futuros estudios ecotoxicolgicos.
Finalmente, los anlisis a nivel poblacional han ponderado
el empleo del indicador r (tasa intrnseca de crecimiento
natural) por la capacidad integradora de diversos parmetros
biolgicos en estudios de ciclo de vida (Coniglio & Baudo
1989, Koivisto & Ketola 1995, Forbes & Calow, 1999). Pese
a haber sido cuestionado por algunos autores (Allan 1976,
Janssen et al. 1994), este indicador es altamente confable y
es utilizado en estudio para evaluar los efectos directos de los
metales y otros contaminantes.
Otra de las principales lneas de investigacin en ecotoxi-
cologa de microcrustceos acuticos es el estudio del efecto de
las mezclas de metales, empleando particularmente el gnero
Daphnia como modelo experimental (Jak et al. 1996, Gaete &
Paredes 1996, Wong & Pak 2004). La relevancia de esta lnea
radica en que los distintos contaminantes, no se encuentran
aislados en la naturaleza, sino combinados e interactuando con
diferentes componentes del medio. Existen varios mtodos gr-
fcos y estadsticos que proporcionan curvas de dosis-respuesta
para cada metal en modelos de mezclas. Esta informacin es
utilizada para generar las concentraciones crticas y predecir el
impacto de la interaccin de los metales (Norwood et al. 2003).
Dado que estos trabajos slo son aplicables a la toxicidad aguda,
an quedan por disear nuevos modelos para valores crnicos.
Pese a la gran importancia de los avances mencionados, hasta el
momento ningn organismo internacional ha creado protocolos
que involucren estos modelos para el monitoreo orientado al
mantenimiento de la calidad del ambiente acutico.
Finalmente, considerando la incidencia indirecta de los txi-
cos sobre los microcrustceos, recientes lneas de investigacin se
han abocado al estudio de posibles mecanismos de interferencias
en las interacciones intra o interespecfcas (Boyd 2010), o los
efectos de la bioacumulacin de compuestos a lo largo de la
trama trfca (Zyadah 2000). Es sabido que las interacciones
biolgicas cumplen un rol clave en la estructuracin y manten-
imiento de los ecosistemas, y si tales interacciones son alteradas
por factores antropognicos, la principal consecuencia sera una
desestabilizacin de los mismos.
A partir de lo desarrollado, se podra afrmar que las nuevas
tendencias metodolgicas aportan una visin ms integral y
representativa de la contaminacin qumica real del ambiente.
Esto reside por un lado, en que la incorporacin de parmetros
ms sensibles y de relevancia ecolgica permite analizar los bal-
ances energticos de los organismos y estimar las consecuencias
poblacionales a mayor plazo. Por otra parte, el anlisis de mezclas
y de los efectos indirectos favorece una mejor comprensin de
los efectos de los contaminantes que interactan en el medio e
interferen en los procesos biolgicos.
391

Efectos adversos de los principales metales de importancia
ecotoxicolgica.
Entre los metales no esenciales, es decir aquellos cuya pres-
encia en el organismo no es necesaria para el desarrollo normal
de las funciones metablicas se consideraron el mercurio, el
cadmio, el plomo y el arsnico. Entre los ms representativos del
grupo de los esenciales se analiz el nquel, el zinc, el cromo
y el cobre. Estos poseen funciones metablicas importantes a
concentraciones traza, pero se tornan altamente txicos cuando
superan el umbral de tolerancia.
Mercurio. La mayora de los estudios sobre los efectos biolgi-
cos del mercurio se centran en el cladcero D. magna. En esta
especie, De Cohen y Janssen (1997) observaron que dicho metal
y otros compuestos asociados pueden inhibir enzimas digestivas
especfcas. Sin embargo, tales efectos estaran estrechamente
ligados a la temperatura del medio, que puede determinar su
ingreso y eliminacin (Tsui & Wang 2004): temperaturas bajas
reduciran los efectos txicos, aunque se ha demostrado que el
potencial de transferencia trfca desde las algas hacia los dfni-
dos no se ve completamente afectado. Tal observacin favorece
la evidencia que el grado de toxicidad del mercurio puede ser
diferente segn el nivel biolgico considerado y promueve la
necesidad de continuar las investigaciones acerca de la impor-
tancia relativa de los factores externos, como determinantes de
la toxicidad.
Khangarot y Das (2009) evaluaron el desarrollo de huevos
partenogenticos de D. carinata exponindolos a concentracio-
nes entre 0,1 y 32 g L
-1
de mercurio. Los resultados obtenidos
indicaron que la inhibicin de los mismos constituye un indica-
dor efcaz de la toxicidad de este metal. Dada la sensibilidad del
mtodo empleado, futuras investigaciones en esta lnea contri-
buiran a detectar indicadores tempranos y muy apropiados
para biomonitoreo.
Cadmio. Hasta el momento los cladceros ms estudiados en
relacin a la toxicidad del cadmio son Ceriodaphnia dubia, D.
magna (Suedel et al. 1997) y Moina macrocopa (Wong

&Wong

1990) y entre los coppodos, Eurytemora afnis (Hall et al.
1995). Sin embargo, se ha reconocido que varias especies de la
biota acutica poseen gran tolerancia a este metal. Esta propie-
dad podra estar asociada, entre otros factores, a la presencia de
ciertos componentes del medio capaces de inhibir o disminuir
su ingreso al organismo. Por ejemplo, se ha demostrado en otros
invertebrados acuticos que la exposicin a bajas concentraciones
de sulfato de zinc disminuye la susceptibilidad a la toxicidad del
cadmio (Howell 1985). La presencia de enzimas o complejos de
detoxifcacin tales como las metalotionenas tambin podran
ejercer un rol clave, aunque la relacin entre stos y la elevada
tolerancia aun est poco resuelta (Wright & Welbourn 1994).
Por otra parte, se ha demostrado el potencial bioacumulativo de
este elemento a lo largo de las cadenas trfcas (Munger et al.
1998, Croteau et al. 2005), indicando que tal proceso es noto-
riamente mayor en la comunidad planctnica que en la de peces.
Entre los trabajos experimentales ms signifcativos se en-
cuentra el de Barata et al. (2002). Estos investigadores analizaron
cmo el aporte de alimento y la densidad poblacional pueden
afectar las respuestas del cladcero tropical Moinodaphnia
macleayi a la toxicidad del cadmio. Estos autores reconocieron
un efecto denso-dependiente sobre la toxicidad del metal, sin
embargo dicho efecto es variable segn la cantidad de alimento
provisto. La relevancia de dicha investigacin reside en reconocer
la posibilidad de subestimar la toxicidad real del metal segn las
condiciones ambientales.
Plomo. En los ambientes naturales los efectos adversos del
plomo incluyen alteraciones en el crecimiento, reproduccin,
comportamiento, metabolismo y sobrevivencia. En cuanto a la
incorporacin del metal disuelto en los organismos, no existen
muchas investigaciones, pero se comprob que D. magna,
absorbe casi el 90% a travs de su exoesqueleto (Berglind et al.
1985). Por otra parte, de modo similar que para otros metales,
existen diferencias especfcas en la sensibilidad y numerosos au-
tores concuerdan que los calanoideos resultan generalmente ms
sensibles (Sharma & Selvaraj 1994), seguidos por los cladceros,
particularmente D. magna, y los coppodos ciclopoideos (Of-
fem & Ayotunde 2008). De todos modos, pese al aporte de
informacin, estos estudios slo consideran parmetros irre-
versibles, obtenidos a partir de ensayos agudos. Sera necesario
realizar nuevas investigaciones a nivel crnico o subcrnico para
conocer en detalle los efectos ms concretos y mecanismos de
accin del plomo sobre el ciclo de vida de los organismos. Otros
autores analizaron la infuencia del sedimento (Garca-Garca
2006) o de la disponibilidad de alimento (Enserink 1995) en la
toxicidad del plomo durante el ciclo de vida de varias especies,
enfatizando nuevamente la importancia de los factores externos
como determinantes de la toxicidad de ste y otros elementos.
Arsnico. En contraposicin con otros metales, los compuestos
inorgnicos de arsnico son ms txicos que los orgnicos, an
para cladceros y coppodos de agua dulce. Los principales estu-
dios sobre sus efectos txicos se realizaron en Bosmina longirostris,
D. magna, D. pulex y Simocephalus serrulatus (Eisler 2004). Los
trabajos ms recientes han considerado no slo las caractersti-
cas del metal sino las posibles alteraciones en la naturaleza o
el modo de exposicin. Por ejemplo, Hoang (2007) evalu las
respuestas de D. magna a exposiciones fuctuantes de arsnico
observando que el parmetro ms afectado fue la mortalidad,
mientras que el crecimiento corporal no fue signifcativamente
alterado. Otro aporte interesante lo proveen Chen et al. (1999),
quienes detectaron la capacidad del arsnico de incrementar la
expresin del ARNm en clulas constitutivas de D. pulex. Este
anlisis permiti desarrollar biomarcadores efcientes utilizando
tcnicas moleculares y demogrfcas combinadas. Sin embargo,
cabe mencionar que pese a su sensibilidad, las investigaciones
a escala molecular no contemplan los efectos individuales ms
sutiles, de relevancia ecolgica. Estos efectos son esenciales para
comprender procesos txicos a mayor plazo, tales como cambios
en las dinmicas poblacionales, lo cual adquiere gran relevancia
desde el punto de vista ecolgico y ambiental.
Nquel. Se ha detectado que la presencia y distribucin de
nquel en los fuidos corporales, caparazn, apndices fltradores
y huevos se deben principalmente a procesos de acumulacin a
partir del medio (Hall 1982). A nivel celular, el efecto txico ms
claro se refeja en la homeostasis del Mg
2+
. Entre las principales
alteraciones fsiolgicas en cladceros de agua dulce, se conoce el
efecto inhibitorio sobre el crecimiento (Khangarot & Ray 1987),
el consumo de oxgeno y la concentracin de hemoglobina
(Panne 2003). Tal como fue demostrado para otros metales, la
toxicidad del nquel vara segn las condiciones del medio. En
esta lnea Keithly et al. (2004) y, posteriormente, Deleebeeck
392
et al. (2008) observaron que el incremento de la dureza del
agua aumenta la concentracin efectiva (LC
50
s) del nquel en
C. dubia y otros cladceros de agua dulce. Actualmente existen
varios modelos que permiten predecir la biodisponibilidad de
este metal para los crustceos, sin embargo estn diseados casi
nicamente para experiencias con D. magna y C. dubia. An
quedan por desarrollar modelos que involucren otros organismos
planctnicos de relevancia ecolgica.
Zinc. Las investigaciones ms recientes sobre los efectos del
zinc conferen particular nfasis a la calidad del alimento y a
la aclimatacin como factores determinantes de la toxicidad y
tolerancia. En lneas generales, los estudios a nivel celular indican
que el zinc es capaz de alterar el balance de Ca
2+
, y si tal cosa
ocurre, los daos embrionarios, en el desarrollo o el crecimiento
podran ser irreversibles, con graves consecuencias poblacionales
(Jeziorski & Yan 2006). A nivel reproductivo, la toxicidad actu-
ara ms en forma directa inhibiendo la eclosin de los huevos
en la cmara incubatriz, que indirectamente por la disminucin
de la fecundidad de las hembras (Brown et al. 2005).
Entre los cladceros de agua dulce ms estudiados se en-
cuentran los gneros Daphnia y Ceriodaphnia. Varios trabajos
registran la elevada tolerancia de D. magna al zinc que podran
deberse a caractersticas genticas especfcas (Shaw et al. 2006)
o al efecto de aclimatacin a las condiciones de laboratorio
(Muyssen et al. 2005). Por otra parte, se investig el efecto
individual de diferentes cationes mayores (Ca
2+
, Mg
2+
, Na
+
, K
+
,
y H
+
) sobre la toxicidad aguda del zinc para D. magna (Heijer-
ick, 2002) as como el efecto de la transferencia trfca sobre
la misma especie alimentada con algas contaminadas. En este
trabajo, no se observaron efectos en el crecimiento, pero s en
la reproduccin total (De Schamphelaere et al., 2004). Para el
caso de los coppodos se desarroll un protocolo que permite
evaluar el efecto de la toxicidad y el modo de accin de este
metal sobre Bryocamptus zschokkei. En ausencia de alimento, los
estadios larvarios fueron ms sensibles y los principales efectos
txicos fueron la reduccin en el nmero de huevos por camada,
aumento del tiempo de desarrollo y elevada mortalidad durante
la eclosin (Brown 2005).
Cromo. Los efectos txicos que generan elevadas concentracio-
nes de cromo inciden sobre numerosos parmetros de la historia
de vida de microcrustceos. Sin embargo, se han registrado
diferentes resultados que dependen en gran medida de las condi-
ciones de cultivo as como aspectos genticos de las diferentes
especies (Martnez-Jernimo et al. 2006). En este sentido, entre
los trabajos ms completos en cladceros, se encuentran los de
Spehar y Fiandt (1986); Coniglio y Baudo (1989); Gagneten
(2006), quienes estudiaron alteraciones en la longevidad, ali-
mentacin y reproduccin. Asimismo, en condiciones similares,
se evaluaron los efectos adversos del cromo en forma individual
y en mezclas en el coppodo Mesocyclops pehpeiensis (Wong &
Pak 2004) y otros coppodos dulceacucolas (Gutierrez et al.
2010, Soto et al. 2003).
A nivel comunitario, el impacto del cromo fue evaluado
intensamente en estudios de mesocosmos, donde se observaron
importantes modifcaciones en la diversidad, riqueza y densidad
del zooplancton (Gagneten, 2002). Dicho trabajo denota la
necesidad de realizar estudios multiespecfcos, dada su mayor
capacidad predictiva al compararla con ensayos que involucran
slo una especie.
Cobre. En los compartimientos biolgicos, este elemento
forma parte de numerosas enzimas que actan como cataliza-
doras redox o carriers (Flemming & Trevors 1989). En el caso
de los cladceros, la sensibilidad es muy variada, y depende
principalmente de las condiciones del medio. Entre la literatura
analizada en este trabajo, D. magna registra un rango de toxicidad
aguda entre 1,4 y 70 gL
-1
(Winner & Farrel 1976, Bossuyt
et al. 2004). C. dubia, otra de las especies ms estudiadas en
ensayos de laboratorio, registr valores entre 35 to 79 gL
-1
a
diferentes grados de dureza del agua (Belanger et al. 1989), sin
embargo, Gagneten y Vila (2001) encontraron lmites meno-
res de sensibilidad (entre 5 y 20 gL
-1
) en el mismo cladcero
sometido a diferentes niveles de pH. En estudios crnicos con
tres generaciones sucesivas, Cowgill y Milazzo (1991) com-
pararon el efecto del cobre metlico individual y como nitrato
de cobre en la misma especie, observando diferentes respuestas
txicas, lo que demuestra la importancia de tener en cuenta la
especiacin de los metales en los ambientes naturales. En el caso
de los coppodos, las variaciones en la sensibilidad dependen
del estadio de desarrollo. Por ejemplo, la LC
50
-48 h registrada
para nauplios de Mesocyclops pehpeiensis fue 75 g L
-1
(Wong
& Pak 2004), mientras que los adultos de Cyclops abyssorum y
Eudiaptomus padanus registraron valores de 2500 gL
-1
y 500
gL
-1
respectivamente (Baudouin & Scoppa 1974).
Los mecanismos de toxicidad conocidos para cobre con-
sideran interacciones con protenas, enzimas, cidos nucleicos
y metabolitos (Flemming & Trevors 1989). Sin embargo, los
estudios con cobre a nivel celular en invertebrados acuticos
son muy escasos o incompletos. Pese a esta falta de informacin,
los ensayos crnicos suelen ser tiles para detectar indicios de
los mecanismos de toxicidad (Winner & Farrel 1976). A nivel
comunitario, Havens (1994) realiz estudios de mesocosmos
observando una importante reduccin en la biomasa total as
como en el transporte del carbono orgnico a lo largo de la
cadena trfca. Por otro lado, a pesar de la gran relevancia del
comportamiento en la dinmica de las comunidades, los estudios
etolgicos actuales sobre los efectos del cobre son muy escasos y
los antecedentes registrados hasta el momento se centran prin-
cipalmente en D. magna (Untersteiner et al. 2003, Ferrando &
Andreu 1993).
En lneas generales se puede afrmar que numerosos fac-
tores tales como la calidad del alimento, la predeterminacin
gentica, el grado de desarrollo, el tamao o el sexo determinan
importantes diferencias en la sensibilidad individual (Vasela &
Vijverberg 2007, Brown et al. 2005) y entre las especies. Por esta
razn, los trabajos comparativos y multiespecfcos son necesarios
e importantes para reconocer las condiciones ptimas de anlisis
y evitar subestimar la toxicidad de los metales.
Por otra parte, est ampliamente documentado que la in-
cidencia de los elementos externos sobre la toxicidad de los
metales es muy variable segn el nivel de organizacin biolgica
considerado. En este sentido, los efectos de la temperatura o las
condiciones fsicoqumicas del medio, tales como el pH, entre
otros, tienden a infuir de modo diferente en la toxicidad de los
metales sobre los individuos, las poblaciones o sus interacciones.
Finalmente, destaca la falta de estudios con especies region-
ales o representativas de cada sitio contaminado en particular.
La mayor parte de los estudios en relacin a la toxicidad de los
metales se centran en los gneros Daphnia o Ceriodaphnia, que
393

si bien presentan una amplia distribucin y facilidad para el
desarrollo de cultivos experimentales, su relevancia y utilidad
como organismos test para estudios ambientales ha sido muy
cuestionada (Koivisto 1995).
Potencialidades de cladceros y coppodos como organ-
ismos test
Las caractersticas de la historia de vida de los cladceros y
coppodos de agua dulce son adaptaciones adquiridas que per-
mitieron su xito evolutivo (Paggi 1995). Estas caractersticas
los tornan muy apropiados para estudios ecotoxicolgicos, sin
embargo, ciertas diferencias conferen ventajas a un grupo sobre
el otro, segn los objetivos propuestos.
En primer lugar, la morfologa constituye una caracterstica
favorable para los estudios toxicolgicos de campo y laboratorio
en ambos grupos (De Bernardis & Peters, 1987). Su longitud
media vara entre uno y dos milmetros, y sus diversos apndices
permiten reconocer malformaciones o alteraciones en el desar-
rollo sea por causas naturales, tales como parasitismo o regen-
eracin post dao, o antropognicas como las consecuencias de
eventos de contaminacin ambiental (Fleminger 1985, Sillett &
Stemberger 1998, Otha et al. 1998, Sinev 2000).
Otro aspecto ventajoso compartido son los parmetros
fsiolgicos relacionados con las funciones de respiracin. Los
intercambios de gases se dan principalmente en la superfcie del
cuerpo, pero ciertos cladceros poseen adems rganos nucales
que cumplen funciones excretoras (Aladin &Potts 1995). En
este sentido, el consumo de oxgeno as como la proporcin de
hemoglobina en el cuerpo se encuentran entre los indicadores
fsiolgicos ms sensibles (Pane et al. 2003).
Una primera diferenciacin entre ambos grupos reside en la
alimentacin, ya que los cladceros se caracterizan principal-
mente por ser herbvoros-detritvoros, aunque algunos pocos
son depredadores. Los coppodos, en cambio, poseen modos de
alimentacin ms variados, siendo algunos grupos fltradores,
otros ramoneadores o carnvoros. El conocimiento de estos
hbitos es particularmente importante cuando se llevan a cabo
estudios de laboratorio por la necesidad de realizar cultivos
paralelos para alimentar a los organismos.
Otro de los aspectos de particular importancia en estudios
experimentales ecotoxicolgicos es el desarrollo postembrionario
(Gutierrez et al. 2010). En este sentido, los coppodos, a dife-
rencia de los cladceros, presentan un ciclo de vida altamente
complejo, pero a la vez muy favorable para la obtencin de
informacin sobre los efectos txicos en cada etapa (Kovatch et
al, 1999). Esta caracterstica permite adems obtener una mayor
aproximacin sobre las respuestas poblacionales (Hutchinson
2002). El desarrollo de los coppodos incluye el paso por doce
estadios larvarios y una metamorfosis de la morfologa naupliar
(N6) a la de copepodito (C1). Cada uno de dichos estadios
es fcilmente identifcable, y el pasaje de N6 a C1 constituye
un excelente parmetro para evaluar una posible disrupcin
endocrina ya que implica un momento de gran estrs y sus-
ceptibilidad ante alteraciones ambientales (Barata et al., 2004).
Contrariamente, los cladceros poseen un desarrollo directo, y
sus estadios larvarios son ms variables y difciles de identifcar,
con lo cual la deteccin de alteraciones en este proceso podra
resultar imprecisa.
La reproduccin es un parmetro de particular relevancia en
los ensayos de laboratorio. En este caso, dado que los cladceros
poseen reproduccin partenognica, son ms favorables que los
coppodos, razn por la cual han sido estandarizados y considera-
dos ms apropiados para establecer comparaciones y determinar
los niveles gua de toxicidad (De Bernardis & Peters 1987). En
condiciones ambientales estables, estos organismos producen
individuos genticamente idnticos, promoviendo mayor certeza
en las evaluaciones a escala de microcosmos, donde se requiere
el mayor control posible de las variables externas al txico que se
intenta analizar. Los coppodos en cambio poseen reproduccin
sexual, ms compleja y prolongada y carecen consecuentemente
de la homogeneidad que caracteriza a los cladceros.
Finalmente, considerando el esquema r-K de estrategias de
perpetuacin, los coppodos estaran ubicados entre los K estrat-
egas por su extenso perodo de desarrollo, su comparativamente
modesta tasa intrnseca de crecimiento natural y su sexualidad.
Contrariamente, por el gran oportunismo y capacidad parteno-
gentica, los cladceros seran estrategas r, vinculndose a los
rotferos (Allan 1976). Estas particularidades son importantes si
se pretende realizar estudios de campo, o extrapolar resultados
de laboratorio a escalas mayores.
Conclusin
Los primeros criterios ecotoxicolgicos para evaluar la toxi-
cidad de los contaminantes sobre las especies acuticas fueron
la mortalidad y daos reproductivos en ensayos cortos. La ven-
taja de dichos tests radica en su claridad, ya que los resultados
obtenidos son cuantales, generando respuestas de tipo todo o
nada. Sin embargo, la necesidad de obtener informacin subletal
a bajas dosis de contaminantes, que permita detectar el estrs
previo a la muerte y tomar medidas oportunas para mitigar los
riesgos, promovi nuevos enfoques metodolgicos.
Los anlisis sobre los efectos ms sutiles o subcrnicos, el
efecto de las mezclas de metales y el impacto indirecto de los
mismos sobre los individuos y las poblaciones, son los princi-
pales puntos de inters actual en la comunidad cientfca. Estos
permiten adems obtener resultados ms representativos de
la potencialidad txica de los contaminantes, aunque an es
necesario un mayor esfuerzo interdisciplinario para integrar los
resultados alcanzados.
Pese a la existencia de un gran nmero de trabajos ecotoxi-
colgicos respecto a la toxicidad de los metales, la gran mayora
se han focalizado en pocas especies de microcrustceos, dejando
reas vacantes en el conocimiento de la sensibilidad de especies
representativas de cada regin en particular. Considerando la
importancia biolgica y ecolgica de las mismas, el desarrollo
de estudios en esta lnea proveera informacin complementaria
y de gran utilidad para evaluaciones de impacto ambiental y
estudios integrales de los ecosistemas.
Finalmente, se podra concluir que ciertas particularidades
comunes de los cladceros y coppodos tales como el tamao,
la morfologa y el rol ecolgico, los tornan buenos indicadores
de toxicidad y permiten evaluar efcientemente los efectos y
mecanismos de accin de los metales. No obstante, ciertas
diferencias en el desarrollo, la reproduccin y las estrategias de
perpetuacin conferen ventajas a un grupo sobre otro segn el
anlisis requerido, que necesariamente deben ser consideradas
en cada diseo metodolgico particular.
394
Agradecimientos
A la Universidad Nacional del Litoral, por el fnanciamiento
del trabajo (Proyecto CAI+D 2009).
Literatura citada
Aladin N.V. & W.T. Potts. 1995. Osmoregulatory capacity of
the cladocera. Journal of Comparative Physiology B:
Biochemical, Systemic, and Environmental Physiology
164(8): 671-683.
Allan D.J. 1976. Life history patterns in zooplankton. The American
Naturalist 110 (971): 165-180.
APHA 1989. Toxicity Test Methods for Aquatic Organisms, Standard
Methods for the Examination of Water and Wastewater,
17th ed., Washington, DC, Part 8000.
Barata C., D.J Baird & A.M.V. Soares. 2002. Demographic responses
of a tropical cladoceran to cadmium: effects of food sup-
ply and density. Ecological Applications 12(2): 552-564.
Barata C., C. Porte & D.J. Baird. 2004. Experimental designs to
assess endocrine disrupting effects in invertebrates: A
review. Ecotoxicology 13: 511-517.
Baudouin M.F. & P.S. Scoppa. 1974. Acute toxicity of various met-
als to freshwater zooplankton. Bull. Environ. Contam.
Toxicol. 12: 745-751.
Belanger S.E., J.L. Farris & D.S. Cherry. 1989. Effects of diet, water
hardness, and population source on acute and chronic cop-
per toxicity to Ceriodaphnia dubia. Arch. Environ. Contam.
Toxicol. 18(4): 601-611.
Berglind R., G. Dave & M.L. Sjobeck. 1985. The effects of lead
on aminolevulinic acid dehydratase activity, growth, he-
moglobin content, and reproduction in Daphnia magna.
Ecotoxicol. Environ. Saf. 9: 216-229.
Bossuyt B.T., K.A. De Schamphelaere & C.R. Janssen. 2004. Using
the biotic ligand model for predicting the acute sensitivity
of cladoceran dominated communities to copper in natural
surface waters. Environ. Sci. Technol. 38(19): 5030-5037.
Boyd R.S. 2010. Heavy metal pollutants and chemical ecology:
exploring new frontiers. Journal of chemical ecology 36:
46-58.
Brown R.J., S.D. Rundle, T.H. Hutchinson, T.D. Williams & M.B.
Jones. 2005. A microplate freshwater copepod bioassay for
evaluating acute and chronic effects of chemicals. Environ.
Toxicol. Chem. 24(6): 15281531
Cairns J. Jr. 1986. The Myth of the Most Sensitive Species. BioSci-
ence 36 (10): 670-672
Chen C.Y. & C. L. Folt. 2000. Bioaccumulation and diminution of
arsenic and lead in a freshwater food web. Environ. Sci.
Tec. 34 (18): 3878-3884.
Chen D., H. Ma, H. Hong, S.S. Koh, S.M. Huang, B.T. Schurter,
D.W. Aswad & M.R. Stallcup. 1999. Regulation of tran-
scription by a protein methyltransferase. Science 284:
21742177.
Cohen J.H. & R.B.Jr Forward. 2005. Fotobehaviour as an inducible
defense in the marine copepod Calanopia Americana.
Limnol Oceanogr 50 (4): 1269-1277.
Coniglio L. & R. Baudo. 1989. Life-tables of Daphnia obtusa (Kurz)
surviving exposure to toxic concentrations of chromium.
Hydrobiologia 188-189(1): 407-410.
Cowgill U.M. & D.P. Milazzo. 1991. Comparison of the effect of
metallic copper and copper nitrate (Cu(NO3)2. 3H2O) on
Ceriodaphnia dubia utilizing the three-brood test. Bull.
Environ. Contam. Toxicol. 46: 141-145.
Croteau M.N., S.N. Luoma & A.R. Stewart. 2005. Trophic trans-
fer of metals along freshwater food webs: Evidence of
cadmium biomagnifcation in nature. Limnol. Oceanogr.
50(5):1511-1519.
De Bernardi R. & R.H. Peters. 1987. Why Daphnia? In: Daphnia
(Eds R.H. Peters & R. de Bernardi), pp. 19. Memorie
Dellistituto Italiano Di Idrobiologia, Pallanza, Italy.
De Cohen W.M. & C.R. Janssen. 1997. The use of biomarkers in
Daphnia magna toxicity testing II. Digestive enzyme activ-
ity in Daphnia magna exposed to sublethal concentrations
of cadmium, chromium and mercury. Chemosphere 35(5):
1053-1067.
De Schamphelaere K.A.C., M.Canli, V. Van Lierde, I. Forrez, F.
Vanhaecke & C.R. Janssen. 2004. Reproductive toxicity
of dietary zinc to Daphnia magna. Aquatic Toxicology
70(3):233-244.
Deleebeeck N.M.E., K.A.C. De Schamphelaere, D.G. Heijerick,
B.T.A. Bossuyt & C.R. Janssen. 2008. The acute toxicity
of nickel to Daphnia magna: predictive capacity of bio-
availability models in artifcial and natural waters. Ecotox.
Env. Safe. 70(1): 67-78.
Eisler R. 2004. Arsenic Hazards to Humans, Plants, and Animals
from Gold Minino. Rev. Environ. Contam. Toxicol. 180:
133165
Enserink E.M., M.J.J. Kerkhofs, C.A.M. Baltus & J.H. Koeman.
1995. Infuence of food quantity and lead exposure on
maturation in Daphnia magna; evidence for a trade-off
mechanism. Functional Ecology 9(2): 175-185.
EPA 1984. Estimating concern levels for concentrations of chemi-
cal substances in the environment. Environmental effects
Branch, environmental Protection Agency, Washington
DC, USA.
Ferdous Z. & A.K. Muktadir. 2009. A Review: Potentiality of Zoo-
plankton as Bioindicator. American Journal of Applied
Sciences 6 (10): 1815-1819.
Ferrando M.D. & E. Andreu. 1993. Feeding behavior as an index of
copper stress in Daphnia magna and Brachionus calyci-
forus. Comparative biochemistry and physiology part C
106 (2): 327-331.
Fleminger A. 1985. Dimorphism and possible sex change in co-
pepods of the family Calanidae. Marine Biology 88(3):
273-294.
Flemming C.A. & J.T. Trevors. 1989. Copper toxicity and chemistry
in the environment: a review. Water Air and Soil Pollution
44(1-2): 143-158.
Forbes V.E. & P. Calow. 1999. Is the per capita rate of increase a
good measure of population-level effects in ecotoxicology?
Environ. Toxicol. Chem. 18(7): 15441556.
Gaete H. & K. Paredes (1996) Toxicidad de mezclas de contami-
nantes qumicos sobre el cladcero Daphnia magna. Rev.
Int. Contam. Ambient., 12(1): 23-28.
Gagneten A.M. 2002. Respuesta de una comunidad zooplanctnica
de agua dulce a la aplicacin de cromo en clausuras ex-
perimentales. Interciencia, 27 (10): 563-570.
Gagneten A.M. 2006. Effects of chronic toxicity of Cr and Cu on
Daphnia magna Straus (Crustacea, Cladocera). In: Envi-
ronmental and human health: An holistic vision (Ed.: Jorge
Herkovits). Soc. Environ. Toxicol. Chem. p. 168.
Gagneten A.M. & I. Vila. 2001. Effects of Cu+2 and pH on the ft-
ness of Ceriodaphnia dubia (Richard 1894) (Crustacea,
Cladocera) in microcosm experiments . Environmtal
Toxicology 16 (5): 428-438.
Garca-Garca G., S. Nandini & S.S.S. Sarma. 2006. Turbidity
mitigates lead toxicity to cladocerans (Cladocera). Eco-
toxicology 15(5):425-436.
Gutierrez M.F., J.C. Paggi & A.M. Gagneten. 2010. Fish infochemi-
cals alter life cycle and growth of a calanoid copepod.
Journal of Plankton Research 32 (1): 47-55.
Hall L.W. 1982. On some simple estimates of an exponent of regular
variation. J. Roy. Statist. Soc. B 44: 37-42.
395

Hall L.W.Jr, M.C. Ziegenfuss, R.D. Anderson & B.L. Lewis. 1995.
The effect of salinity on the acute toxicity of total and free
cadmium to a Chesapeake Bay copepod and fsh. Mar. Pol.
Bull. 30(6): 376-384.
Havens K.E. 1994. Structural and functional responses of a fresh-
water plankton community to acute copper stress. Envi-
ronmental Pollution 86(3): 259-266.
Heijerick D.G., K.A.C. De Schamphelaere & C.R. Janssen. 2002.
Predicting acute zinc toxicity for Daphnia magna as func-
tion of key water chemistry characteristics: development
and validation of a biotic ligand model. Environ. Toxicol.
Chem. 21(6): 13091315.
Heugens E., A. Hendriks, T. Dekker, N. van Stralen & W. Admiraal.
2001. A review of the effects of multiple stressors on
aquatic organisms and analysis of uncertainity factor for
use in risk assessment. Critical Reviews in Toxocology
31 (3): 247-284.
Hoang T.C., J.S. Gallagher & S.J. Klaine. 2007. Responses of
Daphnia magna to pulsed exposures of arsenic. Environ.
Toxicol., 22: 308-317.
Howell R. 1985. Effect of zinc on cadmium toxicity to the amphipod
Gammarus pulex. Hydrobiologia 123(3): 245-249.
Hutchinson T.H. 2002. Reproductive and development effect of
endocrine disrupters in invertebrates: in vitro and in vivo
approaches. Toxicology Letters 131: 75-81.
Jak R.G., J.L. Maas & T.M.C. Scholten. 1996. Evaluation of labo-
ratory derived toxic effect concentrations of a mixture of
metals by testing fresh water plankton communities in
enclosures. Water Research 30: 1215-1227
Janssen C.R., G. Persoone & T.W. Snell. 1994. Cyst- based toxicity
test. VIII. Short-chronic toxicity tests with the freshwater
rotifer Brachionus calyciforus. Aquatic Toxicology 28:
243-258.
Jeziorski A. & N.D. Yan. 2006. Species identity and aqueous calcium
concentrations as determinants of calcium concentrations
of freshwater crustacean zooplankton. Can. Jour. Fish.
Aquatic Sci. 63(5): 1007-1013.
Keithly J., J. Brooker, D.K. DeForest, B.K. Wu & K.V. Brix. 2004.
Acute and chronic toxicity of nickel to a cladoceran
(Ceriodaphnia dubia) and an amphipod (Hyalella azteca).
Environ. Toxicol. Chem. 23(3): 691696.
Khangarot B.S. & Das. 2009. Toxicity of mercury on in vitro devel-
opment of parthenogenetic eggs of a freshwater cladoceran
Daphnia carinata. J. Hazard. Mat. 161(1): 68-73.
Khangarot B.S. & P.K. Ray. 1987. Correlation between heavy metal
acute toxicity values in Daphnia magna and fsh. Bul.
Environ. Contam. Toxicol. 38(4): 722-726.
Koivisto S. 1995. Is Daphnia magna an ecologically representative
zooplankton species in toxicity tests? Environmental Pol-
lution 90 (2):263-267.
Koivisto S. & M. Ketola. 1995. Effects of copper on life-history
traits of Daphnia pulex and Bosmina longirostris. Aquatic
Toxicology 32(2-3):255-269.
Kovatch C., G. Chandler & B. Cull. 1999. Utility of a full life-cycle
copepod bioassay approach for assessment of sediment-
associated contaminant mixtures. Marine Pollution Bul-
letin 38 (8): 692-701.
Martnez-Jernimo F., L. Martnez-Jernimo & F. Espinosa-Chvez.
2006. Effect of culture conditions and mothers age on the
sensitivity of Daphnia magna Straus 1820 (Cladocera)
neonates to hexavalent chromium. Ecotoxicology 15(3):
259-266.
Munger C., L. Hare, A. Craig & P.M. Charest. 1998. Infuence of
exposure time on the distribution of cadmium within
the cladoceran Ceriodaphnia dubia. Aquatic Toxicology
44(3): 195-200.
Muyssen B.T.A., B. Bossuyt & C.R. Janssen. 2005. Inter- and intra-
species variation in acute zinc tolerance of feld-collected
cladoceran populations. Chemosphere 61(8):1159-1167.
Nowood W.P., U. Borgmann, D.G. Dixon & A. Wallace. 2003.
Effects of metal mixtures on aquatic biota: a review of
observations and methods. Humann and Ecol. Risk As-
sess. 9(4): 795-811.
OECD. 1981. Test Guideline 452. Chronic Toxicity Studies. In:
OECD Guideline for the Testing of Chemicals. Organi-
zation for Economic Cooperation & Development, Paris
Offem B.O. & E.O. Ayotunde. 2008. Toxicity of lead to freshwater
invertebrates (Water feas; Daphnia magna and Cyclop sp)
in fsh ponds in a tropical foodplain. Water, Air and Soil
Pollution, 192 (1-4):39-46.
Ortaz M., E. Gonzlez & C. Peaherrera. 2006. Depredacin de
peces sobre el zooplancton en tres embalses neotropicales
con distintos estados trfcos. Interciencia 31(7):517-524.
Otha T., S. Tokishita, Y. Shiga, T. Hanazato & H. Yamagata. 1998. An
assay system for detecting environmental toxicants with
cultured cladoceran eggs in vitro: malformations induced
by ethylenethiourea. Environ. Res. Sec A 77: 43-48.
Paggi J.C. 1995. Crustacea Cladocera, p. 909-951. In: E.C.
Lopretto & G. Tell (Eds). Ecosistema de aguas continen-
tales: metodologas para su estudio. La Plata, Ediciones
Sur, Tomo III.
Pane E.F., C. Smith, J.C. McGeer & C.M. Wood. 2003. Mecha-
nisms of acute and chronic waterborne nickel toxicity in
the freshwater cladoceran, Daphnia magna. Environ. Sci.
Technol. 37: 43824389.
Reichwaldt E.S. & H. Stibor. 2005. The impact of diel vertical migra-
tion of Daphnia on phytoplankton dynamics. Oecologia
146 (1): 50-56.
Snchez-Ortz R., S. Sarma & S. Nandini. 2010. Comparative
population growth of Ceriodaphnia dubia and Daphnia
pulex (Cladocera) exposed to zinc toxicity. Journal of
Environmental Science and Health, Part A, 45 (1): 37 41.
Sharma M.S. & C.S. Selvaraj. 1994. Zinc, lead and cadmium toxicity
to selected freshwater zooplankters. Pollution Research
13(2): 191-201.
Sharp A.A. & D.E. Stearns. 1997. Sublethal effects of cupric ion
activity on the grazing behaviour of three calanoid cope-
pods. Mar. Pol. Bul. 34(12): 1041-1048.
Shaw J.R., T.D. Dempsey, C.Y. Chen, J.W. Hamilton & C.L. Folt.
2006. Comparative toxicity of cadmium, zinc, and mix-
tures of cadmium and zinc to daphnids. Environ. Toxicol.
Chem. 25(1): 182-189.
Sibly & P. Calow. 1989. A life-cycle theory or responses to stress.
Biological Journal of the Linnean Society 7: 101-116.
Sillett K.B. & R.S. Stemberger. 1998. Masculinized females in a
population of Leptodiaptomus minutus (Copepoda, Cala-
noida). Can. J. Zool. 76(3): 596600.
Sinev A.Y. 2000. Postembryonal development of male and abnor-
mal sexual individuals of Alona affnis (Leydig, 1860)
(Anomopoda, Chydoridade). Hydrobiologia 437: 197-202.
Soto E., G. Oyarce, B. Inzunza & E. Bay-Schmith. 2003. Acute
toxicity of organic and inorganic compounds on the fresh-
water cyclopoid copepod Eucyclops neumani neumani
(Pesta, 1927). Bull. Environ. Contamin Toxicol. 70 (5):
1017-1021.
Spehar R.L. & J.T. Fiandt. 1986. Acute and chronic effects on water
quality criteria-based metal mixtures on three aquatic spe-
cies. Environ. Toxico. Chem. 5: 917-931.
Stearns D.E. & A.A. Sharp. 1994. Sublethal effects of cupric ion
activity on the phototaxis of three calanoid copepods.
Hidrobiologa 292/293: 505-511.
396
Suedel B.C., J.H.Jr Rodgers & E. Deaver. 1997. Experimental fac-
tors that may affect toxicity of cadmium to freshwater
organisms. Arch. Environ. Cont. Toxicol. 33(2): 188-193
Sullivan B.K., E. Buskey, D.C. Miller & P.J. Ritacco. 1983. Effects
of copper and cadmium on growth, swimming and preda-
tor avoidance in Eurytemora affnis (Copepoda). Marine
Biology 77: 299-306.
Tsui M.T.K. & W.X. Wang. 2004. Temperature infuences on the
accumulation and elimination of mercury in a freshwater
cladoceran, Daphnia magna. Aquatic Toxicology 70(3):
245-256.
Untersteiner H., J. Kahapka & H. Kaiser. 2003. Behavioural response
of the cladoceran Daphnia magna Straus to sublethal Cop-
per stressvalidation by image analysis Aquatic Toxicol-
ogy 65(4): 435-442.
Vasela S. & J. Vijverberg. 2007. Effect of body size on toxicity of
zinc in neonates of four differently sized Daphnia species.
Aquatic Ecology 41: 67-73.
West C.W. & G.T.Ankley. 1998. A laboratory assay to assess
avoidance of contaminated sediments by the freswater
oligochaete Lumbriculus variegate. Arch. Environm. Con.
Toxicol. 35: 20-24.
Winner R.W. & M.P. Farrell. 1976. Acute and chronic toxicity of
copper to four species of Daphnia. J. Fish. Res. Board
Can. 33: 1685-1691.
Wong C.K. & A.P. Pak. 2004. Acute and subchronic toxicity of
the heavy metals copper, chromium, nickel and zinc,
individually and in mixture to the freshwater coppepod
Mesocyclops pehpeiensis. Bull. Environ. Contam. Toxicol.
73: 190-196.
Wong C.K.& P.K. Wong. 1990. Life table evaluation of the effects
of cadmium exposure on the freshwater cladoceran, Moina
macrocopa. Bull. Env. Con. Toxicol. 44: 135-141.
Wright D.A. & P.M. Welbourn. 1994. Cadmium in the aquatic
environment: a review of ecological, physiological, and
toxicological effects on biota. Environ. Rev. 2(2): 187-214.
Zyadah, M.A.& T.E. Abdel- baky. 2000. Toxicity and Bioaccumula-
tion of Copper, Zinc, and Cadmium in Some Aquatic Or-
ganisms. Bull. Environm. Contam. Toxicol. 64: 740-747.
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11. La Revista cuenta con las siguientes secciones:
a. TRABAJOS ORIGINALES. Son artculos primarios, inditos que exponen los resultados de trabajos de investigacin y constituyen
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artculo debe tener un texto promedio de 20 pginas, las ilustraciones deben ser slo las necesarias para una mejor exposicin de los
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b. NOTAS CIENTFICAS. Son artculos primarios, reportes de resultados cuya informacin es de inters para la comunidad cientfca.
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c. ARTCULOS DE REVISIN. Son artculos primarios, en esta seccin se incluyen trabajos que constituyen una exhaustiva revisin
del tema de investigacin del autor, se incluyen aqu tesis, revisiones taxonmicas y recapitulaciones. Deben contar las siguientes
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d. COMENTARIOS. Son artculos donde se discute y exponen temas o conceptos de inters para la comunidad cientfca. Se incluyen
aqu ensayos de opinin y monografas. Deben contar con las siguientes partes: Ttulo, autores, cuerpo del comentario, y Literatura
Citada. Todo el artculo debe tener un texto promedio de 10 pginas.
e. COMENTARIOS DE LIBROS. Son artculos que comentan recientes publicaciones de inters para la comunidad cientfca.
Puede solicitarse al Comit Editor la elaboracin de un comentario enviando dos copias del libro a la direccin postal de la Revista
Peruana de Biologa.
12. Cuando el artculo exponga sobre experimentos con humanos y animales, los procedimientos deben de ceirse a la Declaracin
de Helsinki de 1975 y a las leyes peruanas vigentes (Ley 27265). Deben ser presentadas las declaraciones pertinentes y mencionadas
en el texto.
13. Cuando el artculo exponga sobre nuevas especies, nuevos registros, ampliaciones biogeogrfcas o inventarios taxonmicos debe
indicarse el depsito de los ejemplares en un centro de referencia taxonmico.
14. Cuando los especmenes hallan sido colectados en reas protegidas, debe de indicarse los respectivos permisos.
15. Los nombres cientfcos del gnero y especie irn en cursivas. La primera vez que se cita un organismo deber hacerse con su
nombre cientfco completo (gnero, especie y autor); posteriormente podr citarse solamente la inicial del nombre genrico y el
nombre especfco completo.
16. Deben usarse los smbolos de las unidades del Sistema Internacional de Medidas. Si fuera necesario agregar medidas en otros
sistemas, las abreviaturas correspondientes deben ser defnidas en el texto. Decimales con coma, no punto (ejemplo correcto: 0,5;
incorrecto: 0.5).
17. LAS CITAS EN EL TEXTO deben incluir el apellido del autor y ao (ejemplo: (Carrillo 1988) o ... de acuerdo a Snchez (1976)
o (Chvez y Castro 1998, Rios 1999, Piedra 2001)). Si hay varios trabajos de un autor en un mismo ao, se citar con una letra
en secuencia adosada al ao (ejemplo: Castro 1952a). Cuando hay ms de dos autores se citar al primer autor y se colocar et al.
(Ejemplo: (Smith et al. 1981) o segn Smith et al. (1981)).
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18. La LITERATURA CITADA incluir todas las referencias citadas en el texto dispuestas solamente en orden alfabtico y sin numeracin.
La cita se inicia con el apellido del primer autor a continuacin, sin coma, las iniciales del nombre con puntos y sin espacio. El
segundo y tercer autor deben de tener las iniciales de los nombre y a continuacin el apellido. El ltimo autor se diferenciara por
que le antecede el smbolo &. Si hubiesen ms de tres autores pueden ser indicados con la abreviatura et al. En la literatura citada
solamente se usa letra tipo normal, no itlica, no versalita. Ejemplos:
a. Montgomery G.G., R.C. Best & M. Yamakoshi. 1981. A radio-tracking study of the American manatee Trichechus inunguis
(Mammalia: Sirenia). Biotropica 13: 81 -85.
b. Buhrnheim C.M. & L.R. Malabarba. 2006. Redescription of the type species of Odontostilbe Cope, 1870 (Teleostei: Characidae:
Cheirodontinae), and description of three new species from the Amazon basin. Neotrop. ichthyol. 4 (2): 167-196.
c. Nogueira R.M.R., M.P. Miagostovich, H. G. Schatzmayr, et al. 1995. Dengue type 2 outbreak in the south of the State of Bahia,
Brazil: laboratorial and epidemiological studies. Rev. Inst. Med. trop. S. Paulo 37 (6): 507-510.
d. McLachlan A. & A.C Brown. 2006. Te Ecology of Sandy Shores. Elsevier Science & Technology Books. 373pp.
e. Crawford D.J. 1983. Phylogenetic and systematic inferences from electrophoretic studies. In: S.D. Tanksley and T.J. Orton, eds.
Isozymes in plant genetics and breeding, Part A. Elsevier, Amsterdam. Pp. 257-287.
f. Pianka E.R. 1978. Evolutionary ecology. 2nd edn. New York: Harper & Row.
g. Carroll S.B. 2005. Evolution at Two Levels: On Genes and Form. PLoS Biol 3(7): e245. <http://biology. plosjournals.org/
archive/1545-7885/3/7/pdf /10.1371_journal.pbio.0030245-S.pdf >. Acceso 31/07/2005.
h. Food and Drug Administrations (FDA). 2001. Fish and Fishery Products Hazards and Controls Guidance. Tird Edition June
2001. <http://www.cfsan.fda.gov/~comm/haccp4.html> (acceso 24/12/07).
i. CONAM. 2005. (en lnea). Informe nacional del estado del ambiente 2001. <http://www.conam.gob.pe /sinia/INEA2001.
shtml>. Acceso 31/07/2005.
j. IMARPE. 2002. (en lnea). Segundo informe del BIC Jos Olaya Balandra. Paita Salaverry. 24 febrero- 05 Marzo 2002. <http://
www.imarpe.gob.pe /imarpe/informeolaya02-032002.php>. Acceso 01/07/2005.
k. Solari S.A. 2002. Sistemtica de Tylamys (mammalia: didelphimorphia: marmosidae). Un estudio de las poblaciones asignadas
a Tylamys elegans en Per. Tesis, Magster en Zoologa, mencin Sistemtica y Evolucin. Facultad de Ciencias Biolgicas
Universidad Nacional Mayor de San Marcos. <http://www.cybertesis.edu.pe/sisbib/2002/solari_ts /html/indexframes.html>.
Acceso 31/07/2005
19. Las citas de artculos en prensa deben incluir el volumen, el ao y el nombre de la revista donde saldrn publicados; de lo
contrario debern ser omitidos.
20. Deben evitarse las citas a resmenes de eventos acadmicos (congresos y otros) y las comunicaciones personales.
21. Las Figuras (mapas, esquemas, diagramas, dibujos, grfcos, fotos, etc.) sern numeradas correlativamente con nmeros arbigos;
de igual manera las Tablas. Las leyendas de las fguras deben presentarse en hoja separada del texto y deben ser sufcientemente
explicativas. Cada tabla debe llevar un ttulo descriptivo en la parte superior.
22. Cuando el trabajo es enviado por correo postal, las fguras sern presentadas en papel Canson y con tinta china, en un tamao
A4, montados sobre cartulina blanca. Los dibujos y fotos de estructuras y organismos deben llevar una escala grfca para facilitar
la determinacin del aumento. Los mapas deben llevar las respectivas coordenadas. Las fotografas deben tener 15x10 cm de tamao
como mnimo, en papel liso, con amplio espectro de tonos y buen contraste, montados sobre una cartulina blanca A4. Costos por
fotografas a color debern ser asumidos por el autor.
23. Si las fguras fuesen escaneadas, deben guardarse en un archivo TIFF, tamao natural, 600 dpi. Las grfcas de origen electrnico
deben de enviarse en formato nativo editable (achivo.xls, archivo.wmf, archivo.svg, archivo.eps). Los mapas en formatos SHP.
Fotos de cmaras digitales en formato JPGE mayor a 3Mpixel. Otros archivos independientes en formato TIFF, BMP, Ai, PSD.
Costos por ilustraciones a color sern asumidos por el autor.
24. Los archivos deben presentarse por separado, esto es, un archivo con el texto y leyendas en formato MS-Word. Otro archivo
para las tablas en MS-Excel o como tablas en MS-Word. Otros archivos en formatos nativos, no como imgenes insertadas
en otros archivos (por ejemplo no enviar imgenes pegadas en una hoja de MS-Word o Excel).
25. Slo se aceptan fotos e imgenes digitales de alta calidad.
26. El material enviado no ser devuelto, por lo que los autores deben tomar sus precauciones.
27. Una prueba del trabajo revisado, editado y diagramado adems del costo por impresin ser enviado al autor para su aprobacin.
28. El autor principal podr solicitar cuatro ejemplares de la revista. Un nmero de separatas adicional podr ser solicitado antes
de la impresin teniendo en cuenta los costos respectivos.
Comit Editor
Email: editor.revperubiol@gmail.com
Correo postal: Leonardo Romero (Editor)
UNMSM-FCB
Apartado 11-0058
Lima 11
Per
(continacin...)
Notas cientfcas
373 Notes on the ecology of a relict population of the Lomass Lizard Microlophus tigris (Tropiduridae: Sauria) in Las Leyendas Zoological Park,
(Lima, Peru)
Notas sobre la ecologa de una poblacin relicto de la lagartija de las Lomas Microlophus tigris (Tropiduridae: Sauria)en el Parque Zoolgico
377 Notes on the ecology of Phyllodactylus reissi (Phyllodactylidae: Sauria) in Parque Nacional Cerros de Amotape (Tumbes, Peru)
Notas sobre la ecologa de Phyllodactylus reissi (Phyllodactylidae: Sauria) en el Parque Nacional Cerros de Amotape (Tumbes, Per)
381 Extensin de la distribucin del rango migratorio de la Dormilona de Frente Negra, Muscisaxicola frontalis (Aves: Tyrannidae) en el Per
Extension of the distribution of the migratory range of the Black-fronted Ground Tyrant Muscisaxicola frontalis (Aves: Tyrannidae) in Peru
Renzo Alcocer, Grace P. Servat y Wilfredo Mendoza
383 Algunos acantocfalos de la familia Oligacanthorhynchidae del Per
387 Primer registro de Crepidobothrium gerrardii (Cestoda: Proteocephalidae) en el Per
First record of Crepidobothrium gerrardii (Cestoda: Proteocephalidae) in Peru
Comentarios
389 Efecto de los metales sobre microcrustceos de agua dulce. Avances metodolgicos y potencialidad de cladceros y coppodos como organismos test
Efects of metals on freshwater microcrustaceans. Metodological advances and potentiality of cladocerans and copepods as test organisms
Mara Florencia Gutierrez y Ana Mara Gagneten
(Contina...)
Revista PeRuana de Biologa
Volumen 18 Diciembre, 2011 Nmero 3
Rev. peru. biol. ISSN 1561-0837
Contenido
Trabajos originales
271 Talictrum peruvianum (Ranunculaceae), una especie nueva de Lima, Per
Talictrum peruvianum (Ranunculaceae), a new species from Lima, Peru
Huber Trinidad, Asuncin Cano y Blanca Len
275 Vochysia awasensis (Vochysiaceae), nueva especie de los Bosques Montanos del Choc ecuatoriano
Vochysia awasensis (Vochysiaceae), new species from the Mountain Forests from the Ecuatorian Choc
279 Detailed assessment of the distribution of Astrocaryum sect. Huicungo (Arecaceae) in Peru
Evaluacin detallada de la distribucin de Astrocaryum sec. Huicungo (Arecaceae) en Per
Francis Kahn, Betty Milln, Jean-Christophe Pintaud and Miguel Machahua
283 Riqueza, uso y origen de plantas medicinales expendidas en los mercados de la ciudad del Cusco
Richness, use and origin of expended medicinal plants in the markets of the Cusco City
Isau Huamantupa, Magaly Cuba, Rosa Urrunaga, Elas Paz, Nelson Ananya, Myrthia Callalli, Nadir Pallqui y Hozmary Coasaca
293 Desarrollo reproductivo del amancay Ismene amancaes (Amaryllidaceae) en su ambiente natural
Reproductive development of amancay Ismene amancaes (Amaryllidaceae) in its natural environment
Mery L. Suni, Edisson Pascual y Enoc Jara
299 Nueva especie de Mediorhynchus (Acanthocephala, Gigantorhynchidae) en Turdus chiguanco (Turdidae) de Junn, Per
New species of Mediorhynchus (Acanthocephala, Gigantorhynchidae) in Turdus chiguanco (Turdidae) from Junn, Peru
Roco Moya, Rosa Martnez y Manuel Tantalen
303 Aspectos estructurales y cuantitativos del ovario de Fulica armillata (Aves: Rallidae)
Structural and cuantitative aspects of the ovary of the Fulica armillata (Aves: Rallidae)
311 Anlisis de las vocalizaciones del murcilago longirrostro peruano Platalina genovensium Tomas, 1928 (Chiroptera: Phyllostomidae)
Analysis of vocalizations of Long-snouted Bat Platalina genovensium Tomas, 1928 (Chiroptera: Phyllostomidae)
Juan A. Malo de Molina, Sandra Velazco, Vctor Pacheco y Juan Carlos Robledo
319 Tres nuevos registros de asteroideos (Echinodermata: Asteroidea) de Per
Tree new records of asteroids (Echinodermata: Asteroidea) from Peru
Yuri Hooker y Francisco A. Sols-Marn
325 Estudio de la actividad fermentativa de Hansenula anomala y produccin de compuestos qumicos de importancia sensorial
Study of the fermentative activity of Hansenula anomala and production of chemical compounds of sensory importance
Waldir Estela Escalante, Mojmr Rychtera, Karel Melzoch, Elena Quillama Polo

y Beatriz Hatta Sakoda
335 Inmunogenicidad del veneno de Bothrops atrox (Ophidia: Viperidae) y su evaluacin por mtodos inmunoenzimticos
Immunogenicity of Bothrops atrox (Ophidia: Viperidae) venom and its evaluation by immunoenzymatic methods
Gustavo A. Sandoval, Julio Mendoza, William Roldn, Yrma Espinoza, Hilda Solis y Armando Yarlequ
343 Propagacin in vitro de Carica papaya var. PTM-331 a partir de meristemos apicales
Reynaldo Solis L., Julio Olivera S. y Rafael S. La Rosa L.
349 Diagnstico e identifcacin rpidos por PCR de Yersinia ruckeri aislada de Oncorhynchus mykiss procedentes de Canta, Lima, Per
Rapid diagnosis and identifcation by PCR of Yersinia ruckeri isolated of Oncorhynchus mykiss from Canta, Lima, Peru
Susana Sirvas-Cornejo, Claudia Cecilia Snchez-Robinet y Csar Pea-Domnguez
355 Efecto de la adicin de materia orgnica sobre la dinmica poblacional bacteriana del suelo en cultivos de papa y maz
Efect of addition of organic matter on bacterial population dynamics of soil in potato and corn crops
David Garca Ventocilla, Gloria Mamani Gamarra, Nicols Romn Cabello, Luis Surez Salas, Ana Contreras Marn y Julio Malca Jauregui
361 Optimizacin de los medios de propagacin y enraizamiento in vitro de las variedades criollas de vid para elaborar pisco
Optimization of media for in vitro propagation and rooting of creole grapevine varieties utilized for pisco making
Eugenio Gonzlez, Diego Pignataro, Gisella Orjeda, Wilfredo L. Gonzles

y Daniel Clark
367 Colonizacin intraluminar testicular y diferenciacin de la masa celular interna en ratones (Mus musculus)
Intraluminar testicular colonization and diferentiation of the inner cell mass in mice (Mus Musculus)
Lyonal Acosta, Vctor Nez, Jose Pino y Betty Shiga

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