UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN AGUSTN FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS Y AGROPECUARIAS ESCUELA PROFESIONAL Y ACADEMICA DE BIOLOGIA

CURSO: GENTICA GENERAL MECANISMOS DE LA HERENCIA DE CARACTERES CUALITATIVOS Carcter del color de ojos ligados al sexo en Drosophila melanogaster ALUMNOS: GONZALES MEJIA JONATAN DANIEL URBINA LAIME FREDDY EVAN Arequipa Per 2011

INTRODUCCIN
La transmisin de informacin biolgica de progenitores a progenie, ha sido un factor esencial en el desarrollo de los organismos, esta transmisin ha requerido de la evolucin de mecanismos gentico, que garanticen la fidelidad de este proceso. Debido a su fundamental importancia estos mecanismos, fueron establecidos desde muy temprano en la historia de la vida, de manera que en la actualidad son compartidos por muchos grupos taxonmicos. Para comprender los principios genticos, es posible entonces estudiar organismos muy diferentes y llegar a conclusiones generales. La seleccin de un organismo especfico, para realizar estudios genticos, depende de las ventajas que est presente para la realizacin de estos estudios. La mosca de la fruta Drosophyla melanogaster, nos ofrece grandes ventajas para la realizacin de diversos estudios en gentica. Ha sido utilizada ampliamente como material experimental desde que fue utilizada por W.E. Castle, en 1906, y sent las bases para las cruzas llevadas a cabo por T.H. Morgan y sus colaboradores en 1909. Otra ventaja que ofrece este organismo son un tiempo generacional relativamente corot, un tamao suficientemente pequeo para facilitar su manejo pero suficientemente grande para la observacin de un gran nmero de caracteres mutantes, al alto nide de proliferidad lo cual resulta en fcil produccin de grandes nmeros de progenie para la aplicacin de un alto nivel de rigor estadstico en el anlisis de los experimentos.
OBJETIVOS: Reconocer las caractersticas diferenciables de Drosophila. Estudio del ciclo de vida de Droshophila Enumerar algunos de los caracteres genticos de Drosophila Analizar la forma de herencia de estos caracteres mediante el procedimiento de cruzas, mediante prueba de Ji cuadrado.

I. HIPTESIS El carcter color de ojos esta ligado al sexo. II. MARCO TEORICO 2.1. Ciclo de vida El ciclo de vida de Drosophyla melanogaster incluye cuatro fases: Huevo, larva, pupa y adulto. La duracin del ciclo vara con la temperatura de cultivo. A 25C el ciclo dura alrededor de 10 das, pero a 20C, puede durar alrededor de 15 das. Los cultivos de Drosophyla no deben exponerse a altas temperaturas 30C. Lo cual resulta en la esterilizacin o muerte de las moscas, ni a bajas temperaturas (10c) lo cual resulta en ciclos de vida prolongada (tal vez de 57 das), y reducir la viabilidad. La temperatura ptima de cultivo es de 25C. 2.1 Huevo (0.5 mm.) Las hembras adultas son capaces de poner huevos dos das despus de emerger del estado de pupa, la puesta aumenta por da durante una semana hasta 50 o 75 huevecillos por da. El huevo es ovoide, con dos pequeas proyecciones que emergen de un extremo, stas son aplanadas y la sirven al huevecillo para que no se hundan en el medio de cultivo. Los huevos se pueden observar a simple vista sobre la superficie del alimento. El desarrollo embrionario del huevo tarda aproximadamente 1 da a 25 C. La larva emerge del huevo. 2.2 Larva (4-5 mm) Es blanca, segmentada y vermiforme. Tiene partes bucales de coloracin negra (ganchos mandibulares) en una regin ceflica estrecha. No tiene ojos. La fase larvaria en el ciclo de Drosophila es una de rpido comer y crecer. Consiste de tres subdivisiones llamadas estadios. El primero y segundo estadio

terminan en mudas cada muda implica una eliminacin completa de la piel y partes orales de la larva y es el mecanismo por medio del cual esta crece. El tercer estadio termina en la pupacin. Inmediatamente antes de la pupacin la larva deja de comer, se arrastra hacia una superficie relativamente seca, y se revierte sus espirculos anteriores. La fase larvaria dura alrededor de 4 das a 25 C. es ese momento el tercer estadio y mide aproximadamente 4.5 mm de largo. 2.3 Pupa (3mm) La pupa es considerada la fase reorganizativa del ciclo de las mosca, durante el cual la mayora de las estructuras larvarias son destruidas y las estructuras adultas se desarrollan a partir de tejidos embrionarios llamados aniagen (o tambin discos imaginables). Los cambios anteriores resultan en el desarrollo de un individuo con la forma corporal y las estructuras del adulto (imago). La fase de pupa tarda alrededor de 4 das a 25 centgrados, el adulto emerge del pupario. 2.4 Adulto (2 mm) El adulto es considerado la fase reproductiva del ciclo. La mosca emerge o eclosiona del pupario forzando su salida por el extremo anterior del pupario. En un inicio, la mosca adulta es de forma elongada con las alas no expandidas. Es una hora, las alas se expanden y el cuerpo gradualmente adquiere una forma de adulto ms definitiva. En un inicio los adultos son de un color relativamente claro, dentro de las primeras pocas horas se obscurecen y adquieren el color caracterstico. Los adultos de D. melanogaster pueden aparearse 6 horas despus de haber emergido del pupario. La hembra empieza a depositar huevos aproximadamente a los 2 das de haber emergido, puede depositar hasta 50 a 75 huevos por das durante los primeros das. Despus la produccin de huevos disminuye. El promedio de vida de las moscas adultas es de 37 das a 25 C. III. MATERIAL Y MTODOS 3.1 Exmen de las moscas: En el laboratorio encontrar frascos con moscas normales (tipo silvestre). Coja una mosca (macho y hembra) y colquela en un estereoscopio e identifique que el cuero de la mosca se divide en cabeza, trax y abdomen. Utilizando las figuras adjuntas, identifique las siguientes caractersticas de la morfologa de la mosca. CABEZA: La cabeza se compone de seis segmentos fusionados. En ella encontrara: 1. Antena, cada una consistente de tres segmentos. 2. Aristas, cada una ramificada con origen cerca del segmento distal de cada antena. 3. Probaseis, lengua. 4. O/os compuestos, formados de un gran nmero de facetas independientes (Omatidios). 5. Ocelos, ojos simples, en nmero de tres y localizados entre los ojos compuestos en la superficie dorsal de la cabeza. 6. Setas, vibrisas, orbitales, ocelares, verticales, posterverticales. TRAX: El trax est compuesto de tres segmentos fusionados: 1. Protrax, consistente par de hmeros y el primer par de patas (cada pata formada de: coxa, trocnter, fmur, tibia y cinco articulaciones tarsicas, en el caso de los machos el peinecillo sexual, en la articulacin bsica prxima. 2. Mesotmx, consistente de mesonoto y escutelo de localizacin dorsal: mesopleura, petropleura y estemopleura de localizacin lateral las alas (note las posiciones generales de las venas longitudinales y transversales), y el segundo par de patas. 3. Meta trax, consitente de metanoto, hipleura, los alteres o balancines (alas traseras modificadas, que funcionan como balances), y el tercer par de patas. 4. Espirculos orxicos, en nmero de dos 5. Setas: dorsocenrales, notopleurales, presuturales, supraalares, postalares y escutelares. ABDOMEN: El abdomen consiste de siete u ocho segmentos visibles en la hembra y cinco o seis en el macho. En l encontrara: 1. Tergitos, escleritos dorsales (placas integumentales) uno por segmento. 2. Estemitos, escleritos abdominales, uno por segmento.

3. Espirculos abdominales 4. Regin genital 3.2 IDENTIFICACIN DEL SEXO DE LA MOSCA ADULTA: Las mocas machos y hembras pueden diferenciarse por un nmero de diferentes criterios, algunos de los cuales ya han sido mencionados. La identificacin del sexo de la mosca adulta puede realizarse de la manera siguiente: Peinecillo sexual. El peinecillo sexual se encuentra solamente en las moscas macho y consiste de una fila de aproximadamente diez setas rectas, negras en la articulacin trsica proximal (La ms arriba) de cada una del primer par de patas. Esta estructura tambin puede identificarse en la fase de pupa. Abdomen. La hembra posee siete segmentos visibles, con elongacin posterior, y bandas separadas obscuras sobre la superficie dorsal hasta el mismo extremo. El macho tiene cinco segmentos visibles y tiene un extremo posterior redondeado, las bandas obscuras de los ltimos segmentos se encuentran fusionadas. Regin genital. La hembra posee placas anales y placas oviposictoras de coloracin clara. El macho posee placas anales y arco genital y pene con pigmentacin obscura. Despus de examinar las moscas de tipo silvestre (normales) y ahber encontrado las estructuras mencionadas anteriormente, haga lo mismo con las cepas mulantes que le sern proporcionadas. Es preferible examinar a los individuos mulantes y silvestres simultneamente con fines comparativos.

3.3 CULTIVO DE DROSOPHILA MEDIO DE CULTIVO Para la crianza experimental de la Drosophila melanogaster, se debe disponer de un medio alimenticio que sea lo suficientemente denso y firme. El medio debe contener, suficiente azcar para alimentar a las moscas y favorecer el crecimiento de las levaduras pero cuidando de que no se honguee el medio. En cada frasco de cultivo se debe poner aproximadamente 50 cc del medio de cultivo (frascos de 250 cc). Medio de cultivo para la crianza de Drosophila melanogaster

Nota: Cantidad de medio para dos frascos de 250 cc. Para mayor nmero de frascos aumentar proporcionalmente las cantidades. Poner en frascos madres (nuevos) una cantidad adecuada (por lo menos 8) de moscas Drosophila a partir de los frascos mantenidos en el laboratorio, la hembra adulta de Drosophila comienza a depositar huevos despus del segundo da de emerger la pupa. Los huevos son blancos y ovoides de 0.5 mm de longitud, portando un par de filamentos en unos de los extremos, lo que evita

hundirse dentro del alimento blanco, sobre el cual siempre son puestos los huevos. La larva segmentada y blanca emerge un da o dos ms tarde y comienza a horadar el medio. Este estado larval, es de alimentacin y de crecimiento rpido. Ya que la piel del insecto (cutcula) no puede crecer y extenderse, la joven larva debe mudar su piel periodicamente. Se distingue tres estados larvarios, llamados INSTARS, disntinguidos uno de otros por mudas. El tercer instar terminan en pupaci; justo antes de la piupacin, la larva deja de alimentarse, luego se arrastra fuera del medio a un lugar seco donde cesa de moverse. La mosca adulta, es al comienzo reltivamente clara en color, con las extendidad; despus de pocas horas, se obscurece y asume la forma definida de un adulto tpico
3.4 ESTUDIO DE ALGUNOS CARACTERES GENTICOS MEDIANTE CRUZAS Para realizar las cruzas debemos asegurarnos que las hembras con quien se inicie las cruzas son vrgenes, para ello debemos seguir los siguientes pasos. Aislamiento de vrgenes Ya que las hembras de Drosophila pueden almacenar y utilizar esperma de una inseminacin para una gran parte de su vida reproductiva, slo deber usarse vrgenes para hacer los cruces. Las hembras de esta especie, pueden aparearse seis horas despus que han emergida de la pupacin. De este modo, si todas las moscas adultas son extradas de la botella de cultivo y se deja la botella por seis horas, todas las hembras extradas la segunda vez debern ser vrgenes. Pueden utilizarse machos de cualquier edad en los cruces.

Antes de que observe las mutantes de Drosophila, debe familiarizarse con el tipo comn o salvaje de Drosophila. Para realizar las cruzas ha de tenerse los siguientes aspectos en cuentas: 1. Realizar las cruzas entre muchos pares de progenitores provenientes de lneas puras, con caractersticas contrastantes. 2. Gran descendencia en la cruza 3. Seleccin de los caracteres.
IV RESULTADOS 4.1. Dibuje los caracteres descritos en las moscas observadas: los caracteres observados en prcticas son, el color de ojos Blanco y Rojo.

Figura N1: Ojos blancos de Drosophila melanogaster

Figura N2: Ojos rojos de Drosophila melanogaster

4.2. Esquematice Drosophila melanogaster adulta, macho y hembra para resaltar las diferencias sexuales.

Abdomen Macho

Abdomen hembra

Macho

Hembra

4.3. Esquematice el ciclo de Drosophila melanogaster, use consultas bibliogrficas y en hojas aparte

Tabla Caracteres genticos para Drosophila Cromosomas totales Autosomas Cromosomas sexuales Genoma Genes 4 pares 3 pares 1 par x/y 132 millones de bases 13 767 aproximadamente

4.4. Anote los resultados de las cruzas obtenidas CRUCES PARA OBTENER LA F1: a) Frasco del cruce N 1

a. Parentales: Hembra DP (alas duppy, ojos rojos) x Macho W (alas normales, ojos blancos). b. F1: 13 machos de ojos rojos y alas normales. 18 hembras de ojos rojos y alas normales.

b) Frascos del cruce N 2 a. Parentales: Hembras ojos rojos alas normales x machos ojos rojos alas normales. (F1xF1) b. F2: TOTAL 243

MACHO BLANCO 3 DP MACHO ROJO 2DP HEMBRA BLANCO 1DP HEMBRA ROJO 7 DP

53 NORMAL 54 NORMAL 0 NORMAL 123 NORMAL

5.- Tabulacin del tiempo cuando se observ por primera vez cada uno de los estadios de Drosophila. CUADRO N 1: Ciclo Biolgico de Drosophila melanogaster de la F1 Estadio Huevo Larva Pupa TOTAL Tiempo o duracin 24/07/11 25/07/11 (1dias) 25/07/11 - 31/07/11 (6dias) 31/08/11 - 07/07/11 (8dias) 15 das

Utilizando la simbologa adecuada represente la informacin sobre los cruzamientos:

CRUCE PARA LA F1:

R r r

En hembras.En machos.-

X X : Ojos rojos R X Y: Ojos rojos

X X : Ojos blancos r X Y: Ojos blancos

Frasco N 1 CRUCE PARA F1 P1: hembra de ojo blanco x macho de ojo rojo

Macho de ojos blancos

r X

Hembra de ojos rojos

R X R r X X R X Y R X R r X X R X Y

Y Resultado: 50% machos ojos rojos 50% Hembras ojos rojos

Frasco N 2: CRUCE PARA LA F2

P1: hembra ojos rojos x macho ojos rojos Macho de Hembra de ojos rojos R r ojos rojos X X
R X

R R X X R X Y

R r X X r X Y

Resultado: 50% machos donde 25% ojos rojos, 25% ojos blancos 50% hembras ojos rojos Evaluacin: F1 esperados 50% machos ojos rojos 50% Hembras ojos rojos 25% machos ojos rojos 25% machos ojos blancos 50% hembras ojos rojos

F2 esperados

Cruzamiento a prueba para alas: Para expresin DP = aa homocigoto Cruza esperada para F1: Macho alas Hembra alas AA x aa 100% Aa normales DP

Todas hembras alas normales Todos machos alas normales

Cruza esperada para F2:

Macho alas Hembra alas normales normales Aa x Aa 1/4 AA 1/2 Aa 1/4 aa 75% moscas alas normales 25% moscas alas DP

8.- Interprete los resultados de su experimento. Se cumpli con la hiptesis planteada por Usted al inicio del experimento? Qu comentarios u observaciones le merece la experiencia propuesta? CRUZA N 1a Datos de laboratorio:

Organismo: Drosophilla melanogaster Carcter: Color de Ojos = todos rojos

ALAS OBSERVADOS ESPERADOS

CRUZA N 1b Datos de laboratorio:

MACHOS 13 15.5

HEMBRAS 18 25.5

TOTAL 31 31

Organismo: Drosophilla melanogaster Carcter: Alas Dp = todos alas normales

ALAS OBSERVADOS ESPERADOS

MACHOS 13 15.5

HEMBRAS 18 25.5

TOTAL 31 31

PARA F2 CRUZA N 2a Datos de laboratorio:

Organismo: Drosophilla melanogaster Carcter: Color de Ojos = F2

MACHOS OJO ROJO OJO BLANCO OBSERVADOS 54 53 ESPERADOS 57.5 57.5

HEMBRAS OJO ROJO OJO BLANCO 123 0 115 0

TOTAL

230 230

x = (o e) = 1.12
2

gl=2

=99%

xt=0.21

X2 teorico > X2 tabla Altamente sigificativo

Por lo tanto, se concluye que para los caracteres genticos para ojos en Drosophilla melanogaster estn ligados al sexo.
CRUZA N 2b Datos de laboratorio:

Organismo: Drosophilla melanogaster Carcter: Alas DP = F2

MACHOS NORMALES DP OBSERVADOS 107 5 ESPERADOS 91.125 16.625

ALAS

HEMBRAS NORMALES DP 123 8 91.125 16.625

TOTAL 243 243

La proporcin es igual entre machos y hembras, por lo tanto: ALAS observados esperados x = (o e) = 24.84
2 2

Machos y hembras normales DP 230 13 182.25 33.25 =99%

total 243 243 xt=6.64

gl=1

X2 teorico > X2 tabla significativo

Por lo tanto se concluye que los caracteres para alas DP son ligados al sexo, y no caracteres somticos en Drosophilla melanogaster. Este resultado no es esperado, deducindose que existen errores de muestreo.
OBSERVACION: El ciclo biolgico de Drosophila melanogaster es adecuada a temperaturas de 25C llegndose a criar en estufa, de igual manera las condiciones de esterilidad son un factor muy importante que influye en el desarrollo de las pupas. Es importante tener cuidado en el manejo de los frascos debido a que no debe combinarse los padres con la F1 en un mismo frasco por que al momento de contar genera datos no congruentes. Por ultimo en el presente trabajo no se pudo realizar la cruza reciproca debido a la disponibilidad de tiempo y ello es una factor limitante en poder presumir totalmente si el carcter se encuentra ligado al sexo.

PATRON DE OJOS

F1 y F2
W, e

R R X X

r r X X

R r X X

R X Y

R r X X

R X Y

F1

F2

Leyenda
Mosca hembra (ojos rojos) Mosca macho (ojos blancos) Mosca henbra de ojos blancos Mosca macho de ojos rojos

. CONCLUSIONES

Se logro reconocer las caractersticas diferenciables de la Drosophila melanogaster. Se sigui paso a paso todos los estadios melanogaster. del ciclo de vida de Droshophila

Se caracteriz el carcter de ojos de Drosophila melanogaster el cual esta ligada al sexo. Se logro analizar y predecir a los descendientes de todas las cruces realizadas. Mediante la prueba de ji cuadrado.

ANEXOS

Parentales Macho blanco normal x Hembra rojo duppy

f1 wXdp 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 Total

macho rojo blanco X X X

hembra rojo blanco x

Alas Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal 31

X X X x X X x X x X X x X X X X X X X X X X X X X X X 13 18

Parentales: Hembras ojos rojos alas normales x machos ojos rojos alas normales. (F1xF1)

F2 w x dp 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39

macho rojo blanco X X

Hembra rojo blanco

Alas Dp Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Dp Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Dp Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal

X X X X X X X X X X X X X X X X X X X x X X X x x X X X X X X x X X X X X

40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84

X X X X X X X X X x X x X x x X X x X X X x X X X X X X X X X x X X X X x X x X X X x X X

Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal DP Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Dp Normal Normal Normal Normal Normal

85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129

X X x X X x X X x X X x X X X X x X X X X x X X X x X x X X x X X X X X X X X X X X x X X

Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Dp Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Dp Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Dp Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal

130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174

X X x X X X X X X X X X X X X x X X x X X X X X x X x X X X X X X X X X X X X X x X X X x

Normal Normal Dp Normal Normal Normal Normal Normal Normal Dp Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Dp Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal

175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219

X X X X X X X X X X X x X X X x x X x x X x X x X X X X X x X x X X X X X X X X X X X X X

Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Dp Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal

220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 Total F2:

X X X X X X X X X x X x X X X X X X X X x X X X 56 56 130 1

Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal Dp Normal 12 231 DP NORMAL

MACHO BLANCO 3 DP MACHO ROJO 2DP HEMBRA BLANCO 1DP HEMBRA ROJO 7 DP

53 NORMAL 54 NORMAL 0 NORMAL 123 NORMAL