MICROALGAS: ASPECTOS ECOLGICOS Y BIOTECNOLGICOS

Liliana M. Gmez Luna Laboratorio de Ecotoxicologa Marina, Centro Nacional de Electromagnetismo Aplicado, Universidad de Oriente

Resumen
En este trabajo se presenta una descripcin de la ecologa de las microalgas de agua dulce, as como las de ambientes costeros y marinos, haciendo un anlisis de las especies predominantes en distintos tipos de acuatorios, tomando en consideracin parmetros fsico-qumicos relevantes. Se explican trminos como fitoplancton y microalga, confirindole a cada uno su valor conceptual, adems del de biotecnologa algal. Asimismo, se hace referencia al papel del fitoplancton en el balance de oxgeno y dixido de carbono a nivel global, donde se pone en tela de juicio el papel de los bosques, en contraposicin con el de los microorganismos fotosintetizadores, teniendo en cuenta que pueblan la mayor parte de los hbitats acuticos, por lo que representan la mayora si se tiene en cuenta la proporcin tierra: agua del planeta, y adems, hay que considerar la eficiencia fotosinttica de stos. Por otra parte, se explica el potencial de los microorganismos fotosintetizadores para la produccin de sustancias de inters qumico, farmacutico e industrial. Se destaca la descripcin de experiencias propias en la extraccin de sustancias de inters qumico-farmacutico a partir de microalgas, y el beneficio que reportan para el hombre, especficamente a partir de Chlorella vulgaris y Porphyridium cruentum. Palabras clave: biotecnologa, microalgas, fitoplancton, residuales, bioderivados, bioconversin, ficologa, ecologa.

Abstract
In this work a description of the ecology of fresh water microalgae is presented, as well as those of coastal and marine environments, making an analysis of the predominant species in different systems, considering the outstanding physical and chemical parameters. Terms like phytoplankton and microalga are explained, conferring each one their conceptual value, besides that algal biotechnology concept. Also reference is made to the roll of the phytoplankton in the oxygen and carbon dioxide balance at global level, when it is a discussing topic the roll of the forests versus photosynthetic microorganisms. On the other hand, the potential of these microorganisms it is explained because of the production of fine chemicals with pharmaceutical and industrial uses. It is remarked the description of own experiences in the extraction of fine chemicals with pharmaceutical and chemical uses to emphasize with Chlorella vulgaris and Porphyridium cruentum. Key words: biotechnology, microalgae, phytoplanckton, wastes, fine chemicals, bioconversion, phycology, ecology.

Introduccin
Fue Hensen en 1887, quien us por vez primera el trmino plancton (del griego plangkts: errante), para llamar a todas las partculas organognicas, muertas

o vivas que se mueven a merced de las aguas. Desde hace muchos aos el plancton ha sido objeto de estudio. La comunidad planctnica se clasifica, segn sus componentes, en fitoplancton y zooplancton. El fitoplancton comprende un amplio grupo de organismos

Vol. XIX, N 2, 2007

auttrofos mayoritariamente microscpicos, que representan el primer eslabn en la cadena alimenticia. El trmino microalga aparece posteriormente, muy ligado al desarrollo biotecnolgico; ste se refiere a aquellos microorganismos que contiene clorofila a y otros pigmentos fotosintticos, capaces de realizar fotosntesis oxignica. En este contexto, las cianobacterias o algas verde-azules, con estructura celular procariota, se han considerado tradicionalmente dentro del grupo /1/. Entre las microalgas se incluyen organismos con dos tipos celulares: cianobacterias, que tienen estructuras celular procariota, y las restantes microalgas con estructura celular eucariota; sin embargo, el trmino no tiene valor taxonmico alguno.

lugar donde vive un grupo de especies, puede entonces coincidir con la acepcin generalizada de hbitat. En la literatura algolgica, sobre todo de los pases centroeuropeos, se usa biotopo no slo para definir el lugar topogrfico, sino el conjunto de condiciones de vida junto al lugar definido espacialmente, ya claramente delimitados sus rasgos y lmites fsicos /2/. De forma general, las algas son de gran relevancia para los ecosistemas acuticos, donde contribuyen al balance de oxgeno, y gracias a ellas, se inicia el flujo de energa en estos ecosistemas. Existen algunas especies poco exigentes, que pueden vivir en condiciones extremas: cavernas, suelos desrticos, hielos o nieves perpetuas, lagos hipersalinos, acdulos, alcalinos y con elevadas temperaturas. A pesar de su simplicidad y amplia distribucin, las algas habitan en slo lugares donde existen condiciones favorables para la colonizacin y el desarrollo. Estos requerimientos o factores ecolgicos limitantes son: la radiacin luminosa, la temperatura, la disponibilidad de oxgeno y la concentracin de determinados nutrientes, fundamentalmente. Los factores climticos que incluyen un buen nmero de otros factores abiticos, pueden determinar varias zonas de distribucin como la boreal, sudboreal, templada del norte, subtropical del norte, tropical, subtropical del sur y templada del sur, entre otras. Se pueden encontrar algas que habitan acuatorios con caractersticas fsico-qumicas particulares, constituyendo indicadores, por ejemplo, Coccomonas sp. e Hydrurus sp., que se desarrollan en aguas con alto contenido de calcio, mientras que en aguas distrficas y con bajos valores de pH se desarrolla la mayora de las desmidiceas. En las aguas ricas en nutrientes, hasta eutrficas, son comunes las Volvocales, Chlorococcales y Euglenofceas. De igual forma, hay un patrn de distribucin predominante para acuatorios lticos y otro para acuatorios lnticos. Los acuatorios de aguas corrientes o lticos estn en constante movimiento, lo que permite una oxigenacin constante y una renovacin de nutrientes.

Ecologa de las algas microscpicas

Microalgas de agua fresca
Un trmino importante al hablar de ecologa es el de Ecosistema, propuesto por Tansley en 1923 con varios sinnimos: microcosmos (Forbes, 1887), holozen (Fiederichs, 1930), biosistema (Thienemann, 1939) /2/. Son unidades naturales formadas por componentes biticos y abiticos, cuyos intercambios llevan a un sistema estable donde ocurren procesos cclicos no completamente cerrados, y cuyos efectos pueden salir del ecosistema; es la completa asociacin de organismos independientes que habitan un rea determinada (comunidad bitica o biota) y sus relaciones fsicas, tanto con la comunidad como con el individuo y sus reacciones, no slo entre s, sino tambin en las condiciones fsicas del entorno, formando un complejo ecolgico. Los organismos vivientes y su entorno o ambiente abitico se encuentran inseparablemente relacionados, e interactan uno sobre otro. Cualquier entidad cuyos componentes operan en conjunto para lograr cierta estabilidad funcional, aun por un breve lapso de tiempo, puede ser considerada ecosistema. Los conceptos de ecosistema y biotopo pueden llegar a superponerse, sobre todo si se aplica en el sentido ms amplio. En caso contrario, o sea, en el sentido ms estrecho, es decir, considerando slo el

Vol. XIX, N 2, 2007

Los manantiales fros, ricos en carbonatos, fosfatos y nitratos, se caracterizan por la presencia de Fragilaria sp., Amphora sp., Cocconeis sp., Spirogyra sp., Tribonema sp., etctera. Las aguas lticas con carga mineral pueden tener una representacin importante de cianofitas y diatomeas. Asimismo, son tpicas de ambientes acdulos las Chlamydomonas acidophila, Euglena mutabilis, Stichococcus minor y Microspora tumidula, entre otras. A diferencia de los manantiales, los ros y arroyos, tienen diferentes profundidades, caudal, lecho, turbidez, concentracin de nutrientes, y aporte o carga contaminante, debido a la influencia antrpica, siendo tambin acuatorios lticos. Aqu la flora fitoplanctnica es muy diversa, y en dependencia de variaciones estacionales o situaciones espacio temporales, puede existir predominio de clorofitas o cianofitas, y diatomeas, fundamentalmente; pueden distinguirse adems algas rodofceas. De forma general, el patrn de distribucin es variado, destacando la presencia de microalgas epilticas, epfitas y epiplicas. Es comn la presencia en ros y arroyos de Ulotrix sp., Spirogyra sp., Achnantes sp., Oedogonium sp., Tribonema sp., Cymbella sp., Euglena sp., Scenedesmus sp., Chlorella sp., Navicula sp., Nitzchia sp., Zygnema sp., Mougeotia sp. Este patrn est correlacionado con la carga contaminante, el caudal, la temperatura, el pH y la disponibilidad de oxgeno y luz. As, dependiendo de la distribucin espacial de valores de los factores limitantes, dentro de una misma localidad, pueden llegar a definirse sublocalidades, con una composicin propia de especies, o colonizada por comunidades alginas especficas. Es importante hacer referencia al sistema saprobiolgico, el que ha sido establecido teniendo en cuenta los criterios de Kolkwitz, Marsson, Liebemann, Sladecek, Zelinka y Marvan /2/. Este sistema determina la existencia de varias zonas de acuerdo con la carga contaminante y caractersticas fsicoqumicas de las aguas, como son: la zona coprozoica, polisaprbica, polisaprbica, polisaprbica, mesosaprbica, mesosaprbica, mesosaprbica, zona oligosaprbica y zona catarbica.

Sin embargo, este sistema tiene sus variaciones en el trpico, y en diferentes zonas cuyo nivel de contaminacin rompe con los estndares establecidos internacionalmente, si se tiene en cuenta la descripcin original hecha por los diferentes autores que han contribuido con su implementacin. La zona catarbica, por ejemplo, est asociada al nacimiento de los ros y arroyos, pero puede darse el caso de la existencia de fuentes contaminantes desde el mismo nacimiento del acuatorio, por lo que el patrn descrito variara. En el caso de los acuatorios lnticos, caracterizados por la inmovilidad de sus aguas, excepto cuando se manifiesta turbulencia por corrientes convectivas o por la accin del viento, son representativos los charcos, embalses, lagos y lagunas salobres, presentando una flora influida por caractersticas locales, fundamentalmente. En acuatorios lnticos eutrficos, particularmente ricos en calcio, es comn la presencia de Eudorina sp., Pediatrum sp., Dictyosphaerium sp., Closterium sp., Scenedesmus sp. y Straurastrum sp.; mientras que los oligotrficos pobres en calcio, presentan otro patrn poblacional y menor concentracin de especies; en este caso puede detectarse un predominio de diatomeas como Asterionella formosa, Melosira ambigua, Mallomonas sp., Peridinium sp., Ceratium sp., Ankistrodesmus sp. y Pediatrum duplex, entre otras especies. Actualmente, los acuatorios lnticos como los embalses son explotados por la acuicultura, por lo que sus caractersticas van a depender del manejo de stos por los acuicultores. De forma general, al igual que otros microorganismos, los fotosintetizadores impactan la vida del hombre de diversas formas (figura 1). Es an reciente la discusin sobre el papel del fitoplancton en el balance de oxgeno y dixido de carbono a nivel global, donde se pone en tela de juicio el papel de los bosques, en contraposicin con el de los microorganismos fotosintetizadores, teniendo en cuenta que pueblan la mayora de los hbitats acuticos, por lo que representan mayora si se tiene en cuenta la proporcin tierra: agua del planeta; adems de considerar la eficiencia fotosinttica de stos.

Vol. XIX, N 2, 2007

Fig. 1 Impacto de las microalgas en la vida del hombre.

Numerosas investigaciones han puesto de manifiesto el potencial de los microorganismos fotosintetizadores para la produccin de sustancias de inters qumico, farmacutico e industrial /1/, adems de su utilizacin en la alimentacin animal y el tratamiento de las aguas residuales. Por otra parte, cabe citar los efectos txicos de algunas especies fitoplanctnicas, que traen aparejados trastornos de salud y hasta la muerte de animales y humanos. Dentro de las aguas interiores pueden existir acuatorios con un grado de salinidad significativo, cuyo contenido principal es el cloruro de sodio y sulfatos. Esta flora se denomina halfila, y puede diferir de las algas netamente marinas. De forma general, segn Hustedt, stas pueden ser polihalbicas, euhalbicas, mesohalbicas, oligohalbicas; adems de las halfobas, que no toleran valores de salinidad altos. Puede haber algas que resisten altos contenidos de sales, constituyendo indicadores de la salinidad del agua, como Navicula salinarum y Anomoeoneis sphaerophora. Es importante definir trminos importantes a la hora de hablar de algas de agua dulce como: limnoplancton, referido al plancton de los lagos; heleoplancton: plancton de los embalses, y potamoplancton, que es el plancton de los ros.

Microalgas de ambientes costeros y marinos

Menos del 1% de la energa solar disponible en la superficie del mar es absorbida por organismos auttrofos. stos constituyen el primer eslabn en la cadena alimentaria, y la va de entrada de energa a un ecosistema; de aqu que se denominen productores primarios. Los productores primarios de los ecosistemas costeros y marinos son auttrofos y se encuentran en el primer nivel trfico; stos soportan al mundo viviente a travs de la fotosntesis. A menudo, el trmino productividad primaria se intercambia con el de autotrofa, y se puede definir como el proceso biolgico mediante el cual se sintetizan compuestos orgnicos ricos en energa a expensas del CO2, agua y otros nutrientes. Los principales productores primarios en zonas costeras son: algas (macroalgas y microalgas), cianobacterias, fanergamas que crecen en los sedimentos y los dinoflagelados simbiontes presentes en los arrecifes, adems de la vegetacin costera. Hay que considerar la importancia de los manglares, que forman densos bosques en la zona intermareal, formando un importante ecosistema costero. Salvo algunas excepciones, el primer nivel trfico de las tramas alimentarias marinas, lo forma el fitoplancton, que es el productor primario ms abundante.

Vol. XIX, N 2, 2007

El fitoplancton est compuesto por organismos microscpicos que se ubican, fundamentalmente en la columna de agua, esencialmente en la zona ftica; sin embargo, se encuentran especies epiplicas, epilticas, epizoicas, epfitas, neustnicas y bentnicas. Por su tamao, el fitoplancton puede clasificarse en: picoplancton, ultraplancton, nanoplancton y microplancton. Al igual que su tamao, presenta formas muy diversas. Se conoce que en todos los ambientes marinos, especialmente en aguas ocenicas, el nanoplancton (o el fitoplancton de menor tamao) es el productor primario ms importante. Dentro del fitoplancton se destaca la relevancia de las cianobacterias (< 5m), las que son abundantes en zonas esturicas e intermareales. Algunas especies de cianobacterias son capaces de utilizar el nitrgeno atmosfrico, por lo que son fijadoras de nitrgeno; estas especies son comunes en las costas, y generalmente viven asociadas a plantas marinas. Entre los productores primarios se encuentran las macroalgas, pertenecientes, fundamentalmente, a tres divisiones del reino Plantae: Phaeophyta, Rodophyta y Chlorophyta, y las fanergamas o plantas superiores, pertenecientes a la divisin Antrophyta. Las macroalgas y plantas bentnicas estn expuestas a ms limitaciones ambientales que el fitoplancton, por lo que a nivel global, producen menos biomasa. La sntesis continua de materia orgnica por el fitoplancton depende de una serie de condiciones biticas y abiticas. Los factores que modulan la productividad primaria de forma general son: - Disponibilidad de nutrientes (concentracin y fuente de nutrientes). - Disponibilidad, calidad, orientacin e intensidad de la luz. - Temperatura. - Salinidad. - pH. - Pastoreo (predadores). - Disponibilidad de oxgeno y dixido de carbono. Los requerimientos nutricionales y de energa (luz) de los productores primarios estn, con frecuencia,

especialmente separados en el medio marino. La luz est disponible en la superficie, mientras que las reservas de nutrientes estn concentradas en aguas que estn por debajo de la zona ftica. Para vivir, estos organismos deben hacerlo en la zona ftica, ya que la luz se impone como un factor limitante fundamental para su distribucin. La profundidad de dicha zona est determinada por varias condiciones, incluyendo la absorcin atmosfrica de la luz, el ngulo entre el sol y la superficie del mar, adems de la transparencia del agua. Existe una profundidad en la cual la intensidad de la luz es tan pobre que no ocurre la fotosntesis; sta vara, de unos metros en la zona costera a 200 m en mares claros tropicales. La profundidad en la que no hay productividad primaria neta se conoce como profundidad crtica. Adems de la intensidad, es importante considerar la calidad de la luz, es decir, su composicin espectral, puesto que de sta depender, en gran medida, el proceso fotosinttico. El aparato fotosinttico de todos los productores primarios marinos, excepto las cianobacterias, est localizado en los cloroplastos, donde se encuentran los pigmentos fotosintticos que absorben la energa luminosa para convertirla en energa qumica. La fotosntesis ocurre a expensas del PAR (Radiacin Fotosintticamente Activa), que va de 400 a 700 nm. Sin embargo, el patrn de absorcin no es el mismo para los diferentes pigmentos, los que le confieren caractersticas de color distintivas a cada organismo. Por otra parte, la calidad espectral de la radiacin vara con las condiciones climticas, a lo largo del da, con los cambios estacionales y en la columna de agua. Es importante considerar que el efecto acumulativo del pastoreo cclico, conjuntamente con las variaciones en cuanto a disponibilidad de la luz y nutrientes, crea un complejo patrn de productividad primaria, que vara estacional y geogrficamente. Los requerimientos de nutrientes varan de forma especfica entre las diferentes especies; pero, de forma general, la materia orgnica es utilizada de

Vol. XIX, N 2, 2007

manera colectiva, ya que contiene C, H, O, N, P, trazas de vitaminas y otros elementos necesarios para mantener la vida. Para conocer cunto de estos elementos necesitan los productores primarios, se puede recurrir a un anlisis elemental, donde la proporcin arroja, aproximadamente los siguientes datos: 110 C: 230 H: 75 O: 16 N: 1 P Adems de estos elementos (macronutrientes), se necesitan trazas (micronutrientes) de hierro, manganeso, cobalto, zinc y cobre, entre otros. La disponibilidad de estos nutrientes en el medio marino es afectada en ocasiones por la contribucin de escurrimientos, cambios del pH de las aguas, sobre todo en zonas esturicas, y la erosin. Es importante sealar, que cualquier alteracin en la disponibilidad y concentracin de nutrientes puede producir fenmenos de afloramientos de determinadas especies. Se conoce por ejemplo, que una disminucin en la concentracin de hierro (Fe) en el Canal Ingls durante la primavera, provoc un bloom de diatomeas, sugiriendo que la disponibilidad de hierro puede limitar la talla y composicin de las poblaciones fitoplanctnicas. De igual forma, aumentos en las concentraciones de fosfatos, sulfatos, nitratos y otros, provocan la eutroficacin de las aguas, trayendo consigo, en ocasiones, la aparicin de floraciones de especies txicas. Por otra parte, es necesario mencionar los fenmenos de afloramientos o surgencias llevan nutrientes a la zona ftica, provocando aumentos bruscos en la productividad primaria. Cabe citar el ejemplo del fenmeno meteorolgico El Nio: la corriente fra y productiva del Per fluye en contraste con la parte de tierra de la lnea costera, que es ms bien seca y rida. Cada verano, cerca de las Navidades, la corriente clida que viene del Norte, (llamada as por el nio Jess) va hacia el Sur, provocando lluvias y temperaturas ms clidas. Ocasionalmente, esta intrusin de aguas tropicales va ms all de lo normal, permaneciendo ms tiempo y provocando abundantes lluvias en el desierto costero.

El fenmeno de El Nio trae consigo el crecimiento repentino de plantas en las ridas costas; esta misma corriente trae masas de agua menos densas, clidas, y ricas en nutrientes. En los aos donde el efecto es severo, hay disminucin de las poblaciones costeras, desapareciendo poblaciones completas de peces y aves marinas que dependen de ellos. En estas costas peruanas, los afloramientos o surgencias son masivos, y se ven interrumpidos solamente por el fenmeno de El Nio; en su ausencia, la productividad llega a ser de 300 g C m-2 ao-1, con el consiguiente aumento de otras poblaciones costeras. No fue hasta hace unas pocas dcadas que los oceangrafos fueron conscientes de que, aparentemente el fenmeno es consecuencia de cambios atmosfricos globales. De forma general, la productividad primaria puede ser: bruta, que no es ms que la cantidad total de materia orgnica producida va fotosntesis en el medio marino y neta, que es la cantidad de materia orgnica disponible para los consumidores, protistas no fotosintetizadores y descomponedores. En el medio marino y ocenico, la productividad primaria vara notablemente en tiempo y espacio, y los animales que viven de los auttrofos deben adaptarse a estos patrones. Usualmente, la productividad fotosinttica neta puede estimarse mediante la velocidad de evolucin de O2 de consumo del CO2. En la primera mitad del pasado siglo, el mtodo de las botellas (claras y opacas) fue ampliamente utilizado para estimar la productividad primaria del fitoplancton, usando carbono marcado radiactivamente (C14). Actualmente, la productividad primaria puede ser determinada mediante el uso de radioistopos marcadores para medir el crecimiento algal en condiciones naturales y el contenido total de clorofila por medio de radimetros transportados por satlites, expresndose en g C m-2 ao-1 g C m-2 da-1. La medicin remota va satlite ha sido la primera tcnica salida a la luz para determinar la productividad primaria a escala global. En la actualidad, uno de los mtodos ms aceptados para la determinacin de la productividad primaria global ha sido desarrollado

Vol. XIX, N 2, 2007

despus de realizar el artificio de dividir al mundo en 57 regiones biogeoqumicas (Longhurst et al., 1995). De esta forma puede observarse la evolucin fitoplanctnica en semanas, meses y aos. En las zonas costeras, la productividad primaria es mayor, con valores entre 193 y 800 g de C m-2 ao-1. La productividad primaria es una de las formas de evaluar el flujo de carbono en un ecosistema dado o a nivel global, pero slo a nivel de superficie, no al interior del ocano. Es importante considerar, que esta productividad en las zonas de afloramientos o surgencias, es mayor que a nivel global, donde alcanza un rea de 8,44 106 km2, e incluye a las provincias (ARAB, CCAL, CNRY, CHIL y BENG), definidas por importantes corrientes ocenicas. El estimado de hoy es mayor que el de Ryther en 1969, quien consider un rea de 0,36 106 km2. Asimismo, la productividad primaria ocenica total ha sido estimada como 2,5 a 4 veces mayor que la de las provincias costeras. De forma general, altas latitudes, regiones poco profundas y las zonas de afloramientos (Corriente de

Somalia, Corriente del Oeste de Australia, Corriente de California, del Per, de Canarias y de Bengala) soportan una gran productividad primaria, la que es ms frecuente en los meses clidos, cuando la luz no es un factor limitante. Las regiones ocenicas, especialmente en trpicos y subtrpicos, donde una fuerte termoclina y picnoclina son permanentes, y en mares polares, donde la luz es limitante la mayor parte del ao, existe una baja productividad primaria (<50 g C m-2 ao-1).

Biotecnologa de las microalgas

Uso y aplicaciones de las microalgas
Tradicionalmente, las algas microscpicas han sido cultivadas para diferentes fines (figura 2). Por otra parte, se han utilizado condiciones naturales favorables para su desarrollo, por lo que se conocen lagos donde aparecen blooms masivos temporales de especies beneficiosas para el hombre, explotndose el cultivo in situ.

Fig. 2 Diferentes usos de las microalgas.

Las ventajas del cultivo de microalgas se pueden resumir en tres puntos segn Cohen (1986): 1. El cultivo de microalgas es un sistema biolgico eficiente de utilizacin de la energa solar para producir materia orgnica. Las microalgas crecen ms rpido que las plantas terrestres y es posible obtener mayores rendimientos anuales de biomasa. 2. La composicin bioqumica pueden modificarse fcilmente variando las condiciones ambientales y/o la composicin del medio de cultivo. 3. Bajo ciertas condiciones, muchas especies de microalgas pueden acumular en altas concentraciones compuestos de inters comercial, tales como protenas,

lpidos, almidn, glicerol, pigmentos naturales o biopolmeros. Se han propuesto y desarrollado numerosas aplicaciones de las cianobacterias y microalgas eucariotas en diversos campos tecnolgicos, en cultivo masivo o continuo, libres o inmovilizadas, vivas o procesadas, algunas de las cuales se encuentran en plena explotacin comercial. Existen publicaciones relativamente recientes, compiladas en libros tales como Microalgal Biotechnology /1/, Algal and Cyanobacterial Biotechnology (Cresswell et al., 1990), Introduction to Applied Phycology (Akatsuka, 1990), o Microalgae. Biotechnology and Microbiology /4/, donde se destacan las siguientes aplicaciones:

Vol. XIX, N 2, 2007

- Acuicultura: Actualmente las microalgas constituyen la principal fuente de alimento utilizada en la nutricin de moluscos, rotferos y fases larvarias de crustceos, siendo adems utilizadas como complemento en las dietas de peces o como medio para mantener la calidad del agua. - Tratamiento de agua: Las microalgas se emplean en el tratamiento de aguas residuales, detoxificacin biolgica y control de metales pesados en aguas naturales o en aguas industrialmente contaminadas. - Agricultura: Utilizacin de la biomasa microalgal como biofertilizante. - Biomedicina y farmacologa: utilizacin en dietas de adelgazamiento y tratamientos de heridas; algunas microalgas presentan efectos hipocolesterolmicos, actividad antibacteriana, antifngica, inmunoreguladora y antitumoral. - Alimentacin humana y pienso animal: Las microalgas representan una fuente de protena Single Cell Protein con posibles aplicaciones en nutricin humana, pero principalmente se utiliza como complemento de piensos animales. Los hidrolizados proteicos son de gran utilidad en la industria mdico farmacutica. - Industria qumica y alimenticia: Produccin de sustancias de inters comercial, tales como vitaminas, pigmentos, fitol, aminocidos, polisacridos, glicerol, enzimas, promotores de crecimiento en industrias de fermentacin; ceras, biosurfactantes, fosfolpidos y lecitinas, cidos grasos esenciales y prostaglandinas, o la utilizacin de los lpidos algales para la produccin de combustibles lquidos.

microalgas, se obtiene un extracto con propiedades antispticas y desinfectantes; asimismo, se puede obtener un hidrolizado proteico con propiedades bioestimulantes de varias especies, y polisacridos extracelulares cidos con propiedades inmunomoduladoras, principalmente a partir de Porphyridium cruentum. Las cepas utilizadas para estos fines deben obtenerse a partir de colecciones de cultivo reconocidas, o bien depositarse en stas, toda vez descubierto un nuevo producto a partir de cualquier cepa local. En el caso de los ejemplos de sustancias de inters qumico-farmacutico citados, es relvante el uso de Chlorella vulgaris Beijerinck, que pertenece a la clase Chlorophyceae; orden Chlorococcales (Chlorellales), familia Oocystaceae /5/ y Porphyridium cruentum Vischer, que pertenece a la clase Rodophyceae; orden Porphyridiales, familia Porhyridiaceae (Vonshak, 1988). En este sentido, es de gran importancia considerar que en los pases tropicales la aclimatacin en cultivos a cielo abierto, en condiciones climatolgicas totalmente diferentes a las de su lugar de procedencia, con una temperatura media de 302 C y altos niveles de irradiacin solar durante todo el ao, es un proceso lento, por lo que las cepas locales adquieren un valor relevante.

La biotecnologa algal: conceptos bsicos y perspectivas

El uso y conservacin de los recursos naturales es uno de los temas ms abordados en los ltimos aos, debido a la preocupacin creciente por la constante agresin sobre el medio ambiente que provoca la actividad industrial y urbana. Por otra parte, la mayora de las drogas tiles para el hombre son de origen natural. Hasta hace algunos aos, la fuente primaria eran las plantas terrestres. Sin embargo, aproximadamente el 70 % del planeta est cubierto por agua, por lo que muchos organismos acuticos han sido objeto de estudio y explotacin comercial, fundamentalmente las macroalgas /6/; mientras que numerosas especies de microalgas representan hoy un recurso natural no explotado.

Algunas sustancias de inters qumico farmacutico

Existen numerosos productos de inters qumicofarmacutico que pueden extraerse a partir de clulas en cultivo de microalgas. Se conoce que el extracto acuoso de Chlorella vulgaris tiene propiedades estimulantes sobre el crecimiento de clulas y microorganismos. A partir de la clorofila extrada de diferentes especies de

10

Vol. XIX, N 2, 2007

Debido a la importancia de estos microorganismos en la alimentacin animal y humana, la utilidad de las sustancias que de ellas se extraen y el desarrollo tecnolgico alcanzado en esta rea de investigacin, han aparecido en trabajos recientes trminos como Biotecnologa solar /7/ y Biotecnologa algal /4, 8, 9/, que de cierta forma reflejan el inters por la evolucin tecnolgica alcanzada, consecuencia lgica de un largo proceso histrico que comenz hace millones de aos cuando el hombre, espontneamente, empez a utilizar las microalgas en su alimentacin. Una de las aplicaciones ms interesantes de las microalgas es la relacionada con las sustancias de inters qumico-farmacutico, debido a la utilidad prctica que stas encuentran en biomedicina, farmacologa, fitocosmtica y en la industria alimentaria. A partir de diferentes especies de microalgas se extraen sustancias como vitaminas, pigmentos, alcoholes, aminocidos, polisacridos sulfatados, glicerol, cidos grasos poliinsaturados, enzimas, extractos acuosos reguladores del crecimiento, ceras, biosurfactantes, fosfolpidos, lecitinas, betanas y precursores de prostaglandinas, dependiendo de las que sean capaces de sintetizar. Algunas sustancias poseen efectos teraputicos como: cicatrizantes, inmunorreguladores, anticancergenos, tensorreguladores, antiinflamatorios, hipocloesterolmicos, entre otros /1, 9, 10/. La multiplicacin de los descubrimientos en el campo de la Bioqumica, la Gentica, la Biologa molecular y celular desde mediados del 60 a los 80, hizo posible la aparicin de una nueva biologa. Cabe mencionar la revolucin en el campo de la Bioqumica en lo que a la enzimologa respecta (elucidacin de estructuras y funciones de enzimas, as como su utilizacin industrial e inmovilizacin); el descubrimiento de tcnicas de modificacin y transferencia de ADN entre organismos; en el campo de la virologa las investigaciones sobre bacterifagos; investigaciones relacionadas con la gentica molecular y el desarrollo de tcnicas de la ingeniera gentica. En 1978, la Federacin Europea de Biotecnologa adopt la siguiente definicin de Biotecnologa:

"Las Biotecnologas permiten, gracias a la aplicacin integrada de los conocimientos y las tcnicas de la bioqumica, la microbiologa, la gentica y la ingeniera qumica; aprovechar en el plano tecnolgico las propiedades y posibilidades de los microorganismos y de los cultivos celulares. Las biotecnologas ofrecen la posibilidad de producir, a partir de recursos renovables y disponibles en abundancia, gran nmero de sustancias y compuestos esenciales para la vida y para mejorar la condicin del hombre. Aplicadas a escala industrial, las biotecnologas constituyen la Bioindustria". La bioindustria, comprende, por una parte, las actividades industriales en las que la biotecnologa remplaza a las tecnologas convencionales; por ejemplo, la sntesis de sustancias aromticas, productos textiles, produccin de etanol e hidrgeno; y por otra, las actividades en las que la biotecnologa desempea la funcin motriz esencial, como la produccin de levaduras, algas y bacterias, con el objetivo de suministrar protenas, amino cidos, vitaminas y utilizacin de enzimas, vinculado todo ello con la industria alimenticia; la clonacin y seleccin de variedades de cultivos, bioinsecticidas; vinculado a la produccin agrcola; sntesis de hormonas, interferones y antibiticos, relacionados con la industria farmacutica y el tratamiento de aguas residuales, vinculado a la proteccin del medio ambiente. En 1987, el Consejo Nacional de Desenvolvimiento Cientfico y Tecnolgico de Brasil, public algunas definiciones sobre biotecnologa: 1. "Es el uso de actividades biolgicas en el campo de los procesos tecnolgicos y de la produccin industrial y consiste en la puesta en prctica de la microbiologa y la bioqumica en funcin de la qumica industrial y la ingeniera de fabricacin. 2. La aplicacin de organismos, sistemas o procesos biolgicos en las plantas industriales y el sector de los servicios. 3. Uso de un proceso biolgico en el que se recurre a clulas microbianas, vegetales o animales, o a sus partes para obtener bienes y servicios. 4. Ciencia de los procesos productivos basada en la accin de los microorganismos y sus constituyentes

Vol. XIX, N 2, 2007

11

activos y procesos que funcionan en las clulas y tejidos de los organismos superiores. 5. La concepcin, optimizacin y transposicin a gran escala de procesos bioqumicos y celulares para la produccin industrial de productos tiles y sus correspondientes aplicaciones. 6. Conjunto de procesos industriales que involucran sistemas biolgicos. 7. El uso de organismos vivos o sus constituyentes en procesos industriales. 8. Transformacin industrial de materiales por parte de microorganismos u otros agentes biolgicos con fines productivos o bienes y servicios. 9. Uso integrado de la bioqumica, microbiologa e ingeniera para lograr una aplicacin tecnolgica (industrial) de las capacidades de los microorganismos, de cultivos celulares, tejidos y sus partes. 10. Aplicacin de la bioqumica, biologa, microbiologa e ingeniera qumica a los procesos o productos industriales, incluyendo aquellos relacionados con la salud, energa y agricultura y al medio ambiente. 11. El uso de sistemas celulares para la obtencin de productos o desarrollo de procesos industriales. 12. Aplicacin de principios cientficos e ingenieriles al tratamiento de materiales para producir bienes y servicios mediante agentes biolgicos. 13. Es cualquier tcnica que usa microorganismos vivos o sus partes para obtener o modificar productos, mejorar plantas y animales o desarrollar microorganismos para usos especficos". De todas las definiciones pudiera resumirse, que la biotecnologa es un campo de accin interdisciplinario, donde encuentran aplicacin fundamental la bioqumica, la microbiologa, la biologa y la ingeniera qumica, permitiendo el desarrollo de tecnologas idneas para el dominio de los sistemas biolgicos en beneficio del hombre. Existieron etapas esenciales en el surgimiento de la biotecnologa y sus especializaciones. En 1953 Sanger establece la estructura completa de la insulina, y Watson y Crick, demuestran que el ADN tiene estructura de doble hlice. En 1963, Nirenberg, descifra la clave gentica "El mensaje hereditario", la relacin clave gentica y estructura proteica.

En 1967 se automatiza la determinacin de estructuras proteicas basadas sobre las tcnicas de anlisis de Sanger y el mtodo de degradacin de Edman y Begg. En 1978 Dayhoff y Eck comercializan estos aparatos, y ese ao se determina la secuencia aminoacdica de ms de 500 protenas, confeccionndose un "Atlas". Comienzan a desarrollarse tcnicas de determinacin de ADN. En 1980, Hood y Hunkapiller, del Instituto de Tecnologa de California, perfeccionan el microanalizador de protenas, lo que permite establecer la secuencia de 100 a 200 aminocidos por da a partir de 10 ng de protenas. En 1981 Gilbert, Maxam y Sanger, en la Universidad de Harvard, elaboran un mtodo rpido de anlisis del ADN; se hace posible determinar la secuencia de 1 000 nucletidos por semana con un slo operador. El equipo se comercializa entre 19821985. Ya se haban vencido dos etapas de anlisis (6070/70-80) y la tercera deba ser la de la sntesis. En 1963 Merrifield sent las bases para la construccin y comercializacin de las primeras mquinas automticas de sntesis de polopptidos. De 1970 a 1972, Khorana sintetiza ADN; en 1977 Itakura sintetiza genes de la somatostatina, los que fueron introducidos en clulas de E. coli, por tcnicas de recombinacin gentica, perfeccionadas por Boyer; queda demostrado, por primera vez, la expresin de genes humanos en clulas bacterianas. La sntesis se desarrolla sobre soportes slidos, y en 1980 Itakura desarrolla el primer ensamblador de genes. Todos estos progresos tcnicos determinaron el avance de los conocimientos biolgicos y sentaron las primeras bases para el surgimiento de la biotecnologa; pero corresponde, por medio de la integracin de materias afines, de conocimientos slidos, formar las bases de nuevas biotecnologas o mejor, nuevas especializaciones dentro de la biotecnologa, coherentes, con fuerza y vida propias; stas han de tener carcter singular, y deben sustentarse en sistemas biolgicos que funcionen de modo natural, no artificial, y cuyos mecanismos bioqumicos metablicos se dominen en provecho del hombre. Albert Sasson en 1984 plante que uno de los procesos biotecnolgicos ms antiguos, por no ser absoluto, era la fermentacin microbiana, ya que en

12

Vol. XIX, N 2, 2007

1891, en una tablilla babilnica que data de 600 aos a. de C., se descubre la preparacin de la cerveza. Los sumerios fabricaban 20 tipos de cerveza en el 3er milenio a. de C. Hoy podemos hablar de una de las ms nuevas de las biotecnologas: La biotecnologa solar o algal, y no por ello se puede negar su antigedad. El trmino como tal aparece en 1987, citado por los cientficos radicados en Canad, De Paw y De la Noe. En un sentido amplio puede definirse como la tecnologa de cultivo y explotacin de microorganismos fotosintticos, donde las algas microscpicas tienen un papel preponderante. De esta forma, la biotecnologa algal (ex situ o in situ), a gran escala, puede ayudar a reducir las concentraciones globales de CO2 y al mismo tiempo proveer una fuente ilimitada de biomasa, la cual puede ser un instrumento en la transformacin de la industria de los combustibles fsiles, a la basada en fuentes de energa renovables. Sin embargo, existe una tendencia a la explotacin de especies productoras de sustancias teraputicas muy valiosas, suplementos nutricionales que combinen en su modo de accin algn beneficio teraputico y biomasa rica en vitaminas. De forma general, se puede hacer referencia a las ventajas de este campo de accin interdisciplinario: 1. Se pueden hacer cultivos continuos, por lo que hay una produccin importante de biomasa por rea. 2. Las microalgas contienen poco material estructural y alto contenido proteico, de carbohidratos, lpidos y vitaminas. 3. Son inocuas y comestibles. 4. Muchas especies de microalgas pueden crecer en aguas hipersalinas, lo que permite el aprovechamiento de zonas semiridas u ocenicas, con alta radiacin solar, no tiles para otros fines. 5. La biomasa ofrece muchas posibilidades; es un cultivo muy verstil. No obstante, existen requerimientos esenciales para el desarrollo de la biotecnologa algal: 1. Inversin inicial en equipamiento y construccin civil. 2. Suministro de nutrientes y Regulacin de las condiciones de cultivo.

3. Extraccin de las algas o cosecha. 4. Secado para su almacenamiento y distribucin. 5. Extraccin de bioderivados de inters hasta producto terminado. Los procesos biotecnolgicos son creadores de nuevas industrias con bajas demandas energticas, y tienen orientacin prctica hacia la bsqueda del xito cientfico y econmico. Sin embargo, uno de los problemas que enfrenta la Biotecnologa algal es el costo de los medios de cultivo de las microalgas. El medio de cultivo puede constituir hasta el 75 % del costo de un producto; de aqu que la utilizacin de residuales sea importante en la biotecnologa algal. Las aplicaciones, tanto en la alimentacin, biomedicina y farmacia, as como la produccin de energa, valorizan el proceso. No obstante, la utilizacin de residuales deja de ser una alternativa en aquellos procesos en que las buenas prcticas exigen un producto limpio desde el inicio del proceso productivo.

Antecedentes histricos del uso de las microalgas

En 1980, el microbilogo holands Beijerick establece cultivos puros de una microalga de agua dulce: Chlorella vulgaris. Algo ms tarde, Otto Warburg (1919) consigui en laboratorio cultivos densos de Chlorella, e introdujo la idea de utilizar estos cultivos como una herramienta de trabajo en el estudio de la fotosntesis. Los cultivos de microalgas han sido estudiados por numerosos investigadores, observndose que bajo condiciones de cultivo adecuadas, especialmente a una intensidad de saturacin, son mucho ms productivos que las plantas superiores o las clulas fotoautotrficas aisladas de las mismas /11/. El concepto de produccin masiva de microalgas se llev a cabo por primera vez en Alemania durante la II Guerra Mundial, dirigido a la produccin de lpidos, para lo que se utilizaron las microalgas Chlorella pyrenoidosa y Nitzchia palea /11/. Despues de la II Guerra Mundial comenz a considerarse la biomasa microalgal como un

Vol. XIX, N 2, 2007

13

suplemento importante e, incluso, capaz de reemplazar a las protenas animales o vegetales convencionales para consumo directo del ganado o del hombre, acortando la ineficiente cadena alimenticia proteica. En la dcada de los 50, en Alemania Occidental, comenzaron los trabajos sobre el cultivo de Scenedesmus acutus /12/, en los que se planteaba la utilizacin del CO2 producido en la regin industrial del Rhur. Estos trabajos fueron continuados por Soeder y su grupo, que realizaron importantes aportes al cultivo masivo de microalgas /11/. Tambin, a comienzos de los aos 50, Oswald y colaboradores de la Universidad de California, Berkeley, sugirieron la utilizacin de cultivos masivos de microalgas para tratamiento de aguas residuales y produccin de protena, simultneamente (1975). Oswald y Golueke (1960) desarrollaron, asimismo, sistemas de produccin masiva de algas para la bioconversin de la energa solar en metano. En los aos 60 se destacan los trabajos realizados sobre la produccin masiva de microalgas en Trbon (Repblica Checa) /11/. En la dcada del 80 se establecen numerosas industrias para la produccin de microalgas, sobre todo de Spirulina y Dunaliella, en Taiwan, Tailandia, California, Australia, Hawai e Israel. La produccin de Dunaliella aparece como una de las ms prometedoras, por sus contenidos en -caroteno y sus propiedades teraputicas /1, 11/. En aos recientes, los desarrollos tecnolgicos para la produccin masiva de microalgas han sido significativos en todo el mundo. El resultado prctico de este cultivo masivo, en el contexto de produccin de microalgas para la alimentacin, es el desarrollo de una floreciente industria de Chlorella en Japn y Taiwan. Esta microalga se utiliza para la manufactura de tabletas, extractos y otros alimentos dietticos, para los que existe en Japn un mercado bien establecido. En Taiwan, se han utilizado Chlorella ellipsoidea y Chlorella pyrenoidosa con un rendimiento de 2530 g/m/da. En Asia, actualmente existen numerosas factoras para la produccin masiva de microalgas de agua dulce para la alimentacin, principalmente Chlorella sp.

El desarrollo de la tecnologa de cultivos algales ha avanzado mucho hasta nuestros das, y Cuba se ha integrado a estos estudios, teniendo en cuenta los beneficios que stos, de forma general, reportan al desarrollo de la acuicultura. Se conoce, que el desarrollo de la acuicultura depende, en gran medida, de una exitosa produccin de la semilla de siembra, es decir, los alevines y las larvas precriadas, donde el uso de microalgas, directa o indirectamente, ha sido de gran importancia. Los microorganismos fotosintticos se han agrupado tradicionalmente en las categoras de bacterias fotosintticas y microalgas. Las cianobacterias suponen una de las principales contribuciones para la biotecnologa microalgal; por ende, el trmino microalga no tiene sentido taxonmico alguno, y dentro del mismo se pueden incluir organismos con dos tipos celulares: las cianobacterias, que tienen estructura celular procariota, y las restantes microalgas con estructura celular eucariota. En la actualidad, las microalgas tienen una vasta aplicacin en varias vertientes de la vida humana; se utilizan como suplementos dietticos, en medicina, farmacutica, en la industria de los cosmticos, en la bsqueda y obtencin de nuevos combustibles, para la alimentacin de aves de corral, cerdos, rumiantes, y en la acuicultura, en la alimentacin de peces y de zooplancton, siendo numerosas las investigaciones que citan la obtencin de mayores ndices de produccin con el uso de alimento vivo.

Utilizacin de residuales en la biotecnologa algal

En los procesos relacionados con el tratamiento de residuales, son importantes las Single Cell Protein (SCP) o protenas de origen unicelular, la inmovilizacin de enzimas e ingeniera gentica. Para poder ser utilizados como substratos, los residuales deben reunir ciertas caractersticas: 1. Disponibilidad a lo largo de todo el ao (las industrias estacionales son problemticas, por lo que es recomendable generar sistemas diversificables). 2. 3. Que sean fermentables. Bajo costo.

14

Vol. XIX, N 2, 2007

Es importante tener en cuenta la transicin RESIDUO-SUBPRODUCTO-RECURSO; puesto que en cuanto un material cobra utilidad, se valoriza y encarece el proceso a posteriori. Las estrategias dependen de la situacin socio-econmica particular y la tradicin del pas. Entre los residuos valiosos estn las melazas, el suero lcteo: 1. 2. 3. 4. Lejas bisulfticas (industria del papel). Residuos celulsicos. Quitina de exoesqueletos. Almidn (agua de lavar patatas).

En resumen, las caractersticas generales de los microorganismos utilizados son: 1. Caractersticas nutricionales favorables:

Protenas: Debe tener 35-60 % de protenas. La estimacin no debe hacerse por el valor de 6,25; pues se sobrestima, ya que 10-15 % del nitrgeno no proteico se incluye y corresponde a bases nitrogenadas y N-acetil glicosaminas; el Bradford trae interferencias, cuantificado por Lowry, solubilizando previamente en medio alcalino. Aminocidos esenciales: Tienen generalmente mucha lys y poca met. Las dietas ricas en cereales pueden complementarse, pues son deficitarias en lys. Existen levaduras mutantes ricas en met. Vitaminas: Casi todos son ricos en vitaminas del complejo B, entre otras. Glutatin y otros factores que potencian la accin de la insulina. cidos nucleicos: Se requiere que tengan un contenido bajo; la mayora de los microorganismos presentan este inconveniente, como las bacterias (20 %), las levaduras (10 %), microalgas (4 %), microhongos 5 %. Existen metodologas de extraccin que encarecen el producto, pero con los nucletidos resultantes se puede potenciar sabores (saborizantes), y valorizar as el residuo obtenido. 2. Buena digestibilidad, lo cual va muy unido al valor nutritivo. Existen varios mtodos para aumentar la digestibilidad de la biomasa: enzimtico, qumico y mecnico. Para valorar la digestibilidad in vitro, existe actualmente el ndice de digestibilidad HSU, con el que se valora la velocidad de variacin del pH. 3. Aceptabilidad. Es importante la textura, que es muy buena en el caso del microhongo Fusarium semitectum, que aparece en el maz. La aceptabilidad es la conjugacin de apariencia, color, olor, sabor. En las algas se ha visto que la aceptabilidad es mayor cuando disminuye el color verde intenso que stas presentan. 4. Ausencia de toxicidad. Las pruebas son largas y costosas, desde 6 semanas (toxicidad aguda)

Durante las Guerras Mundiales aparecieron muchas industrias de las llamadas SCP, hoy desaparecidas o muy desarrolladas. En esa poca, los registros farmacuticos no tenan sentido prctico y, al igual que en la prueba de la vacuna de la Malaria, que fue posterior, los primeros en testar los resultados fueron los soldados. A diferencia de aquellos tiempos, hoy se busca obtener sustancias o productos con mayor valor aadido. El trmino SCP o POU (Protena de Origen Unicelular) fue acuado por el M&T (Instituto de Investigaciones Tecnolgicas de Massachusetts) en los aos 70, y su xito se debe a que eliminaba la palabra microorganismo, comnmente asociada a patologa, por lo que ms que nada constituy un recurso lingstico; SCP puede ser la biomasa o un extracto proteico. Los factores que despertaron el inters en las SCP fueron: el miedo a que se agotaran las fuentes convencionales de protenas, el inters ecolgico y el descubrimiento de que los microorganismos se desarrollaban sobre el petrleo. Tradicionalmente los microorganismos ms usados en el cultivo sobre residuales han sido las levaduras (Sacharomyces, Klyveromyces y Candida, especficamente un mutante de gran tamao que se separaba por decantacin); microhongos, microalgas, bacterias, que por normativas sanitarias estn en desuso; cultivos mixtos, y en general microorganismos GRAS (Generally Recognized as Safe), listados por el PAG (Protein Advisory Group) de la FAO. Actualmente, esta industria se desarrolla para destinar la biomasa producida a la alimentacin animal.

Vol. XIX, N 2, 2007

15

hasta los estudios multigeneracionales (15 generaciones). No deben producir productos cancergenos. 5. Bajos costos. La SCP debe competir con la harina de pescado y la harina de soja. Requerimientos de los microorganismos que crecen sobre residuales: 1. Capacidad de crecimiento sobre varias fuentes de carbono (los efluentes tienen composicin variada y variable). 2. Gran eficiencia de conversin de substrato en biomasa. 3. Crecimiento a temperaturas elevadas y pH extremos. Esto elimina la necesidad de refrigerar, que encarece mucho, junto con la aireacin del proceso; adems evita la contaminacin al trabajar cerca de los extremos. Esto ofrece tambin la ventaja de realizar cultivos intensivos a cielo abierto. 4. Recogida simple de biomasa (decantacin, filtracin, floculacin, centrifugacin, en este orden de preferencia).

(182 C) y aireacin constante a un flujo promedio de 2 L/ min-1, siendo la ltima alternativa la ms factible, ya que garantiza reproducibilidad en los experimentos. Como medio de cultivo utilizado para el mantenimiento y desarrollo de los cultivos, puede ser usado el sugerido por Brown /13/ modificado. En el caso del P. cruentum, el medio idneo es el propuesto por Vonshak /14/, y puede someterse a las mismas condiciones de aireacin e iluminacin descritas para Chlorella.

Productos de inters qumicofarmacutico, obtenidos a partir de Chlorella y Porphyridium

Obtencin del extracto acuoso de Chlorella vulgaris, Beij.
Se prepara una suspensin homognea a partir de biomasa seca en polvo de C. vulgaris, 20:250 (P: V). Esta suspensin se somete a un tratamiento trmico breve a una temperatura prxima a la ebullicin; se centrifuga durante 20 min a 2 800 g. El sobrenadante se separa de la biomasa y se somete a una segunda centrifugacin para eliminar restos celulares. El extracto se congela a -20 C y se liofiliza. El extracto acuoso obtenido a partir de C. vulgaris (EC) tiene una concentracin proteica superior a la de carbohidratos, mientras que los cidos nucleicos representan el 9 % del residuo slido del extracto. Por otra parte, el extracto contiene Na, K, Mg, Cu, Zn y trazas de Fe, Ni y Mn; adems, una mezcla de aminocidos libres y tres pptidos de bajo peso molecular, capaces de permanecer en solucin a pesar de las temperaturas alcanzadas durante el proceso de obtencin, que le confieren valiosas cualidades nutritivas para los organismos organotrficos, ya que, de forma general, el medio funciona como un material proteico parcialmente digerido; ello, adems de la contribucin de los hidratos de carbono y el aporte de sales minerales. Por otra parte, el anlisis de aminocidos libres en el extracto crudo permite detectar la presencia de tres aminocidos esenciales: lisina, histidina y leucina, adems de una concentracin importante de cido

Ejemplos de producciones de SCP

Candida lypoltica (TROPINA); Methylophilus methylopha (PRUTEEN); Hansenula anomala, Candida utilis, Klyveromyces, Paecilomyces varioti, Chlorella vulgaris, Scendesmus quadricauda, Nizchia palea; siendo las tres ltimas especies de microalgas.

Cultivo de Chlorella vulgaris y Porphyridium cruentum

De forma general, el mantenimiento de las cepas se logra mediante cultivos stock, que se doblan peridicamente para mantener el crecimiento en fase logartmica. Los cultivos de C. vulgaris a escala de laboratorio, crecen de forma adecuada con una iluminacin de 70150 moles fotn m-2 s-1, proporcionada por tubos fluorescentes DAYLIGHT MAZDAFLUOR TF40/ 36W, con ritmo nictimeral 12:12, a temperatura ambiente o en cmara con temperatura controlada

16

Vol. XIX, N 2, 2007

glutmico, significativamente superior al resto de los aminocidos presentes en el extracto; siendo importante adems el contenido de alanina, prolina, asprtico y serina; sin embargo, existe un dficit del resto de los aminocidos. Los medios de cultivo naturales son ricos en compuestos solubles orgnicos e inorgnicos, y muy prcticos por su fcil obtencin y aplicabilidad industrial, a pesar de su variable composicin. Los extractos crudos pueden contener, segn la especie de microalga y su composicin especfica: carbohidratos, aminocidos, pptidos, protenas, vitaminas y otros factores de crecimiento, en proporciones variables, lo que est estrechamente relacionado con la metodologa de extraccin y las condiciones de cultivo.

El extracto hidroalcohlico de cuproclorofilinas ha sido evaluado como desinfectante y antisptico. El EHC es ms efectivo que el alcohol al 70 % frente a microorganismos tales como: Staphylococcus aureus, Salmonella typhimurium, Escherichia coli y Pseudomonas aeruginosa, y tan efectivo como el fenol al 2 % para E. coli y P. aeruginosa. El extracto es activo como desinfectante, garantizando la accin letal en 5 min de exposicin en presencia de interferencias como jabn y/o protenas, contaminantes comunes en cualquier proceso de desinfeccin; asimismo, es efectivo en la desinfeccin qumica de las ropas. Sin embargo, el inconveniente fundamental es que, adems de su accin desinfectante, acta como colorante, lo cual es importante tener en cuenta para su posible aplicacin. El EHC al 0,7 % en solucin hidroalcohlica acta como un desinfectante de amplio espectro con un tiempo de accin letal de 5 min, con el que se garantiza un 100 % de muerte despus de 1 min de exposicin. La obtencin de un extracto de cuproclorofilinas a partir de microalgas ofrece las ventajas inherentes de la materia prima, referido a productividad, rendimiento y fcil extraccin. Por otra parte, valoriza la biomasa, puesto que la materia prima para su obtencin es un subproducto del proceso de obtencin de tabletas a partir de biomasa miroalgal.

Obtencin del extracto hidroalcohlico de cuproclorofilinas (EHC) de Chlorella vulgaris Beij.

Para la extraccin de las clorofilas y la obtencin del extracto hidroalcohlico de cuproclorofilinas a partir de stas, se sigue un flujo operativo relativamente sencillo. La materia prima es un extracto alcohlico de pigmentos obtenido a partir de la biomasa hmeda o seca de cualquiera de las dos especies de microalgas. La extraccin alcohlica se hace con alcohol al 96 % durante 1h a temperatura ambiente, con agitacin constante y en condiciones de semioscuridad. Despus de centrifugar, el sobrenadante se somete a una hidrlisis alcalina, con el objetivo de romper la cadena fitlica, para lo que se utiliza una solucin de hidrxido de sodio. Se hace una particin con ter de petrleo, y despus de separar las fases, se hace un tratamiento cido a la fase alcohlica con una solucin de cido oxlico; con este tratamiento se elimina el tomo central de magnesio para sustituirlo luego por el de cobre, para lo cual se utiliza una solucin al 50 % de CuSO4. La fase alcohlica clarificada se rotaevapora. Con este paso se eliminan las trazas de metanol que pueden quedar en la solucin como consecuencia de la hidrlisis del anillo de ciclopropanona de la molcula de clorofila. El extracto obtenido se esteriliza por filtracin en un filtro bacteriolgico Sartorius con membrana de acetato de celulosa Nuflow (Oxoid) de 0,2 m.

Obtencin del hidrolizado proteico de Chlorella vulgaris, Beij.

Se prepara una suspensin al 10 % de biomasa seca y despigmentada de C. vulgaris; sta se somete a hidrlisis enzimtica durante 4 h con pancreatina (20 moles Tyr min-1 por gramo de biomasa), a 37 C, en un bao con temperatura controlada y agitacin continua. El pH se debe mantener entre 7,5 y 8 u. La reaccin se detiene por calentamiento a 100 C durante 15 min, y la mezcla resultante se centrifuga a 4 000 rpm, 10 min, separando el sobrenadante; ste se concentra bajo presin reducida en un rotaevaporador hasta un 10 % de materia seca y se somete a un secado por aspersin. Segn criterios especializados, la hidrlisis enzimtica de las protenas celulares constituye una

Vol. XIX, N 2, 2007

17

de las tendencias ms prometedoras para incrementar la digestibilidad de la biomasa algal. La hidrlisis representa una opcin para obtener biopreparados ricos en aminocidos libres y pptidos con diferentes pesos moleculares, que pueden ser empleados en cosmetologa, en la formulacin de productos bioestimulantes y alimentos especiales. Los carbohidratos constituyen aproximadamente el 15 % del hidrolizado proteico de C. vulgaris, mientras que las sales minerales hacen un aporte del 10 %; la relacin N-amnico/N-total presenta un valor superior al 40 %, lo que resulta apropiado para una asimilacin eficiente del producto. Por otra parte, el hidrolizado contiene una mezcla significativa de aminocidos libres y pptidos de bajo peso molecular. Es importante la concentracin de lys, aminocido limitante en cereales; adems, ste es rico en gly, ala, glu y asp, clasificados como dulces, al contribuir con las propiedades organolpticas de los hidrolizados /15/. El hidrolizado estimula de forma eficiente el crecimiento de diferentes especies de bacterias, hongos filamentosos y levaduras.

intraperitonealmente de forma repetitiva a ratones de la lnea Balb/c, estimula las funciones de los macrfagos peritoneales. Dicha fraccin, en una dosis de 50 g/ratn, increment de forma significativa el nmero de clulas del exudado peritoneal, observndose, adems, cambios en su morfologa. Por otra parte, los niveles de actividad de la enzima fosfatasa cida lisosomal se incrementaron, sugiriendo una posible estimulacin de la actividad metablica y funcional de las clulas del sistema fagocitario. Puede citarse adems que no se reporta la aparicin de granulomas ni otras alteraciones macroscpicas en los sitios de inoculacin y, en algunos casos, se ha observado un ligero incremento de la masa esplnica /15/.

Usos de las microalgas: aspectos de inters

Durante las ltimas dcadas, la utilizacin de las microalgas ha ganado inters. stas han sido utilizadas como modelo biolgico en la investigacin fundamental por su flexibilidad metablica y caractersticas fisiolgicas. El desarrollo de la biotecnologa microalgal ha permitido, no slo el desarrollo a escala comercial de cultivos de nuevas especies, sino la ampliacin de la lista de aplicaciones de estos microorganismos y las sustancias de inters qumico, farmacutico e industrial que de ellas se extraen. La microalga C.vulgaris ha sido una de las especies ms estudiadas en investigaciones relacionadas con la extraccin de sustancias biolgicamente activas, por las cualidades de su biomasa y la versatilidad de sus cultivos. De forma particular, la industria de explotacin de Chlorella se ha desarrollado en Japn y Taiwan, destinando la biomasa, fundamentalmente, a su uso como suplemento diettico y, en general, para la salud /16/. En los ltimos aos han aparecido trabajos sobre la aplicacin en biomedicina de los extractos acuosos de esta microalga /17-19/; Chlorella vulgaris crece rpidamente a elevadas temperaturas y tolera valores de 37 C, en condiciones de cultivo a cielo abierto.

Obtencin de polisacridos sulfatados a partir de Porphyridium cruentum, Visch.

El cultivo se desarrolla hasta la fase estacionaria de crecimiento; posteriormente, se separa por centrifugacin la biomasa, y el sobrenadante se trata con cloruro de cetil-piridinio al 10 % para precipitar los polisacridos cidos exocelulares. La fraccin precipitada se disuelve con cloruro de sodio 4 M, y posteriormente se dializa durante 12 h contra agua destilada. El dializado se precipita con etanol al 70 % y el precipitado se seca en estufa a 80 C hasta peso constante. Los efectos promotores de la salud humana atribuidos a las algas se han relacionado con la activacin de los mecanismos de proteccin inmunitaria, inherentes al organismo por sustancias naturales de elevado potencial teraputico, resultando de una importancia especial los polisacridos. La fraccin polisacardica PC-I, aislada a partir de cultivos de P. cruentum, y administrada

18

Vol. XIX, N 2, 2007

En condiciones normales de cultivo, la biomasa seca de Chlorella, obtenida a partir de cultivos a cielo abierto, puede llegar a tener un contenido proteico del 50-56 %, por lo que constituye una fuente valiosa de SCP con excelente calidad nutricional. Aunque ofrece grandes ventajas desde el punto de vista nutricional, la biomasa utilizada para la alimentacin debe ser sometida previamente a tratamientos adecuados de disrupcin celular, con el objetivo de exponer las protenas celulares a la accin de enzimas proteolticas, facilitando as su digestibilidad; esto se debe a que al igual que la mayora de las especies pertenecientes a la clase Chlorophyceae, las clulas de Chlorella vulgaris presentan una pared celular celulsica rgida, que dificulta su digestibilidad por animales monogstricos /4/. La utilizacin de los pigmentos no ha sido de inters comercial, por el contrario, los feofrbidos presentes en la biomasa procesada constituyen una limitacin para su utilizacin, ya que stos producen, despus de su ingestin, irritaciones de la piel en humanos debido a fenmenos de fotosensibilizacin. El Ministerio de Salud de Japn ha fijado el lmite de feofrbidos en productos de Chlorella, en 100 mg por 100 g de alga /10/; de aqu que sea necesario despigmentar la biomasa destinada a la elaboracin de tabletas, lo que adems de minimizar el riesgo de exceder los lmites de feofrbidos, mejora la aceptabilidad de las tabletas elaboradas a partir de esta microalga. Estos son algunos resultados de las investigaciones sobre bioderivados obtenidos a partir de microalgas; sin embargo, este campo es muy amplio e interesante, teniendo en cuenta la potencialidad de estos microorganismos, su rpido crecimiento, eficiencia de utilizacin de la luz solar y la versatilidad de los cultivos, al permitir la obtencin de varios bioderivados en un proceso nico. Por otra parte, las microalgas son tiles en la alimentacin animal y el tratamiento de residuales, como biofertilizantes y acondicionadores de suelos; desde el punto de vista ecolgico, su cultivo a escala comercial, a cielo abierto constituye una forma de

conservar la biodiversidad ex situ y una alternativa de la reforestacin en cuanto a la evolucin de oxgeno, contribuyendo a la minimizacin del efecto invernadero. Es por ello que representan un campo de actividad fundamental, sumamente atractivo.

Bibliografa
1. Borowitzka, M.A., Vitamins and fine Chemicals from MicroAlgae, in Micro-Algal Biotechnology, Borowitzka, M.A. & Borowitzka, L.J. (eds.). Cambridge Univ. Press. Cambridge, 1988, pp: 153-196. 2. Comas, Augusto, Conferencia sobre Ecologa de las Algas de Agua Dulce, Cienfuegos, 1992, (Material docente). 3. Cohen, Z., Products of Microalgae, in Handbook of Microalgae Mass Culture. Richmond, A. (ed.). C. R. C. Press. Florida, 1986, pp: 41-453. 4. Becker, E.W., (de.), Microalgae. Biotechnology and Microbiology. Cambridge Univ. Press. Cambridge, 1994, 293 pp. 5. Bourrelly, P., Les algues deau douce. Initiation la sytmatique. I. Les Algues vertes. Boube, N. & Cie, Pars, 1990, 572 pp. 6. Hansen.,J., Packard, J. & Doyle, W. 1981. Mariculture of red seaweeds. A California Sea Grant College Program Publication. TCSGCP-002. California. 7. De Pauw, N. & De La Noe, J., A Review of Production and Use of Microalgae: The Potential of Microalgal Biotechnology. Biotech. Adv., 1988, 6: 725-770. 8. Chapman, D. J., & Gellenbeck, K. W., An Historical Perspective of Algal Biotechnology. En: Algal and Cyanobacterial Biotechnology. Cresswell, R.C. Rees, T.A.V. & Shah, N. (eds.). Longman Scientific Technical Press. New York, 1989, pp: 1-23 9. Borowitzka, M.A., Algal biotechnology Products and Processes-Matching Science and Economics. J. Appl. Phycol., 1992, 4: 267-279. 10. Becker, E.W., Micro-Algae for Human and Animal Consumption. En: Micro-Algal Biotechnology, 1988, pgs. 222-256. 11. Gmez, L., Cultivo y aplicacin de las microalgas Dunaliella salina y Chlorella vulgaris en Cuba. Tesis de Doctorado. Servicio de aplicaciones, Universidad de Corua. La Corua, Espaa, 1997, 265 pp. 12. Abalde, J., Cid, A., Fidalgo, P., Torres, E. & Herrero, C., Microalgas: Cultivo y aplicaciones. Universidade da Corua, A Corua, 1995, 210 pp. 13. Brown, T.E., Richardson, F.L. & Vaughn, M.L., Development of red pigmentation in C. winmeri (Chlorophyta, Chlorococcales), 1967. Phycologia 6 (4): 12. 14. Vonshak, A., Porphyridium. En: Micro-algal Biotechnology. Borowitzka, M.A. & Borowitzka, L.J. (eds.). Cambridge Univ. Press. Cambridge, 1988, pp: 120-150. 15. Morris H. Comunicacin personal.

Vol. XIX, N 2, 2007

19

16. Richmond, A., Outdoor Mass cultures of Microalgae. Biological Principles. En: Handbook of Microalgal Mass Culture. Richmond, A. (de.). CRC Press. Boca Raton, Florida, 1986, pp: 285-330. 17. Hasegawa, T., Accelerated restoration of the leucocyte number and augmented resistance against E. coli in cyclophosphamide-treated rats orally administered with a hot water extract of Chlorella vulgaris. Int. J. Inmunopharm, 1990, 12 (8): 883-891. 18. Ibusuki , K. & Minamishima, Y., Effect of Chlorella vulgaris extracts on murine cytomegalovirus infections. Nat. Inmum. and Cell Growth Regul., 1990, (9):121-128. 19. Tanaka, K., Oral administration of Chlorella vulgaris augments concomitant antitumor immunit. Inmunopharm. Inmunotoxicol., 1990, 12 (2): 277-291. 20. Arredondo, J.L., Fertilizacin y fertilizantes: Su uso y manejo en la acuicultura. Universidad Autnoma Metropolitana. Unidad Iztapalapa, 1993, ISBN: 970-620266-8. 202 pp. 21. De Pauw, N. y Persoone, G., Micro-algae for aquaeculture. In: Micro-algal Biotechnology. Borowitzka, M. A. y Borowitzka, L. J. (eds.). Cambridge Univ. Press, Cambridge, 1988, 197-221 pp. 22. Di Marzio, Walto D., Definir el uso de protocolos de ensayos ecotoxicolgicos de alcance nacional. Universidad Nacional de Lujn. I Reunin de la SETAC. Buenos Aires, 1998, Argentina. 23. El Edib, M. A., Abou- Waly, H. F., El- Naby, A. M. H., Impact of Fuel Oil Freshwater Alga Selenastrum capricornutum. Bull. Environ. Contam. Toxicol, 1997, 59: 438-444. 24. Fargasova, A., Comparative study of triorgatonim compounds on various biological subjects. Ectoxicol & Environ. Saft., 1997, 38-42. 25. Herkovits, J., Ecotoxicologa y desarrollo sustentable. Acto de Apertura de la I Reunin de la SETAC, Buenos Aires, 1998, Argentina.

26. Herkovits, J., Evaluacin ecotoxicolgica de efluentes industriales. Acto de Apertura de la I Reunin de la SETAC, Buenos Aires, 1998, Argentina. 27. Kettrup, A. y Marth, P., Specimen Banking as an Environmental Surreillance Tool. Ed. Gerrit Schrmann & Bernard Market. John Wiley & Sons, Inc. (Part 2. Chemicals in the Environment), 1998, pp. 413-438. 28. Loza lvarez, S., El nanofitoplacton de las plantas de las bahas de Vita y Jururu, Cuba, 1994, 27: 90-106. 29. Porta, A., Desarrollo y aplicacin de indicadores bioqumicos (Biomarkers) de exposicin a metales pesados en diagnsticos de calidad de aguas superficiales. I Reunin de la SETAC. Buenos Aires, Argentina, 1998. 30. Senz M. E, Di Marzio. W. D, Tortorelli M, Alberdi J., Efectos de plaguicidas sobre algas verdes de agua dulce. Universidad de Lujn. Resmenes Reunin de la SETAC, Buenos Aires, Argentina, 1998. 31. _______, Toxicidad de efluentes industriales sobre microalgas (Chlorophyceae). Universidad de Lujn. I Reunin de la SETAC, Buenos Aires, Argentina, 1998. 32. Tukaj Z., The effect of crude and fuel oil on the growth, chlorophyll (a) content and dry matter production of algal Scenedesmus quadricauda (Berb). Environ Pollut, 1987, 47: 9-24. 33. Ukeles, R., American experience in the mass culture of microalgae for feeding larvae of the American oyester Crassostrea virginica. In: Algae Biomass. Production and Use. G. Shelef and C. J. Soeder Eds. Elsevier/ Nolland Biomedical Press. Amsterdam, 1980, 287-306 pp. 34. Webb, K. L. y Chu, R. L.E., G. D. Pruder, C. Langdon and D. Conklin (Eds), Proceedings of the Second International Shellfish Nutrition. Lousiana State University, Baton Rouge, L. A., Phytoplankton as a Food source for Bivalve Larvae, 1983, pp. 272-291. 35. Yfera, M. & Lubin, L. M., Effects of Microalgal diet on Growth and Development of Invertebrates in marine aquaculture. En: Introduction to Applied Phycology. Akatsuka, I. (ed.), pp: 209-227. SPB Academic Publishing bv. The Hague, 1990.

20

Vol. XIX, N 2, 2007