Microscopia de transmisie - Microscopia de reflexie

I. Noiuni teoretice Microscopul reprezint un instrument optic alctuit dintr-un ansamblu de dioptrii (sferici) i centrai ce are rolul de a forma imagini mult mrite ale unor obiecte de dimensiuni mici. Microscopul este alctuit din : - sistemul mecanic - sistemul electric - sistemul optic

Figura 2.1. Schema microscopului de transmisie i de reflexie (sistemul optic). Microscopia de transmisie: se folosete pentru preparate ce nu au grosimi mai mari de un micron i prezint un contrast bun. Microscopia de reflexie: se folosete pentru preparate ce nu permit o transmisie eficient a luminii. Obiectivul poate juca rol de condensor sau poate exista un condensor special dispus coaxial cu obiectivul. Sistemul mecanic (principalele elemente componente): -msua microscopului prevzut cu doi cavaleri (sau clrei) ce asigur fixarea preparatului pe msu.

-uruburi de punere la punct a imaginii (macroviza pentru acordul brut i microviza pentru acordul fin). -uruburi de centrare a componentelor optice pe acelai ax. -revolverul cu obiective i diafragmele (fante circulare cu diametrul variabil ce au rolul de a modifica fluxul de lumin pe preparat). Sistemul optic (principalele elemente componente): -condensorul focalizeaz razele de lumin ce vin de la surs, pe preparat. -obiectivul format dintr-un ansamblu de lentile convergente ce formeaz o imagine real, mrit i rsturnat. -ocularul format dintr-un ansamblu de lentile convergente ce formeaz o imagine virtual, mrit i dreapt. Sistemul electric (principalele elemente componente): -sursa de tensiune. -aparate de msur. Mrimi caracteristice microscopului: mrirea transversal:
y2 y1

unde: y2 = dimensiunea imaginii (perpendicular pe axa optic) y1 = dimensiunea obiectului (perpendicular pe axul optic) grosismentul: G
tg tg
2 1

G ob G oc

unde: 2 = unghiul sub care se vede obiectul privit prin microscop, 1 = unghiul sub care se vede obiectul atunci cnd este privit cu ochiul liber i situat la distana optim de citire (0.25m pentru un ochi normal), Gob = grosismentul obiectivului, Goc = grosismentul ocularului. puterea separatore: P
1 2n sin 1,22

unde: = distana dintre dou puncte ale obiectului care pot fi separate, n = indicele de refracie dintre preparat i obiectiv, = lungimea de und a radiaiei utilizate, = unghiul dintre axa optic i razele cele mai deprtate de ax care mai ptrund n obiectiv.

Figura 2.2. Reprezentare schematic a elementelor prezentate mai sus. II. Parte experimental A. Determinarea diametrului eritrocitelor Materiale necesare: preparat microscop micrometru ocular Mod de lucru: se aeaz preparatul pe msua microscopului i se pune la punct imaginea. Se nlocuiete ocularul cu micrometul ocular. Se localizeaz apoi o celul (eritrocit) i se determin diametrul n diviziuni (figura 2.3).

. Figura 2.3. Eritrocitele vzute la microscop prin micrometrul ocular. Diametrul n microni se calculeaz cu ajutorul formulei:
m div

1 100 , unde ( G ob G ob

40 )

Datele experimentale se trec n tabelul de mai jos. No. 1 ....

div m med n-1

S se determine intervalul de confiden i s se compare rezultatul obinut cu intervalul fiziologic admis n literatura de specialitate pentru hematii. B. Determinarea grosismentului obiectivului Materiale necesare: microscop micrometru obiectiv micrometru ocular Mod de lucru: se aeaz micrometrul obiectiv pe msua microscopului i se pune la punct imaginea. Se nlocuiete ocularul cu micrometul ocular. Se aliniaz cele doua scale la stnga i se caut diviziuni ce coincid att pe scala micrometrului obiectiv ct i pe cea a ocularului (figura 2.4).

Figura 2.4. Determinarea grosismentului obiectivului (n = numrul de diviziuni pe micrometrul ocular, m = numrul de diviziuni pe micrometrul obiectiv). Grosismentului obiectivului se calculeaz cu ajutorul formulei:
g ob n 10 m

Datele experimentale se trec n tabelul de mai jos. No. 1 ...... S se determine intervalul de confiden. n m gob gmed
n-1