Universidad de Chile Facultad de Ciencias Departamento de Qumica Licenciatura Ciencias mencin Qumica

Informe de Laboratorio Desviaciones de la Ley de Beer Equilibrio cido-base de verde de bromocresol (VBC)

Autores:

lvaro Etcheverry Valeria Hermosilla Fecha de entrega: 27/01/2012 e-Mail: aetcheverry@ug.uchile.cl 1

RESUMEN En este laboratorio se emplear la espectrofotometra UV-Vis, para determinar la concentracin de una muestra problema de una solucin de verde de bromocresol (VBC); los principios fsicos de este experimento provienen de la Ley de Beer y que se aplican a la espectroscopa de absorcin. La frmula global de VBC es C21H14Br4O5S, el cual funciona como indicador gracias a la formacin de un equilibrio cido-base, con 2 especies que absorben a distintas longitudes de onda (especficamente 450 y 615 nm). Utilizando mtodos digitales para encontrar un ajuste ptimo se encontr un valor de pKa de 4,89 con un error de 1,9%, una absortividad a 450 nm de 17071 (L mol -1 cm-1) con un error de 2,5%, y una absortividad a 615 nm de 37019 (L mol-1 cm-1) con un error de 4,3%. INTRODUCCIN La espectrofotometra UV-Vis, se basa en los principios fsicos de una espectroscopa de absorcin. Al considerar un haz de radiacin que pasa de forma paralela a travs de una capa de solucin de l cm de espesor y que contiene una especia qumica que absorbe a la longitud de onda del haz de radiacin cuya concentracin es c; entonces, debido a la interaccin entre las partculas absorbentes y los fotones, la potencia de entrada P cambia a Po debido a un efecto de atenuacin, de acuerdo a la siguiente expresin: T= P Po (1)

Donde T es la transmitancia, la que por lo general se expresa como porcentaje. Por otro lado, la absorbancia de una solucin est descrita por: A = log T = log Po P (2)

Segn la Ley de Beer, la absorbancia de una solucin es proporcional al espesor de la capa de solucin y a la concentracin de la especie absorbente (los trminos b y c mencionados anteriormente).
A bc A = l c

(3)

Donde corresponde a la constante de proporcionalidad, llamada absortividad molar, corresponde al espesor de la capa de solucin, tambin denominado paso ptico, y c que corresponde a la concentracin de la especie absorbente. La ecuacin (1) es la expresin matemtica de la Ley de Beer, sin embargo, existe un rango lineal en donde la aproximacin de la Ley de Beer es aplicable y por ende existen diversos tipos de desviaciones observadas en la realidad. Algunas de estas desviaciones se deben a la forma con la que se miden las absorbancias y otras debido a 2

los cambios qumicos asociados a la concentracin (por ejemplo, un equilibrio cidobase). En el caso del Verde de Bromocresol (VBC), de acuerdo al pH en que se encuentre puede encontrarse en 2 formas y en medio bsico este se encuentra en estado de resonancia, segn la Figura N1.

Figura N1: Ecuacin de disociacin y la forma bsica resonante para el VBC1. Segn la ecuacin de equilibrio, tenemos lo siguiente: HIn H + + In Ka = [H + ][In ] [HIn] (4)

Como se ve en la Figura N2, el VBC absorbe a distintas longitudes de onda, de acuerdo a la forma en que se encuentra (cida o bsica), debemos saber la concentracin de la especie que absorbe a cierta longitud de onda.

Figura N2: Espectro UV-Vis para el VBC2.

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http://en.wikipedia.org/wiki/File:Bromocresol_green_ionic_equilibrium.png http://en.wikipedia.org/wiki/File:Bromocresol_green_spectrum.png

A pH cido, el VBC tiene un mximo de absorbancia a 450 nm, por lo tanto para calcular la absorbancia debemos encontrar una ecuacin que dependa de la concentracin de la especie HIn. En primer lugar podemos considerar que la concentracin de protones es igual a la concentracin de la especie In-, por lo tanto: [H + ] = [In ] = y [HIn] = Co y Y sustituyendo en la ecuacin (1): K a K a2 + 4 KCo y= 2 Multiplicando por 450 y : A450 = ( K a + 2Co ) ( Ka + 2Co ) 2 4Co 2 450 l 2 (5)

Luego, si consideramos que las concentraciones de H+ e In- no son iguales obtenemos la siguiente ecuacin: C C y = H o K a + CH C C A450 = H o K a + CH

450 l

(6)

A pH bsico, la especie predominante ser la especie In-, y tendr su mxima absorbancia a 615 nm; haciendo las mismas suposiciones que para el caso anterior, se obtienen dos ecuaciones: A615 = A615 K a K a 2 + 4 Ka Co 615 l 2 K a Co = 615 l K a + CH (7) (8)

Donde: - Ka corresponde a la constante de acidez del VBC. - Co corresponde a la concentracin analtica de VBC (en mol/L). - 450 corresponde a la absortividad molar a 450 nm (L mol-1 cm-1). - 615 corresponde a la absortividad molar a 615 nm (L mol-1 cm-1). - CH corresponde a la concentracin de H+ (en mol/L). - corresponde al paso ptico, que para todos los casos corresponde a 1 cm. 4

PARTE EXPERIMENTAL 1. Datos brutos obtenidos: Se prepararon distintas soluciones a partir de una solucin patrn que contena 18,06 mg de VBC aforada a 250 mL, segn las diluciones indicadas en la Tabla N1. Posteriormente, mientras se iban obteniendo las absorbancias se fue midiendo el pH de cada una de las soluciones. Muestra Vol. sol. Vol. agua pH 0 Blanco 0 15.0 6.10 1 1.0 1.0 5.80 2 2.0 13.0 5.69 3 3.0 12.0 5.49 4 4.0 11.0 5.3 5 6.0 9.0 5.14 6 8.0 7.0 5.03 7 10.0 5.0 4.98 8 12.0 3.0 4.88 9 15.0 0.0 4.75 Tabla N1: Diluciones realizadas y el respectivo pH de cada una. Se midieron dos veces las absorbancias de cada muestra para cada longitud de onda (450 y 615 nm), se obtuvieron los valores mostrados en la Tabla N2. Muestra 0 (Blanco) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Conc. VBC (mol/L) 0 Medicin 1 Abs A Abs A 450 nm 615 nm 0 0 Medicin 2 Abs A Abs A 450 nm 615 nm 0 0 0.04 0.04 0.04 0.04 0.04 0.04 0.04 0.04 0.04

6.9E-6 0.037 0.04 0.263 0.04 0.040 0.04 0.252 1.38E-5 0.098 0.04 0.433 0.04 0.090 0.04 0.445 2.07E-5 0.161 0.04 0.611 0.04 0.131 0.04 0.610 2.76E-5 0.252 0.04 0.668 0.04 0.215 0.04 0.725 4.14E-5 0.385 0.04 0.891 0.04 0.388 0.04 0.881 5.52E-5 0.564 0.04 1.068 0.04 0.541 0.04 1.035 6.9E-5 0.772 0.04 1.140 0.04 0.745 0.04 1.085 8,28E-5 0.972 0.04 1.338 0.04 0.912 0.04 1.296 1,04E-5 1.249 0.04 1.426 0.04 1.158 0.04 1.537 Tabla N2: Absorbancias de las soluciones de VBC a 450 y 615 nm.

2. Tratamiento de datos: En primer lugar, se calcularon las concentraciones de VBC en cada una de las muestras, tanto en mol/L como en ppm, segn se muestra en la Tabla N3. 5

Conc. Conc. mol/L ppm 0 (Blanco) 0 15.0 0 0 1 1.0 1.0 6.9E-6 4.82 2 2.0 13.0 1.38E-5 9.63 3 3.0 12.0 2.07E-5 14.45 4 4.0 11.0 2.76E-5 19.26 5 6.0 9.0 4.14E-5 28.90 6 8.0 7.0 5.52E-5 38.53 7 10.0 5.0 6.9E-5 48.16 8 12.0 3.0 8,28E-5 57.79 9 15.0 0.0 1,04E-5 72.24 Tabla N3: Concentraciones de VBC en cada una de las muestras, en mol/L y en ppm. Tambin se calcul la concentracin de protones en cada una de las soluciones como se muestra en la Tabla N4. Conc. [H+] (mol/L) 0 Blanco 6.10 7.94E-07 1 5.80 1.58E-06 2 5.69 2.04E-06 3 5.49 3.24E-06 4 5.3 5.01E-06 5 5.14 7.24E-06 6 5.03 9.33E-06 7 4.98 1.05E-05 8 4.88 1.32E-05 9 4.75 1.78E-05 Tabla N4: Concentraciones de protones para cada una de las muestras en mol/L. Muestra pH Finalmente, se calcul el promedio de las absorbancias para obtener un slo valor por cada muestra para longitud de onda, como se resume en la Tabla N5, y as poder graficarlo usando el programa OrginPro 8.5.

Muestra

Vol. sol.

Vol. Agua

<A> 615 nm 0 0.258 0.04 2 0.094 0.439 0.04 0.04 3 0.146 0.611 0.04 0.04 4 0.234 0.04 0.697 0.04 5 0.387 0.04 0.886 0.04 6 0.553 0.04 1.052 0.04 7 0.759 0.04 1.113 0.04 8 0.942 0.04 1.317 0.04 9 1.204 0.04 1.482 0.04 Tabla N5: Absorbancias promedio de cada muestra para las distintas longitudes de onda. Con los datos anteriores se procedi a graficarlos en el programa OriginPro 8.5 y posteriormente se realiz el ajuste correspondiente para obtener la mejor curva posible. En base a los ajustes, se subdividieron bsicamente en dos grupos considerando las ecuaciones (5), (6), (7) y (8), y se fijaron alternadamente los dos parmetros que se buscaban (Ka y ), a fin de obtener la mejor curva. Para la absorbancia a 450 nm, se obtuvo el siguiente grfico, cuando no se considera la concentracin de H+: Grfico N1: Absorbancia a 450 nm, sin considerar la concentracin de H+.

<A> 450 nm 0 (Blanco) 0 1 0.039 0.04

Muestra

A450 =

( K a + 2Co ) ( Ka + 2Co ) 2 4Co2 450 2 K a = 1,53E 5; Ka = 2, 2 E 6

450 = 17211; 450 = 545

2 red = 0, 063

Para la absorbancia a 450 nm pero ahora considerando la concentracin de H+, se obtuvo el grfico N2: Grfico N2: Absorbancia a 450 nm, considerando la concentracin de H+.

CH Co 450 K a + CH K a = 6, 76 E 6; Ka = 1,1E 6 A450 =

450 = 16931; 450 = 339

2 red = 0,863

Para la absorbancia a 615 nm, se obtuvo el Grfico N3, donde no se considera la concentracin de H+.

Grfico N3: Absorbancias a 615 nm, sin considerar la concentracin de H+.

 K a + K a2 + 4 Ka Co 615 2 K a = 2, 49 E 5; Ka = 1,5 E 6 A615 =

450 = 38283; 450 = 3801

2 red = 2,173

Finalmente se obtuvo el siguiente grfico para la absorbancia a 615 nm, considerando la concentracin de H+.

Grfico N4: Absorbancia a 615 nm, considerando la concentracin de H+. 10

K a Co 615 CH + K a K a = 1, 08 E 5; Ka = 2,1E 6 A615 =

450 = 35754; 450 = 3756

2 red = 2, 279

En la Tabla N6, se muestra un resumen de los resultados obtenidos: Absorbancia a 450 nm, sin considerar [H+] Absorbancia a 450 nm, considerando [H+] Absorbancia a 615 nm, sin considerar [H+] Absorbancia a 615 nm, considerando [H+] Ka Ka 1,53E-5 2,2E-6 6,76E-6 1,1E-6 Ka/ Ka 14,38% 16,27% pKa 4,81 5,17 17211 545 16931 339 38283 3801 35754 3756 / 3,17% 2,00% 2red 0,06 3 0,86 3 2,17 3 2,27 9

2,49E-5 1,5E-6 1,08E-5 2,1E-6

6,02% 19,44%

4,60 4,97

9,93% 10,51 %

Tabla N6: Resumen de los resultados obtenidos. 11

DISCUSIN En base a los resultados obtenidos de la Tabla N6, podemos observar que el mejor ajuste se efecta para las mediciones a 450 nm, lo que se aprecia en el 2red cercano a 0, mientras que para las mediciones a 615, el ajuste posee un 2red cercano a 2. En cuanto a los errores asociados a los valores obtenidos para los parmetros, podemos observar que corresponden a porcentajes que fluctan entre un 6 y 20%. Se obtuvo un pKa experimental de 4,89, mientras que la literatura informa de un pKa 4,8 3, mientras que las absortividades molares halladas fueron de los valores obtenidos (17071 y 37019 L mol-1 cm-1, para 450 y 615 nm respectivamente), son bastante cercanos a los reales (17500 y 35500 L mol-1 cm-1 para 450 y 615 nm respectivamente). Es interesante notar que ninguna de las curvas sigue un comportamiento lineal a altas concentraciones, por lo que se presenta una desviacin en la Ley de Beer. Esto puede deberse a tres causas: desviaciones instrumentales (que ocurren como consecuencia de la forma en que est midiendo la absorbancia), desviaciones qumicas (que ocurren como consecuencia de procesos de disociacin, asociacin o reaccin con el solvente por parte de la especie absorbente), y desviaciones reales (debido a que la Ley de Beer describe bien el comportamiento de la absorbancia en soluciones diluidas y se producen desviaciones significativas por sobre los 0,01 mol/L). Podemos descartar las desviaciones instrumentales debido a que se utilizaron haces radiantes monocromticos y adems a que cada medicin se realiz dos veces; por otro lado podemos descartar las desviaciones reales de la Ley de Beer debido a que trabajamos a concentraciones menores a 0,01 mol/L, as que slo podemos asociar las desviaciones encontradas en nuestro experimento a desviaciones qumicas producidas por algn cambio en la concentracin. Por ejemplo, de acuerdo a la estructura de la especie que se encuentra en medio bsico (Figura N1) nos encontramos con estructuras resonantes de estabilidades similares, por lo que es probable que a mayor concentracin sea una de ellas la que predomina, lo que causara una desviacin en la linealidad esperada por la Ley de Beer. En general, podemos decir que una desviacin positiva en la Ley de Beer se debe por un aumento de la concentracin de una especie absorbente (en el caso de la absorbancia a 450 nm), mientras que una desviacin negativa se produce debido al aumento de concentracin de una especie no absorbente en la longitud de onda irradiada (como es el caso de la absorbancia a 615 nm). Como es posible observar, cuando las especies absorbentes se encuentran involucradas en un equilibrio cido-base, la Ley de Beer no se cumple, para evitar esto, se sugiere trabajar en soluciones bffer o cuya fuerza inica sea constante, o que se opere a una longitud de onda donde las especies involucradas posean la misma absortividad molar (que para el caso del VBC, se encuentra alrededor de los 515 nm). Otros tipos de desviaciones qumicas podran ser la formacin de complejos, reacciones con el solvente o reacciones de polimerizacin. Una forma de eliminar las desviaciones qumicas de la Ley de Beer es encontrar una expresin que permita calcular la concentracin de la especie absorbente a medida que esta va cambiando con alguna variable, como por ejemplo el pH. Este mtodo fue el
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WEAST, Robert C., Editor-in-Chief. Handbook of Chemistry and Physics, 65th Edition. EEUU, CRC Press Inc., 1985. pp D-151.

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utilizado en este laboratorio para encontrar un valor para Ka y para , utilizando un software (OriginPro 8.5). CONCLUSIONES Es posible utilizar la espectrofotometra para calcular Ka y para un indicador cido-base, simplemente conociendo las longitudes de onda de mxima absorcin para las distintas especies y realizando una serie de mediciones adecuadas. No es posible aplicar la Ley de Beer como forma lineal para cualquier solucin, existen limitaciones que producen desviaciones a la linealidad. Tenemos 3 tipos de desviaciones: instrumental, qumica y real. Para nuestro experimento es posible descartar las desviaciones instrumentales y reales, debido a los criterios utilizados para las mediciones y a que se trabaj con soluciones de concentracin menor a 0,01 mol/L. Debido a que la especie absorbente en nuestro laboratorio sufre un equilibrio cido-base cuando no se utilizan soluciones tamponadas, se sufren desviaciones a la linealidad de origen qumico. Utilizando una metodologa de software fue posible obtener una forma mejorada de la Ley de Beer para ser aplicada a una especie que sufre un equilibrio cidobase y de esta manera obtener una expresin que permita ser aplicada para el estudio de soluciones de VBC a distintas longitudes de onda. Los datos obtenidos mediante metodologa de software resultaron ser bastante cercanos a los de la literatura con errores. Los errores obtenidos fueron de 1,9% para el pK a, 2,5% para la absortividad molar a 450 nm, y de 4,3% para la absortividad molar a 615 nm. Cabe notar que el error ms alto recay sobre la absorbancia a 615 nm, lo que era de esperarse de acuerdo a lo visto en clases. BIBLIOGRAFA SKOOG, Douglas A. y West, Donald M. Anlisis Instrumental, 2da Edicin. Mxico, McGrawHill, 1992. Pp 158-163.

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