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HIPERSENSIBILIDAD ALERGIA ALIMENTARIA

El estudio de la hipersensibilidad alimentaria ha estado repleto de confusiones, restricciones dietticas innecesarias y de errores diagnsticos. La ltima clasificacin de la hipersensibilidad a alimentos respaldada por la WAO en 2003 es la de la comisin de Nomenclatura de la Academia Europea de Alergia e Inmunologa Clnica. Se propone que cualquier reaccin adversa a alimentos se defina como hipersensibilidad alimentaria; dentro de stas, las reacciones mediadas por mecanismos inmunolgicos se definen como alergia a alimentos (mediadas o no mediadas por IgE) y las reacciones no inmunolgicas se definen como hipersensibilidad no alrgica a alimentos (previamente conocidas como intolerancia). Esta ltima puede deberse a: a) Intolerancia por deficiencias enzimticas. b) A reacciones farmacolgicas debidas a los constituyentes naturales de los alimentos. c) O a que existan reacciones de mediacin bioqumica todava no descubiertas. Una persona come a lo largo de su vida unas 3 toneladas de alimentos diferentes. En condiciones normales el sistema inmune tolera los alimentos y reacciona frente a patgenos. Pero puede responder de una forma exagerada frente antgenos alimentarios. El tracto gastrointestinal es el mayor rgano linftico del organismo. Hasta los dos aos, en que se desarrolla totalmente la barrera intestinal, es posible la absorcin de macromolculas enteras y el sistema linftico puede reconocer eptopos conformacionales. Las barreras inespecficas son el cido gstrico, el moco, las enzimas digestivas y el peristaltismo. Las inmunolgicas son la IgA e IgM secretoras. Los linfocitos T y B reconocen los antgenos, pero no son capaces de distinguir entre elementos nocivos y no. La clave est en las placas de Pller. Tienen un centro germinal con clulas B productoras de IgA. Estn rodeadas de clulas M que transportan los antgenos a las clulas dendrticas internas que lo procesan para presentarlo a las clulas B. Estas son inducidas a producir IgA por el influjo del TGFbeta producido por las clulas T y se produce un estado de tolerancia oral. Las clulas dendrticas son capaces de regular la produccin de IgA secretora en el tracto gastrointestinal y suprimir a las clulas T, provocando la tolerancia. Las clulas epiteliales del intestino realizan la misma funcin y son capaces de hacer tolerantes a las clulas dendrticas anulando su capacidad inflamatoria y hacindolas liberar IL-10 e IL-6 pero no IL-12, provocando una respuesta Th2 de tolerancia. Estas clulas estn muy unidas pero en caso de inflamacin se abren estos espacios y permiten el paso de gran cantidad de antgenos.

EPIDEMIOLOGIA DE LA HIPERSENSIBILIDAD ALERGICA La prevalencia de la alergia a alimentos es ms alta en la infancia (6-8%), que en la edad adulta que se estima en un 2% de la poblacin (3). El motivo es que es durante los primeros aos de vida cuando se introducen la mayora de alimentos potencialmente alergnicos en la dieta y cuando se establecen los mecanismos de tolerancia inmunolgica. Segn los datos del estudio multicntrico espaol Alergolgica (3), los principales alrgenos alimentarios en nios son la leche (82%), el huevo (76%) y el pescado (50%). En Israel, el tercer alergeno alimentario mas importante es el ssamo que se incluye tempranamente en la dieta del lactante y en Italia los cereales. El cacahuete es el alrgeno mas importante en EEUU aunque el consumo es igual que en China. Esto es debido a que en China se consume hervido o muy fritos y en EEUU tostados, lo que aumenta su alergenicidad. En Espaa son muy importantes las frutas, y sus alrgenos tienen relacin con alrgenos de los plenes ms predominantes en cada zona. METODOS DIAGNOSTICOS EN LA HIPERSENSIBILIDAD ALERGICA En la alergia alimentaria los datos de la anamnesis, y que son tan fundamentales en otras enfermedades para establecer el diagnstico se han de confirmar mediante pruebas de provocacin alimentaria. Adems deben registrarse los sntomas objetivados, el intervalo transcurrido entre la ingesta del alimento y el inicio de los sntomas, la cantidad de alimento necesaria para producir sntomas y la frecuencia con que esta reaccin se ha presentado en el pasado. Tras la eliminacin de la dieta del alimento sospechoso, si los sntomas persisten, puede quedar descartado. Si al reinstaurar el alimento en la dieta se repiten los sntomas, es preciso efectuar una prueba de provocacin. Las dietas de eliminacin no son muy tiles para el diagnstico si los sntomas son ocasionales o espordicos. Es mejor que el paciente anote diariamente los alimentos que consume y los relacione con los sntomas, aunque esto es muy tedioso. En la exploracin hay que poner especial cuidado en el estado de la piel y tambin explorar los aparatos respiratorio y digestivo. Las pruebas cutneas son seguras y especficas con alto valor predictivo negativo. Miden la activacin de los mastocitos cutneos. Una prueba cutnea negativa prcticamente excluye la sensibilizacin al alimento, pero una positiva debe supeditarse a los resultados de la provocacin. Se pueden realizar en nios menores de 2 aos, aunque su sensibilidad es menor, tienen una gran especificidad. La elaboracin

de los extractos diagnsticos con alimentos complica el diagnstico. Los alergenos purificados son mejores que los recombinantes, obtenidos por recombinacin de cidos nucleicos in vitro. Sin embargo estos ltimos son reproducibles y fcilmente estandarizables. Adems no existen todas las isoformas naturales. Con frutas y vegetales es mejor el prick, teniendo en cuenta que la piel es ms alergnica que la pulpa, y que hay diferente alergenicidad entre variedades de la misma especie. Tambin hay que tener en cuenta el procesado del alimento: La manzana, avellana y apio pierden su alergenicidad tras calentamiento pero en el caso del cacahuete, la lenteja o la lapa la aumentan por la aparicin de neoantgenos. Es preciso una correcta caracterizacin y cuantificacin de la actividad biolgica de los alrgenos principales. Si la reaccin fue de anafilaxia, mejor es evitar las pruebas y medir la IgE especfica. La triptasa se eleva a los 60-90 minutos del inicio de la anafilaxia y se mantiene 6 horas. Otras pruebas cutneas son las pruebas de parche con alrgenos. No tienen utilidad en la alergia a alimentos mediada por IgE, pero se han utilizado en el diagnstico de dermatitis tpica por leche, huevo y trigo y en las reacciones tardas a alimentos, sobre todo a trigo y en esofagitis eosinoflicas. Se pueden encontrar respuestas irritantes (8). Determinacin de IgE especfica Existe correlacin entre la gravedad de la clnica con la presencia de IgE frente a gran diversidad de eptopos. Es un test altamente sensible y muy rentable con alimentos como leche, huevo, cacahuete, pescado y ms baja para frutas y otros vegetales. .Se han establecido puntos de corte de valores de IgE que se correlacionaran con una positividad en la prueba de provocacin y la obviaran. En cuanto a otras tcnicas in vitro, no hay ningn anlisis que haya logrado sustituir a las pruebas de provocacin aunque la deteccin de IgE especfica por CAP es altamente fiable. No sirve de nada la determinacin de IgG, IgA o IgM especfica. El tests citotxico (ALCAT) no es reproducible ni avalado por la literatura cientfica. Otros tests como la kinesiologa, neutralizacin, pulso, electrotrmico, no tienen valor (3). Pruebas de provocacin controlada con alimentos. Recientemente la EAACI ha publicado la gua de la provocacin con alimentos, prueba altamente diagnstica, pero con riesgo. No se debe hacer en caso de anafilaxia o reaccin sistmica grave o si la historia es altamente sugestiva, repetida y reciente con estudio alergolgico previo concordante. Tampoco se debe hacer en pacientes que no puedan recibir adrenalina, tratados con beta-bloqueantes, IECA, etc. Se precisa dieta de eliminacin previa, ingreso y va.

Prueba labial Se aplica una gota del alimento en la parte interna del labio y se observa lo que pasa a los 15 minutos Diagnstico desglosado por componentes: alrgenos purificados Son mas estables, estandarizables y pueden ser producidos en grandes cantidades. Se han sintetizado mas de 40 alrgenos recombinantes. Al probar diferentes protenas de un alimento, nos ayuda a investigar diferencias geogrficas de sensibilizacin y las reactividades cruzadas, como la alergia tipo II a alimentos debida a un sensibilizante primario polnico. Tambin descartan sensibilizaciones subclnicas por Ig E de baja afinidad debido a reactividades cruzadas. Diagnstico desglosado por componentes: Eptopos de alrgenos Los pacientes que poseen anticuerpos IgE frente a eptopos secuenciales padecen con ms frecuencia alergia persistente al alimento y es ms grave, que el que responde a eptopos conformacionales que evolucionan a la tolerancia en menos tiempo. Por ejemplo, la presencia de IgE frente a eptopos AA 123-132 de la alfa1 casena es marcador de persistencia de la hipersensibilidad a la leche. Paneles diansticos de alrgenos o eptopos La aplicacin de los ensayos de hibridacin de cidos nucleicos a gran escala (micromatrices o microarrays) ha hecho posible que podamos disponer de chips o paneles de alrgenos o eptopos, pegados a una placa de slice, pudindose utilizar miles en un solo ensayo. Esto nos permitira saber el mapa de sensibilizacin de un paciente, su relevancia clnica, las posibles reactividades cruzadas y el pronostico de su enfermedad. INMUNOPATOLOGIA DE LA ALERGIA ALIMENTARIA El tracto gastrointestinal forma parte de un sistema inmunolgico de musosas (MALT), del que forma parte tambin el tejido bronquial, nasofarngeo, mamario, lagrimal, genitourinario , es decir, todas las vas por donde puede entrar un Ag. En el MALT hay zonas inductoras de facilitacin de entrada y procesamiento del Ag y zonas efectoras donde residen los linfocitos B y T. La entrada normal de macromolculas est regulada por las clulas M que cubren las placas de Peller y muestran el Ag al tejido linftico subyacente. Esta absorcin de

macromolculas permite en los recin nacidos en paso de protenas maternas como las inmunglobulinas y factores de crecimiento beneficiosos. Pero si en un adulto la barrera se deteriora, el paso de estas protenas puede tener consecuencias clnicas. Se ha visto un aumento de permeabilidad del MALT en asmticos, por ello se considera que en la alergia alimentaria unida a asma hay un fallo general del MALT. La mayora de las macromolculas son absorbidas en el intestino delgado y presentadas a los linfocitos T y B en ausencia de clulas dendrticas, siendo inhibida la activacin del linfocito T y producindose una tolerancia. Pero si las protenas escapan a la digestin y alcanzan el ileo terminal, son procesadas por las clulas dendrticas tras su paso a travs de las clulas M, con lo que el linfocito T recibe seales de activacin se activan en las placas de Pller y viajan a travs de los folculos linfoides a la circulacin general. De ah, los linfocitos migran a los rganos diana del MALT donde reciben un trofismo especfico determinado genticamente por el que se van a asentar en los rganos efectores correspondientes a las zonas inductoras donde inicialmente respondieron al antgeno, dando lugar a las diferentes formas clnicas. Una vez all, cada vez que se produzca la llegada del Ag, los linfocitos T y B asentados liberarn sus mediadores inflamatorios (15-20). PANALERGENOS VEGETALES: APLICACIN CLINICA DE LA

CARACTERIZACION Y PURIFICACION DE ALERGENOS VEGETALES Las protenas de plantas presentes en alimentos se pueden clasificar en 3 grupos
1.

Protenas de reserva: se acumulan sobre todo en las semillas de plantas superiores. Protenas estructurales, catalticas y reguladoras, que se sintetizan en pequeas cantidades en respuesta a factores ambientales. En ellas se incluyen las profilinas, la beta fructofuranosidasa en tomate y la glixalasa I del arroz.

2.

3.

Protenas de defensa: frente a invasiones de patgenos y plagas (virus, bacterias, hongos, insectos, nematodos)

1. Protenas de reserva Su funcin es el suministro de nutrientes durante la germinacin. Se clasifican en dos superfamilias: prolaminas y cupinas, con secuencias de aminocidos muy diferentes pero que comparten dominios conformacionales. Alguna de estas protenas se emplea en el procesado de productos alimenticios con el fin de conferirles propiedades de viscosidad, tensoactivas, etc. Por lo que pueden encontrarse en alimentos sin etiquetar.

Las fuentes de protenas de reserva son los cereales, legumbres, frutos secos y especias. a) Superfamilia de las prolaminas: son protenas de gran importancia en el procesado de alimentos. Incluye dos grupos: Las prolaminas propiamente dichas (en harinas y cereales) y las albminas. -Prolaminas: Son protenas insolubles en agua, ricas en aminocidos prolina y glutamina. Pueden causar alergia por inhalacin por harina en asma del panadero) o por ingestin (con clnica de dermatitis atpica o anafilaxia inducida por el ejercicio). Aunque en el asma del panadero estn involucradas esencialmente enzimas inhibidoras de alfa amilasa, acil-CoA oxidasa, peroxidasa y otras enzimas, tambin se ha demostrada la implicacin de diferentes tipos de gliadinas. En anafilaxia inducida por el ejercicio y dependiente de la ingestin de trigo est demostrada su asociacin a la gliadina (26), de 53 KDa, protena recientemente clonada y secuenciada, con notable identidad con las alfa-secalinas de arroz y la hordena de la cebada. Se ha demostrado reactividad cruzada entre estos alrgenos y la gliadina omega-5 que se activa en el intestino durante el ejercicio formando grandes complejos de alrgeno capaces de producir reaccin anafilctica. La gliadina omega-5 es un alrgeno mayoritario en nios con alergia inmediata tras la ingestin de trigo. -Albminas 2S: Son protenas solubles con coeficiente de sedimentacin de 2. Son alrgenos mayoritarios de las leguminosas, frutos secos y especias y son el grupo mas conocido de la familia de las prolaminas, com PM de 10-14 KDa y 90 a 135 aminocidos. Son ricas en aminocidos nitrogenados (glutamina y arginina) y sulfurados (cistina) para suministrar nitrgeno, azufre y carbono durante la germinacin. Contienen mucha metionina por lo que se utilizan en biotecnologa para mejorar las propiedades nutricionales de otras semillas como la soja. Actan en la defensa frente a bacterias gram positivos, hongos, inhibidores de sernproteasas y actividad antagonista de la calmodulina. Las albminas 2S pueden acceder al organismo por ingesta de la semilla o por inhalacin de la harina obtenida en su molturacin. Son alrgenos relevantes en la alergia causada por la mostaza, cacahuete, nuez del brasil, nuez inglesa, pipas de girasol, ssamo, guisante, almendra, avellana, anacardo soja y col. Tambin tienen albminas 2S, colza y semillas de algodn causando alergia ocupacional. Las albminas 2S son codificadas por familias multignicas por eso tienen gran polimorfismo y en una misma semillas las hay parecidas pero no idnticas. Se han descrito ms de 15 albminas 2S, en ms de 10 especies vegetales. El alrgeno ms conocido es el Sin a 1 de la mostaza amarilla (Sinapsis alba). Las mostazas tiene gran proximidad filigentica por que pertenecen ambas a la familia Brassicaceae (nabos,

rbanos, coles, coliflor y brcoli) por lo que hay reactividad cruzada entre ellos. Otras albminas 2S como las del ricino, cacahuete o girasol tiene baja reactividad cruzada por la gran diferencias entre las plegamiento conformacional de las albminas 2S es similar a regiones hipervariables. El las LTPs (lipid transporting protein), inhibidores de alfaamilasa/tripsina de cereales y la proteina hidrofbica de soja. Las albminas 2S son muy estables ante tratamientos trmicos y enzimas proteolticos, pues son compactas y con muchos puentes disulfuro por lo que alcanzan el epitelio gastrointestinal de forma intacta e interacciona con los lpidos que facilitan su absorcin. b) Familia de las cupinas: Presentan dominios caractersticos de barril beta tipo cupina. Se encuentran en numerosas mono y dicotiledoneas. Tienen 3 tipos de protenas: globulinas 11S o leguminas, 7S o vicilinas y germinas. Se han encontrado en la soja, cacahuete, nuez, almendra, trigo, lenteja, guisante, pimienta, mostaza y naranja. -Las germinas tienen gran solubilidad, carcter glicoproteico y estabilidad frente a agentes desnaturalizantes como tratamientos trmicos y enzimas proteolticas. Se sintetizan en paredes celulares de embriones de cereales y se expresan en etapas tempranas de su germinacin. Aparecen en plantas adultas tras la agresin por agentes biolgicos o ambientales (ayuno, calor, deshidratacin). La GPL de pimienta es el primer miembro de una nueva familia de defensa de plantas: la PR-16. -Las cupinas pueden producir radicales perxido, con actividad cataltica. La GLP del trigo y de la Arabidopsis son alergnicas, como la de la naranja. -Leguminas (globulinas 11S) y vicilinas (globulinas 7S): Tienen un PM de 300-450 KDa, por ensamblaje de dos dmeros. Los monmeros de 3040 KDa contienen una estructura en barril beta. Slo se ha encontrado un miembro glicosilado en el lupino. Las vicilinas tienen poca similitud con las leguminas pero su estructura tridimensional es similar. Se han descrito leguminas en la soja (glicinas g1 y g2), en los frutos secos, como el cacahuete (Ara h 3), nuez del brasil (Ver e 2), avellana (Cor a 9), anacardo y mostaza y podran ser importantes en la nuez, coco ssamos y almendra. Se ha encontrado reactividad cruzada entre leguminas de la soja y cacahuete. Tanto las leguminas como las supinas tienen labilidad trmica pero el tostado aumenta la alergenicidad del cacahuete 2. Profilinas Son protenas citoslicas de 14 KDa que son bsicos para la formacin del citoesqueleto de las plantas. Constituyen una familia de panalrgenos altamente conservada (mas del 70% de homologa de secuencia entre sus miembros),

responsable de la co-sensibilizacin entre plenes y plantas. Resisten la temperatura pero son fcilmente atacadas por proteasas digestivas, y por ello producen sntomas locales y leves (SAO). La prevalencia de IgE frente a profilinas suele ser de un 20-30% pero son mayoritarios en soja, naranja y meln. 3. Proteinas de defensa Las plantas representan el grupo ms importante de organismos autofrficos y durante toda su vida son base alimentaria de organismos heterotrficos, que incluyen animales, insectos y microorganismos (hongos, bacterias y virus). Para contrarrestrar su ataque, han desarrollado mecanismos qumicos, estructurales y metablicos. Cuando una planta es atacada hay un mecanismo de localizacin rpida de las clulas daadas (equivalente a una respuesta de hipersensibilidad), se acumulan sustancias antimicrobianas y se producen protenas relacionadas con la patognesis cuya sntesis est regulada por genes de defensa. Desde hace aos se intuy que la manipulacin de estos genes podra determinar la siembra de vegetales mas resistentes a plagas. Estos estudios comenzaron tras las epidemias de hambre causadas por la parasitacin de vegetales de importante consumo, como la causada por la parasitacin de las patatas en Europa en 1896 por el hongo Phytosphora infestans. Por ello, adems de la seleccin natural de las especies, el hombre ha ido modificando sus cultivos, selecionando los mas resistentes e intentando manipularlos, hasta llegar actualmente a la complejidad del cultivo de especies transgnicas.

Datos iniciales, especialmente en frutas, han involucrado a tres nuevas familias de protenas de defensa, ubicuas y bien caracterizadas en reacciones alrgicas: Quitinasas de clase I con un dominio heveina N-teminal son los alergenos principales de pltano, aguacate o castaa, tres de los principales alimentos asociados al sndrome "latexfrutas", LTPs (lipid transfer proteins) han sido caracterizadas como las proteinas con mayor capacidad de ligar IgE en frutas de la familia Rosaceae (manzana, melocotn, albaricoque...) en el rea mediterrnea y las Taumatinas (osmotinas) que han sido tambin detectadas como alergenos de cereza y otros frutos. Adems, varias enzimas como peroxidasa, cistein-proteasas, glucanasas o esterasa, potencialmente implicadas en proteccin vegetal, tambin han sido identificadas como alergenos en harinas y frutas (8,34,35). Vamos a comentar los datos de las mas estudiadas:
1)

Homlogos de Bet v1 (protenas PR-10): En areas de abedules y rboles del orden Fagales (centro y norte de Europa) un alto nmero de pacientes polnicos tienen IgE contra el alrgeno principal del polen de abedul (Bet v 1). Entre ellos, mas del 50% tiene sntomas al comer manzana y otros frutos de las Rosaceas, el apio, la zanahoria y las especias, por la presencia de homlogos de Bet v 1 en los mismos. Estos homlogos son protenas lbiles, sensibles a tratamientos mdicos y altamente degradables por las proteasas digestivas, por eso slo suelen dar sndrome oral. A veces, en la soja, han causado anafilaxia. Se pueden manipular manzanas de forma transgnica con niveles de homlogos disminuidos.

2)

Protenas de transferencia de lpidos (LTP, protenas PR-14): En reas mediterrneas, sin fagales, la alergia a frutas rosaceas no est relacionada con la familia Bet v1. Un 20% de pacientes presentan sensibilizacin a estos frutos sin polinosis asociada. Los alergenos principales son LTPs, polipptidos bsicos de 9 KDa con alta similitud entre ellos (30-95% de identidad) y 4 puentes disulfuro. Su conformacin es compacta y se acumulan fundamentalmente en los tejidos epidrmicos de hojas y frutos. lo que explica mayor alergenicidad de la piel. esto sirve como mecanismo de defensa y sntesis de polmeros lipoflicos (cutina, suberina). Ademas del PRu p3 del melocotn y la Mal d 3 de la manzana, se han descrito LTPs en una (Vit v1), naranja (Cit s3, 126), en hortalizas (Asp o1 en esprrago, Lac s1 en lechua), frutos secos (Cor a8 en la avellana, Cas s 8 en castaa), cerales (Zea m14 en maiz y Tri a14 en trigo.), ltez (Hev b 12) y

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algunos plenes : Art v3 en la Artemisia vulgaris, Ole e7 en el olivo, Par j1 en la parietaria. Todas ellas son potentes alrgenos en alimentos por que tiene alta resistencia al calor y a ser degradadas por proteasas digestivas. por ello, mantienen su actividad en bebidas procesadas como zumos, vinos y cerveza. En segundo lugar se asocian con sntomas sistmicos graves provocando sntomas incluso en pacientes no polnicos, y en poblacin mediterrnea. Pueden sensibilizar por va digestiva e inhalatoria. Mediante mutagnesis se podran realizarse variantes hipoalergnicas.
3)

Quitinazas y alrgenos con dominio hevena

Los alrgenos mas

importantes de ltex son la prohevena (Heb b 6.02), una protena antifngica de 20 Kda. que se procesa generando la hevena (Heb b6.02) que incluye la mayora de eptopos de unin con la IgE. un 4060% de alrgicos a ltex presentan hipersesnibilidad a aguacate, pltano, castaa y kiwi. Los alrgenos responsables de la reactividdad cruzada son quitinasas son clase I. Tambin se han descrito quitinasas de clase IV como alrgenos principales de la uva y algunos plenes. Estas enzimas con PM de 32 KDa tiene alta identidad con la hevena del ltex. Son las quitinasas completas, y no slo los dominios hevena, los responsables de la alergenicidad. La inactivacin de algunas quitinasas de clase I por el calor explican por qu los frutos consumidos en fresco y no los cocinados son los ms relacionados con el sndrome ltex-frutas.
4)

Taumatinas (protenas PR-5): Son protenas antifngicas de 23 KDa con 8 puentes disulfuros, estructura estable y resistente atratamientos trmicos. Se han identificado Mal d2 en manzana, Pru av2 en cereza, Act c2 en kiwi, Cap a1 en pimienta y en plenes de ariznica y Junperus. Se ha expresado Mal d2 como recombinante en plantas transgnicas de Nicotiana bentamiana, usando vectores virales.

5)

Proteasas y beta 1,3 glucanasas (protenas PR-2): Estn siendo estudiadas en la actualidad. La actinidina del Kiwi (At c1) de 30 KDa, muy abundadnte en este fruto, la cucumisina del meln (Cuc c1), sernproteasa de 66 KDa y sus alergenos homlogos en calabaza y tomate. Son protenas antifngicas de 33-36 KDa y existen en el latex (Heb v2) y en el polen de olivo (Ole e9). Tambin la ficina del trigo, papana de la papaya y bromelina de la pia.

11 6)

Otros alrgenos vegetales: Slo se ha encontrado un miembro de la PR-1 asociadas a la alergia, el Cuc m3 del meln, de 16 Kda, que tiene una secuencia similar al grupo 5 de venenos de insectos.

7)

Inhibidores de cereales de alfa-amilasa heterlogas. Hemos dejado al final estas protenas por que son las que mas ha estudiado nuestro grupo y de las que tenemos mas informacin:

En cuanto a la relacin entre los alergenos vegetales y las protenas de defensa debe sustentarse en extensos estudios en el futuro, pero los datos ya disponibles permiten vislumbrar sus aplicaciones:
1.

La purificacin y aislamiento ptimos de los panalrgenos principales de defensa para su utilizacin en tests in vivo e in vitro puede ser de gran importancia en el diagnstico de las enfermedades alrgicas.

2.

El conocimiento de estas protenas y su actividad biolgica en el ser humano podran ser base de la manipulacin gentica de las plantas para cultivos de especies menos alergnicas y tambin ms resistentes a plagas.

3.

La sensibilizacin cruzada de pacientes alrgicos a diferentes alimentos y/o plenes, puede explicar el aumento de incidencia de fenmenos alrgicos. Por otra parte se debe sealar en posible peligro clnico de plantas transgnicas que sobreexpresen proteinas de defensa alergnicas (p.e. para obtener resistencias a hongos o parsitos). Este riesgo sera mnimo utilizando protenas de defensa no alergnicas (en el caso del sndrome latex-frutas, expresando quitinasas de clase II, no alergnicas y s antifngicas).

12 4.

La disminucin de la alergenicidad de las plantas mediante manipulacin gentica podra lograr la sntesis de frmacos menos sensibilizantes, lo cual constituye una seria limitacin de la biotecnologa con plantas en la actualidad.

5.

Estudios de localizacin "in situ" pueden indicar en que partes de un alimento (piel, pulpa, cubierta o endospermo de semillas), se acumula preferentemente un alergeno.

6.

La disponibilidad de clones y estructuras terciarias de algunas de las protenas de defensa mencionadas (LTPs, quitinasas) o en nuestro caso, inhibidores de -amilasas, puede facilitar tanto la obtencin de alergenos recombinantes, como su manipulacin por mutagnesis dirigida para producir proteinas hipoalergnicas.

7.

Por ltimo, las propiedades alergnicas de las familias de protenas de defensa deben considerarse en la obtencin de plantas transgnicas utilizando los correspondientes genes encaminadas a obtener un aumento en la resistencia a determinadas plantas o patgenos. De no ser as podemos aumentar la prevalencia de esta importante patologa.

En cuanto a las tcnicas analticas en el estudio de la hipersensibilidad alrgica alimentaria, hay que decir que las tcnicas electroforticas para aislamiento de protenas son superiores a otros mtodos como la cromatografa porque tienen ms resolucin y son capaces de resolver la compleja composicin proteica, por ejemplo, de la harina en orden a caracterizar sus posibles y diferentes alergenos (36). Diferentes autores (7,30), utilizando electroforesis bidimensional de alta resolucin en combinacin con anlisis de proteinas detectaron alrededor de 700 protenas solubles en trigo, de las cuales 70 detectaban IgE, sobre todo las localizadas en las reas de 14-18, 27, 37, 55 y 70 Kda. Mediante secuenciacin de aminocidos encontraron homologas en proteasas inhibidoras de -amilasa (14-18 Kda), acil-CoA oxidasa (26 Kda) y fructosa-bifosfato aldolasa (37 Kda) de trigo, maiz y cebada. Sin embargo estos estudios no aclaran bien que proteinas pueden ser clnicamente relevantes. Por ello se intenta aislarlas para una vez purificadas y aisladas en extractos diagnsticos y as pudieramos comprobar su reactividad in vivo mediante tcnicas de diagnstico alergolgico (pruebas cutaneas y de provocacin). Tambin, se puede poner especial atencin a la potencial relacin entre las protenas de defensa presentes en las semillas los posibles alergenos que pudieramos identificar. Hay que aclarar que era la primera vez que se utilizaban alergenos purificados "in vitro" de cereales para el diagnstico alergolgico "in vivo".