Diseo de medios de cultivo

Medios de cultivo
El crecimiento microbiano es un hecho gobernado por los principios de la conservacin. Materia clulas Energa Informacin productos Se requiere entradas de Materia nutrientes Energa generada por la transformacin de energa qumica a energa libre Informacin cdigo gentico

Balance de masa: deben existir en el medio aquellos elementos que se requieren para construir la clula. Es posible representar crecimiento microbiano como una ecuacin qumica
CaHbOc + mNH3+.........+nO2 (clulas) qCdHeOfNg + rCO2 + H2O + uChHiOjNk (productos)

Analisis elemental de la clula y requeridos para formulacin de medios de cultivo C, H, O, N : constituyen entre el 90 al 95% del total Mg, P, S : constituyen magnitud intermedia otros : constituyen trazas

COMPOSICIN QUIMICA DE LAS CELULAS MICROBIANAS

FUENTES DE CARBONO fuente orgnica de carbono---- m.o. heterotrofos fuente inorgnica-----------------m.o. fotisinteticos (autrofos) FUENTE DE NITRGENO Amonio, nitrgeno, amino de aa y proteinas, urea, nitrato??? o nitrgeno elemental ???
En general las clulas son capaces de sintetizar todo tipo de material celular a partir de compuestos simples, por diferencias genticas en su sistema enzimtico, algunas cepas requieren de FACTORES DE CRECIMIENTO o NUTRIENTES ESCENCIALES (vitaminas, amino cidos, nucletidos)

MEDIOS DE CULTIVO DEFINIDOS DEFINIDO: Sabemos su composicin , definido qumicamente. Formulado en base a compuestos puros Preferibles para investigacin y desarrollo Problemas: costo a nivel industrial COMPLEJO: Composicin compleja y variables Producto de desecho, mas barato, nutricionalmente mejor (contiene factores de crecimiento , protenas) se requiere suplementar con algunos nutrientes

Tabla medios complejos industriales

COMPONENTE Melaza Licor de maceracin de maz Perneado de suero Harina de soya y de pescado Hidrolizado o extracto de Vinasas Sub producto de la industria de azcar Sub Producto de procesamiento de maz Sub producto de procesamiento de suero de leche Industrializacin de soya y pescado Industria procesadora de levadura (forrajera o panificacin) Sub productos de la produccin de etanol por fermentacin

Diseo de medios de cultivo

Definicin de rendimiento
Yx/s=masa celular producida masa de nutriente consumido Idea: Por cada kilogramo de nutriente consumido se producen tantos kilogramos de clulas. Yx/s= x = (masa celular final- masa celular inicial) -s -(masa sustrato final masa de sustrato inicial) Yx/s=% de sustrato en en el nutriente % de sustrato en la celula

Ejemplo para nitrgeno Yx/s = % de sustrato en en el nutriente % de sustrato en la clula Yx/s = masa de nitrgeno en el (NH4)2SO4/masa de (NH4)2SO4
masa de nitrgeno en clula/masa de clula

Asumir todo el N va a la clulas

masa de nitrgeno en el (NH4)2SO4= masa de nitrgeno en clula

Yx/s = masa celular producida masa de nutriente consumido

Caso de carbono diferente Fermentacin aerobia 60% de carbono va a la clula 40% de carbono va a CO2 Yx/c= % de Carbono en Sustrato * 0.6 % de Carbono en clula 0.5-0.6

Fermentacin anaerobio 10 % de carbono va biomasa 90 % otros molculas orgnicas

Otros requerimientos
Para el estudio en matraces se debe considerar la variacin de pH por efecto de Consumo de fuente de nitrgeno Produccin de metabolitos como cidos orgnicos (ac. ctrico).

Consumo de fuente de nitrgeno NH4+ NH3 +H+ - NH2 + H NH3 En la clula pH pH

pH Constante
Se requiere agregar soluciones buffer para mantener pH constante Soluciones ms comunes: utilizar soluciones tampn (buffer) Fosfato** Citrato ** a []de fosfato entre 10 a 15 g/L hay inhibicin

Cuantificacin de Oxigeno

(requerido) Oxigeno se requiere administrar en forma continua debido a su baja solubilidad en agua (de 7 mg/l a Temperatura de 28 30C) No interesa la concentracin sino la velocidad con que es suministrado.

En equilibrio Velocidad de consumo O2 = Velocidad de demanda O2 Adems la velocidad de demanda de oxigeno es proporcional a la velocidad de crecimiento de la poblacin

Demanda de oxigeno en el cultivo (Na)

YO2= x entonces O2 = x -O2 YO2 Na = dO2=(dx) 1 dt dt YO2
En trminos de unidades : hr-1

Na = dO2=(x) dt YO2

x;gr clula/litro

Y : gr de clulas /gr de oxigeno

Na = (x)= YO2

hr-1 gr clula/ litro

_=

cantidad de oxigeno tiempo volumen

gr clulas/ gr oxigeno

Na = mili moles de oxigeno /litro hora ** por razones de eficiencia se suministra ms de lo necesario

Orden de Na < 50 mM /hr bajo - normal 90 150 mM /h limite superior > 120 500 mM /h difcil de cubrir CALOR DE FERMENTACIN Todo crecimiento de m.o genera calor residual
Velocidad de respiracin o velocidad de consumo de oxigeno. Q02 = Na ssi cultivo no esta limitado por O2

Aerobio

** Qf = 0.12 QO2

** relacin emprica del orden del 10% de exactitud

CALOR DE FERMENTACIN (QF)

Todo crecimiento de microorganismo genera calor residual Aerobio QF =0,12 CO2
Kcal / h mM/h

Ec. Empirica

CO2 velocidad de consumo de oxigeno CO2 Na ssi cultivo no est limitado por oxigeno

Anaerobio O2 + sustrato CO2 +H2O combustin total QF combustin

Materia celular (biomasa) Productos
Qcombustin total = QF + Q QF = Qcombustin total - Q
Combustin celular

+Q

combustin de productos

Combustin celular

-Q

combustin de productos

QF= [Hs* Cs ( Hp Cp)- Hc Cc] 1 t Hs, Hp , Hc Calor de combustin de sustrato, productos y clulas. Cs, Cp , Cc Diferencia entre la concentracin de sustrato, productos y clulas. UTILIZA METODOS TERMODINAMICOS

Relacin entre y Yx/s

Usos de sustrato Crecimiento biomasa Mantencin energa CO2 Produccin de metabolitos (S)T = (S)C + (S)M + (S)P / 1 t dS = dS + dS + dS dt T dt C dt M dt P t0

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