Manual Hematología

Facultad de Bioanlisis, Veracruz
Manual de Prcticas de Hematologa
MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO
SERIE BLANCA
ELABOR:
Q.C. MARIA ESTHER DESCHAMPS LAGO
Serie Blanca
SERIE BLANCA: PRACTICA NO.1 OBTENCIN DE LA MUESTRA DE SANGRE

1. INTRODUCCIN Obtencin De Sangre Capilar Es el mtodo empleado cuando se necesita tan solo una pequea cantidad de sangre, ya que los estudios a realizar as lo requieren. El sitio ms apropiado para obtener sangre capilar es la yema del dedo. En los nios ms pequeos, es ms conveniente obtenerla del taln del dedo pulgar del pie. Los detalles relativos a los recipientes y portaobjetos que se utilizan, se indican a continuacin. VENTAJAS. con que puede obtenerse ente til en pacientes geritricos y en nios, en particular, recin nacidos. Facilidad Especialm
DESVENTAJAS. Slo logra obtenerse una pequea cantidad de sangre que puede ser insuficiente. Es un mtodo por lo general tardado y que tiende a provocar hemlisis de la muestra En pacientes inmunocomprometidos puede provocar infecciones, excepto cuando se realiza la puncin despus de 8 a 10 min. de contacto con la piel con un buen antisptico. Obtencin De Sangre Venosa . Es el principal mtodo de extraccin de sangre en el laboratorio de anlisis clnicos, ya que es relativamente fcil de realizar. VENTAJAS. Nos permite hacer mltiples exmenes y en repetidas veces si se desea, con la misma muestra. Las alcuotas de plasma y suero pueden congelarse para futura referencia. DESVENTAJAS Puede provocar la coagulacin de la sangre si el procedimiento lleva mucho tiempo. Algunos componentes no son estables en sangre anticoagulada. Puede dificultarse en nios, pacientes obesos en estado de shock.
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Puede ocasionarse hemlisis de las muestras afectando ciertas determinaciones, por las siguientes causas: Por forzar el paso de la sangre al tubo Por agitar el tubo enrgicamente Por extraer sangre de un hematoma Anticoagulantes Empleados. Estas sustancias impiden la formacin de cogulos. El mecanismo por el que se evita la coagulacin, vara segn el anticoagulante; por ejemplo, EDTA, citrato y oxalato se unen con el calcio, mientras que la heparina impide la conversin de protrombina en trombina. Ejemplos de anticoagulantes son EDTA, citrato de sodio, y heparina en forma de sal de litio ,Los tubos deben invertirse varias veces para asegurar la mezcla adecuada despus e la recoleccin, de acuerdo con las instrucciones del fabricante. 2. PRINCIPIO Y METODOLOGA . El sitio ms prctico para obtener sangre venosa es la flexura anterior del brazo, de preferencia justo por arriba de alguna de las ramas venosas que all se encuentran. Las venas superficiales de la cara anterior del antebrazo son las ms comnes para la venopuncin. Las tres venas principales que se utilizan son: 1) vena ceflica, ubicada en la parte superior del antebrazo y del lado del pulgar de la mano; 2) vena baslica, ubicada en la parte inferior del antebrazo y del lado del dedo meique de la mano; y 3) vena cubital mediana, que conecta las venas baslica y ceflica en la fosa antecubital ( flexin del codo) y es la vena de eleccin.Si el paciente aprieta el puo despus de aplicar el torniquete, la vena se tornar ms prominente. El torniquete facilita la obtencin. En los nios pequeos se pueden utilizar otros sitios; si es as, es mejor que la sangre la obtenga alguna persona con experiencia. Usar una aguja puntiaguda, nunca menor de calibre 21 y una jeringa de 5 ml de 10 ml. Tanto la aguja como la jeringa debern estar limpias, secas y estriles. Con prctica se puede obtener sangre usando slo una aguja con un tubo de goma por el que se deja correr la sangre hasta los tubos en los que se recoge la muestra. Para esta tcnica se utilizan agujas de calibre 19. 3. LISTA DE REQUERIMIENTOS 3.1 Materiales de Laboratorio CANTIDAD 2 1 1 1 1 1 1 DESCRIPCIN Tubos de recogida de muestras con EDTA Aguja de Vacutainer Contenedor de Vacutainer Jeringa Lanceta Torundas de algodn con alcohol isoproplico Ligadura
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4. PROCEDIMIENTO. 4.1 Puncin Capilar 4.1.1 Indicaciones. En lactantes, se realiza en la superficie plantar interna externa del taln.En nios de ms de un ao, en la superficie palmar de la ltima falange del segundo, tercero cuarto dedo de la mano.La puncin no deber realizarse en una parte edematosa congestionada, donde la piel se encuentra fra y ciantica. 4.1.2 Identificacin del Paciente
Asegurarse de que el paciente llegue en condiciones ptimas y tranquilizarlo. Colocar al paciente adecuadamente. Checar el material para la extraccin: 4.1.3 Tcnica. 4.1.3.1 Limpiar cuidadosamente la piel en el sitio de puncin y a su alrededor con algodn mojado en algn desinfectante , como alcohol de 70%. 4.1.3.2 Secar el rea con gasa estril seca. 4.1.3.3 Puncionar con una lanceta estril aguja desechable. El movimiento debe ser rpido y la puncin suficientemente profunda para asegurar que la sangre fluya libremente.La salida de la sangre puede facilitarse ejerciendo una suave presin en la cara lateral del dedo. A corta distancia del sitio de puncin.
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La sangre deber fluir libremente. Si se ejerce demasiada presin, se diluir con los lquidos tisulares, lo que la puede hacer inapropiada para estudio. 4.1.3.5 Descartar siempre la primera gota de sangre, limpindola con una gasa seca y dejar el sitio de puncin limpio y seco. 4.3.1.6 Obtener la cantidad requerida de muestra, aspirando la sangre con pipeta colocndola en un portaobjetos. 4.2 Puncin Venosa 4.2.1 Indicaciones. Debe indicarse al paciente la posicin correcta, que puede ser sentado recostado, apoyando bien el brazo en posicin horizontal. Elegir la vena adecuada, prefirindose la cubital mediana, la vena baslica, la ceflica, las venas de la mueca, tobillo y mano, ya que resultan fciles de palpar. 4.2.2 Tcnica 1. Desinfectar la piel en el sitio de puncin con algodn mojado en un desinfectante apropiado como alcohol de 70%. 2. Preparar la jeringa y la aguja, en su defecto la aguja con el contenedor en el caso del sistema de tubos al vaco, cuidando que la tcnica sea asptica. 3. Aplicar un torniquete en el brazo ( por arriba del sitio de puncin), suficientemente apretado para que restrinja el flujo de la sangre venosa. 4. Desinfectar nuevamente el sitio de puncin, y secar la piel con algodn gasa limpios, secos y estriles. 5. Asegurarse de que el mbolo de la jeringa est hasta el fondo , es decir, que la jeringa no contenga aire. Insertar la aguja de la jeringa en una vena con un movimiento preciso. 6. Jalar lentamente el mbolo y obtener 2 a 3 ml de sangre. 7. Retirar la jeringa de la aguja y sustituirla por otra jeringa que contenga la solucin anticoagulante de citrato de sodio. O directamente introducir el tubo del sistema de vaco. 8. Obtener el volumen de sangre deseado jalando el mbolo muy despacio. 9. Soltar el torniquete y colocar una gasa seca sobre el sitio de la puncin, retirando despus la aguja con un solo movimiento. 10. Presionar ligeramente la gasa sobre el sitio de puncin durante algunos momentos y despus pedir al paciente que contine aplicando la presin durante unos minutos. 11. Cuando la sangre se obtiene empleando slo una aguja sin jeringa, se emplea el mismo procedimiento y cantidad de anticoagulante. Deben usarse tubos graduados para obtener la proporcin adecuada de anticoagulante y sangre.
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Actividades: - Practicar la toma de sangre capilar. - Practicar la toma de sangre venosa. -Realizar esquemas de puncin capilar .
-Realizar esquemas de puncin venosa y de las principales venas empleadas.
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-Realizar esquema de los diferentes sistemas de extraccin: jeringa y sus partes; sistema vacutainer y sus partes; tipos de tubos y colores de tapones empleados en el sistema vacutainer, de acuerdo con el anticoagulante empleado .
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- Reporte de resultados.____________________________________________ _______________________________________________________________ _______________________________________________________________ _______________________________________________________________
SERIE BLANCA:PRCTICA No. 2 EXTENDIDOSDE SANGRE

1. INTRODUCCIN. Los extendidos de sangre se realizan dentro del estudio del hemograma completo, bien de manera aislada .En ellos se pueden estudiar los eritrocitos, los leucocitos y las plaquetas, y el propsito de ello es determinar las caractersticas morfolgicas de cada tipo celular y evaluar la frecuencia relativa de los distintos tipos de leucocitos. Se deben teir con una de las tinciones de Romanowsky las cuales varan en sus propiedades de tincin, y por lo tanto, es importante seleccionar una y familiarizarse con ella. La coloracin de Wright es muy confiable y sencilla, pero otras tambin lo son, tales como la de Giemsa. Leishman May-Grnwald, las cuales son igualmente satisfactorias, aunque puede variar la tincin de un lote a otro de colorante. 2. PRINCIPIO Y METODOLOGA . Los frotis de sangre deben confeccionarse con lminas portaobjetos de vidrio que previamente se hayan lavado y secado de manera conveniente, con la finalidad de eliminar cualquier resto de grasa que pudiera quedar en ellos y evitar as una mala calidad en la tincin. Los frotis de sangre son esenciales para el estudio morfolgico y cuantitativo de las clulas sanguneas. Cuando un frotis se encuentra bien realizado, se podrn distinguir en l tres reas importantes: la cabeza zona de inicio, el cuerpo zona media y la cola rea final del mismo. Un frotis no deber ser ni grueso ni delgado, pues en ninguno de ellos se podrn apreciar bien las reas antes mencionadas. En un frotis bien realizado, la tincin ser de mejor calidad. 3.LISTA DE REQUERIMIENTOS 3.1 Materiales de Laboratorio
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4. PROCEDIMIENTO. Tcnica de los dos Portaobjetos. 1. Colocar a una distancia de 1.5-1.9 cm del extremo derecho de un portaobjetos, una pequea gota desangre ( del tamao de 3 cabezas de alfiler) obtenida por puncin capilar del taln, del lbulo de la oreja por extraccin venosa. 2. Si se emplea sangre venosa mezclada con anticoagulante, el frotis deber realizarse lo ms pronto posible, debido a que el contacto prolongado con ste altera la morfologa celular. 3. Aproximar el portaobjetos extensor a la gora, dejando que hagan contacto y que por capilaridad ste se extienda a lo largo del borde. 4. Se desliza el portaobjetos extensor hacia el extremo contrario, para lograr una pelcula delgada de sangre. 5. dejar secar y teir. NMERO 2 1 1 1 1 1 1 DESCRIPCIN Tubos de recogida de muestras Aguja de Vacutainer Contenedor de Vacutainer Jeringa Torundas de algodn con alcohol isoproplico Ligadura Caja de portaobjetos limpios
ACTIVIDADES: -Realizar 10 frotis correctamente confeccionados. -Realizar esquema muestra que las
partes de un frotis .
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-Realizar esquema de tres frotis: demasiado grueso, demasiado delgado y correctamente realizado.
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- Reporte de resultados.____________________________________________ _______________________________________________________________ _______________________________________________________________ _______________________________________________________________
SERIE BLANCA: PRACTICA NO. 3 TINCIN DE WRIGHT Y REACTIVOS COMUNMENTE EMPLEADOS EN HEMATOLOGIA
1. INTRODUCCIN La finalidad de la tincin de Wright es lograr que el alumno se sienta capacitado para preparar adecuadamente algunos de los reactivos y colorantes ms comnmente empleados en las reas de hematologa y microbiologa, que como qumico clnico tiene la obligacin de conocer y dominar. 2. PRINCIPIO Y METODOLOGA . COLORANTES. A los colorantes de les puede clasificar en tres grupos: 1) Acidos. Son aquellos constitudos por sales cuya base es incolora y cuyo cido es coloreado. A este grupo pertenecen las eosinas. Estas soluciones se usan para la coloracin citoplasmtica coloracin de fondo. 2) Basicos. Son aquellas sales de cido incoloro y base coloreada como el clorhidrato de azul de metileno. Estos colorantes tien por lo general algunos elementos del ncleo. 3) Neutros. Son aquellas sales con el cido y la base coloreados, por ejemplo, los eosinatos de azul y azur de metileno , los ms empleados en hematologa. El mtodo de Romanowsky, que emplea estos colorantes, ha sido la base de las coloraciones panpticas utilizadas en la actualidad ya que ha tenido un gran xito en la tincin diferencial de la
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mayora de las estructuras normales y anormales de la sangre. La mayor parte de estos colorantes policromos derivados del mtodo de Romanowsky, se disuelven en alcohol metlico, combinando as, la fijacin con la tincin. Los ms conocidos de todos ellos, son los de Giemsa y de Wright. Tipo de Error Tincin demasiado azul Causas Tiempo excesivo de tincin Lavado deficiente Ph muy alcalino Como se Corrige Disminuir el tiempo de tincin Lavar adecuadamente Acidificar el pH
Tincin demasiado rosa
Tiempo insuficiente de tincin Aumentar el tiempo de tincin Lavado excesivo Lavar adecuadamente pH muy cido Elevar el pH Colorante no filtrado Filtrado de colorante Secado de la laminilla durante la Procurar que siempre haya un tincin. buen menisco de colorante durante la tincin.
Precipitacin de colorante
ANTICOAGULANTES. Los 4 anticoagulantes ms usados son: mezcla de oxalato amnico y de potasio ( simplemente oxalato amnico ), citrato trisdico, sequestrene ( EDTA ), y heparina. Los 3 primeros impiden la coagulacin sustrayendo el calcio del plasma sanguneo por precipitacin fijacin en forma no ionizada. La heparina neutraliza la trombina y otras fases de la activacin de los factores de coagulacin. El citrato trisdico, el EDTA y la heparina, pueden emplearse para impedir la coagulacin de la sangre destinada a transfusiones, sin embargo, la mezcla de oxalatos, no, por ser txica. Los oxalatos pueden usarse para determinaciones como hemoglobina, hematocrito y recuentos globulares, aunque para extensiones sanguneas puede usarse tan slo en los primeros minutos, pues ms tarde pueden desarrollarse alteraciones de las clulas sanguneas como formas dentadas de los hemates, vacuolizacin en el citoplasma de los granulocitos, fagocitosis de los cristales de oxalato, artefactos en los ncleos de los linfocitos y monocitos, etc.Adems no deben emplearse para determinaciones qumicas de nitrgeno y potasio. Para investigaciones de coagulacin, es muy til el citrato trisdico. El EDTA sequestrene es tal vez el anticoagulante ms usado para el recuento de clulas sanguneas. Se le compara con el oxalato para el estudio del hematocrito y hemoglobina, pero para estudios morfolgicos, es todava mejor, pues con l, no se forman alteraciones ni artefactos en las clulas sanguneas, an despus de un buen tiempo de estar hecha la mezcla, si la sangre se refrigera ( 2 horas a 24 horas ). La heparina tambin puede usarse para determinaciones como hematocrito y hemoglobina, pero no de ptimos resultados en las extensiones sanguneas, ya que produce un fondo azul en aqullas que son teidas con el colorante de Wright.
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3. LISTA DE REQUERIMIENTOS 3.1 Reactivos. NUM. 1 2 3 4 5 6 7 NOMBRE DEL REACTIVO Colorante de Wright Metanol Na2HPO4 KH2PO4 EDTA Oxalato de amonio Agua destilada CANTIDAD 0.1 g 60 ml 2.56 g 6.66 g 3g 0.8g 1.5L
3.2 Equipo de Laboratorio Balanza Granataria Balanza Analtica 3.3 Materiales de Laboratorio NUM 1 2 3 4 5 6 7 8 9 CANTIDAD 1 2 1 4 1 3 1 1 10 DESCRIPCIN Mortero Probetas de 100 ml Matraz Volumtrico de 100 ml Varillas de vidrio Frasco de vidrio color mbar de 1L de capacidad Frascos de vidrio color mbar de 150 ml de capacidad Jeringa sistema vacutainer para toma de muestra Ligadura Portaobjetos
3.4 Preparacin de los reactivos 3.4.1Colorante de Wright:
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Manual de Prcticas de Hematologa 0.1 g 60 ml
Se tritura el colorante con el alcohol en un mortero; sto se hace poco a poco. Esta operacin debe durar 30 min. hasta completar disolucin. Se deja reposar dos das y se filtra.
3.4.2 - Amortiguador Buffer de fosfatos Na2HPO4 KH2PO4 Agua destilada para aforar a 2.56 g 6.66 g 1L
Mezclar las sales con poca cantidad de agua destilada, e ir agregando poco a poco ms agua, hasta aforar a 1 L. Guardar en un frasco mbar de 1 L.
3.4.3- EDTA. EDTA Agua destilada 3g 100 ml
Mezclar el EDTA poco a poco con el agua destilada.
3.4.4 -Solucin de Oxalato de amonio. Oxalato de amonio Agua destilada 0.8 g 80 ml
Mezclar poco a poco el oxalato de amonio con el agua destilada. En ambos, se utiliza 1 gota de solucin por ml de sangre.
4.PROCEDIMIENTO. 4.1 Tcnica: Tincin de Wright. 4.1.1. Seleccionar un portaobjetos nuevo de 25 X 75 mm para hacer extendidos, que tenga la orilla relativamente lisa.
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4.1.2 Obtener una pequea cantidad de muestra de sangre perifrica. 4.1.3Colocar una pequea gota de sangre a 2 3 mm de la orilla de un portaobjetos limpio y seco. Colocar el portaobjetos para hacer extendido en un ngulo de 30 a 45 grados con respecto al portaobjetos que tiene la muestra y hacer contacto cn la gota. Esta debe extenderse rpidamente a lo largo de la orilla del portaobjetos para hacer los extendidos. Deslizar el portaobjetos de extensin sobre la superficie dispersando la muestra de sangre. El extendido de sangre debe medir aproximadamente 30 mm de largo . El portaobjetos de extensin no se despegar hasta haber extendido toda la sangre. El grueso del extendido de sangre puede regularse modificando el ngulo del portaobjetos de extensin, variando el tamao de la gota de sangre, la presin la velocidad de extensin. 4.1.4 El extendido de sangre se seca con el aire. Una vez seco, se escribe con lpiz el nombre del paciente en una orilla del portaobjetos. 4.1.5 Fijar el extendido de sangre en alcohol metlico absoluto durante 2 a 3 minutos. El color del extendido de sangre cambiar de rojo a caf claro. Esta fijacin es recomendable aunque el colorante que se vaya a emplear se encuentre diludo en alcohol metlico absoluto. 4.1.6 Cubrir el portaobjetos completamente con el colorante. Despus de 3 minutos aadir un volumen igual de amortiguador. Soplar ligeramente para mezclar uniformemente. Aparecer un brillo metlico verde. 4.1.7 Despus de 5 minutos enjuagar cuidadosamente con agua de la llave amortiguador de fosfatos, al principio con chorro delgado y suavemente y despus con el chorro fuerte para eliminar todo exceso de colorante. Limpiar el reverso del portaobjetos en posicin erecta. Cuando se haya secado, cubrir el portaobjetos con un cubreobjetos rectangular y fijarlo con una gota de lquido de montaje. Se puede usar slo aceite de inmersin en una preparacin temporal. El alumno deber ensayar tiempos hasta ajustar aquellos que ms convengan para una ptima coloracin. As, con tres frotis ms deber ensayar: 2 minutos de colorante y 4 de amortiguador; 6 minutos de colorante y 6 minutos de amortiguador; 6 minutos de colorante y 11 minutos de amortiguador. 4.2 Resultados Esperados. Los resultados esperados en la tincin sern los siguientes: Hemates en color rosa. Ncleos de los leucocitos de azul prpura, con la cromatina y paracromatina netamente diferenciadas. Grnulos neutrfilos del citoplasma, lila violeta Grnulos eosinfilos, rojo tirando a naranja. Grnulos basfilos, prpura tirando a azul oscuro. Plaquetas, color lila oscuro. Citoplasma de los linfocitos, azul claro. Citoplasma de los monocitos, ligero azul.
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Actividades: -Practicar la tincin de Wright con frotis de sangre perifrica. -Corregir de acuerdo al recuadro , errores encontrados en la tincin. - Reporte de resultados .______________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________
SERIE BLANCA:PRCTICA No. 4 EVALUACIN DE SANGRE PERIFRICA

1.INTRODUCCIN. Una vez que se ha hecho y teido un frotis satisfactorio, ste puede ser evaluado en bsqueda de anormalidades. Cada examen debera incluir anlisis con bajo poder ( 10X ), con alto poder ( 40 45 X), e inmersin ( 100X ).Un error comn consiste en comenzar el examen con el objetivo de inmersin.Ciertos problemas de la muestra y anormalidades morfolgicas significativas pueden pasarse por alto a menos que todos los objetivos sean empleados. La presencia de eritrocitos anormales en el frotis de sangre perifrica a menudo brinda importantes claves en el diagnstico diferencial de las anemias, y puede ser tambin de ayuda en el diagnstico de otras enfermedades. La morfologa de los eritrocitos puede verse alterada con cambios en el tamao, en la forma, en las propiedades tintoriales de clulas individuales por la presencia de ciertos materiales dentro de ellas. Incluso, la presencia de solo una nica clula con ciertos cambios, puede considerarse significativa; en otros, la anormalidad se considera importante slo si un nmero significativo de clulas se ven afectadas.
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Asimismo, en la serie blanca, es importante realizar el recuento diferencial, an cuando los nuevos contadores electrnicos den un resultado anticipado del mismo, ya que slo puede confirmarse ste por medio de dicha lectura. Del mismo modo, se buscarn anormalidades en las clulas blancas y stas se reportarn, as como la presencia de clulas que normalmente no se ven en sangre perifrica, sino nicamente en mdula sea, a menos que exista alguna patologa presente. Lo mismo aplica para las plaquetas, las clulas ms pequeas de sangre perifrica.Se puede hacer un recuento indirecto de las mismas cuando as se requiera, y buscar anormalidades en su forma y en su tamao. Algunas anormalidades pueden requerir que se indique le severidad del cambio. Todas estas determinaciones pueden diferir de observador a observador, conduciendo a una variacin considerable en el anlisis del mismo frotis de sangre. Los laboratorios actualmente tratan de controlar estas inconsistencias desarrollando criterios para estandarizar la evaluacin de la morfologa. As, muchos laboratorios usan un mtodo semicuantitativo de evaluacin, consistente en los trminos: leve, moderado severo. O bien un sistema " por cruces" :1+, 2+, 3+, etc. Tan importante como el que haya consistencia entre los observadores, es importante tambin la seleccin de una rea apropiada del frotis para la evaluacin. En un frotis en " cua ", en el rea "aplumada" terminal del frotis, demuestran cambios que pueden considerarse patolgicos, p.e. macrocitosis, esferocitosis, clulas en "diana ", etc. En el rea gruesa del frotis, las clulas pueden interpretarse como microcticas en forma equivocada, y la morfologa puede ser difcil de evaluar. Tambin tendern a formar apilamientos ( rouleaux ) en esta rea. Por ello, el rea ideal para examinar un frotis, es aquella que contiene aproximadamente 200-250 clulas por campo a seco fuerte. Esto corresponde a una rea en donde los eritrocitos se tocan pero no se enciman. En el verdadero Roleaux, los mrgenes individuales de las clulas son difciles de distinguir y dan una imagen como de pilas de monedas que han sido empujadas y tiradas, imagen que persiste an en las reas ms delgadas del frotis, aunque ah exista menor cantidad de clulas. La intensidad de la formacin de "rouleaux" depende de la concentracin de las protenas plasmticas, especialmente el fibringeno. En enfermedades inflamatorias, los niveles de fibringeno pueden aumentar. Tambin la elevacin de gama globulinas, como se observa en el Mieloma mltiple, provoca formacin de "rouleaux". 2. PRINCIPIO Y METODOLOGA . 2.1 Anlisis con bajo poder.
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Este objetivo debe utilizarse para evaluar la calidad de la tincin.Las clulas blancas deberan verse fcilmente con este aumento.Si no es asi, el frotis debe ser nuevamente teido.El borde aplumado debe ser examinado para buscar cmulos de plaquetas filamentos de fibrina, indicando esto que debe realizarse una nueva toma, ya que esta evidencia de coagulacin podra interferir con muchas pruebas hematolgicas. Los extremos laterales y aplumado deben evaluarse en bsqueda de un nmero desproporcionado de leucocitos.,Las clulas ms grandes ( por ejemplo los neutrfilos y los monocitos, tienden a acumularse ms en estos lugares y si el frotis est mal hecho, se acumularn ms en estas reas, las cuales estn fuera del rea ideal de observacin.Si la mayora de las clulas se encuentran en el borde aplumado, el frotis deber descartarse y prepararse uno nuevo. 2.2 Anlisis con alto poder. Con este objetivo existen dos problemas por resolver. En primer lugar, se debe seleccionar el rea apropiada para iniciar la cuenta diferencial. Esta debe ser donde los eritrocitos se tocan pero no se sobreponen, y puede ser un rea en donde se encuentren 200 eritrocitos por campo. Si la cuenta de leucocitos es muy baja, puede ser necesario incluir reas fuera del rea ideal con el fn de encontrar suficientes clulas blancas.El segundo problema por resolver con este objetivo, ser estimar la cuenta total de leucocitos. Estando en el rea ideal, contar el nmero de clulas blancas observadas en cinco a diez campos y determinar el promedio. El promedio, multiplicado por un factor de correccin que a menudo est entre 2000 y 2,500 ( 2 a 2.5 en miles) representar la cuenta total del leucocitos. 2.3 Anlisis con objetivo de inmersin. Con este objetivo, la cuenta diferencial de leucocitos debe estimarse, la cuenta de plaquetas, tambin debe poder estimarse y los tres tipos de clulas ( leucocitos , eritrocitos y plaquetas ) deben observarse en bsqueda de anormalidades morfolgicas. La cuenta diferencial consiste en identificar cuando menos 100 leucocitos consecutivos, y reportar estos valores como un porcentaje. Es importante incluir las clulas de los mrgenes, as como las del cuerpo del frotis. As, para lograr esto, debe seguirse el patrn de observacin de la imagen siguiente:
El nmero de plaquetas tambin puede ser estimado con este objetivo. Empleando la misma rea que para la cuenta diferencial, es decir, donde los eritrocitos se tocan pero no se
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sobreponen, deben contarse las plaquetas en al menos diez campos. Este nmero ser convertido en no. de plaquetas/l de sangre, como se hizo con la cuenta de leucocitos. Deber calcularse el nmero promedio de plaquetas por campo, y dicho nmero se multiplicar por un factor determinado por el propio laboratorio en base a la combinacin de los objetivos y oculares empleados en sus microscopios. Por ejemplo, cada plaqueta, observada representa 15,000 plaquetas 20,000 / l. Si se llegaron a observar un promedio de 12 plaquetas por campo, entonces, la cuenta total de plaquetas sera de 180,000/ l en el primer caso, 240,000 / l en el segundo caso. La ltima actividad a realizar con este objetivo, sera evaluar la morfologa celular. Esto puede irse haciendo a medida que se va realizando la cuenta diferencial. Cualquier anormalidad inclusin en clulas rojas y blancas, deber reportarse. Tambin es importante evaluar la forma y el tamao de los eritrocitos en esta misma rea. Las clulas suelen distorsionarse en reas muy delgadas, demasiado gruesas. Las plaquetas tambin debern evaluarse en su tamao y forma. Ms de una forma inusualmente grande de plaquetas, en cada cinco campos debern ser reportadas . 3. LISTA DE REQUERIMIENTOS. 3.1 Equipo de laboratorio. Microscopio de Luz 3.2 Materiales de Laboratorio CANTIDAD 1 DESCRIPCIN Frotis de sangre perifrica teido con colorante de Wright
4. PROCEDIMIENTO. 4.1 Anlisis con bajo poder. 4.1.1Evaluar la calidad de la tincin. 4.1.2Examen en el borde aplumado del frotis en bsqueda de cmulos de plaquetas filamentos de fibrina. 4.1.3Evaluar extremos laterales y aplumado en bsqueda de leucocitos desproporcionados. 4.2 Anlisis con alto poder. 4.2.1Seleccionar el rea apropiada para iniciar la cuenta diferencial. 4.2.3Estimar la cuenta total de leucocitos.
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4.3Anlisis con objetivo de inmersin. 4.3.1Realizar el recuento diferencial, contando cien clulas en total, y diferenciando la lnea celular a la que pertenecen. 4.3.2Realizar el recuento indirecto de plaquetas. 4.3.3Buscar anormalidades morfolgicas tanto de los leucocitos como de los eritrocitos y de las plaquetas.
ACTIVIDADES: - Reporte de resultados 1. Anlisis con bajo poder. 1.1 Calidad de la tincin:_________________________________________________ __________________________________________________________________ 1.2 Examen del borde aplumado del frotis ___________________________________ __________________________________________________________________ 1.3 Examen de los extremos laterales y aplumado del frotis.____________________ _____________________________________________________________________ 2. Anlisis con alto poder. 2.1 Seleccionar el rea apropiada para iniciar la cuenta diferencial.________________ ___________________________________________________________________ 2.2 Estimar la cuenta total de leucocitos._____________________________________ ______________________________________________________________________ 3. Anlisis con objetivo de inmersin. 3.1 Recuento diferencial
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Metamielocitos Bandas Segmentados Linfocitos Monocitos Eosinfilos Basfilos
_____ _____ _____ _____ _____ _____ _____ 100
3.2 Busqueda de anormalidades morfolgicas de: leucocitos ___________________________________________________________
SERIE BLANCA:PRCTICA No. 5 FORMULA LEUCOCITARIA RECUENTO DIFERENCIAL

1.INTRODUCCIN. La frmula leucocitaria nos da informacin sobre el porcentaje de leucocitos de cada tipo, en base a su morfologa y caractersticas tintoriales. A partir de estos valores y de la cuenta total de glbulos blancos obtenidos en microlitros, podremos calcular los valores absolutos de cada lnea celular en sangre perifrica, y as compararlos con los valores normales de cada una de ellas. 2.PRINCIPIO Y METODOLOGA . Se realizar el recuento diferencial, de acuerdo como se indica en el procedimiento, y se comparar contra los siguientes valores normales .Se anexan tambin, adems de los valores normales en %, los valores normales absolutos, que indican el nmero de cada estirpe celular expresado por microlitro . ( para obtenerlos, ver prctica no.7 ) -VALORES NORMALES. TIPO CELULAR Metamielocitos Bandas Segmentados Linfocitos Monocitos PORCENTAJE ( % ) 0-2 0-11 40-74 12-46 1-13 LMITES ABSOLUTOS <10-500 100-800 2000-6000 1000-4200 100-800
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Facultad de Bioanlisis, Veracruz Eosinfilos Basfilos 0-7 0-3
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3. LISTA DE REQUERIMIENTOS 3.1 Equipo de Laboratorio 1. Microscopio de Luz 3.2 Materiales de Laboratorio CANTIDAD 1 DESCRIPCIN Frotis de sangre perifrica teido con colorante de Wright
4. PROCEDIMIENTO. Con el objetivo de inmersin, identificar cuando menos 100 leucocitos consecutivos en un frotis teido con Wright, y reportar estos valores en por ciento.Se aconseja identificar el rea ideal para la observacin: el rea del cuerpo del frotis, donde las clulas se tocan pero no se sobreponen. El recorrido debe hacerse de manera vertical, para no omitir clulas de los mrgenes y para no salirse del rea ideal para el recuento. ACTIVIDADES. Investigar en qu casos pueden encontrarse cada una de las lneas celulares reportadas en la cuenta diferencial, con valores por arriba y por debajo de lo normal.
REPORTE DE RESULTADOS: TIPO CELULAR Metamielocitos Bandas Segmentados Linfocitos Monocitos Eosinfilos Basfilos PORCENTAJE ( % ) VALORES ABSOLUTOS
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SERIE BLANCA:PRCTICA No. 6 RECUENTO DE GLBULOS BLANCOS

1.INTRODUCCIN. La evaluacin de los glbulos blancos considera el conteo total de leucocitos y la cuenta diferencial de cada uno de ellos. La medicin del nmero total de leucocitos sirve en ocasiones de gua para evaluar la severidad de una enfermedad, siempre que se le asocie a la clnica que sta presenta.Un aumento de los glbulos blancos por encima de 10,000 /l, se llama leucocitosis, que con frecuencia es acompaada por incremento de los granulocitos neutrfilos, aunque no es la nica causa. Es menos frecuente que aumenten todas las lneas celulares, lo que podra deberse en realidad a una hemoconcentracin. Una disminucin en el recuento de glbulos blancos por debajo de los valores normales establecidos, se conoce como leucopenia.
2.PRINCIPIO Y METODOLOGA . Las pipetas empleadas para el recuento manual de glbulos blancos, son similares a las que se usan para el recuento de glbulos rojos, pero presentan en su capilar superior, la grabacin 11, y en la inferior, la grabacin 0.5, lo cual indica una dilucin distinta, que es en
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este caso de 1:20. Se emplea la misma cmara cuentaglbulos llamada cmara de Neubauer, nada ms que el conteo y los clculos se realizan de diferente manera. La cmara cuentaglbulos presenta un retculo con una superfcie total de 9mm, de 1 mm cada uno. Los cuadrados de las cuatro esquinas estn subdivididos en 16 cuadrados, y el cuadrado central, en 25.
Cuadrculas ( L ) para recuento de glbulos blancos
3.LISTA DE REQUERIMIENTOS. 3.1 Reactivos NUM 1 NOMBRE DEL REACTIVO Acido Actico CONCENTRACIN 2% CANTIDAD 50 ML
3.2 Equipo de Laboratorio
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Facultad de Bioanlisis, Veracruz 1. Microscopio de Luz
3.3
Material de Laboratorio CANTIDAD 1 1 1 1 DESCRIPCIN Cmara de Neubauer Pipeta para recuento de glbulos blancos Tubo de ensaye de 13 X 100 Boquilla
4.2
Preparacin del reactivo 4.2.1Lquido de Turk hemolizante: -solucin de cido actico al 2% - Agregar 1 gota de azul de metileno lquido
PROCEDIMIENTO. 5.1 Tcnica. 4.1.1 Pipetear sangre hasta la marca de 0.5 4.1.2 Limpiar cuidadosamente con una gasa o papel suave el extremo de la pipeta y completar con el lquido de dilucin hasta la marca de 11. 4.1.3 Mezclar en el agitador por 2 minutos. 4.1.4 Cargar la cmara con la dilucin bien homogeneizada 4.1.5 Dejar reposar 4.1.6 Contar los leucocitos contenidos en los cuatro retculos de las esquinas. Estos se encuentran divididos en 16 cuadros cada uno. 4.1.7 Realizar clculos como indica la frmula: N______x______20______x______10 = 4 En donde: N X 50
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N = suma de los leucocitos encontrados en los 4 retculos 20 = Ttulo de la dilucin 10 = Correccin de la cmara para llevar a 1 mm 4 = nmero de retculos. 4.2 Valores Normales: Adultos: 5,000 - 10,000 / mm Nios hasta 5 aos: 6,000 - 15,000 / mm Recin nacidos: 10,000 - 15,000/ mm 4.3 Causas de error 4.3.1 4.3.2 4.3.3 4.3.4 4.3.5 4.3.6 4.3.7 4.3.8 Recoleccin de la sangre en condiciones de cianosis. Si se practica la puncin venosa, evitar la compresin exagerada y prolongada. Pipetas mal calibradas Dilucin agitada insuficientemente Carga de la cmara con la primera gota de la pipeta Distribucin desigual de la cmara Incorrecto ajuste del cubreobjetos Cuenta defectuosa de los elementos celulares Confundir a los eritroblastos con leucocitos. Para evitar dicho error, se debe realizar una correccin con la siguiente frmula: Y = %_eritroblastos_contados X No. De leucocitos contados 100 + % de eritroblastos contados Numero real de leucocitos= No. De leucocitos contados Y Ejemplo: No. De leucocitos= 15,000 % de eritroblastos= 35 Y= 100 No. Real de leucocitos= 15,000 3,750 No. Real de leucocitos= 11,250 ACTIVIDADES. Realizar un esquema de la pipeta empleada para el conteo de Glbulos Blancos. 35 + _ 35 x 15,000
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Enlistar causas de leucocitosis as como de leucopenia.
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- Reporte de resultados .______________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________
SERIE BLANCA:PRCTICA No. 7 EVALUACIN DE FROTIS DE S.P. CON LEUCOCITOSIS Y DESVIACIN A LA IZQUIERDA
1.INTRODUCCIN. Un cambio en sangre perifrica que no est asociado con ningn cambio morfolgico celular pero que est asociado con enfermedad, es un incremento en las bandas. Esto puede ser referido como una " desviacin hacia la izquierda ", particularmente si formas an ms jvenes son encontradas en la circulacin. Normalmente la cuenta de neutrfilos tambin se encuentra aumentada, ya que si no es as, sto puede indicar un peor pronstico para el paciente, por lo que algunos autores se refieren a la primera circunstancia como un " cambio regenerativo hacia la izquierda ", y a la segunda , con cuenta normal baja de leucocitos, como un " cambio degenerativo hacia la izquierda ". Ocasionalmente, el aumento en la cuenta total de blancos y la aparicin de formas neutroflicas jvenes, es tan marcada, que pareciera la sangre perifrica que se analiza en pacientes con leucemia mieloctica crnica. Este exceso de salida de estas formas a la circulacin, de hecho s es debido a algn otro proceso patolgico y debe ser distinguido de leucemia. El trmino " Reaccin Leucemoide " es el indicado en esta situacin. En general, una cuenta de glbulos blancos elevada, se conoce como leucocitosis.Aunque ms frecuentemente se debe a un aumento en los neutrfilos ( neutrofilia ), no siempre es as: puede estar elevada a causa de un incremento en los linfocitos ( linfocitosis), en los eosinfilos ( eosinofilia ), y casi siempre se debe a alguna alteracin . 2.PRINCIPIO Y METODOLOGA . Se debern buscar tanto en el frotis sanguneo como por medio del recuento de glbulos blancos en el contador electrnico por el mtodo manual, el nmero aproximado de leucocitos en una muestra que previamente haya sido analizada y de la cual se haya reportado leucocitosis y desviacin a la izquierda. El hallazgo de un nmero aumentado de
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Manual de Prcticas de Hematologa banda y
leucocitos y el de formas jvenes que incluyan principalmente formas en metamielocitos, confirmarn dicho diagnstico .
4.PROCEDIMIENTO. Observar imgenes en laminillas y/ diapositivas correspondientes con estas alteraciones. ACTIVIDADES. - Reporte de resultados .______________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________
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SERIE BLANCA:PRCTICA No. 8 EVALUACIN DE FROTIS DE S.P. CON EOSINOFILIA

1.INTRODUCCIN. Como ya se ha mencionado, la elevacin de los glbulos blancos a partir de neutrfilos, es la ms comn. Sin embargo, puede haber un incremento en los eosinfilos que lleven a una leucocitosis. Aun cuando la cuenta de glbulos blancos no estuviera elevada, se podra decir que puede haber eosinofilia, y sto se determinar en base al clculo de los valores absolutos. Si los valores absolutos de los eosinfilos se encuentran por arriba de lo normal, se podra decir que hay eosinofilia. Son dos las causas ms comunes de esta condicin: las enfermedades y reacciones alrgicas, y ciertas parasitosis, sin embargo, no son las nicas. 2.PRINCIPIO Y METODOLOGA . Se analizarn muestras en las que exista el hallazgo de eosinofilia, hacindose el recuento diferencial as como la determinacin de los valores absolutos de los eosinfilos. 3.LISTA DE REQUERIMIENTOS. 3.1 Equipo de Laboratorio Microscopio de Luz 3.2 Materiales de Laboratorio CANTIDAD 1 DESCRIPCIN Frotis de sangre perifrica teido con colorante de Wright
4. PROCEDIMIENTO. Observar imgenes en laminillas y/ diapositivas correspondientes con estas alteraciones.
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ACTIVIDADES. Realizar una lista de enfermedades en las que se encuentren elevados los eosinfilos.
- Reporte de resultados .______________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________
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SERIE BLANCA:PRCTICA No. 9 EVALUACIN DE FROTIS DE S.P. CON PICNOSIS Y MICROORGANISMOS INTRACELULARES
1.INTRODUCCIN. Picnosis. El ncleo del neutrfilo normalmente es algo picntico, pero pueden distinguirse la paracromatina y la cromatina.Las clulas muertas las que estn a punto de morir, sin embargo, tendrn un ncleo obscuro y redondo sin evidencia de estructura nuclear. Los lbulos pueden estar separados puede haber un nico y redondo ncleo en degeneracin. Las clulas pueden distinguirse como neutrfilas porque el citoplasma retiene el tiente rosa habitual. Estas clulas tambin pueden ser identificadas como necrobiticas. En una muestra fresca, estas clulas son evidencia de que el organismo est " perdiendo la batalla " en un paciente con infeccin; tambin pueden aparecer en pacientes que reciben quimioterapia. Estos cambios tambin pueden encontrarse como resultado de una prolongada exposicin al EDTA. Organismos intracelulares. Esta es un tipo de inclusin muy rara de encontrar e indica la presencia del organismo infectante, ya que una sola clula que presente un microorganismo es significativo. Puede ser o bien una bacteria, bien una levadura, y puede observarse intra extracelularmente, e indica una septicemia abrumadora, de mal pronstico aunque podra ser un artificio originado por la toma de la muestra a travs de algn catter contaminado. 2.PRINCIPIO Y METODOLOGA . Se analizarn muestras en las que exista el hallazgo de picnosis y microorganismos intracelulares. 3.LISTA DE REQUERIMIENTOS. 3.1 Equipo de Laboratorio Microscopio de Luz 3.2 Materiales de Laboratorio CANTIDAD DESCRIPCIN
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Facultad de Bioanlisis, Veracruz 1
Frotis de sangre perifrica teido con Wright
4.PROCEDIMIENTO. Observar imgenes en laminillas y/ diapositivas correspondientes con estas alteraciones.
ACTIVIDADES. - Reporte de resultados .______________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________
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SERIE BLANCA:PRCTICA No. 10 EVALUACIN DE FROTIS DE S.P. CON CAMBIOS MORFOLGICO-BENIGNOS: GRANULACIONES TXICAS, VACUOLIZACIONES, CUERPOS DE DOHLE Y AGRANULACIN CITOPLSMICA
1.INTRODUCCIN. Granulaciones Txicas. Este cambio representa la presencia de grnulos primarios no especficos, los cuales se tien de color azul-prpura con la tincin de Wright como sucede con los del promielocito. Pueden deberse al menor nmero de mitosis realizadas durante la maduracin celular. Algunas clulas pueden contener slo unos pocos grnulos, otras, pueden contener muchos. Las granulaciones txicas pueden ser vistas en una variedad de desrdenes inflamatorios txicos, como por ejemplo, en infeccin bacteriana, ataque al corazn, insuficiencia renal, gota, artritis reumatoide, as como en respuesta a una neoplasia. Una granulacin aumentada tambin puede ser vista cuando el frotis es teido por mucho tiempo. Si estos grnulos fueran realmente debidos a un proceso patolgico, no seran vistos en todas las clulas, y adems aquellas que en verdad presenten granulaciones txicas, lo harn en variedad de grados. Si todas las clulas se ven afectadas y en el mismo grado de intensidad, sto debe considerarse como un artificio del frotis. Vacuolizacin. Ya que la principal funcin de los neutrfilos es la fagocitosis, si existe actividad fagoctica aumentada, pueden haber numerosas vacuolas dentro del citoplasma como una evidencia de sto. Estas son identificadas morfolgicamente como " hoyos " dentro del citoplasma. Sin embargo, sto tambin puede ser el resultado de una exposicin prolongada al EDTA. Al igual que en las granulaciones txicas, si todas las clulas se ven afectadas en el mismo grado, debe sospecharse un artificio del frotis. La vacuolizacin puede encontrarse frecuentemente cuando el paciente tiene una infeccin bacteriana, especialmente con las bacterias pigenas . Tambin es frecuente observarlas junto con las granulaciones txicas. Cuerpos de Dhle. Estas inclusiones son a menudo encontradas junto con las granulaciones txicas y/ vacuolizacin, aunque no siempre. A veces pueden ser la nica evidencia de un proceso
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txico reactivo en un paciente. Los cuerpos de Dhle son pedazos de RNA residual ( retculo endoplsmico rugoso ) en el citoplasma. Tienen el caracterstico color azul tenue del RNA y se les encuentra frecuentemente cerca de la membrana citoplasmtica de la clula. En algunas clulas, pueden ser muy prominentes, y en otras, pequeos y muy tenues, y pueden pasarse por alto si el observador no tiene suficiente cuidado en la observacin. En ocasiones pueden observarse los tres tipos de cambios txicos en la misma clula. Agranulacin citoplsmica. En ocasiones, la nica evidencia de neutrfilos activados es una rea clara agranular en la periferia de la clula, que indica la formacin de un pseudpodo. Estas clulas tambin se distinguen por un borde citoplsmico irregular en contraste con el borde redondo usual del neutrfilo. Tambin sto puede ser visto junto con las granulaciones txicas, la vacuolizacin, y los cuerpos de Dhle, aunque cada uno de ellos puede verse individualmente, y a menudo estos cambios se asocian con aumento en las formas en banda y cuenta elevada de leucocitos, aunque no siempre. 2.PRINCIPIO Y METODOLOGA . Se analizarn muestras con alteraciones en las que exista el hallazgo de varios cambios morfolgico-benignos. 3.LISTA DE REQUERIMIENTOS. 3.1 Equipo de Laboratorio Microscopio de Luz 3.2 Materiales de Laboratorio CANTIDAD 1 DESCRIPCIN Frois de sangre perifrica teido con Wright
4. PROCEDIMIENTO. Observar imgenes en laminillas y/ diapositivas correspondientes con estas alteraciones. ACTIVIDADES. - Reporte de resultados .______________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________
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SERIE BLANCA:PRCTICA No. 11 EVALUACIN DE FROTIS DE S.P. CON LINFOCITOS ATPICOS

1.INTRODUCCIN. El trmino " atpico ", ha sido utilizado para describir cualquier forma que vare del criterio morfolgico empleado para un linfocito normal. Debido a que varias formas son el resultado de infeccin viral, el trmino " reactivo" y el ms especfico de " virocito " han sido asociados con esta respuesta. Puede aplicarse el trmino " linfocitos variantes " ya que no todos los cambios son " reactivos " asociados con infeccin viral. La mayora de las formas variantes estn asociadas con infecciones virales, especialmente con el grupo herpes virus ( por ejemplo, el virus Epstein-Barr-la causa de mononucleosis infecciosa, citomegalovirus herpes simplex tipos 1 y 2 ), y virus de hepatitis B y C. Tambin pueden encontrarse en casos de toxoplasmosis, sfilis tuberculosis. Debido a que ocasionalmente puede encontrarse algn linfocito atpico y considerarse normal, algunos laboratorios los reportan como un porcentaje separado de leucocitos, por ejemplo, un porcentaje de linfocitos normales y un porcentaje de formas variantes. Otros pueden usar un mtodo semicuantitativo, como " 1+, 2+, 3+ " " leve, marcado severo ", para indicar su frecuencia relativa. Siempre que ms del 10% sean clasificados como variantes, el hallazgo es considerado clnicamente significativo y debe ser reportado. Otra de las formas se asemejan muy a menudo a un monocito. Son grandes, con citoplasma abundante y a menudo vacuolado, el cual puede ser ms gris, comparando con el usual color azul cielo del linfocito normal. El ncleo puede ser redondo, doblado, indentado lobulado y tiene una apariencia ms abierta y color ms tenue que lo usual. No presenta nucleolos. A veces, el citoplasma es predominantemente azul cielo, y contiene reas de un azul ms intenso, que tienden a irradiar del ncleo a concentrarse en la periferia de la clula, especialmente en donde hace contacto con las clulas que la rodean. A esta caracterstica se le conoce como basofilia radial basofilia perifrica, respectivamente. Estas clulas, como puede verse, pueden ser especialmente difciles de distinguir de los monocitos. Algunos rasgos tiles para distinguirlos es que los monocitos son clulas que empujan a otras y tienden a indentarlas cuando estn muy prximas a ellas. En cambio, los linfocitos ms fcilmente sufren esa indentacin . El ncleo del monocito, tpicamente es ms doblado lobulado, y el patrn cromatnico es ms delicado y fino. Por otro lado, si se est en duda, puede seguirse una regla general que menciona que si hay muchos linfocitos en el frotis, la clula que se sospecha ms seguramente es un linfocito tambin. En un momento dado, hay quien puede confundir estas clulas con formas malignas blastos. Debe recordarse entonces que en casos de leucemia, las clulas tienden a ser muy similares morfolgicamente, dando una apariencia montona, homognea, especialmente al
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Manual de Prcticas de Hematologa formas
observarse con pocos aumentos.En contraste, las enfermedades asociadas con variantes, demostrarn una apariencia muy heterognea. 2.PRINCIPIO Y METODOLOGA . Se analizarn muestras en las que exista el hallazgo de linfocitos atpicos. 3.LISTA DE REQUERIMIENTOS. 3.1 Equipo de Laboratorio Microscopio de Luz 3.2 Materiales de Laboratorio CANTIDAD 1 DESCRIPCIN Frotis de sangre perifrica teido con Wright
4. PROCEDIMIENTO. Observar imgenes en laminillas y/ diapositivas correspondientes con estas alteraciones. ACTIVIDADES. - Reporte de resultados .______________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________
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SERIE BLANCA:PRCTICA No. 12 EVALUACIN DE FROTIS DE S.P. CON LINFOCITOS PLASMOCITOIDES

1.INTRODUCCIN. Una de las formas en que se presenta el linfocito atpico, comparte rasgos con la clula plasmtica, la cual no es encontrada normalmente en sangre perifrica. Ambas tienen un citoplasma azul muy intenso y pueden medir de 15-20 .Los dos pueden distinguirse por su patrn de cromatina nuclear. En el linfocito " plasmacitoide ", el ncleo tiene una apariencia abierta y laxa y tiene un color rojo-prpura ms tenue. Pueden verse tambin nucleolos. Esto es en contraste con la apariencia amontonada, abultada del ncleo de la clula plasmtica y su localizacin excntrica dentro de la clula. No hay una rea clara perinuclear en el linfocito plasmacitoide como la hay en la clula plasmtica. Los linfocitos plasmocitoides son comnes de encontrar en ciertas enfermedades virales como el dengue y las enfermedades exantemticas de la infancia.
2.PRINCIPIO Y METODOLOGA . Se analizarn muestras que tengan el hallazgo de linfocitos plasmocitoides. 3.LISTA DE REQUERIMIENTOS. 3.1 Equipo de Laboratorio Microscopio de Luz 3.2 Materiales de Laboratorio CANTIDAD 1 DESCRIPCIN Frotis de sangre perifrica teido con Wright
4. PROCEDIMIENTO. Observar imgenes en laminillas y/ diapositivas correspondientes con estas alteraciones. ACTIVIDADES.
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- Reporte de resultados .______________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________
SERIE BLANCA:PRCTICA No. 13 EVALUACIN DE FROTIS DE S.P. CON HIPERSEGMENTACIN NUCLEAR EN NEUTRFILOS
1.INTRODUCCIN. Los ncleos de los neutrfilos normalmente tienen de dos a cinco lbulos nucleares.La mayora tendrn dos tres. Si existe un aumento en las clulas con cuatro cinco lbulos, el observador debera buscar cuidadosamente clulas con ms de cinco lbulos.La presencia de una sola clula con seis distintos lbulos nucleares, puede tener significancia clnica. Por otro lado, si ms del 5% de los neutrfilos tienen cinco lbulos si la mayora tienen cuatro, sto tambin puede ser un hallazgo importante. Los neutrfilos hipersegmentados son la indicacin ms temprana en sangre perifrica de anemia megaloblstica ( por deficiencia de vitamina B12 de folatos ), y es importante que se reporten. Cuando menos deben identificarse seis lbulos distintos para que la clula sea identificada como hipersegmentada.En casos severos, pueden encontrarse clulas con nueve lbulos an ms. 2.PRINCIPIO Y METODOLOGA . Se analizarn muestras que tengan el hallazgo de hipersegmentacin nuclear en neutrfilos 3.LISTA DE REQUERIMIENTOS. 3.1 Equipo de Laboratorio Microscopio de Luz 3.2 Materiales de Laboratorio CANTIDAD DESCRIPCIN 1 Frotis de sangre perifrica teido con Wright 4. PROCEDIMIENTO. Observar imgenes en laminillas y/ diapositivas correspondientes con estas alteraciones.
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SERIE BLANCA:PRCTICA No. 14 ESTUDIO DE MDULA SEA

1.INTRODUCCIN. El estudio medular es un procedimiento especializado de gran utilidad clnica. Puede ser realizado tanto por aspirado (mielograma) como por biopsia percutnea segn las caractersticas clnicas del paciente y el diagnstico presuntivo. El estudio medular permite identificar las diferentes series hematopoyticas, estudiar el estroma medular y obtener material para estudios bacteriolgicos, micolgicos, de citometra de flujo y genticos entre otros. La decisin de solicitar un estudio de mdula sea debe basarse en la hiptesis de que los hallazgos que se esperan del estudio justifiquen someter al paciente al riesgo y la molestia, a pesar de stos ser mnimos. Los hallazgos medulares esperados (o inesperados) en parte dependen del cuadro clnico, de los hallazgos en sangre perifrica y de la informacin que se requiere en algunos casos especficos. En la actualidad el estudio medular hace parte integral del estudio sistematizado de un importante nmero de enfermedades hematolgicas, infiltrativas y neoplsicas que estn bien protocolizadas. Debido a que el aspirado de mdula sea est virtualmente libre de riesgo (excepto si se hace en el esternn) y que la biopsia medular es un procedimiento invasivo mnimo, el estudio se recomienda en todos los casos en donde se pueda justificar un probable beneficio con la informacin obtenida. Estudio medular . El tipo de procedimiento utilizado para el estudio de la mdula sea (aspirado, biopsia o ambos), depende de la sospecha clnica. En trminos generales se plantean cuatro posibilidades: Compromiso de precursores hematopoyticos con alteraciones citolgicas, como en las anemias y leucemias. En estos casos, est mejor indicado el aspirado medular o mielograma. Compromiso de las estructuras de soporte del tejido hematopoytico o del mismo hueso como en la mielofibrosis, metstasis o granulomas, o que haya disminucin del tejido hematopoytico y se requiera determinar con certeza la celularidad, como en la anemia aplstica. En estos casos est mejor indicada la biopsia medular. Fiebre de origen desconocido, en donde se debe solicitar un estudio de aspirado y biopsia. Sospecha clnica o se desee estudiar una enfermedad infecciosa por bacterias, micobacterias y hongos. En estos casos, se debe solicitar estudio de cultivos de material medular obtenido por aspirado.
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Algunos pacientes con coagulopata (especialmente los hemoflicos) requieren terapias de reemplazo para hacer el procedimiento cuando est indicado hacer el estudio. Como la mdula sea es un tejido blando, se pueden obtener muestras introduciendo una aguja adecuada en la mdula y aspirando con jeringa. Los sitios donde se puede obtener mdula sea en los adultos y nios mayores de un aos son: el esternn, las espinas ilacas superiores anterior o posterior; la cresta ilaca y las apfisis espinosas de las vrtebras. La puncin esternal, hasta donde sea posible, no se debe hacer de rutina, debido al riesgo de lesin cardiovascular. En nios menores de un ao se puede tomar material medular por aspirado en el tubrculo tibial. A partir del primer ao de vida se toma similar a la del adulto. Procedimientos especiales en el material medular Las muestras de mdula sea son coloreadas con Wright cuando son obtenidas por aspiracin y con hematoxilina-eosina, cuando es por biopsia; de acuerdo con los resultados obtenidos el hematlogo apoyado en los hallazgos de sangre perifrica y en el examen fsico, puede recurrir que tipo de procedimientos especiales estn indicados para confirmar el diagnstico.
2.PRINCIPIO Y METODOLOGA . 2.1 Principio. Los extendidos de mdula sea se colorean con Wright siguiendo la tcnica usual. Inicialmente son observados macroscpicamente para determinar la presencia de partculas. Luego el extendido es examinado en bajo poder (10X) para apreciar la relativa cantidad de grasa y de contenido celular hematopoytico de acuerdo al cual la mdula se puede clasificar como: hipocelular, normocelular e hipercelular. Despus de la observacin en 10X el extendido se examina con objetivo de 100X localizando los campos donde se hallan las partculas y se procede al anlisis de las clulas sanguneas que habitan en la mdula sea. Se establece la relacin del nmero de las clulas blancas frente al nmero de clulas rojas nucleadas. Esta proporcin se denomina relacin mielo eritroide (M:E). Para estimar esta relacin es necesario la identificacin y tabulacin de 300 500 clulas nucleadas. Se observa aumento en la relacin mielo-eritroide, cuando se aumentan los precursores mieloides como sucede en los procesos inflamatorios agudos, leucemias o cuando se disminuyen los precursores eritroides como en la insuficiencia renal crnica. Una disminucin en la relacin mielo-eritroide se presenta cuando se disminuyen los precursores mieloides como en la anemia aplstica o cuando aumentan los precursores eritroides como en las anemias hemolticas y megaloblsticas. En forma simultnea se realiza una valoracin cuidadosa de la morfologa de las diferentes lneas celulares: serie eritroide, granuloctica, linfoide, monoctica, megacarioctica, clulas plasmticas y otras clulas.
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2.2 Metodologa Estudio de Mdula Osea El estudio de mdula sea, comprende los siguientes aspectos:
2.2.1 Seco Dbil 10X. Celularidad Global, Ausencia Aumento del No. De Clulas grasas y/ megacariocitos. Celuraridad Hematopoytica -Normal -Aumentada: hiperceluraridad -Disminuda: hipoceluraridad aplasia.
2.2.2 Examen a Gran Aumento 100X. 2.2.2.1 Recuento Global: Serie Granuloctica con predominio:mielocitos y metamielocitos : Serie Eritroctica: Predominio: Policromatfilos y Ortocromticos. Serie linfoide, Monoctica y Megacarioctica: 60%. 20%. 20%.
2.2.2.2 Caractersticas Morfolgicas: -Aumento de Mieloblastos -Aumento de Linfocitos clulas plasmticas -Basofilia, Eosinofilia, aumento de clulas Cebadas de Macrfagos. -Megacariocitos: hipo hipersegmentacin nuclear; alteraciones de la madurez citoplsmica, megacariocitos de tamao muy pequeo. -Serie Eritoide con cambios Megaloblsticos diseritropoyesis. -Presencia de clulas no hematopoyticas: clulas metastsicas.
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2.2.3 Reporte del Mielograma y Valores Normales. LMITES DE NORMALIDAD (%) Serie Blanca Mieloblastos Promielocitos Mielocitos Metamielocitos Bandas + segmentados Serie Roja Proeritroblastos Eritroblastos Basfilos Eritroblastos Policromticos Eritroblastos Ortocromticos Linfocitos Basfilos y Clulas Cebadas Megacariocitos Monocitos + macrfagos Plasmocitos Relacin Mieloide-Eritroide 3.LISTA DE REQUERIMIENTOS. 3.1 Equipo de Laboratorio 1 Microscopio de Luz 50.4-70.3 0.2-1.5 2.1-4.1 8.4-17.0 10.0- 26.8 15.7 -31 0.2-1.3 0.5-2.4 17.9-29.2 0.4-4.6 11.1-23.1 0-0.2 0-0.4 0-0.8 0.4-3,9 1.5-3.3
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3.2 Material de Laboratorio CANTIDAD DESCRIPCIN 1 Laminillas y/ diapositivas con muestra de aspirado de mdula sea
4.PROCEDIMIENTO. Observar las laminillas diapositivas y reportar el mielograma de acuerdo con el formato que aparece en el reporte de resultados. ACTIVIDADES. -Observacin de laminillas y/ diapositivas con imgenes de aspirados de mdula sea normal . -Reportar un mielograma normal.
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Facultad de Bioanlisis, Veracruz R E P O RT E Serie Blanca Mieloblastos Promielocitos Mielocitos Metamielocitos Bandas + segmentados Serie Roja Proeritroblastos Eritroblastos Basfilos Eritroblastos Policromticos Eritroblastos Ortocromticos Linfocitos Basfilos y Clulas Cebadas Megacariocitos Monocitos + macrfagos Plasmocitos Relacin Mieloide-Eritroide DE
Manual de Prcticas de Hematologa MIELOGRAMA
SERIE BLANCA:PRCTICA No. 15 INTRODUCCIN A LAS LEUCEMIAS Y EVALUACIN DE FROTIS DE S.P. CON LEUCEMIA GRANULOCTICA CRNICA
1.INTRODUCCIN. Las leucemias mieloides son neoplasias malignas del Sistema Hematopoytico.
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Como las neoplasias en general, las clulas leucmicas: Proliferan de manera independiente de sus factores de crecimiento ( producidos por las clulas estromales de su microambiente) Tampoco responden a factores que las inhiben pues estn protegidas de la apoptosis. Esta autonoma en la reproduccin celular se debe a mutaciones en los genes que codifican para: - factores de crecimiento - factores de transcripcin - protenas fosforiladoras( que meten a la clula en ciclo celular) - factores inhibidores de la apoptosis - factores inhibidores del ciclo celular
El trmino LEUCEMIA significa aumento de leucocitos neoplsicos en la sangre, por lo cual es un trmino inapropiado. Las LEUCEMIAS son neoplasias clonales que provienen de una sola clula maligna original la cual tiene una gran capacidad proliferativa, como la CTH las CFC: Las leucemias pueden ser agudas crnicas LEUCEMIAS CRNICAS En las Leucemias Crnicas, las clulas neoplsicas maduran terminalmente No producen la muerte en las etapas iniciales El nmero de clulas maduras es normal aumentado Segn el predominio de la lnea celular hacia la cual maduran pueden distinguirse: Leucemia Granuloctica Crnica Leucemia Mielomonoctica Crnica Policitemia Vera Trombocitemia esencial Mielofibrosis crnica idioptica con metaplasia mieloide. LEUCEMIA GRANULOCTICA CRNICA La mutacin original se produce en una CTH, que madura terminalmente hacia todas las lneas celulares, pero lo hace de predominantemente hacia la lnea granuloctica, y frecuentemente hacia la megacarioctica. 2.PRINCIPIO Y METODOLOGA . 2.1 Datos Caractersticos en el Diagnstico:
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CTH CFC GEMM
CTH
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Leucocitosis generalmente por arriba de 50,000leucocitos totales, y en ms del 70% de los casos, por arriba de 100,000. Presencia de granulocitos en todas las etapas de maduracin. Eosinofilia y sobre todo basofilia absolutas Presencia de eritroblastos Anemia moderada ausencia de sta Plaquetas normales aumentadas Fosfatasa alcalina en leucocitos disminuda. Mdula ea con Hiperplasia de clulas granulocticas en todas las etapas de maduracin y con abundantes megacariocitos. 2.2 Datos Definitivos Para El Diagnstico Datos Citogenticos : Presencia del Cromosoma Philadelphia: translocacin recproca entre los cromosomas 9 y 22. ( aumento de tirosina kinasa intracelular) Presencia de translocacin con formacin del gen hbrido BCR/abl
3.LISTA DE REQUERIMIENTOS. 3.1 Equipo de Laboratorio Microscopio de Luz 3.2 Materiales de Laboratorio CANTIDAD 1 1 DESCRIPCIN Frotis de sangre perifrica teido con Wright y/ diapositivas Aspirado de mdula sea teido con Wright y/ diapositivas
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SERIE BLANCA:PRCTICA No. 16 EVALUACIN DE FROTIS DE S.P. Y M.O. CON POLICITEMIA VERA Y MIELOFIBROSIS IDIOPTICA CON METAPLASIA MIELOIDE
1.INTRODUCCIN.
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En las leucemias mieloides crnicas, la CTH tienen todava ms capacidad de dividirse que una CTH normal. Si la maduracin predomina hacia la lnea de los eritrocitos, se tendr:Policitemia vera. Cuando la proliferacin es predominantemente hacia la lnea de los megacariocitos, pero stos se mueren en la etapa de megacariocito maduro, a esta neoplasia se le llama Mielofibrosis con Metaplasia Mieloide. 1.1 POLICITEMIA VERA Policitemia ( elevacin de los glbulos rojos masa eritroctica total) de orgen primario en la que hay que descartar otras causas de policitemia secundaria como son: Enfermedades con dificultad en la oxigenacin sangunea: tabaquismo crnico, sndrome de Pickwick. Fstulas arteriovenosas cardiopatas congnitas. Hemoglobinas anormales que producen hipoxi tisular. Tumores productores de eritropoyetina.
1.2 MIELOFIBROSIS CRNICA IDIOPTICA CON METAPLASIA MIELOIDE Se origina tambin en una CTH que madura hacia todas las lneas mieloides pero predominantemente hacia los megacariocitos En la Mdula sea existe aumento de todas las lneas, pero predominantemente hacia los megacariocitos los cuales mueren en la etapa de megacariocitos maduros, liberando los factores de crecimiento fibroblsticos, lo cual lleva a la mielofibrosis. Al ocuparse el tejido medular por el tejido fibroso, se origina la hematopoyesis extramedular. En sangre perifrica usualmente hay un cuadro leucoeritroblstico.( elevacin del nmero de granulocitos inmaduros y muchos eritroblastos
2.PRINCIPIO Y METODOLOGA . 2.1 Criterios para el Diagnstico de Policitemia Vera: Proliferacin de la CTH hacia todas las lineas con predominio hacia la lnea eritroctica:plaquetas ,eritroblastos ,basofilia , eosinofilia, granulocitosis con clulas no ms inmaduras que los mielocitos.Sin embargo la Biometra Hemtica no es definitiva.
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Trombocitosis > 400,000/ l Leucocitosis > 12,000/ l sin fiebre infeccin Aumento de fosfatasa alcalina leucocitaria sin fiebre infeccin. Aumento de vitamina B12 srica transcobalamina Cromosoma Philadelphia negativo.
Estudio de Cortes Histolgicos de Mdula sea en Policitemia Vera Hiperplasia notable, con aumento de todas las lneas celulares, principalmente eritroblastos y megacariocitos. Clulas Grasas disminudas ausentes. El 30% de pacientes desarrollan mielofibrosis con metaplasia mieloide.
2.2 Criterios para el Diagnstico de Mielofibrosis Idioptica Crnica con Metaplasia Mieloide. En mdula sea, aumento de todas las lneas, pero predominantemente hacia los megacariocitos. Mielofibrosis desde el principio en algunos pacientes, aunque no en todos, que se demuestra con gruesas fibras de colgena en mdula sea y sustitucin de la celuraridad normal por tejido fibroso, ocasionada por liberacin de factores de crecimiento fibroblstico por los megacariocitos malignos. En sangre perifrica puede haber elevacin o disminucin de plaquetas y granulocitos . En sangre perifrica, cuadro leucoeritroblstico ( granulocitos inmaduros y muchos eritroblastos , anemia y poiquilocitos ( sobre todo dacriocitos ). Realizar diagnstico diferencial con otras enfermedades que causan mielofibrosis.( los dems sindromes mieloproliferativos crnicos ).
3.LISTA DE REQUERIMIENTOS. 3.1 Equipo de Laboratorio Microscopio de Luz 3.2 Materiales de Laboratorio CANTIDAD 1 DESCRIPCIN Frotis de sangre perifrica teido con Wright y/ diapositivas
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Facultad de Bioanlisis, Veracruz 1
Aspirado de mdula sea teido con Wright y/ diapositivas
SERIE BLANCA:PRCTICA No. 17 EVALUACIN DE FROTIS DE S.P. Y M.O. CON LEUCEMIA MIELOMONOCTICA CRNICA Y TROMBOCITEMIA ESENCIAL
1.INTRODUCCIN.
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Cuando la maduracin de la CTH es predominantemente hacia los neutrfilos y monocitos, la leucemia se llama Leucemia Mielomonoctica Crnica. Cuando la maduracin predomina hacia las plaquetas, se trata de Trombocitemia esencial. 1.1LEUCEMIA MIELOMONOCTICA CRNICA Leucemia Mielomonoctica Crnica Mielodisplasia Tipo IV. Cuadro parecido al de la LGC, pero con un incremento en la maduracin hacia la lnea de los monocitos . 1.2 TROMBOCITEMIA ESENCIAL ( Primaria Hemorrgica )
La clula que sufre la mutacin neoplsica, es la CTH, que madura hacia todas las lneas, pero con predominio hacia la lnea de megacariocitos-plaquetas.
2.PRINCIPIO Y METODOLOGA . 2.1 Criterios para el Diagnstico de Leucemia Mielomonoctica Crnica. Monocitos displsicos, clulas hbridas entre mielocitos y monocitos. Menos del 15% de los granulocitos son inmaduros. Cambios displsicos +++.( apndices nucleares ; ncleos de neutrfilos muy largos ) Ms de 1000 monocitos /l ( ms del 3% ), Anemia leve. En mdula sea los mieloblastos son <20%.
2.2 Criterios para el Diagnstico de Trombocitemia Esencial Cuenta de Plaquetas por arriba de 600,000/l Hemoglobina < 13 g/dl Ausencia de Cromosoma Philadelphia del gen hbrido BCT/abl Fibrosis medular ausente menos de 1/3 de la biopsia Ausencia de otra causa de trombocitosis ( trombocitosis secundaria ) Mdula sea con hiperplasia moderada de las lneas eritroblstica y granuloctica y aumento marcado de megacariocitos. Descartar otras causas de Trombocitosis Secundaria, como:Deficiencia de Hierro,Hemorragias crnicas, Procesos inflamatorios infecciosos crnicos, Neoplasias malignas no hamatopoyticas, Pacientes esplenectomizados.
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ACTIVIDADES. - Reporte de resultados .______________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________
SERIE BLANCA:PRCTICA No. 18 EVALUACIN DE FROTIS DE S.P. Y M.O. CON LEUCEMIA MIELOIDE AGUDA M0
1.INTRODUCCIN. LEUCEMIAS AGUDAS En las leucemias agudas, las clulas neoplsicas no maduran teminalmente; generalmente maduran hasta la etapa de blasto un poco ms all.
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Para que se consideren agudas deben tener > 20% de blastos en M.O. Las clulas blsticas inhiben la proliferacin de las clonas normales. Los pacientes tienen anemia, plaquetopenia, granulocitopenia. La muerte sobreviene por hemorragias, por la plaquetopenia e infecciones.
La Leucemia M0, es una leucemia aguda cuya cuenta tpica de Mdula Osea es la siguiente: 96% de Mieloblastos ( 1a) 4% de eritroblastos ( eritroblastos y granulocitos en maduracin: muy disminudos ). Por lo tanto: 0-3% de los blastos son positivos para tincin citoqumica de MIELOPEROXIDASA.
2.PRINCIPIO Y METODOLOGA . Criterios para el diagnstico de la Leucemia Aguda M0 Demostrar con anticuerpos anti-mieloperoxidasa, la presencia de esta enzima ( MPO) en el Retculo Endoplsmico Rugoso en el Aparato de Golgi. Demostrar la presencia de protenas de membrana CD13 CD33 con anticuerpos monoclonales . Demostrar la ausencia de esterasas especficas, que son propias de la serie monoctica, Demostrar la ausencia del marcador monoctico CD14 y que descartan la Leucemia M5a monoblstica . Demostrar la ausencia de marcadores megacariocticos como CD41 CD61, que descartan Leucemia M7 Megacarioblstica. Demostrar la ausencia de marcadores de linfocitos que descartan leucemia linfoblstica: de Precursores B: CD10, CD19, y TDT. Y de Precursores T: CD2, CD3, CD5, CD7 y TDT.
3.LISTA DE REQUERIMIENTOS. 3.1 Equipo de Laboratorio Microscopio de Luz 3.2 Materiales de Laboratorio CANTIDAD 1 1 DESCRIPCIN Frotis de sangre perifrica teido con Wright y / diapositivas Aspirad de mdula sea teido con Wright y/ diapositivas
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1.INTRODUCCIN. La cuenta tpica de la leucemia aguda M1 es: Mieloblastos: 83% Promielocitos: 3%
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Facultad de Bioanlisis, Veracruz Mielocitos: 2% Eritroblastos: 12% 2.PRINCIPIO Y METODOLOGA .
Los criterios para el diagnstico de la leucemia aguda M1, son: >3% y < 10% de clulas tienen grnulos MPO positivos bastones de Auer observables con la tincin citoqumica para MPO son clulas con un poco ms de maduracin . ( que pueden ser: mieloblastos 1b ( mieloperoxidasa + ) , mieloblastos 2, promielocitos , mielocitos. 90% de clulas son mieloblastos sin grnulos ( mieloblastos 1 =negativos para mieloperoxidasa ) Hay anemia, granulocitopenia, trombocitopenia
3.LISTA DE REQUERIMIENTOS. 3.1 Equipo de Laboratorio Microscopio de Luz 3.2 Materiales de Laboratorio CANTIDAD DESCRIPCIN 1 Frotis de sangre perifrica teido con Wright y/ diapositivas 1 Aspirado de mdula sea teido con Wright y/ diapositivas
4.PROCEDIMIENTO. Observar imgenes en laminillas y/ diapositivas correspondientes con estas alteraciones. ACTIVIDADES. - Reporte de resultados .______________________________________________________ __________________________________________________________________________
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1.INTRODUCCIN. La Leucemia mieloide aguda M2, presenta la siguiente cuenta tpica de Mdula Osea: Mieloblastos: Promielocitos: 52% 33%
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Facultad de Bioanlisis, Veracruz Mielocitos: Granulocitos ms maduros: Eritroblastos: 2.PRINCIPIO Y METODOLOGA . Criterios para el diagnstico de la Leucemia Aguda M2: 7% 3% 5%
Entre 30 y 89% de clulas de mdula sea ( excluyendo eritroblastos ) son mieloblastos y > 10% de clulas son promielocitos granulocitos ms maduros. ) El rango puede ser: desde 20% de blastos con 80% de promielocitos clulas ms maduras , hasta 80% de blastos con 20% de promielocitos clulas ms maduras Las llamadas Leucemias Agudas de Eosinfilos, de Basfilos y de Clulas cebadas, son similares a la M2, aunque con diferenciacin a cada lnea respectiva
3.LISTA DE REQUERIMIENTOS. 3.1 Equipo de Laboratorio Microscopio de Luz 3.2 Materiales de Laboratorio CANTIDAD 1 1 DESCRIPCIN Frotis de sangre perifrica teido con Wright y/ diapositivas Aspirado de Mdula sea teido con Wright y/ diapositivas
4.PROCEDIMIENTO. Observar imgenes en laminillas y/ diapositivas correspondientes con estas alteraciones. ACTIVIDADES. - Reporte de resultados .______________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________
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1.INTRODUCCIN. La leucemia M3 es una leucemia aguda, en la cual, la clula neoplsica original es la CFC GEMM y no la CTH. Y en donde el 90% de las clulas de mdula sea maduran hasta la etapa de promielocitos. Su complicacin principal y la causa de su gravedad es la CIVD, la cual se evita con el Acido Transretinoico, , que favorece la diferenciacin de las celulas malignas.
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2.PRINCIPIO Y METODOLOGA . Criterios para el diagnstico de la leucemia aguda M3. 90% de clulas de Mdula Osea maduran hasta la etapa de PROMIELOCITOS , los cuales son anormales, y en mayor cantidad que los promielocitos normales; algunas clulas pueden madurar hasta neutrfilos segmentados y las clulas que maduran ms pueden presentar anomala de Pseudo-Pelger. Pueden ser de dos variedades: 1) Variedad de grnulos grandes, los cuales son observables, y cristalizan formando bastones de Auer, generalmente en cantidad mltiple, llamados faggots, en el 90% de las clulas ) 2) La Variedad Microgranular, en la que los grnulos pueden no verse claramente, teniendo estos casos el ncleo plegado, de aspecto monocitoide, por lo que puede ser confundida con una leucemia M5b ( monoblstica ), por lo cual debe realizarse para su diagnstico, tinciones de Mieloperoxidasa Y esterasas dobles: MPO M3 M5b +++ + +++ Esterasas
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1.INTRODUCCIN. En la leucemia M4, la maduracin de la clona neoplsica se dirige hacia dos lneas de manera simultnea: la de los granulocitos y la de los monocitos, por lo que la morfologa es compatible tanto con una M2 como con una M5. Cuenta tpica en Mdula Osea:
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Mieloblastos y promielocitos: Mielocitos: Monoblastos y promonocitos: Eritroblastos: 2.PRINCIPIO Y METODOLOGA .
45% 8% 43% 4%
Criterios para el diagnstico de la Leucemia Aguda M4 20% de las clulas son blastos, que inluyen: mieloblastos 1 y 2; monoblastos 1 y 2 y promonocitos ( ms de 5,000 clulas de estirpe monoltica ). Ms del 20% y < 80% de clulas son blastos, promonocitos y granulocitos ms maduros.( Los granulocitos y clulas de estirpe monoltica se encuentran en proporciones muy similares. Si > 80% de clulas fueran de estirpe monoctica, sera una M5
3.LISTA DE REQUERIMIENTOS. 3.1 Equipo de Laboratorio Microscopio de Luz 3.2 Materiales de Laboratorio CANIDAD 1 1 DESCRIPCIN Frotis de sangre perifrica teido con Wright y/ diapositivas Aspirado de mdula sea teido con Wright y/ diapositivas
4.PROCEDIMIENTO. Observar imgenes en laminillas y/ diapositivas correspondientes con estas alteraciones. ACTIVIDADES. - Reporte de resultados .______________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________
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SERIE BLANCA:PRCTICA No. 23 EVALUACIN DE FROTIS DE S.P. Y M.O.CON LEUCEMIA MIELOIDE AGUDA M5
1.INTRODUCCIN. Se distinguen dos tipos de leucemias Monoblsticas: la M5a poco diferenciada, y la M5b bien diferenciada. El diagnstico se realiza al encontrar en M.O. > 80% de clulas de estirpe monoctica: monoblastos, promonocitos y monocitos en una cuenta sin eritroblastos. Cuenta tpica de la leucemia M5a:
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Facultad de Bioanlisis, Veracruz Monoblastos: Promonocitos y monocitos: Eritroblastos: Cuenta tpica de la leucemia M5b: Monoblastos: Promonocitos: Monocitos: Eritroblastos: 6% 85% 7% 2% 90% 6% 4%
2.PRINCIPIO Y METODOLOGA. Criterios para el diagnstico de la Leucemia M5.
M5a
M5b
> 80% de clulas son de estirpe > 80% de clulas son de estirpe monoctica: monoctica: monoblastos, promonocitos y monoblastos, promonocitos y monocitos en monocitos en una cuenta sin eritroblastos. una cuenta sin eritroblastos. >80% de clulas de estirpe monoctica <20% de clulas de estirpe monoctica son son monoblastos monoblastos
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La M5a poco diferenciada ( equivalente a la M0) se forma de monoblastos 1 y constituye el 15% de los casos de M5a.Debe distinguirse de la M0 de la L2: -usando anticuerpos monoclonales para CD14 -Demostrando la presencia de esterasas no especficas en el RER con el microscopio electrnico, la ausencia de MPO.
> 80% de las clulas de estirpe monoctica son promonocitos y monocitos; stos se distinguen por sus grnulos azurfilos con Wright
La M5a bien diferenciada, se forma de Puede confundirse son la monoblastos 1b y 2 y ---es positiva para microgranular esterasas no especficas. -es positiva para anticuerpos monoclonales anti CD14, CD36 y CD68. -MPO negativa, pero ocasionalmente positiva.
M3 variedad
3.LISTA DE REQUERIMIENTOS. 3.1 Equipo de Laboratorio Microscopio de Luz 3.2 Materiales de Laboratorio CANTIDAD DESCRIPCIN 1 Frotis de sangre perifrica teido con Wright y/ diapositivas 1 Aspirado de mdula sea teido con Wright y/ diapositivas 4.PROCEDIMIENTO. Observar imgenes en laminillas y/ diapositivas correspondientes con estas alteraciones.
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1.INTRODUCCIN.
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En esta leucemia, tambin llamada eritroleucemia, la CTH maligna madura de manera simultnea hacia las lneas eritroblstica y granuloctica. 2.PRINCIPIO Y METODOLOGA . Criterios para el diagnstico de la leucemia M6. Al menos 50% de clulas de Mdula osea deben ser eritroblastos que frecuentemente, pero no siempre, tienen anormalidades morfolgicas Y al menos 30% de clulas de la mdula sea deben ser mieloblastos promielocitos que pueden tener bastones de Auer. 30% -49% de clulas medulares sean eritroblastos con alteraciones morfolgicas notables Y que al menos 30% de clulas de Mdula Osea sean mieloblastos promielocitos O bien los siguientes criterios reunidos: Cuadro de leucemia aguda Severa anemia Otras citopenias La mayora de las clulas de la Mdula Osea sean eritroblastos muy anormales en distintas etapas de maduracin con predominio de eritroblastos. Frecuentemente no ms de 5% de mieloblastos, a lo que antes se llamaba MIELOSIS ERITRMICA, que por lo general evoluciona hacia una M6 tpica con > 30% de mieloblastos.
3.LISTA DE REQUERIMIENTOS. 3.1 Equipo de Laboratorio Microscopio de Luz 3.2 Materiales de Laboratorio CANTIDAD 1 1 DESCRIPCION Frotis de sangre perifrica teido con Wright y/ diapositivas Aspirado de mdula sea teido con Wright y/ diapositivas
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1.INTRODUCCIN. Las clulas proliferantes en las M7 maduran hasta megacarioblastos y en ocasiones hasta promegacariocitos y megacariocitos.A este tipo de neoplasias , formadas casi exclusivamente por clulas de aspecto blstico sin diferenciacin morfolgica, y diagnosticables principalmente a travs de tcnicas inmunocitoqumica, se les llama leucemias megacarioblsticas M7.
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2.PRINCIPIO Y METODOLOGA . Criterios para el Diagnstico de la leucemia M7. >30% de blastos en Mdula osea, de los cuales: >50% deben pertenecer a la lnea de los megacariocitos. Las clulas son positivas para los anticuerpos anti CD41 y CD61, que ponen en evidencia las glicoprotenas plaquetarias. ( tcnicas inmunocitoqumicas ) Mieloperoxidasa negativa en los blastos ( megacarioblastos ) Esterasas no especficas positivas focalmente en el aparato de Golgi. De acuerdo con la etapa hasta la cual llegan a madurar las clulas se consideran: M7a: La clona proliferante madura hasta la etapa de megacarioblasto. M7b: La clona proliferante madura hasta promegacariocitos e incluso megacariocitos. Pudiendo presentar plaquetas normales y aumentadas morfolgicamente anormales ( gigantes y sin grnulos. En ambas se observa tambin proliferacin de otras lneas celulares, especialmente de eritroblastos. Con frecuencia presentan fibrosis medular. 3.LISTA DE REQUERIMIENTOS. 3.1 Equipo de Laboratorio Microscopio de Luz
3.2 Materiales de Laboratorio CANTIDAD 1 1 DESCRIPCIN Frotis de sangre perifrica teido con Wright y/ diapositivas Aspirado de mdula sea teido con Wright y/ diapositivas
4.PROCEDIMIENTO. Observar imgenes en laminillas y/ diapositivas correspondientes con estas alteraciones. ACTIVIDADES. - Reporte de resultados .______________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________
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SERIE BLANCA:PRCTICA No. 26 EVALUACIN DE FROTIS DE S.P. CON LEUCEMIA LINFOCTICA CRNICA Y LEUCEMIA DE CLULAS PELUDAS
1.INTRODUCCIN. Leucemia Linfoctica Crnica B Esta es la ms comn de las leucemias linfoides.Cursa con linfocitosis notable. En ella, el resto de la hematopoyesis se conserva normal.Se presenta con crecimiento ganglionar
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bilateral.El Linfoma de Linfocitos bien diferenciados es la manifestacin tisular (ganglionar ) de la misma enfermedad.Los linfocitos tienen pocas inmunoglobulinas de superficie. Leucemia de Clulas Peludas Las tricoleucemias o leucemia de clulas peludas se presenta generalmente con esplenomegalia, sin linfadenomegalias y con anemia citopenias.Las clulas proliferantes tienen una morfologa caracterstica que ayuda a su diagnstico. 2.PRINCIPIO Y METODOLOGA . 2.1Criterios para el diagnstico de la leucemia Linfoctica Crnica B. Hallazgo de linfocitosis y linfadenomegalias en pacientes de ms de 50 aos de edad, sin otra causa de linfocitosis. Rasgos Morfolgicos: numerosos linfocitos pequeos con escaso citolasma, cromatina gruesa, segmentada, como rebanadas de pastel. En su evolucin pueden aparecer prolinfocitos acompaados por citopenias variables. Inmunofenotpicamente, los linfocitos son positivos a CD19, CD20 y a CD5; ste ltimo los caracteriza por tener la capacidad de formar autoanticuerpos. 2.2 Criterios para el diagnstico de la Leucemia Linfoctica Crnica T CD8+ de Linfocitos Grandes Granulares. Linfocitosis menos notable. Clulas con grnulos azurfilos citoplsmicos y cromatina gruesa, pero no segmentada. Linfocitos con capacidad de inhibir la proliferacin de clulas hematopoyticas. El cuadro leucmico se acompaa de neutropenia pancitopenia. Inmunofenotpicamente son clulas positivas a CD2, CD3 y CD8 2.3 Criterios para el diagnstico de la Leucemia de Clulas Peludas. Rasgos morfolgicos caractersticos de ayuda al diagnstico por bases morfolgicas: Clulas pequeas Citoplasma muy plido y con muchas microvellosidades filiformes Ncleos pequeos como los de los linfocitos, pero cromatina no tan densa. Las clulas tienen caractersticamente grnulos con fosfatasa cida resistente al cido tartrico. La mdula sea es difcil de aspirar, ya que, como es tpico, tiene fibrosis. Inmunofenotpicamente son positivas para CD19 y CD20, CD11 y CD25.
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SERIE BLANCA:PRCTICA No. 27 EVALUACIN DE FROTIS DE S.P. CON LEUCEMIA LINFOBLSTICA

1.INTRODUCCIN. La clasificacin FAB seala 3 tipos fundamentales: L1, L2, y L3, independientemente de su inmunofenotipo.
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Leucemia L1. Corresponden al tipo ms comn de leucemia aguda infantil y es la que tiene el mejor pronstico de las 3. Leucemia L2.Tienen un peor pronstico que las L1 Leucemia L3. Casi todos los casos corresponden a clulas B.Tienen mal pronstico 2.PRINCIPIO Y METODOLOGA . 2.1Criterios para el diagnstico de la Leucemia L1. blastos muy pequeos, en donde el ncleo ocupa la mayor parte de la superficie y por lo tanto hay muy escaso citoplasma, el cual carece de vacuolas presenta muy escasas; hay homogeneidad en cuanto al tamao celular y densidad cromatnica; la cromatina es fina, aunque no tanto como la de los mieloblastos Ocasionalmente, la cromatina es gruesa y pueden confundirse con linfocitos pequeos. Los linfoblastos ocasionalmente adquieren forma de raqueta de mano. 2.2 Criterios para el diagnstico de la Leucemia L2. Clulas muy variables en tamao Las clulas ms grandes tienen cromatina fina y nucleolos bien demarcados, como los de los mieloblastos; las de tamao intermedio, tienen cromatina ms gruesa, y las ms pequeas, tienen cromatina condensada. Con frecuencia, los ncleos tienen mltiples indentaciones cerebriformes ( en cuyo caso, si se acompaan de grnulos positivos a la fosfatasa cida y a -naftil acetato esterasa, corresponden a leucemias T y tienen un mal pronstico). Citoplasma ms abundante que en las L1, generalmente sin grnulos y con pocas ninguna vacuola.
2.3 Criterios para el diagnstico de la Leucemia L3 Clulas muy caractersticas, con citoplasma basfilo repleto de vacuolas claras, que contienen lpidos neutros, positivas con rojo oleoso y PAS negativas Ncleos con cromatina fina granular y enormes nucleolos. Las clulas son morfolgica e inmunofenotpicamente indistinguibles de las que proliferan en el linfoma de Burkitt.
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SERIE BLANCA:PRCTICA No. 28 EVALUACIN DE FROTIS DE S.P. Y M.O.CON MIELOMA MLTIPLE

1.INTRODUCCIN. Neoplasia hematopoytica, en la que proliferan clulas plasmticas, que han madurado independientemente de una estimulacin antignica.Cuando llegan a salir las clulas
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plasmticas a la circulacin, el diagnstico que se establece en el de Leucemia de clulas plasmticas. Dichas clulas forman inmunoglobulinas homogneas, monoclonales, que se reconocen por electroforesis de protenas.La proliferacin se restringe a la mdula sea, ocasionando zonas de ostelisis reconocidas por radiografas, y que se manifiestan clnicamente por dolor sea y fracturas patolgicas y por hipercalcemia.
2.PRINCIPIO Y METODOLOGA . 2.1 Criterios para el diagnstico del Mieloma Mltiple. En el aspirado de mdula sea: Aumento notable de clulas plsmticas ( lo normal es <3%) Algunas clulas presentan ncleos irregulares y multilobulados. Clulas plasmticas con cristales mltiples intracelulares, constitudos por inmunoglobulinas cristales azurfilos alargados. Clulas plasmticas con bordes citoplsmicos irregulares y de color rojo ( clulas en flama).
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SERIE BLANCA: PRACTICA NO. 29 TINCIN CITOQUMICA PARA MIELOPEROXIDASA

1.INTRODUCCIN La citoqumica constituye en la prctica hematolgica un complemento indispensable de la morfologa ptica convencional.
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Su finalidad es estudiar la presencia de ciertos componentes qumicos (enzimas o sustancias diversas) en el interior de las clulas sanguneas tanto hematopoyticas como circulantes en sangre perifrica. A menudo resulta difcil diferenciar los blastos leucmicos de la leucemia linfoblstica aguda de los de la leucemia mieloblastica (M1), monoblstica aguda (M5A) y la leucemia megacarioblstica aguda (M7) utilizando solamente extensiones con las coloraciones de MayGrnwald-Giemsa. Recientemente se ha propuesto estudiar las leucemias agudas basndose en tres niveles secuenciales de investigacin que son: los mtodos citoqumicos en primer lugar, el inmunofenotipo intracelular en segundo lugar y por ltimo el inmunofenotipo de membrana. Diversos procedimientos de tincin citoqumica contribuyen a llevar a cabo esta distincin. Cuando se utilizan las reacciones citoqumicas adecuadas junto con el aspecto morfolgico de las extensiones con tincin de Wright-Giemsa, puede establecerse un diagnstico preciso en la mayora de los casos. Desde el punto de vista tcnico todas las reacciones citoqumicas tienen en comn 3 etapas fundamentales: fijacin, incubacin y contraste. Estas tinciones pueden realizarse sobre sangre perifrica, extensiones de medula sea, preparaciones de ndulos linfticos u otros tejidos. 2.PRINCIPIO Y METODOLOGA . La mieloperoxidasa se sintetiza en el retculo endoplasmtico rugoso, de donde pasa a las cisternas del aparato de Golgi quedando localizada fundamentalmente en la granulacin prim aria o azurfila. Dicha enzima se combina in vivo con perxido de hidrgeno transformndose en un potente agente bactericida, viricida y fungicida. As, muestra actividad en todos los estadios del desarrollo de los neutrfilos y se halla en los grnulos azurfilos. Los eosinfilos muestran una actividad intensa. Los linfocitos, basfilos y las formas eritroides no se tien. La tincin citoqumica de mieloperoxidasa es fundamental en el diagnstico diferencial de las leucemias agudas (positiva en las mieloblsticas y negativa en las linfoblsticas). La actividad peroxidasa puede faltar en algunos neutrfilos txicos de pacientes con infeccin y leucemia aguda, y en casos raros de deficiencia congnita de mieloperoxidasa. La demostracin citoqumica de esta enzima se basa en la accin oxidante de la peroxidasa sobre el substrato, bencidina, en presencia de perxido de hidrgeno, apareciendo un precipitado amarillo ocre en el lugar del citoplasma en donde se ha producido la reaccin. 3.LISTA DE REQUERIMIENTOS 3.1 Reactivos. NUM NOMBRE DEL REACTIVO CONCENTRACIN CANTIDAD
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Facultad de Bioanlisis, Veracruz 1 2 3 4 5 6 7 8 Formol Etanol absoluto Dihidrocloruro de bencidina ZnSO4.7H2O Acetato de sodio3H20 H202 NaOH Safranina
Manual de Prcticas de Hematologa 37% 10ml 90ml 0.3g 1ml 1g 0.7ml 1.5ml 0.2g
3.8% 3% 1.0N
3.2 Equipo de Laboratorio Balanza granataria Balanza analtica 3.3 Material de Laboratorio CANTIDAD 2 2 1 2 1 2 10 DESCRIPCIN Vasos de precipitados de 100 ml Matraces aforados de 100 ml Pipeta graduada de 10 ml Pipetas graduadas de 5 ml Pipeta graduada de 1 ml Frascos de 250 ml Frotis de sangre perifrica
3.4 Preparacin de los Reactivos 3.4.1 Solucin Fijadora Formol al 37% Etanol absoluto 3.4.2 Solucin Colorante Modo de Preparacin: Etanol al 30% ( v/v en agua ) Dihidrocloruro de bencidina ZnSO4.7H2O al 3.8% Acetato de sodio 3H2O 100 ml 0.3 g 1 ml 1 g 10 ml 90 ml
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Facultad de Bioanlisis, Veracruz H2O2 al 3% NaOH 1.0 N Safranina 0.7 ml 1.5 ml 0.2 g
Los reactivos se mezclan en el orden indicado. La bencidina a veces contiene un material insoluble. Al aadir el sulfato de zinc se forma un precipitado que se disuelve al aadir los dems reactivos. El pH de la solucin debe ajustarse a 6.00 + 0.05. La solucin se filtra y se guarda a temperatura ambiente; puede usarse de manera repetida por meses. 4.PROCEDIMIENTO. 4.1 Tcnica: 4.1.1. 4.1.2 4.1.3 4.1.4 4.1.5 4.1.6 4.1.7 4.1.8 4.1.9 Los frotis se fijan por un minuto con la solucin formol etanol Lavar con agua de la llave Secar al aire PERFECTAMENTE Sumergir en la solucin colorante por 30 segundos. Lavar con agua de la llave Contrateir por 30 segundos con solucin acuosa de safranina al 1% Lavar con agua de la llave Secar al aire Sellar con resina sinttica y cubrir con cubreobjetos del #1
Actividades: -Practicar la tincin citoqumica para Mieloperoxidasa con frotis de sangre perifrica. 4.2 Resultados Esperados. - Reporte de resultados .______________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________
SERIE BLANCA: PRACTICA NO. 30 ALFA NAFTIL ACETATO ESTERASA EN LEUCOCITOS

1. INTRODUCCIN.
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Las esterasas son un grupo de enzimas capaces de hidrolizar steres en sus componentes cidos y alcoholes. Existen diferentes variedades segn el substrato empleado. Se utilizan 4 substratos: naftol-AS-C-cloroacetato, naftol-AS-D-acetato, -naftil-acetato, -naftil-butirato, los cuales al ser hidrolizados en presencia de una sal diazoica dan un precipitado insoluble en el lugar de la reaccin. 2. PRINCIPIO Y METODOLOGA . Utilizando como substrato el naftol-AS-C-cloroacetato (CAE) se detecta una esterasa que es especfica de la granulopoyesis neutrfila en la que es positiva a partir del mieloblasto y se expresa en forma de un precipitado rojo anaranjado muy brillante. Su utilidad diagnstica se centra bsicamente en el reconocimiento de clulas blsticas mieloides, si bien su aparicin es ms tarda que la de la mieloperoxidasa aunque iguala a sta en especificidad. Utilizando como substrato el naftol-AS-D-acetato, se obtiene una intensa positividad en la serie monoctica que, a diferencia de las restantes clulas hematopoyticas, es fluoruro sensible. Dada su positividad ms restrictiva es preferente usar el substrato naftil-acetato o -naftil-butirato para marcar la serie monoctica y sus precursores, cuya positividad es intensa y se manifiesta en forma de un precipitado difuso por todo el citoplasma. 3.LISTA DE REQUERIMIENTOS. 3.1 Reactivos. NUM 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 NOMBRE DEL REACTIVO Na2HPO4 KH2PO4 Formaldehido Acetona Na2HPO4 KH2PO4 Cloruro de Pararosanilina HCl Alfa Naphthyl acetato Etiln glicol monometil Eter Nitrito de sodio CONC. 37% CANTIDAD 20 mg 100mg 25 ml 45 ml 2.366 2.267 g 250 mg 1.25 ml 50 mg 2.5 ml 1.5 ml
Concentrado 4%
3.2 Equipo de Laboratorio Balanza granataria Balanza analtica
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Facultad de Bioanlisis, Veracruz 3.3 Materiales de Laboratorio CANTIDAD 2 2 2 2 1 1 3 4 2 2 2 10
DESCRIPCIN Vasos de precipitados de 100 ml Vasos de precipitados de 500 ml Probetas de 100 ml Probetas de 500 ml Matraz volumtrico de 50 ml Tubo de 13X100 ml Pipetas de 10 ml Pipetas de 5 ml Goteros de 10 ml Goteros de 100 ml Frascos de 500 ml Frotis de sangre perifrica
3.4 Preparacin de Reactivos Soluciones de Fijacin 3.4.1 Solucin A Na2HPO4 KH2PO4 Agua destilada 3.4.2 Solucin de fijacin pH 6.6 Formaldehdo al 37% Acetona Solucin A ( #1 ) ( Esta solucin se guarda a 4C ) 25 ml 45 ml 30 ml 20 mg 100 mg 30 ml
3.4.3 Amortiguador de fosfatos 1/15 M pH 7.6 a) Na2HPO4 H2O destilada b) KH2PO4 H2O destilada 2.366 g 250 ml 2.267 g 250 ml
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Facultad de Bioanlisis, Veracruz Preparacin del amortiguador: Solucion a) Solucin b) Soluciones de Tincin 3.4.4 Solucin de Pararosanilina Cloruro de Pararosanilina Agua destilada HCl concentrado
42.5 ml 7.5 ml
250 mg 5 ml 1.25 ml
Disolver calentando suavemente y agitando. Dejar enfriar la solucin y filtrar ( Esta solucin se conserva a temperatura ambiente ) 3.4.5 Solucin de Alfa Naphthyl acetato Alfa Naphthyl acetato Etiln glicol monometil Eter 50 mg 2.5 ml
( Esta solucin se prepara fresca , en cada ocasin ). 3.4.6 Solucin de Pararosanilina hexazotizada Solucin de Pararosanilina Nitrito de sodio al 4% recin preparado 1.5 ml 1.5 ml
( Esta solucin se prepara fresca, en cada ocasin ). 3.4.7 Mezcla de incubacin. Buffer de Fosfatos 1/15 M, pH 7.6 Solucin de Pararosanilina hexazotizada Solucin de Naphthyl acetato Ajustar el pH a 6.1+ 0.3 con NaOH 1N y filtrar ( Esta solucin se prepara fresca , en cada ) 45 ml 3 ml 2.5 ml
4.PROCEDIMIENTO.
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Facultad de Bioanlisis, Veracruz 4.1 Tcnica:
4.1.1. Fijar los frotis a 4C por 30 segundos 4.1.2 Lavar los frotis con agua de la llave 4.1.3 Dejar secar a temperatura ambiente 4.1.4 Colocar los fotis en la mezcla de incubacin a temperatura ambiente por 45 minutos en la oscuridad 4.1.5 Lavar con agua de la llave 4.1.6 Contrateir con hematoxilina de Gill por 10 minutos 4.1.7 Lavar con agua de la llave 4.1.8 Secar a temperatura ambiente 4.1.9 Sellar con resina sinttica y cubrir con cubreobjetos del #1
Actividades: -Practicar la tincin citoqumica para Esterasas con frotis de sangre perifrica.
- Reporte de resultados .______________________________________________________ __________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ _____________________________________________________________
BIBLIOGRAFA 1 .BLOOD CELL MORPHOLOGY. Peripheral Smear Evaluation. Manual 1.Lynn Maedel and Sandra Sommer.American Society of Clinical Pathologysts.Chicago.
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2.BLOOD CELL MORPHOLOGY. Benign or Reactive Changes in WBCs and Plateletes.Manual 3. Lynn Maedel and Sandra Sommer.American Society of Clinical Pathologysts.Chicago. 3.El Atlas de Hematologa.Dr. Joaqun Carrillo Farga 4.Manual de Tcnicas Bsicas para el Laboratorio de Hematopatologa.Instituto de Hematopatologa AVL Society. 5.Manual de Tcnicas de Laboratorio en Hematologa.Segunda edicin.Joan Lluis Vives.Josep Lluis Aguilar.Masson. 6.Citoqumica. http://web.udl.es/dept/medicina/citoweb/libro/pass/paginas/contenido/libro/citoquim.htm
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3.4 Preparacin de los reactivos 3.4.1Colorante de Wright:

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3.4.3- EDTA. EDTA Agua destilada 3g 100 ml

Mezclar el EDTA poco a poco con el agua destilada.

3.4.4 -Solucin de Oxalato de amonio. Oxalato de amonio Agua destilada 0.8 g 80 ml

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3.2 Busqueda de anormalidades morfolgicas de: leucocitos ___________________________________________________________

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