Universidad Nacional Autnoma de Mxico Escuela Nacional Preparatoria 2 Erasmo Castellanos Quinto

Prctica N 2

INTEGRANTES: y y y y y Fuentes Meja Monserrat Manzanita Loyola Isaac Moreno Serrano Julio Alejandra Prieto Herrera Antonio Vzquez Cerda Alejandra

GRUPO: 600C

MATERIA: Temas Selectos de Biologa

Antibiogramas: Accin de la Ampicilina (penicilina) y del Aloe vera (sbila) en cultivo de bacterias. INTRODUCCIN: Antecedente: El escocs Alexander Fleming descubri la penicilina, un antibitico que revolucion la medicina moderna, de un modo bastante accidental. Hasta Fleming el nico tratamiento posible contra las infecciones bacterianas era la quimioterapia, usando sustancias sintetizadas en el laboratorio que, si bien

solucionaban parcialmente ciertos efectos de la enfermedad, generaban efectos secundarios importantes. Gracias a la penicilina, en el siglo XX, algunas

enfermedades hasta entonces consideradas incurables empiezan a tener solucin. En 1921, Fleming haba observado la accin anti bactericida de una sustancia presente en las secreciones nasales, llamada lisozima. En 1928, cuando estudiaba el virus de la gripe encontr que en la placa en la que estaba cultivando unas bacterias haba crecido moho y que alrededor de este se haba formado un rea libre de estafilococos. Esta capa contena alguna sustancia que inhiba el crecimiento de la bacteria. A este principio activo lo llamo Penicilina, ya que proceda del hongo Penicillium notatum. Sin embargo, problemas tcnicos no le permitieron purificar ni producir la penicilina por lo que no lleg a usarla clnicamente. En 1938, los britnicos Ernst Boris Chain y Howard Walter Florey iniciaron una investigacin detallada y sistemtica de este antibitico y lograron, en 1940, tras su traslado a EEUU, la fabricacin industrial y el empleo mdico de la penicilina, lo que supuso la salvacin de incontables vidas durante la Segunda Guerra Mundial. (Camacho J. 2001) Ampicilina sdica (Penicilina): Antibitico sinttico de espectro amplio, til para bacterias gramnegativas. Resistente al cido y se destruye con la penicilinasa. Se absorbe ms lentamente que otras penicilinas. Usado en infecciones respiratorias, gastrointestinales causadas por Shigella, salmonella, E. Coli, H. influenza, etc. (Loebl, S., Spratto G. y Heckheimer E. 1994)

Sbila (Aloe Vera): Varios estudios demuestran que el jugo de la hoja de A. vera en aplicaciones externas, acelera el proceso de cicatrizacin de heridas y quemaduras inducidas experimentalmente en ratn, rata, cuyo y conejo. Extractos acuosos de la hoja ejercieron un efecto antiinflamatorio en el ratn y la rata cuando se administraron por va externa, subcutnea y oral, en animales a los que se indujo edema de pie o inflamacin de odo mediante la aplicacin de diferentes productos irritantes. Se ha comprobado que el homogenado, el jugo y el extracto de la hoja presentan una accin benfica en casos de lcera en la rata por vas oral e intragstrica a la dosis de 500mg/kg el homogenado, y 2ml/animal, el jugo. Los extractos acuosos y etanlicos de las hojas presentaron un efecto analgsico en el ratn por va intragstrica y subcutnea. Otros efectos probados incluyen la accin hipoglicmica en el ratn ejercida por una fraccin de polisacridos obtenida de las parte areas por va intraperitoneal e intragstrica en animales diabticos inducidos con aloxana; la accin estimulante de msculo liso probada en leon de rata; la accin depresora del sistema nervioso central cuando se administr el extracto acuoso de la hoja por va intraperitoneal; una accin antibitica contra Bacillus subtilis y Satphylococcus aureus, antiviral contra el Virus Herpes simplex I y II debido al extracto acuoso y metanlico respectivamente. (Biblioteca digital de la medicina tradicional mexicana, 2009) Antibiograma: Son mtodos in Vitro que determinan la susceptibilidad de los microorganismos a una variedad de agentes microbianos, bajo condiciones de laboratorio especfica y estandarizada. (Alexander H., 2010) JUSTIFICACIN: En este trabajo se busca determinar la sensibilidad de los microorganismos, (que se cultivaron anteriormente) a los antibiticos, usando un antibitico natural (aloe vera encontrado en la sbila) y un antibitico sinttico (ampicilina, una clase de penicilina). Adems de un lote testigo que ser agua. Con esto podremos conocer y comparar los efectos de stos sobre los microorganismos (principalmente bacterias).

HIPTESIS: Se espera encontrar que ambos, tanto el antibitico natural como el sinttico pueden inhibir los microorganismos antes cosechados en las cajas petri, de la cual se derivan otras dos hiptesis: 1a hiptesis: Esperamos demostrar que la penicilina es ms efectiva, cmo antibitico que la sbila. 2a hiptesis: Esperamos demostrar que la sbila es ms efectiva, como antibitico que la penicilina. OBJETIVO: y Determinar la sensibilidad de los microorganismos cultivados (bacterias) ante antibiticos, uno de tipo natural y el otro sintetizado, mediante el uso de antibiogramas, tomando como lote testigo el agua.

METODOLOGA: Preparacin de medios de cultivo 1. Se toman 300 mL de caldo de pollo concentrado en el vaso de precipitado de 500 mL. 2. Se calienta el caldo de pollo en la parrilla, hasta que quede completamente liquido (recurdese que el caldo de pollo estando frio se solidifica). 3. Como se requiere una disolucin al 3% de carragenina, se pesan 9 gr en la balanza, vacindolos en el caldo, se agita hasta que quede completamente disuelta la carragenina en el caldo. Se calienta evitando la formacin de grumos. Se debe cuidar que no llegue al punto de ebullicin porque podra derramarse. 4. Vaciar la solucin en el matraz Erlen Meyer.

Figura 1. La solucin de carragenina y caldo de pollo en el matraz Erlen Meyer (Paula A. 2010) 5. Se introducir el matraz en la autoclave, que estar aproximadamente a 121C aproximadamente vigilando la presin, durante aproximadamente una hora. 6. Dentro de la campana de flujo laminar desinfectada, los alumnos portando bata y cubre bocas, se abren las 10 cajas de petri y se vaca dentro de ellas un poco del contenido del matraz, (caldo de pollo y carragenina), procurando tomar el matraz con un guante, ya que estar caliente. Se cierran y sellan las tapas despus de llenadas.

Figura 2. Vaciado de solucin en cajas petri (Pineda, J. 2008)

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7. Al terminar se llevan las 10 cajas dentro del refrigerador y se dejan 3 das dentro, para que se solidifique el medio de cultivo. Elaboracin de Antibiograma 1. Se sacan 4 de las 10 cajas petri del refrigerador, se colocan abiertas 24 horas en diferentes superficies con el fin de que se contamine. 2. Al da siguiente se meten en la estufa de cultivo a 30 centgrados, dejndolas dentro de esta por tres das.

Cajas petri

Figura 3. Cajas petri dentro de estufa de cultivo microbiano (Andrea P. 2008) 3. Trascurridos los 3 das se sacan las cajas petri de la estufa y se observa el crecimiento de microorganismos en los medios 4. Con ayuda de un microscopio estereoscpico y posteriormente para un mejor enfoque con un microscopio ptico, se seleccionar una colonia de bacterias de una caja petri. Figura 4. Este es un ejemplo de cmo se vern las colonias de bacterias para diferenciarse de los hongos. (Extrada de http://fresno.pntic.mec.es/ msap0005/1eso/tema_10.htm)

5. Dentro de la campana de flujo laminar con uso de pinzas, se toman un par de discos de papel filtro, cortados con la perforadora, dos de ellos humedecidos con antibitico natural, un par ms con antibitico sinttico y el ltimo par con agua, . 6. Se colocarn en la superficie de siembra, procurando que queden equidistantes uno del otro. formando un hexgono como se muestra en la figura 1, procurando que la superficie no sea tocada por las pinzas y los discos solo toquen la zona del medio donde sern sembrados. 7. Se repiten los pasos 5 y 6 en las 4 cajas

Figura 5. Aqu se explica la forma en cmo se colocarn los discos 8. Continuando en la campana de flujo laminar con el asa de siembra, se toma una pequea muestra de la colonia seleccionada y se transfiere frotando levemente el asa de siembra con el medio de cultivo estril, procurando sea un mismo tipo de microorganismo, en el rea donde se encuentran los discos humedecidos. Es importante que la siembra sea superficial, sin profundizar en el medio de cultivo y que los alumnos usen guantes, bata y cubre bocas. 9. Se llevan las placas a incubar a 30C en la estufa de cultivo durante 24 horas. 10. Pasadas 24 horas, se observa el crecimiento sin abrir las cajas, y se hacen
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las anotaciones de los resultados y conclusiones correspondientes.

BIBLIOGRAFA: y Alexander H. 2010, Antibiograma Presentacin PowerPoint recuperado el 14 de noviembre de 2011 desde http://www.slideshare.net/Prymer/ Antibiograma-3625685, y Andrea P. 2008. Extrada el 24 de noviembre 2011 de

http://pumabukis.blogspot.com/2008/08/practica-de-hogos-y-levaduras.html y Biblioteca digital de la medicina tradicional mexicana, 2009 Atlas de las Plantas de la Medicina T radicional Mexicana / Sbila / Aloe Vera Mxico, UNAM, extrado el 14 de noviembre de 2011 desde http://www.medicinatradicionalmexicana.unam.mx/monografia.php?l=3&t=S %C3%A1bila&id=7465. y Camacho J. 2001. La prodigiosa penicilina: Fleming, Madrid, Nivola, 140 pp. y Loebl, S., Spratto G. y Heckheimer E. 1994. Manual de Farmacologa 1 Mxico, Limusa y Grupo Noriega Editores, pp. 68-85. y Paula A. 2010. Micropropagacion. Extrada el 25 de noviembre 2011 de http://www.blogger.com/profile/02859018439623654183 y Pineda, J. 2008. Microbiologa. Extrada el 24 de noviembre 2011 de http://microbita.blogspot.com/2008/11/medios-de-cultivo.html y Virus, Bacterias, protistas y hongos. Extrada el 23 de noviembre 2011 de http://fresno.pntic.mec.es/msap0005/1eso/tema_10.htm