Prueba Nombre y pH del medio Estado fsico Siembra y cantidad de inoculo recomendado Utilidad del medio de cultivo o de la prueba

Reaccin de Voges-Proskauer (VP) Medio de Clark y Lubs (Caldo RM/VP) Lquido Difusin Determina la capacidad de algunos organismos de producir un producto final neutro, la acetona a partir de la fermentacin de glucosa.

Prueba de reduccin de nitratos Caldo nitrato pH=7.0 Lquido Difusin, inculo denso. Determinar la capacidad de un organismo de reducir el nitrato en nitritos o en nitrgeno libre.

Prueba de sulfuro indol motilidad Medio SIM pH 7.3 Semislido en forma vertical Picadura en forma vertical Determinar si un organismo es mvil o inmvil, si es capaz deliberar cido sulfhdrico por accin enzimtica de los aminocidos que contienen azufre produciendo una reaccin visible de color negro y por ltimo la capacidad de desdoblar el indol de la molcula triptfano, adems que la consistencia del medio permite la observacin de la movilidad de algunas bacterias. Tiempo: 24 - 48 horas Temperatura 35 - 37 C Prueba de indol Reactivo de Kovacs Adicionar 5 gotas y agitar suavemente el tubo Interpretar inmediatamente. Indol La reaccin positiva despus de 24 horas indica una prueba completa. Si el cultivo de 24 horas es negativo deber incubarse otras 24 horas y repetirse la prueba. 1. cido sulfhdrico Positivo: Ennegrecimiento del medio Negativo: Sin ennegrecimiento 2. Indol Positivo: Anillo rojo en la superficie del medio. Negativa: No se produce color Negativa: Color naranja en la superficie del medio. Indica desarrollo de escatol, un compuesto metilado que puede ser el precursor de la formacin de indol. 3. Movilidad Positiva. Los organismos mviles migran de la lnea de siembra y se difunden en el medio provocando turbiedad. Negativa. Crecimiento bacteriano acentuado siguiendo la lnea de siembra. PRUEBA POSITIVO NEGATIVO Sulfuro + Indol + Movilidad + -

Temperatura y tiempo de incubacin Reactivos necesarios(orden de adicin y volumen)

Tiempo: 24 - 48 horas Temperatura: 35-37 C 1) 0.6ml de alfa naftol 2) 0.2ml de KOH 3) Agitar el tubo suavemente, dejar reposar de 10 a 15 minutos antes de la interpretacin.

Tiempo: 18-24 horas Temperatura 35 - 37 C 1. Alfa - naftilamina 1 ml. 2. cido sulfanilico 1 ml.

Tiempo mximo de lectura del resultado

La mayora de los organismos capaces de reducir el nitrato, lo hacen dentro de las 24 horas.

Interpretacin

Positivo: Rojo rosado en la superficie del medio (presencia de acetona). Negativo: Amarillo. Puede formarse un color cobrizo pero aun as la reaccin es negativa.

Se interpretan los resultados un minuto despus de adicionar los reactivos. Positivo: rosa a rojo intenso Negativo: Amarillo Fase 2. Si no hay cambio de color adicionar Zn Cambio de color: Negativo No hay cambio de color: Positivo

Reporte de resultados

Positivo (+) Negativo (-)

Positivo (+) Negativo (-)

Prueba Nombre y pH del medio Estado fsico Siembra y cantidad de inoculo recomendado Utilidad del medio de cultivo o de la prueba

Movilidad, indol y ornitina MIO pH 6 Semislido en forma vertical Por picadura, en forma vertical El medio MIO se utiliza para la identificacin de Enterobacterias sobre la base de movilidad, la produccin de ornitina descarboxilasa y de indol.

Fenilalanina desaminasa Agar fenilalanina pH 7.6 Slido en pico de flauta Estra en pico de flauta, inculo denso. Determina la capacidad de un organismo de desaminar la fenilalanina en cido fenilpirvico por su actividad enzimtica, con la consiguiente acidez resultante.

Almidn Agar almidn pH 7.6 Slido pico de flauta o Placa

Temperatura y tiempo de incubacin Reactivos necesarios(orden de adicin y volumen)

Tiempo: 24 48 horas Temperatura: 35 37 C Prueba de indol Reactivo de Kovacs Adicionar 5 gotas y agitar suavemente el tubo Interpretar inmediatamente. Indol Si el cultivo de 24 horas es negativo deber incubarse otras 24 horas y repetirse la prueba. 1. Ornitina descarboxilasa Positivo: color prpura del medio Negativo: Color amarillo en el fondo del tubo que puede ser prpura al final. 2. Indol Positivo: Anillo rojo en la superficie del medio. Negativa: No se produce color Negativa: Color naranja en la superficie del medio. Indica desarrollo de escatol, un compuesto metilado que puede ser el precursor de la formacin de indol 3. Movilidad Positiva. Los organismos mviles migran de la lnea de siembra y se difunden en el medio provocando turbiedad. Negativa. Crecimiento bacteriano acentuado siguiendo la lnea de siembra. *Se leen las reacciones de movilidad y de ornitina descarboxilasa antes de agregar el reactivo de Kovacs para la prueba de indol.* Prueba Movilidad Indol Ornitina Positivo + + + Negativo -

Tiempo: 18-24 horas Temperatura 35 - 37 C Cloruro frrico 10% Adicionar de 4-5 gotas a un tubo incubado Hacer rotar suavemente el tubo para que el crecimiento se separe. Esperar de 1 a 5 minutos para leer la reaccin.

Ayuda a la diferenciacin de especies entre varios gneros de microorganismos aerobios (Bacillus y Streptococcus) Ayuda a la diferenciacin de especies entre diversos gneros de microorganismos anaerobios (Clostridium) Ayuda a la diferenciacin de gneros en los que todas las especies son: Methylobacterium, Mobiluncus y Roseomonas 35C 18-24 h Agregar Reactivo directamente-Yodo acuoso de Gram-Yodo acuoso de Lugo

Tiempo mximo de lectura del resultado Interpretacin

Positiva: Rojo claro a intenso en el pico de flauta. Negativo: Amarillo

Positivo Caldo. Ausencia de color en el medio o leve tono amarillo Placa/Tubos de pico flauta. Medio color prpura-azul con rea incolora alrededor Negativo Caldo. Color azul en todo el medio Placas/tubos en pico de flauta. Medio color prpura-azul en crecimiento

Reporte de resultados

Positivo (+) Negativo (-)

Positivo (+) Negativo (-)

Prueba Nombre y pH inicial del medio Estado fsico Siembra y cantidad del inoculo recomendado Utilidad del medio de cultivo o prueba

Fermentacin de carbohidratos Caldo bsico rojo de fenol pH 7.4 Lquido Por difusin, inculo denso

Reaccin de la ureasa Agar urea de Christensen pH 6.8 Slido en pico de flauta (cola de pescado) Estra en pico de flauta (no hacer puncin).

Licuefaccin de gelatina Gelatina nutritiva Semislido Picadura en posicin vertical hasta una profundidad de 22.5 cm, inculo denso. Determinar la capacidad de un organismo de producir enzimas de tipo proteoltico (gelatinasas) que licuan la gelatina.

Oxidacin fermentacin Medio bsico de Hugh Leifson, medio O/F. Semislido (tambin permite la observacin de movilidad). Picadura, inculo poco denso. Picar ambos tubos aproximadamente hasta 0.6 mm de fondo.

Determinar la capacidad de una bacteria de fermentar un carbohidrato especfico incorporado a un medio bsico, produciendo cido, o cido con gas visible.

Temperatura y tiempo de incubacin

Tiempo: 24 - 48 horas Temperatura: 35 - 37 C

Determina la capacidad de un organismo de desdoblar la urea formando dos molculas de amoniaco por la accin de la enzima ureasa produciendo un cambio de color rojo en el medio. Tiempo: 18-24 horas Temperatura: 35-37 C

Determina el metabolismo oxidativo o fermentativo de un hidrato de carbono.

Tiempo: 18 - 24 horas Temperatura: 35 - 37 C Al trmino de la incubacin se coloca el tubo en un refrigerador o bao de hielo durante dos horas para determinar si se ha producido o no la digestin de la gelatina (licuefaccin).

Tiempo: 18 - 24 horas Temperatura: 35-37 C

Indicador de pH

Rojo de fenol: cido: Color amarillo (pH = 6.8) Alcalino : Color rojo ( pH = 8.4) Medio no inoculado: Rojo (pH = 7.4)

Interpretacin del viraje

Positiva = Color amarillo (cido) Negativa = Color rosa - rojizo (alcalina) Color naranja (incubar 24h mas)

Rojo de fenol cido: Amarillo (pH = 6.8) Alcalino : Rojo rosado (pH = 8.4) Medio no inoculado: Amarillo (pH = 6.8) Positivo: Rojo rosado intenso en el pico de flauta Negativo: Amarillo

Azul de bromotimol cido : Color amarillo (pH = 6) Alcalino : Azul de Prusia intenso (pH = 7.6) Medio no inoculado: Verde (pH = 7.1)

Positivo: Medio licuado (estado lquido) Negativo: Medio slido

Reporte de resultados

A = cido K = alcalino G = gas

Positivo (+) Negativo (-)

Positivo (+) Negativo (-)

Amarillo: cido Burbujas: Gas Verde: alcalino Las bacterias oxidativas producen cido slo en el tubo abierto expuesto al oxgeno atmosfrico. Los microorganismos fermentadores producen cidos en ambos tubos. Fermentativo: F, Ferm Oxidativo: O, Oxi Ni oxidativo ni fermentativo: NR(no reactivo), (inerte), NF(no fermentativo)

Prueba Nombre y pH inicial del medio Estado fsico Siembra y cantidad del inoculo recomendado

Agar triple azcar hierro: TSI gar hierro triple azcar (agar hierro de Kligler, AHK) Slido en pico de flauta Picadura y estra en pico de flauta

Agarl lisina hierro (LIA) Base de descarboxilasa de Moller Slido en pico de flauta Por picadura y estra, inculo liviano.

Citratos Citrato de Simmos Slido inclinado (pico de flauta) Se toma una colonia bien aislada de la superficie del medio de aislamiento primario y se inocula como una estra nica en la superficie del pico de flauta. El inculo debe ser liviano. Determina si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como nica fuente de carbono para el metabolismo y crecimiento, provocando alcalinidad.

Utilidad del medio de cultivo o prueba

Determina la capacidad de un organismo de atacar un hidrato de carbono especfico incorporado en un medio de crecimiento bsico, con produccin o no de gases, junto con la determinacin de posible cido sulfhdrico.

Temperatura y tiempo de incubacin Indicador de pH

Mide la capacidad enzimtica de un organismo para descarboxilar un aminocido (lisina y arginina) para formar una amina, con la consiguiente alcalinidad. Temperatura: 35 37 C Tiempo: 18 24 horas Prpura de bromocresol !"cido: color amarillo (pH = 5.2) !"Alcalino: color prpura (pH = 6.8) !"Medio no inoculado: color prpura intenso brillante (pH = 6.0) K/K = azul de Prusia /azul de Prusia Desaminacin oxidativa / descarboxilacin K/A= azul de prusia / lila No desaminacin Produccin de H2S = Ennegrecimiento del medio Produccin de gas = Burbujas o levantamiento del medio de cultivo de las paredes del tubo.

Tiempo = 24 - 48 horas Temperatura = 35 - 37 C Azul de bromotimol (pH= 6) Alcalino: color azul de Prusia intenso (pH = 7.6) Medio no inoculado: Color verde (pH = 6.9)

Rojo de fenol cido: amarillo Alcalino: rojo Medio no inoculado: naranja rojizo (pH =7.4)

Interpretacin del viraje

Alcalino/cido (K/A): Fermentador de glucosa. cido/cido (A/A): Fermentador de glucosa, lactosa y sacarosa. Alcalino/alcalino: No fermentador de carbohidratos; uso de peptonas. Alcalino/sin cambios: No fermentador de carbohidratos; uso de peptonas. Produccin de H2S: precipitado negro Produccin de gases: Produccin de burbujas, descomposicin del medio, ligera muesca del medio sobre el costado del tubo o desplazamiento del medio del fondo, dejando un espacio libre. 1. K / A (Fermentacin de glucosa solamente) 2. A / A (Fermentacin de glucosa y lactosa) 3. K / K (No fermentacin de glucosa y lactosa). Los resultados se escriben siempre siguiendo un patrn. Primero la reaccin del pico de flauta seguida por la reaccin de la capa profunda, separadas por una barra.

Reporte de resultados

A = cido K = Alcalino N = Neutra R = Rojo (desaminacin oxidativa)

Positivo: Crecimiento aunque no exista cambio de color.Crecimiento y el medio de color azul intenso en pico de flauta. Negativo: No se observa crecimiento y medio de color verde. Si se utiliza carbono a partir de citrato de sodio, tambin se extrae nitrgeno del fosfato de amonio contenido en el medio, liberndose amoniaco. En ocasiones se detecta un crecimiento visible a lo largo de la lnea de siembra antes de la aparicin de color. Este crecimiento visible tambin indica resultado positivo. Negativo (-) Positivo (+)