11

15. Biorreacciones enzimticas

15. BIORREACCIONES. TRANSFORMACIONES
ENZIMTICAS
15.1. CONSIDERACIONES GENERALES SOBRE REACCIONES
15.1.1. Algunas ecuaciones generales
15.1.2. Aspectos cinticos
15.1.3 . Transformaciones de materia orgnica. Hidrlisis.
15.2. CINTICA ENZIMTICA (Homognea)
15.2.1. Caractersticas de las enzimas
15.2.2. Ecuaciones cinticas
a. Ecuacin bsica. Michaelis-Menten
b. Otras ecuaciones enzimticas (no MM)
c. Actividad enzimtica en superficies
15.2.2. Dependencia de variables de operacin temperatura
a. Dependencia de T
b. Dependencia del pH
15.2.3. Desactivacin de la enzima
15.3. CINTICA HETEROGNEA
15.3.1. Necesidad de sistemas heterogneos. Tipos de
inmovilizacin
15.3.2. Transferencia de materia interna y reaccin
a. Caractersticas del sistema
b. Concentraciones en el interior de la partcula
c. Clculo de la cintica heterognea a partir de cintica
homognea (Uso del mdulo de Thiele)
d. Cintica homognea a partir de cintica heterognea ( Uso
del mdulo de Weisz)
e. Otras limitaciones de las enzimas inmovilizadas diferentes
de la difusin de substrato.
15.3.3. Limitaciones de transferencia de materia externa
a. A partir de la cintica heterognea (Uso del mdulo
observable de t. materia)
b. A partir de la cintica homognea (Uso del nmero de
Damkhler)
15.3.4. Limitaciones de transferencia de materia externa e interna
15.4. REACTORES ENZIMTICOS
15.4.1. Tipos de reactores
15.4.2. Ecuaciones generales para reactores ideales
a. Discontnuos
b. Biorreactor de flujo pistn (BFP)
c. Biorreactor de flujo perfectamente agitado( BCPM), o (CSTR
)
15.4.3. Integracin de las ecuaciones de reactores con cintica
enzimtica
BIBLIOGRAFA
12
15. Biorreacciones enzimticas
15.1. CONSIDERACIONES GENERALES SOBRE REACCIONES
15.1.1. Algunas ecuaciones generales
Considerar una reaccin en forma general aA + bB mM + nN
En el caso de que tuviramos un equilibrio, posiblemente precisaramos conocer
para los clculos el valor de la constante de equilibrio: K
e
= . Esta
constante se relaciona con la G de la reaccin (Gibbs) que se calcula restando
las G de los productos menos la de los reactivos, mediante la relacin K
e
=
RT
G
r

Su relacin con la entropa, y la variacin de la constante con la temperatura

viene dada por:
G = H T S y por l
n
K
e
=
,
_

T
T
R
S
RT
H
n r 0
La relacin entre Ke y la T es muy importante cuando hay equilibrios. En
procesos biolgicos, industriales, G es (-) y muy alta. Por tanto, pocas veces
tenemos equilibrios a considerar. Alguna excepcin son la hidrlisis del almidn y
la inversin de la glucosa.
Al plantear las transformaciones posiblemente tenemos que considerar funciones
de cada una de las concentraciones, por lo que introducimos muchas variables.
Por eso conviene introducir la conversin por ej. del componente A (X
A
) definida
como los moles que se convierten de A por cada mol inicial. Si consideramos una
reaccin irreversible A + b B --- c C
A + bB dC
Inicialmen
te
En t =
0
C
Ao
C
Bo
C
Co
En t =
t
C
A
C
B
C
C
donde
C
A
= C
Ao
(1 -
X
A
)
C
B
= C
Bo
-
bC
Ao
X
A
C
C
= d
C
Ao
X
A
Al cabo de cierto tiempo tendremos para C
A
: C
A
= C
Ao
(1 - X
A
) formndose de C
una cantidad de moles C
C
= d C
AO
X
A
ya que por cada mol que se haya consumido
de A se formarn d moles de C; y de B quedarn C
B
= C
Bo
b C
Ao
X
A
al consumirse
b moles de B por cada uno consumido de A. De esta forma, en lugar de tener las
variables C
A
, C
B
y C
C
, ahora tenemos una sola variable, la conversin (X
A
). La
introduccin de la conversin es muy importante para facilitar los clculos en
particular con cintica con varios componentes o con varios volmenes. Existen
otras definiciones de la conversin tiles en el caso por ejemplo de que
tengamos muchas reacciones.
15.1.2. Aspectos cinticos
Denominamos la cintica como r = mol /(s m
3
) aunque tambin se puede
expresar por ejemplo como mg/(Lh) (como en cintica enzimtica) o formas
anlogas que incluyen cambios de concentracin (incluso referido a rea o masa
en lugar de volumen) por unidad de tiempo. La cintica se refiere cada
componente, por lo que tendremos r
A
=mol A/s m
3
, o r
C
=mol C/s m
3
. La relacin
hay entre r
C
y r
A
se obtendr mediante el valor del coeficiente estequiomtrico,
13
15. Biorreacciones enzimticas
incluyendo un valor de signo que responde al lado de la ecuacin en que se
encuentren A y C. As, r
C
= -d r
C
, por cada mol de A reaccionan b moles de C.
Conviene partir de la necesidad de disponer de valores de la cintica
primeramente de un componente. Considerando n
A
como el nmero de moles A,
y

el coeficiente estequiomtrico,, tendramos la definicin de la velocidad:
dt
dn
V
rA
A

1
Si tratamos con volumen V constante, n
A
/V= c
A
(concentracin) r
A
=
dt
dC
A
; r
C
=
dt
dC
C
.
El valor de r
A
con frecuencia cambia con el tiempo, al tiempo que lo hacen las
concentraciones Hay cinticas muy variadas, con diferentes ecuaciones
funciones de concentraciones. La grfica de r
A
vs C
A
puede ser muy diferente. Se
indican en la Figura 15.1. algunas formas de la cintica, y se indican asimismo a
continuacin ecuaciones que ajustan esos comportamientos
i
rA
ii
iii
iv
C
A
Figura 15.1. Algunas formas habituales de comportamiento cintico y
ecuaciones de ajuste
Puede haber muchsimas formas ms complicadas. Las dos ms sencillas, orden
1 o 0, son muy interesantes, porque son frecuentes, fciles de resolver y
finalmente porque aunque tengamos grficas muy complicadas, en algunos
intervalos se puede aproximar a orden 0, en otro intervalo a orden 1, lo que
puede ser en particular interesante en procesos reales, e industriales en que se
trabaja en un pequeo intervalo. Otro aspecto interesante de estas ecuaciones
simples es que otras ecuaciones pueden requerir su linealizacin, tomando slo
el trmino de primer orden, como es el caso en el anlisis del control de procesos
que suele tratarse frecuentemente para sistemas lineales.
En definitiva en la prctica industrial la cintica r
A
(=) mol A/(m
3
s) se ajusta
frecuentemente a r
A
= k
1
C
A
, y en otras ocasiones a r
A
= k
0
. Las cinticas de orden
cero al no ser funcin de la concentracin presentan efectos muy interesantes.
Asi quiere decir que cae de forma continua, por lo que si se mantienen al cabo de
cierto tiempo dara lugar a tener concentraciones negativas. As, es muy
frecuente adems tener en la misma grfica, orden 0 en altas concentraciones y
1 en bajas concentraciones.
Podemos pensar en la trasformacin de materia orgnica a travs de diferentes
reacciones en srie o paralelo, unas con biocatalizadores (enzimas o
i. r = k
0
(orden = 0), k
0
= (moles/
(m
3
s))
ii. Ecs parablicas como.
A
A
A
C
r
C

+
, o
al principio r= kc
A
n
con n 1 o p.ej.
iii. r = k
1
C
A
(orden = 1), k
1
= s
-1
iv. r = k
1
C
A
n
con n

1
14
15. Biorreacciones enzimticas
microorganismos), otras sin su concurso. Haremos unos breves comentarios
sobre las transformaciones sin biocatalizadores, y despus trataremos en mayor
detalle procesos con su concurso, que se pueden clasifica clasificar en 4 tipos
segn el carcter cintico o microbiano, y la consideracin de cintica
homognea o heterognea cuando hay problemas de transferencia de materia
(habitualmente se debe a que hay varias fases)
1. Cintica
homognea
Cintica
enzimtica
Cintica
microbiana
2. Cintica
heterognea
Cintica
enzimtica
Cintica
microbiana
15.1.3 . Transformaciones de materia orgnica. Hidrlisis.
Existen un nmero muy elevado de transformaciones de inters sin participacin
de biocatalizadores, algunas mencionadas en otros captulos.
a. Algunas transformaciones son muy importantes en el campo alimentario, por
ejemplo
- Condensacin de Maillard. Reaccin entre carbonilo libre (p.ej. azcares
reductores, polihidroxicarbonilo) y funcin amina (p.ej. aminocidos o
protenas). En forma simple,
2
(base Schiff) + N-R + H O
H
H OH
H NH R
C O C C N R
+

f f f p f
, a su
vez,
la base Schiff puede sufrir una transaminacin, o isomerizar en aldosilamina
N-substituida. Son ms reactivas las pensosa que las hexosas, y las aldosas
que las cetosas, y los aminocidos si las funciones amina y carboxilo estn
ms alejadas. Estn favorecidas con poco agua, la primera etapa favorecida
a pH alto, y la segunda a pH bajo (catlisis cida), por lo que globalmente
presenta un pH intermedio ptimo. Es una forma frecuente de pardeamiento
no enzimtico.
- Otras transformaciones: Las bases Schiff, as como las cetosaminas, sufren
muchas transformaciones. El cido ascrbico se oxida en cido
dihidroxiascrbico catalizado por la luz, Cu
2+
, Fe
3+
, pH 4.
b. Otro grupo importante es la hidrlisis de materia vegetal, por ejemplo en el
aprovechamiento de material lignocelulsico para obtener bioetanol. Se han
ensayado tanto hidrlisis cida como bsica, y en particular temperatura alta,
denominada explosin por vapor.
c. En el tratamiento de aguas residuales resulta muy importante, suele ser
controlante, la hidrlisis de materia orgnica, tanto de materia suspendida como
de materia disuelta. Para ambos substratos se ha considerado usualmente una
cintica de rden 1. Se han dado valores de 1-30 d
-1
dependiendo de la
aceptacin de e
-
y suele incluirse efectos qumicos, enzimticos y microbianos.
15.2. CINTICA ENZIMTICA (Homognea)
15.2.1. Caractersticas de las enzimas
Las enzimas son habitualmente protenas, aunque tambin hay
glicoprotenas y RNA (ribozimas). Se conocen ms de 2000 enzimas, con
bastante especificidad, habitualmente mayores las de organismos superiores. Se
15
15. Biorreacciones enzimticas
denominan aadiendo la terminacin asa al substrato o reaccin catalizada,
clasificndose segn la reaccin que catalizan en: 1. Oxidorreductasas, 2.
Transferasas (transferir grupos), 3. Hidrolasas, 4. Liasas (adicin a dobles
enlaces), 5. Isomerasas 6. Ligasas (formar enlaces rompiendo ATP).
Estructuralmente, algunas enzimas son simplemente polipptidos, pero muchas
(holoenzimas) tienen junto al grupo proteico (apoenzima), otro grupo no proteico
denominado cofactor (metales como Zn, Fe, Mg, Mn,.o molculas como CoA,
NAD,..o vitaminas)
La importancia de las enzimas suele referirse en general a su comportamiento en
fase acuosa, tanto en produccin como en el campo de la salud, y ser la que se
trate aqu. No obstante conviene mencionar el inters que est generando su uso
para sntesis en fase orgnica en las ltimas dcadas.
Obtencin.-Se obtienen a partir de cepas altamente productoras, habitualmente
a travs de la rotura y separacin celular, precipitacin, ultrafiltracin,
separacin cromatogrfica, cristalizacin y secado de la protena. Se producen en
cantidades grandes: proteasas (ej. Subtilisina, tripsina, renina), hidrolasas
(pectinasas, amilasas, lipasa), glucosa oxidasa (glucosa a cido glucnico),
glucosa isomerasa (glucosa a fructosa)
Catlisis.-Conviene recordar que las enzimas, como otros catalizadores, reducen
la barrera de activacin, acelerando la velocidad de aproximacin al equilibrio,
pero no su valor. Es decir aumentan tanto la reaccin directa como la inversa.
Para acelerar la reaccin, el substrato, o una forma compleja del mismo, se
acerca, en distancia y orientacin adecuados, actuando las fuerzas de van der
Waals, para producirse despus la transformacin, y la liberacin del producto.
15.2.2. Ecuaciones cinticas
a. Ecuacin bsica. Michaelis-Menten
Las enzimas son catalizadores biolgicos, por lo que a priori facilitan que se haga
una reaccin al acelerarla, pero sin modificarse ellos. En la prctica pueden sufrir
alguna variacin.
Consideraremos una ecuacin simple con concentracin baja de enzima inicial,
o o
S E ?
P S
E

Experimentalmente la forma habitual de evaluar la cintica es a partir de las
velocidades de iniciales de transformacin de substrato, experimentando con
diferentes concentraciones del mismo.
Podemos considerar una evolucin de concentraciones de S y P como el de la
figura, incluyendo la formacin de un complejo intermedio. Para llevarse a cabo
la reaccin en forma cataltica e interpretar los resultados, habr que analizar la
formacin de compuestos intermedios, y plantear posibles mecanismos.
El mecanismo sencillo mejor conocido desde hace casi un siglo, y anlogo al de
otras reacciones de tipo qumico, que conduce a la ecuacin de Michaelis-Menten
(MM) es
k
1
E P ES S E + +
k
-1
k
1
16
15. Biorreacciones enzimticas


S
P
E
ES
Tiempo
Concentracin
Figura 15.2. Posible forma de evolucin de reactivos y prod uctos en la reaccin
enzimtica
En la figura anterior se indica la evolucin prevista por este mecanismo tambin
para E y para el complejo ES. Hay dos tipos de aproximaciones que conducen a
la ecuacin mencionada (MM), en ambos casos la velocidad,
2
( )
P
dP
r k ES
dt
. A
dems
S
dS
r
dt
. Estas son:
1. Aproximacin de estado estacionario. Es decir ( ) / 0 d ES dt (debe ser
o o
S E ? ). Entonces,

1 1 2
( )
. ( ) ( ) 0
d ES
k E S k ES k ES
dt

. Notar que Eo=E+(ES) luego
1 2
1
( )
o
E S
ES
k k
S
k

+
+
Por tanto,
m
P
m
v S
r
K S

+
(MM) donde
2 m o
v k E y
1 2
1
m
k k
K
k

2. Aproximacin de equilibrio rpido en la primera etapa. Se requiere k

1
y k
-1
rpidos. El
equilibrio
1
1
.
( )
( )
eq
k E S
K
ES k

luego
1
1
( )
o
E S
ES
k
S
k

+
por tanto se obtiene la
ecuacin MM pero
con
2 m o
v k E y
1
1
m
k
K
k

Por tanto, con las ecuaciones correspondientes a este mecanismo en las

aproximaciones indicadas, y en estado estacionario, o ES bajo. (Notar E << S
y k
1
> k
2
?)
- r
s
=
S K
S v
m
m
+
(ecuacin de Michaelis-Menten)
v
m
1/2v
m
K
m
S,
mol /m
3
mol /m
3
s
-r
s
17
15. Biorreacciones enzimticas

Figura 15.3. Forma correspondiente de r
S
vs. S en intervalo completo de
Michaelis Menten
Este tipo de ecuacin da una forma anloga a la indicada en la figura anexa. El
signo (-) corresponde al hecho de que la concentracin de S se va reduciendo
como se deduce de la propia definicin de r
S
. El valor de v
M
resulta v
M
= k
3
E
o
donde E
o
es la actividad enzimtica del propio enzima.
Cuando se dispone de la grfica pueden obtenerse los parmetros v
m
y K
m
por
ajuste no lineal o utilizando formas linealizadas como las que se sealan a
continuacin, que permitan calcularlos a partir de datos de una recta con las
funciones entre parntesis (Lineweaver-Burk, Eadie-Hofstee, Hanes-Woolf). Notar
que el uso de r, precisa obtener las pendientes de la curva lo que aade errores
1 1 1
m
m m
K
r v v S
_ _
+

, ,
; ( )
m m
m
r
r v K
v
_


,
( )
1
m
m m
K S
S
r v v
_
+

,
El valor de v
m
(=) s
-1
, (turnover) es la velocidad de conversin si el enzima est
totalmente saturado. puede variar en varios rdenes de magnitud. El valor de K
m
= mol/m
3
en cambio, vara menos, dependiendo tambin de las condiciones de
operacin. Por ejemplo para amilasa 1, - galactosidasa 3, ureasa 10
mol/m
3
.
Notar que con substratos muy diluidos
o o
E S : por ejemplo porque tengamos un
substrato orgnico poco soluble en agua, no se puede asumir ninguna de las dos
aproximaciones sealadas, p.ej. ES no se mantiene constante en ninguna zona, y
no se cumple Michaelis- Menten. Si incluso fuese
o o
E S ? se tendra
o
E E :
constante y por tanto tendramos una cintica de pseudoprimer orden en S.
Evolucin del substrato con el tiempo.
Dada la ecuacin se puede conocer (por integracin) la evolucin de
concentraciones (tambin puede usarse para calcular las constantes cinticas).
En la ecuacin de Michaelis-Menten (M_M), es evidente que pasa a ser orden 0 o
1 si la S se hace mucho mayor o menor que Km.
Si Km << S orden 0, la integracin queda
dS
dt
= -v
m
S = So v
m
t
Si Km >> S orden 1
m
m
v dS
S
dt K

S = S
o

t
Km
v
m
e

18
15. Biorreacciones enzimticas
Con M-M
m
S
m
v S dS
r
dt K S

+

1
ln
o o
m m
S S S
v K
t t S

_ _


, ,
Estas ecuaciones permiten predecir el valor de S en cada tiempo. Tambin
podran usarse para determinar constantes si se conoce S(t), representando S o
ln(S
o
/S) vs t, y (S
o
-S)/t vs. t
-1
ln(S
o
/S) respectivamente
Si no se ajusta a ninguna de estas simplificaciones, conocer la evolucin con el
tiempo comienza ser ms complejo. No obstante la ecuacin de Michaelis-Menten
va a resultar con mucha frecuencia suficiente para tener una ecuacin de r
A
vs.
c
A
.
b. Otras ecuaciones enzimticas (no MM)
Hay otras propuestas, y ecuaciones con inters cientfico, que requieren
mecanismos ms complejos que los que conducan a Michaelis-Menten.
En ocasiones la unin de un substrato a un enzima facilita que entren otros
nutrientes en otros puntos del enzima. Este es un efecto cooperativo o
alostrico, que puede ajustarse a
n
m
S n n
m
v S dS
r
dt K S

+
donde si n es mayor de 1 hay un efecto cooperativo positivo.
Podemos tener muchas otras posibilidades de interaccin de las diferentes
especies sealadas con otros compuestos presentes. Pueden ser anlogas a
substratos unindose al enzima (inhibicin competitiva), que se unan al complejo
ES (inhibicin acompetitiva) , o que se unan en lugares no activos aunque
reduzcan la actividad (inhibicin no competitiva). Incluso si hay concentraciones
muy altas del substrato puede unirse a ES (inhibicin por substrato) generando
que haya una concentracin de substrato con velocidad mxima (para
m s
S K K ). Se indica en la Tabla 15.1. los mecanismos de las interacciones
sealadas, y las ecuaciones que se obtienen con un mtodo anlogo al indicado
para MM.
Tabla 15. 1. Mecanismos para diversas interacciones de I o S, con E y con ES
1) Inhibicin competitiva
2) Inhibicin anticompetitiva
3) Inhibicin de ambas formas (no competitiva)
S
K
I
Km
S v
r
I
m
s
+
,
_

+

1

,
_

+ +

I
m
s
K
I
S Km
S v
r
1

,
_

+ +

I
m
s
K
I
S Km
S v
r
1 ) (


EI

I +
P ES S E +
I
K
P ES S E +
I
K I +
ESI
KI
EI

I +
P ES S E +

EI
K
I
+I
ESI
I +
19
15. Biorreacciones enzimticas
4) Inhibicin por substrato
En ocasiones, incluso sobre Michaelis Menten, el substrato se puede especiar
en ms de una forma, pudiendo catalizarse slo una de ellas. Esto es frecuente
cuando por ejemplo slo la especie hidrogenada (no la inica, pero puede ser al
contrario) entra en la reaccin. Se considerar como una ecuacin funcin del
pH.
c. Actividad enzimtica en superficies
En substratos slidos.- Es frecuente con ejemplos muy importantes, como es
el caso de las celulasas (aprovechar energticamente biomasa), o de lisozimas
(paredes celulares). Si tenemos una cantidad dada de puntos disponibles en el
substrato S
o
para acceder el enzima E
o
con la que forma reversiblemente
ads
des
k
k

el complejo ES, tendramos un esquema inverso que el que veamos en MM. As
se obtendra
- r
s
=
( )
2
( )
/
o
ads des
k S E
k k E +
Si la mayora de E
o
est como E (poco como ES) se podra substituir E por E
o
.
En interfases fluidas.- Son tambin muy frecuentes e importantes. Por
ejemplo en procesos industriales las lipasas en superficie agua/aceite (W/O)
rompen los triglicridos en cidos grasos y glicerina. Sin embargo, de la misma
forma que en fase acuosa los bloques apolares de las enzimas se alejan de la
superficie acuosa, cuando se exponen en una interfase W/O se modifican,
tendiendo a colocarse estos bloques hacia la fase orgnica, y en muchas
ocasiones se pueden desnaturalizar.
Un modelo sencillo sera considerar que E y S se adsorben reversiblemente,
pasando a ES y despus E+P que son desorbidos. Los procesos de adsorcin y
desorcin son proporcionales al rea interfacial por unidad de volumen a. Si la
concentracin del producto en la interfase se considera constante se puede
obtener
- r
s
=
#

*/
o
k E S
k S k a + +
.
Notar que si a es grande (mayor de 10
4
m
-1
) sera anloga a M-M, pero si es
pequea (p.ej. 10
3
veces menos) tendramos .
S
r S a
15.2.2. Dependencia de variables de operacin temperatura
a. Dependencia de T
El efecto de la temperatura sobre la cintica se manifiesta en particular en la
variacin del valor de v
m
. Esta dependencia suele ajustarse a la ecuacin de
Arrhenius, v
m
= v
m0
e
-Ea /R
, aunque debe limitarse la validez a un intervalo de
temperaturas relativamente estrecho habitualmente vlido en el intervalo de 10
a 40 C (zona recta).

P ES S E +
Ks +S
ES
2
) (
S
m
s
K
S
S Km
S v
r
2
+ +

20
15. Biorreacciones enzimticas
Aunque hay enzimas que pueden trabajar bien en temperaturas cercanas a 90
C, en muchos casos se presenta una cada de v
m
muy brusca para T~40C como
se indica en la zona de la izquierda de la grfica anexa.
Figura 15.4. Forma de dependencia de la velocidad con la temperatura
La energa de activacin en la zona de la ecuacin de Arrehnius suele ser Ea ~ 40
- 80 kJ/mol. Al aumentar la pendiente, en la grfica, la E
a
es ms grande. A T
as
superiores a 40
o
C, la inactivacin es muy rpida y no es vlida como se ha dicho.
Dado que v
m
= k
2
E
a
, el valor de v
m
vara de forma anloga a como lo hace E
a
,
actividad enzimtica.
b. Dependencia del pH
Las enzimas tienen unos intervalos de pH en los que presentan eficacia alta
bastante especficos. En algunos casos es slo uno o dos unidades de pH,
mientras en otros puede ser mucho ms amplio. Este efecto es resultado de
muchos cambios posibles de la estructura con el pH.
Figura 15.5. Formas habituales de variacin de la actividad con el valor del pH
Efecto del pH sobre la especiacin. Con frecuencia al variar el pH, el enzima toma
diferente forma cido o bsica, y la capacidad del enzima slo es eficaz en cierta
forma.
*Considerar que sobre el esquema descrito en Michaelis-Menten el enzima activo
es el de la forma E, pero puede presentarse tambin en una forma ms cida o
ms bsica, es decir .
El pH ptimo ser intermedio entre pK
1
y pK
2
. Entonces, considerando que
E
o
=E
-
+E+EH
+
+ES,
E
1
E
2
E
3
pH
Activida
d
ln v
m
1/T
313
K
283
K
-E
a
/R
21
15. Biorreacciones enzimticas
2
1
1
m
S
m
v S
r
K H
K S
H K
+
+

1
+ + +
1
]
*Si en base a Michaelis Menten, la especie activa S se ioniza
a
K
S S H
+
+

se obtendra
1
1
m
S
m
v S
r
K
K S
H
+

1
+ +
1
]
15.2.3. Desactivacin de la enzima
Frecuentemente en campos de la salud, y de forma muy particular en
condiciones industriales, el enzima se va desactivando con el tiempo debido a la
interaccin, incluso reacciones, con los componentes del medio. Adems en este
caso donde haya desactivacin tendremos una actividad enzimtica funcin del
tiempo E
a
(t), La cantidad de enzima activa, se va reduciendo con el tiempo.
Considerando la definicin de Michaelis-Menten, v
m
= k
2
Ea por tanto
( )
2 a
m
k E t S
dS
dt K S

+
Debemos por tanto buscar la funcin que describa la evolucin de E
a
(t). La
desactivacin puede deberse al efecto de fuerzas de cizalla en cierto tiempo, a
su degradacin o autodigestin, o al efecto de venenos, entre otros. Segn estos
mecanismos, se pueden considerar diversas ecuaciones, para describir la
cintica r
Ea
, segn el propio mecanismo, por ejemplo proporcional a la actividad
y al veneno en caso de que este juegue un papel, o de tipo parablico (como MM)
con diversas interacciones. No obstante, con desactivacin simple, o como
aproximacin en otros casos, se ha obtenido que se puede ajustar a una
ecuacin de orden 1 de forma suficientemente til a efectos de prediccin,
= k
d
E
a
Por tanto integrando obtenemos como vara Ea con el tiempo
.
d
k t
a a o
E E e

El hecho de que el enzima se desactive, hace que la integracin de la ecuacin

de Michaelis Menten resulte algo ms difcil
2 0
d
k t
a
m
k E e S ds
dt K S

+
es decir
2 .
d
k t m
a o
K S
dS k E e dt
S

+

Adems, la propia transformacin de desactivacin es diferente a cada
temperatura. As, el valor de k
d
tambin cambia con la temperatura; al aumentar
la T
a
aumenta k
d
, pudindose definir tambin por una ecuacin del tipo de
Arrhenius,
. a d
E t
d
k Ae

para introducir en la ecuacin integral anterior. Los

valores de la energa de activacin de esta transformacin suelen ser muy altos
E
a(d)
1 = 170 400 (kJ/mol), por tanto al subir un poco la temperatura, se
desactiva ms fuertemente que lo haca la activacin.
Problema 15.1. Una enzima acta sobre un substrato transformndole
inicialmente de acuerdo con la ec. de Michaelis-Menten con ks= 0,02 g/l, v
m
= 19
g/l hora. Desafortunadamente la enzima se desactiva desde 10
4
ue/ml a 10
2
ue/ml en 0,693 horas.
Si la concentracin inicial de substrato es 20 g/l, cuanto tiempo tarda en
degradarse el 90 %. Comparar con el tiempo que tardara si no hubiese
desactivacin de la enzima.
Qu porcentaje de degradacin mximo puede lograrse.
22
15. Biorreacciones enzimticas
La ecuacin de Michaelis-Menten
m
S
S
dS
k S dt

+
como k
S
<<S se transforma en
dS
m dt

En ausencia de desactivacin So-S= v
m
t. Luego t=20(0,9)/18,95 t= 0,95
horas
Desactivacin,1er orden, k
d
= (ln (10
4
/10
2
))/t

= ln 10
2
/0,693= 6,645 hr
-
1
Adems
,
d
k t
m m inic
e

Por tanto
,
d
k t
dS
m inic dt
e

Integrando
,
d
o
S t
k t
m inic
S o
dS e dt



se tiene
,
1
m inic
d
d
k t
o k
S S e

1
]
substituyendo S
o
=20, S=2 g/l, v
m inic
= 19 g/lhr No se llegara
nunca
Finalmente en la ltima ecuacin, con t tendiendo a infinito, So-S= v
m
inic
/kd = 19/6,645, es decir, el valor mnimo resulta S= 17,14 g/l.
15.3. CINTICA HETEROGNEA
15.3.1. Necesidad de sistemas heterogneos. Tipos de
inmovilizacin
El mayor problema del uso de enzimas es el alto coste que suele acarrear. Ello se
debe a que se suele perder con la corriente de producto, y se trata de productos
habitualmente de alto coste. Una forma de evitarlo es hacer que el enzima quede
inmovilizado en un soporte de forma que se pueda recuperar con facilidad sin
que se pierda en el proceso, por lo que se puede reutilizar, e incluso en ocasiones
facilitar la separacin de otros compuestos.
Aunque se consiga evitar la prdida del enzima, deben analizarse los posibles
problemas generados en su efectividad, debido a las limitaciones difusionales, al
microentorno, y a las posibles desactivaciones de los grupos activos.
Hay muchas formas de inmovilizacin, pudiendo clasificarse de varias formas,
por ejemplo
1. Inmovilizacin en la superficie. Las fuerzas pueden ser adsorcin o
enlace covalente
1.1.Adsorcin. Se pueden utilizar muchos tipos de materiales, as
almina, slice, vidrio, . CMC, celulosa, Cactivo, resinas de intercambio
inico,.. entre otros. Frecuentemente se trata la superficie, en ocasiones se
puede hacer entrecruzamiento, aunque puede haber desnaturalizacin de
protenas, p.ej. con glutaraldehido. Las fuerzas suelen ser de van der
Waals, puentes de hidrgeno, intercambio de cargas, incluso interaccin
hidrofbica.
1.2.Enlace covalente. Se une el soporte (frecuentemente activado) a la
enzima (no en el punto activo) a travs de grupos NH
2
, OH
-
, SH
-
,-COO
-
.
Como activacin del soporte suele usarse CNBr
-
, glutaraldehido, SH
-
.,..
Para evitar su reaccin, puede bloquearse previamente el punto activo
mediante un inhibidor. En general puede haber prdida de actividad y
estabilidad, aunque en ocasiones el efecto es opuesto.
23
15. Biorreacciones enzimticas
2. Atrapamiento.
2.1.En matrices. Suele mezclarse la enzima con materiales (p.ej.
alginato, carragenato, agar-agar, poliacrilamida, metacrilato,..),
polimerizndose o endurecindose despus, para extruir o dar forma a
continuacin (en masa, bolitas, fibras,..).
2.2. En membranas. Se retienen las enzimas en membranas
semipermeables procurando usualmente el paso de substratos y
productos, pero impidiendo las enzimas que tienen P
m
elevado y se
reciclan al reactor. Se utilizan membranas de celulosa, polisulfona,
poliacrilato,.. con distintas configuraciones, pero sobre todo fibra hueca
(pared asimtrica, la interna separadora, la externa estructural).
2.3. Microencapsulacin. Se generan microesferas (p.ej. 10-200 m) con
la enzima en disolucin, y estas pueden protegerse en membrana
polimrica u otra fase polimerizada, por ejemplo dando esferas mayores.
15.3.2. Transferencia de materia interna y reaccin
a. Caractersticas del sistema
Se ha sealado que algunas de las caractersticas de los sistemas inmovilizados,
al tiempo que retiene la enzima, genera limitaciones difusionales para el
acceso del substrato a la enzima. Este aspecto ser tratado a continuacin, y
mencionaremos al final otros aspectos que pueden tambin modificar la cintica
como la disposicin de la enzima en el soporte, el entorno particularmente por
los productos, o incluso las variaciones de la temperatura.
Cuando el biorreactor est bien mezclado y las enzimas en estado libre, la
cantidad de S y E es igual en todo el sistema, y aunque cambia con t, son
conocidos, o determinables tomando muestras o mediante una sonda. Cuando
tenemos enzimas inmovilizadas en un soporte, los nutrientes deben difundir al
entorno del enzima donde se estn eliminando, y si no llegan con suficiente
rapidez tendremos alrededor del enzima una concentracin menor que la que
hay en la masa global. El substrato A tiene que difundir hacia dentro, pero
conforme difunde se encuentra con enzimas que la van consumiendo y
dificultando su acceso al interior. Esto afectar a la velocidad de consumo de
nutrientes, la velocidad no ser la medida fuera f(c
AB
) (cintica homognea) ,
sino de la concentracin dentro f(c
A
) (cintica heterognea).
CAB
C
AS
E
E
C
A
C
AS
CAB
CAB (enmasalquida)
CAS(enla superficie)
CA(dentro delapartcula)
P
A
Figura 15.6. Perfiles de substratos en la masa global (c
Ab
), superficie (c
As
), e
interior (c
A
) al difundir para reaccionar en el soporte.
24
15. Biorreacciones enzimticas
El perfil de A en el exterior puede ser alto, pero luego cae hasta la superficie (con
agitacin escasa), y despus dentro del soporte. La velocidad que observamos es
la integral de todas las velocidades que hay dentro de la bolita. Necesitamos por
ello conocer el perfil de concentraciones en cada punto, calcular la r
A
en cada
punto, sumar todas ellas y dividirlo por el total y la r
A
final que resulta (=
mol/m
3
s) ser la real, la observable. Esta ecuacin es comn tanto para enzimas
como para microorganismos.
Habr dos resistencias: resistencia exterior debido a que C
AB
C
AS
, y la
resistencia interior.. Estudiaremos la resistencia interior en los dos siguientes
apartados
b. Concentraciones en el interior de la partcula
Considerar una partcula esfrica con el enzima (biocatalizador) distribuido
uniformemente en la misma. En la superficie mantenemos una concentracin c
As
por lo que difunde hacia el interior donde tenemos una concentracin c
A
que
puede ser uniforme o no segn el suministro por difusin de A hacia el interior.
La transferencia de materia N
A
(moles A/m
2
s) tiene lugar slo por difusin en
direccin radial y puede ser descrita segn la ley de Fick
r
r
R
Difusin del
sustrato
Figura 15.7. Definicin del proceso de difusin y reaccin en la direccin radial
en esferas.
Para sistemas unidimensionales, la velocidad de transferencia de materia de un
sustrato es proporcional al gradiente de concentracin de este sustrato y la
constante de proporcionalidad ser la difusividad eficaz D
A
( D
Aw
/ ) del
sustrato en este slido.
dr
dC
D N
A
A A

Se supone que la partcula es homognea e isotrmica con lo que se puede

considerar que sus propiedades y los parmetros cinticos se mantienen
constantes en todo el soporte. Consideremos ahora un elemento diferencial de
volumen del biocatalizador con un espesor r, haciendo un balance de materia a
este elemento diferencial de volumen, por unidad de tiempo:
Masa de sustrato que se acumula = Masa de sustrato que entra - Masa de
sustrato que sale - Masa de sustrato que se consume debido a la reaccin
25
15. Biorreacciones enzimticas
r r r r
r
C
D r
r
C
D r r
t
C
A
r
A
A
r r
A
A
A

+
2 2 2 2
4 4 4 4

Simplificando y tomando lmites cuando r tiende a 0 tendremos

A
A
A
A
r
r
C
r D
r r t
C

,
_

2
2
1
Para calcular la cintica observable, considerando un sistema pseudoestacionario
(cero el primer miembro de la ecuacin), debe resolverse esta ecuacin,
substituir la ecuacin correspondiente en fase homognea r
A
, introducir las
condiciones iniciales realizando un balance de materia al reactor (medio lquido).
Finalmente se introducen las condiciones frontera del mismo, que en este caso
podran ser:
r = 0 (centro)
0

r
C
A
(Condicin de simetra), y r = R (superficie) C
A
= C
AS
Se obtiene as el perfil de concentracin dentro del slido c
A
= f (r).
As, si r
A
= k c
A

( )
( )
k
D
k
D
senh r
R
Ar AR r
senh R
c c
O si r
A
= ko
( )
2 3 3
2
2 2 3
2 2
6
1
o o o
k R R R
r
Ar Ar D
R rR R
c c + + (Ro es el radio donde A
se agota)
Si
m A
m A
A
v c
k c
r
+
slo existe una solucin numrica
Se ha tratado el problema con geometra (o soporte) esfrico, pero el esquema
de clculo es el mismo con geometra plana o cilndrica, y para cualquier cintica.
c. Clculo de la cintica heterognea a partir de cintica
homognea
(Uso del mdulo de Thiele)
Conocido c
Ar
(en cada posicin, r) se calcula la velocidad en cada posicin, y si se
integra (suma) para todo el volumen tendremos la velocidad observada, que
expresada por unidad de volumen ser r
Ahet
. Por ejemplo para esfera, con orden
cero resulta muy sencillo ( )
3 3
4
. 3 A het o o
r R R k
.
En general, para cualquier caso posibles se opta por definir un factor de eficacia
definido por:
. A het
A
r
i r

As, la velocidad heterognea se calcula como producto de la homognea
(conocida) por
i

(dado por ecuaciones o en una grfica). El valor de

i

se
obtiene como funcin del nmero adimensional Mdulo de Thiele (Th), definido
de forma general como:
26
15. Biorreacciones enzimticas
2
AR
p
AR
Aeq
c
V
r
A A S
c
Th Dr dc
_


,

Podemos sealar algunos valores indicativos de Th y algunos valores que se

obtienen de
i
para diversos rdenes de reaccin y geometras
Orden 1 Esfera
3
k R
D
Th ( )
2
1
3
3 .coth(3. ) 1
i
Th
Th Th
Placa plana
k
D
Th k
tanh( ) Th
i Th

Orden cero Esfera
3 2
o
AR
k
R
Dc
Th
Placa plana
1
2
o
AR
k x
Dc
Th
Los valores para la funcin de la eficacia, incluso para Th en otras situaciones
resulta compleja en forma analtica, pudiendo consultarse en forma grfica. No
obstante si el valor de Th es bajo el valor de la eficacia de forma aproximada
toma valores muy sencillos. Asi:
Con orden 1 (todas geometras) Si Th<0,3
i

= 1 Si Th>10
i

=1/Th
Con orden 0 (todas geometras) Si Th<0,58
i

= 1 Si Th>10
i

=
Michaelis-Menten (con =k
m
/c
AR
) Si ->inf.aprox ord 1 Si ->0,
aprox orden 0
Cuando la velocidad de difusin es muy alta respecto a la de reaccin, el sistema
evolucionar hacia perfiles planos y la velocidad del proceso global depender
slo de la velocidad de reaccin. La eficacia del proceso, por lo tanto, ser alta,
cercana a la unidad, ya que todo el soporte ser activo y en el centro del soporte
se dispondr de una concentracin de sustrato igual a la existente en la
superficie. Se dice entonces que se trata de un proceso con control por reaccin.
Para velocidades de difusin ms bajas (supuesta la misma velocidad de
reaccin), tendern a aparecer perfiles cncavos o incluso se dar el caso de que
el sustrato no llegue a alcanzar las capas internas del soporte, volvindose estas
inactivas. Se tratar entonces de un proceso controlado por difusin y su eficacia
ser baja. La grfica de
i
vs. Th se presenta en la Figura 15.8
27
15. Biorreacciones enzimticas
Figura 15.8. Factor de eficacia interna en funcin del mdulo de Thiele para
varias situaciones (esfricas
____,
placas.)
Problema. En un biocatalizador esfrico de D=2 cm, se inmoviliza un
biocatalizador que lleva a cabo la transformacin de un nutriente A bien
agitado en concentracin 12 g/L en disolucin (coeficiente de difusin
en el interior 5x10
-10
m2/s), y segn una cintica aproximadamente de
orden 1, k= 0,5 h
-1
en disolucin. Indicar si hay resistencias difusionales
importantes, y calcular la velocidad que se observa en el soporte
El mdulo de Thiele para partculas esfricas y cintica de orden 1 ser:
ef
D
k R
3

substituyendo los valores dados
s m x
s m x
/ 10 5
3600 / 5 , 0
3
10 1
2 10
2

= 1,76 .
Si se consulta en la grfica de factor de eficacia se obtiene h= 0,78 (Si se
hubiese pretendido aproximar por h=1/f)=0,57 . El error habra sido importante)
Por tanto hay resistencia difusional interna importante. Se supone que no la hay
externa al haber indicado bien agitado. La velocidad que se observa ser

A A
kc r
.por tanto
Lh g L g h r r
obs A het A
/ 41 , 3 57 , 0 ) / 12 )( 5 , 0 (
1
) ( ) (


d. Cintica homognea a partir de cintica heterognea
(Uso del mdulo de Weisz)
0,01
0,1
1
0,1 1 10 100 1000
F
a
c
t
o
r

d
e

e
f
i
c
a
c
i
a

i
n
t
e
r
n
a
,

i

(
-
)
Mdulo de Thiele, (-)
orden 1
=
orden 0
10
-3
10
-1
10
-2
0.2
1
28
15. Biorreacciones enzimticas
A partir de los datos indicados antes se ha elaborado un mtodo para obtener la
cintica homognea si se dispone de resultados en el sistema heterogneo. Se
trata de calcular
i
y despus determinar:
, A het
A
i
r
r

Para calcular
i
debemos antes determinar otro nmero adimensional el
llamado Mdulo de Weisz que relaciona la velocidad de reaccin con la velocidad
de difusin segn la expresin:
AS A
A(Obs)
p
p
C D
r
S
V
2

,
_

donde V
p
, volumen del biocatalizador, S
p
, superficie externa del biocatalizador,
r
A(Obs)
; velocidad de reaccin observada por unidad de volumen de biocatalizador
D
A
; difusividad del sustrato en el biocatalizador , y C
AS
; concentracin de sustrato
en la superficie externa del biocatalizador.
As, para partculas esfricas
AS A
A(Obs)
C D
r
2
3
R

,
_

y pelculas planas
AS A
A(Obs)
C D
r
2
b
donde R radio de la partcula, b
espesor de la pelcula.
De esta manera valores altos del mdulo de Weisz indicarn que nos
encontramos ante un sistema con perfiles de sustrato cncavo o nulo, baja
eficacia y control por difusin. Por el contrario, valores bajos sern un indicativo
de perfiles planos, altas eficacias y control por reaccin. Resulta posible por lo
tanto, relacionar la eficacia del sistema con el valor que se obtiene al calcular
este nmero adimensional. En la bibliografa existen grficas para distintas
cinticas y geometras mediante las cuales, conociendo el valor del mdulo de
Weisz se puede conocer la eficacia del sistema. En la Figura 15.9 se muestra la
evolucin de la eficacia interna (
i
) con el valor del mdulo de Weisz ( ) para
biocatilizadores esfricos para cinticas de orden cero, primer orden y Michaelis-
Menten ( =K
m
/C
AS
).
Se puede observar que en todos los casos un valor del mdulo de Weisz de 0.1
corresponde a eficacias prximas a 1 y que a medida que aumenta el valor del
mdulo la eficacia va disminuyendo. Por ejemplo, supuesta una cintica de
primer orden, para =10, la eficacia es de 0.1, lo que significa que las
limitaciones difusionales provocan que la velocidad del proceso global sea un
10% de la que tendramos en caso de que estas limitaciones no existiesen.
29
15. Biorreacciones enzimticas
Figura 15.10. Factor de eficacia interna en funcin del mdulo de Weisz para
varias situaciones (esfricas
____,
placas.)
Existe un criterio vlido para todas las geometras y cinticas conocido como
criterio de Weisz:
< 0.3
i
1 Limitaciones difusionales despreciables
> 3
i
<< 1 Limitaciones difusionales aconsideradar,
Y aproximadamente: Si > 10 para orden 1,
1/
y para orden 0
2/
.
Puede interesar dar alguna relacin aproximada entre Th y . Para orden 1
2
2( )
i
Th y para orden 0
2
2( )
i
Th .
e. Otras limitaciones de las enzimas inmovilizadas diferentes de la
difusin de
substrato.
El entorno del enzima no ser diferente del existente en estado libre, nicamente
debido a la diferente concentracin de substrato. La matriz adquirir una carga,
afectada por la propia presencia de la enzima, y se tendrn valores locales de
pH, constituyentes inicos y de todos los otros componentes, incluyendo
producto.
Las estabilidades a cambios trmicos, de pH , e incluso a ciertos txicos, suelen
aumentar debido a la inmovilizacin que ofrece cierta proteccin.
0,01
0,1
1
0,01 0,1 1 10 100
=
orden 1
=0
orden 0
=0.2
F
a
c
t
o
r

d
e

e
f
i
c
a
c
i
a

i
n
t
e
r
n
a
,

i

(
-
)
Mdulo de Weisz, (-)
30
15. Biorreacciones enzimticas
En alguna ocasin, con reacciones exotrmicas, la temperatura dentro de la
partcula puede ser mayor que en la fase lquida al no difundir suficiente calor
hacia afuera, y la velocidad que se observa puede ser mayor debido a esas
limitaciones difusionales trmicas.
15.3.3. Limitaciones de transferencia de materia externa
Hasta el momento no hemos considerado el efecto causado por la resistencia
externa, debido a que existe una pelcula de lquido en torno al biocatalizador
previamente comentada (Figura 15.6). La concentracin en la superficie del
soporte (C
AS
) no ser la misma que en el medio lquido (C
AB
), lo que lgicamente
tambin afectar la eficacia global del proceso. Este valor C
AS
puede ser
calculado a partir de la ecuacin
( )
A L AB AS
N k a C C
siendo N
A
; moles de sustrato que atraviesan la pelcula por unidad de tiempo y
unidad de volumen de biocatalizador (moles/l s); k
S
; coeficiente de transferencia
de materia lquido-slido (cm/s); a; superficie externa del biocatalizador/volumen
del biocatalizador= S/V
P
(cm
-1
); C
AB
concentracin de sustrato en el medio lquido
(moles/l); C
AS
concentracin de sustrato en la superficie del biocatalizador
(moles/l).
Notar que precisamos calcular el coeficiente k
L
(o k
L
a) que puede en ocasiones
determinarse experimentalmente, y en otras calcularse mediante correlaciones.
En las correlaciones con frecuencia aparece dentro de un nmero adimensional
(Sherwood=Sh= k
L
D
p
/D), que suele presentarse en funcin de otros nmeros
adimensionales como el Schmidt=Sc=/ D, y del Reynolds=Re=D
p
v/ en
procesos de conveccin forzada, o del Grashof=Gr=gD
p
3
(

)/
2
para
conveccin libre
a. A partir de la cintica heterognea (Uso del mdulo
observable de t. materia)
Si nos encontramos en estado estacionario los moles de sustrato que atraviesan
la pelcula sern los mismos que los que son consumidos por el biocatalizador,
por lo que se puede escribir:
( ) ( )
( )
P
A
A obs L AB As L AB As V
r k C C k a C C
Pudiendo despejar la concentracin en la superficie del biocatalizador
( )
1
AS
Ab
C A obs
C
L Ab
r
k aC

Un valor bajo de k
L
implicar una baja eficacia, por el contrario un valor muy alto
indicara que C
AS
= C
AB
y por lo tanto esta resistencia externa puede ser
despreciable.
Tambin podemos definir un nmero adimensional mdulo observable de
transferencia de materia
. A het P
L Ab
r V
S k c

y por tanto
.
.
1
A R
A b
c
c
.
Si es prximo a 1 no hay limitaciones de transferencia de materia, y si es
<<1 habr fuertes limitaciones .
31
15. Biorreacciones enzimticas
Habr adems una velocidad observable basada en la concentracin en la
superficie que hemos llamado r
A.R
, y otra distinta basada en la concentracin en
la masa global c
Ab
que es la que podemos medir y llamamos r
Ab
y que ser la
que podemos medir (por ejemplo (r
Ab
=k c
Ab
). Podemos definir una eficacia
debida a la resistencia externa
e
como
(en la superficie)
(en la masa global)
AS
e
Ab
r
r

.
Por ejemplo si cintica de orden 1:
.
.
A R
A b
r
e r
=
3
3
(4 / 3)
(4 / 3)
AS
Ab
R kC
R kC

, luego
.
.
A R
A b
c
e c

b. A partir de la cintica homognea (Uso del nmero de
Damkhler)
Se puede utilizar el mtodo anterior mediante tanteo. El mtodo directo puede
basarse en el uso nmero de Damkhler como
Velocidad mxima de reaccin
Velocidad mxima de difusin del reactivo
Da
por ejemplo, para Michaelis-Menten
m
L Ab
v
Da
k ac

Para orden 1
1
L
k
Da
k a

,para orden 0
o
L Ab
k
Da
k ac

As, conocida la cintica homognea (o v

m
, k
1
, k
0
) y el coeficiente volumtrico de
transferencia de materia k
L
a se obtiene Da con Michaelis-Menten, y puede usarse
(junto a ( =K
m
/C
Ab
) en la Figura 15.10 para calcular la
e
y a partir de ella la
cintica heterognea.
Figura
15.10.
Relacin entre el nmero de Damkhler y el factor de eficacia externa
e

0,01
0,1
1
0,01 0,1 1 10 100 1000
Da/ (-)
F
a
c
t
o
r

d
e

e
f
i
c
a
c
i
a

e
x
t
e
r
n
a

E

(
-
)
=1
0
=0.
2
=0.0
2
1
10
-1
10
-2
32
15. Biorreacciones enzimticas
15.3.4. Limitaciones de transferencia de materia externa e
interna
Finalmente, si hay tanto resistencias externa como interna, tendremos una
eficacia global

definida como:
.
i e

Por tanto si hay las dos resistencias, se calcula la cintica homognea en base a
la concentracin c
Ab
es decir r
Ab
, despus se calculan
i
y
e
, y finalmente se
puede calcular la r
Ahet
como
. . A het A b
r r
15.4. REACTORES ENZIMTICOS
15.4.1. Tipos de reactores
Podemos hacer una primera clasificacin de reactores, con enzimas libres o
inmovilizados
a)-Los reactores con enzimas libres suelen ser tanques agitados,
habitualmente de tipo mecnico, con velocidades moderadas.
b)-Los reactores con enzimas inmovilizadas pueden ser muy diversos. Se
clasifican en
Reactores para enzimas en partculas se muestran en la Figura 15.10.a
tres tipos:
o Sistemas mezclados, debiendo cuidarse la suspensin y mezcla de
las partculas
o Sistemas de lecho fluidizado, habitualmente con reciclo para ajustar
la velocidad
o Sistemas de lecho fijo o empaquetado
Los dos primeros corresponden con buena mezcla, mezcla
apreciable, mientras el tercero, lecho fijo dar un flujo prximo a
pistn (aunque con alguna dispersin)
Reactores con estructura de pelcula, se muestran dos tipos en
Fig.15.10.b
o Fibras huecas . El flujo de pistn, se transforma en mezclado debido
al reciclo
o Membranas en espiral. Se presenta el mismo tipo de flujo.
Adems de todos los bioreactores mencionados, se han utilizado
muchos otros
en el laboratorio, por ejemplo cestas con enzimas en tanques
agitados
33
15. Biorreacciones enzimticas
Alimentacin
Catalizador
Slido
Suspendido
A) EstructuradePartculas
B) EstructuradePelcula
Alimentacin
Membranade
paredpermeable
Producto
Soportede
Membrana
Alimentacin
Producto
i) Mezcla ii ) Recirculacin iii ) Empaquetado
iv ) Fibrashuecas v) Membranaenespiral
Alimentacin
Catalizador
Slido
Suspendido
A) EstructuradePartculas
B) EstructuradePelcula
Alimentacin
Membranade
paredpermeable
Producto
Soportede
Membrana
Alimentacin
Producto
i) Mezcla ii ) Recirculacin iii ) Empaquetado
iv ) Fibrashuecas v) Membranaenespiral
Figura 15.10. Reactores usuales con enzimas inmovilizadas.
La configuracin final del sistema se complica con el uso de reciclos (aumenta la
mezcla), y en particular la combinacin habitual con tanques agitados que sirven
para mantener un volumen en operacin, particularmente en sistemas por carga.
Para sistemas de flujo pueden introducirse directamente en los reactores, pero a
veces se colocan tambin tanques y reciclos para aumentar el tiempo de
residencia.
15.4.2. Ecuaciones generales para reactores ideales
a. Discontnuos (BDPM)
Un problema importante en biorreactores discontnuos es conocer la eficacia final
o las concentraciones finales, en funcin del tiempo. Consideramos que est el
biorreactor discontnuo perfectamente mezclado (BDPM), de forma que la
composicin (y temperatura, velocidades,..) es la misma en todos los puntos.
Consideraremos que no hay variacin de volumen durante la biorreaccin. Se
puede aceptar en fase lquida. La excepcin pueden ser las transformaciones a
presiones muy elevadas (miles de atmsferas), que se estn comenzando a
utilizar al procurar procesos de esterilizacin. Un balance de materia sera
Velocidad de
mol/s = desaparicin de A = ; Para A R r
A
= dn
A
/dt
por reaccin
Velocidad de
acumulacin
Velocidad de
desaparicin de
A por reaccin
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15. Biorreacciones enzimticas
En trminos de conversin tendramos X
A
, r
A
V = -n
Ao
dx
A
/dt,
( )
A
X
A
Ao
o
A
dX
t n
r V

En la prctica resulta ms til aqu considerar. Si V=cte,

AF
Ao
C
A
C
A
dC
t
r

Tambin podemos expresarlo como

A
A
dc
r
dt

P
P
dc
dt
r

La forma integral permite obtener la evolucin de la concentracin con el tiempo.

Si se tratan muchas reacciones puede resultar interesante trabajar con
conversiones X
A
. En trminos de moles (n) y conversiones (x). En cierto instante
n
A
= n
A0
n
A0
x
A.
Al reaccionar A va reducindose su concentracin C
A
= C
AO
(1
X
A
) donde x
A
es la fraccin de moles de A iniciales que se han convertido
(=conversin de A). Si tenemos A+2B3C, inicialmente n
A0
de A, n
B0
de B, en
cierto instante tendramos n
A0
(1-x
A
) de A, n
B0
-2n
A0
x
A
y 3 n
A0
x
A
de C.
Existen algunas situaciones con variacin de volumen en fase lquida V=V
o
,
como en biorreacciones a alta presin. Aqu debe considerarse
(1 ) /
A Ao A
c c X

b. Biorreactor de flujo pistn (BFP)
Si no hay expansin de volumen, la ecuacin ser la misma que para discontnuo,
basta con substituir t por .
A
A
dc
r
d

,
AF
Ao
C
A
C
A
dC
r

. Una aplicacin industrial

muy importante con este biorreactor es la isomerizacin de glucosa a fructosa;
otra es la transformacin de almidn en amilosas en las plantas de obtencin de
bioetanol.
c. Biorreactor de flujo perfectamente mezclado (BCPM), o
(CSTR )
En estado estacionario la diferencia entre entrada y salida es igual a lo que
desaparece por reaccin.
mol/s = = (entrada) - (salida); Para el caso A R,
siendo F(=) mol/s
(-r
A
)
F
V = F
Ao
F
AF
. Si la densidad es constante F
Ao
F
AF
= Q
o
(c
Ao
c
AF

y con el tiempo de residencia = V/Q tendremos

( )
Ao AF
o A
F
C C V
Q r

o bien
A
C
r

Notar que en esta ecuacin es positivo, el valor de r

A
ser negativo (p.ej.-kc
A
)
si se consume, en cuyo caso c
A
(c
A1
-c
A0
) es negativo
15.4.3. Integracin de las ecuaciones de reactores con cintica
enzimtica
Hemos visto las ecuaciones, generales para reactores ideales, en sistemas sin
variacin de volumen, en estado estacionario: a) Para biorreactor discontnuo
mezclado (o biorreactor de flujo pistn)
A
A
dc
t
r

(
A
A
dc
r

), b) Para biorreactor de
flujo perfectamente mezclado
A
A
c
r

35
15. Biorreacciones enzimticas
Estas pueden integrarse con las cinticas enzimticas tratadas en este captulo,
incluyendo las homogneas y las heterogneas. Se muestran a continuacin
algunos de los resultados.
Cintica/React
or
Discontnuo o flujo
pistn
Flujo perfectamente mezclado (BRPM)
Orden 0 S = So v
m
t
A Ao m
c c v
Orden 1
S = S
o

t
Km
v
m
e

1
0
1
m
A A
m
v
c c
K

_
+

,
Michaelis-
Menten
( )
ln
m o o
m m
K S S S
t
v S v

+
( )
2 1
4
2
A Ao m m m m Ao Ao m
c c K v v K c c K
1
t + +
1
]
Si del total del volumen V
T
, slo en una zona de volumen V
R
hubiese reaccin
debemos introducir la cintica r
A
en la ecuacin
A
T R A
dc
V V r
dt

Si tenemos varios biorreactores o conexiones de flujo (reciclo, bypass), se
obtiene la conversin a travs de los balances de materia, calculando los
sucesivos valores.
BIBLIOGRAFA
- Bailey J.E., Ollis D.F.Biochemical Engineering Fundamentals McGraw Hill, NY
(1986).
- Blanch, H.W.; Clark, D.S. Biochemical Engineering; Marcel Dekker: N.Y., 1996.
- Carberry, J.Chemical and Catalytic Reaction Engineering McGraw Hill, NY
(1976).
- Cheftel, J-C, Cheftel, H., Introduccin a la bioqumica y tecnologa de
alimentos.II, Acribia, Zaragoza, 1976
- Doran, P.M. Bioprocess Engineering Principles. Academic Press, London
(1995).
- Hill, Ch. Chemical Eng.Kinetics Reactor Design John Wiley NY (1977).
- INTERNATIONAL UNION OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
http://www.chem.qmul.ac.uk/iubmb/.
- K. Schgerl, K.H. Bellgardt (Eds.) Bioreaction Engineering Modelling and Control;
Springer: Berlin Heidelberg, 2000.
- Segel, L.H. Biological Kinetics; Cambridge University Press: Cambridge, 1991.
.