Funcionamiento del criadero: cultivo de algas

3.1 Introduccin
Microalgas marinas unicelulares (Figura 12) se cultivan como alimento para las distintas etapas del cultivo en criadero de mariscos de valor comercial. Hasta hace poco las algas que viven constituy el nico alimento para las larvas de bivalvos y los jvenes. Esto est empezando a cambiar como resultado de las investigaciones recientes sobre los desarrollos de dietas adecuadas no vivos y artificiales. Sin embargo, la produccin de algas en vivo seguir siendo un aspecto muy importante de la gestin de criaderos con xito en el futuro inmediato, aunque slo sea como un suplemento alimenticio en directo a los productos alimenticios innovadores. Flagelado y especies de diatomeas, entre las microalgas, son las principales productoras en la base de la cadena alimentaria del mar. Que fabrican componentes orgnicos celulares de la absorcin de dixido de carbono y los nutrientes contenidos en el agua de mar utilizando la luz como fuente de energa en un proceso llamado fotosntesis. Normalmente son cultivadas en los criaderos de un tratamiento adecuado del agua de mar enriquecida con nutrientes adicionales, que incluyen los nitratos, fosfatos, elementos traza esenciales, vitaminas y dixido de carbono como fuente de carbono. Agua de mar sinttica se puede utilizar, pero tiene un costo prohibitivo, excepto en la escala de laboratorio pequeo. La necesidad de microalgas cultura se debe a que el contenido de fitoplancton natural del agua de mar utilizada en la planta de incubacin es insuficiente para apoyar el crecimiento ptimo de las altas densidades de larvas y juveniles criados. Particularmente en el cultivo de larvas, los tratamientos de agua utilizada se eliminar casi todos los naturales de fitoplancton que luego tiene que ser sustituido a partir de cultivos de especies preferidas, de valor de los alimentos. En este contexto, y en el suministro de raciones de alimentos adecuados para los animales reproductores y juveniles, algunas de las muchas algas que ocurren naturalmente son de buen valor alimenticio para los bivalvos y no todos ellos son susceptibles a la cultura artificial a una escala suficientemente grande. Una lista de las especies ms comnmente utilizadas en criaderos de bivalvos se da en la Tabla 1. Los parmetros de tamao de las clulas y la composicin tambin se

muestran.
Tabla 1: El volumen de las clulas, el peso orgnico y contenido de lpidos bruto de algunas de las especies ms comnmente cultivadas de algas utilizados como alimentos de larvas de bivalvos y escupi. Especies marcados con * son de valor nutricional relativamente pobre. Especie: Flagelados: Tetraselmis suecica Dunaliella tertiolecta * Isochrysis galbana Isochrysis (T-ISO)Pavlova lutherii Diatomeas: Chaetoceros calcitrans Chaetoceros gracilis Thalassiosira pseudonana Skeletonema costatum Phaeodactylum tricornutum * El volumen celular medio (m 3 ) 300 170 40-50 Peso orgnica. (10 mg 6 clulas) 200 85 19-24 Lpidos%

6 21 20-24

35 80 45 85 40

7 30 22 29 23

17 19 24 13 12

La cultura de las cuentas de las algas alrededor del 40% de los costes de la crianza de semillas de bivalvos a una longitud de concha de aproximadamente 5 mm en una incubadora. Por ejemplo, 1 milln de menores almejas de Manila o las ostras del Pacfico de 5 mm longitud de la concha se consumen 1 400 l de alta densidad, algas cultivadas cada da a la temperatura de crianza ptima de 24 C. Volmenes ms pequeos todos los das son necesarios para alimentar a los reproductores y las larvas. Los mtodos bsicos de cultivo de algas no han cambiado mucho en los ltimos aos y los diversos pasos en el proceso que conduce a las culturas a escala de produccin se presentan en la Figura 13. Criaderos han optado por la cultura ya sea en interiores, con intensa iluminacin artificial, generalmente ajena a la cultura de los vasos, o de la cultura al aire libre, amplia en grandes tanques o estanques utilizando la luz natural. Las tcnicas intensivas son satisfactorios en trminos de fiabilidad y productividad, pero son costosos en trminos de desembolso de capital y el trabajo, mientras que los mtodos intensivos tienden a ser menos fiable y, a veces no muy productivo. Ambos mtodos se consideran en conjunto con la infraestructura esencial y metodologas. Un diagrama esquemtico del proceso de cultivo de algas se da en la figura 14 y un plano de un criadero que muestra el rea asignada para el cultivo de algas se dio anteriormente en la Figura 5 (seccin 1.2).

Figura 13: Pasos en la produccin de algas. Culturas de archivo (250 ml o menos) permanecer en aislamiento bajo la luz y el control del clima (temperatura baja) y slo se utilizan para inocular cultivos iniciadores cuando sea necesario. Que no se airean ni se agrega dixido de carbono. Cultivos iniciadores (250 ml y 4 l de volumen) se cultivan rpidamente de 7 a 14 das a temperaturas ms altas y la intensidad de la luz con una fuente de dixido de carbono del aire enriquecido. Cuando est listo, una pequea parte del volumen se utiliza para iniciar una nueva cultura de arranque y la parte principal para iniciar una cultura a escala intermedia. Intermediatescale culturas (por lo general de entre 4 y 20 l l de volumen) se pueden utilizar como alimento para las larvas o para iniciar un cultivo a gran escala. A gran escala los cultivos son por lo general de un mnimo de 50 litros y con frecuencia son mucho mayores en volumen.

Fig. 14: El proceso de cultivo de algas que muestra los diferentes insumos necesarios.Si el tratamiento del agua de mar secundaria es necesario o no depende de la medida en que es un principio que el agua filtrada.

3.2 Mantenimiento del material y fermentos lcticos

Culturas de archivo, tambin conocido como maestro de culturas, de las especies preferidas son la base fundamental de la cultura. Normalmente se suministra como monoespecficos (uni-algas) los cultivos de las colecciones de cultivos de buena reputacin mantenida por las instituciones nacionales o laboratorios de investigacin. Ya que son valiosos, que normalmente se mantienen en los medios de comunicacin especializados de mantenimiento, por ejemplo, Erdschreiber, o bien en F / 2 medios de comunicacin, o sobre placas de agar nutriente enriquecido o laderas, bajo condiciones controladas de temperatura y la iluminacin. Un rea especial o una habitacin de la sala de cultivo de algas generalmente se asigna a este propsito. Las cepas se utiliza slo para proporcionar lneas de cultivos iniciadores (tambin conocido como inculos) cuando sea necesario. Todo esfuerzo debe hacerse para minimizar el riesgo de contaminacin de la poblacin y cultivos iniciadores con los microorganismos competidores. Los procedimientos estriles se describe a continuacin se deben seguir para asegurarse de que no se produzca contaminacin. Las cepas se mantienen en pequeos contenedores transparentes, autoclavable. Por ejemplo, 500 ml de vidrio de borosilicato, de fondo plano o cnico, matraces de ensayo equipada con un tapn de algodn en el cuello, propicio que contiene 250 ml de medio estril, autoclave, son ideales. La composicin y preparacin de Erdschreiber medio se da en la Tabla 2. Medios alternativos adecuados para los fines son de Guillard F / 2 (ver Tabla 3) y HESAW (ver Tabla 4). Especialidades de las algas de enriquecimiento cultural para su inclusin en el agua de mar tratada adecuadamente tambin puede ser utilizado de acuerdo a las instrucciones del fabricante. Las cepas se mantienen a menudo en un medio de agar agua de mar impregnada con los nutrientes adecuados en placas de Petri o en las laderas de los tubos de ensayo. Las cepas se mantienen mejor en una incubadora de refrigeracin de 4 a 12 C (segn la preferencia), iluminada por dos o ms de 8 vatios (W) las lmparas fluorescentes que proporcionan

una intensidad de luz de 450 lux medidos en la superficie de cultivo (Figura 15 ). Alternativamente, se puede mantener en condiciones de fro cerca de una ventana orientada al norte (de la luz solar directa), o en una habitacin fresca iluminada con lmparas fluorescentes. El objetivo no es permitir el crecimiento rpido, pero mantener los cultivos en buen estado. Las culturas no se airean, ni dixido de carbono introducido.

3.2.1 Procedimientos para el manejo de cepas

Es necesario cultivos madre sub-cultura a intervalos mensuales para mantenerlos en un estado fuerte y saludable. Despus de retirar el tapn de algodn en un frasco de cultivo de valores y de fuego en el cuello del matraz con un mechero Bunsen (o un soplete de butano), un inculo de 20 a 50 ml se decanta en otro frasco estril con medio en autoclave. El tapn se inserta despus en llamas en el cuello de este nuevo frasco.Nombre de la especie y la fecha se indeleblemente en la botella, que luego se regres a la incubadora. El cultivo madre original se conservar durante un par de semanas en el caso de que la cultura de valores nuevos no crece. Del cultivo de procedimiento de transferencia se realiza mejor en un gabinete que ha sido esterilizado por la luz ultravioleta para reducir an ms el riesgo de contaminacin (ver figura 16). Detalles del procedimiento de transferencia se indican en el cuadro adjunto.

Figura 16: A . - diagrama esquemtico de una cmara de transferencia de la cultura B - un autoclave adecuado para la esterilizacin de pequeos volmenes de medio de cultivo. Tabla 2: La composicin y la preparacin del medio Erdschreiber mantenimiento de los cultivos. Constituyentes: 1. El agua de mar : Autoclave 2 l 3 l en un vidrio de borosilicato con fondo plano matraz con tapn de algodn a 1,06 kg cm -2 por 20 minutos. Reposar durante 2 das. 2. extraer del suelo : preparado de la siguiente manera: a) mezclar 1 kg de suelo de una zona de bosques o pastos tratados con fertilizantes artificiales, insecticidas, etc, con 1 l de agua dulce destilada; b) autoclave a 1,06 kg cm
-2

durante 60 minutos;

c) decantar el lquido sobrenadante; d) filtrar el sobrenadante a travs de papel Whatman No. 1 y luego a travs de una fibra de vidrio (GF / C) de papel;

e) autoclave en alcuotas de 1 l en botellas de polipropileno a 1,06 kg cm -2por 20 minutos; f) Almacenar en congelador hasta que sea necesario; g) autoclave de 100 ml en 500 ml de vidrio de borosilicato, de fondo plano matraz con tapn de algodn a 1,06 kg cm -2 por 20 minutos. 3. nitrato / solucin de fosfato de archivo : Disolver 40 g NaNO 3 y 4 g de Na 2 HPO 4 en 200 ml de agua destilada. Autoclave en el frasco de 500 ml a 1,06 kg cm -2 durante 20 minutos. 4. silicato de solucin madre : Disolver 8 g de Na 2 de SiO tres .5 H 2 O en 200 de agua destilada. Autoclave en el frasco de 500 ml a 1,06 kg cm -2 por 20 minutos. Procedimiento: Aadir 100 extracto de suelo ml (2) a 2 l de agua de mar esterilizada (1). Con una pipeta estril, aadir 2 ml de nitrato / fosfato de solucin madre (3) y 2 ml de caldo de silicato (4). Decantar 250 ml en 8 frascos de vaco en autoclave de 500 ml con tapones de algodn. Use un mechero Bunsen o soplete de butano para la llama de los cuellos de las botellas inmediatamente antes y despus de decantacin / pipeta. El medio de mantenimiento ya est listo para su uso. Procedimiento para la transferencia de cultivos de algas de matraz a matraz (A) Limpiar todas las superficies internas de la inoculacin de cabina con el 85% de etanol. (B) Coloque todos los frascos que se requerirn en la cabina, es decir, todos los frascos que se transferirn de (el frasco de transferencia) y los frascos que contienen los medios esterilizados para ser transferido a (matraces nuevos). (C) Cierre cabina y encender la lmpara ultravioleta. Deje por lo menos durante 20 minutos. (No es seguro que mire directamente a luz ultravioleta, por lo que una cubierta oscura se debe colocar sobre la placa de visin plexigls (plstico acrlico transparente) cuando la luz est encendida.) (D) Apague la lmpara. Ignite quemador pequeo. (E) Retire las tapas de aluminio de una transferencia y un nuevo frasco. Llama el cuello de cada botella girando lentamente el cuello a travs de la llama. (F) Incline el cuello del matraz de transferencia hacia el nuevo frasco. En un solo movimiento, retire los dos tapones y vierta un inculo en el matraz de nuevo.Transferencia de aproximadamente 50 ml de especies de diatomeas y 100 ml de flagelados. Evite tocar el cuello de los dos frascos. Nunca toque la parte del tapn que se introduce en el matraz. Una vez que el inculo, se aade, reemplazar el tapn en el frasco de transferencia. Poco a poco la llama el cuello del matraz nuevo antes de volver a su tapn. (G) Coloque la tapa de aluminio sobre el cuello del matraz nuevo. El uso de un rotulador resistente al agua, la etiqueta del frasco de nuevo con las especies de algas inoculados y la fecha de la transferencia. (H) Repita el procedimiento con todas las botellas dentro de la cabina. Una vez completado, apague y quemador de cabina abierta.

(I) Eliminar todos los recipientes nuevos y colocar en la incubadora de algas o un rea bien iluminada en el centro de cultivo de algas. (J) El inculo restante en los frascos de transferencia puede ser utilizada para inocular grandes culturas, tales como frascos de 4 litros o garrafas. (De: Bourne, Hodgson y Whyte, 1989) Tabla 3: F / 2 de Guillard medios utilizados para el cultivo de algas en criaderos de Guillard (1975). 1. 2. 3. 4. Nitrato Fosfato Silicato Trazas de metales NaNO 3 NaH 2 PO 4 . H 2 O Na 2 de SiO 3 .9 H 2 O FeCl 3 .6 H 2 O Na 2 EDTA Disolver en 900 ml de agua destilada H 2 O Aadir 1 ml de cada una de las soluciones de metal despus de rastrear CuSO 4 .5 H 2 O 0,98 g por cada 100 ml ZnSO 4 .7 H 2 O 2,20 g por cada 100 ml CoCl 2 .6 H 2 O 1,00 g por cada 100 ml MnCl 2 .4 H 2 O 18,00 g por cada 100 ml Na 2 MoO 4 .2 H 2 O 0,63 g por cada 100 ml Completar el volumen a 1 l con agua destilada H 2 O (pH aprox. 2,0) Aadir 1 ml por litro FSW de las soluciones anteriores (# 1-4). 5. Vitaminas Biotina 1,0 mg B-12 1,0 mg Tiamina HCl 20,0 mg Se disuelven en 1 litro destilada H 2 O. Tienda de congelados. Agregar 1 / 2 ml de solucin de vitaminas por cada 1 litro de agua de mar. Tabla 4: los medios de comunicacin HESAW utilizado para el cultivo de algas en criaderos de bivalvos. A partir de Harrison et al. (1980). NaNO 3 Na 2 . glycero.P0 4 .5 H 2 O Se disuelven en dos 1itres destilada H 2 O 2. Na 2 EDTA.2H 2 O H 3 BO 3 Se disuelven en 1 litro caliente destilada H 2 O 1. 466,7 g 66,7 g 55,3 g 38,0 g 75,0 g por l 5,0 g por l 30,0 g por l 3,5 g 4,36 g

3. FeCl 3 .6 H 2 O 1,6 g Disolver en 100 ml de agua destilada H 2 0. Aadir 50 ml de solucin N 1 y el resto a la solucin # 2. Mezcle las soluciones # 1 y # 2. 4. MnSO 4 . H 2 O 4,1 g, o

MnSO 4 .4 H 2 O 5,4 g Disolver en 50 ml de agua destilada H 2 0. Aadir a la solucin anterior. 5. Na 2 MoO 4 .2 H 2 O 1,26 g Disolver en 50 ml de agua destilada H 2 0. Aadir a la solucin anterior. 6. ZnS0 4 .7 H 2 O 7,3 g CuS0 4 .7 H 2 O 1,6 g Disolver en 100 ml de agua destilada H 2 0. Aadir 10 ml de solucin a la solucin anterior. 7. Na 2 SeO 3 0,173 g Se disuelven en 1 litro destilada H 2 0. Aadir 1 ml de solucin a 100 ml de agua destilada H 2 0 para que la solucin madre. Aadir 10 ml de solucin madre a la solucin anterior. Aumentar el volumen de la solucin a 10 l, aadiendo destilada H 2 0. Autoclave antes de su uso. Aadir 1 ml de solucin para cada uno de l agua de mar. 8. Na 2 de SiO 3 .5 H 2 O 224,0 g, o Na 2 Si0 3 0.9 H 2 O 300,0 g Se disuelven en 1 litro destilada H 2 0. Poco a poco aadir 1,5 l de 1 Molar HCl (133,5 ml de HCl concentrado en 1,5 L destilada H 2 0). Aumentar el volumen de la solucin a 10 l, aadiendo destilada H 2 0. Autoclave antes de antes de su uso. Aadir 1 ml de solucin para cada uno de l agua de mar. 9. Vitaminas (Siga las instrucciones de las vitaminas en la Tabla 4.)

3.2.2 arranque Manageme cultura

Procedimientos para el mantenimiento de cultivos iniciadores (inculo) son casi idnticos a los descritos anteriormente. Estos cultivos son cultivados especficamente para proporcionar inculo para iniciar cultivos de mayor cantidad necesaria para producir alimentos. Una fila de cultivos iniciadores es originario de configuracin de la cultura de valores de la especie requerida. Cultivos iniciadores, como las poblaciones, se pueden cultivar en frascos de 500 ml de ebullicin en 250 ml de medio de cultivo. Debido a que son necesarios para proporcionar inculo es necesario para crecer rpidamente. Que se cultivan en 18 a 22 C a una distancia de 15-20 cm a partir de 65 o 80 lmparas fluorescentes W dando un nivel de iluminacin en la superficie de cultivo de 4 750 a 5 250 1ux (Figura 17). Cultivos iniciadores son generalmente gaseosas con un aire / dixido de carbono (CO 2 mezcla). Cultivos iniciadores son cultivados durante perodos variables de tiempo antes de su uso.En el caso de especies de diatomeas, que tienen tiempos cortos de generacin, este periodo es de 3 a 5 das. Para la mayora de los flagelados que es de 7 a 14 das.Cuando est listo para su uso un cultivo iniciador es sub-cultivadas con tcnicas estriles, como se describi anteriormente. Veinte a 50 ml, (dependiendo de la especie y la densidad de la cultura), se transfiere a una cultura nueva ml 250 - para mantener la lnea de la cultura de arranque. Mayor volumen de cultivos iniciadores pueden ser necesarias para inocular a gran volumen de cultivos de produccin. Por motivos de claridad, los cultivos de l de volumen entre 2 y 25 se conoce como escala intermedia culturas. A modo de ejemplo, una cultura de produccin de 200 litros inicialmente comenzar con un arranque de 250 ml de la especie requiere que se transfiere cuando se ha crecido a un mayor volumen 2 a 4 l de arranque. Cuando una cultura de 200 litros est a punto de iniciarse, de 200 a 400 ml de la cultura de l 2-4 de arranque se utiliza para iniciar una nueva cultura de 2 o 4 l de arranque y el resto para iniciar el cultivo de 200 litros de produccin.

Con los arrancadores de mayor volumen es ventajoso para aumentar el nivel de iluminacin y de airear la cultura, con una mezcla de aire de dixido de carbono /. Es aconsejable diluir el medio para cultivar especies de diatomeas de una salinidad de 20 a 25 PSU (unidades prcticas de salinidad, lo que equivale a partes por mil) para obtener las tasas de crecimiento posible. La mayora de las especies de flagelados se cultivan mejor a unos 30 PSU.

3,3 de escala intermedia CULTURA

La mayora de los laboratorios y criaderos que requieren pequeas cantidades de algas para uso alimentario frascos esfricos de vidrio o de cristal o de plstico garrafas de hasta 25 l de volumen (figura 18). Estos son por lo general funcionan como sistemas de cultivo por lotes o semipermanente. Cultivo por lotes consiste en la inoculacin del medio de cultivo con la especie requerida. La cultura es entonces ha crecido rpidamente hasta que un nuevo aumento de la densidad celular es inhibida por el fracaso de la luz para penetrar adecuadamente la cultura, La cultura es entonces totalmente la cosecha, el recipiente de lavado y esterilizado y comenz de nuevo con una nueva cultura. El mtodo semi-continua implica el inicio de las culturas de la misma manera pero en lugar de por completo la cosecha cuando han crecido, estn parcialmente recogidos antes de la luz limitante es alcanzado. El volumen extrado es reemplazado con medio de cultivo recin preparado y el proceso se repite 2 o 3 das despus. De esta manera la vida de la cultura se extiende. Con algunas de las especies ms resistentes, por ejemplo, Tetraselmis suecica , culturas tendr una duracin de 3 meses o ms con las cosechas de 25 a 50% del volumen de cultivo 3 veces por semana. Cultivo por lotes se utiliza generalmente para especies delicadas y el rpido crecimiento de las diatomeas.Semi-continuo la cultura se utiliza principalmente con especies ms resistentes de flagelados.

3.3.1 fases de crecimiento de los cultivos

La recoleccin se lleva a cabo en semi-continuo de la cultura durante la fase exponencial de crecimiento. Las cosechas de lotes se hacen generalmente en el pico de crecimiento exponencial como los cultivos entran en la fase estacionaria. Una ilustracin del significado de estos trminos se da en la figura 19. En este caso, las especies cultivadas es el gran flagelado verde, Tetraselmis .

Figura 19: Etapas en el crecimiento de los cultivos de algas se ilustra por una curva de crecimiento tpica de la gran flagelado verde, Tetraselmis suecica .

Momento de la inoculacin del cultivo iniciador, la densidad de las clulas a partir de la cultura es de 25 a 50 clulas por ml (clulas por microlitro). Despus de la inoculacin de estas clulas crecen y se dividen cada vez ms rpidamente a medida que se aclimate a las condiciones de cultivo. Este perodo de aclimatacin, que dura de 2 a 3 das, se llama la fase de latencia . Una vez adaptado a las condiciones, la tasa de divisin celular se acelera y el aumento en el nmero de clulas en el cultivo es logartmica. Este perodo tiene una duracin de 4-6 das y se llama la fase de crecimiento exponencial . Tasa de divisin celular se ralentiza la penetracin de la luz a travs de la cultura y / o nutrientes se vuelven limitantes. La cultura, entonces entra en la fase estacionaria , que puede durar muchos das en el caso de los flagelados o slo por un corto tiempo de diatomeas. Los cultivos de flagelados permanecen en esta fase por el reciclaje de los nutrientes de las clulas muertas y en descomposicin, sino en el caso de las diatomeas, que puede producir la auto-inhibicin de metabolitos, que atraen el crecimiento bacteriano, se derrumba la cultura. En el ejemplo mostrado en la Figura 19, las culturas lote de Tetraselmis se cosechan con una densidad de alrededor de 2 000 clulas culturas per.l y semi-continuos a unos 1 500 clulas per.l. Estas densidades se puede incrementar, dentro de los lmites, por el aumento de la intensidad de la luz que cae sobre las culturas, manteniendo el pH entre 7,5 a 8,2 con control de CO 2 de entrada y por la adicin de nutrientes adicionales a medida que aumenta la densidad de la cultura.

3.3.2 Detalles de la operacin de la cultura a escala intermedia

La complejidad de la operacin de la cultura depende de la exigencia de las algas y las limitaciones de costos en los que el sistema necesita para operar. En la forma ms simple el sistema de cultivo puede ser slo una versin a escala de los cultivos de partida, con 2 l de 25 l de fondo plano, frascos de vidrio o garrafas. Estos son parte llena del medio de cultivo - en este caso, estril, enriquecida con nutrientes del agua de mar - y luego se inocula con la especie requerida y la gaseada, con una mezcla de 2% de CO2 transportado en aire comprimido. El dixido de carbono es de una fuente de gas envasado con la presin del gas y la regulacin del caudal. Se trata de proporcionar la fuente de carbono para la fotosntesis y el control de pH dentro del rango de 7,5 a 8,2. El aire / CO 2 se filtra a travs de un cartucho de 0.2.m porosidad o de la membrana de filtro para eliminar la mayora de los contaminantes atmosfricos contaminantes y microorganismos competidores. Ejemplos de este tipo de sistema se ilustra en la Figura 18. El medio de cultivo se prepara a partir de agua de mar filtrada y esterilizada. Hay varias opciones para el tratamiento de la cultura del agua: a) ya sea el agua de mar se filtra para eliminar las bacterias con 0,22 o 0.45.m filtros de cartucho de membrana, o, b) es por lotes o continua pasteurizada de 65 a 75 C o, yc) que se trata en autoclave a 1,06 kg por cm 2 durante 20 minutos (Despus del autoclave el medio debe dejarse reposar durante 2 das en un recipiente apropiado cerrado de la atmsfera). O, d) es qumicamente esterilizadas con una solucin de hipoclorito de sodio a 25 mg por freechlorine l (mediante la adicin de 0,5 ml de leja domstica - 5% de hipoclorito de sodio - por l de agua de mar filtrada). Antes de su uso, el residual de cloro libre se neutraliza mediante la adicin de un exceso de solucin de tiosulfato de sodio (50,0 mg por litro), preparado en agua destilada. Nota : Los mtodos (a) (c) son los ms utilizados para la preparacin de la cultura a pequea escala, (b), y (d), despus de la filtracin antes del 1 o 2 micras de tamao de partcula, para el cultivo a gran escala.

Despus del tratamiento de esterilizacin, las adiciones de nutrientes se hacen. Los detalles del enriquecimiento de nutrientes utilizados en el Ministerio de Agricultura, Pesca y Alimentacin, Pesca laboratorio, Conwy, Reino Unido, que es adecuado para todas las especies comnmente cultivadas, se da en la Tabla 5. Tenga en cuenta que las diatomeas requieren la adicin de slice (Si) de los nutrientes bsicos. El medio est listo para prescindir de forma asptica a los frascos de cultivo, que ya est listo para ser inoculadas. En los ltimos aos, varias marcas de propiedad de los nutrientes de cultivo de algas se han convertido en disponibles. Estos se basan generalmente en la Guillard F / 2 y la frmula proporcionan excelentes resultados de crecimiento (ver Cuadros 3 y 4 de las frmulas bsicas). Para obtener la mxima productividad de la mayora de las especies puede ser necesario diluir el agua de mar con pura (destilada) de agua dulce (o de una fuente no contaminada) antes de la filtracin o autoclave. Las tasas de crecimiento y divisin celular de Chaetoceros calcitrans , pseudonana Thalassiosira y Skeletonema costatumson ptimas con una salinidad de 20 a 25 PSU. La productividad de muchos de los flagelados es ptima de 25 a 30 PSU. Iluminacin para el crecimiento de la cultura es proporcionada por lmparas fluorescentes, por lo general montado en el exterior de los frascos de cultivo (ver Figura 18). El nmero de lmparas es determinada por la altura y el dimetro de los recipientes de cultivo con el objeto de proporcionar 15 000 a 25 000 lux medidos en el centro del recipiente de cultivo vaco. Dos lmparas de 65 W o 80 son suficientes para iluminar tres frascos de vidrio l, que son alrededor de 18 cm de dimetro, mientras que cinco lmparas de la misma potencia de luz son necesarios para los buques de alrededor de 25 l de volumen (35 cm de dimetro). El crecimiento es ptimo entre los 18 y 22 C para la mayora de las especies. Tabla 5: nutrientes soluciones de sales para el enriquecimiento de las culturas de diatomeas en el agua de mar tratada. La adicin de la solucin madre de C se omite en la cultura de los flagelados. Un archivo FECI 3 . 6H 2 0 1,30 g * MnCl 2 .4 H 2 0 0,36 g H 3 BO 3 33,60 g EDTA 45,00 g NaH 2 PO4.2H 2 0 20,00 g NaNO 3 100,00 gramos Traza solucin de metal * 1,0 ml Agua destilada a 1000 ml Aadir 2 ml de archivo Un litro de agua de mar filtrada * Seguimiento de metal solucin ZnCI 2 2,10 g COCI 2 .6 H 2 O 2,00 g (NH 4 ) 6 Mo 7 O 24 .4 H 2 O 0,90 g CuS0 4 .6 H 2 0 2,00 g Agua destilada a 100 ml Acidificar con conc suficiente. HCI para obtener una solucin clara. * Cantidad de enriquecimiento del agua de mar en autoclave. Para utilizar agua de mar filtrada 3,25 g. Archivo B La vitamina B 12 (cianocobalamina) 10 mg La vitamina B 1 (aneurina clorhidrato) 200 mg

Agua destilada Aadir 0,2 ml de archivo B por litro de agua de mar filtrada Archivo C Na 2 de SiO 3 .5 H 2 0 Agua destilada Aadir 2 ml de archivo C por litro de agua de mar filtrada.

200 ml

4,0 g 100 ml

Ejemplos de la densidad celular alcanzados en la cultura de pequea escala de un nmero de especies nutricionalmente importantes se presentan en la Tabla 6. Estos son los valores obtenidos en el Laboratorio de Pesca MAFF, Conwy, y son tpicos de la densidad de lograr en otras partes de las empresas la cultura comercial. Es interesante sealar que tanto una mayor densidad de clulas de Chaetoceros calcitrans se obtienen 2 litros que en cultivos de 20 l.. Esto no significa necesariamente que la productividad en trminos de biomasa es menor. En todas las especies cultivadas el tamao de las clulas es variable de acuerdo a las condiciones de cultivo y la fase de crecimiento. En dos culturas l de Chaetoceros mayor densidad celular se alcanz, pero las celdas individuales son ms pequeas: 35 m 3 en comparacin con 50 m 3 en cultivos de 20 l..El contenido de extracto seco tambin es menor en alrededor de 10 microgramos por millones de clulas (microgramos por milln de clulas) en comparacin con un mximo de 18 microgramos por millones de clulas en cultivos de 20 l.. Otras especies muestran una variabilidad similar en los parmetros relacionados con el tamao en funcin de la densidad celular y las condiciones, ms all de las diferencias inherentes en el tamao celular entre las especies. A travs de la manipulacin de las condiciones de cultivo de las especies ms grandes, tales como Tetraselmis, es factible alterar el tamao de celda para que las clulas pueden ser ms fcilmente ingeridos por larvas ms pequeas. A pequea escala los sistemas de cultivo pueden ser objeto de mejoras tcnicas para aumentar su desempeo operativo como por quimiostatos. Pero, si el objetivo es solamente para producir ms alimentos, la mejor solucin es recurrir a los mtodos de cultivos a gran escala. Tabla 6: densidad celular en la cosecha (l clulas -1 ) obtenidos en los pequeos lotes (B ) y semicontinuo ( SC ) 2 l 20 l culturas para una seleccin de las especies de alto valor nutritivo. La salinidad del medio de cultivo tambin se da. Condiciones de cultivo Especies Isochrysis (T-ISO) Tetraselmis suecica Chaetoceros calcitrans Thalassiosira pseudonana(3H) Volumen (l) 20 20 2 20 2 Tipo SC SC B B B Salinidad (PSU) 25 30 20 20 20 Cosecha de la densidad (l clulas -1 )

15 000 2 000 60 000 22 000 40 000

3.3.3 Estimacin de la densidad de algas

Antes de la discusin de los mtodos de cultivo a gran escala, una breve descripcin en relacin con la estimacin de la densidad de las clulas en cultivo a cualquier escala se justifica. Existen varios mtodos para estimar la densidad de clulas de algas, incluyendo el uso de espectrofotmetros, fluormetros, hemocitmetros y contadores Coulter ("multisizers"). Un espectrofotmetro o fluormetro mide el contenido de clorofila A en un cultivo de algas y esto puede ser utilizado para obtener una aproximacin rpida de la densidad celular. Grficos

comparando la densidad celular y las lecturas de ambos instrumentos deben estar preparados para cada especie de alga. No obstante, la clorofila A de contenido en una celda de algas no es permanente y vara en funcin del estado nutricional de la clula. Esto afectar a la exactitud de las estimaciones de densidad de las clulas derivadas cuando se utilizan estos instrumentos. Estimaciones ms precisas de la densidad celular se puede hacer usando un hemocitmetro o un contador Coulter. Hemocitmetros son diapositivas de vidrio grueso con dos cmaras en la superficie superior, cada una mide 1,0 x 1,0 mm. Un cubreobjetos especial hincapi en estos dos cmaras dando una profundidad de 0,1 mm hace que el volumen total de cada cmara de 0.1 mm 3 . La base de cada cmara est marcada con una cuadrcula para facilitar en el recuento de clulas dentro del rea (Figura 20). Antes de contar las especies de algas mviles, 1 o 2 gotas de formol al 10% debe ser aadido a una muestra de 10 ml a 20 de la cultura para ser contados. Con el cubreobjetos, una o dos gotas de la muestra de algas se introducen por medio de una pipeta Pasteur para llenar las dos cmaras.

Figura 20: Diagrama de la red de marcado en una diapositiva hemocitmetro. La densidad celular se calcula de la siguiente manera. La red central de cada cmara (en trazo azul en la figura 20) se subdivide en 25 cuadrados (tambin se indica en azul en el diagrama), cada una mide 0,2 x 0,2 mm. Cada cuadrado grande est subdividido en 16 cuadrados pequeos de 0,05 x 0,05 mm. El nmero de clulas en 10 escogidos al azar 0,2 x 0,2 mm cuadrados se cuentan y el promedio o media calculada. Esto le da el nmero medio de clulas de algas por 0,2 mm x 0,2 mm x 0,1 mm mm o 0.004 3 . Ejemplo : A. Cuenta de clulas de algas: 40 + 30 + 50 + 60 + 55 + 65 + 70 + 45 + 40 + 70 = 525 Media = 52,5 clulas por 0,004 mm
3

B. Multiplique el promedio por 250 para obtener el nmero promedio de las clulas por milmetro tres . C. Debido a que hay 1000 mm 3 en 1 ml, multiplicar el valor calculado en B por 1 000.En este ejemplo, la densidad celular sera 52,5 x 250 x 1 000 = 13,1 millones (13,1 x 106) clulas por ml. Nota: 1 clula por ml (clulas ml -1 ) = 1 000 clulas por microlitro (clulas l -1 )

Un mtodo fcil y ms precisa de estimar la densidad de las clulas es el uso de un contador Coulter (ahora se llama un "Multisizer" - ver figura 21). Este instrumento fue desarrollado principalmente para el recuento de clulas sanguneas. Varios modelos estn disponibles y todos funcionan en el mismo principio. Una pequea corriente elctrica se pasa entre dos electrodos. Cada vez que una clula pasa entre ellos, la corriente se ve impedida y la clula se cuentan. El tamao de la abertura del tubo es importante, y para el conteo de clulas de algas de entre 2 a 10 micras de una abertura de 50 a 100 micras de dimetro es necesario. Un volumen conocido de agua se extrae a travs de la abertura en el tubo de abertura y las clulas se cuentan.Explicaciones ms detalladas de la operacin de un contador Coulter estn disponibles y se incluyen en el material de lectura se sugiere al final de esta seccin. Desde cultivos de algas suelen ser densos, las muestras deben ser diluidas a una densidad que se puede contar con precisin cuando se utiliza un contador electrnico - alrededor de 50 000 clulas por ml (50 clulas por microlitro). Muestras de algas se suelen diluir con una solucin al 3% de cloruro de sodio (sal de mesa por disolucin en agua destilada) o agua de mar con 0,45 m de membrana filtrada. Ejemplo : Aadir 0,2 ml de cultivo de algas a 20 ml 3% de NaCl. Mezclar bien. Cargo 3 veces y obtener un valor medio. Cuenta individual = 5 280, 5 336, 5 120. Si el volumen de la solucin de la muestra por el contador de Coulter es de 0,1 ml, entonces el promedio = 5 245 clulas por 0,1 ml. Multiplicar 5 245 por 10 para obtener el nmero de clulas en 1 ml de la muestra, y multiplicar por 100 para corregir el factor de dilucin. En este ejemplo, la densidad celular sera de 5 245 x 10 x 100 = 5.200.000 (5,2 x 10 6 ) clulas por ml.

3.4 cultivo a gran escala

Los criaderos de bivalvos comerciales necesidad de producir grandes volmenes de buena calidad, de alta alimentos algas valor diario para el apoyo econmico a escala la produccin de semillas. Ejemplos de algunos de los sistemas actualmente en uso en Europa y Amrica del Norte se describen en esta seccin. Que van desde las bolsas de polietileno sencillos ya sea suspendido o apoyado por un cilindro de malla de acero revestido de plstico o acero galvanizado, con sofisticados turbidostatos electrnico y mando. Todos tienen la caracterstica comn de que la cultura est contenida en un cilindro alto y estrecho, siendo sta la configuracin ms eficiente. Cultura en la rectangular (Figura 22) o en tanques circulares con iluminacin superior es en gran parte obsoletos. La excepcin est en los criaderos, principalmente en la costa oeste de Amrica del Norte. Siguen utilizando grandes tanques circulares iluminados por alto rendimiento, lmparas de halogenuros metlicos. Mayor productividad se logra mediante el montaje de las luces de alumbrado interno en los cultivos (Figura 23) en lugar de externamente como un banco de lmparas fluorescentes.

3.4.1 Bolsa y las culturas del cilindro

El polietileno se puede comprar como grueso calibre, "lay-flat" tubera en diferentes anchuras y en rollos de longitud conveniente. Al cortar una longitud adecuada y termosellado un extremo un

recipiente estril, cultura flexible se pueden formar, ya sea como un cilindro o en una bolsa alargada. Los contenedores forman de esta manera se puede reforzar mediante el apoyo a ellos dentro de un marco de plstico o de plstico recubierto de malla de acero. Por otra parte, los cilindros pueden ser suspendidos, con o sin malla de sujecin lateral, si el dimetro de la bolsa es inferior a 30 cm y la altura a menos de 200 cm. Los ejemplos se muestran en la Figura 24.. Las bolsas son la forma menos costosa de la construccin de grandes barcos contenedores de cultura y como se puede utilizar en interiores con iluminacin artificial o al aire libre aprovechando la luz natural. Las bolsas se ilustra en la Figura 24A se forman a partir de las longitudes de 10 000 calibre, extra fuerte, 90 cm de ancho tubo de polietileno. Ellos son apoyados por soldados de malla y marcos de acero tienen una capacidad de 480 l con un gran rea de superficie de 3,2 m 2 para la penetracin de la luz. Grandes culturas de este tipo puede ser iluminado por montaje vertical de 1,8 m de largo, 80 lmparas fluorescentes W o puede estar situado al aire libre, fuera de la luz solar directa. Sistemas de bolsas de muestra en la Figura 24B y C se forman del mismo material pero con el apoyo de malla resistente, de plstico. En general, cuanto mayor sea el dimetro del recipiente de cultivo, menor es la densidad de las clulas de lo posible con un nivel fijo de iluminacin. Sin embargo, estas bolsas son superiores en la productividad de volumen similar de fibra de vidrio rectangular, o tanques de plstico a veces todava se utiliza para la cultura de masas. Son, sin embargo, ineficiente en comparacin con las culturas con iluminacin interna como puede verse en los datos de rendimiento en la tabla 7. Culturas bolsa de polietileno tiene una vida relativamente corta debido a que la superficie interna atrae la cultura basura y bacterias, que en conjunto reducen la penetracin de la luz y son una fuente de contaminacin. Al final de una cultura de ejecucin, es necesario renovar la bolsa. Bolsas de gran dimetro son ineficientes, pero los de dimetro inferior a 30 cm puede ser eficaz porque la superficie a la relacin de volumen de penetracin de la luz es mejor. Una solucin ms permanente para el mismo principio que se ofrece por la hoja de grado solar, fibra de vidrio transparente que se puede formar a un soldado del cilindro y el disolvente o adquiridos en forma cilndrica. Las cualidades de penetracin de la luz de este material es excelente y los barcos construidos son duraderos. Los cilindros que son de 150 a 240 cm de alto y 30 cm a 50 en dimetro se utilizan comnmente en el norte de criaderos Americanos (Figura 24D y E). Tabla 7: Comparacin entre rendimientos de Tetraselmis y Phaeodactylum de diversos sistemas de cultivo a gran escala. Rendimiento se calcula en litros por da a un estndar de densidad de las clulas por litro de volumen de cultivo. (* Los sistemas de iluminacin interna). Referencias citadas se dan en su totalidad en la lista de lecturas recomendadas al final de esta seccin. Especies / Sistema Tetraselmis 80 l * turbidostato 200 barcos de l * 340 tanques de l Phaeodactylum 200 barcos de l * 20 l frascos 480 bolsas de polietileno l 195 l cilindros Referencia Laing y Jones, 1988 Laing & Helm, 1981 Griffith et al ., 1973 Helm y Laing, 1981 Ukeles de 1973 Baynes et al ., 1979 Wisley y Purday de 1961 Rendimiento 1,25 ^ 0.40 0.12 0.35 0.33 0.15 0.06

* Un valor de rendimiento de 1,25 indica una cosecha promedio diario de 100 litros a una densidad estndar de clulas de un cultivo de 80 l de volumen.

3.4.2 culturas iluminacin interna

Iluminacin interna recipientes de cultivo son costosas de construir, pero barato de operar. Mediante el montaje de las lmparas dentro de un vaso o un cilindro de plstico transparente, como en la Figura 23, la distancia efectiva de la luz para penetrar en la cultura se reduce considerablemente. En el ejemplo mostrado, el recipiente de cultivo es de 150 cm de alto por 40 cm de dimetro. El cilindro montado en el interior la luz es de 15 cm de dimetro, por lo tanto, la energa lumnica emitida por el 6, 80 W, 150 lmparas fluorescentes cm de longitud recorre slo unos 14 cm en el permetro de la cultura. En un desarrollo posterior, esta distancia se redujo an ms en los buques ms pequeos de 80 l cultura y sin embargo, la productividad total de los mismos se logr que en 200 l culturas. La productividad (o rendimiento) se determina como el nmero total de clulas de algas cosechadas de una cultura cada da. Internamente iluminado culturas tienen una larga vida, algunos duran ms de 100 das con las especies ms resistentes. Cuando una cultura ha terminado, el barco se esteriliza mediante el llenado con 20 a 50 mg por l solucin de hipoclorito (cloro libre), dejndola reposar por lo menos durante una hora, antes de un lavado minucioso con la calidad de la cultura, el agua marina filtrada, despus de lo cual se drena y se re-encendido. Condiciones bsicas de la cultura son esencialmente los mismos que se describi anteriormente. La principal diferencia es en el tratamiento de agua para ser utilizado como medio de cultivo. Autoclave o sub-micras de filtracin es demasiado caro para los volmenes necesarios de gran tamao. Agua de mar filtrada a 1 o 2 micras de tamao de partcula por filtracin del cartucho es aceptable para algunas de las especies ms grandes unicelulares, por ejemplo, Tetraselmis y Skeletonema. De lo contrario, la pasteurizacin o la esterilizacin qumica se recomienda. El control de la salinidad y pH se requiere y, para obtener la mxima productividad, la intensidad de la iluminacin debe ser cuidadosamente calculada para el dimetro del recipiente de cultivo.

3.4.3 Principios del manejo de cultivo a gran escala

El objetivo en la gestin de la cultura es obtener el mayor rendimiento posible al da de las algas para que los sistemas de cultivo son operados de manera rentable. Este rendimiento debe ser sostenido por largos perodos de tiempo para mantener la produccin en laboratorio de los menores. Ineficaz gestin de la cultura de las algas influye en gran medida el potencial de produccin y en ltima instancia, el precio de venta de la semilla de bivalvos.

Figura 25: La relacin entre la productividad de un sistema de cultivo (rendimiento) y la entrada de energa de la luz. Ver explicacin en el texto. La operacin de semi-continuo, las culturas con iluminacin interna se tendrn en cuenta en esta seccin. Los principios generales son aplicables a cualquier centro de la cultura y en una escala de produccin. La relacin con el rendimiento bsico de entrada de energa de la luz se muestra en la Figura 25. El rendimiento se calcula como el nmero de litros de algas recolectadas por da en una densidad estndar de clulas por microlitro. El uso del trmino densidad estndar de clulas requiere una explicacin. Con el fin de comparar los rendimientos de diferentes especies en un sistema de cultivo, un factor comn a partir de biomasa peso seco de algas cosechadas se aplica. Las diferentes especies de algas varan mucho en las dimensiones lineales y de peso por clula, como ya se vio en el Cuadro 1. Conociendo el peso por clula, un nmero equivalente de clulas puede ser calculado para cada especie, para proporcionar una biomasa determinada. Para algunas de las especies importantes de este se aproxima a: 250 clulas de Chaetoceros calcitrans = 100 clulas de lsochrysis galbana = 60 clulas de Skeletonema costatum = 10 clulas de Tetraselmis suecica , sobre la base del peso seco. Por lo tanto, para Skeletonema y Tetraselmis las densidades de clulas estndar que se utiliza en el clculo del rendimiento de 6 000 y 1 000 clulas por microlitro, respectivamente (alternativamente, 6 millones y 1 milln de clulas por ml). Otro trmino que requiere explicacin es el concepto de densidad celular poscosecha(PHCD). PHCD = densidad celular por unidad de volumen (clulas por microlitro) inmediatamente despus de la cosecha diaria, y la sustitucin del volumen extrado con el medio de cultivo fresco. Se trata de la densidad celular (despus de la cosecha y la reposicin del volumen de cultivo con el nuevo medio) en relacin con la intensidad de luz que en gran parte determinar el crecimiento de la cultura en el siguiente perodo de 24 horas. Referencia a la figura 25 muestra que el rendimiento es mximo en el ptimo PHCD cuando la entrada de energa de la luz no es limitante. En valores PHCD debajo de la tasa ptima, la divisin celular (K), descrito por la ecuacin: (N t = clulas por microlitro en la cosecha) (N 0 = PHCD

est en su punto mximo, pero la densidad celular poscosecha es demasiado bajo para una mxima productividad. Por encima de la densidad celular poscosecha ptima, la luz se vuelve cada vez ms limitado debido al efecto de auto-sombreado de las clulas a la densidad de la cultura superior. Reduce la fotosntesis, por lo tanto, la tasa de divisin celular y la disminucin de los rendimientos diarios. El rendimiento es mximo a una intensidad de luz en particular y puede ser aumentado o disminuido mediante la alteracin de la entrada de energa de la luz.

Figura 26: El efecto de la intensidad de la luz sobre el rendimiento de la Tetraselmis en 200 l con iluminacin interna recipientes de cultivo. El efecto de la creciente intensidad de la luz en 200 l de culturas Tetraselmis al aumentar el nmero de lmparas fluorescentes de 80 W 4-8 se muestra en la Figura 26.Cuatro lmparas proporcionan una intensidad de iluminacin de 7,6 mW cm por 2 (7.6 milivatios por centmetro cuadrado que ofrece una intensidad de iluminacin de 28 000 lux) y ocho lmparas, 14,0 mW cm por 2 (52 000 lux). El mximo rendimiento, mayor de 67 l por da de 1 000 clulas por microlitro a 28 000 lux a 96 litros por da a la densidad celular mismo en la mayor intensidad de iluminacin. Las mejoras en la rentabilidad de una tasa de divisin celular acelerado y, debido a la entrada de energa de la luz mayor, las culturas pueden funcionar a una mayor densidad celular poscosecha. Los rendimientos de 8 y 6 unidades de lmparas son similares. Esto se debe a la saturacin de las culturas enfoque de la luz al ms alto nivel de iluminacin, por lo tanto, el rendimiento en relacin con el costo de la entrada extra de energa disminuye con 8 unidades de la lmpara. La influencia de la densidad celular poscosecha en la tasa de divisin celular (K) enTetraselmis en 200 culturas l se muestra en la Figura 27A. Aumentar el valor, en forma exponencial PHCD disminucin de los valores K, como la luz se hace cada vez ms limitado. Datos de la Figura 27B y C muestran que los valores de la disminucin de K, por lo tanto, el rendimiento disminuye al aumentar el pH y la salinidad. Esto pone de relieve la necesidad de controlar estos parmetros (a), de entrada el aumento de dixido de carbono en el caso de aumento del pH, y (b), diluyendo el medio de cultivo en caso de elevada salinidad. Dispositivos para controlar el pH mediante la variacin de la velocidad de entrada de dixido de carbono se encuentran disponibles en los proveedores de equipos de acuicultura.

Figura 27: Efectos de la A - la densidad celular poscosecha (PHCD) y B - pH en la tasa de divisin celular, y la influencia de la salinidad sobre la productividad de los cultivos deTetraselmis suecica C. Las tcnicas de cultivo que mejoren el rendimiento mximo tambin puede tener el efecto de alterar el tamao de las clulas a la cosecha (Figura 28). Con PHCD aumento y la aparicin de la limitacin de la luz, las clulas disminuyen de tamao medido como seco o peso orgnico. Sin embargo, dentro de los lmites normales de operacin de PHCD el efecto global sobre el rendimiento mximo, sobre una base de biomasa, es pequeo. El contenido de nutrientes del medio de cultivo tambin tiene un efecto importante sobre el rendimiento mximo alcanzable en los sistemas de cultivo a gran escala. Esto se muestra en la Figura 29, que proporciona datos sobre la cultura de la diatomea,Skeletonema costatum . Las diatomeas necesitan slice, que se presenta en forma de SiO 3-Si, para permitir el desarrollo de la frustrules silceas que encierran el citoplasma.Si la slice es limitante, el crecimiento celular y la disminucin de las tasas de divisin y disminuir los rendimientos. Esto se ve claramente en la comparacin de las 6, 80 unidades de lmparas fluorescentes de 30 W mg por l Si (figura 29A) y en 5 mg por l Si (figura 29C). Cultivos a 30 mg por l Si proporcionan un rendimiento mximo diario de 160 l (a partir de un volumen de cultivo de 200 l en 6 000 clulas por microlitro), mientras que a los 5 mg por l el rendimiento mximo fue de slo 74 l - menos de un 4 unidad de la lmpara al nivel ms alto de Si (Figura 29B). El rendimiento mximo (Figura 29) es considerablemente mayor que se puede obtener a partir de cultivos de manera eficiente funcionamiento de Tetraselmis y refleja los tipos de clulas mucho mayor divisin en consecuencia, la productividad alcanzable con diatomeas.

Figura 28: Relaciones entre la densidad celular poscosecha (PHCD) y el tamao de las clulas en trminos de peso y la productividad de los semi-continuo de la cultura deTetraselmis suecica .

3.4.4 automatizado a gran escala la cultura

Hasta ahora la discusin se ha centrado en los mtodos de cultivo semi-continuo.Aunque menos mano de obra que los sistemas de lotes cosechados, el componente de mano de obra en la operacin de un programa de recoleccin diaria sigue siendo relativamente alta. Como consecuencia de ello, es habitual para disminuir la velocidad de la cosecha a 48 h intervalos. Esto se logra mediante la operacin los cultivos a una menor densidad celular poscosecha. Sin embargo, el punto de mximo rendimiento se puede llegar en el intervalo de 48 horas, de modo que la limitacin de luz influir en la productividad general. La solucin es operar las culturas de forma continua, es decir, la cosecha continua. Esta solucin es posible, usando el control optoelectrnico de la densidad celular. Un diagrama de un sistema automatizado desarrollado y utilizado en la Laboratorio de Pesca de Conwy, Reino Unido se muestra en la Figura 30 aos.

Figura 29: Relaciones entre la densidad de clulas post-cosecha y el rendimiento en densidad estndar de clulas de Skeletonema costatum culturas operado semicontinua en dos intensidades de luz y las concentraciones de silicatos.

Figura 30: Esquema de un sistema de cultivo continuo ("turbidostato") (no est dibujado a escala). Clave : 1 , el depsito de agua de mar a medio (200 litros), 2 , bomba peristltica, 3 , rel de deteccin de la resistencia (50 a 5 000 ohms); 4 , la resistencia depende de la luz (ORP 12); 5 , filtro de cartucho (0,45 m), 6 , recipiente de cultivo (80 l de volumen), siete , seis, 80 lmparas fluorescentes W, 8 , depsito de recogida para recibir la cosecha ( 125 l de volumen). El componente clave de este sistema es una resistencia dependiente de luz (LDR) fijada a la superficie exterior de un recipiente de cultivo transparente. Luz que incide sobre la LDR despus de penetrar en la cultura vara dependiendo de la densidad de las clulas en la cultura. Iluminacin interna se utiliza, como en el semi-continuo, sistemas de gran escala se ha descrito anteriormente. Como la densidad celular aumenta la transmisin de la luz a travs de la cultura se reduce y esto aumenta el valor de la resistencia de la LDR. Este aumento es detectado por un rel de deteccin de la resistencia (RSR), que se fija para activar una bomba peristltica cuando un cierto valor preestablecido se alcanza la resistencia. La RSR se ajusta para funcionar a la intensidad de la luz en la que la divisin celular es mxima. Cuando se activa, la bomba peristltica suministra un nuevo medio al recipiente de cultivo y esto desplaza un volumen igual de la cultura en un recipiente receptor. A medida que la cultura en el vaso se convierte cada vez ms diluida, la transmisin de luz a travs de la cultura, detectado por el aumento de LDR, la resistencia de la LDR disminuye, y el RSR se apaga la bomba peristltica. Este aparato es barato de construir con la electrnica moderna y es muy eficaz en el mantenimiento de culturas con la mxima productividad. Los rendimientos de un sistema automtico, de 80 l para Isochrysis galbana (Clon T-Iso) y Tetraselmis son similares a los de la ms grande, 200 unidades de l funcionamiento semi-permanente. Un mximo rendimiento de Tetraselmis de cerca de 100 l por da a 1 000 clulas por microlitro es alcanzable por el funcionamiento del sistema automtico de alrededor de 2 000 clulas por microlitro. Los rendimientos de alrededor de 90 litros por da a 10 000 clulas por microlitro se han obtenido con lsochrysis que funciona a una densidad de cultivo de 16 000 clulas por microlitro. El principio de funcionamiento automtico no es nueva. Quimiostatos o turbidostatos con fuentes externas de luz a la produccin de especies de microalgas han sido descritos previamente. El sistema de Conwy descrito anteriormente es una versin actualizada y ms eficiente de este concepto. Sistemas de cultivo continuo sobre la base de forma vertical u horizontalmente dispuestas, las unidades de bolsa de polietileno estn disponibles comercialmente.

3.4.5 Solucin de problemas

Culturas dejar de crecer, llegar a ser excesivamente contaminados con microorganismos competidores o se estrellar, incluso en los criaderos mejor dirigidos.A continuacin se presentan algunos consejos para una comprobacin para determinar el origen de tales fallas.

1. Suministro de aire. Hay aire suficiente entrar en las culturas? Son las clulas que sedimenta en el fondo del recipiente de cultivo? Esto puede suceder cuando las diatomeas cultivo determinado, en cuyo caso debe ser el caudal de aire mayor. No debera suceder en el caso de los flagelados que se cultivan habitualmente. Si lo hace, entonces el problema es otro. 2. La temperatura. Compruebe min / max termmetro. Hubo algn aumento o disminucin de la temperatura de las instalaciones de cultivo de algas en las ltimas 24 horas? La mayora de las especies de algas que se cultivan habitualmente no pueden tolerar temperaturas superiores a 26 C durante largos perodos de tiempo - o temperaturas inferiores a 12 C. Las temperaturas en el rango de 18 a 22 C son ideales. 3. pH. Compruebe CO 2 de suministro. Es el CO 2 cilindro vaco? Verifique el pH de los cultivos de algas utilizando una sonda de pH. Es el pH muy alto (por encima de 8,5)? Es el pH demasiado bajo (por debajo de 7,5)? Ajustar el CO 2 la oferta en consecuencia. 4. Nutrientes. Revise los archivos para la ltima vez que los cultivos recibieron nutrientes.Esto es particularmente importante para los semi-continuo de culturas. 5. Contaminacin. Son las paredes del recipiente del cultivo, especialmente en la interfaz agua / aire, visiblemente espumosa o ensuciado con lo que parece ser detritus?Si es as, de la cultura se encuentra al final de su vida til y necesita ser reemplazada.Si ste es un problema constante en las primeras etapas del ciclo de cultivo con una especie en particular, a continuacin, compruebe los cultivos de partida en busca de signos de organismos contaminantes y reemplazarlos cuando sea necesario. No todas las especies se pueden cultivar con xito durante toda la temporada. Algunos tienen particular "ventanas de oportunidad" cuando se puede cultivar de forma fiable. Sin embargo, no hay coherencia entre los criaderos que cuando una especie se desarrolla bien el nombre o no. Esto tiene que ser aprendido de la experiencia sobre el terreno y pone de relieve la importancia de mantener registros exhaustivos.

3.4.6 extensa cultura al aire libre

Sistemas de cultivo intensivo, se ha descrito anteriormente, estn estrechamente controladas y de alta productividad, proporcionando alimento para las larvas, juveniles y reproductores pequea incubadora porttil. Una alternativa, especialmente adecuado para la provisin de alimentos para juveniles de mayor tamao, es la cultura extensa depsito al aire libre, que hace uso de la luz natural (Figura 31). Esto implica la fertilizacin de un gran volumen de agua de mar con los nutrientes bsicos necesarios para la produccin, es decir, nitrgeno, fsforo y slice en una forma u otra. Aqu, el objetivo no es necesariamente para inducir una floracin monoespecficas, pero un flagelado mixtas y la poblacin de diatomeas, con una densidad mayor de lo que normalmente ocurren en el mar. Es posible inducir floraciones monoespecficas de antes de fina (<2 de retencin de partculas micras) la filtracin del agua de mar incautado y la introduccin de un inoculo de las especies requeridas, siempre y cuando se es fuerte y vigoroso. El uso de agua de mar o aguas salobres convenientemente salada, extrada de los pozos tambin servir para este propsito. Sin embargo, es difcil mantener las flores tales durante largos perodos debido a que rpidamente se contaminan con otros microorganismos. Flores multiespecficas son ms fciles de manejar y se basan en el contenido de fitoplancton natural del agua de mar utilizada como inculo. Mientras que la composicin de las especies varan de una flor a otra, de acuerdo con las condiciones de la temporada y el medio ambiente, las algas

producen de esta manera es valor nutricional en menores de edad cada vez mayor y tambin para el mantenimiento de reproductores. En el Laboratorio de Pesca de Conwy, tanques de gran tamao, de hormign al aire libre que van en el volumen de 60 m 3 a 450 m 3 se han utilizado para la produccin extensiva de algas en apoyo de la cultura infantil de las semillas de bivalvos. Estos tanques se llenan con agua de mar de 28 a 32 PSU salinidad del estuario adyacente en aproximadamente 2 semanas de intervalo. En esta forma de cultivo, los abonos se aaden tres das antes de que el tanque se necesita para producir las algas como alimento para los bivalvos juveniles. La adicin de productos qumicos son los siguientes: Urea NH 2 CONH 2 (46% N) 1,50 g por m 3 Triple superfosfato P 2 O 5 (20% P) 1,56 g por m 3 Metasilicato de sodio Na 2 de SiO 3 .5 H 2 0 (13% Si) 10.60 g por m 3 Las concentraciones de NH 2 N es de 50 microgramos por tomos de l; PO 4 -P, 10 tomos de microgramos por litro y de SiO 3 -Si, 50 tomos de microgramos por l. Ms crudamente, la aplicacin de las aves de corral o estircol animal de 500 kg por hectrea para los tanques y los estanques de aproximadamente 1 m de profundidad pueden ser una fuente eficaz y menos costoso de los nutrientes. El ritmo de desarrollo de una flor se relaciona con la composicin de especies y la densidad inicial de algas en el agua de mar, duracin del da, de la cantidad de iluminacin incidental que cae sobre la superficie del agua, los niveles de nutrientes y la temperatura. El rea de superficie / volumen del tanque o estanque es importante.Tanques poco profundos y estanques de aproximadamente 1 m de profundidad son ms efectivas que las aguas ms profundas, que permita una mejor penetracin de la luz.Aireacin de los tanques o estanques es beneficioso para la produccin. La duracin de la floracin depende de una serie de factores relacionados con las especies de algas que se desarrollan en las condiciones imperantes y la velocidad a la que las algas son pastoreadas por los bivalvos. Por lo general, un brote de la densidad de tiles destinados a la alimentacin se puede mantener durante 7-10 das despus de la cual se drena el tanque, limpiar y volver a llenar con agua de mar fresca. La composicin de las especies de flores se pueden manipular en cierta medida, mediante la alteracin de los tipos de fertilizantes agregados. Por ejemplo, al omitir Si, las especies de flagelados puede dominar, porque el contenido natural de silicio del agua de las que dependen las diatomeas rpidamente se agotan. En tanques ms pequeos es posible inocular el agua fertilizada con las especies cultivadas en los sistemas de cultivo intensivo. Sea o no esta especie se convertir en dominante en la flor depende de las condiciones ambientales y la presencia o ausencia de especies que compiten. En general, el uso de la fertilizacin artificial de agua de mar embalsada es una tcnica valiosa en el cultivo de bivalvos, en particular en los sistemas de guardera para los menores. A menudo es posible mejorar la produccin de fitoplancton en un factor de 5 o ms en comparacin con las condiciones de mar abierto. El coste de los fertilizantes es pequeo por 1 000 litros de agua de mar en comparacin con los beneficios considerables en el aumento del valor comercial de los menores de ms rpido crecimiento.