1 www.biol.unlp.edu.ar/biologiavegetal/tp09-2011.

doc

http://es.scribd.com/doc/31502636/Alcaloides-TP-PDF

ALCALOIDES-TP N9 Biologa Vegetal 2011 Licenciatura en Biotecnologa y Biologa Molecular

OBJETIVOS Obtener y caracterizar alcaloides de origen vegetal Obtencin de nicotina: la nicotina es el principal alcaloide contenido en las hojas de tabaco (Nicotiana tabacum y N. rustica, pertenecientes a la familia de las Solanceas ) donde se encuentra en el orden del 2 a 8 % combinada en forma de sal con cido ctrico y cido mlico. Es un lquido oleoso muy higroscpico de color amarillo plido que se torna marrn por exposicin al aire y a la luz. Qumicamente deriva de la piridina. El objetivo ser extraer nicotina a partir de las hojas de tabaco trituradas contenidas en un cigarillo, detectar la presencia de la misma en el extractivo obtenido mediante las reacciones generales de alcaloides e identificarla a travs de cromatografa en placa fina utilizando una solucin de nicotina patrn como referencia. Material vegetal a emplear: hojas secas y picadas de tabaco (Nicotiana tabacum) contenidas en un cigarillo. Mtodo de extraccin: se utiliza el denominado mtodo de extraccin por va hmeda: colocar el tabaco contenido en un cigarillo en un erlenmeyer y agregar 30 ml de agua cida (HCl 2%), tapar y calentar a ebullicin en bao de mara durante 15 minutos. Filtrar por papel y recoger el filtrado en un erlenmeyer o tubo que debe taparse inmediatamente para evitar prdida de nicotina por evaporacin. Enfriar. Dividir el extractivo obtenido en 2 partes iguales: A y B y proseguir de la siguiente forma: A. Reacciones Generales Tomar alcuotas del filtrado correspondiente a la porcin A en tubos de Kahn y realizar las siguientes reacciones generales de alcaloides mediante el agregado de gotas de los reactivos que se nombran a continuacin: 1. Reactivo de Bouchardat (Iodo -ioduro de Potasio). 2. Reactivo de Mayer (Ioduro doble de Mercurio y Potasio). 3. Solucin de cido tnico al 5%. 4. Solucin de cido pcrico al 1-2%. En todos los casos se observan precipitados: de sales dobles (1 y 2 ), de tanatos del alcaloide (3) y de picrato del alcaloide (4).

B. Purificacin Alcalinizar la porcin A con NaOH al 10% hasta reaccin alcalina al papel de tornasol. Transvasar el filtrado alcalinizado a una ampolla de decantacin, agregar 10 ml de cloroformo y agitar suavemente para evitar emulsificacin. Dejar reposar hasta visualizar ntidamente dos fases, recoger la fase clorofrmica (inferior) que contendr el alcaloide en estado de base y desechar la fase acuosa. Identificacin por cromatografa Sembrar 4 gotas del extracto clorofrmico y 4 gotas de la solucin de nicotina patrn en placas finas de Silicagel G. Solvente de desarrollo: metanol: cloroformo (3:17) Revelado: Pulverizar con reactivo de Bouchardat La nicotina aparece como una mancha marrn sobre un fondo amarillento.