INTRODUCCION La modificacin deliberada de la informacin gentica de un organismo cambiando directamente el cido nucleico de su genoma se denomina ingeniera gentica, y se logra

mediante un conjunto de mtodos conocidos como tecnologa del DNA recombinante. La tecnologa del DNA recombinante abre reas totalmente nuevas de investigacin y de biologa aplicada, y constituye una parte esencial de la biotecnologa, que en la actualidad se encuentra en una fase de rpido crecimiento y desarrollo. El DNA recombinante es DNA con una secuencia nueva formada al unir fragmentos procedentes de dos o ms fuentes diferentes. Uno de los primeros avances que condujeron a la tecnologa del DNA recombinante (rDNA) fue el descubrimiento, por Werner Arber y Hallliltoll Smith, en los ltimos aos de la dcada de 1960 de enzimas microbianas que cortan el DNA de doble cadena (DNA bicatenario). Est.as enzimas reconocen y cortan secuencias especficas de una longitud de 4 a 8 pares de pases, y reciben el nombre de enzimas de restriccin o endonucleasas dc restriccin. En condiciones normales, protegen la clula husped destruyendo el DNA del fago tras su penetracin en la clula. Las clulas protegen su propio DNA de las enzimas de restriccin mediante la metilacin de nucletidos en los sitios que estas enzimas reconocen. Los tipos I y III cortan el DNA lejos de la secuencia de reconocimiento. Las endonucleasas de tipo II cortan el DNA en los sitios especficos que reconocen. Las enzimas de tipo TI se pueden utilizar para preparar fragmentos de DNA que contengan genes o porciones de genes especficos. Existen cuatro tipos principales de vectores: los plsmidos, los bacterifagos y otros virus, los csmidos y los cromosomas artificiales. Cada tipo tiene sus ventajas respecto a los dems. Los plsmidos son los de manejo ms sencillo; los fagos y otros virus que contienen DNA recombinante pueden almacenarse ms convenientemente durante perodos prolongados mientras que los csmidos y los cromosomas artificiales permiten clonar fragmentos ms largos de DNA. Adems de estos tipos principales, tambin existen vectores diseados para una funcin especfica. Los plsmidos de tipo pYe se reproducen tanto en levaduras como en E. col y pueden utilizarse para clonar genes de levadura en E. coli. Todos los vectores comparten una serie de caractersticas. Se trata tpicamente de pequeas molculas de DNA bien caracterizadas. Contienen al menos un origen de replicacin y son capaces de replicarse en el interior del husped apropiado, incluso cuando contienen DNA forneo. Finalmente, codifican un rasgo fenotpico que puede utilizarse para detectar su presencia; con frecuencia tambin es posible diferenciar los vectores parentales de los recombinantes.

DISCUSION De acuerdo a los resultados obtenidos de la tabla _______ se observa que en el cultivo del tubo nmero 1 de la mayora de los equipos hubo crecimiento bacteriano a excepcin de los equipos 5 y 6 que no obtuvieron crecimiento porque al sembrar no se dieron cuenta de que el medio era caldo Luria con ampicilina lo que es un antibitico y la bacteria o presenta resistencia. El cultivo del tubo 1 se realiz para saber si la bacteria era viable por lo que fue en tubo testigo de viabilidad En el cultivo del tubo nmero 2 en ningn equipo se present crecimiento bacteriano y eso era lo esperado, ya que la cepa es sensible a la Ampicilina. En los cultivos de los tubos nmero 3 y 4 se esperaba que hubiera crecimiento de colonias de color azul, la clula al estar en estado de competencia adquiere el DNA que est en el medio pero como este DNA es no recombinante, no lleva la insercin del gen de inters en el gen lacZ, por lo que la galactosa al interactuar con este gen, quita al represor para que se pueda llevar a cabo la sntesis de la enzima -galactosidasa y poder degradar la lactosa presente, pero en este experimento no se utiliz lactosa sino IPTG que es una molcula con una conformacin parecida a la lactosa logrando que de igual manera se pueda producir la enzima, y al encontrase con el X-gal, la -galactosidasa lo hidroliza a galactosa y 5-bromo-4-cloro-3-hidroxindol. Este ltimo es oxidado a 5,5'-dibromo-4,4'dicloro-ndigo, un compuesto azul insoluble. Cabe mencionar que para que se produjera la galactosidasa se llev a cabo una complementacin alfa, esto es, al usar la cepa que tiene una delecion denominada M15 que produce una forma truncada de la -galactosidasa, llamada fragmento , que es inactiva, la clula entonces al introducir el DNA, este material contiene la parte que le falta el denominado fragmento , los dos fragmentos puede reunirse y recomponer una forma activa de la -galactosidasa. De este modo, si X-gal y un inductor de la -galactosidasa, son disueltos en el medio de agar de una placa de cultivo, las colonias crecidas en la placa que posean un gen lacZ funcional podrn ser claramente distinguidas por su coloracin azul , teniendo en cuenta de que el crecimiento tambin se debe a que presentan la resistencia a la ampicilina conferida por el DNA TOPO. Como se denota en la tabla _____ en todos los equipos se obtuvieron colonias azules excepto en el equipo 3 que tal vez no pusieron la cantidad adecuada de X-gal y no se produjo el color azul, en en los equipos 5 y 6 que obtuvieron colonias blancas adems de las de color azul, esto se puede deber a que se produjo un efecto de satelitismo, ya que las colonias azules que si presentaban la enzima para inactivar el antibitico la pueden secretar y las clulas que eran sensibles a la ampicilina pudieron crecer en la periferia de la clula resistente. En los cultivos de los tubos nmero 5 y 6 el DNA que se adiciono al medio fue DNA TOPO ape, un DNA recombinante, DNA con insercin, por lo que lleva un DNA extra en el gen lacZ despus del fragmento de la enzima, haciendo que este gen sea ms grande, aunque de igual manera se realiz un complementacin alfa, al tener la clula una delecion M15, al momento de que el IPTG quita el

represor del opern de lactosa y al comenzar la transcripcin y despus la traduccin se produjo una enzima inactiva debido a los genes extra. De tal manera que se puede obtener crecimiento porque el plsmido introducido en la clula competente le confiri resistencia a la ampicilina y el medio Luria es un medio rico, por lo que la bacteria no necesariamente tuvo que degradar el X-gal presente.