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BioqumicaIApontamentos

adaptadoaPCporjisnunesdooriginalmanuscritodeInsCunha
(matriasat1Frequncia;paraa2frequnciaexiste umasebentaaPCde20082009)

A M II N O C II D O S AM NOC DOS
Os aminocidos so a unidade bsica das protenas. Apresentam um grupo amina e um grupo carboxlico, variando entre si devido composio do grupo R. Existem apenas 20 tipos de aminocidos nas protenas e denominam-se -aminocidos, j que o grupo amina est localizado adjacentemente ao carbono . O carbono dos aminocidos quiral, excepto para a glicina (aminocidos mais simples). Como tal, existem enantimeros L e D, quando o grupo amina estado lado esquerdo ou direito do carbono quiral, respectivamente. Nas protenas existe apenas L-aminocidos, contudo na natureza existem ambos os tipos.

excepo da glicina, os aminocidos so compostos opticamente activos, formando enantimeros. L-aminocido D-aminocido

Os aminocidos agrupam-se em 5 classes consoante a composio e a polaridade do grupo R: no polares alifticos, no polares aromticos, polares no carregados, polares carregados positivamente e polares carregados negativamente. No polares alifticos No polares aromticos

A tirosina resulta da hidroxilao da fenilalamina, pois diferem apenas por um grupo OH. Todos estes aminocidos tm anis aromticos que os incluem nesta classe, mas o triptofano contm ainda um anel indlico.

Polares no carregados O grupo dos aminocidos polares no carregados apresenta grupos polares como -OH, -SH, -NH2 (). O aminocido L-prolina tem a particularidade de ter o grupo amina incorporado num anel, chamando-se por isso iminocido. Este anel torna a prolina um aminocido rgido. Estes aminocidos foram ligaes de hidrognio, so mais solveis em gua e mais hidroflicos. Polares carregados positivamente A histidina contm um anel imidazlico. Pensa-se que h um equilbrio e a carga fica repartida. Da que apesar de no aparentar ter ionizao, na realidade tem e, como tal, inesperado no grupo dos aminocidos carregados positivamente.

Polares carregados negativamente Tanto o cido asprtico como o cido gutmico resultam da hidrlise cida da asparagina e da glutamina, respectivamente.

Particularidades do grupo R dos aminocidos As caractersticas dos grupos R dos aminocidos, nomeadamente o tamanho, a carga e a estrutura, condicionam as propriedades dos aminocidos que as contm. A cistena (Cys, C) por exemplo, apresenta no grupo R um por SH, que permite que este aminocido entre facilmente em reaces redox para originar num novo aminocido, chamado cistina.

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As pontes de enxofre so muito resistentes. Como o interior da clula um meio pouco agressivo, as protenas intracelulares no formam pontes de enxofre, mas protenas que vo ser transportadas para o meio extracelular tm que ser mais resistentes, j que vo para um meio agressivo. Assim, as protenas que se destinam a ir para fora da clula tm geralmente pontes de enxofre. Tanto a glicina (Gly, G) como a prolina (Pro, P) so aminocidos importantes na conformao das protenas, por razes totalmente opostas. A glicina um aminocido muito flexvel, enquanto que a prolina o aminocido mais rgido, estando no extremo oposto da glicina. Como j foi referido, a sua rigidez resulta da presena do grupo amina no anel. Depois de incorporados nas protenas, os aminocidos podem ser modificados. A isto se chamam modificaes ps-tradutrias. o caso da OHprolina (evidenciado ao lado), OH-lisina, entre outras. Alm dos 20 aminocidos das protenas, existem outros que no so encontrados nestas. Temos como exemplos a ornitina e a citrulina, aminocidos do ciclo da ureia.
OH-prolina

ornitina

citrulina

Os aminocidos aromticos (fenilalanina (Phe, F), tirosina banda (Tyr, UV e Y) e triptofano (Trp, W)) a apresentam determinados propriedades espectroscpicas, absorvendo radiao na emitindo fluorescncia comprimentos de onda () de radiao. Estas caractersticas so importantes para fazer a sua identificao. Resultam da presena de anis aromticos. Os de absoro variam com a polaridade do meio.

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Propriedades anfotricas dos aminocidos A pH neutro, os aminocidos em soluo existem na forma de zwitter-io (io dipolar), ou seja, a sua carga global 0. Em meios cidos fornece protes e adquire cargas positivas, enquanto que em meios bsicos aceita protes, ficando com cargas negativas. Conclui-se ento que os aminocidos so espcies anfotricas, o que nos permite traar curvas de titulao. Ponto isoelctrico ponto em que o aminocido tem carga elctrica 0. Corresponde forma de zwitter-io.

Regra geral, os aminocidos tm 2 pK pelo menos, correspondentes aos 2 estados de ionizao possveis. Alguns aminocidos tm mais estados de ionizao e, como tal, mais do que 2 pK. Para um aminocido com 2 pK, o ponto isoelctrico dado pela mdia aritmtica dos dois.

Quando esto presentes mais do que dois grupos ionizveis, inicia-se com a forma completamente protonada do aminocido (aa) e determina-se a carga. Retira-se o 1 proto, que obrigatoriamente o do grupo carboxlico (-COOH -COO-). Se o grupo R do aa for protonado, este proto o 2 a ser removido. Por fim, removido o proto do grupo -amina. Para o ponto isoelctrico entram os pK que ionizam a espcie zwitter-inica, os restantes so desprezados. A histidina o nico aa que no segue a norma das protonaes. Para este, o 1 a desprotonar o grupo R, depois o carboxlico e por fim o -amina. Exemplo: Determinar o ponto isoelctrico da lisina (Lys, K) pK1 = 2,2 pK2 = 8,9 pK3 = 10,5

(forma + protonada)

(zwitter-io)

Os pK que ionizam o zwitter-io so pK2 e pK3, logo o ponto isoelctrico : pK2 + pK3 = 2 8,9 + 10,5 2

pI =

= 9,7

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- Aminocidos no essenciais = aminocidos que conseguimos sintetizar. - Aminocidos essenciais = aminocidos que o nosso organismo incapaz de sintetizar por si. Como tal, para obt-los, temos que recorrer alimentao.
*A arginina (Arg, R) um aminocido essencial em jovens, mas no no adulto.

Ligao peptdica O grupo carboxlico de um aminocido e o grupo amina de outro podem reagir entre si atravs de uma reaco de condensao, com a perda de uma molcula de gua. Desta reaco forma-se uma ligao peptdica que une os 2 aminocidos. A reaco sempre de um grupo carboxlico do 1 aminocido para um grupo amina do 2 aminocido. nesta direco que a protena sintetizada. A ligao peptdica uma ligao covalente mas tem carcter de dupla ligao. Por este motivo, entra facilmente em ressonncia e uma ligao rgida.

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P R O T E N A S PROTE NAS
As protenas so polmeros formados por cadeias polipeptdicas cujas unidades funcionais so os aminocidos. Cada protena tem em mdia 200-500 aminocidos. Os aminocidos que compem uma protena chamam-se normalmente resduos. A massa molecular das protenas expressa-se em Daltons (1 aa 110 Da). A ordem pela qual os 20 aminocidos esto presentes numa protena determina a sua conformao tridimensional e esta, por sua vez, condiciona a funo da protena.

Nvel de organizao estrutural

1 Estrutura primria A estrutura primria resulta de ligaes peptdicas (covalentes) entre os vrios aminocidos. Como a ligao peptdica tem carcter de dupla ligao, ou seja, coplanar e rgida, reduz a mobilidade da cadeia. A forma trans da ligao mais frequente do que a forma cis, pois nesta h impedimentos estreos. A forma cis s mais estvel quando um dos aminocidos a prolina (Pro, P), devido sua rigidez. A liberdade rotacional da estrutura primria est condicionada pelos ngulos de toro ( e ).

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- Grficos de Ramachandran = grficos de em funo de que tm registado valores de ngulos de toro calculados teoricamente. Neste grfico surgem zonas escuras que correspondem aos ngulos mais provveis para os quais no existe impedimento estreo. Estes grficos tornam-se importantes quando queremos conhecer qual a estrutura secundria que a protena poder adquirir. 2 Estrutura secundria A estrutura secundria surge na protena regularmente e resulta das propriedades da ligao peptdica (ngulos de toro e caractersticas coplanares) e possveis interaces entre os tomos constituintes da cadeia polipeptdica. Existem 4 tipos de estruturas secundrias: hlices , hlices , voltas ou loops e random coil. Hlice As hlices so o tipo de estrutura secundria mais abundante e formam-se quando surgem aminocidos que permitem ngulos de -60 e de -50. As ligaes de hidrognio entre o grupo C=O de cada resduo de aa e grupo NH do 4 resduo de aa repetem-se periodicamente originando uma conformao helicoidal. Todos os resduos, excepto o primeiro e o ltimo, esto envolvidos em ligaes de H ou ligaes intracatenrias. Nesta conformao existem extremidades polares, cerca de 3-6 resduos por volta e os grupos R orientam-se para fora da hlice, o que provoca o aparecimento de interaces que podem estabilizar ou no a hlice. As pores mais hidroflicas voltam-se para fora, enquanto que as mais hidrofbicas voltam-se para dentro. Os aa mais provveis para o aparecimento desta estrutura so a Ala, Glu, Leu e Met, e os menos favorveis so a Pro, Gly, Tyr e Ser, visto interferirem com a estabilidade da hlice. As hlices podem enrolar para a direita ou para a esquerda, mas o enrolamento mais comum para a direita. Desta regra geral exceptuam-se as protenas fibrosas que tendem a enrolar para a esquerda. Cadeia Nas cadeias os ngulos de toro adquirem uma posio mais estendida, o que impede a formao de ligaes de hidrognio intracatenrias. Os ngulos de toro caractersticos desta estrutura so de -140 e de -130. Cada cadeia formada por 5-10 resduos de aminocidos. Os grupos R encontram-se orientados para fora da cadeia em direces opostas (no h interaces). As cadeias tm potencial para serem anfipticas (face polar e face apolar). Consoante a orientao das suas vrias cadeias polipeptdica, as cadeias podem apresentarse sobre folha antiparalela ou folha paralela. Nas antiparalela, as cadeias polipeptdicas dispe-se
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em sentidos contrrios, havendo formao de ligaes de hidrognio entre C=O e NH das diferentes cadeias, ligaes essas mais curtas do que na hlice . Nas paralelas, as cadeias polipeptdicas dispe-se na mesma direco, formando contudo ligaes de H mais longas, que so consequentemente mais fceis de quebrar. Em ambos os tipos de folha existe uma toro natural.

Voltas ou Loops Cerca de 1/3 dos resduos de uma protena constituem as voltas ou loops, que so estruturas que se caracterizam por alterar a direco da cadeia polipeptdica. Estas estruturas localizam-se superfcie das protenas e surgem em locais de reconhecimento de anticorpos (Acs), fosforilao, glicosilao, hidroxilao, (). Existem dois tipos de voltas ou loops: voltas e voltas .

- Voltas envolvem 4 aa e so responsveis pela ligao de duas folhas antiparalelas.


Apenas se estabelecem ligaes de H entre o grupo C=O do 1 aminocido e o grupo NH do 4 aa. Os aminocidos preferenciais das voltas so a Gly (pequena e flexvel) e a Pro (configurao favorvel). Existem voltas tipo I (4 Prolinas) e tipo II (uma Glicina 3 aa).

- Voltas so formadas apenas por 3 resduos de aa. As ligaes de H estabelecem-se entre o grupo C=O do 1 aa e o grupo NH do 3 aa. 3 Estrutura terciria A estrutura terciria uma conformao tridimensional resultante da associao das vrias unidades das estruturas secundrias. O tipo de associao que as unidades secundrias fazem entre si est dependente e muitas vezes provocada por interaces com o meio. Existem 2 tipos de estruturas tercirias: motivos e domnios.
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- Estruturas supra-secundrias ou motivos = combinaes de duas a quatro estruturas secundrias sucessivas, que contactam entre si com o arranjo geomtrico especfico. Podem ou no associar-se a uma funo particular. Ex: motivo hlice-loop-hlice, motivo gancho , motivo loop , motivo zinc-finger e motivo chave grega. - Domnios = estruturas locais compactas, semi-independentes, que resultam de agrupamento de vrias estruturas supra-secundrias ou motivos. Existem trs tipos de domnios: domnio (), domnio () e domnio ().

Domnio

Domnio

Domino

4 Estrutura Quaternria A estrutura quaternria resulta da associao de duas ou mais cadeias polipeptdicas (subunidades) entre si para formar a protena. Quando uma protena formada por uma nica subunidade, diz-se monomrica e no apresenta estrutura quaternria. Para protenas com 2 ou mais subunidades, a protena designa-se multimrica homomrica (tem as subunidades todas iguais) ou heteromrica (subunidades diferentes). De acordo com o eixo de simetria, a estrutura quaternria pode ser didrica (DN 2xn unidades idnticas em torno de um eixo rotacional), octadrica (O), tetradrica (T), icosadrica (I) ou helicoidal.

Ligaes existentes nas protenas A funo das vrias protenas est dependente do tipo de interaces existentes entre as diferentes partes das protenas, pois condicionam a sua conformao, dependendo tambm da relao que a protena tem com o meio (gua, sais, membranas, outras protenas, DNA, ()). Existem essencialmente dois tipos de ligaes:

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Ligaes no covalentes As ligaes no covalentes so interaces prximas e fracas, fundamentais porque a sua multiplicidade a fora motora necessria para estabilizar a estrutura ou arranjo espacial. Existem 3 tipos de ligaes no covalentes: - Interaces electrostticas = ligaes inicas entre grupos com cargas diferentes; ligaes de H que podem ser dentro da mesma cadeia polipeptdica, entre cadeias diferentes ou, ainda, envolvendo os tomos da ligao peptdica ou de alguns resduos e aa. - Foras de Van der Waals = quando 2 tomos no carregados se encontram na vizinhana um do outro e a sua nuvem elctrica influencia a outra. Leva criao de um dipolo transitrio fazendo com que os ncleos se aproximem um do outro. - Interaces hidrfobas = formam-se quando as molculas apolares se juntam para minimizar o contacto com a gua. A fora motora a alterao favorvel da entropia da gua que de outro modo estaria com um arranjo mais ordenado volta de cada molcula apolar. Ligaes covalentes = pontes de enxofre, isto , ligaes dissulfureto. Ex: Cys-Cys (forma a Cistina).

Classificao estrutural das protenas Protenas globulares A grande maioria das protenas pertence a este grupo. Possuem forma esfrica ou globular e contm vrios domnios. Apresentam folhas e hlices que se ligam entre si atravs das voltas ou loops. Regra geral, as protenas globulares apresentam um ncleo hidrofbico e uma superfcie hidroflica que as torna solveis em gua. Ex: albuminas (mais solveis e coagulam com o calor), globulinas (pouco solveis e coagulam facilmente), histonas, hemoglobina contm 4 cadeias polipeptdicas e 4 grupos heme. Cada cadeia contm 8 hlices e as cadeias so iguais duas a duas. Podem ligar-se a um O2). Protenas de membrana As protenas membranares no tm um domnio hidrofbico no interior, mas um domnio hidrofbico que fica em contacto com o interior dos fosfolpidos da membrana. Estas protenas so extremamente difceis de trabalhar sendo necessrio usar detergentes capazes de formar micelas volta dessas protenas.
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Protenas fibrosas As protenas fibrosas como o nome indica tm um arranjo de cadeia polipeptdica em fibra, sendo normalmente formadas por vrias cadeias enroladas. So molculas insolveis em gua. Ex: colagnio, -queratina, fibrona. 1 Colagnio = protena mais abundante no organismo, localiza-se em diferentes tecidos e apresenta funes ligeiramente distintas dentro de uma mesma funo global. formado por 3 cadeias helicoidais enroladas, unidas por ligaes de hidrognio. As cadeias so helicoidais mas no so modelos da hlice , apresentando uma abertura Maio e 3 resduos de aa por volta (repulso estrea dos anis de Pro). Os resduos de aa essenciais so a glicina (Gly) e a Prolina (pr), 35% Gly, 21%Pro, 11%Ala. A sequncia dos resduos de aminocidos na cadeia GlyXYGlyXY (), em que um dos X ou Y uma Prolina. Existem 3 resduos por volta e o enrolamento faz-se pela esquerda. Cada hlice enrola para a esquerda, mas depois o conjunto tem enrolamento para a direita. As fibrilhas de colagnio so estabilizadas por ligaes covalentes entre Lys e OH-Lys. 2 -queratina = caracterizadas por uma estrutura muito rgida. As queratinas designam-se -queratinas pois so formadas por hlices . Apesar de menos abundantes que o colagnio, as queratinas so muito importantes no organismo, sendo um dos constituintes do cabelo, unhas, (). As hlices de queratina so muito ricas nos aminocidos Ala, Val, Ile, Met e Phe. A estrutura da queratina estabilizada por ligaes covalentes (ligaes dissulfureto (S-S) e Cys-Cys). As 3 hlices enrolam-se para a direita formando uma protofibrilha, que posteriormente se arranjam em miofribrilhas. (o enrolamento de cada hlice para a direita, mas o enrolamento do conjunto para a esquerda).

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3 fibrona = a fibrona uma protena formada por folhas organizadas entre si formando camadas. A cadeia polipeptdica formada essencialmente pelos aminocidos Ala e Gly, na sequncia Gly-X-Gly-X (), em que X pode ser Ala ou Ser. A estrutura desta protena estabilizada por ligaes de hidrognio e interaces de Van der Waals.

Resumo das Classes e Caractersticas dos Aminocidos

Folding Proteico O folding proteico consiste na aquisio da estrutura tridimensional nativa da protena. No um processo aleatrio. Levinthal props uma teoria para o folding proteico, em que estimou que uma protena com 100 aa, em que cada um deles se adoptava duas conformaes espaciais, poderia ter 1030 conformaes diferentes. Contudo, sabendo que a ideia do universo apenas 1011, isto seria impossvel. Para ultrapassar este paradoxo julga-se que a natureza ter desenvolvido mtodos atravs dos quais o folding proteico adquirido rapidamente. Estados: desnaturado intermdio nativo Molten Globule Etapas do folding proteico: Formao secundrias Formao de domnios Patamar Molten Globule Estrutura proteica final Formao de pontes de enxofre
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reversvel

de

estruturas

In vivo, medida que as protenas so sintetizadas, o seu folding facilitado por protenas especializadas designadas por Chaperones Moleculares. Os chaperones moleculares interagem com as protenas recm-sintetizadas que possuem um folding parcial, proporcionando um ambiente prprio ao correcto folding, j que nem todas as protenas sofrem folding espontaneamente. Existem duas importantes classes de chaperones moleculares: - Famlia Hsp70 = protenas abundantes em clulas em choque por elevadas temperaturas (heat shock protein 70000 u). Liga-se regio rica em resduos hidrofbicos evitando que agreguem desadequadamente. Bloqueiam ainda o folding de protenas que ainda no atravessaram a membrana, j que s depois disso podem sofrer folding. - Chaperoninas = protenas complexas (Ex.: GroEL e GroES). O complexo GroEL liga-se s protenas e simultaneamente a hidrlise de uma molcula de ATP altera de conformao promovendo o folding da protena.

Funo proteica A funo das protenas interagir especificamente com outras molculas, alterando ou influenciado a sua actividade, nomeadamente outras protenas, cidos nucleares (controlo da replicao e expresso), polissacardeos (superfcie da membrana celular), lpidos (incorporados em membranas), pequenas molculas (O2, electres, ies) Ao interagirem com estas molculas, as protenas desempenham uma das 2 funes: estabelecimento de ligaes reversveis com outras molculas (ligandos), alterao conformacional (induced fit) que permite a ligao da protena ao ligando atravs de um stio de ligao complementar com a primeira em termos de tamanho, carga e caractersticas hidroflicas e hidrofbicas.

= stios ocupados pelo ligando [L] = concentrao de ligando

Quanto mais forte a ligao de uma de um ligando protena, menor a qualidade de ligando necessrio para que metade dos stios de ligao se encontrem ocupados.

Quanto menor Kd, maior Ka, logo ser necessrio menor [L] para ocupar metade dos stios de ligao. Kd a constante de dissociao. 13 | P g i n a d e 55

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Ex: a mioglobina uma protena de armazenamento logo tem Ka elevado e Kd baixo pois a tendncia manter-se associada s substncias que armazena. A hemoglobina uma protena de transporte, tendo ento baixo Ka e elevado Kd, pois ao chegar ao destino, necessita de se libertar rapidamente do produto que transporta.

Estados conformacionais Estado T (tense; desoxi-hemoglobina) Maior nmero de ligaes nas interfaces 12, estabilizadas pela ausncia de O2. As ligaes tornam a protena + compacta para a entrada de O2. Estado R (relaxed; oxi-hemoglobina) Maior afinidade para O2, sendo estabilizada quando este se liga.

Imunoglobina G A imunoglobina G uma protena em forma de Y formada por duas cadeias leves (L) e duas cadeias pesadas (H), ligadas entre si por pontes de enxofre e ligaes no covalentes. Na sua estrutura contm ainda domnios constantes, que so comuns a todas as imunoglobinas, e as pores variveis (V), que diferem de protena para protena. Os antignios (Ag) ligam-se ao Ac atravs dos aminocidos presentes no resduo varivel das cadeias H e L, contudo esta ligao especfica, dependendo da forma, localizao das cargas, hidrofobilidade e formao de ligaes de H. Ao ligar-se ao Ac, o Ag altera a conformao do primeiro (induced fit), sendo esta ligao extremamente forte, ou seja, elevado Ka e baixo valor de Kd.
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Patologias associadas ao folding proteico Alteraes na sequncia de aminocidos de determinada protena podem impedir que a mesma consiga adquirir o seu folding proteico correctamente, alterando a sua estabilidade funcional, ou seja, tornam-se mais susceptveis de sofrer agregao e/ou degradao. Como consequncia deste problema, podem surgir inmeras patologias: - Fibrose qustica = mutao e deleco de um aminocido (Phe) na protena CFTR (actua como canal de Cl-) originando um folding alterado que leva sua degradao antes de chegar ao destino (membrana). - Doena do prio = alterao estrutural da protena PrPSc (alterao gentica) que induz a formao de agregados e consequente deposio (vacuolizao) nas clulas neuronais. A protena referida um constituinte normal da membrana das clulas nervosas. - Doena de Alzheimer = surge com a deposio de amilide no crebro que resulta de uma alterao conformacional da protena na sua forma nativa para random coil. Consequentemente induz a deposio da substncia referida no crebro.

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E N Z II M A S ENZ MAS
Protenas com funo de catlise. Quando queremos aumentar a velocidade de uma reaco, adicionamos um catalisador que consegue acelerar a reaco mas sem ser consumido. Isto alcanado atravs do aumento da temperatura ( Energia vibracional e probabilidade de coliso) ou de concentrao dos reagentes. Contudo, em sistemas vivos, a [ ] de reagentes geralmente baixa e a impossibilidade de se aumentar a TC (visto que o seu aumento afecta estruturas biolgicas) trouxe a necessidade de existirem catalisadores biolgicos, nomeadamente as enzimas. Os biocatalisadores ou enzimas so ento substncias que aceleram as reaces qumicas (mesmo temperatura intracelular), diminuindo a sua energia de activao. As reaces so termodinamicamente favorveis (G0) e no decorrer da reaco a enzima no degradada.

Propriedades das enzimas 1. As velocidades das reaces catalisadas so muito elevadas. Ex: anidrase carbnica (( 107xs) 2. Ao contrrio dos catalisadores inorgnicos que actuam em muitas reaces diferentes, as enzimas catalisam apenas uma determinada reaco que envolve uma molcula especfica. Pode ento dizer-se que as enzimas apresentam especificidade, a qual pode ser de 2 tipos: absoluta ou relativa, como o caso das lipases. 3. As enzimas esto sujeitas a regulao da sua actividade.

Ligao enzima substrato As enzimas so molculas proteicas globulares, de grandes dimenses comparativamente maioria dos substratos. A configurao espacial de uma enzima comporta uma regio de ligao ao substrato o centro activo que complementar de todo ou apenas de parte do substrato. Uma enzima pode ter mais do que um centro activo. A interaco da molcula de enzima com o substrato d-se ento em zonas localizadas, o dito centro activo, que no mais que um conjunto de resduos de aa que participam assim directamente na catlise, atravs das suas cadeias laterais. Esta interaco pode ser de vrios tipos: Interaces inicas Ligaes de hidrognio
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Interaces de Van der Waals S alguns aminocidos participam no centro activo, no estando em sequncia na cadeia polipeptdica.
O complexo ES permite que o substrato seja completamente degradado, devido ao elevado poder cataltico da enzima. A enzima ao ligar-se ao substrato permite ainda reduzir a energia de activao necessria reaco, relativamente que teria se a reaco no fosse catalisada. Enzima Substrato Complexo enzima substrato Enzima Produto

Assim que se d a ligao enzima substrato, este ltimo activado, verificando-se imediatamente alteraes qumicas. Contudo, a ligao transitria, pois quando a reaco termina, formam-se os produtos e a enzima libertada intacta. Est ento pronta para intervir numa prxima reaco.

Modelos de ligao enzima substrato Modelo da chave na fechadura (Fisher, 1890) O centro activo da enzima rgido, da que o substrato tenha que ser perfeitamente complementar de modo a encaixar-se. Baseia-se portanto no princpio de que as estruturas so rgidas. Modelo da forma induzida (Koshland, 1959) Existe uma interaco mais dinmica entre a enzima e o substrato. Assim, o substrato ao ligar-se enzima induz uma mudana estrutural na mesma, de modo a que os aminocidos do centro activo se moldem, formando um centro activo complementar do substrato. Este modelo, baseado ento no princpio da flexibilidade estrutural, permitiu explicar a actividade de algumas enzimas que actuam sobre vrios substratos.

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Mecanismos catalticos: (Factores que contribuem para a catlise) 1. Proximidade do centro activo - Orientao do substrato (S) - Mudana conformacional na enzima - Distenso do complexo enzima substrato (ES) 2. Efeitos electrostticos - Centro activo anidro - Formao de dipolos entre o centro activo e o substrato 3. Catlise cido base - Protonao de grupos laterais de aa do centro activos 4. Catlise covalente - Grupos laterais nucleoflicos formam ligaes covalentes com S para dar ES

Classificao das enzimas

Nomenclatura / Classificao Sistemtica - Sufixo _ase Exemplos: glucose oxidase, glucose E fosfatase, urease, DNA polimerase, () - E. C. + 4 Algarismos: 1 Classe principal (transferase) 2 Subclasse (fosfotransferase) 3 Sub-subclasse (grupo aceitador de fosfato) 4 N de srie (molcula que tem o grupo OH.... 18 | P g i n a d e 55

Cintica enzimtica AP A = Substrato P = Produto

V = ( - [A] ) / t = [P] / t = velocidade da reaco k = constante de velocidade, depende do pH, TC e fora inica.

k . [A]
s^-1 M

M.s^-1

Inicialmente a velocidade da reaco aumenta linearmente, mas a partir de determinada altura todos os centros activos ficam ocupados. A, por mais que a concentrao de substrato aumente, a velocidade deixa de aumentar. Neste ponto diz-se estar em saturao enzimtica. - Ordem da reaco = soma dos expoentes das concentraes na equao de velocidade. - Tempo de semi-vida = tempo necessrio para que gaja consumo de de [A] (t1/2). A+BP A + H2O exc P V = k [A]1 [B]1 V = k [A]1 [H2O] V = k [A]0 reaco de 2 ordem reaco de pseudo-1 ordem reaco de ordem 0

- A velocidade da reaco s directamente proporcional a [S] quando [S] baixa reaco de 1 ordem. - Quando [S] elevada, a enzima fica saturada V de ordem 0 - Para [S] intermdias, a reaco tem ordem mista. Velocidade inicial (V0) = velocidade da reaco imediatamente aps a adio da enzima ao substrato. Assume-se que a reaco reversvel (P A) ainda no ocorreu. O estudo da cintica enzimtica (estudo quantitativo da catlise enzimtica) importante, pois permite-nos determinar parmetros como: velocidade da reaco, determinar a afinidade da enzima para o substrato (S) ou para o inibidor (I), perceber os mecanismos da reaco e as foras que regulam as vias metablicas.

Cintica de Michaelis-Menten Quando a quantidade de produto muito pequena, a reaco ocorre s no sentido directo.
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1. O equilbrio rapidamente estabelecido k1.[E].[S] = k2.[ES] 2. Condies do estado estacionrio: [ES] = muito baixo e constante; k1 = k3 Estado estacionrio:

A velocidade de dissociao de ES igual velocidade de formao do mesmo. KM = constante de Michaelis. um parmetro de [S] na qual a enzima trabalha a metade da velocidade mxima (Se [S] = KM). reflecte a afinidade da enzima para o substrato.

Equao de Michaelis Menten - KM muito alto k2 muito alto baixa afinidade entre a enzima e o substrato - KM muito baixo k1 muito alto elevada afinidade entre a enzima e o substrato Nota: quando k3 <<< k2/k1, KM = k1/k2 constante de dissociao de ES

Hiprbole rectangular com duas assimptotas.

Quando fazemos uma linearizao da equao de Michaelis Menten obtemos no uma hiprbole, mas uma recta (linearizao de Lineweaver Burck) que nos permite determinar com maior preciso KM e Vmx.

KM calcula-se pela interseco da recta com o eixo do X.

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Unidades de enzima: - Turn-over number (s-1) = n de moles de substrato convertido em produto por segundo, por mole de enzima. - Unidades internacionais (I.U.) = quantidade de enzima que produz 1 mol de produto por minuto. - Actividade especfica = unidades internacionais por mg de protena. - Ketal (kat) = quantidade de enzima que produz 1 mol de produto por segundo.

Factores que influenciam a actividade enzimtica Temperatura A temperatura um dos factores ambientais que influencia a actividade enzimtica. As baixas temperaturas inactivam as enzimas pois induzem a sua compactao, que dificulta a ligao ao substrato. Contudo, esta inactivao reversvel, pois no h destruio da enzima. medida que a temperatura aumenta, a velocidade da reaco tambm aumenta at um mximo que geralmente 37C. A partir daqui, a velocidade da reaco comea a diminuir. Isto acontece porque as elevadas temperaturas quebram as ligaes intramoleculares que mantm a estrutura do centro activo, impedindo a ligao ao substrato. TC energia vibracional coliso E+S; TC ptima = mxima eficincia de catlise. pH Os efeitos do pH variam consoante o tipo de enzima. O pH influencia o estado inico do centro activo. A pH ptimo (que consoante a enzima pode ser cido, bsico ou neutro), a enzima atinge a mxima eficincia da catlise. Contudo, quando o pH se afasta muito do valor ptimo, a enzima sofre desnaturao, tornando-se inactiva (alterao do centro activo, da estrutura terciria e ainda do substrato). pH ptimo = mxima eficincia da catlise.

Inibio enzimtica A actividade enzimtica pode ser afectada pela presena de molculas que funcionam como inibidores enzimticos. A inibio enzimtica pode ser de dois tipos:
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- Inibio reversvel = ligaes no covalentes que dependem de actividade de afinidade I/S/E. Competitiva = o inibidor liga-se ao centro activo da enzima No competitiva ou mista = o inibidor liga-se noutro local, alterando o centro activo Anti-competitiva ou incompetitiva = liga-se a formas alteradas da enzima (complexo ES).

- Irreversvel = ligaes covalentes [EI]. A enzima fica incapacitada para se ligar ao substrato. Uma inibio irreversvel ocorre por ligao ou por destruio de um grupo funcional da enzima e pela formao de ligaes covalentes ou no covalentes estveis. Inibio competitiva Ocorre quando um composto estruturalmente semelhante ao substrato, est em concentrao mais elevada que este e por isso liga-se ao centro activo da enzima impedindo a ligao do substrato. A inibio competitiva depende da relao entre a [I] e a [S], pois quando a concentrao do substrato aumenta, este vai competir cada vez mais pelo centro activo. A diminuio da afinidade de E para S provocada o aumento de Km. Vmx no se altera. Inibio no competitiva ou mista O inibidor no tem uma estrutura semelhante do substrato, e forma com a enzima um complexo enzima-inibidor (EI) num local da superfcie diferente do centro activo. Diz-se no competitiva porque o inibidor e o substrato no competem pelo mesmo espao. Deste modo, a enzima inactivada. Contudo, o inibidor tambm se pode ligar ao complexo enzimtico (ES), impedindo a formao dos produtos. Neste tipo de inibio, Km mantm-se constante e Vmx diminui.

Linearizao das equaes de

Michaelis Menten para inibies competitivas


e no competitivas.
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Inibio anti-competitiva ou incompetitiva Na inibio anti-competitiva ou incompetitiva, o inibidor no compete com o substrato, mas liga- se ao complexo enzimtico ES, impedindo a formao dos produtos. Neste tipo de inibio, Km diminui e Vmx tambm diminui.

Em suma:

Inibio Enzimtica

Competitiva Km ; Vmx cte. No-competitiva Km cte; Vmx . Anti-competitiva Km ; Vmx

Enzimas Alostricas As enzimas alostricas caracterizam-se por mudarem de configurao quando se liga um modulador. Para estas enzimas no se aplica a cintica de Michaelis-Menten e como tal, em vez de terem uma curva hiperblica para o grfico V = f ([S]) tm uma curva sigmoidal. - Enzima alostrica homotrpica = o modulador da enzima um metabolito diferente do substrato. As enzimas alostricas, cujas subunidades so os protmeros, contm stios alostricos ou reguladores e stios catalticos.

Algumas enzimas para exercerem actividade componentes adicionais, nomeadamente cofactores e coenzimas. a sua cataltica qumicos

requerem um ou mais

- Cofactores = so ies metlicos (Cu2+, Fe2+, Mg2+ e Mn2+), electroflicos, que orientam o substrato para o centro activo (polarizao) e participam em reaces redox.
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- Coenzimas = molculas orgnicas que se ligam temporariamente durante a catlise. Regra geral, as coenzimas derivam de vitaminas, funcionando ainda como transportadores dos grupos funcionais. Exemplos de coenzimas: NAD (nicotinamida adenina dinucletido): enzimas desidrogenases; reaces redox. FAD (Flavina adenina dinucletido): redox; enzimas desidrogenases, oxidases e hidrolases. ATP (Adenosina trifosfato): transferncia de grupo fosfato; enzimas fosfotransferases (cinases). Moeda energtica da clula, responsvel por reaces endergnicas: 1. Biossntese de biomolculas; 2. Transporte activo de substncias atravs de membranas celulares; 3. Trabalho mecnico (contraco muscular). Coenzima A (CoASH): participa no ciclo de Krebs.

- Um grupo prosttico uma coenzima ou io metlico (cofactor) fortemente ligado enzima. - A apoenzima ou apoprotena a molcula proteica propriamente dita. - Vitaminas so nutrientes orgnicos necessrios na dieta em muito pequenas quantidades.

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M E T A B O L II S M O METABOL SMO
O metabolismo consiste na soma de todas as reaces qumicas que ocorrem nas clulas e no organismo, muitas vezes por intermdio de uma grande quantidade de enzimas que catalisam essas reaces. O metabolismo engloba os processos: Catabolismo metabolismo fase em degradativa que do molculas

orgnicas (ex: protenas, hidratos de carbono, lpidos) so convertidas em produtos finais mais simples como CO2, NH3 A via catablica liberta energia, alguma da qual armazenada sob a forma de ATP ou dos transportadores de electres NADH, FADH e FADH2. A restante energia libertada sob a forma de calor. Anabolismo pode tambm chamar-se

processo de biossntese j que consiste


na sntese de molculas grandes e complexas como protenas, polissacardeos, lpidos, cidos nucleicos, a partir de micromolculas simples. As reaces anablicas requerem o fornecimento de energia, que geralmente obtida atravs da cedncia de um fosfato pelo ATP ou da formao de NAD+, FAD+. Todos os processos que ocorrem no metabolismo celular regulam-se pelas vias da termodinmica, nomeadamente a 1 Lei: a energia total do Universo constante; e a 2 Lei: em todos os processos naturais, a entropia do Universo aumenta. O metabolismo um processo espontneo e termodinamicamente favorvel, pois a energia dispendida na quebra de ligaes inferior gasta na formao de outras. Desta forma, o metabolismo um processo exergnico (G<0). G = G prod G reag = H + TS A+BC+D

As reaces metablicas so cumulativas, G = - RT ln k eq sendo Gtotal dado pela soma de G de cada reaco individual.

[C ][ D] G = G + RT ln [ A][ B]

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ATP adenosina trifosfato As clulas obtm energia livre a partir de nutrientes e usam-na para produzir ATP a partir de ADP e Pi (ATP + Pi ATP). Posteriormente, esta energia existente sob a forma de ATP doada a processos endergnicos como a sntese de macromolculas, transporte de substncias contra o gradiente de concentrao (). Para que isto acontea, o ATP participa nas reaces ATP fosfatos. A energia resultante da hidrlise do ATP substancialmente negativa (G<<0), da que geralmente esteja associado a um io Mg2+ (MgATP2-) pois os complexos de magnsio protegem parcialmente as cargas negativas, influenciando a conformao dos grupos fosfatos no ATP e ADP.

ADP + Pi ou ATP

AMP + 2Pi, em que liberta

O ATP pode ser obtido essencialmente a partir de dois processos, nomeadamente pela fosforilao ao nvel do substrato ou pela fosforilao oxidativa.

Transportadores de electres A reduo de transportadores de electres em processos catablicos, resulta na conservao de energia livre libertada pela oxidao de nutrientes. Alguns transportadores so o NAD+, NADP+, FMN e FAD. O seu poder transportador resulta do facto de estarem a ser constantemente oxidados e reduzidos. O NAD+ (nicotinamida adenina dinucletido na forma oxidada) e o NADP+ (nicotinamida adenina dinucletido fosfato) acertam um H- (equivalente a um proto e dois electres) transformandose na respectiva forma reduzida NADH e NADPH. O segundo proto libertado pelo substrato vai para o solvente. Assim sendo, temos as seguintes reaces: NAD+ + 2 + 2H+ NADH + H+ e NADP+ + 2 + 2H+ NADPH + H+ O sinal (+) em NAD+ e NADP+ no indicador da carga das molculas, pois ambas tm carga negativa, indicando ento que o anel nicotinamida est na forma oxidada. As flavoprotenas so enzimas que catalisam reaco redox usando FMN (flavina mononucletido) e FAD (flavina adenina dinucletido) como coenzimas. A forma reduzida destas coenzimas , respectivamente, FMNH2 e FADH2. Como estas coenzimas podem participar na

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transferncia de um ou dois electres, esta classe de transportadores est envolvida numa maior quantidade de reaces que o NAD+ e o NADP+.

RESPIIRAO CELULAR RESP RAO CELULAR


A respirao celular um processo que ocorre no citoplasma e na mitocndria das clulas e subdivide-se em 3 etapas: Gliclise (ocorre no citoplasma e uma etapa comum respirao e fermentao) Ciclo de Krebs (ou ciclo do cido ctrico; decorre na matriz mitocondrial) Fosforilao oxidativa (ocorre na membrana interna da mitocndria).

Gliclise A gliclise o mecanismo atravs do qual uma molcula de glicose degradada por um grande nmero de enzimas de forma a originar duas molculas de 3 carbonos, nomeadamente duas molculas de piruvato. Durante as vrias reaces que compem a gliclise, alguma energia livre presente na glicose conservada sob a forma de ATP e NADH. A gliclise comporta 2 fases: - Fase preparativa = primeira fase da gliclise em que a glicose convertida em gliceraldedo3-fosfato, molcula de 3 carbonos. Durante esta fase consomem-se 2ATP. - Fase payoff = segunda fase da gliclise. a fase em que h ganho de energia. Aqui o gliceraldedo-3-fosfato convertido em cido pirvico, com a produo de 4 molculas de ATP. Contudo, foram perdidas duas na 1 fase, logo o balano (+) 2ATP. A gliclise desenrola-se em 10 etapas, 5 em cada fase.

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1 Fosforilao da glicose A glicose fosforilada no carbono 6 pelo ATP, que convertido a ADP, e forma-se glicose-6-fosfato. Esta reaco catalisada pela enzima hexocinase.
As etapas reguladoras da gliclise so aquelas em que ocorrem reaces irreversveis controladas porcinases.

Reacoirreversvel!

2 Converso da glicose-6-fosfato a frutose-6fosfato A enzima fosfohexose ou fosfoglucose isomerase catalisa a isomerizao reversvel a glucose-6-fosfato (aldose) em frutose-6-fosfato (hexose).

3 Fosforilao da frutose-6-fosfato a frutose di ou bifosfato A enzima fosfoquinase-1 (PFR-1) catalisa a transferncia de um grupo fosfato de ATP para a frutose-6-fosfato, convertendo a frutose-1,6-bifosfato. Etapa mais importante da gliclise. Esta enzima inibida por elevados nveis de ATP e H+ no meio. 4 Clivagem da frutose-6-bifosfato A enzima aldolase (ou frutose 1,6-difosfato aldolase) catalisa uma reaco reversvel de condensao aldlica, em a frutose 1,6-bifosfato clivada em duas trioses fosfato diferentes, nomeadamente, a gliceraldedo-3-fosfato (uma aldose) e a dihidroxiacetona fosfato (uma cetose):

Reacoirreversvel!

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5 Interconverso das trioses fosfato Apenas o gliceraldedo-3-fosfato pode ser directamente degradado nas seguintes fases da gliclise. Da que, a dihidroxiacetona fosfato seja rapidamente e reversivelmente convertida a gliceraldedo-3-fosfato pela enzima triose fosfato isomerase. Esta reaco conclui a 1 fase da gliclise (fase preparativa). 6 Oxidao da gliceraldedo-3-fosfato A 1 etapa da fase payoff a oxidao de gliceraldedo-3-fosfati a 1,3-bifosfoglicerato, reaco esta catalisada pelo gliceraldedo-3-fosfato desidrogenase. Nesta reaco cedido um proto a um aceitador, o NAD+ que ento reduzido a NADH.

7 Desfosforilao do 1,3-bisfosfoglicerato A enzima fosfoglicerato quinase transfere um grupo fosfato altamente energtico da 1,3-bisfosfoglicerato para o ADP, com a formao de 3-fosfoglicerato e ATP. Esta reaco chamada fosforilao ao nvel do substrato, que juntamente com a fosforilao oxidativa uma das formas de sintetizar ATP. 8 Converso do 3-fosfoglicerato a 2-fosfoglicerato A enzima fosfoglicerato mutase catalisa a troca reversvel de um grupo fosfato entre C2 e C3 de glicerato. Para esta reaco ocorrer essencial a presena de Mg2+.

9 Desidratao do 2-fosfoglicerato a fosfoenolpiruvato A enzima enolase promove a remoo reversvel de uma molcula de gua de 2-fosfoglicerato, o que d origem ao fosfoenolpiruvato (PEP).

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10 Desfosforilao do fosfoenolpiruvato O ltimo passo da gliclise consiste na transferncia de um grupo fosfato do fosfoenolpiruvato reaco esta (PEP) catalisada para pela o ADP, piruvato

quinase, que requer K+ e Mg2+/Mn2+. No final da reaco obtemos piruvato ou cido pirvico. Mais uma vez esta transferncia corresponde a uma fosforilao ao nvel do substrato. Contudo, o piruvato obtido surge na forma enlica, mas rapidamente tautomeriza para a forma cetnica, forma esta que predomina a pH=7. Glicose + 2NAD+ + 2ATP + Pi 2piruvato + 2NADH + 2H+ + 2ATP + 2H2O Balano energtico da gliclise Durante a gliclise, alguma energia da glicose conservada em ATP, contudo a grande maioria fica armazenada no produto, as duas molculas de piruvato. Por cada molcula de glicose degradada, formam-se duas molculas de ATP. O balano global um conjunto de reaces espontneas e exergnicas j que Gglobal = -85 KJ.mol-1. A energia retida no produto posteriormente extrada por sucessivas reaces de oxidao no ciclo de Krebs e na fosforilao oxidativa. Todos os intermdios presentes entre a glicose e o piruvato esto fosforilados, o que extremamente importante. Uma das vantagens da fosforilao o facto de impedir a glicose, que j entrou na clula, de voltar a sair. Alm disso, os grupos fosfato so formas de conservao de energia metablica e ainda reduz a energia de activao necessria para a ocorrncia das reaces enzimticas.

Formao da acetil-coenzima A Antes de entrar no ciclo do cido ctrico ou ciclo de Krebs, as molculas de piruvato resultantes da gliclise tm que ser degradadas a acetil-CoA. Esta reaco catalisada pela enzima piruvato desidrogenase (PDH 1 ), que um complexo

Emanaerobiose,opiruvatonodacetilCoA,massimlactatoporaco dolactatodesidrogenase,ouetanolpelolcooldesidrogenase.

RegulaodaPDH:aenzimaPDHcinasefosforilaaPDH,desactivandoa. FuncionaentoemcasosemquehexcessodeacetilCoAeNADH. AenzimaPDHfosfatasedesfosforilaaPDHactivandoa.

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enzimtico localizado na mitocndria. Este complexo formado por 3 enzimas, nomeadamente piruvato desidrogenase (E1), dihidrolipoil transacetilase (E2) e dihidrolipoil desidrogenase (E3). A reaco de converso do piruvato a CO2 e

Reacoirreversvel!

acetil-CoA pode-se subdividir em 3 reaces, nomeadamente descarboxilao, oxidao e desidrogenao. Inicialmente o C1 do piruvato libertado em CO2. O CO2 oxidado a cido carboxlico, havendo a subsequente desidrogenao do grupo OH, permitindo a formao de acetilCoA. Nesta reaco forma-se NADH e um proto H+ cedido cadeia respiratria. Para que esta reaco ocorra necessria a presena de 5 coenzimas: TPP, FAD, coenzima A, NAD e lipoato.

Ciclo do cido ctrico ou de Krebs No ciclo de Krebs, a acetil-CoA formada

anteriormente vai sofrer sucessivas oxidaes. 1 A acetil-CoA cede o seu grupo acetil para o oxaloacetato (4C) com a formao de citrato (6C). Esta reaco catalisada pela enzima citrato sintetase.
O ciclo de Krebs importante porque a acetilCoA s passa atravs da membrana mitocondrial quando transformadaemcitrato.

InibidaATP,citrato,NADH

2 Aps ser formado, o citrato converte-se em isocitrato numa reaco catalisada pela enzima aconitase (ou aconitato hidratase) e que tem como intermdio o cis-aconitato.
Inibidaporfluoroacetato(provocaacumulaodecitrato

3 Por aco da citrato desidrogenase, o isocitrato desidrogenado e descarboxilado, com a formao de CO2 e -cetoglutarato (5carbonos). Forma-se NADH e H+.

Inibidaporniacina(NAD )eATP.EstimuladaporADPeCa .

2+

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4 O complexo enzimtico -cetoglutarato desidrogenase catalisa a converso do -cetoglutarato em succinil-CoA, com a libertao de mais uma molcula de CO2; NAD+ o aceitador de electres, ficando reduzido a NADH.
InibidaporsuccinilCoA,NADH.ActivadaporCa .
2+

5 Converso do succinil-CoA a succinato (4carbonos) pela enzima succinil-CoA sintetase. A quebra da ligao origina muita energia que usada na sntese de ATP ou GTP. 6 O succinato formado oxidado a fumarato (4carbonos) pela flavoprotena succinato desidrogenase. Esta enzima tem incorporado um FAD que reduzido durante esta reaco a FADH2. 7 Hidratao do fumarato a malato, catalisada pela enzima fumarase. Forma-se um estado de transio intermdia, um carbanio. Como a enzima estereospecfica, forma-se L-malato.
Inibidapormalonatoeoxaloacetato

8 Oxidao do malato a oxaloacetato catalisado pela enzima L-malato desidrogenase que tem acoplado um NAD+ que ento reduzido a NADH + H+. O oxaloacetato, composto por 4carbonos, o produto final do ciclo de Krebs.
Inibidaporniacina.

Durante o ciclo de Krebs formada apenas uma molcula de ATP. No final de cada ciclo, o oxaloacetato formado regenerado, podendo-se iniciar um novo ciclo. Apesar de o oxignio no ser usado directamente durante o ciclo de Krebs, este s se processa em aerobiose. O balano total do ciclo : acetil-CoA + 3NAD+ + FAD + ADP + Pi 2CO2 + 3NADH + 3H+ + FADH2 + ATP
Emcadacicloformamse12ATP: 1NADH3ATP,logo3NADH9ATP 1FADH22ATP 1GTP1ATP

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Fosforilao oxidativa A fosforilao oxidativa o mecanismo pelo qual a energia libertada na respirao celular, resultante da transferncia de electres ao longo da cadeira respiratria, usada na fosforilao de ADP, isto , na sntese de ATP. Nos eucariotas, a fosforilao oxidativa ocorre ao nvel da mitocndria e envolve a reduo de O2 a H2O associado transferncia de electres de NADH e FADH2. Em 1948 Kennedy e Lehninger descobriram que era na mitocndria que se processava a fosforilao oxidativa. A mitocndria formada por duas membranas. A membrana externa permevel a pequenas molculas e ies, que se movem livremente atravs dos canais transmembranares, as porinas. Pelo contrrio, a membrana interna impermevel maioria das pequenas molculas e ies, incluindo protes H+. As nicas substncias que atravessam esta membrana fazem-no atravs de transportadores especficos. Esta membrana comporta a maioria dos componentes da cadeira respiratria. A matriz mitocondrial, rodeada pela membrana interna, contm o complexo piruvato desidrogenase, as enzimas do ciclo de Krebs, enzimas da -oxidao dos cidos gordos, enzimas da oxidao dos aminocidos, entre outras.

Transportadores de electres A fosforilao oxidativa inicia-se com a entrada dos electres na cadeia respiratria. A maioria destes electres chega por aco das enzimas desidrogenases que captam electres das vias catablicas, catalisando-os para aceitadores universais de electres, as coenzimas NAD+ ou NADP+ e FMN ou FAD. A maioria das desidrogenases do catabolismo so NAD+ especficas e ao retirarem 2 protes aos seus substratos reduzem o NAD+ a NADH enquanto outro proto libertado sob a forma de H+ para o meio. Nem o NADH nem o NADPH conseguem atravessar a membrana, mas os electres que transportam podem passar directamente.

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Flavoprotenas: grupos prostticos FAD e FMN As flavoprotenas esto ligadas covalentemente a um nucletido flavina (FAD ou FMN) que pode aceitar 1 electro originando uma semiquinona ou podem aceitar 2electres, dando origem a outra forma reduzida, FMNH2 ou FADH2. Estes grupos prostticos compem alguns complexos que constituem a cadeia respiratria, nomeadamente o complexo I que tem FMN em grupo prosttico e o complexo II que tem o FAD.

Cadeia Respiratria A cadeira respiratria consiste numa srie de transportadores de electres, muitos deles integrados em protenas que actuam sequencialmente, aceitando e dando electres. Na cadeia respiratria existem 3 tipos de transferncia de electres, nomeadamente: 1. Transferncia directa de electres. Ex: Fe3+ Fe2+ 2. Transferncia sob a forma de tomo de H (H+, ) 3. Transferncia sob a forma de io hidreto (H-) que transporta 2electres. O termo equivalente redutor usa-se para designar um nico equivalente de electro transferido durante uma reaco oxidao-reduo. Alm dos transportadores de electres j referidos anteriormente (NAD+ e flavoprotenas), existem 3 outros tipos de molculas com funo transportadora na cadeia respiratria. So eles a ubiquinona ou coenzima Q, os citocromos e as protenas ferro-sulfurosas (Fe-S). Ubiquinona ou coenzima Q uma benzoquinona lipossolvel com uma cadeia lateral isoprenide longa (coenzima Q10). uma molcula pequena, hidrofbica, sendo ento capaz de se difundir atravs da bicamada fosfolipdica da membrana mitocondrial interna, podendo ento transportar equivalentes redutores entre transportadores menos mveis. O ponto de recolha de electres para esta protena a interface entre as flavoprotenas (dador de 2electres) e os citocromos (aceitadores de 1electro). A ubiquinona ao transportar dois electres parcialmente reduzida a ubiquinol (QH2) sendo posteriormente oxidada a nvel do complexo III. Citocromos Os citocromos so protenas que mudam de cor consoante esto no estado oxidado ou no estado reduzido, devido ao facto de terem uma forte absoro no visvel. Esta caracterstica est relacionada com os seus grupos prostticos heme contendo ferro.
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Na mitocndria podemos distinguir 3 tipos de citocromos: a, b e c. Distinguem-se pelas diferenas nos espectros de absoro. Dentro de cada subclasse, os vrios tipos de citocromos tambm se distinguem com base em pequenas diferenas espectrais. Cada tipo de citocromo no estado reduzido (Fe2+) tem 3 bandas de absoro no visvel, cujos (c.d.o ou comprimento de onda) permitem-nos distingui-los. 1 Citocromo a: tem o grupo heme fortemente ligado, mas no uma ligao covalente. Os citocromos a e a3 tm uma forma modificada do grupo heme, chamado heme A, no qual duas cadeias laterais esto modificadas. Heme A est associado a um grupo Cu que se localiza perto do Fe do heme. Os dois citocromos referidos tm formas idnticas de heme A, ligada mesma cadeia de citocromo, mas como esto em diferentes ambientes de membrana, tm diferentes potenciais de reduo. 2 Citocromo b: tal como todos os outros citocromos, o citocromo b capaz de transportar apenas 1 electro. Existem dois tipos de citocromos b, nomeadamente b562 e b566. Tm como grupo prosttico um grupo heme igual ao da hemoglobina e mioglobina, isto , o Fe est complexado com a protoporfirina IX. O grupo heme est fortemente ligado ao citocromo, contudo no uma ligao covalente. 3 Citocromo c: existem 2 tipos de citocromos c, nomeadamente c e c1. Ao contrrio do que acontece para os restantes citocromos, nestes o grupo heme est ligado covalentemente protena atravs da ligao tio-ster, entre duas cadeias laterais vizinhas e duas cistenas. O grupo heme do citocromo c localiza-se no exterior da membrana mitocondrial, no fazendo portanto parte do citocromo. Apenas est ligada a ele covalentemente. O citocromo c reduzido ao nvel do complexo III e move-se neste estado para o complexo IV. O citocromo c, semelhana da ubiquinona, mvel, circulando pela cadeia respiratria. Centros Fe-S Os centros Fe-S so protenas que contm ferro no heme associado a tomos de enxofre de resduos de aminocidos cistena (Cys) na protena. Todas estas protenas participam no transporte de um electro. Existem 4 formas de centros Fe-S. Durante a transferncia de electres ao longo de mitocndria, participam, pelo menos, oito centros Fe-S que so simultaneamente oxidados e reduzidos.
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Constituio da cadeia respiratria

Os electres esto da

transportadores cadeia em

de vrios

respiratria

organizados

complexos membranares que podem ser fisicamente separados entre si. No conjunto a cadeia tem 4 complexos, mas existe mais um 5 e ltimo complexo.

Complexo I Tambm designado por NADH desidrogenase ou NADH: ubiquinona oxiredutase uma grande enzima (43 subunidades), que contm acoplado os transportadores FMN e pelo menos 6 centros Fe-S. Este complexo tem forma de L, em que uma das pores est totalmente no interior da membrana mitocondrial enquanto a outra se prolonga para a matriz. O complexo I catalisa dois processos: transferncia (exergnica) de um proto NADH para a ubiquinona que reduzida a ubiquinol (QH2) e a transferncia endergnica de 4 protes H+ da matriz para o espao intermembranar. Esta ltima reaco vectorial, pois o movimento protnico sempre no mesmo sentido (da matriz que se torna negativa (N) quando os protes a abandonam, para um espao intermembranar positivo (P)). O ubiquinol formado s reoxidado mais frente, ao nvel do complexo III.

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Complexo II O complexo II, succinato desidrogenase ou succinato: ubiquinona oxidoredutase, uma protena hidrofbica e como tal localiza-se no interior da membrana mitocondrial. comum cadeia respiratria e ao ciclo de Krebs. Apesar de menor e mais simples que o complexo I, esta protena tem 4 subunidades, um grupo heme b (que evita a formao de radicais livres de oxignio), FAD, centros Fe-S, um local de ligao ao substrato (succinato) e um local de ligao da ubiquinona, que vai ser reduzida a ubiquinol e este ser reoxidado no complexo III. Neste complexo h a converso de succinato em fumarato (ciclo de Krebs).

Existem outros substratos dadores de electres, nomeadamente a oxidao de cidos gordos, o glicerol-3-fosfato pela aco da enzima glicerol-3-fosfato desidrogenase, todos eles contribuintes para a pool de QH2. Complexo III O complexo III ou complexo citocrmico bc1 ou ubiquinona: citocromo oxidoredutase , como o nome indica, o primeiro complexo que apresenta citocromos. Este complexo intervm na transferncia dos electres da do ubiquinol (QH2) para o citocromo c, com o transporte vectorial de protes da matriz para o espao intermembranar. Tendo em conta a estrutura do complexo III, foi proposto um modelo para a passagem de electres e protes. Este modelo designa-se ciclo Q. O ciclo Q evidencia a troca de 2 electres do ubiquinol para transportadores de um electro, nomeadamente citocromos b562 e b566, explicando como so transportados 2H+ (4H+ no total) por par de electres transferidos do complexo III para o citocromo c. No final o ubiquinol oxidado a ubiquinona e os citocromos so reduzidos. (2H+ passam para a soluo, 2H+ regeneram QH2).

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Complexo IV O complexo IV ou citocromo oxidase formado pelos citocromos a e a3 e 3 subunidades. O complexo IV de grandes dimenses e transporta electres do citocromo c para o O2 que consequentemente reduzido a H2O. medida que o oxignio vai sendo progressivamente reduzido electro a electro, os centros redox transportam 1 electro, mas sem a libertao de radicais livres para o exterior. A subunidade II formada por 2 tomos de Cu complexados com grupos SH de duas cistenas, enquanto a subunidade I contm 2 citocromos e um centro Cu que aceita electres e reduz O2 ligado a heme a3.

Modelo de acoplamento quimiosmtico O modelo de acoplamento quimiosmtico foi proposto por Peter Mitchell como forma de explicar o mecanismo que associa o fluxo protnico com a fosforilao. Desta forma, o acoplamento quimiosmtico traduz o processo atravs do qual a energia electroqumica resultante das diferentes concentraes de protes ao longo da membrana mitocondrial promove a sntese de ATP, medida que os protes fluem passivamente de volta matriz atravs de um poro protnico, associado aco da ATP sintetase.

Gradiente protnico A transferncia de electres ao longo da cadeia respiratria desde o NADH at ao O2 globalmente uma reaco muito exergnica. Muita desta energia usada no bombeamento de protes da matriz para o espao intermembranar. Por cada par de electres transferidos at ao O2, so bombeados 4H+ para o exterior pelo complexo I, 4H+ pelo complexo III e 2H+ pelo complexo IV. A diferena de concentraes protnicas na matriz e no espao intermembranar gera um gradiente electroqumico (H), isto , um gradiente de concentrao qumica (H+) que estabelece um potencial
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elctrico. Este gradiente electroqumico, com o nome de fora proto matriz, tem duas componentes: 1 . Potencial qumico (pH) = diferena de [H+] entre os 2 lados da membrana. 2 Potencial elctrico ou de membrana () = resulta da separao de cargas quando um proto H+ se move atravs da membrana como um contra-io.

Sntese de ATP Complexo V O complexo V ou ATP sintetase um grande complexo enzimtico localizado na membrana mitocondrial interna que catalisa a formao de ATP a partir de ADP e Pi, acompanhada de um fluxo de protes do espao intermembranar para a matriz. O complexo V formado por duas componentes distintas: 1 Domnio F1 = protena membranar perifrica que se projecta para dentro da matriz e que contm 9 subunidades: 3 subunidades e , 1 , , . As subunidades so responsveis pela catlise da reaco de sntese de ATP. As subunidades e dispem-se alternadamente em torno de um eixo central, a subunidade . 2 Domnio F0 = protena integral formada por 3 subunidades de 3 tipos diferentes, nomeadamente a, b e c. A subunidade a constitui um poro especfico para a passagem de H+. A subunidade b, formada por 2 subunidades, associa-se subunidade de F1 e mantm as subunidades e fixas relativamente membrana. A subunidade c pequena, hidrofbica, e liga-se ao eixo do domnio F1 pelas subunidades e . Tem forma cilndrica e ao rodar passagem de ies H+ pela subunidade a, provoca a rotao da subunidade de F1 que se liga a uma nova subunidade .

Mecanismo de catlise rotacional (P. Boyer) O complexo F1 tem 3 locais no equivalentes de ligao do ATP, um em cada par de subunidades . A determinado momento, um destes locais est na conformao -ATP (T, tight), uma segunda na conformao -ADP (L, loose) e uma terceira est na conformao -vazia (o, open). A fora proto matriz provoca a rotao da subunidade central () que vai ficando em contacto sucessivamente com as vrias subunidades . Consequentemente ocorre uma alterao conformacional cooperativa em que o local -ATP convertido em -vazia e o ATP dissocia-se. O local ADP convertido a-ATP que promove a condensao da ligao ADP e Pi para formar ATP enquanto que o local -vazio convertido a -ADP que se
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liga ao ADP, enquanto que Pi libertado para o solvente. O ATP no pode ser libertado de um local sem que ADP e Pi estejam ligados a outro. Uma rotao total corresponde a 120 e promove a formao de 3ATP e 9H+.

Balanodarespirao: Gliclise: 2ATP+2NADH =8ATP CiclodeKrebs: 6NDH+2FADH2+2GTP =24ATP AcetilcoA: 2NADH =6ATP ______________________________________________ 38ATP

Inibidores da fosforilao oxidativa Os inibidores da fosforilao oxidativa so usados geralmente na determinao da via de transferncia de electres atravs dos transportadores e as propriedades da fora proto matriz.

Existem substncias funo

ainda com

desacopladora, Nomeadamente dinitrofenol e o termogenina. o (DNP)

Regulao da fosforilao Oxidativa A fosforilao oxidativa o processo que produz a grande maioria de ATP produzido nas clulas em aerobiose. Pela via da NADH produz-se 2 a 3ATP por cada 2 electres transferidos, enquanto que pelo succinato produz-se 1 a 2 ATP por cada 2 electres. Na maioria das clulas aerbias o ATP est presente 4 a 10 vezes mais que o ADP. Numa situao de elevado consumo de ATP, o ADP aumenta e a respirao estimulada e acompanhada

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com o aumento de ATP sintetizado. Pelo contrrio, quando a clula est bem nutrida (ATP), o ADP diminui () assim como a sntese de ATP. O grfico d-nos a taxa de consumo de O2, ou seja a taxa de respirao celular. O controlo respiratrio ocorre pela limitao imposta sobre o transporte de electres pelo gradiente quimiosmtico. O estado III corresponde soma do consumo de O2 + ADP enquanto que o estado IV corresponde diferena entre o consumo de O2 ADP. O quociente entre estas variveis (b/c) corresponde ao estado de acoplamento mitocondrial.

Shuttle Malato/Aspartato O aspartato formas NADH matriz de shuttle malato/ das o e Este uma regenerar citoslico mitocondrial.

transport-lo

de volta

processo usado ao nvel do fgado, rins e corao. (1) NADH citoslico passa redutores oxaloacetato malato. atravessa interna (2) a 2 equivalentes para O o malato do produzindo membrana malato--

atravs

transportador

cetoglutamato. (3) Na matriz transfere os 2 equivalentes redutores ao NAD+ e o NADH formado oxidado pela cadeia respiratria. O oxaloacetato formado pela cedncia dos equivalentes no consegue passar directamente para o citosol. (4) ento transaminado a aspartato que (5) atravs do transportador glutamato-aspartato passa para o citosol. (6) O oxaloacetato regenerado no citosol completando o ciclo.

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Shuttle glicerol-3-fosfato Alguns rgos como o crebro e o msculoesqueltico no usam o shuttle malato/aspartato para regenerar o NADH mas sim o shuttle glicerol-3fosfato. No citosol, a dihidroxiacetona fosfato aceita 2 equivalentes redutores de NADH numa reaco catalisada fosfato pela desidrogenase face externa glicerol-3-fosfato da no membrana espao citoslica. Uma isozima da desidrogenase glicerol-3liga-se de mitocondrial interna e transfere os equivalentes redutores glicerol-3-fosfato intermembranar para a ubiquinona. Este shuttle no envolve a cadeia transportadora de electres, e tem menos rendimento ().

HIIDRATOS DE CARBONO H DRATOS DE CARBONO


Os hidratos de carbono so compostos formados por C, O e H e so a classe mais abundante de compostos na natureza, tanto animal como vegetal. Os hidratos de carbono so aldedos e cetonas poli-hidroxilados ou compostos que por hidrlise do origem aqueles compostos. Existem 3 grandes classes de hidratos de carbono: monossacardeos, oligossacardeos e polissacardeos. A frmula emprica da maioria dos hidratos de carbono Cn(H2O)n, podendo tambm aplicar-se a compostos diferentes dos glcidos. errado chamar a estes compostos hidratos de carbono ou acares (nome que advm da frmula), mas glcidos ou sacridos.

Funes desempenhadas pelos glcidos: Armazenamento de energia (ex: amigos e glicognio) Fontes de energia (ex: glucose) Intermedirios metablicos Elementos estruturais (ex: celulose) Constituintes do material gentico.

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Monossacardeos Os monossacardeos so os acares mais simples, formados por uma nica unidade polihidroxilada de aldose e cetose, tendo 2 ou mais grupos hidroxilo. O monossacardeo mais abundante na natureza a D-glucose (dextrose). Os monossacardeos so incolores, slidos cristalinos muito solveis em gua e com sabor doce. A maioria dos monossacardeos so cadeias carbonadas lineares com ligaes simples, excepto para o oxignio onde h uma ligao dupla. Quanto ao nmero de carbonos, os monossacardeos classificam-se em trioses (3C), tetraoses (4C), pentoses (5C), hexoses (6C), (). Quanto ao grupo funcional, os monossacardeos classificam-se em aldoses (quando o grupo carbonilo se localiza no final da cadeia carbonada) ou cetose (o grupo carbonilo est presente em qualquer posio da cadeia excepto nas extremidades).

Todos

os

monossacardeos,

excepo

da

dihidroxiacetona, contm um ou mais centros quirais, sendo portanto opticamente activos. Como tal, tm enantimeros que consoante a direco da rotao de plano de luz polarizado designam-se D ou L. O que determina se os hidratos de carbono esto na forma D ou L a orientao do grupo OH ligado ao carbono adjacente ao carbono terminal que contm o OH. Dois acares que diferem apenas na configurao de um nico carbono chamam-se epmeros. o caso da D-glucose e da D-manose, ou da D-glucose e da D-galactose. As cetoses e aldoses com 5 e 6 tomos de carbono caracterizam-se por formar estruturas cclicas, como resultado da reaco com lcoois formando derivados chamados acetais e hemiacetais que contm um carbono assimtrico adicional. Devido
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sua semelhana com os compostos pirano (

) e furano (

), os compostos cclicos de 5 e 6

carbonos so muitas vezes designados por piranoses ou furanoses. O processo de ciclizao de cetoses e aldoses de 5 e 6 carbonos ocorre por reaco do tomo de oxignio do grupo carboxilo e o grupo hidroxilo do penltimo tomo de carbono. Se o produto resultante tiver 6 carbonos, como se assemelha ao pirano chama-se piranose, mas se tiver 5 carbonos chama-se furanose. O processo de ciclizao ocorre principalmente em soluo. Formam-se 2 produtos, e que apesar de serem ismeros pticos no so enantimeros. Tomam a designao de anmeros pois diferem na orientao do grupo OH no carbono C1. Ex: glicose. Os produtos e podem interconverter-se por uma reaco de mutarotao. A glicose por outro processo de ciclizao pode originar uma furanose atravs de uma reaco entre o grupo carboxilo e o grupo hidroxilo do antepenltimo carbono. O carbono C2 que passa a ser o assimtrico ou anomrico.

Dglucofuranose

Dissacardeos Os dissacarardeos so acares como a maltose, lactose, (), formados a partir da condensao de dois monossacardeos cuja ligao que os une do tipo glicosdica, que resistente a meios bsicos mas hidrolisada em meios cidos. - Maltose = dissacardeo formado por 2 resduos de D-glucose ligados por uma ligao 1,4-glicosdica. Um resduo de glicose funciona como um hemiacetal ( o grupo OH do carbono anomrico que intervm na ligao) enquanto que o outro funciona como lcool. Como o grupo OH do carbono anomrico , a ligao tem uma orientao para baixo. Dizemos que a maltose um acar redutor pois o grupo OH do carbono anomrico da glicose que funciona como lcool est livre.

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- Lactose = o dissacardeo do leite, sendo formada por um resduo de galactose e outro de glucose ligados entre si por uma ligao -1,4-glicosdica. A galactose funciona como um hemiacetal ( o grupo OH de C1 que intervm na reaco) enquanto que a glucose funciona como um lcool ( o grupo OH de C4 que intervm na reaco). Como o grupo OH do carbono anomrico , a ligao tem uma orientao para cima. A lactose um dissacardeo redutor pois o OH do carbono anomrico est livre. hidrolisada por aco das enzimas lactases ou -glucosidases nas bactrias. - Sacarose = dissacardeo da glucose e frutose em que os monossacardeos esto ligados por uma ligao -1,2-glucosdica. Na ligao esto envolvidos os OH anomricos, isto , OH de C1 da glucose e OH de C2 da frutose. Como o grupo OH do carbono anomrico de glucose , a ligao tem uma orientao para baixo. Este dissacardeo no redutor. - Glicsidos = formados pela condensao de monossacardeos. So compostos formados a partir da condensao entre o grupo OH do carbono anomrico de um monossacardeo e um segundo composto que pode ser ou no outro monossacardeo.

Polissacardeos So polmeros de mdio a alto peso molecular que constituem a maioria dos acares existentes na natureza. Diferem entre si pela constituio, comprimento da cadeia, tipo de ligaes e grau de ramificao. 1 Homopolissacardeos = formados por um nico tipo de macromolculas, podendo a cadeia ser linear (os monossacardeos ligam-se entre si por ligaes glicosdicas) ou ramificada (enquanto que nas lineares as ligaes glicosdicas so nas posies 1,4, nas ramificadas so em 1,6). 2 Heteropolissacardeos = polissacardeos formados por mais do que um tipo de monmeros e que tal, como acontece para os homopolissacardeos, podem ter cadeia linear ou ramificada. Ex:glicognio(homopolissacardeo) O glicognio formado exclusivamente por resduos de glicose tendo uma cadeia ramificada e de elevado pesomolecular.noredutor.De8em8resduos,acadeiadeixadeserlinearepassaaramificadacomligaes1,6 glicosdicas.umpolissacardeodereserva(armazenamentodeenergia)nostecidosanimais.Umexcessodeglucose na dieta provoca aconverso da mesma em lpidos ou o seu armazenamento na forma de glicognio. Oglicognio permitenosobterATPduranteojejum.

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Metabolismo dos glcidos (ou glcidos)


Conjunto de reaces ininterruptas e contnuas que ocorrem durante os processos orgnicos de transformao da matria e energia.

Gluconeognese Quando as reservas de glucose esto a acabar, o organismo necessita de uma forma de a repor a partir de precursores diferentes dos hidratos de carbono. Nos animais, estes precursores da glucose so o lactato, piruvato, glicerol ou aminocidos. Este mecanismo chama-se gluconeognese e nos mamferos ocorre principalmente a nvel do fgado, que posteriormente transporta a glicose formada para todos os outros rgos atravs da corrente sangunea. A gluconeognese um processo oposto gliclise mas no completamente inverso da mesma, j que existem 3 reaces que no podem dar-se pelas mesmas enzimas que as usadas na gliclise. Contudo, a gluconeognese e a gliclise ocorrem maioritariamente no citosol e requerem coordenao e regulao mtua. 1 Converso do piruvato a PEP Inicialmente o piruvato transportado do citosol para a mitocndria ou gerado j na mitocndria a partir da alanina (transaminao). Posteriormente a enzima mitocondrial piruvato carboxilase (necessita da presena da coenzima biotina) converte o piruvato em oxaloacetato, pela reaco: Piruvato + HCO3- + ATP oxaloacetato + ADP + Pi Esta enzima necessita de acetil-CoA como efector. Como a membrana mitocondrial no tem transportador para o oxaloacetato, antes de o exportar para o citosol este ter que ser reduzido a malato, pela enzima malato desidrogenase, com gasto de NADH: Oxaloacetato + NADH + H+ L-malato + NAD+ O malato abandona a mitocndria atravs de um transportador especfico e no citosol reoxidado a oxaloacetato, com a produo de NADH: Malato + NAD+ oxaloacetato + NADH + H+
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O oxaloacetato converte-se ento em PEP pela enzima fosfoenolpiruvato carboxicinase. Esta reaco requer Mg2+ e GTP em dador de fosfato: Oxaloacetato + GTP PEP + CO2 + GDP Contudo, existe outra forma de transformar o piruvato em PEP, e isto acontece quando o piruvato produzido a partir do lactato no citosol dos hepatcitos. Esta reaco catalisada pela enzima lactato desidrogenase e produz-se tambm NADH e H+. O piruvato produzido e conduzido mitocndria onde convertido a oxaloacetato pela piruvato carboxilase. O oxaloacetato convertido directamente a PEP que por sua vez transportado para o citosol, de forma a continuar a gluconeognese. Piruvato + ATP + GTP + HCO3- PEP + ADP + GTP + Pi + CO2 2 Converso da frutose 1,6-bifosfato a frutose-6-fosfato Como esta reaco altamente exergnica e irreversvel, no pode ocorrer de forma inversa gliclise, necessitando pois da enzima Mg2+-dependente frutose-1,6-bifosfatase (FBPase-1) para promover a hidrlise do fosfato em C1. Frutose 1,6-bifosfato + H2O frutose-6-fosfato + Pi 3 Converso da glucose-6-fosfato em glucose A reaco de converso da glucose-6-fosfato a glucose no ocorre por uma hexocinase como na gliclise, mas pela enzima glicose-6-fosfatase. Esta reaco no requer sntese de ATP, sendo simplesmente a hidrlise de um fosfato. Glucose-6-fosfato + H2O glucose + Pi

Balano energtico da Gluconeognese = este processo energeticamente dispendioso, contudo muita da energia gasta necessria para assegurar a irreversibilidade de todo o processo. Por cada molcula de glucose formada, so necessrios 6 grupos fosfato provenientes de 4ATP e de 2GTP. So necessrias tambm 2NADH: 2piruvato + 4ATP + 2GTP + 2NADH + 2H+ + 4H2O glucose + 4ADP + 2GDP + 6Pi + 2NAD+

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Regulao da gliclise e da gluconeognese As 3 enzimas que catalisam as reaces irreversveis na gliclise so a hexocinase, a fosfofrutocinase-1 (PFK-1) e a piruvato cinase, enquanto que na gluconeognese h a destacar a frutose 1,6-bifosfatase, a piruvato carboxilase e a glucose-6-fosfatase. Hexocinase Inibida pela glicose-6-fosfato Inibida pela inibio de fosfofrutocinase ( glicose-6-fosfato) Fosfofrutocinase (PFK-1) Inibida pelo ATP (baixa a afinidade da enzima) Activada pelo AMP e Pi (logo ATP) Inibida pelo H+ (previne o excesso de lactato) Inibida pelo citrato (pra a gliclise e potencia o efeito do ATP) Activada pelo frutose 2,6-bisfosfato (regulada pelo AMPc) Piruvato cinase Activada pela frutose 2,6-bifosfato Activada pelo AMPc Inibida pelo ATP (indirectamente acetil-CoA e alanina) Frutose 1,6-bifosfato
(inverso da PFK-1)

Activada pelo ATP Inibida pelo AMPc Activada pelo citrato Inibida pelo frutose-1,6-bifosfato ( glicose)

Piruvato carboxilase Fosfoenolpiruvato carboxicinase FBPase 1

Activada pelo acetil-CoA Inibida pelo ADP Activada pelo acetil-CoA Inibida pelo ADP Inibida pelo AMPc Activada pelo ATP e citrato Inactivada pela frutose 2,6-bifosfato

Quando os nveis de glucose do sangue diminuem, o pncreas liberta a hormona glucagon que vai induzir o aumento da produo da glucose no fgado, seja atravs das reservas de glicognio ou atravs da gluconeognese. O glucagon vai aumentar a concentrao de AMPc que por sua vez activa as protenas cinases, inibindo a gliclise e activando a gluconeognese. Pelo contrrio, quando existem elevadas concentraes de glucose no sangue, o pncreas liberta insulina que vai induzir a reduo da glucose atravs do estmulo da gliclise e da inibio da gluconeognese. A insulina provoca a diminuio da concentrao de AMPc, que leva inactivao das protenas cinases, o que consequentemente activa a gliclise.
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- Glucagon = [AMPc] = activa as cinases = gliclise = gluconeognese - Insulina = [AMPc] = inactiva as cinases = gliclise = gluconeognese

Metabolismo do glicognio O glicognio um homopolissacardeo formado exclusivamente por resduos de glicose. Tem elevado peso molecular, forma ligaes -1,4-glicosdicas, caractersticas de cadeias lineares, e ligaes -1,6-glicosdicas, caractersticas de cadeias ramificadas. O glicognio um polissacardeo de armazenamento, constituindo uma reserva de glicose quando a concentrao desta no sangue baixa (ex: aps exerccio fsico forado). O glicognio armazenado principalmente ao nvel do msculo-esqueltico e do fgado. O mecanismo atravs do qual o glicognio degradado a glicose chama-se glicogenlise enquanto que o processo inverso (glucose glicognio) chama-se glicognese.

Glicogenlise A glicogenlise ocorre por aco de 3 enzimas: glicognio fosforilase, enzima que desramifica a cadeia e fosfoglucomutase. A 1 enzima referida necessita da presena da coenzima piridoxal-5fosfato. A primeira reaco consiste na remoo sequencial dos resduos glicosdicos, comeando na extremidade no redutora por ataque de um fosfato inorgnico. Esta reaco catalisada pela enzima fosforilase tem os produtos: Glicognio + Pi glucose-1-fosfato + glicognio + ADP
(n resduos) (n-1 resduos)

glucose-1-fosfato

formada,

por

aco

da

enzima

fosfoglucomutase, convertida em glucose-6-fsfato. Nesta forma, o produto pode ento entrar na gliclise. Glucose-1-fosfato glucose-6-fosfato

glicognio fosforilase enzima desramificadora fosfoglucomutase

Glicognese O dador de glucose na sntese do glicognio UDP-glucose (forma activada da glicose). O ponto de partida da glicognese a molcula glucose-6-fosfato que por aco da enzima fosfoglucomutase convertida em glicose-1-fosfato, que por sua vez vai ser convertida em UDPglucose pela enzima UDP-glucose pirofosforilase. Por aco da glicognio sintetase so adicionados
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resduos de glicose extremidade no redutora da 1 cadeia de glicognio em crescimento. Contudo, esta enzima no consegue criar as ligaes 16, necessitando ento de uma enzima ramificadora chamada glicosil-1,6-transferase. A ramificao s ocorre a uma distncia de 4 resduos de uma outra ramificao pr-existente. Nota:aglicogniosintetaseparaseractivadanecessitadeumprimer(glicogenina). Por fim, o ATP intervm para restituir o UTP a partir do UDP formado, que pode ento novamente no ciclo de sntese de glicognio.

Regulao da glicogenlise e da glicognese

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Via das Pentoses Fosfatos Tal como na gliclise, a via das pentoses um processo alternativo da oxidao da glucose, sem hidrlise ou sntese de ATP, utilizando a glucose-6-fosfato (glucose-6-P), o qual assim um metabolito intermedirio quer ao nvel da gliclise, quer ao nvel da via das pentoses. Uma das utilidades desta via prende-se com a manuteno da pool de NADPH, uma coenzima essencial em processos biossintticos (cidos gordos e riboses acares constituintes dos cidos nucleicos, como tal fundamentais na constituio do material gentico). Esta via est presente em todas as clulas, estando aumentada em clulas cujos processos biossintticos esto activos. Ao nvel dos Glbulos Vermelhos, o NADPH fundamental para que ocorra a manuteno do glutatio na sua forma reduzida, assim como ao nvel das gnadas, no processo de sntese de hormonas. Reaco Geral:

A via das pentoses inclui uma fase oxidativa em que existe a produo de 2 molculas de NADPH (em 2 passos consecutivos) e uma fase no oxidativa em que a ribose-5-fosfato em excesso vai ser utilizada para dar origem a vrios metabolitos. No fim regenerada a glucose-6-fosfato. Fase oxidativa da pentose:

A passagem a ribulose-5-fosfato para ribose-5-fosfato feita atravs de uma isomerase, uma vez que estes 2 compostos so ismeros: a ribulose uma cetose enquanto a ribose uma aldose.
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Na fase no oxidativa, a formao de vrios intermedirios faz-se por transferncia de tomos de carbono. Nesta transferncia intervm 2 tipos de enzimas; as transcetolases que transfere, 2 tomos de carbono e as transaldolases que transferem 3 tomos de carbono. Fase no oxidativa

Continuaodopasso 3

Vantagem desta via: no h consumo de ATP e forma-se NADPH e ribose.


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Degradao da Galactose Para alm da degradao directa da glucose (gliclise) j anteriormente referido, tambm necessrio considerar a degradao de outros dois monossacardeos importantes: a galactose (que figura na lactose) e a frutose.

Assim, a galactose, por aco da galactocinase e com gasto de uma molcula de ATP, fosforilada a galactose-1-fosfato; esta ir sofrer a aco da enzima uridiltransferase, que por sua vez vai permitir a entrada de UDP. Esta reaco composta importante porque ao mesmo tempo que introduz uma molcula de glucose que vai continuar o processo de metabolizao, retira uma mol de galactose, que ao sofrer a aco da enzima UDP-galactose-4-epimerase passa a glucose (uma vez que estas molculas so epmeras) esta mol de glucose vai ser de novo introduzida na degradao. Por meio destas reaces, a glucose-1-fosfato pode seguir 2 vias: ou transformada em glicognio (logo, armazenada) ou por aco de uma mutase origina glucose-6-fosfato; por sua vez esta poder passar directamente para o sangue ou entrar no ciclo da gliclise (uma vez que um dos intermdios desta). Relativamente s enzimas galactocinase e uridiltransferase, a sua presena essencial e a sua deficincia em certas patologias tem consequncias muito graves: na sua ausncia temos um aumento da galactose (j que no degradada) que vai passar a galactol. Este ltimo vai ento acumular-se nas crneas (podendo provocar cegueira) ou no fgado (provocando doenas hepticas). Para alm destes problemas, surgem tambm problemas a nvel energtico, j que a galactose uma fonte de energia que assim no vai ser utilizada. A soluo para estes problemas retirar a galactose da alimentao.

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Sntese da Galactose A galactose pode ser sintetizada a partir da UDP-Glu, de forma a originar no fim lactose (dissacardeo do leite, constitudo por galactose e glucose).

A lactose e a sua sntese so importantes na altura do aleitamento, j que o acar que figura no leite. A enzima lactose sintetase constituda por 2 subunidades: a galactosiltransferase (sempre presente no organismo) e a -lactalbumina (que s surge no organismo na altura do aleitamento.)

Metabolismo da Frutose

A aco da enzima aldolase B vai dar origem aos intermedirios da gliclise ou da gluconeognese: a dihidroactetona-fosfato e o D-gliceraldedo. A 1 pode ser convertida em glicose por enzimas da gluconeognese (caso as condies fisiolgicas assim o determinem), ou alternativamente em piruvato ou lactato, pelo ltimo estado da gliclise (da estar indicado gliclise no esquema).
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Relativamente ao gliceraldedo, por aco da triose cinase ele pode passar a gliceraldedo-3-fosfato que por sua vez por: Passar a dihidroxiacetona fosfato (j que so interconvertveis), formando-se assim mais uma mol desta que segue para os caminhos acima referidos; Ou passar a frutose-1,6-bifosfato caso seja necessria a sntese de glicognio (segundo o esquema em cima). Esta via tambm fonte de glucose para o sangue. Tambm nesta degradao, denominada futlise, algumas deficincias fisiolgicas podem causar problemas muito graves. Podem ocorrer 2 situaes: Intolerncia Hereditria Frutose: esta surge quando h um dfice da actividade da aldolase, que provoca a acumulao de frutose-1-fosfato, que inibe 2 enzimas, a glicognio fosforilase e a fosfoglucomutase, que so enzimas que intervm na sntese do glicognio, que fica assim inibido. Estas situaes causam doenas hepticas graves e hipoglicmia, podendo levar a coma. Dfice da actividade da frutocinase: esta leva apenas a um aumento da excreo da frutose na urina, sem consequncias graves. Estas patologias so raras e no caso da 1 muito graves, sendo apenas detectadas quando introduzida fruta na alimentao do beb. No h nestas reaces consumo nem hidrlise de ATP, dando-se em condies anaerbias, no citoplasma.

FIMda1partedamatria!
2ParteemsebentatambmaPCfeitapelo2anodoano20082009

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