La fosforilacin oxidativa es la transferencia de electrones de los equivalentes reducidos NADH y FADH, obtenidos en la gluclisis y en el ciclo de Krebs hasta el oxgeno

molecular, acoplado con la sntesis de ATP. Este proceso metablico est formado por un conjunto de enzimas complejas, ubicadas en la membrana interna de las mitocondrias, que catalizan varias reacciones de xido-reduccin, donde el oxgeno es el aceptor final de electrones y donde se forma finalmente agua. La fosforilacin oxidativa es un proceso bioqumico que ocurre en las clulas. Es el proceso metablico final (catabolismo) de la respiracin celular, tras la gluclisis y el ciclo del cido ctrico. De una molcula de glucosa se obtienen 38 molculas de ATP mediante la fosforilacin oxidativa. Dentro de las clulas, la fosforilacin oxidativa se produce en las membranas biolgicas. En procariotas es la membrana plasmtica y en eucariotas es la membrana interna de las dos de que consta la mitocondrial. El NADH y FADH2, molculas donadores de electrones que "fueron cargadas" durante el ciclo del cido ctrico, se utilizan en un mecanismo intrincado (que implica a numerosas enzimas como la NADH-Q reductasa, la citocromo c oxidasa y la citocromo reductasa), gracias a la bomba H+ que moviliza los protones contra un gradiante de membrana. La teora quimiosmotica establece que ambos procesos -(F.O y CTe-) estn acoplados energticamente. Por Ej, la Oligomicina se une a la Fraccin Fo de la Atpasa e inhibe la sntesis de ATP, por lo tanto detendr tambin a la cadena de transporte de electrones. Por lo tanto disminuir el consumo de O2. Hay sustancias que actuan como desacoplantes de estos dos procesos, para que puedan actuar de manera individual. Por ejemplo siguiendo con el caso anterior, si ahora se agregara 2,4-dinitrofenol, que es un cido dbil que acta como desacoplante, el consumo de O2 se reestablecera, ya que tender a liberar la cadena de transporte de electrones, aunque la oligomicina continue bloqueando la produccin de ATP. La fraccin Fo est formada por proteinas transmembrana en la membrana mitocondrial interna (MMI), y es bsicamente un poro que permite el paso de H+. La fraccin F1 se encuentra del lado interno de la MMI y es la encargada de utilizar la disipacin del gradiente electroqumico para fosforilar ADP + Pi y liberar ATP. Los nucletidos entran y salen de la mitocondria a travs de transportadores especficos. Un gran complejo proteico llamado ATP-sintasa situado en la membrana mitocondrial interna (MMI), permite a los protones pasar a travs en ambas direcciones; genera el ATP cuando el protn se mueve a favor de gradiente. Debido a que los protones se han bombeado al espacio intermembranoso de la mitocondria en contra de gradiente, ahora pueden fluir nuevamente dentro de la matriz mitocondrial y mediante la va ATP-sintasa, se genera ATP en el proceso. La reaccin es:

ADP3- + H+ + Pi ATP4- + H2O Cada molcula de NADH contribuye suficientemente a generar la fuerza motriz de un protn que produzca 2,5 molculas de ATP. Cada molcula de FADH2 produce 1,5 molculas de ATP.[1] Todas juntas, las 10 molculas de NADH y las 2 FADH2 provenientes de la oxidacin de la glucosa (gluclisis, descarboxilacin oxidativa de piruvato en acetil-CoA y ciclo de Krebs) a formar 28 de las 36 molculas totales de ATP transportadoras de energa. Hay que decir que estos valores de molculas de ATP son mximos. En realidad cada molcula de NADH contribuye a formar entre 2 y 3 molculas de ATP, mientras que cada FADH2 contribuye a un mximo de 2 molculas de ATP. http://lucero-bioqumica.blogspot.com/2009/04/fosforilacion-oxidativa.html

Fosforilacion Oxidativa - Presentation Transcript 1. Cadenas de Tansporte Electrnico Mitocondrial y Fotosinttica Tema 7 Bioqumica gD Tema 7 (UVEG) 2. Resumen del Tema Oxidaciones biolgicas Fotosntesis Caractersticas de la El cloroplasto de los mitocondria organismos fotosintticos eucariotas Reacciones redox Pigmentos fotosintticos Oxidacin de sustratos y Pigmentos principales y transferencia de electrones accesorios, complejos LHC a la cadena de transporte electrnico mitocondrial Organizacin y funcionamiento de la cadena de transporte Componentes de la cadena electrnico fotosinttica de transporte electrnico PSII, OEC, Citb6f, PC, PSI, Fd, mitocondrial FNR Sntesis acoplada de ATP Cadena electrnica Razn P/O mitocondrial y fotosinttica Balance de la fotofosforilacin Inhibidores y (no cclica) desacopladores del Bioqumica gD Tema 7 (UVEG) Fotofosforilacin cclica transporte electrnico 2 3. Oxidaciones Biolgicas Los organismos aerobios requieren oxgeno para su supervivencia Un proceso de oxidacin Para que oxidaciones sigan directo hay que regenerar NAD+ AH2 + 1/2 O2 A + H2O A) Con otro sustrato oxidado no se da en general en X (ox) + NADH (red) + H+ sistemas biolgicos el O2 no actua como aceptor primario de electrones XH2 (red) + NAD+(ox) En las clulas como en determinadas condiciones (anaerobias) aceptores primarios de B) A travs de la cadena de electrones actan otras transporte electrnico (cadena molculas, NAD+ respiratoria) donde sistemas (nicotinamida adenina redox permiten transferir dinucletido) electrones desde NADH hasta Bioqumica gD Tema 7 (UVEG) Los sustratos que tienen que el ltimo aceptor (O2) con oxidarse lo hacen con el produccin concomitante de NAD+ ATP AH2 + NAD+ A + NADH + H+ 3 4. Cadena Respiratoria y Fosforilacin Oxidativa La cadena de transporte electrnico es la ltima H+ etapa del proceso ATP oxidativo ATP sintasa Glucosa H+ Coenzimas c.t.e. fuente de O oxidados X actividades celulares, I 10 NAD+ H+ la energa que se 2 [FAD] D 24e-+24H+ 24e- H+ libera se conserva como energa de A 10 NADH+H+ H+ enlace qumico en el C 2 [FADH2] Flujo de ATP I Coenzimas e- exergnico O2 reducidos Energa libre N Bioqumica gD Tema 7 (UVEG) H2O CO2 Garca Ferris Cadena de transporte electrnico 4 5. Caractersticas de la Mitocondria En eucariotas, la cadena de transporte electrnico y la Matriz Crestas Membrana Membrana interna externa fosforilacin oxidativa se localizan en la membrana interna de la mitocondria Impermeabilidad a iones y molculas (incluidos los H+) Espacio intermembrana Contiene los complejos I-IV, Purves ATP sintasa (complejo V), orientada hacia la

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matriz, ATP-ADP translocasa y otras protenas transportadoras Bioqumica gD Tema 7 (UVEG) En el espacio intermembrana se acumulan los H+ bombeados por la cadena Voet 5 Reacciones Redox La cadena de transporte electrnico es una sucesin de reacciones Ared Box redox (oxidorreduccin) (dador o (aceptor agente o agente Los electrones (e-) pasan reductor) oxidante) de un compuesto Ared (dador electrnico) a un compuesto Box (aceptor electrnico) El dador (compuesto con tendencia a ceder e-) se Aox Bred oxida Aox y el aceptor (compuesto con Bioqumica gD Tema 7 (UVEG) Purves tendencia a ganar e-) se reduce Bred 6 Potencial de Reduccin Estndar, Eo Toda reaccin redox El potencial redox es la puede dividirse en dos tendencia que tiene un semirreacciones, cada par redox a ceder o una correspondiente a un captar e-, expresndose par redox como Eo en condiciones Ared Aox + neestndar bioqumicas Box + ne- Bred Los potenciales redox se ________________________ miden frente al par 1/2H2/H+(valor cero) Ared + Box Aox + Bred Bioqumica gD Tema 7 (UVEG) 7 Energa Libre en Reacciones Redox El par con potencial Al transferirse electrones redox ms negativo es se puede liberar energa el reductor ms Eo = Eo(aceptor) - Eo(dador) potente mientras que y Go = - nF Eo el par redox con (n= nmero de electrones transferidos) potencial ms positivo Go <0 (flujo favorable) es el oxidante ms cuando Eo >0 fuerte El flujo favorable de e- En condiciones no ser siempre del par con estndard menor Eo al par con o' RT [aceptor e - ] mayor Eo E=E + ln Bioqumica gD Tema 7 (UVEG) nF [dador e - ] Eo Eo Par dador de e- Par aceptor de e- 8 ! Transferencia de Electrones desde el NADH al Oxgeno NADH + H+ + 1/2 O2 NAD+ + H2O Esta reaccin es suma de dos semirreacciones NADH + H+ NAD+ + 2H+ + 2e- (par dador de e-) 1/2 O2 + 2H+ + 2e- H2O (par aceptor de e-) El potencial Eo para cada par redox (correspondiente a la semireaccin oxidante + ne- reductor) es NAD+ + 2H+ + 2e- NADH + H+ Eo = -0.32 v 1/2 O2 + 2H+ + 2e- H2O Eo = +0.82 v Eo = 0.82 -(-0.32) = 1.14 v Termodinmicamente Bioqumica gD Tema 7 (UVEG) Go = - (2) x 96.48 x 1.14 = -220 kJ.mol-1 favorable El enzima responsable de la oxidacin del NADH no es uno sino varios, los e- se transfieren hasta el O2 en etapas sucesivas componentes de la cadena de transporte electrnico- 9 Oxidacin de Sustratos y Transferencia de Electrones Electrones que provienen de la degradacin de hidratos de carbono, lpidos y aminocidos son transferidos a la cadena de transporte electrnico glucosa piruvato acetil-CoA 2H 2H ciclo del 2H cido ctrico cidos grasos 2H 2H 2H 2H 2H aminocidos 2H 2H 2H 1/2 O2 NAD+ FMN UQ cit b cit c1 cit c cit aa3 Cadena transporte electrnico H2O Bioqumica gD Tema 7 (UVEG) Enzimas relacionadas con procesos redox oxidorreductasas- no poseen grupos funcionales capaces de actuar como sumidero de e-, por tanto requieren cofactores orgnicos (nucletidos de piridina, nucletidos de flavina, grupos hemo) y/o metales de transicin activos (Fe, Cu, Mo) 10 Deshidrogenasas Dependientes de NAD+ Catalizan la reaccin general AH2 + NAD+ A + NADH + H+ Presentan estereoespecificidad A B La parte activa es el anillo de nicotinamida Lehninger Bioqumica gD Tema 7 (UVEG) Wavelength (nm) 11 Deshidrogenasas Dependientes de FAD Catalizan la reaccin general AH2 + E.FAD A + E.FADH2 La parte activa es el anillo de isoalloxacina, acepta 2e- y 2H del sustrato de uno en uno para FMN formar FADH2 FMN es un componente de la cadena de transporte electrnico mitocondrial, nunca interviene como oxidante directo, acta Bioqumica gD Tema 7 (UVEG) unido a la enzima Eo depende del entorno Lehninger 12 Componentes de la Cadena Electrnica Mitocondrial Protenas ferrosulfuradas El tomo de hierro interviene en transferencias de un elctron Fe3+(ox) + 1e- Fe2+(red) Lehninger Eo del par Fe3+/Fe 2+ en cada centro Fe-S El hierro forma enlaces de coordinacin con tomos de azufre depende del entorno (lbiles) y restos tiol de cisteinas proteico Cuproprotenas Bioqumica gD Tema 7 (UVEG) 3 histidinas y una El tomo de cobre interviene en molcula O22- coordinan transferencias de un elctron el tomo de cobre en el Cu2+(ox) + 1e- Cu1+(red) centro CuB (en azul) de la citocromo oxidasa Voet 13

14. Componentes de la Cadena Electrnica Mitocondrial Citocromos El tomo de hierro del grupo hemo interviene en transferencias de un elctron Fe3+ + 1e- Fe2+ Contiene un grupo hemo Hemo C como el de la hemoglobina (citocromo c) (citocromo b) El grupo hemo est unido a dos cisteinas de la protena (extrnseca de membrana) Bioqumica gD Tema 7 (UVEG) Hemo A Eo del par Fe3+/Fe 2+ El grupo hemo tiene unido una en cada citocromo cadena hidrocarbonada que lo ancla depende del entorno en el interior de la protena (citocromo a) Lehninger proteico 14 15. Componentes de la Cadena Electrnica Mitocondrial Ubiquinona: transportador no proteico Derivados de 2,3-dimetoxi- 5metil-1,4-benzoquinona sustituidos con cadena Ubiquinona (Q) isoprenoide (completamente Mamferos 10 unidades oxidada) (Q10) Cadena isoprenoide apolar capacita para difundir en la Radical membrana semiquinona (QH) Transportador mvil capta ede uno en uno y los cede de uno en uno Q10 canaliza e- derivados de Ubiquinol (QH2) Bioqumica gD Tema 7 (UVEG) oxidacin de sustratos (completamente (deshidrogenasas reducida) dependientes de FAD) Lehninger 15 16. Orden de los Transportadores Electrnicos Varios criterios permiten establecer Transportador NADH electrnico el orden de los componentes de la cadena E -0.32V - Potenciales standar de cada uno de NAD+ 1 los pares redox 2 - Espectros de absorcin en estado 3 oxidado y reducido 4 5 G<0 - Razn P/O - Accin de inhibidores 6 - Accin de detergentes inicos suaves 7 y baja temperatura (permite aislar 8 O2 complejos mitocondriales) E +0.82V H2O Flujo de 2e- Garca Ferris Los e- se mueven de forma Bioqumica gD Tema 7 (UVEG) secuencial de un transportador con menor E a uno con mayor E Lehninger 16 17. Complejos Mitocondriales Transportadores se organizan en complejos (I, II, III, IV) embebidos en la membrana interna mitocondrial Complejos I, III y IV intervienen en reoxidacin NAD+ Complejos II, III y IV intervienen en reoxidacin FAD Transportadores mviles actan entre diferentes complejos Ubiquinona (Q, CoQ) conecta I con III y II con III Citocromo c conecta III con IV Complejos I, III y IV bombean H+ al espacio intermembrana acoplado al paso de e- (G <0) Bioqumica gD Tema 7 (UVEG) [FAD] Lehninger 17 18. Organizacin de los Complejos Mitocondriales Cada complejo consta de varios transportadores que actan sucesivamente en la cadena (Eo creciente) La variacin de energa libre producida durante el paso de los e- en I, III y IV permite bombeo de H+ desde la matriz (in) hacia el espacio intermembrana (out), generndose un gradiente de H+ que hace posible la sntesis de ATP Bioqumica gD Tema 7 (UVEG) (ATP sintasa) Lodish 18 19. Caractersticas de los Complejos Mitocondriales I y II Complejo I NADH-ubiquinona oxidorreductasa NADH deshidrogenasa NADH + H+ + Q NAD+ + QH2 Go = -70 kJ.mol-1 Bombea 4 H+/2e- Mw > 900.000, ms de 25 polipptidos, FMN acta como adaptador electrnico, capta 2 e- de NADH y los cede de uno en uno a centros Fe-S (7-8) Succinato-ubiquinona oxidorreductasa Complejo II Succinato deshidrogenasa succinato + Q fumarato + QH2 Go 0 kJ.mol-1 No Bombea H+ Mw 125.000, ms de 4 Bioqumica gD Tema 7 (UVEG) polipptidos, FAD acta como adaptador electrnico, capta 2 e- de succinato y los cede de uno en uno a centros Fe-S (3) Enzima del ciclo del cido citrico Horton 19 20. Caractersticas de los Complejos Mitocondriales III y IV Complejo III Ubiquinol-citocromo c oxidorreductasa Citocromo c reductasa QH2+ 2cit c(Fe3+) Q + 2cit c(Fe2+) Go = -37 kJ.mol-1 Bombea 4 H+/2e- (ciclo Q) Mw 250.000, dmero de 9-11 subunidades, contiene un centro Fe-S, cit b (con dos hemos) y cit c1 distinto de cit c que acta como aceptor de e- Complejo IV Ferrocitocromo c-oxgeno oxidorreductasa Citocromo c oxidasa 2cit c(Fe2+)+ 1/2O2 2cit c(Fe3+)+ H2 O Go -110 kJ.mol-1 Bombea 2H+/2e- Bioqumica gD Tema 7 (UVEG) Mw 400.000, dmero de 13 subunidades, contiene dos tomos de cobre (CuA y CuB) y dos cit a (cit a y cit a3) Horton 20 21. Otros Sustratos Transfieren e- a la Ubiquinona Otras dos vias transfieren e- a ubiquinona (UQ) a travs de deshidrogenasas FAD-dependientes - Acil-CoA deshidrogenasa (-oxidacin de cidos grasos) - Glicerol-fosfato deshidrogenasa (lanzadera glicerol-fosfato) Bioqumica gD Tema 7 (UVEG) Garrett 21

22. Sntesis Acoplada de ATP Razn P/O, nmero de molculas de ATP (P) sintetizadas por cada 2enecesarios para reducir un oxgeno (O) Se necesita consumir 4H+ del gradiente electroqumico para sintetizar una molcula de ATP (3 ATP sintasa + 1 importar ADP + Pi y exportar ATP por el translocador ADP-ATP y la translocasa de fosfato) Lehninger 2e- (NADH + H+) a 1/2 O2 2e(FADH2) a 1/2 O2 Bioqumica gD Tema 7 (UVEG) Complejo I 4H+ Complejo II ningn H+ Complejo III 4H+ Complejo III 4H+ Complejo IV 2H+ Complejo IV 2H+ P/O =10H+ /4H+ = 2.5 P/O =6H+ /4H+ = 1.5 22 23. Transportadores Necesarios para la Fosforilacin Oxidativa El translocador ADP-ATP lleva a cabo un transporte antiporte que exporta ATP4- (sin Mg2+) e importa ADP3- - transporte electrognico, se inhibe por atractilsido La translocasa de fosfato lleva a cabo un transporte de Pi impulsado por la entrada en simporte de un H+ - transporte electroneutro no consume potencial de membrana - el gradiente de H+ favorece el funcionamiento de los dos transportadores Bioqumica gD Tema 7 (UVEG) La salida de ADP y Pi, combinada con la entrada de ATP implica globalmente el Lehninger consumo de un H+ adicional 23 24. Control Respiratorio NADH o Succinato La fosforilacin oxidativa y Inhibidor cadena o Inhibidor sntesis ATP la cadena de transporte [O2] electrnica estn ntimamente acopladas El acoplamiento se establece a travs del gradiente inico de H+ La regulacin coordinada [ATP] Garcia Ferris de ambos procesos se conoce con el nombre de 1 2 tiempo control respiratorio 2 -Si se inhibe la cadena: no hay transporte de 1 Mitocondrias en presencia de e-, no se consume O2, no se genera gradiente ADP, Pi, fuente de e- (NADH, de H+ y no se sintetiza ATP Bioqumica gD Tema 7 (UVEG) - Si se inhibe la sntesis de ATP: no se forma succinato), y O2 como aceptor ATP, no se consume el gradiente de H+ y se final, consumen O2 y sintetizan detiene la cadena de transporte electrnico ATP (el gradiente de H+ es tan grande que la cadena no tiene energa para bombear H+) 24 25. Inhibidores de la Cadena de Transporte Electrnico y de la Sntesis de ATP Cadena de transporte electrnico Complejo I Rotenona Amital Complejo II Carboxina Complejo III Antimicina A Complejo IV Cianuro (CN-) Azida (N3-) Monxido de carbono (CO) Sntesis de ATP ATP sintasa (complejo V) Bioqumica gD Tema 7 (UVEG) Oligomicina Translocador ADP-ATP Atractilsido 25 26. Desacopladores Rompen el acoplamiento Mitocondrias en entre la cadena de presencia de ADP y Pi: transporte electrnico y la 1 NADH o succinato fosforilacin oxidativa Inhibidor de la 2 sntesis de ATP Son cidos dbiles solubles en la membrana (pKa 5), 3 DNP se protonan en el espacio intermembrana (alta [H+]) y 1 2 3 se desprotonan en la matriz (baja [H+]) [O2] pasa H+ del espacio intermembrana a la matriz Disipan el gradiente de H+ Estimulan el transporte Bioqumica gD Tema 7 (UVEG) electrnico (aumenta el consumo de O2) [ATP] Garca Ferris 26 27. Termogenina Es un desacoplador natural Protena integral de la membrana interna mitocondrial que forma un canal de H+ El gradiente de H+ se disipa y no se sintetiza ATP, generndose calor Est presente en el tejido adiposo marrn de mamferos lo que permite mantener la temperatura Bioqumica gD Tema 7 (UVEG) corporal (oso durante la ADP + Pi hibernacin) ATP Lehninger 27 28. Partculas Submitocondriales Son vesculas cerradas generadas por el sellado de las crestas mitocondriales como consecuencia de aplicar ultrasonidos (sonicacin) a mitocondrias aisladas. Es una herramienta para estudios de la cadena de transporte electrnico -Al cambiar la orientacin de la membrana hay que tener en cuenta que: -Dentro de la partcula queda el citocromo c que estaba en el espacio intermembrana -Fuera queda orientada la ATP sintasa (luego ya no es necesaria la actividad de la translocasa ATP-ADP, insensibilidad al atractilsido) -Tambin se orienta hacia fuera el sitio de unin del NADH o el succinato -Partculas submitocondriales en disolucin pueden acceder a las fuentes de poder reductor Bioqumica gD Tema 7 (UVEG) (NADH, succinato), ADP y Pi suministradas con la disolucin para llevar a cabo la cadena de transporte electrnico y la fosforilacin oxidativa 28 29. Fases de la Fotosntesis Fase luminosa Captacin de energa por pigmentos que absorben luz y conversin en energa qumica (ATP) y poder reductor (NADPH) H2O O2 H2O + NADP+ + ADP

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+ Pi Fase luminosa O2 + NADPH + H+ + ATP No siempre el donador de e- (agente reductor) es el H2O NADP+ NADPH + H+ Localizacin cloroplasto, ADP + Pi ATP membrana tilacoide (plantas) Fase de fijacin del CO2 Fase fijacin CO2 NADPH y ATP se utilizan para reducir al CO2 CO2 + H2O + NADPH + H+ + ATP Hidrato de carbono CO2+ H2O (CH2O)n Bioqumica gD Tema 7 (UVEG) (CH2O)n + NADP+ + ADP + Pi Localizacin, estroma (plantas) La sntesis de hidratos de carbono es un proceso endergnico que requiere energa (ATP) y poder reductor (NADPH) 29 Cmo se Convierte la Energa Luminosa en Energa Qumica? Aparentemente los e- son forzados en 1937. Robert Hill descubre que contra de un gradiente electroqumico una suspensin de cloroplastos Cadena de transporte iluminados en presencia de un de electrones -sistemas redoxaceptor de e- (ferricianuro) puede producir O2 h 2H2O + 2A 2AH2 + O2 E luminosa se convierte en E qumica, H2O dador de e- estroma Se libera O2 sin reduccin de CO2 El O2 procede del agua, no del CO2 lumen tilacoidal Ochoa demuestra que el aceptor de e- es el NADP+ Stryer 2H2O+2NADP+ 2NADPH+ 2H++ O2 Go = -nFEo En esta cadena se La energa es proporcionada Go = -2 x 96.48 x (-0.32-(+0.82)) insertan 2 sistemas en forma de cuantos de luz de pigmentos PSI y PSI y PSII son lasmquinas Go = +220 kJ.mol-1 Bioqumica gD Tema 7 (UVEG) PSII que permiten que conducen la fase luminosa introducir la energa para de la fotosntesis forzar a los electrones La cadena fotosinttica emplea la energa de la radiacin electromagntica para impulsar la sntesis de NADPH y ATP 30 El gradiente de H+ Impulsa la Sntesis de ATP El gradiente de H+ generado a travs de la membrana tilacoidal permite la sntesis de ATP oscuridad Experimento de Jagendorg Un gradiente de H+ producido artificialmente en vesculas tilacoidales mantenidas en oscuridad es capaz de impulsar la sntesis de ATP Bioqumica gD Tema 7 (UVEG) Stryer 31 El Cloroplasto de los Organismos Fotosintticos Eucariotas La fotosntesis se produce en clulas eucariticas (algas, membrana externa membrana plantas superiores) y en membrana interna tilacoidal bacterias (cianobacterias) Stryer En el cloroplasto se realizan Estroma las dos fases de la lamelas fotosntesis del grana Contiene DNA y ribosomas (sintetizan parte del espacio lamela del lumen intermembrana componente proteico) estroma tilacoidal La membrana tilacoidal contiene los transportadores electrnicos y la ATP sintasa (orientada hacia el estroma) Bioqumica gD Tema 7 (UVEG) El estroma contiene las enzimas solubles que llevan Lehninger a cabo la fijacin del CO2 32 Pigmentos Fotosintticos Principales Molculas capaces de absorber radiacin visible Plantas verdes clorofilas (Chla y Chlb) Los sistemas de dobles enlaces conjugados permiten absorber luz en la zona del visible Los espectros de absorcin de los pigmentos fotosintticos se Mathews complementan Chlb y Chla absorben en la zona del azul y del rojo con espectros que complementan sus gamas de absorcin en el visible Bioqumica gD Tema 7 (UVEG) Por ello, la luz reflejada por las plantas es de color verde Campbell 33 Pigmentos Fotosintticos Accesorios Son receptores de luz complementarios Carotenoides El mas importante en plantas superiores es el -caroteno, los dobles enlaces conjugados permiten absorber en el azul Ficobilinas (bacterias fotosintticas y algas rojas) Ficoeritrina Ficocianina Campbell Bioqumica gD Tema 7 (UVEG) Mathews 34 Organizacin de los Pigmentos Fotosintticos Los pigmentos se organizan en unidades funcionales: fotosistemas (PSI, PSII) Constan de clorofilas (200), carotenoides (50) y Clorofilas antena Estas molculas protenas ligadas a absorben energa protenas luminosa Todas las molculas pueden Carotenoides, otros transfirindola absorber luz (molculas Luz pigmentos accesorios entre molculas hasta alcanzar el antena) pero solo una pareja centro de reaccin de clorofila a en cada fotosistema puede actuar en la conversin de energa luminosa en energa qumica (fotooxidacin) centro de Bioqumica gD Tema 7 (UVEG) reaccin fotoqumica Centro de reaccin Lehninger 35 Absorcin de la Luz La capacidad de un compuesto para absorber h luz depende de la disposicin de los e- e- alrededor del ncleo atmico Cuando un fotn se adsorbe, un e- pasa a

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un nivel energtico mayor (se requiere una cantidad mnima de energa (un cuanto) La molcula pasa a un estado excitado (*) generalmente inestable e-* El e- vuelve al estado fundamental (nivel de energa bajo), durante el proceso la energa absorbida cuando la molcula se excit se pierde como luz emitida (fluorescencia) o como calor La excitacin de las molculas por la luz es muy rpida, picosegundos (10-12s) y permanecen excitadas un tiempo muy corto Cuando clorofilas aisladas se excitan la energa se libera como fluorescencia y calor, pero e- Bioqumica gD Tema 7 (UVEG) cuando se iluminan hojas de espinaca no se observa fluorescencia La energa pasa de una clorofila excitada a otra (excitn) transmitindose al centro de reaccin 36 Transferencia de Energa al Centro de Reaccin Las molculas antena absorben la energa de un fotn de luz visible y canalizan la energa por resonancia hasta el par especial cuyo estado excitado est estabilizado (menor energa) respecto al resto de molculas de clorofila del fotosistema transferencia de excitn Garrett estados excitados molculas de pigmento antena Energa Energa estado basal e- par especial del centro Bioqumica gD Tema 7 (UVEG) molculas de pigmento antena de reaccin par especial del centro Lehninger de reaccin Aceptor de e- 37 Otras Estructuras de Captacin de Luz Otros pigmentos, estructuras de captacin de la luz (LHC), ayudan a los fotosistemas a absorber radiacin Localizados en la membrana tilacoidal unidos a protenas especficas, actuando a modo de antena Por ejemplo LHCII es un trmero con 36 clorofilas y 6 carotenoides Dado que la eficiencia de los dos fotosistemas en la absorcin de luz no es la misma Bioqumica gD Tema 7 (UVEG) LCHII se asocia a PSI o a PSII incrementando la energa Monmero de LHCII radiante absorbida Lehninger 38 Cadena de Transporte Electrnico Fotosinttica El funcionamiento coordinado de los fotosistemas (PSI y PSII) permite que la transferencia de e- sea siempre a favor de potencial termodinmico Cuando las clorofilas especializadas P700 y P680 se excitan por la luz adquieren una distribucin diferente de e- que cambia su Eo E -1.6 PSII P700* -2H+ -4H+ A0 A1 (estroma) -1.2 (estroma) FX P680* FA/FB -0.8 Ph Fd NADP+ PQA -0.4 FNR PQB PQH2 h NADPH 0 h +H+ Cit b6f h h Pc +0.4 P700 Bioqumica gD Tema 7 (UVEG) +0.8 +4H+ Z P680 (lumen) +1.2 MnC E PSI Mathews (mod Garca Ferris) H2O O2+2H+(lumen) 39 Fotosistema PSII PSII est constituido por dos protenas transmembrana (D1,D2) Los pigmentos antena absorben un fotn excitndose P680 en el centro de reaccin a P680* Feofitina (Ph), clorofila sin Mg2+, le roba el e- a P680* (picosegundos) produciendo separacin de cargas en el centro de reaccin quedando P680+ con un hueco electrnico El e- se transfiere a molculas de plastoquinona PQA, PQB PQB reducida (PQH2) difunde en la Mathews (mod por Garca Ferris) bicapa lipdica hasta el complejo de citocromos b6f El proceso es inhibido por DCMU Bioqumica gD Tema 7 (UVEG) El hueco dejado en P680+ se rellena mediante e- obtenidos a partir de la molcula de agua PQ PQH2 (forma oxidada) (forma reducida) 40 Complejo Productor de Oxgeno El complejo productor de oxgeno (OEC), asociado a PSII, lleva a cabo la escisin de la molcula de agua - Contiene un complejo de Mn (MnC) capaz de ceder hasta 4e- al P680+ a travs de un residuo de Tyr, acumulando 4 oxidaciones (0 +4) - Rellena 4 huecos electrnicos generados por 4 procesos de excitacin y robo electrnico (absorcin de 4 fotones por P680) - Cuando el complejo ha acumulado 4 huecos electrnicos (+4), escinde 2 molculas de H2O para robar 4e- liberando 4H+ al lumen del tilacoide (contribuirn al gradiente de H+) y una molcula de O2 Bioqumica gD Tema 7 (UVEG) Lehninger 41 Citocromos b6f Es una bomba de H+ similar al complejo III de la cadena electrnica mitocondrial Por cada 2 e- Cataliza la transferencia de 2e- desde la plastoquinona reducida (PQH2) a dos molculas de plastocianina (Pc), contiene Fe-S PQH2 + 2 Pcox PQ + 2Pcred El transporte electrnico se produce con una G<0 que se invierte en la generacin de un gradiente electroqumico de protones a travs de la Bioqumica gD Tema 7 (UVEG) membrana tilacoidal (Ciclo Q) Cit b6 posee dos grupos hemo 42 Plastocianina Es un transportador proteico que contiene un centro de cobre Se localiza en la luz del tilacoide Un tomo de Cu est coordinado a His (2), Cys y Met Recoge los e- a la salida del

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complejo b6f Cu2+ + 1e- Cu+ Ser el dador electrnico encargado de rellenar el hueco en el P700+ del PSI despus de su excitacin y prdida del e- Eo est influenciado por el entorno proteico Bioqumica gD Tema 7 (UVEG) Stryer 43 Fotosistema PSI Absorbe un fotn excitndose P700 a P700* P700* tiene un Eo = -1.3v (reductor muy potente) El electrn de P700* es robado por un aceptor cloroflico (Ao) Mathews (mod por Garca Ferris) quedando como P700+ Ao transfiere el e- a A1 (filoquinona) y esta a protenas Fe-S (Fx,FA,FB) y despus a ferredoxina (Fd, protena Fe-S soluble localizada en el estroma El hueco electrnico lo rellena Bioqumica gD Tema 7 (UVEG) la plastocianina (PC) que transporta el e- procedente del complejo cit b6f Stryer PSI 44 Organizacin Espacial del Fotosistema PSI PSI es un trmero compuesto por dos subunidades embebidas en la membrana tilacoidal (A, B) y una subunidad (C) orientada hacia el estroma Bioqumica gD Tema 7 (UVEG) Lehninger 45 Ferredoxina y Ferredoxina-NADP+ Reductasa Ferredoxina es una protena soluble del estroma con centro Fe-S (Fe2S2) Transporta un e- a la ferredoxina-NADP+ reductasa (FNR) FNR es una flavoprotena, acepta dos e- procedentes de dos Fdred generando FADH2, el cual cede un in hidruro (:H-) al NADP+ formndose NADPH y H+ Bioqumica gD Tema 7 (UVEG) Stryer 46 Ecuacin Global de la Fase Luminosa de la Fotosntesis en Plantas 2 H2O + 2 NADP++ 8 fotones O2 + 2 NADPH + 2 H+ Bioqumica gD Tema 7 (UVEG) La transferencia de 4e- es impulsada por 8 fotones y 12H+ aparecen en el lumen tilacoidal 8H+ se bombean por el ciclo Q en el complejo cit bf 4H+ durante la escisin de una molcula de H2O 47 Cadena Electrnica Mitocondrial y Fotosinttica En ambas cadenas los transportadores de e- se localizan en complejos estroma proteicos embebidos en una membrana, conectados por lumen del tilacoide transportadores mviles El transporte de e- genera un Stryer gradiente de H+ que impulsa espacio la sntesis de ATP (ATP intermembrana sintasa en orientacin adecuada en funcin de la Bioqumica gD Tema 7 (UVEG) direccin del gradiente de H+) matriz 48 Balance de la Fotofosforilacin Estroma Entre (3-4)H+ deben 4H+(estroma) retornar al estroma para impulsar la sntesis de una ATP ADP+Pi molcula de ATP (fotofosforilacin no cclica) Por cada 2e- que se CF1 ATP sintasa transfieren desde el agua al NADP+ para formar una molcula de NADPH se CF0 producen 2 (1.5) molculas de ATP 4H+(lumen) 6H+ P/2e-= = 2(1.5) ATP 3H+(4H+ )/ATP Lumen tilacoidal Bioqumica gD Tema 7 (UVEG) Garca Ferris ATP y NADPH sern utilizados para la sntesis de hidrato de carbono en el estroma 6 CO2 + 12 NADPH + 12 H2O + 18ATP C6H12O6 + 12NADP+ + 18ATP + 18Pi 49 Fotofosforilacin cclica A veces no es necesario generar NADPH (no se dispone de NADP+) pero s generar ATP En este caso se produce un transporte cclico de e- funcionando slo PSI que cede el e- a Fd PQ cit bf PC hasta P700 rellenando el hueco electrnico El paso de e- por el complejo bf libera energa que se invierte en el bombeo de H+ al lumen tilacoidal para impulsar la Bioqumica gD Tema 7 (UVEG) sntesis de ATP (fotofosforilacin cclica) Mathews 50 Fotosntesis en Procariotas En procariotas los componentes de la cadena de transporte electrnico, fotosistemas, y ATP sintasa se encuentran en la membrana plasmtica Muchos procariotas poseen un solo fotosistema Algunas bacterias utilizan dadores de e- distintos del H2O, como el SH2 espacio periplsmico P870 Bioqumica gD Tema 7 (UVEG) Las cianobacterias poseen 2 fotosistemas, compartiendo intermediarios con la cadena respiratoria La ATP sintasa es comn 51 Bioqumica gD Tema 7 (UVEG) Topologa del Movimiento de H+ y ATP sintasa 52