GENTICA BACTERIANA

ELEMENTOS CELULARES ENVOLVIDOS NA GENTICA BACTERIANA Cromossomo Enzimas de restrio Plamdeos Transposons

VRUS ENVOLVIDOS NA GENTICA BACTERINA Bacterifagos ou fagos

Genoma bacteriano: genes do cromossomo + genes dos plasmdeos

Cromossomo Molcula nica de DNA ( haplide ) circular de fita dupla, altamente

enovelada, contendo 2 a 4 mil genes

PAREAMENTO DAS BASES NO DNA

D U P L I C A O do DNA

D U P L I C A O do DNA

DUPLICAO do DNA

Enzimas de restrio
( tesouras moleculares )

Acredita-se que as bactrias tenham desenvolvido essas enzimas ao longo de sua evoluo, como proteo ao ataque de bacterifagos

Enzimas bacterianas que clivam o DNA em stios especficos

Originam fragmentos de restrio

Permitem a amplificao do DNA

PLASMDEOS
Molculas extracromossomais de DNA, fita dupla, circulares (de 5 a 100 genes) Replicam-se durante a diviso celular e independentemente (na conjugao ) Alguns conseguem se integrar ao DNA cromossmico - EPISSOMAS Conferem vantagens seletivas Adquiridos por conjugao A bactria pode ter vrias cpias do mesmo plasmdeo e de plasmdeos diferentes

Tipos de plasmdeos

Fator F possui os genes dos pili sexuais e da transferncia do

plasmdeo para outra bactria

Fator R possui gene de resistncia a antimicrobianos

Plasmdeos de virulncia possuem genes de fatores de virulncia Plasmdeos metablicos genes que conferem capacidade metablica extra ( ex.: Pseudomonas podem metabolizar substncias exticas como: tolueno, cnfora, hidrocarbonetos do petrleo

4. Transposons

Frequncia de transposio: muito baixa: 10-5 a 10-7

So pequenos segmentos de DNA cromossmico que podem se mover (ser transpostos) de uma regio para outra do mesmo cromossomo ou do DNA cromossmico para um plasmdeo ou para um bacterifago

Transposons simples - so chamados de seqncias de

insero e contm somente um gene que codifica para a enzima transposase - responsvel pela clivagem e remontagem do DNA

Transposons complexos - gene da transposase + genes

adicionais tais como: genes para toxinas, genes para resistncia a antibiticos, etc

BACTERIFAGOS
Vrus que infectam especificamente bactrias Estrutura

INFECO E REPLICAO DO BACTERIFAGO

ALTERAO DO MATERIAL GENTICO

VARIABILIDADE E ADAPTAO

MUTAES

RECOMBINAO

MUTAES
So alteraes na seqncia de pares de bases do DNA

insero de um aminocido diferente em uma protena

aparecimento de um fentipo alterado ( mutante )

Ex.: - mutantes incapazes de sintetizar aminocidos e vitaminas importantes para a bactria - mutantes incapazes de produzir flagelos, pili ou cpsula - mutantes resistentes a drogas antibiticas

MUTAES

Ocorrem por: - Substituio de bases - Deleo de pares de bases - Insero de pares de bases

ATTACGCGGAT TAGG CC A TAATGCGCCTA ATCC GG T

Subst. de bases

ATTACGCGGAGTAGG CCA TAATGCGCCTC ATCC GGT

ATTC TGGGCGATAAATGG TAAG ACCCGCTAAT TTAC Deleo

ATTCCGATTAAATGG TAAGGCTAATTTACC

ATTTCGGCGCATTAAATTGC TAAAGCCGCGTAATTTAACG Insero ATTTCGGCGCATTAACGATTATTGC TAAAGCCGCGTAATTGCTAATAACG

Origem das Mutaes: Espontnea

Erros espontneos na replicao do DNA

chance de uma em um bilho de que uma mutao ocorrer em um gene em cada gerao - Transposio de genes

Induzida

( por agentes mutagnicos )

- fsicos ( radiao ultravioleta, raios X ) - qumicos (benzopireno, cido nitroso, hidroxilamina, etc )

Mecanismos de reparo das leses do DNA: Enzimas reparadoras: - retiram o fragmento de DNA lesado - sintetizam um fragmento novo de DNA, etc.

TRANSFERNCIA GENTICA E RECOMBINAO

Recombinao gentica Troca de genes entre duas molculas de DNA, para formar
novas combinaes de genes em um cromossomo Nas bactrias, ocorre atravs de: - Transformao - Conjugao - Transduo

T R A N S F O R M A O

Transformao - Transferncia de informao gentica atravs de DNA

livre (fora da clula bacteriana): um fragmento de DNA livre, no meio, captado e incorporado por uma bactria competente.

- A competncia resulta de alteraes na parede celular que a torna permevel a molculas grandes de DNA. - Pode ocorrer naturalmente (ou artificialmente) em bactrias Gram positivas e Gram negativas e um fenmeno muito raro

TRANSDUO

Enzimas de restrio

Transduo

Transferncia de material gentico de uma bactria para outra por meio de bacterifago: um fago infecta uma bactria e, ao se multiplicar, algumas cpias virais incorporam um fragmento do DNA da clula bacteriana. Quando um desses vrus infectar uma outra bactria, transferir para essa bactria o fragmento de DNA da bactria anteriormente infectada

CONJUGAO

Conjugao
Transferncia de informao gentica de uma bactria a outra atravs de contato fsico (pili) entre elas: - Uma bactria doadora (F+) possui o fator F em um plasmdeo ou integrado ao seu cromossomo - Atravs de pili, a bactria transfere o fator F para uma bactria receptora que no possui o fator F (bactria F) - A bactria F+, durante a transferncia, tem o seu fator F replicado, de modo que mantm seu fator F - A bactria que era F passa a ser F+.

CONJUGAO talvez a principal forma de transferncia de resistncia a antibiticos

- Os pili sexuais so codificados por genes de plasmdeos de bactrias Gram negativas. - As bactrias Gram-positivas produzem molculas aderentes para o contato entre elas.

ENGENHARIA GENTICA OU TECNOLOGIA DO DNA RECOMBINANTE

1. Enzimas de restrio (endonucleases) digerem o DNA (cromossmico, plasmideal ou viral) em fragmentos; 2. O fragmento de DNA contendo o gene a ser clonado inserido no plasmdeo ento chamado de vetor, formando o DNA recombinante; 3. O plasmdeo ento incorporado por uma clula bactria recombinante; 4. O vetor se multiplica passando prognie