Instituto Tecnolgico y de Estudios Superiores de Monterrey Campus Estado de Mxico Oscar Martnez Zamarripa A01161608 Prctica #5: Antibiograma

y otros antimicrobianos

Laboratorio de Microbiologa

Profesor: Dra. Josefina Castillo Reyna

26 de septiembre de 2011.

Introduccin Un agente antimicrobiano es un compuesto qumico, natural o sinttico, que mata o inhibe el crecimiento de los MOs (4). En 1941 Selman A. Waksman, descubridor de la estreptomicina, propuso restringir el significado de la palabra antibitico a los productos microbianos con propiedades antimicrobianas (1). El trmino antibitico proviene del griego, anti en contra + biotikos dado a la vida (2). Su descubrimiento vino del azar y la suerte, cuando en 1928 Alexander Fleming olvid unas cajas Petri con bacterias sembradas y al volver not un hongo invasor que inhibi el crecimiento de las bacterias. As encontr por primera vez un antibitico, al que llam penicilina porque es producida por el hongo Penicillium notatum (3). Un antibitico es un agente antimicrobiano que a su vez es un compuesto relativamente sencillo producido por un microorganismo, o un derivado sinttico de ese compuesto, que a bajas concentraciones mata o impide el crecimiento de ciertas clases de microorganismos sensibles, generalmente bacterias (2) (3) (4). Existen antibiticos de amplio espectro, que afectan a bacterias Gram negativas como positivas indistintamente, tienen una mayor aplicacin en la medicina. Un antibitico de espectro de accin limitado afecta a Gram positivo o negativo por separado, son tiles tambin pues ayudan en el control de microorganismos que no son sensibles a otros antibiticos o que han dejado de serlo (4). Los mtodos de accin de los antibiticos en bacterias son en la pared celular, membrana citoplsmica, biosntesis de protenas y sntesis de cidos nuclicos (4). Los agentes antimicrobianos usan sufijos para denotar de qu tipo son. El sufijo cida, de latn cida (que mata), son sustancias que matan por completo al organismo. Cuando se usa sttico, del latn statikos (causando que se detenga) se refiere a que el agente detiene o inhibe el desarrollo del microorganismo (4) (5). Entonces dependiendo de contra qu organismo se usan se pueden llamar bactericida, fungicida, algicida o virucida en caso de matar al organismo, en caso de inhibicin sera bacteriosttico, fungisttico, etctera (5). La actividad antimicrobiana se mide determinando la cantidad ms pequea necesaria de un agente para inhibir el crecimiento de un organismo control. Este valor o cantidad es llamado concentracin mnima inhibitoria (MIC) (4).Por otro lado, cuando el agente mata al organismo, se llama concentracin mnima letal (MLC) (10). Otros agentes microbianos diferentes a los antibiticos son los agentes qumicos. Podemos decir que los agentes de este tipo que se usan en tejidos vivos son los antispticos. Mientras que los que se usan en objetos inanimados son llamados desinfectantes (4). Dentro de estos agentes podemos encontrar a los fenoles y derivados, que desnaturalizan protenas y as daan la membrana (Ej. Metil-resorcino para lavar manos). Alcoholes, se usan de cadena corta, desnaturalizan protenas y disuelven lpidos de

membrana (Ej etanol, isopropanol). Halgenos, su funcionamiento depende de cul se use. El cloro inactiva enzimas por ejemplo (Ej, cloro, yodo). Detergentes destruyen membranas por sus cabezas hidrofbicas e hidroflicas (Ej. Cloruro de benzalconio). Tambin se pueden encontrar aldehdos, cidos y bases y agentes gaseosos (5) (6). Un antibiograma es usado para estudiar la actividad de los agentes antimicrobianos frente a organismos responsables de infecciones (7). Tienen como objetivo evaluar en el laboratorio la respuesta de un microorganismo a uno o varios antimicrobianos, usando este resultado como factor predictivo de la eficacia clnica (9). Se usan para establecer de forma relativamente cuantitativa, la actividad de un conjunto de antibiticos o antimicrobianos. Este mtodo consiste en observar la formacin de halos de inhibicin del crecimiento en una placa inoculada homogneamente. Estos se van a formar por la accin de discos antibiticos o antimicrobianos de concentracin conocida, cuya difusin al medio va a originar la inhibicin del crecimiento (8). Objetivos Aprender a sembrar homogneamente con hisopo estril para obtener crecimiento en csped. Aprender a hacer un antibiograma y comprender su importancia. Relacionar el tamao de un halo de inhibicin con la susceptibilidad de un MO al antimicrobiano usado.

Resultados

En cada uno de las placas se pusieron discos antimicrobianos en el siguiente orden: I. II. III. IV. V. VI. Ampicilina Benzal Cloro Etanol En caso de AN y EMB: Suspensin fngica. En caso de PDA: Suspensin bacteriana.

Agar nutritivo

Agar Nutritivo
No. de disco Descripcin S hay halo. Se pudieron observar puntos blancos a sus alrededores. Tamao de halo (dimetro) Aproximadamente 8 mm. Foto

S hay halo. Se presentaron puntos que hacan irregular al halo.

15 mm.

No hay halo. Sin embargo en la parte de arriba se dio crecimiento de otro tipo.

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S hay halo.

18 mm.

Sin halo. El crecimiento en el disco 3 puede provenir ms bien de este disco.

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Agar EMB

Agar EMB
No. de disco Descripcin Tamao de halo (dimetro) Foto

Tiene halo muy pequeo.

Menor o cercano a 7 mm.

Halo muy grande, tiene colonias 12 mm de radio. Se corta aisladas creciendo dentro de la por la caja, pero seran 24 zona del halo. mm de dimetro.

No hay halo ni nada adicional que notar.

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Hay un halo de tamao moderado Aproximadamente 24 mm. y forma algo irregular. No es exacto por irregularidades.

Se puede decir que hay halo, pero en dado caso es muy pequeo.

En caso de ser halo es menor a 7 mm.

Agar PDA

Agar PDA
No. de disco Descripcin Sin halo de inhibicin ni nada adicional que notar. Tamao Foto

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Sin halo de inhibicin ni nada adicional que notar.

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Hay falta de crecimiento alrededor del disco, sin embargo Difcil de medir por las no es un halo o no tiene la forma irregularidades. caracterstica del halo. 30 mm de radio, es cortado por la caja, por lo que el dimetro podra ser de 60 mm.

Hay un halo muy grande.

No hay halo pero hay un crecimiento diferente alrededor del disco.

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Discusin En cada una de las placas se pudieron ver discos que tienen halos de inhibicin bastante notorios, al igual que hubieron discos que no representar mayor obstculo para el desarrollo del MO. Hubo tanto halos grandes como chicos. Segn el tamao del halo de inhibicin, se puede saber si el MO es resistente, intermedio o susceptible al antimicrobiano. Cuando es susceptible, se alcanzan resultados ptimos con dosis usuales del antibitico. Siendo intermedio el resultado, se puede alcanzar xito con dosis mximas. Siendo el MO resistente, es seguro el fracaso para controlar al organismo con ese antimicrobiano (14). Para una cepa de E. coli ATCC25922, se tienen los siguientes resultados conforme al dimetro del halo de inhibicin para la ampicilina (15): Dimetro del halo de inhibicin en milmetros con disco de ampicilina (10 g) Resistente <13 Intermedia 14-16 Sensible
>17

Como no se encontraron datos para los dems antimicrobianos, se sac el promedio de dimetros para diferentes antibiticos (15): Resistente <14 Intermedia 15-17 Sensible
>18

As aunque no se va a poder determinar con certeza la resistencia o susceptibilidad a un antimicrobiano, se puede tener una idea de en qu rubro estn. En el caso del agar nutritivo, se puede ya decir que la bacteria resiste el cloro. Tambin se puede decir que el hongo que contena el disco de la suspensin fngica, no produce ningn antibitico al cual la bacteria no sea resistente, en caso de que produzca alguno. Esto se confirma puesto que en el agar EMB no hay halo para cloro y el halo de la suspensin, podra decirse que no es halo o en caso de serlo es menor a los 14 mm (7 mm) que al comparar con la tabla nos indica ser resistente. Para ampicilina hay un halo pequeo, de 8 mm en agar nutritivo y un halo cercano a los 7 mm en agar EMB. Comparando con la primera tabla podemos decir que la bacteria es resistente a la ampicilina.

Quedan por analizar los halos que s crecieron ms. El primero es el de Benzal. Para el agar nutritivo hay un halo de 15 mm mientras que para el EMB hay uno de 24 mm. Para el primer halo se podra decir que es intermedio, pero para el segundo podra ser sensible pues supera el rango por mucho. El hecho que hace sospechar que en realidad es intermedio, adems del tamao del halo para AN, es que en el halo del EMB hay crecimiento aunque limitado. Para bacterias slo queda es etanol. Para nutritivo fue 18 mm y para EMB fue 24 mm. Ambos tamaos entran en el rango el rango de sensible. Esto nos indica que es probable que la bacteria sea susceptible a la accin del agente antimicrobiano etanol. En AN y PDA se observ crecimiento de otro organismo con la suspensin fngica o bacteriana, esto es normal pues son organismos diferentes los que se pusieron en ese disco, Se comprueba que ni la ampicilina, ni el Benzal son efectivos contra este hongo viendo que no hay halo en el agar PDA. Tambin se puede ver que la bacteria puesta en la suspensin, no genera ningn antimicrobiano que afecte al hongo, en caso de producir alguno. Para cloro no hay informacin que ayude a interpretar el resultado por la falta de uniformidad de la inhibicin, en caso de serlo. No se puede saber si falta de crecimiento es por el efecto de inhibicin del antimicrobiano o es que se sembr incorrectamente. En caso de ser inhibicin, el posible halo rondara los 16 mm, por lo que tambin podra ser posible que el hongo sea susceptible intermedio al cloro. Todo esto hace que no se pueda saber cmo afecta el cloro a este hongo. Finalmente est el etanol. Hay un halo de inhibicin de 60 mm alrededor del disco de etanol en el agar PDA. Esta medida pasa por mucho a la de sensible. Casi se puede decir con completa certeza que este hongo es sensible al etanol. No se sabe si estos resultados se pueden extrapolar a otros MOs pero lo que se puede ver aqu es que el etanol es un agente antimicrobiano qumico muy efectivo. Cuestionario 1) En esta prctica se realiz el antibiograma en medio slido, cmo podra ser un experimento de antibiograma en medio lquido? Descrbalo. Se podra hacer un antibiograma de mtodo basado en dilucin. A unos tubos de medio cultivo se les ponen diferentes concentraciones del antibitico a estudiar y se inoculan con el MO elegido. La concentracin mnima inhibitoria entonces corresponde al tubo con concentracin ms baja que haya logrado inhibir el 90% del crecimiento microbiano. La lectura del antibiograma se hace por turbidez (11).

2) Cul es la importancia clnica de la concentracin mnima inhibitoria? Gracias a esto se puede hacer una terapia adecuada con antibiticos. As se puede saber la concentracin o cantidad de medicamento que se debe de administrar para inhibir al que est afectando y as dar un tratamiento correcto, antes analizando otros factores (12). 3) Mencione 2 mtodos disponibles comercialmente para determinar la MIC El mtodo de difusin en agar y mtodos automatizados, que utilizan sistemas de microdilucin en medio lquido sobre microplacas con pocillos e interpretan el crecimiento bacteriano en cada pocillo (13). 4) En qu se basa el sistema comercial E-test? Es una tcnica en la que se usan tiras plsticas impregnadas en concentraciones crecientes de antibitico indicadas en una escala graduada en la misma tira. La tira se coloca en una placa inoculada con el MO a estudiar. Se puede observar la concentracin marcada en la tira al nivel donde empieza la inhibicin para as determinar cul es la menor concentracin a la que se presenta inhibicin (13). 5) En esta prctica se realiz el antibiograma con slo un antibitico y 4 agentes antimicrobianos. Si usted quisiera encontrar la MIC de un solo antibitico para un microorganismo, qu variacin hara en los discos de papel filtro? Qu probara? Variara la concentracin del antibitico en cada uno de los discos para as poder ver a qu concentracin el antibitico puede inhibir efectivamente al MO. 6) Cul es la razn por la que algunas especies obtienen resistencia a un cierto antibitico? Por variaciones en el genoma de la bacteria, que traen como consecuencia que el antibitico ya no pueda afectar al MO. Pueden ser una mutacin. Esta capacidad puede ser transferida despus al resto de la especie por conjugacin, transduccin, o transformacin (3).

7) Qu hara para que una especie con resistencia a un antibitico pudiera ser erradicada de un organismo enfermo? Qu consejo podra darle al mdico? Probara la eficacia de otro antibitico en contra de esa especie. Le aconsejara al mdico que realizara un antibiograma inoculando con el MO que est afectando al enfermo y probar con diferentes antibiticos para ver cul lo controla.

8) Cul es su opinin personal de las especies bacterianas creadas genticamente con hasta 5 plsmidos de resistencia a antibiticos?

Me parece que es una accin muy inconsciente de parte de quien se dedica a crearlas. Puede ser muy peligroso tener una especie con resistencia a tantos antibiticos. Si alguien se ve infectado por esta especie y el cuerpo mismo no es capaz de luchar contra la bacteria, sera extremadamente difcil ayudar mediante antibiticos. Siendo as, esto puede representar una gran amenaza para nosotros ya que podra causar muchas muertes sin tener la posibilidad de detener su paso. Conclusin Un antibiograma es muy til para poder ver de qu manera afecta un agente antimicrobiano al desarrollo de un microorganismo. Colocando un disco con el antimicrobiano a estudiar, es posible analizar el halo de inhibicin formado para determinar si el organismo es resistente, intermedio o sensible al mismo. ste y otros mtodos para analizar la concentracin mnima inhibitoria son muy tiles en el correcto tratamiento de enfermedades usando antibiticos. Con base en los resultados se puede ver por qu el etanol es usado tan frecuentemente como desinfectante para deshacerse de MOs y demuestra que por lo menos para la bacteria y hongo usado, la ampicilina no sera un antibitico efectivo. Bibliografa
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