Introduo

A espectrofotometria o mtodo de anlises ptico mais usado nas investigaes biolgicas e fsico-qumicas. Utiliza-se o espectrofotmetro como instrumento no qual permite comparar a radiao absorvida ou transmitida por uma soluo que contm uma quantidade desconhecida de soluto, e uma quantidade conhecida da mesma substncia. A absoro das radiaes ultravioletas, visveis e infravermelhas depende das estruturas das molculas, e caracterstica para cada substncia qumica. Quando a luz atravessa uma substncia, parte da energia absorvida (absorbncia): a energia radiante no pode produzir nenhum efeito sem ser absorvida. A cor das substncias se deve a absoro (transmitncia) de certos comprimentos de ondas da luz branca que incide sobre elas, deixando transmitir aos nossos olhos apenas aqueles comprimentos de ondas no absorvidos. Esta tcnica constitui um dos mais amplos caminhos usados pelos qumicos analticos para determinao de espcies moleculares em soluo. A grande maioria dos elementos da tabela peridica pode ser determinada usando uma tcnica apropriada de absoro molecular. A energia associada s transies em uma molcula poliatmica compreende: Emolcula =Eeletrnica +Erotacional, onde: Energia eletrnica est associada distribuio dos eltrons em torno dos ncleos atmicos; Energia vibracional relaciona-se com a vibrao dos tomos ou grupos de tomos em torno das posies de equilbrio nas ligaes; Energia rotacional associa-se rotao da molcula em torno do seu centro de gravidade. A curva de calibrao a funo que descreve a resposta de um detector sobre uma faixa de concentrao e usada para prever a concentrao de uma amostra desconhecida. Aps decidir as condies para a analise, necessrio preparar uma curva de calibrao com uma series de solues-padro que englobem a regio de concentrao esperada para as amostras. Idealmente, os padres de calibrao devem apresentar composio prxima das amostras a serem analisadas, no apenas com respeito concentrao do analito, mas tambm em relao s concentraes das outras espcies na matriz da amostra, de modo a minimizar os efeitos dos vrios componentes da amostra na absorbncia medida.

Objetivos
Construo do espectro de a absoro do complexo Fe(II)-ortofenantrolina e Construo da curva de calibrao para a determinao espectrofotomtrica Determinao de ferro em amostra de frmacos. seleo do comprimento de onda para determinao espectrofotomtrica do ferro; de ferro usando o reagente ortofenatrolina;

Materiais e Instrumentos
Espectrofotmetro para a regio do UV/Vis; Cubetas espectrofotomtricas; Bqueres; Bales volumtricos (50 e 100 mL); Pipetas volumtricas (1, 2 e 5 mL); Pipetas graduadas; Pra de suco.

Reagentes e Solues
Soluo contendo 50 mg/L de ferro; Soluo de ortofenantrolina 0,1% m/v em lcool; Soluo de cido ascrbico 5% m/v; Soluo de acetato de sdio 2 mol/L 10% m/v; Amostra do frmaco Per Fer (Sulfato ferroso).

Procedimentos

Preparo das amostras:

Adicionaram-se certa quantidade de gua em cada um, dos trs bales volumtricos de 200mL disponveis na prtica; Uma pipeta volumtrica foi ambientalizada com o frmaco (sulfato ferroso), e com o auxilio dessa pipeta, coletou-se trs alquotas de sulfato ferroso nas medidas de 1, 2 e 3 mL e adicionou-as cada medida em um balo volumtrico contendo gua; Adicionou-se 0,2 mL de H2SO4 concentrado nos bales volumtrico contendo a gua e amostra e completou os bales com gua destilada; Tampou o balo e homogeneizou a soluo. Preparo de solues padro para construo de curva analtica:

Uma pipeta volumtrica foi ambientalizada com a soluo padro de Fe(II), e com o auxilio dessa pipeta, coletou-se cinco alquotas dessa soluo padro nas medidas de 1, 2, 3, 4 e 5mL na concentrao de 50mg/L e transferiu para bales de 50mL; Pipetou-se 2,5mL de cido ascrbico soluo padro de Fe(II) nos bales volumtricos contendo as solues padres; Deixou-se em repouso por 10minutos; Pipetou-se 5mL de ortofenotrolina e adicionou nos bales contendo as solues padres; Adicionou-se 3mL de acetato de sdio Completaram-se os bales volumtricos at a marca de aferio com gua destilada. Preparo da soluo em branco:

Colocou-se 1mL de soluo padro de Fe(II) em um balo volumtrico de 200ml e adicionou-se; 0,2 mL de H2SO4 concentrado, 2,5 mL de cido ascrbico, 5mL de ortofenotrolina e 3mL de acetato de sdio. Construo do espectro de absoro do complexo Fe(II)-ortofenantrolina:

Foi construdo o espectro de absoro com a soluo correspondente ao penltimo ponto da curva de calibrao (4mg/L) e determinou-se o comprimento de onda de mximo absoro. Construo da curva analtica e determinao do ferro nas amostras:

Determinou-se o comprimento de onda de mximo absoro, as absorbncias das cincos solues em relao soluo em branco e construir curva de calibrao usando uma planilha eletrnica; Determinaram-se as absorbncias das solues das amostras, interpolou-se na curva analtica e determino-se a concentrao de ferro nas amostras do frmaco(sulfato ferroso) levando em consideraes as diluies realizadas.

Resultados e Discusso
Medicamentos para o controle de anemia, normalmente empregam o Fe (II) como princpio ativo, sendo mais comum o uso de sulfato ferroso. Assim como para qualquer outro tipo de medicamento o controle da quantidade de princpio ativo extremamente importante, pois a dosagem sub-teraputica ou excesso pode agravar o estado de sade do paciente ou mesmo lev-lo ao bito. O Fe (II) pode ser determinado espectrofotometricamente com a utilizao de um reagente bastante seletivo a o-fenantrolina, cuja frmula : C12H8N3. A o-fenantrolina reage com o Fe (II) em meio cido, formando um complexo de cor vermelhoalaranjado. Uma vez formada a cor do complexo estvel por um longo perodo, apresentando absoro que obedece a lei de Beer, nos comprimentos de onda entre 480 a 520nm (timo em 508nm). Esse complexo mostra uma composio de 3 ligantes (o-ortofenatrolina) abaixo: Reao: Fe2+ + 3 Fen H+ Fe (Fen)32+ + 3 H+ lenta e depende do pH. para 1 centro metlico [ferro (II)] conforme a reao

Antes de adicionar a orto fenantrolina na soluo padro, adicionou-se cido ascrbico nesta, com a finalidade de manter o ferro no estado de oxidao 2+, reduzindo os ons de ferro que foram oxidados, de 3+ em 2+. Adicionou-se o acetato de sdio com a finalidade de formar um sistema tampo, evitando-se variaes bruscas do pH. A Tabela 1 mostra os valores de absorbncia achados no comprimento de onda de mxima absoro (508 nm).
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Tabela 1 Soluo Comprimento de onda, (nm) Absorvncia 1 508 2 508 3 508 4 508 5 508

0,368

0,754

1,131

1,432

1,432

Atravs dos valores contidos na Tabela 1 pde-se determinar o grfico (figura 1), equao da reta e fator de correlao abaixo:

Figura1 Curva de calibrao Equao da reta: y = 0,3627x + 0,0116

Fator de correlao: R2 = 0,9982

Utilizando a interpolao dos valores das absorbncias das triplicatas da amostra na curva analtica, pode-se determinar as concentraes do frmaco e posteriormente determinou-se a mdia desses concentraes. y = 0,3627x + 0,0116 Substituindo-se o valor da 1 triplicata: 0,183 = 0,3627x + 0,0116 x = 0,472 mL/L y = 0,3627x + 0,0116 Substituindo-se o valor da 2 triplicata: 0,207 = 0,3627x + 0,0116
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x = 0,539mL/L y = 0,3627x + 0,0116 Substituindo-se o valor da 3 triplicata: 0,208 = 0,3627x + 0,0116 x = 0,541 mL/L Mdia das contraes das amostras: x = 0,517 mL/L Esse valor foi multiplicado por 50 e por 200, devido o fator de diluio: 5173 mL/L / 1000 5,173 mL.

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Concluso
A partir do comprimento de onda de mxima absoro para o complexo formado entre o ferro e a orto-fenentrolina, pde-se construir a curva de calibrao para a determinao espectrofotomtrica de ferro no frmaco. Com o auxlio da equao da reta da curva de calibrao e das absorbncias das amostras, determinou-se a concentrao de ferro contido na amostra do frmaco.

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Referncias Bibliogrficas
HARRIZ, Daniel C. Anlise Qumica Quantitativa, 5 Ed., Rio de Janeiro. LTC, 2001. JEFFRY BASSET MENDHAM DENNEY Vogel Anlise Qumica Quantitativa, Rio de Janeiro, RJ. Editora LTC Livros Tcnicos e Cientficos Editora S. A. 2002.

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