BC0411 - Transformaes Bioqumicas Cadeia de Transporte de eltrons e Fosforilao Oxidativa

Profa Ana Paula de Mattos Aras Centro de Cincias Naturais e Humanas e-mail: ana.areas@ufabc.edu.br 01/04/2008

Energtica corporal
O corpo humano em repouso consome ~ 420 kJ / h, um pouco mais do que uma lmpada incandescente de 100 W. As necessidades energticas corporais so atendidas principalmente por eventos eletroqumicos na mitocndria. Na mitocndria desenvolvido um potencial modesto de 0,2 V, mas uma corrente de ~ 500 A, representando um movimento transmembrnico de ~ 3 x 1021 prtons / s, que dirige a sntese de ATP.

Organismos aerbicos consomem O2 e liberam CO2 no processo de oxidao metablica

A completa oxidao da Glicose se resume nesta equao: C6H12O6 + 6 O2 6 CO2 + 6 H2O

Numa primeira etapa, os tomos de C da Glicose so oxidados: C6H12O6 + 6 H2O 6 CO2 + 24 H+ + 24 e-

Na segunda, o oxignio molecular reduzido: 6 O2 + 24 H+ + 24 e12 H2O

Os 12 pares de e- so transferidos para NAD+ e FAD, nas reaes da Gliclise e do Ciclo do cido Ctrico, gerando NADH e FADH2. Os eltrons transferidos participam de uma seqncia de oxidao-reduo em centros redox em 4 complexos enzimticos antes de reduzir O2 a H2O. Durante o processo, H+ so expelidos da mitocndria, produzindo um gradiente. !G produzido dirige a sntese de ATP num processo conhecido como Fosforilao Oxidativa.

A mitocndria
Na mitocndria ocorre o metabolismo oxidativo eucaritico. Nela esto: Piruvato desidrogenase, enzimas do Ciclo do cido Ctrico, enzimas que catalisam a oxidao de cidos graxos e as protena redox envolvidas no transporte de eltrons e na Fosforilao Oxidativa. Por esta razo, a mitocndria freqentemente chamada de casa de fora da clula.

Anatomia mitocondrial
A mitocndria uma organela em forma de elipse, medindo de 0,5 a 1 mm (o tamanho de uma bactria). Uma tpica clula eucaritica contm ~ 2000 mitocndrias, que ocupam ~ 1/5 da clula. A mitocndria formada pela membrana externa e contm uma membrana interna com invaginaes (crista mitocondrial). O nmero de invaginaes reflete a atividade respiratria da clula. As protenas mediando a cadeia de transporte de eltrons e a Fosforilao oxidativa esto na membrana interna da mitocndria. Ento a taxa de respirao varia com a rea de superfcie da membrana. A membrana interna divide a mitocndria em matriz e espao intermembrnico.

Anatomia mitocondrial
A matriz mitocondrial uma soluo gelatinosa que contm enzimas solveis do metabolismo oxidativo, assim como substratos, cofatores nucleotdicos e sais inorgnicos. A matriz tambm contm a maquinaria gentica mitocondrial DNA, RNA e ribossomos, que geram quase que a totalidade das protenas desta organela. A crista mitocondrial forma microcompartimentos que restringem a difuso de substratos e ons entre o espao intercristal e intermembrnico. Isto resulta num maior gradiente de pH, que implica na maior eficincia de sntese de ATP.

Sistemas de transporte mitocondriais

Como membranas bacterianas, a membrana mitocondrial externa contm protenas que permitem a difuso de molculas relativamente grandes (~ 10 kDa). O espao intermembrnico corresponde ao citossol, em termos de concentraes de metablitos e ons. A membrana interna (~ 75% de protena em massa) permevel a O2, CO2 e H2O. Possui, alm das protenas do transporte de eltrons, protenas transportadoras de metablitos, como ATP, ADP, piruvato, Ca2+ e fosfato. A permeabilidade controlada da membrana interna permite a gerao de gradientes de ons e na compartimentalizao das funes metablicas do citossol e da mitocndria.

Sistemas de transporte mitocondriais

NADH pode ser transportado para a mitocndria pelo sistema malatoaspartato, com oxaloacetato como intermedirio. NADH tambm pode ser transportado pelo sistema glicerofosfato. ATP e ADP possuem sistema de transporte com controle conformacional.

Transporte de eltrons
A transferncia de e- at O2 passa por centros redox mveis e outros complexos proticos integrais de membrana. A seqncia dos carreadores reflete os potenciais de reduo relativos. O processo total do transporte de e- exergnico. A afinidade de um substrato oxidado por e- aumenta com o seu potencial padro de reduo. A oxidao de NADH altamente exergnica: NAD+ + H+ + 2 e1/2 O2 + 2 H+ + 2 eNADH H2O E = -0,315 V E = 0,815 V

Como a semi-reao de O2 possui potencial padro de reduo maior (maior afinidade por e-). A equao geral : 1/2 O2 + NADH + H+ H2O + NAD+

Esquema da cadeia de transporte de eltrons

Os eso transportados das espcies com menor potencial de reduo para as de maior potencial. A seqncia de eventos da cadeia foi elucidada atravs do uso de inibidores (em vermelho) e da medida dos potenciais redox.

Inibidores da Cadeia de Transporte de eltrons

Toxina de planta Usado como inseticida Barbitrico Usado como sedativo Antibitico

Transporte de eltrons mitocondrial

Eltrons so transferidos entre Complexos I e III pela coenzima Q e entre Complexos III e IV pela protena de membrana Citocromo C.

Complexo I: NADH-Coenzima Q oxidorredutase

O complexo protico I possui vrios cofatores que funcionam como conversores, uma vez que NADH s pode doar 1 par de e-, enquanto os Citocromos s podem aceitar um e- por vez.

Cofatores do Complexo I: FMN, Coenzima Q (CoQ) e cluster 4Fe4S

Enquanto os eltrons so transferidos entre os centros redox do Complexo I, os prtons so translocados da matriz mitocondrial para o espao intermembrnico.

Complexo II: Succinato Coenzima Q oxidorredutase

Este complexo contm a enzima, do Ciclo do cido Ctrico, Succinato Desidrogenase, que transfere eltrons do Succinato para a Coenzima Q. Coenzima Q funciona como coletora de eltrons recebendo e- dos complexos I e II. Alm disso, pode receber e- do FADH2 produzido pelo sistema glicerofosfato. Complexo II possui como cofatores FAD, clusters Fe-S e o citocromo b560.

Complexo III: Coenzima Q-citocromo C oxidorredutase

Complexo III transfere eda CoQ reduzida para o Citocromo C

Ciclo Q
CoQH2 sofre reoxidao em duas etapas, passando por um intermedirio estvel semiquinona, CoQ-. Estes eltrons so utilizados para reduzir duas molculas de citocromo. O anti-fngico Stigmatelin um inibidor do Ciclo Q.

Complexo IV: Citocromo c Oxidase

No complexo IV ocorre a reduo de O2 : 4 Citocromo C (Fe2+) + 4 H+ + O2 4 citocromo C (Fe3+) + 2 H2O O Complexo IV possui citocromos e tomos de Cu como cofatores.

Fosforilao oxidativa
A Sntese de ATP a partir de ADP + Pi (reao endergnica) acoplada ao processo de transporte de eltrons. Teoria quimiosmtica, proposta por Peter Mitchell em 1961. Acreditava-se, anteriormente, que a hidrlise de um composto de alta energia, como Fosfoenolpiruvato, dirigia a sntese de ATP. A teoria de Mitchell foi confirmada por algumas observaes: Fosforilao oxidativa requer membrana interna intacta. A membrana interna impermevel a ons, como H+, OH-, K+ e Cl- cuja difuso poderia desfazer gradientes. Transporte de eltrons resulta em translocao de prtons em mitocndrias intactas. Compostos que aumentam a permeabilidade da membrana interna a H+, permitem o transporte de e-, mas inibem a sntese de ATP, desacoplando os dois processos.

Acoplamento do transporte de eltrons e da sntese de ATP

ATP sintase
ATP sintase pode sintetizar e hidrolisar ATP. A enzima possui 2 subunidades: F0: poro transmembrnica da protena. F1: poro solvel da protena, localizada de forma perifrica na membrana F1

F0

F1 sofre modificaes conformacionais na sntese de ATP

O: open conformation, muito baixa afinidade pelos ligantes e cataliticamente inativa. L: loose conformation, liga fracamente aos ligantes. T: tight conformation, liga fortemente aos ligantes e cataliticamente ativa.

Desacoplamento da fosforilao oxidativa e da cadeia de transporte de eltrons

O transporte de e- e a sntese de ATP so totalmente acoplados. Compostos como 2,4-dinitrofenol (DNP) desacoplam os dois processos. DNP um cido fraco lipoflico, que atravessa membranas na forma neutra (protonada) e transporta ons para o outro lado da membrana, desfazendo o gradiente.

DNP age como um ionforo transportador de prtons.

Ao do 2,4-dinitrofenol (DNP)

Nos anos 20, DNP era utilizado para emagrecer, mas gerava efeitos colaterais graves, muitas vezes, fatais. Em condies fisiolgicas, o desacoplamento do transporte de e- e da Fosforilao oxidativa produz calor.

Controle do Metabolismo Oxidativo

Uma mulher adulta requer entre 1500 e 1800 calorias dirias, que corresponde ao !G de hidrlise de 200 mols de ATP. A quantidade total de ATP presente no corpo se mantm em nveis baixos (< 0,1 mol). Isto prev que ATP deve ser continuamente reciclado pelo organismo. Sono vs atividade fsica vigorosa: requerimento por ATP pode variar em at 100x. Por isso, existe regulao da Fosforilao Oxidativa.

Controle da Fosforilao Oxidativa

A reao da citocromo C oxidase irreversvel, sendo o ponto de controle da via. A enzima regulada pela disponibilidade de citocromo c reduzido (com Fe2+), cuja concentrao depende de NADH e ATP. Quanto maior a razo [NADH] / [NAD+] e menor a razo [ATP] / [ADP][Pi], maior [citocromo c reduzido] e maior a atividade da citocromo c oxidase, favorecendo a fosforilao oxidativa. Ex: Indivduo em repouso - a taxa de hidrlise de ATP, formando ADP + Pi mnima, e a razo [ATP] / [ADP][Pi] alta, desta forma, a [citocromo C] reduzido pequena e a taxa da Fosforilao Oxidativa mnima.

Controle integrado da Gliclise e do Ciclo do cido Ctrico

Ver adendo da aula

Metabolismo aerbico produz espcies ativas de oxignio

A reduo de O2 pode acontecer de forma parcial, gerando o radical superxido, que pode ser protonado, gerando HO2- . O2 + e O2 - .

O radical Hidroxila o mais potente em sistemas biolgicos, que formado a partir do Perxido de Hidrognio: H2O2 + Fe2+
. OH

+ OH- + Fe3+

O radical Hidroxila tambm pode ser formado pela reao de superxido e perxido de Hidrognio: O2- . + H2O2 O2 + H2O +
.

OH

Apesar do tempo curto de meia vida destes radicais, estas espcies so extremamente reativas e podem remover eltrons de outras molculas, iniciando uma reao em cadeia.

Algumas doenas degenerativas so associadas ao dano oxidativo na mitocndria

Alguns exemplos destas doenas so Mal de Alzheimer e de Parkinson. O aumento das reaes envolvendo radicais livres durante o curso do metabolismo oxidativo normal , em parte, responsvel pelo processo de envelhecimento. Indivduos com defeitos congnitos no DNA mitocondrial sofrem de sintomas tpicos da velhice, como dificuldades neuromotoras, surdez e demncia. Estes defeitos podem fazer com que as mitocndrias destes indivduos sejam mais susceptveis a espcies reativas de oxignio, geradas pela maquinaria de transporte de eltrons.

Mecanismos antioxidantes
Antioxidantes destroem radicais livres oxidativos. Em 1969, Irwin Fridovich descobriu que a Superxido dismutase (SOD) catalisa a converso do radical superxido a H2O2. SOD considerada a primeira linha de defesa contra espcies reativas de oxignio. H2O2 produzido na reao degradado a gua e oxignio pela enzima catalase e pela Glutationa peroxidase, que usa Glutationa como agente redutor.