Laboratrio de Qumica Analtica Henrique Bergamin Filho Centro de Energia Nuclear na Agricultura - USP

MISSO DA QUMICA ANALTICA

A seqncia analtica
Francisco Jos Krug fjkrug@cena.usp.br

Propor os meios para a determinao da composio qumica dos materiais

CEN 0260 Mtodos Instrumentais de Anlise Qumica - 2010

Procurando uma maneira alternativa para fazer anlises quantitativas

Procurando uma maneira alternativa para fazer anlises quantitativas Qual o teor de ferro no po ? 127 mg.kg-1 Fe

Adapatado de slide do Prof. Mauro Korn, DQ-UNEB

Adapatado de slide do Prof. Mauro Korn, DQ-UNEB

TRINDADE DA QUMICA ANALTICA

A seqncia analtica
problema

amostra

mtodo

Definio do problema Escolha do mtodo Amostragem Pr-tratamento da amostra Medida Calibrao Avaliao Ao

H. Bergamin Filho, 1996

fjkrug@cena.usp.br

A seqncia analtica
Definio do problema Escolha do mtodo Amostragem Pr-tratamento da amostra Medida Calibrao Avaliao Ao

Problema: Determinao do teor de Determina chumbo em acar acar Brasil : 307usinas

128 localizadas em SP

70% da produo de acar exportada

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Fonte: Unio da Agroindstria Canavieira de So Paulo - UNICA

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Acar: controle de qualidade (Pb)

A seqncia analtica
Codex Alimentarius Commission (CAC/FAO/WHO) Food Chemical Codex (FCC)

0,1 mg kg-1 Pb em dextrose e frutose 0,5 mg kg-1 Pb em sacarose, xaropes de glicose ou de frutose de milho
FAO/WHO CODEX ALIMENTARIUS COMMISSION. Codex Alimentarius. Rome: FAO; WHO, 1995. CX/FAC 96/17 NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES. Food Chemical CODEX. 4.ed. Washington: Committee on Food Chemicals Codex, Food and Nutrition Board, Institute of Medicine, National Academy of Sciences, 1996. p.400-401, 763-765

Definio do problema Escolha do mtodo Amostragem Pr-tratamento da amostra Medida Calibrao Avaliao Ao

fjkrug@cena.usp.br

Escolha do mtodo
Espectrometria de absoro atmica com forno de grafite (GFAAS) Limite de deteco = 0,005 mg kg-1 Hg Coeficiente de variao dos resultados <10% 2 min/amostra custo: <R$ 10,00/determinao
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Tubo de grafite

Detalhe do forno

Forno de grafite Varian

Sinal analtico proporcional ao teor de chumbo

0,06 AA-BG BG

Sinal analtico proporcional ao teor de chumbo

0,04

Altura do pico ou rea so, idealmente, proporcionais, concentrao

0,02

0,00 0 1 2 3 4 5 6
0 Tempo (s) t

Definio do problema
Determinao de elementos de interesse em nutrio humana e em toxicologia
H Li Na K Rb Cs Fr Be Mg Ca Sr Ba Ra

Absorbncia

Elementos essenciais ao homem (animais)

B Al Sc Y
57 a 71 89 a 103

He F Cl Br I At Ne Ar Kr Xe Rn

C Si Ge Sn Pb ?

N P As Sb Bi

O S Se Te Po

Ti Zr Hf

V Nb Ta

Cr Mo W

Mn Tc Re

Fe Ru Os

Co Rh Ir

Ni Pd Pt

Cu Ag Au

Zn Cd ? Hg

Ga In Tl

maiores

Elementos-trao

Importantes no confirmados

A seqncia analtica
Definio do problema Escolha do mtodo Amostragem Pr-tratamento da amostra Medida Calibrao Avaliao Ao

Escolha do mtodo
- Tcnica ou princpio analtico: (AAS, OES, XRF, NAA, MS) - Mtodo analtico: (GFAAS, ICP-OES, ICP-MS) - Procedimento analtico: determinao de chumbo em acar por GFAAS determinao simultnea de Al, B, Ba, Ca, Cd, Cr, Cu, Fe, Mg, Mn, Ni, Pb, Si, Sr e Zn em guas por ICP-OES

Mtodos de espectrometria atmica para determinao de elementos

- Tcnica ou princpio analtico: (AAS, OES, XRF, NAA, MS) - Mtodo analtico:

(GFAAS, ICP-OES, ICP-MS) - Procedimento analtico:

determinao de chumbo em acar por GFAAS determinao simultnea de Al, B, Ba, Ca, Cd, Cr, Cu, Fe, Mg, Mn, Ni, Pb, Si, Sr e Zn em guas por ICP-OES
Espectrometria de fluorescncia atmica
com gerao de hidretos (HG-AFS)

Viso holstica

Espectrometria de absoro atmica

com chama (FAAS) com forno de grafite (GFAAS) com gerao de hidretos (HG AAS) Com gerao de vapor a frio (CV AAS)

Espectrometria de emisso ptica

com plasma acoplado indutivamente (ICP OES)

Espectrometria de massas
com plasma acoplado indutivamente (ICP-MS)

Aps o recebimento da amostra, o resultado dever ser emitido em quanto tempo ?

1 min? 1h? 10 h ? 1 dia ?

Limites de deteco tpicos e custo instrumental das principais tcnicas espectroanalticas

Qumica limpa

FAAS

US$ 20000 US$ 70000

custo

ICP-OES Radial ICP-OES Axial

US$ 30000 US$ 40000 US$ 80000

HGAAS GFAAS

Confiabilidade metrolgica

US$ 160000

ICP-MS
0,1 1 10 100 1000

0,0001

0,001

0,01

Limites de deteco (g / L)

Figura adaptada de http://www.perkinelmer.com/

Anlise de alimentos e espectrometria de absoro atmica (AAS)

H Li Na K Rb Cs Fr Be Mg Ca Sr Ba Ra Sc Y
57 a 71 89 a 103

Anlise de alimentos: AAS e ICP OES

He H He F Cl Br I At Ne Ar Kr Xe Rn Li Na K Rb Cs Fr Be Mg Ca Sr Ba Ra Sc Y
57 a 71 89 a 103

B Al Ti Zr Hf V Nb Ta Cr Mo W Mn Tc Re Fe Ru Os Co Rh Ir Ni Pd Pt Cu Ag Au Zn Cd Hg Ga In Tl

C Si Ge Sn Pb

N P As Sb Bi

O S Se Te Po

B Al Ti Zr Hf V Nb Ta Cr Mo W Mn Tc Re Fe Ru Os Co Rh Ir Ni Pd Pt Cu Ag Au Zn Cd Hg Ga In Tl

C Si Ge Sn Pb

N P As Sb Bi

O S Se Te Po

F Cl Br I At

Ne Ar Kr Xe Rn

FAAS

GFAAS

CVAAS

HGAAS

Outras tcnicas

ICP OES

GFAAS

CVAAS

HG ICP OES

Outras tcnicas

Validao de mtodos

Validao de mtodos
A validao um processo que estabelece as caractersticas de desempenho e as limitaes de um mtodo analtico, permitindo identificar quais so os fatores que podem afetar as caractersticas de desempenho:

A validao de um mtodo estabelece, a partir de estudos sistemticos em laboratrio (s), se um mtodo possui caractersticas apropriadas para produzir resultados para a soluo do problema analtico.

O processo de validao estabelecer quais so os analitos que podero ser determinados, especificando-se a matriz ou as matrizes e os riscos de interferncias. Nas condies estabelecidas, ser possvel prever quais sero os nveis de preciso e exatido alcanados. A validao deve fornecer subsdios ao usurio do mtodo, para que se saiba, com antecedncia, em que condies o mtodo selecionado ser apropriado para a obteno de resultados que possibilitem a soluo do problema.

Adaptado de CITAC / EURACHEM GUIDE, 1998

Adaptado de CITAC / EURACHEM GUIDE, 1998

Validao de mtodos
Caractersticas de desempenho mais comuns

Preciso das medidas

A incerteza devida ao acaso no valor de uma medida x, ou a correspondente incerteza na estimativa de um resultado analtico, representada pela preciso das medidas: x= mdia de n medidas s=estimativa do desvio-padro

Preciso (repetibilidade e reprodutibilidade) Sensibilidade Limite de deteco Exatido Calibrao Robustez

Adaptado de CITAC / EURACHEM GUIDE, p.29, 2002

xs

s=

1 n-1

j=1

( xj x )
s

2 1/2

Quando n>>20

Distribuio normal ou Gaussiana

Desvio-padro relativo (rsd do ingles relative standard deviation)
rsd = s x (estimativa do rsd)
y

Coeficiente de variao (CV)

CV = rsd x 100 = % rsd
x

y = exp[-(x - )2/22](2)1/2

Distribuio normal ou Gaussiana

y
y

Propriedades da distribuio normal

y

68%

95%

68%

-1

+1 y

-2

+2

-1

+1

x
99,7%

-3

+3

Sensibilidade

Sensibilidade (IUPAC)
A derivada da funo y = g (c), dy/dc, a sensibilidade do procedimento analtico. Se a curva analtica for no linear, a sensibilidade uma funo da concentrao. Diz-se que um mtodo tem boa sensibilidade, quando uma pequena variao na concentrao c causa uma grande mudana na medida y, ou seja, quando a dy/dc for grande.
dyB Medida (y)

Mtodo B

y = f(c)

Mtodo A

dyA

dc

Concentrao (c)

Curva analtica de calibrao

cFe / mg L-1 0.0 2,0 4,0 6,0 8,0 10,0 sinal 0,000 0,120 0,239 0,359 0,478 0,598 mg kg-1Fe 0 20 40 60 80 100
A = 0,0598 CFe (mg L-1)
0,2

Curva analtica de calibrao

sinal 0,000 0,120 0,239 0,359 0,478 0,598

0,6

0,6

sinal

sinal

0,4

0,4

0,2

2,0

4,0

6,0

8,0

10

20

40

60

80

100

cFe / (mg

L-1)

mg kg-1Fe

Limite de deteo

JCGM 2008

VIM-3 Vocabulrio Internacional de Metrologia (2008)

4.18 detection limit limit of detection measured quantity value, obtained by a given measurement procedure, for which the probability of falsely claiming the absence of a component in a material is , given a probability of falsely claiming its presence. NOTE 1 IUPAC recommends default values for and equal to 0.05. NOTE 2 The abbreviation LOD is sometimes used. NOTE 3 The term sensitivity is discouraged for detection limit.

LOD = limite de deteo

mbr = mdia das medidas do branco mamr = mdia das medidas da amostra

Branco mbr = probabilidade de a substncia estar presente quando no est. LOD

= probabilidade de a substncia
no estar presente quando ela est.

mam

Exatido dos resultados Soluo do branco (IUPAC, 1978)

Uma soluo do branco (NT ou simplesmente branco) uma soluo que intencionalmente no contm o analito, mas que possui, sempre que possvel, a mesma composio da soluo da amostra. Um branco do solvente o prprio solvente.

Concordncia entre a medida realizada e o valor verdadeiro

Teste t de Student
fjkrug@cena.usp.br

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CITAC / EURACHEM GUIDE, 2002

Preparado por: CITAC (The Cooperation on International Traceability in Analytical Chemistry) e EURACHEM (A Focus for Analytical Chemistry in Europe)

A seqncia analtica
Definio do problema Escolha do mtodo Amostragem Pr-tratamento da amostra Medida Calibrao Avaliao Ao
www.buchi-analytical.com

Horwitz, W., "Nomenclature for sampling in Analytical Chemistry", IUPAC, Pure Appl. Chem.,v.62, n.6, p.1193-1208, 1990.

Horwitz, W., "Nomenclature for sampling in Analytical Chemistry", IUPAC, Pure Appl. Chem.,v.62, n.6, p.1193-1208, 1990.

Amostra: poro que representa o todo (sample) Sub-amostra: amostra levada para o laboratrio de anlise (subsample) Amostra para anlise: amostra preparada no laboratrio de anlise (test sample) Poro amostrada: material pesado ou selecionado para a anlise (test portion)
Moagem 100 500 mg Digesto

Poro amostrada: material pesado ou selecionado para a anlise

Poro amostrada
Amostra laboratorial

Incertezas na seqncia analtica

Eficincia, perdas, contaminao ? Eficincia, perdas, contaminao ?

homognea?

no

quartear misturar peneirar moer homogeneizar

Apropriada ?

Perdas, contaminao ?

Calibrao da balana ?

sim Poro amostrada a alquota deve representar a amostra laboratorial; para garantir que a poro seja homognea, necessrio reduzir o tamanho das partculas (moagem); no deve haver segrega o; Devem-se prever riscos de contaminao Amostra para anlise

Amostragem

Preparo da amostra

Pesagem da poro amostrada

Decomposio

Separao de interferentes

Estabilidade do analito ?

Estabilidade do analito ?
Ajuste qumico do analito Medida instrumental da concentrao do analito Resultados

Eficincia da Converso ?

Calibrao com solues-padro, CRMs

Sequncia adaptada de Peter Bode

Exemplo: Homogeneizao de amostras biolgicas Homogeneiza biol

Proporciona diminuio de diversidade qumica/biolgica Moagem pode proporcionar contaminaes ou perdas de analitos Procedimentos dependem da quantidade/tamanho da amostra, parmetros fsico-qumicos, dureza, umidade, etc No existem procedimentos-padro
Ph. Quevauviller, Sci. Total Env., v. 176, p.141, 1995 55
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Composio aproximada de materiais usados em equipamentos de moagem

gata % SiO2 Al2O3 Na2O K 2O Fe2O3 MnO CaO MgO xidos 99,91 0,02 0,02 0,01 0,01 0,01 0,01 0,01 2,0 0,5 3,0 porcelana % 61,0 34,0 alumina% 16,5 83,0 xido de zircnio SiO2 Al2O3 Na2O K 2O Fe2O3 MnO CaO MgO ZrO 1,5
fjkrug@cena.usp.br

% 0,1

0,03

1,5 97,0
56

B. Markert. Sample preparation (cleaning, drying, homogeneization) for trace element analysis in plant matrices. Sci.Total Env., v.176, p.45-61, 1995

Composio aproximada de materiais usados em equipamentos de moagem

Carbeto de boro % Fe Cr C Si Mn Co Mo V W 94,0 6,0 0,3
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Carbeto de tungstnio %

Titnio % 0,1

Ao cromo % 84.0 12,0

Ao carbono % 99,11

A seqncia analtica
Definio do problema Escolha do mtodo Amostragem Pr-tratamento da amostra Medida Calibrao Avaliao Ao

0,1

21-23 0,1

0,08

1,65 0,3 0,3

0,15 0,25 0,40

0,3 0,5

B. Markert. Sample preparation (cleaning, drying, homogeneization) for trace element analysis in plant matrices. Sci.Total Env., v.176, p.45-61, 1995

Incertezas na seqncia analtica Pr-tratamento da amostra

Apropriada ? Perdas, contaminao ? Calibrao da balana ? Eficincia, perdas, contaminao ? Eficincia, perdas, contaminao ?

oportuno observar que, entre todas as operaes analticas, a etapa de pr-tratamento das amostras a mais crtica. Em geral, nesta etapa que se cometem mais erros e que se gasta mais tempo. tambm a etapa de maior custo.

Amostragem

Preparo da amostra

Pesagem da poro amostrada

Decomposio

Separao de interferentes

Estabilidade do analito ?

Estabilidade do analito ?
Ajuste qumico do analito Medida instrumental da concentrao do analito Resultados

Eficincia da converso ?

Calibrao com solues-padro, CRMs

Sequncia adaptada de Peter Bode

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Parmetros para escolha do mtodo de pr-tratamento :

Elementos ou compostos a serem determinados Faixas de concentrao Tipo, composio, e homogeneidade das amostras analticas Quantidade de amostra disponvel para anlise Quantidade de amostra necessria para as determinaes Exatido, preciso, seletividade e limite de deteco Requisitos especiais: local da anlise, controle na produo Aspectos restritivos: custos, tempo disponvel, espao, analista

Principais razes para o pr-tratamento

- homogeneizao - dissoluo de amostras slidas - separao de substncias interferentes - pr-concentrao dos analitos

Anlise de materiais orgnicos

Ph. Quevauviller, Sci.Total Env., 176 (1995)141

Teores de carbono em diferentes materiais

Matriz Tecido Vegetal Amostra Alga marrom Farinha de trigo Espinafre Folha de lamo Folha de faia Folha de pltano Grama Trevo Acculas de pinus Acculas de abeto Raz de abeto Casca de abeto Polpa de pssego Manteiga, leos vegetais, gorduras vegetais, sebo % Carbono 35 45 38 44 48 48 39 36 51 48 49 36 40 74...78

Teores de carbono em diferentes materiais

Matriz Tecido Animal Amostra Leite em p desnatado Leite em p carne magra Fgado bovino Peixe Sangue humano Sangue de porco Tecido de ostra Rim de porco Msculo (tecido) Ovo de galinha Glucose Aucar de cana (sacarose) Lactose Celulose Amido % Carbono 42 52 50 51 52 52 52 46 49 41 50 37 42 42 43 41

Glicdeos

Lipdeos

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Classificao dos mtodos de decomposio de materiais biolgicos Via seca

Sistemas abertos
Forno tipo mufla com aquecimento resistivo Forno de micro-ondas

Sistemas fechados
Frasco de combusto de Schniger Trace-O-Mat Combusto iniciada por radiao micro-ondas

Via mida
Sistemas abertos
Digesto em tubos com aquecimento por conveco
HNO3 + HClO4 H2SO4 + H2O2 + Li2SO4 + Se

Sistemas fechados
HNO3

High Pressure Asher Assistida por radiao micro-ondas

HNO3 + H2O2

http://www.codexalimentarius.net/web/index_en.jsp

CODEX STAN 53-1981

CODEX STAN 72 1981

CODEX STAN 72 1981

0,02 mg.kg-1 Pb
Formerly CAC/RS 72-1972. Adopted as a world-wide Standard 1981. Amended 1983, 1985,1987. Revision 2007

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CODEX STAN 193-1995 1 Adopted 1995, Revised 1997, 2006, 2008 CODEX GENERAL STANDARD FOR CONTAMINANTS AND TOXINS IN FOODS

CODEX STAN 193-1995 1

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