PROCEDIMIENTO En este laboratorio se trabaj con un antibiograma, que consiste en el estudio de la sensibilidad o resistencia de determinado microorganismo a varios antibiticos.

Con esta informacin, se clasifica el efecto del antibitico sobre esa determinada colonia en: Resistente (R), Intermedio (I) y Sensible (S). Partimos de un cultivo puro de 24 horas. La cepa es potencialmente patgena de humano y como crece en nuestro cuerpo, la incubacin se ha hecho a 37C. De este cultivo se extrae una colonia y en un tubo de ensayo se diluye la colonia en suero fisiolgico, dando una turbidez establecida para su siembra. Se utiliz un agar en que grmenes y antibiticos puedan difundir correctamente: agar de Muller-Hinton. Tras la incubacin (24 hrs) va a aparecer toda la superficie llena de colonias y alrededor de cada disco aparecer o no un halo de inhibicin dependiendo de que el germen sea sensible a ese antibitico. Este halo lo medimos con regla y lo comparamos con una tabla de susceptibilidad a los antibiticos. Se utilizan para poner los antibiticos, unos discos impregnados que llevan unas letras que nos indican el antibitico del que se trata y un nmero que indica la concentracin en mg/ml que tena la disolucin en la que se impregnaron. Los antibiticos en general pueden ser de amplio espectro o de espectro reducido, estos ltimos van a matar grmenes ms especficamente. Dependiendo del origen o localizacin de la infeccin, se va a utilizar uno u otro UROCULTIVO 1. ORINA OBTENIDA POR MICCIN MEDIA.

A. Material necesario Gasas estriles. Jabn neutro. Recipiente de boca ancha con tapa de rosca hermtico y estril. Bolsas de plstico o colectores estriles para nios.

B. Obtencin de la muestra La muestra idnea es la primera miccin de la maana, ya que permite la multiplicacin de bacterias durante la noche - Tcnica para mujeres: La paciente debe quitarse la ropa interior. Se lavar las manos cuidadosamente con agua y jabn, las enjuagar con agua y las secar con una toalla limpia. Se separarn los labios mayores y menores, y los mantendr separados en todo momento hasta que se haya recogido la orina. Con una gasa enjabonada se lava bien la vulva pasndola de delante hacia atrs, se repetir el proceso un total de 4 veces. Enjuagar cuidadosamente con agua hervida para eliminar los restos de jabn. Se indicar a la paciente que orine desechando los 20-25 primeros mililitros, tras lo cual y sin interrumpir la miccin, se recoger el resto de la orina en el recipiente. El frasco debe sujetarse para que no tome contacto con pierna, vulva o ropa del paciente. Los dedos no deben tocar el

borde del frasco o su superficie interior. - Tcnica para hombres: Lavado de manos con agua y jabn. Retraer completamente el prepucio, que se mantendr as en todo momento, hasta que se haya recogido la orina. Limpiar el glande con jabn neutro. Eliminar los restos de jabn enjuagndolo con agua hervida. Se pedir al paciente que orine desechando los primeros 20-25 mililitros para, sin interrumpir la miccin, recoger el resto de la orina en recipiente estril. - Tcnica para nios: En nios y nias mayores la orina se recoger de forma similar a los adultos. En nios y nias ms pequeos, la orina se recoger en colectores o bolsas estriles especialmente diseadas para ellos de la siguiente forma: Lavado cuidadoso de los genitales y rea perineal igual que en los adultos. Colocar la bolsa de plstico o el colector. Vigilar la bolsa cada 30 minutos y tan pronto como el nio haya orinado, deben retirarse y enviarse al laboratorio para su procesamiento. Si la miccin no se ha realizado en una hora, se repite la operacin colocando una nueva bolsa. Observaciones En pacientes ingresados con imposibilidad de recoger la muestra por s mismos, se realizar sondaje vesical por personal sanitario experto con las medidas aspticas oportunas. Para la investigacin de anaerobios es necesario que la orina se obtenga por puncin suprapbica. Para la bsqueda de micobacterias, la orina se recoge de la forma descrita anteriormente durante tres das consecutivos. En este caso el volumen de orina debe ser 100-150ml. y se elegir preferentemente la primera miccin de la maana. Cuando se sospecha la presencia de hongos el volumen ser superior a 20ml. y en el caso de parsitos se recoger la orina de 24 horas. ORINA DE PACIENTES CON CATETER PERMANENTE A. Material necesario Gasas. Alcohol 70 o solucin yodada. Jeringa o aguja estril. Recipiente estril. B. Obtencin de la muestra Se limpiar el catter con una gasa humedecida en alcohol o solucin yodada. Dejamos secar unos minutos. Pinchar directamente con la aguja el catter, por la zona desinfectada, aspirando entre 3-5ml. C. Transporte y conservacin Puede enviarse en la jeringa o pasar la orina a un recipiente estril. Si no puede llevarse al laboratorio inmediatamente, se debe refrigerar a 4C o utilizar tubos con conservante (cido brico al 2%) . D. Observaciones Como regla general se considera que la sonda vesical no es una muestra adecuada y que est justificado rechazar su procesamiento.

1.

INTRODUCCIN La reaccin de Widal, test basado en el principio de aglutinacin antgeno-anticuerpo, fue desarrollada por Georges Fernand Isadore Widal, prestigioso mdico francs, en Junio de 1896, para el diagnstico serolgico de la fiebre tifoidea. MICROBIOLOGA DE LA SALMONELLA TIPHY La Salmonella typhi es un bacilo Gram negativo anaerobio facultativo, que se encuentra dentro de la familia Enterobacteriaceae, gnero Salmonella, especie Entrica, subespecie entrica (I), y el serogrupo2 ESTRUCTURA ANTIGNICA DE LA SALMONELLA TIPHY El gnero Salmonella tiene una estructura antignica similar al resto de enterobacterias, con tres tipos de antgenos: 1. Antgeno somtico (O) 2. Antgeno flagelar (H) o (d) 3. Antgeno capsular o de envoltura (Vi) o (K) (especfico para Salmonella typhi, dublin, y paratyphi C) INTERPRETACIN CLNICA DE LA REACCIN DE WIDAL Un diagnstico de fiebre tifoidea puede considerarse si los ttulos iniciales se cuadruplican entre una y cuatro semanas. Sin embargo, el clnico no puede esperar este tiempo para establecer un tratamiento, por lo cual se debe considerar la

posibilidad de esta entidad con un ttulo aislado determinado. Este punto de corte depende de la prevalencia de salmonelosis en la comunidad estudiada, siendo as, se han establecido protocolos diagnsticos en varios pases, teniendo en cuenta los estudios realizados en sus regiones. En general, hay que tener en cuenta la fiebre tifoidea con ttulos Anti-O1:160-200 y/o H 160-200 en zonas endmicas; en zonas no endmicas se debe pensar con ttulos ms bajos Anti-O 1:50-100. Adems, una reaccin negativa no excluye el diagnstico de fiebre tifoidea en el contexto de un cuadro clnico compatible.

CONCLUSIONES 1. La reaccin de Widal no es el gold standard para el diagnstico de fiebre tifoidea. 2. La reaccin de Widal sobrediagnostica fiebre tifoidea teniendo en cuenta sus numerosas reacciones cruzadas. 3. Para la interpretacin de la reaccin de Widal se debe conocer la prevalencia de la fiebre tifoidea en una determinada rea. REACCIONES FEBRILES. OBJETIVO. El alumno realizar en el laboratorio las reacciones, con el fn de identificar la presencia de anticuerpos y dar el diagnstico serolgico de algunas enfermedades bacterianas. INTRODUCCION. Los antgenos febriles se usan para detectar anticuerpos en el suero del paciente contra la Salmonella, Brucella y Rickettisia (reaccion cruzada con Proteus OX-19. Salmonella. La reaccin de Widal en un mtodo serolgico usado comnmente en el diagnstico de las fiebres tifoideas, entrica y ondulante, la reaccin mide el ttulo del suero contra una suspensin de microorganismo conocidos. La Salmonella son bacilos no esporurlados aerobios gramnegativos. Hay tres especies clnicamente importantes de Salmonella: enteritidis, choleraeauis y thyphi. Tres sndromes principales, resultan de la infeccin por salmonella. 1. gastroenteritis ( la forma ms comn ). 2. fiebre tifoidea. 3. septicemia. Brucella. En esta prueba se detectan anticuerpos contra Brucella, casi todas las infecciones humanas por Brucella, se deben a B abortus, B suis o B melitensis. La brucelosis es una enfermedad aguda o crnica que se manifiesta principalmente por escalofros, fiebre y debilidad, ocasionalmente episodios febriles ondulatorios que han dado lugar al nombre de fiebre ondulante de la enfermedad. Rickettsias. Las especies de Rickettisias que causan tifo tienen componentes antignos idiotpicos con Proteus ( OX-19, OX-2 OX-K), esta relacin se us en el diagnstico de tifo. Las especies de Rickettsia son cocobaciolos pequeos plemrfos que funcionan como parsitos intracelulares. La inmunidad por lo general es de larga duracin, con algunas excepciones. El tifus endmico puede causar recaadas 10 o 20 aos despus de la aparente recuperacin (enfermedad de Grill Zinseer). La fiebre de las trincheras se caracteriza por las recadas.

FUNDAMENTO. Estas reacciones se basan en el hecho de que cuando el organismo humano es invadido por agentes infecciosos, responde produciento anticuerpos aglutinantes contra ellos los cuales se ponen de manifiesto al entrar en contacto el anticuerpo con el anticuerpo especfico. El ttulo del anticuerpo depende del tipo y curso de la enfermedad. Para que los resultados tengan un valor diagnstico el ttulo de ellos debe aumentar. MATERIAL. 1. placas de vidrio con divisiones 2. gradilla. 3. tubo de hemlisis sin anticoagulante 4. pipeta pasteur con bulbo. 5. pipeta serolgica de 0.1ml 6. aplicadores de madera 7. fuente luminosa 8. jeringa desechable 9. torundas con alcohol. EQUIPO. 1. agitador. 2. centrfuga elctrica. 3. bao mara. REACTIVOS. 1. antgeno O Salmonella typhi 2. antgeno Paratyphi A 3. antgeno H Salmonella typhi 4. antgeno Paratyphi B 5. antgeno Brucella aborturs 6. antgeno Proteus OX-19 PROCEDIMIENTO. Puede efectuarse por medio de dos maneras. Mtodo de aglutinacin rpida en placa. 1. Anotar el antgeno correspondiente en la placa de vidrio. 2. Depositar en cada cuadro 0.04ml de suero del paciente para cada uno de los antgenos que se vayan a utiliza. 3. A cada gota de suero aadir una gota de cada antgeno. 4. Mezclar con un aplicador limpio ( utilizar un aplicador para cada antgeno. 5. Agitar suavemente la placa por rotacin (120 r.p.m) durante 2 3 minutos. 6. Observar la aglutinacin con ayuda de una lmpara. Cuando hay reaccin positiva se repite la tcnica con diluciones las cuales se obtienen con el uso de las siguientes cantidades del suero en la siguiente forma. INTERPRETACIN. El informe del resultado de la prueba se hace tomando en consideracin la dilucin ms alta que se observe en la reaccin positiva. En tifoideas los anticuerpos llegan a tener ttulos diagnsticos hasta los 8 das despus de la fiebre.

Mtodo de aglutinacin en tubo. 1. Numerar siete tubos ( 13x75mm) del uno al seis y un testigo (T) para cada antgeno. 2. Adicionar 0.9 ml de solucin salina al primero y 0.5 ml a los restantates. 3. Agregar 0.1ml del suero problema al tubo uno. Mezclar y pasar 0.5ml al tubo dos y as sucesivamente hasta el seis eliminando 0.5ml de esta ltima dilucin. Obtenindose diluciones 1/10, 1/20, 1/40, 1/80, 1/160 y 1/320. 4. Adicionar 0.3ml de antgeno diluido previamente 1:20 con solucin salina en cada uno de los tubos. 5. Agitar enrgicamente e incubar en bao mara en las siguientes condiciones. 6.Tomar dos o tres tubos a la vez, agitarlos ligeramente frente Interpretacin. Reportar el resultado, empleando la recproca de la dilucin ms alta que presenta aglutinacin. Grado de aglutinacin. 100% ++++ Sedimentacin de los grumos y el sobrenadante claro. 75% +++ grumos sedimentados casi totalmente y sobrenadante claro. 50% ++ sedimentacin marcada y sobrenadante ligeramente claro. Negativo. Ninguna evidencia de aglutinacin, sobrenadante idntico al control. Recomendaciones. 1. No congelar ninguno de los reactivos. 2. Evitar utilizar los reactivos frios. 3. La presencia de ttulos bajos puede ser debido a vacunaciones o infecciones pasadas o subclnicas. 4. Es conveniente estudiar varias muestras de sangre del enfermo con diferencia de cinco a siete das en los casos dudosos. 5. Es recomendable el uso de controles tanto positivos como negativos para asegurar la validez de los resultados. una fuente de luz que ilumine las partculas claramente.