Ciclo de Krebs

Esquema didctico del ciclo del cido ctrico. El ciclo de Krebs (tambin llamado ciclo del cido ctrico o ciclo de los cidos tricarboxlicos) es una ruta metablica, es decir, una sucesin de reacciones qumicas, que forman parte de la respiracin celular en todas las clulas aerobias, aquellas que utilizan oxgeno. En organismos aerbicos, el ciclo de Krebs es parte de la va catablica que realiza la oxidacin de hidratos de carbono, cidos grasos y aminocidos hasta producir CO2, liberando energa en forma utilizable (poder reductor y GTP). El metabolismo oxidativa de glcidos, grasas y protenas frecuentemente se divide en tres etapas, de las cuales el ciclo de Krebs supone la segunda. En la primera etapa los carbonos de estas macromolculas dan lugar a molculas de acetil-CoA de dos carbonos, e incluye las vas catablicas de aminocidos (p. ej. desaminacin oxidativa), la beta oxidacin de cidos grasos y la gluclisis. La tercera etapa es la fosforilacin oxidativa, en la cual el poder reductor (NADH y FADH2) generado se emplea para la sntesis de ATP segn la teora del acoplamiento quimiosmtico. El ciclo de Krebs tambin proporciona precursores para muchas biomolculas, como ciertos aminocidos. Por ello se considera una va anfiblica, es decir, catablica y anablica al mismo tiempo.

Reacciones del ciclo de Krebs

El ciclo de Krebs tiene lugar en la matriz mitocondrial en eucariotas. El acetil-CoA (Acetil Coenzima A) es el principal precursor del ciclo. El cido ctrico (6 carbonos) o citrato se regenera en cada ciclo por condensacin de un acetil-CoA (2 carbonos) con una molcula de oxaloacetato (4 carbonos). El citrato produce en cada ciclo una molcula de oxaloacetato y dos CO2, por lo que el balance neto del ciclo es: Acetil-CoA + 3 NAD+ + FAD + GDP + Pi + 3 H2O _ CoA-SH + 3 (NADH + H+) + FADH2 + GTP + 2 CO2 + 3 H+ Los dos carbonos del Acetil-CoA son oxidados a CO2, y la energa que estaba acumulada es liberada en forma de energa qumica: GTP y poder reductor (electrones de alto potencial): NADH y FADH2. NADH y FADH2 son coenzimas (molculas capaces

de unirse a enzimas) capaces de acumular la energa en forma de poder reductor para su conversin en energa qumica en la fosforilacin oxidativa. El FADH2 de la succinato deshidrogenasa, al no poder desprenderse del enzima, debe oxidarse nuevamente in situ. El FADH2 cede sus dos hidrgenos a la ubiquinona (coenzima Q), que se reduce a ubiquinol (QH2) y abandona el enzima. Las reacciones son: Molcula Enzima Tipo de reaccin Deshidratacin Hidratacin Oxidacin Descarboxilacin Descarboxilacin oxidativa Hidrlisis Oxidacin Adicin (H2O) Oxidacin Condensacin NAD+ + CoA- NADH + H+ + SH CO2 GDP + Pi GTP +CoA-SH FAD H2O NAD+ NADH + H+ FADH2 Reactivos/ Coenzimas H2O NAD+ Productos/ Coenzimas H2O NADH + H+

I. Citrato 1. Aconitasa II. cis-Aconitato 2. Aconitasa III. Isocitrato 3. Isocitrato deshidrogenasa IV. 4. Isocitrato Oxalosuccinato deshidrogenasa V. _5. _-cetoglutarato cetoglutarato Deshidrogenasa VI. Succinil6. Succinil-CoA CoA sintetasa VII. Succinato 7. Succinato deshidrogenasa VIII. Fumarato 8. Fumarato Hidratasa IX. L-Malato 9. Malato deshidrogenasa X. 10. Citrato sintasa Oxaloacetato

Visin simplificada y rendimiento del proceso El paso previo es la oxidacin del piruvato, produciendo un acetil-CoA y un CO2. El acetil-CoA reacciona con una molcula de oxaloacetato (4 carbonos) para formar citrato (6 carbonos), mediante una reaccin de condensacin. A travs de una serie de reacciones el citrato se convierte de nuevo en oxaloacetato. Durante estas reacciones, se substraen 2 tomos de carbono del citrato (6C) para dar oxalacetato (4C); dichos tomos de carbono se liberan en forma de CO2 El ciclo consume netamente 1 acetil-CoA y produce 2 CO2. Tambin consume 3 NAD+ y 1 FAD, produciendo 3 NADH + 3 H+ y 1 FADH2. El rendimiento de un ciclo es (por cada molcula de piruvato): 1 GTP, 3 NADH, 1 FADH2, 2CO2. Cada NADH, cuando se oxide en la cadena respiratoria, originar 2,5 molculas de ATP (3 x 2,5 = 7,5), mientras que el FADH2 dar lugar a 1,5 ATP. Por tanto, 7,5 + 1,5 + 1 GTP = 10 ATP por cada acetil-CoA que ingresa en el ciclo de Krebs. Cada molcula de glucosa produce (va gluclisis) dos molculas de piruvato, que a su vez producen dos acetil-CoA, por lo que por cada molcula de glucosa en el ciclo de Krebs se produce: 4CO2, 2 GTP, 6 NADH, 2 FADH2; total 20 ATP.

Regulacin Muchas de las enzimas del ciclo de Krebs son reguladas por retroalimentacin negativa, por unin alostrica del ATP, que es un producto de la va y un indicador del nivel energtico de la clula. Entre estas enzimas se incluye el complejo de la piruvato deshidrogenasa que sintetiza el acetil-CoA necesario para la primera reaccin del ciclo a partir de piruvato, procedente de la gluclisis o del catabolismo de aminocidos. Tambin las enzimas citrato sintasa, isocitrato deshidrogenasa y _-cetoglutarato deshidrogenasa, que catalizan las tres primeras reacciones del ciclo de Krebs, son inhibidas por altas concentraciones de ATP. Esta regulacin frena este ciclo degradativo cuando el nivel energtico de la clula es bueno. Algunas enzimas son tambin reguladas negativamente cuando el nivel de poder reductor de la clula es elevado. El mecanismo de esta inhibicin es una inhibicin competitiva por producto (por NADH) de las enzimas que emplean NAD+ como sustrato. As se regulan, entre otros, los complejos piruvato deshidrogenasa y citrato sintasa. Principales vas que convergen en el ciclo de Krebs La mayora de las vas catablicas convergen en el ciclo de Krebs, como muestra el diagrama. Las reacciones que forman intermediarios del ciclo se conocen como reacciones anaplerticas. El ciclo de Krebs contituye la segunda etapa del catabolismo de carbohidratos. La gluclisis rompe la glucosa (6 carbonos) generando dos molculas de piruvato (3 carbonos). En eucariotas el piruvato se desplaza al interior de la mitocondria (gracias a un transportador especfico de membrana interna). En la matriz mitocondrial produce acetil-CoA que entra en el ciclo de Krebs. En el catabolismo de protenas, los enlaces peptdicos de las protenas son degradados por accin de enzimas proteasas en el tubo digestivo liberando sus constituyentes aminoacdicos. Estos aminocidos penetran en las clulas, donde pueden ser empleados para la sntesis de protenas o ser degradados para producir energa en el ciclo de Krebs. Para su entrada al ciclo deben eliminarse sus grupos amino (terminales y laterales) por accin de enzimas aminotransferasas y desaminasas, principalmente. En el catabolismo de lpidos, los triglicridos son hidrolizados liberando cidos grasos y glicerol. En el hgado el glicerol puede ser convertido en glucosa va dihidroxiacetona fosfato y gliceraldehdo-3-fosfato, por la gluconeognesis (ruta anablica). En muy diversos tejidos, especialmente en msculo cardaco, los cidos grasos son degradados en la matriz mitocondrial mediante sucesivos ciclos de beta oxidacin que liberan unidades de acetil-CoA, que pueden incorporarse al ciclo de Krebs. En ocasiones, el ciclo de Krebs puede rendir propionil-CoA (3 carbonos), que puede emplearse para la sntesis de glucosa en la gluconeognesis heptica. El ciclo de Krebs siempre es seguido por la fosforilacin oxidativa. Este proceso extrae la energa en forma de electrones de alto potencial de las molculas de NADH y FADH2, regenerando NAD+ y FAD, gracias a lo cual el ciclo de Krebs puede continuar. Los electrones son transferidos a molculas de O2, rindiendo H2O. Pero esta transferencia se realiza a travs de una cadena transportadora de electrones capaz de aprovechar la energa potencial de los electrones para bombear protones al espacio

intermembrana de la mitocondria. Esto genera un gradiente electroqumico de H+, que es utilizado para la sntesis de ATP mediante la enzima ATP sintetasa. De este modo el ciclo de Krebs no utiliza directamente O2, pero lo requiere al estar acoplado a la fosforilacin oxidativa. Por cada molcula de glucosa la energa obtenida mediante el metabolismo oxidativo, es decir, gluclisis seguida del ciclo de Krebs, equivale a 30/32 molculas de ATP dependiendo del tipo de lanzadera para introducir el poder reductor dentro de la mitocondria, si es la lanzadera de malato-aspartato son 32 y si es la de glicerol 3 fosfato, son.

Gluclisis La gluclisis o glicolisis (del griego glycos: azcar y lysis: ruptura), es la va metablica encargada de oxidar o fermentar la glucosa y as obtener energa para la clula. sta consiste de 10 reacciones enzimticas que convierten a la glucosa en dos molculas de piruvato, la cual es capaz de seguir otras vas metablicas y as continuar entregando energa al organismo.1 Es la va inicial del catabolismo (degradacin) de carbohidratos, y tiene tres funciones principales:
1.

La generacin de molculas de alta energa (ATP y NADH) como fuente de energa celular en procesos de respiracin aerbica (presencia de oxgeno) y anaerbica (ausencia de oxgeno). La generacin de piruvato que pasar al Ciclo de krebs, como parte de la respiracin aerbica. La produccin de intermediarios de 6 y 3 carbonos que pueden ser ocupados por otros procesos celulares.

2. 3.

Cuando hay ausencia de oxgeno (anoxia o hipoxia), luego que la glucosa ha pasado por este proceso, el piruvato sufre fermentacin, una segunda va de adquisicin de energa que, al igual que la gluclisis, es poco eficiente. El tipo de compuesto obtenido de la fermentacin suele variar con el tipo de organismo. En los animales, el piruvato fermenta a lactato y en levadura, el piruvato fermenta a etanol. En eucariotas y procariotas, la gluclisis ocurre en el citosol de la clula. En clulas vegetales, algunas de las reacciones glucolticas se encuentran tambin en el ciclo de Calvin, que ocurre dentro de los cloroplastos. La amplia conservacin de esta va incluye los organismos filogenticamente ms antiguos, y por esto se considera una de las vas metablicas ms antiguas.2 El tipo de gluclisis ms comn y ms conocida es la va de Embden-Meyerhoff, explicada inicialmente por Gustav Embden y Otto Meyerhof. El trmino puede incluir vas alternativas, como la va de Entner-Doudoroff. No obstante, Gluclisis ser usada aqu como sinnimo de la va de Embden-Meyerhoff. Visin General La gluclisis es la forma mas rpida de conseguir energa para una clula, y en el metabolismo de carbohidratos, generalmente es la primera va a la cual se recurre. sta se encuentra estructurada en 10 reacciones enzimticas que permiten la transformacin de una molcula de glucosa a dos molculas de piruvato mediante un proceso catablico. La gluclisis es una de las vas ms estudiadas, y en los libros de textos generalmente se le encuentra dividida en dos fases: La primera de gasto de energa, y la segunda fase, que obtiene energa. La primera fase consta en transformar una molcula de glucosa en dos molculas de gliceraldehdo -una molcula de baja energa- mediante el uso de 2 ATP. Esto permite duplicar los resultados de la segunda fase de obtencin energtica. En la segunda fase, el gliceraldehdo se transforma en un compuesto de alta energa, cuya hidrlisis genera una molcula de ATP, y como se generaron 2 molculas de gliceraldehido, se obtienen

en realidad dos molculas de ATP. sta obtencin de energa se logra mediante el acoplamiento de una reaccin fuertemente exergnica despus de una levemente endergnica. ste acoplamiento ocurre una vez mas en esta fase, generando dos molculas de piruvato. De sta manera en la segunda fase se obtienen 4 molculas de ATP. Reaccin La reaccin global de la gluclisis es:

El ATP (Adenosn trifosfato) es la fuente de energa universal de la clula. NADH y H+, otorgan la capacidad de reducir otros compuestos pertenecientes a otras vas metablicas, o bien para sintetizar ATP. El piruvato es la molcula que seguir oxidndose en el ciclo de Krebs, como parte de la respiracin aerbica, donde dar origen a ms molculas NADH, que podrn pasar a sintetizar ATP en la mitocondria. El enlace ster-fosfato Destino del Piruvato

Luego de que una molcula de glucosa se transforme en 2 molculas de piruvato, las condiciones del medio en que se encuentre determinarn la va metablica a seguir. En organismos aerbicos, el piruvato seguir oxidndose por la enzima Piruvato deshidrogenasa y el ciclo de Krebs, creando intermediarios como NAD+ y FAD. Estos intermediarios no pueden cruzar la membrana mitocondrial, y por lo tanto, utilizan sistemas de intercambio con otros compuestos llamados lanzaderas o shuttles. Los ms conocidos son el shuttle malato-aspartato y el shuttle glicerol-3-fosfato. Los intermediarios logran entregar sus equivalentes5 al interior de la membrana mitocondrial, y que luego pasarn por la cadena de transporte de electrones, la cual los usarn para sintetizar ATP. De esta manera, se puede obtener 38 moles de ATP a partir de 1 mol de glucosa. Sin embargo, cuando las clulas no posean mitocondrias (Ej.: eritrocito) o cuando requieran de grandes cantidades de ATP (Ej.: El msculo al ejercitarse), el piruvato sufre fermentacin que permite obtener 2 moles de ATP por un mol de glucosa, por lo tanto, esta va es poco eficiente respecto a la fase aerbica de la gluclisis. El tipo de fermentacin vara respecto al tipo de organismos: En levaduras, se produce fermentacin alcohlica, produciendo etanol y CO2 como producto final; y en msculos, eritrocitos y algunos microorganismos se produce fermentacin lctica, que da como resultado cido lctico o lactato. Etapas de la gluclisis La gluclisis se divide en dos partes principales y diez reacciones enzimticas, las que se describen a continuacin. Fase de Gasto de Energa (ATP) Esta primera fase de la gluclisis consiste en transformar una molcula de glucosa en dos molculas de gliceraldehdo. Hasta el momento solo se ha consumido energa (ATP), sin embargo, en la segunda etapa, el gliceraldehido es convertido a una

molcula de mucha energa, donde finalmente se obtendr el beneficio final de 4 molculas de ATP.

1er Paso: Hexoquinasa ? Glucosa + ATP ?Glucosa-6-fosfato + ADP

6

La primera reaccin de la gluclisis es la fosforilacin de la glucosa, para activarla (aumentar su energa) y as poder utilizarla en otros procesos cuando sea necesario. Esta activacin ocurre por la transferencia de un grupo fosfato del ATP, una reaccin catalizada por la enzima Hexoquinasa,7 la cual puede fosforilar (aadir un grupo fosfato) a molculas similares a la glucosa, como la fructosa y manosa. Las ventajas de fosforilar la glucosa son 2: La primera es hacer de la glucosa un metabolito ms reactivo, mencionado anteriormente, y la segunda ventaja es que la glucosa-6-fosfato no puede cruzar la membrana celular -a diferencia de la glucosa-. De esta forma se evita la prdida de sustrato energtico para la clula. Tcnicamente hablando, la Hexoquinasa slo fosforila las D-hexosas, y utiliza de sustrato MgATP2+, ya que este catin permite que el ltimo fosfato del ATP (Fosfato gamma, _-P o P_) sea un blanco ms fcil para el ataque nucleoflico que realiza el grupo hidroxilo (OH) del sexto carbono de la glucosa, lo que es posible debido al Mg 2+ que apantalla las cargas de los otros dos fosfatos.1 8 Esta reaccin posee un _G negativo.

2do Paso: Glucosa-6-P isomerasa ? Glucosa-6-fosfato ?Fructosa-6-fosfato

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ste es un paso importante, puesto que aqu se define la geometra molecular que afectar los dos pasos crticos en la gluclisis: El prximo paso, que agregar un grupo fosfato al producto de esta reaccin, y el paso 4, cuando se creen dos molculas de gliceraldehido que finalmente sern las precursoras del piruvato.1 En esta reaccin, la Glucosa-6-fosfato se isomeriza a Fructosa-6-fosfato, mediante la enzima fosfohexosa isomerasa. La isomerizacin ocurre en una reaccin de 4 pasos, que implica la apertura del anillo y un traspaso de protones a travs de un intermediario cis-enediol Puesto que la energa libre de esta reaccin es igual a +1,7 kJ/mol la reaccin es no espontnea y se debe acoplar. 3er paso: Fosfofructoquinasa ? Fructosa-6-fosfato + ATP ?Fructosa-1,6-bifosfato + ADP
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3. Fosforilacin de la fructosa 6-fosfato en el carbono 1, con gasto de un ATP, a travs de la enzima Fosfofructoquinasa-1 (PFK1). Tambin este fosfato tendr una baja energa de hidrlisis. Por el mismo motivo que en la primera reaccin, el proceso es irreversible. El nuevo producto se denominar Fructosa-1,6-Bisfosfato. La irreversibilidad es importante, ya que la hace ser el punto de control de la gluclisis. Como hay otros sustratos aparte de la glucosa que entran en la gluclisis, el punto de control no est colocado en la primera reaccin, sino en sta. La fosfofructoquinasa tiene centros alostricos, sensibles a las concentraciones de intermediarios como citrato y cidos grasos. Liberando una enzima llamada fosfructocinasa-2 que fosforila en el carbono 2 y regula la reaccin. 4to Paso: Aldolasa ? Fructosa-1,6-bisfosfato ?Dihidroxiacetona-fosfato + Gliceraldehido-3-fosfato
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La enzima Aldolasa (Fructosa-1,6-bifosfato aldolasa), mediante una condensacin aldlica reversible, rompe la fructosa-1,6-bifosfato en dos molculas de tres carbonos (triosas): Dihidroxiacetona fosfato y Gliceraldehdo-3-fosfato. Existen dos tipos de Aldolasa, las que difieren tanto en el tipo de organismos dnde se expresan, como en los intermediarios de reaccin. Esta reaccin tiene una energa libre (_G) entre 20 a 25 kJ/mol, por lo tanto en condiciones estndar esta reaccin no ocurre de manera espontnea. Sin embargo, en condiciones intracelulares la energa libre es pequea debido a la baja concentracin de los sustratos, lo que permite que esta reaccin sea reversible.1

5to Paso: Triosa fosfato isomerasa ? Dihidroxiacetona-fosfato ?Gliceraldehido-3-fosfato

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Puesto que slo el Gliceraldehdo-3-fosfato puede seguir los pasos restantes de la gluclisis, la otra molcula generada por la reaccin anterior (Dihidroxiacetona-fosfato) es isomerizada (convertida) en Gliceraldehdo-3-fosfato. Esta reaccin posee una energa libre en condiciones estandar positiva, lo cual implicara un proceso no favorecido, sin embargo al igual que para la reaccin 4, considerando las concentraciones intracelulares reales del reactivo y el producto, se encuentra que la energa libre total es negativa, por lo que la direccin favorecida es hacia la formacin de G3P. ste es el ltimo paso de la "Fase de Gasto de Energa". Slo hemos gastado ATP en el primer paso (Hexoquinasa) y el tercer paso (Fosfofructoquinasa-1). Cabe recordar que el 4to paso (Aldolasa) genera una molcula de Gliceraldehdo-3-fosfato, mientras que el 5to paso genera una segunda molcula de ste. De aqu en adelante, las reacciones a seguir ocurrirn dos veces, debido a las 2 molculas de gliceraldehido generadas de esta fase. Hasta esta reaccin hay intervencin de energa (ATP) Fase de beneficio Energtico 6to Paso: Gliceraldehido-3-fosfato deshidrogenasa Gliceraldehido-3-fosfato+ Pi + NAD+ ?1,3-Bisfosfoglicerato + NADH + H+
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Esta reaccin consiste en oxidar el gliceraldehdo-3-fosfato utilizando NAD+ para aadir un ion fosfato a la molcula, la cual es realizada por la enzima Gliceraldehdo-3-fosfato deshidrogenasa o bien, GAP deshidrogenasa en 5 pasos, y de sta manera aumentar la energa del compuesto. Tcnicamente, el grupo aldehdo se oxida a un grupo acil-fosfato, que es un derivado de un carboxilo fosfatado. Este compuesto posee una energa de hidrlisis sumamente alta (cercana a los 50 kJ/mol) por lo que se da inicio al proceso de reacciones que permitirn recuperar el ATP ms adelante. Mientras el grupo aldehdo se oxida, el NAD+ se reduce, lo que hace de esta reaccin una reaccin redox. El NAD+ se reduce por la incorporacin del ion hidruro (H-) -formado por el hidrgeno del aldehdo y los electrones del enlace C-H- para dar como resultado una molcula de NADH de carga neutra.

7mo Paso: Fosfoglicerato quinasa 1,3-Bifosfoglicerato+ ADP ?3-Fosfoglicerato + ATP

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En este paso, la enzima Fosfoglicerato quinasa transfiere el grupo fosfato de 1,3Bifosfoglicerato a una molcula de ADP, generando as la primera molcula de ATP de la va. Como la glucosa se transformo en 2 molculas de gliceraldehdo, en total se recuperan 2 ATP en esta etapa. Ntese que la enzima fue nombrada por la reaccin inversa a la mostrada, y que sta opera en ambas direcciones. Los pasos 6 y 7 de la Gluclisis nos muestran un caso de acoplamiento de reacciones, donde una reaccin energticamente desfavorable (paso 6) es seguida por una reaccin muy favorable energticamente (paso 7) que induce la primera reaccin. En otras palabras, como la clula se mantiene en equilibrio, el descenso en las reservas de 1,3 bifosfoglicerato empuja a la enzima GAP deshidrogenasa a aumentar sus reservas. La cuantificacin de la energa libre para el acople de ambas reacciones es de alrededor de -12 kJ/mol. sta manera de obtener ATP sin la necesidad de O2, se denomina fosforilacin a nivel de sustrato. 8vo Paso: Fosfoglicerato mutasa 3-Fosfoglicerato? 2-Fosfoglicerato
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8. Se isomeriza el 3-fosfoglicerato procedente de la reaccin anterior dando 2fosfoglicerato, la enzima que cataliza esta reaccin es la Fosfoglicerato mutasa. Lo nico que ocurre aqu es el cambio de posicin del fosfato del C3 al C2. Son energas similares y por tanto reversibles, con una variacin de energa libre cercana a cero. 9no Paso: Enolasa 2-Fosfoglicerato? Fosfoenolpiruvato + H2O
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9. La enzima enolasa propicia la formacin de un doble enlace en el 2-fosfoglicerato, eliminando una molcula de agua formada por el hidrgeno del C2 y el OH del C3. El resultado es el fosfoenolpiruvato. Fosfoenolpiruvato? Piruvato
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10mo Paso: Piruvato quinasa

10. Desfosforilacin del Fosfoenolpiruvato, obtenindose piruvato y ATP. Reaccin irreversible mediada por la Piruvato quinasa. El enzima Piruvato Quinasa es dependiente de magnesio y potasio. La energa libre es de -31,4 kJ/mol, por lo tanto la reaccin es favorable e irreversible. El rendimiento total de la gluclisis de una sola glucosa (6C) es de 2 ATP y no 4 (dos por cada gliceraldehido-3-fosfato (3C)), ya que se consumen 2 ATP en la primera fase, y 2 NADH (que dejarn los electrones Nc en la cadena de transporte de electrones para formar 3 ATP por cada electrn). Con la molcula de piruvato, mediante un paso de oxidacin intermedio llamado descarboxilacin oxidativa, mediante el cual el piruvato pasa al interior de la mitocondria, perdiendo CO2 y un electrn que oxida el NAD+, que pasa a ser NADH ms H+ y ganando un CoA-SH (coenzima A), formndose en AcetilCoA gracias a la enzima piruvato deshidrogenasa, se puede entrar al Ciclo de Krebs (que, junto con la cadena de transporte de electrones, se denomina respiracin. WEBGRAFIA: http://es.wikipedia.org/wiki/Gluclisis http://es.wikipedia.org/wiki/Ciclo_de_Krebs