MINISTRIO DA EDUCAO E DESPORTOS UNIVERSIDADE FEDERAL DE GOIS INSTITUTO DE PATOLOGIA TROPICAL E SADE PBLICA

ANA PAULA RODRIGUES CORRA GUIMARES

AVALIAO MICROBIOLGICA DE AMOSTRAS DE GUA MINERAL NATURAL, SEM GS, ENVASADAS, COMERCIALIZADAS EM GOINIA/GO

Orientador: Prof. Dr. lvaro Bisol Serafini

Goinia GO 2006

UNIVERSIDADE FEDERAL DE GOIS INSTITUTO DE PATOLOGIA TROPICAL E SADE PBLICA PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM MEDICINA TROPICAL

ANA PAULA RODRIGUES CORRA GUIMARES

AVALIAO MICROBIOLGICA DE AMOSTRAS DE GUA MINERAL NATURAL, SEM GS, ENVASADAS, COMERCIALIZADAS EM GOINIA/GO

Orientador: Prof. Dr. lvaro Bisol Serafini

Dissertao submetida ao CPGMT/IPTSP/UFG como requisito parcial para obteno do Grau de Mestre na rea de concentrao de Microbiologia

Goinia GO 2006

Dados Internacionais de Catalogao-na-Publicao (CIP) (GPT/BC/UFG)

Guimares, Ana Paula Rodrigues Corra. G963a Avaliao microbiolgica de amostras de gua mineral natural, sem gs, envasadas, comercializadas em Goinia (GO) / Ana Paula Rodrigues Corra. - Goinia, 2006. 64 f. : il., tabs. Orientador: lvaro Bisol Serafini. Dissertao ( Mestrado ) Universidade Federal de Gois, Instituto de Patologia Tropical e Sade Pblica, 2006. Bibliografia. Inclui lista de tabelas e quadros. 1. Microbiologia gua mineral natural Goinia (GO) 2. gua mineral natural Tratamento 3. Pseudomonas aeruginosa 4. Clostridium perfringens I. Serafini, Alvaro Bisol II. Universidade Federal de Gois. Instituto de Patologia Tropical e Sade Pblica II. Ttulo. CDU: 579:663.646(817.3 Goinia)

DEDICATRIA minhafilha,AnaLuisa Quememostra,acadasorriso,acadadescoberta,oquerealmenteimportantee,que, comseuamorealegria,tornaaminhavidamaiscompletaemaisfeliz. Aomeuesposo,Delismar Parceiro nos sonhos e dificuldades, sempre presente nos momentos mais importantes, porsuacompreenso,companheirismoeamor. minhafamlia Aomeupai,Antnio,minhasirms,NiaeCarla,meuirmo,Jonas,minhasobrinhae afilhada,Rafaellae,especialmente,minhame,Teresa,pessoascomquempossocontar emtodososmomentosequemerecemtodaaminhaadmirao. ADeus Porsuaimensabondade,pelaspessoasmaravilhosascomquemmepossibilitouconviver eportudoquemepermitiurealizar. Seeuordenassequeumgeneralsetransformasseemgaivota, eogeneralnomeobedecesse, aculpanoseriadogeneral,seriaminha... precisoexigirdecadaumoquecadaumpodedar... Aautoridaderepousasobrearazo AntoinedeSaintExupry

AGRADECIMENTOS

Ao Programa de Ps-graduao em Medicina Tropical do Instituto de Patologia Tropical e Sade Pblica da Universidade Federal de Gois, pela oportunidade.

Ao meu orientador e amigo, Prof. Dr. lvaro Bisol Serafini, pelo carinho e apoio durante todo o curso e por contribuir de forma to importante para minha formao profissional e humana.

Aos professores do Programa de Ps-graduao, pela generosidade ao dividirem sua experincia e conhecimentos.

Aos integrantes das bancas de qualificao e defesa, pelas contribuies para o aperfeioamento deste trabalho.

Aos servidores do IPTSP/UFG pela cooperao e gentileza.

Aos colegas de laboratrio, Carla, Liana, Maria Cludia, Maria Raquel, Patrcia, Aristides e Vera por sua amizade e disposio em ensinar.

s colegas de turma pela amizade e tantos bons momentos compartilhados.

colega de turma e amiga Letcia Aparecida Silva, pelo apoio e amizade inestimveis.

Ao Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico CNPq, pelo apoio financeiro.

Vigilncia Sanitria de Goinia, pela colaborao durante a coleta das amostras.

A Deus, a quem jamais me faltaram motivos para agradecer.

SUMRIO Lista de Tabelas e Quadros ........................................................................... ii

INTRODUO ............................................................................................... 01 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS .............................................................. ARTIGO 1: gua mineral: Aspectos histricos e microbiolgicos Resumo .......................................................................................................... 08 Abstract .......................................................................................................... 09 Introduo ...................................................................................................... 10 Consumo de gua mineral no Brasil .............................................................. 12 Avaliao microbiolgica de gua mineral no Brasil ..................................... Presena de bactrias em gua mineral ....................................................... Bactrias do grupo coliforme ......................................................................... Pseudomonas aeruginosa ............................................................................. 12 15 15 19 04

Enterococos ................................................................................................... 20 Clostridium perfringens .................................................................................. 21 Bactrias heterotrficas ................................................................................. 22

Tratamento de gua mineral .......................................................................... 24 Mais segurana para o consumidor de gua mineral .................................... 24 Referncias Bibliogrficas ............................................................................. ARTIGO 2: Avaliao microbiolgica de amostras de gua mineral natural, sem gs, envasadas, comercializadas em Goinia/GO Resumo .......................................................................................................... 31 Abstract .......................................................................................................... 32 Introduo ...................................................................................................... 33 Material e Mtodos ....................................................................................... 37 26

Resultados ..................................................................................................... 41 Discusso ...................................................................................................... 44

Agradecimentos ............................................................................................. 50 Referncias Bibliogrficas ............................................................................. 51

LISTA DE TABELAS

ARTIGO 2

Tabela I

Intervalos

das

contagens,

em

UFC/100mL,

dos

microrganismos encontrados em seis dentre quinze marcas de gua mineral comercializadas na cidade de Goinia/GO, avaliadas no 2 trimestre de 2004.............................................. 43

LISTA DE QUADROS

ARTIGO 1

Quadro I Caractersticas

microbiolgicas

estabelecidas

para

gua

mineral pela RDC n 275, de 23 de setembro de 2005, do Ministrio da Sade ................................................................... 14

ARTIGO 2

Quadro I Ocorrncia dos microrganismos pesquisados nas 15 marcas de gua mineral analisadas........................................................ 42

INTRODUO

As guas minerais constituem um dos mais antigos meios de tratamento da sade utilizados pelo homem. Elas se consagraram ao longo da Histria pelo uso generalizado nos mais variados tipos de enfermidades, em diferentes pocas, em todas as partes do mundo (Martins et al. 2005). O entusiasmo pelas curas provenientes de seu uso foi o responsvel pela idia de encher pequenos frascos com o produto e vend-los, proporcionando, assim, a cura a domiclio (Salute 2005). As guas minerais provm, principalmente, de aqferos intermedirios, que apresentam taxas de vazo lentas. Neles, a gua mineral fica represada em uma rea bem definida e protegida, cuja composio qumica, temperatura e taxa de vazo so geralmente estveis (Maier e Pepper 2000). As fontes so a forma mais comum de ocorrncia das guas minerais, que emergem do lenol fretico superfcie atravs de eventos geolgicos como falhas, fraturas ou dobramentos. A utilizao da gua mineral pode ocorrer, tambm, por intermdio de captao artificial, atravs de poos ou galerias, podendo a descoberta ser ocasional ou o resultado de trabalhos de pesquisa (Martins et al. 2002). gua mineral natural, conforme a Resoluo de Diretoria Colegiada (RDC) n 274, de setembro de 2005, do Ministrio da Sade, aquela obtida diretamente de fontes naturais ou por extrao de guas subterrneas, caracterizada pelo contedo definido e constante de determinados sais minerais, oligoelementos e outros constituintes, considerando as flutuaes naturais (Brasil 2005a). Essa mesma Resoluo estabelece, ainda, que as guas minerais no podem ter sua composio alterada pela agregao de substncias fsicas, qumicas ou biolgicas, em nenhuma das etapas de seu processamento. O mercado brasileiro de guas minerais est entre os setores da economia que mais crescem no pas, que j se coloca como o sexto maior mercado de gua mineral do mundo (ABINAM 2003). A explicao para o aumento do consumo de gua mineral em certos setores da populao a

associao do produto a um elevado grau de pureza (Eiroa et al. 1996). Entretanto, a ocorrncia de distrbios gastrintestinais, em decorrncia do consumo de guas minerais, tem motivado o estudo de sua qualidade microbiolgica (Hunter 1993). As doenas transmitidas ao homem atravs da gua decorrem de sua contaminao por excretas de animais, do prprio homem, ou mesmo da presena de substncias qumicas nocivas sade humana (Nascimento et al. 2000). Essa contaminao vem ocorrendo ao longo dos anos, sendo causada pelo crescente desenvolvimento industrial, pelo crescimento demogrfico e pela ocupao do solo de forma intensa e acelerada, aumentando consideravelmente o risco de doenas de transmisso hdrica (Guilherme e Silva 2000). A contaminao da gua mineral pode ocorrer na fonte, no envase (devido natureza do processo ou reutilizao de recipiente no devidamente higienizado), ou no transporte e armazenamento, no caso da embalagem no ser absolutamente estanque (Instituto Nacional de Metrologia, Normalizao e Qualidade Industrial INMETRO 1997). A qualidade microbiolgica da gua mineral de grande interesse, uma vez que muitos consumidores a utilizam como alternativa gua fornecida pelos municpios onde vivem, por considerarem-na melhor e mais segura (Mavridou 1992). No Brasil, as caractersticas microbiolgicas para gua mineral so determinadas pela RDC no 275 (Brasil 2005b), que substituiu a RDC n 54 (Brasil 2000). Segundo parmetros estabelecidos por essa Resoluo, a anlise de gua mineral deve incluir contagem de coliformes totais, enterococos, Pseudomonas aeruginosa, clostrdios sulfito-redutores ou

Clostridium perfringens Escherichia coli.

e pesquisa de coliformes termotolerantes ou

Com relao amostragem, a RDC n 275 coloca que a anlise pode ser realizada utilizando amostra representativa, constituda de cinco unidades amostrais ou amostra indicativa, composta por um nmero de unidades amostrais inferior ao estabelecido para a amostra representativa, ou seja,

menos que cinco unidades. Sempre que se tratar de avaliao de lotes ou partidas, dever ser coletada a amostra representativa. Estudos sobre a qualidade microbiolgica de gua mineral tm sido realizados no Brasil (Wendpap et al. 1999, Nascimento et al. 2000, Alves et al. 2002, Tancredi et al. 2002, SantAna et al. 2003, Silva e Calazans 2003, Giacometti et al. 2005) e em outros pases como Canad (Warburton et al. 1986), Estados Unidos (Breuer et al. 1990), Japo (Fujikawa et al. 1997), Argentina (Tamagnini e Gonzlez 1997), Taiwan (Tsai e Yu 1997), Frana (Defives et al. 1999), frica do Sul (Ehlers et al. 2004) e Grcia (Venieri et al. 2006). Tais estudos tm mostrado que a qualidade das guas minerais comercializadas em vrios locais do mundo no merece, em certos casos, a confiana que, geralmente, lhe creditada pela populao. A adoo de medidas que impeam a contaminao da gua mineral imprescindvel uma vez que, no Brasil, o produto pode passar apenas por filtrao, no sendo permitido o uso de substncias qumicas (Brasil 2005b). A vigilncia rotineira da qualidade bacteriolgica da gua

indispensvel, tendo em vista a necessidade de proteger a sade dos consumidores (Companhia de Tecnologia de Saneamento Ambiental CETESB

1984), uma vez que a gua de consumo humano um importante veculo de enfermidades de natureza infecciosa (Issac-Marquez et al. 1994).

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

ABINAM - Associao Brasileira da Indstria de guas Minerais 2003. A populao brasileira bebeu menos gua em 2002? Disponvel em:

http://www.abinam.com.br/site/mercado.asp?pg=av_05. Acesso em 24/09/04.

Alves NC, Odorizzi AC, Goulart FC 2002. Anlise microbiolgica de guas minerais e de gua potvel de abastecimento, Marlia, SP. Rev Saude Publica 36(6):749-751.

Brasil 2000. Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria. Resoluo - RDC nmero 54 de 15 de junho de 2000. Estabelece padres microbiolgicos para guas minerais. Dirio Oficial da Unio, Braslia, 19 de junho de 2000.

Brasil 2005a. Ministrio da Sade. Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria. Resoluo n 274 de 22 de setembro de 2005. Regulamento Tcnico para guas Envasadas e Gelo. Dirio Oficial da Unio. Braslia, 23 de setembro de 2005.

Brasil 2005b. Ministrio da Sade. Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria. Resoluo n 275 de 22 de setembro de 2005. Regulamento Tcnico de Caractersticas Microbiolgicas para gua Mineral Natural e gua Natural. Dirio Oficial da Unio. Braslia, 23 de setembro de 2005.

Breuer GM, Friell LA, Moyer NP, Ronald GW 1990. Testing of bottled waters sold in Iowa. Disponvel em:

http://www.uhl.uiowa.edu/newsroom/research/bottledWater.html. Acesso em: 15/08/05.

CETESB Companhia de Tecnologia de Saneamento Ambiental 1984. Tcnica de Abastecimento e Tratamento de gua. 2ed.rev. So Paulo: Cetesb. 549p

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Ehlers MM, van Zyl WB, Pavlov DN, Mller EE 2004. Random survey of the microbial quality of bottled water in South Africa. Water SA 30(2):203-210.

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Giacometti L, Mutton MJR, Amaral LA 2005. Qualidade microbiolgica de guas minerais vendidas no municpio de Jaboticabal, SP. Rev Hig Alimentar 19(133): 58-62.

Guilherme EFM, Silva JAM 2000. Pseudomonas aeruginosa, como indicador de contaminao hdrica. Rev Hig Alimentar 14 (76): 43-47.

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Martins AM, Mansur KL, Pimenta TS, Caetano LC 2005. Crenoterapia das guas minerais do estado do Rio de Janeiro. Disponvel Acesso em: em:

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Salute.

Histria

da

gua

mineral.

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http://www.saluteonline.com.br/stabarbara.htm. Acesso em: 25/05/2005

Santana AS, Silva SCFL, Farani Junior IO, Amaral CHR, Macedo VF 2003. Qualidade microbiolgica de guas minerais. Cienc Tecnol Aliment 23:190-194.

Silva JL, Calazans GMT 2003. Avaliao bacteriolgica de guas minerais consumidas na cidade do Recife PE. Disponvel Acesso em: em:

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Tancredi RCP, Cerqueira E, Marins BR 2002. guas minerais consumidas na cidade do Rio de Janeiro: avaliao da qualidade sanitria. Disponvel em: www2.rio.rj.gov.br/governo/vigilanciasanitaria/boletins/bol13.pdf. 19/07/2003 Acesso em:

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Warburton DW, Peterkin PI, Weiss KF, Johnston MA 1986. Microbiological Quality of Bottled Water Sold in Canada. Can J Microbiol 32: 891-893.

Wendpap LL, Dambros CSK, Lopes VLD 1999. Qualidade das guas minerais e potvel de mesa, comercializadas em Cuiab-MT. Rev Hig Alimentar 13(64): 40-44.

ARTIGO 1

GUA MINERAL: ASPECTOS HISTRICOS E MICROBIOLGICOS _______________________________________________________________

Ana Paula Rodrigues Corra Guimares; lvaro Bisol Serafini*

Departamento de Microbiologia, Imunologia, Parasitologia e Patologia do Instituto de Patologia Tropical e Sade Pblica da Universidade Federal de Gois. E-mail: anapaula_rcg@yahoo.com.br * Endereo para correspondncia: Rua 235 esq. 1a. Avenida, 3 andar/Sala 422. Setor Universitrio. CEP 74605-050, Goinia/GO. E-mail:

abisol@iptsp.ufg.br

Resumo A utilizao da gua mineral iniciou-se com fins teraputicos, para tratamento dos mais variados tipos de enfermidades. Os bons resultados obtidos com seu uso deram origem comercializao do produto, motivada inicialmente por suas propriedades teraputicas e, posteriormente, pela busca, por parte da populao, de uma alternativa mais segura em relao gua fornecida pelas redes municipais. Vrios estudos tm sido realizados com o objetivo de avaliar a qualidade microbiolgica de guas minerais e esta reviso visa descrever alguns aspectos de seu consumo e o significado da identificao, em gua, de bactrias que so parmetros obrigatrios na avaliao microbiolgica de gua mineral no Brasil. Descritores: gua mineral, crenoterapia, avaliao microbiolgica.

Abstract The mineral water was first used with therapeutical purposes, for treatment of the most varied types of diseases. The good results obtained from its use, gave origin to the commercialization of the product, motivated initially by its therapeutical properties and, later, by the search, by the population, for a safer alternative to municipal water supplies. Several studies have been carried out with the objective to evaluate the microbiological quality of mineral waters and this review aims to describe some aspects of its use and the meaning of the identification, in water, of bacteria that are parameters of the microbiological evaluation of mineral water in Brazil. Key words: mineral water, crenotherapy, microbiological evaluation.

Introduo A gua mineral considerada um tipo particular de gua subterrnea, cuja formao resulta da ressurgncia das guas das chuvas, infiltradas a grandes profundidades, atravs de fraturas e falhas tectnicas, em velocidade muito lenta (Martins et al. 2002). As guas minerais provm, principalmente, de aqferos intermedirios, situados a aproximadamente 300 metros de profundidade, separados dos aqferos superficiais por camadas limitantes. Neles, a gua mineral fica represada em uma rea bem definida e protegida, cuja composio qumica, temperatura e taxa de vazo so geralmente estveis (Maier e Pepper 2000). A formao da gua mineral comea na atmosfera onde, sob a forma de chuva, absorve alguns elementos do ar. O tempo entre a infiltrao no solo, onde ocorre mineralizao, e a descarga depende da extenso percorrida, podendo variar de dezenas a milhares de anos. Sua composio qumica reflete a percolao em camadas geolgicas, isto , em seu percurso descendente, a gua fica submetida a temperaturas e presses elevadas, solubilizando rochas e minerais, porm resfriando-se caminho da emergncia (Martins et al. 2002). Ao defrontar-se com descontinuidades de estruturas geolgicas (falhas, diques, etc.), impulsionada pelo peso da coluna de gua superposta e, em certos casos, por gases e vapores nela presentes, a gua mineral emerge superfcie sob a forma de fontes (Martins et al. 2002). As guas minerais esto entre os mais antigos meios de tratamento da sade utilizados pelo homem. Elas se consagraram ao longo da Histria pelo uso generalizado nos mais variados tipos de enfermidades, em diferentes pocas, em todas as partes do mundo (Martins et al. 2005). No Brasil, o Imperador D. Pedro II criou, em 1848, a estao hidromineral de Caldas da Imperatriz, situada ao sul do rio Cubato, em Santa Catarina, dando incio utilizao de guas minerais em balnerios no pas (Martins et al. 2005). A utilizao da gua mineral para tratamento de sade recebeu o nome de crenoterapia, palavra derivada dos termos gregos krenen (fonte) e therapeia

(tratamento). Crenoterapia significa, ento, a aplicao teraputica, interna ou externa das guas minerais, particularmente no ponto em que emergem da terra (Bernini 2004). Apesar de reumatologistas, fisioterapeutas, geriatras, entre outros profissionais da rea da sade, envolvidos com a crenoterapia, e dos relatos de pessoas que fizeram uso do procedimento apontarem melhoras significativas (principalmente com relao a problemas reumticos, dermatolgicos, respiratrios e ortopdicos), faltam estudos cientficos que comprovem seus benefcios, fazendo com que a prtica seja vista com ceticismo pela comunidade cientfica (Antunes 2003). O entusiasmo pelas curas provenientes do uso da gua mineral foi o responsvel pela idia de encher pequenos frascos com o produto e vend-los, proporcionando, assim, a cura a domiclio. Reconhecendo as qualidades teraputicas milagrosas dessas guas, a Igreja Catlica colocava as fontes sob a proteo de um Santo, o que explica o nome da maioria delas (Salute 2005). O comrcio de gua mineral foi regulamentado na Frana, em 1605 e impulsionado, no sculo XIX, pelo surgimento da indstria de envase. O

desenvolvimento dos meios de transporte, especialmente das ferrovias, conduziu expanso. A generalizao das embalagens de vidro popularizou a gua mineral e o aumento da procura fez com que as indstrias se automatizassem no fim dos anos 60, progredindo juntamente com o surgimento das embalagens plsticas (Salute 2005). Com o surgimento da indstria e como conseqncia indireta do modelo de civilizao, o tradicional enfoque, que caracterizava a gua mineral pelo aspecto medicinal, foi sendo substitudo, progressivamente, sob o impacto da sua comercializao em larga escala (Martins et al. 2002). Os grandes centros e a poluio crescente dos mananciais trouxeram consigo a necessidade do tratamento da gua para consumo humano e, em contrapartida, um mercado em constante expanso para a gua mineral (Martins et al. 2002), j que a populao buscava proteger-se da gua contaminada pelo aumento da poluio e do artificialismo da gua tratada das redes pblicas (Martins et al. 2005).

gua mineral natural , segundo a RDC (Resoluo de Diretoria Colegiada) n 274, de setembro de 2005, do Ministrio da Sade (Brasil 2005a), a gua obtida diretamente de fontes naturais ou por extrao de guas subterrneas, sendo caracterizada pelo contedo definido e constante de determinados sais minerais, oligoelementos e outros constituintes,

considerando as flutuaes naturais. Segundo essa mesma Resoluo, as etapas s quais a gua mineral natural deve ser submetida, desde a captao at o armazenamento, no podem produzir, desenvolver e/ou agregar substncias fsicas, qumicas ou biolgicas que coloquem em risco a sade do consumidor e/ou alterem a composio original do produto.

Consumo de gua mineral no Brasil O mercado brasileiro de guas minerais est entre os setores da economia que mais crescem no pas, acompanhando uma tendncia mundial. O consumo per capita, que era de 13,2 litros/ano em 1997, saltou para 27 litros em 2002 e o Brasil j se coloca como o sexto maior mercado de gua mineral do mundo (Associao Brasileira das Indstrias de guas Minerais - ABINAM 2003). Segundo Neall (2000), as pessoas tendem a ver a gua mineral como um produto de primeiro mundo, mas ela mais consumida em pases em desenvolvimento, devido s suspeitas com relao aos seus suprimentos de gua potvel. A qualidade microbiolgica da gua mineral de grande interesse, uma vez que muitos consumidores a utilizam como alternativa gua fornecida pelos municpios onde vivem, por considerarem-na melhor e mais segura (Mavridou 1992).

Avaliao microbiolgica de gua mineral no Brasil No Brasil, as caractersticas microbiolgicas da gua mineral so determinadas pela RDC no 275 (Brasil 2005b), que substituiu a RDC n 54 (Brasil 2000). Segundo essa Resoluo, a anlise de gua mineral deve incluir contagem de coliformes totais, enterococos, Pseudomonas aeruginosa,

clostrdios sulfito-redutores ou Clostridium perfringens coliformes termotolerantes ou Escherichia coli (Quadro 1).

e pesquisa de

Com relao amostragem, a RDC n 275 determina que a anlise pode ser realizada utilizando amostra representativa, constituda de cinco unidades amostrais, ou amostra indicativa, composta por um nmero de unidades amostrais inferior ao estabelecido para a amostra representativa, ou seja, menos que cinco unidades. Sempre que se tratar de avaliao de lotes ou partidas, dever ser coletada a amostra representativa. Os resultados das anlises dessa amostra sero considerados na caracterizao microbiolgica da gua ou do lote examinado (Brasil 2005b). Quanto impropriedade para consumo humano, a amostra indicativa ser condenada quando for constatada a presena de E. coli ou coliformes termotolerantes ou quando o nmero de coliformes totais e/ou enterococos e /ou Pseudomonas aeruginosa e/ou clostrdios sulfito redutores ou C. perfringens for maior que o limite estabelecido para amostra indicativa, que de menos que 1 UFC (unidade formadora de colnia)/100mL (Quadro 1). Neste caso, deve ser efetuada a anlise da amostra representativa. A amostra representativa fornece informao a respeito da qualidade de um lote ou partida. Assim, um lote ou partida sero rejeitados quando for detectada a presena de E. coli ou coliformes termotolerantes em qualquer uma das cinco unidades da amostra representativa, ou quando a contagem de coliformes totais e/ou enterococos e/ou P. aeruginosa e/ou clostrdios sulfitoredutores ou C. perfringens ultrapassar o limite superior permitido que de 2 UFC/100 mL em pelo menos uma das unidades amostrais, ou, ainda, quando a contagem de coliformes totais e/ou enterococos e/ou P. aeruginosa e/ou clostrdios sulfito-redutores ou C. perfringens ultrapassar o limite inferior permitido que de menos que 1 UFC/100 mL em mais de uma das unidades amostrais (Quadro 1).

Quadro I. Caractersticas microbiolgicas estabelecidas para gua mineral pela RDC n 275, de 22 de setembro de 2005, do Ministrio da Sade. Amostra Amostra representativa Microrganismo indicativa N C m M limites E. coli ou coliformes (fecais) termotolerantes em 100 mL Coliformes totais em 100 mL Enterococos em 100 mL Ausncia 5 0 Ausncia

<1,0 UFC; <1,1 NMP ou ausncia <1,0 UFC; <1,1 NMP ou ausncia

5 1

<1,0 UFC; <1,1 NMP ou ausncia <1,0 UFC; <1,1 NMP ou ausncia <1,0 UFC; <1,1 NMP ou ausncia

2,0 UFC ou 2,2 NMP 2,0 UFC ou 2,2 NMP 2,0 UFC ou 2,2 NMP

5 1

<1,0 UFC; <1,1 Pseudomonas aeruginosa em 100 mL NMP ou ausncia

5 1

Clostrdios sulfito <1,0 UFC; <1,1 redutores ou C. <1,0 UFC; <1,1 2,0 UFC ou 5 1 NMP ou perfringens em 100 NMP ou ausncia 2,2 NMP ausncia mL Onde: N: o nmero de unidades da amostra representativa a serem coletadas e analisadas individualmente. C: o nmero aceitvel de unidades da amostra representativa que pode apresentar resultado entre os valores "m" e "M". m: o limite inferior (mnimo) aceitvel. o valor que separa uma qualidade satisfatria de uma qualidade marginal. Valores abaixo do limite "m" so desejveis. M: o limite superior (mximo) aceitvel. Valores acima de "M" no so aceitos.

Presena de bactrias em gua mineral Os riscos de contaminao da gua mineral so os mesmos que os dos reservatrios municipais (Calugay 2000). guas minerais no so livres de bactrias (Ducluzeau et al. 1976), mas no podem ser submetidas a tratamento. Dois grupos de bactrias so encontrados em guas minerais comercializadas, as bactrias autctones, existentes antes de qualquer processamento, e as alctones, que contaminam o produto durante as etapas anteriores ao engarrafamento, durante o processamento ou so oriundas do ambiente (Coelho et al. 1998). Bactrias autctones so mais adaptadas s condies oligotrficas de aqferos profundos e rapidamente multiplicam-se aps o envase. Quanto s bactrias alctones, poucas sobrevivem em guas envasadas devido ao baixo nvel de nutrientes. (Leclerc et al. 1985). Usualmente, um maior crescimento bacteriano observado em amostras de gua mineral armazenadas temperatura ambiente. No entanto, armazenamento em temperaturas baixas, como as de refrigerao, no suprime o crescimento bacteriano (Leclerc e da Costa 1998, Korzeniewska et al. 2005)

Bactrias do grupo coliforme O grupo dos coliformes inclui um grande nmero de bactrias aerbias e anaerbias facultativas, Gram-negativas, no formadoras de esporos, que fermentam lactose, com produo de gs, quando incubadas temperatura de 35C por 24 horas. Membros desse grupo que so capazes de fermentar lactose, com produo de gs, 44.5C so chamados de coliformes fecais ou termotolerantes. Muitas dessas bactrias so de origem fecal, mas algumas so capazes de multiplicar-se em vrios ambientes aquticos (World Health Organization-WHO 2003). Os gneros mais importantes do grupo dos coliformes so Enterobacter, Klebsiella, Citrobacter e Escherichia. Geralmente no so patognicos e sua presena em gua indica uma falha no processamento ou contaminao (Reynolds 2003). Os coliformes fecais so mais estreitamente associados com

poluio fecal que os coliformes totais, entretanto, alguns deles, especialmente Klebsiella, podem multiplicar-se em ambientes aquticos apropriados. O nico coliforme que raramente multiplica-se em ambientes aquticos Escherichia coli (WHO 2003). Pesquisas taxonmicas envolvendo os coliformes e estudos de seus habitats tm permitido dividi-los em trs grupos: o dos termotrficos e mais estritamente fecais, como E. coli; os coliformes ubquos e termotrficos, como Klebsiella pneumoniae e Enterobacter cloacae, que podem formar parte da microbiota intestinal de humanos e animais de sangue quente, mas podem tambm ocorrer no ambiente e, por ltimo, os psicrotrficos, coliformes puramente ambientais, como Serratia fonticola e Rahnella aquatilis, que proliferam em guas puras ou poludas e originam-se, principalmente, de vegetais ou pequenos animais (Leclerc et al. 2001) Do ponto de vista da sade pblica, os coliformes ubquos e ambientais so agrupados como indicadores de qualidade. A controvrsia sobre o valor dos coliformes fecais ou termotolerantes como indicadores de contaminao fecal, associada heterogeneidade do grupo, tem levado sugesto de que o termo coliforme fecal ou termotolerante seja redefinido como sinnimo de E. coli (Leclerc et al. 2001). Os indicadores de qualidade para guas minerais so bactrias ubquas, a maioria comum em solo e vegetao e pouco importante com relao contaminao fecal. Na ausncia de E. coli, sua presena em uma amostra de gua no indica um iminente risco sade. Entretanto, so indicadores muito sensveis de contaminao superficial e podem aparecer como primeiros indicadores da mudana da qualidade (Leclerc e Moreau 2002). Os coliformes ocorrem em altos nmeros em guas de esgoto e guas poludas. Geralmente excedem substancialmente em nmero os patgenos veiculados pela gua. So detectveis por procedimentos relativamente simples e de baixo custo, baseados no cultivo usando meios seletivos para crescimento. Os testes para coliformes so a ferramenta mais comumente utilizada para avaliao de gua potvel em todo o mundo (WHO 2003).

A presena de coliformes totais em gua indica potencial contaminao fecal e falhas nos procedimentos de tratamento e desinfeco. Os coliformes fecais fornecem evidncia mais forte de poluio fecal e sua presena em gua para consumo humano geralmente inaceitvel. O controle da contaminao fecal em gua para consumo humano de suma importncia. Indicadores especficos de contaminao fecal, como E. coli, so parmetros primordiais na verificao da qualidade microbiolgica (WHO 2003). Escherichia coli a espcie mais freqentemente isolada de amostras de fezes e parte da microbiota intestinal normal de indivduos saudveis. Geralmente no est associada a efeitos prejudiciais sade, no entanto, sob certas circunstncias, pode provocar doenas graves (WHO 2003). Cepas patognicas de E. coli so responsveis por infeces do trato urinrio, sistema nervoso e sistema digestivo em humanos. Fatores de virulncia contribuem para a patogenicidade de certas cepas de E. coli. Quatro grupos de E. coli causadoras de diarria so conhecidos: E. coli enterohemorrgica (EHEC), E. coli enterotoxignica (ETEC), E. coli enteropatognica (EPEC) e E. coli enteroinvasiva (EIEC). Outros grupos de E. coli associados diarria existentes so E. coli enteroagregativa (EAEC) e E. coli aderente (DAEC), mas seu significado no est, ainda, bem esclarecido (WHO 2003). Alguns sorotipos de EHEC, particularmente E. coli O157:H7, causam doenas que podem incluir desde diarria moderada a colite hemorrgica e/ou sndrome urmico-hemoltica (WHO 2003). E. coli O157:H7 atualmente considerada uma sria ameaa sade pblica, com formas de infeco que provocam srias complicaes clnicas (Padhye e Doyle 1992). ETEC produz enterotoxinas termolbeis ou termoestveis e importante causa de diarria em pases em desenvolvimento, especialmente em crianas de pouca idade. Os sintomas da infeco por ETEC incluem distrbios abdominais, com ou sem diarria aquosa moderada, nuseas e dor de cabea (WHO 2003). A infeco por EPEC tem sido associada com severa diarria no sanguinolenta, vmito e febre em crianas. EPEC rara em pases desenvolvidos, mas ocorre freqentemente em pases em desenvolvimento,

especialmente em crianas mal-nutridas, com perda de peso ou retardo no crescimento (WHO 2003). EIEC causa diarria aquosa e ocasionalmente sanguinolenta (WHO 2003). Os bovinos so o principal reservatrio de E. coli patognica, mas a bactria pode tambm ocorrer em sunos, caprinos e aves domsticas, como galinhas. A transmisso atravs de alimento ou gua contaminada a principal forma de infeco por E. coli. A bactria pode ser transmitida, ainda, por contato com animais ou indivduos contaminados. A transmisso de pessoa a pessoa ocorre em locais em que h contato estreito entre os indivduos, tais como casas de repouso e creches (WHO 2003). A transmisso de E. coli patognica atravs da gua tem sido documentada tanto para guas recreacionais quanto para gua de consumo humano. Um surto envolvendo E. coli O157:H7 ocorreu em um sistema de suprimento de gua da comunidade agrcola de Walkerton, em Ontrio, no Canad, em 2000, quando sete pessoas morreram e mais de 2300 ficaram doentes (WHO 2003). O impedimento da contaminao da gua mineral por E. coli importante uma vez que alguns pesquisadores j documentaram sua sobrevivncia no produto. Warburton et al. (1998) verificaram que o microrganismo capaz de aderir superfcie interna das garrafas e Jayasekara et al. (1998) consideraram que este fato poderia explicar seu longo tempo de sobrevivncia na gua mineral. Os resultados dos estudos sobre o tempo de sobrevivncia de E. coli em gua mineral so conflitantes. Enquanto Warburton et al. (1998) verificaram que E. coli 0157:H7 inoculada em gua engarrafada podia sobreviver por mais que 300 dias, Kerr et al. (1999) encontraram um perodo menor de sobrevivncia para o sorotipo, de 63 dias. Outros trabalhos verificaram perodos ainda menores de sobrevivncia para E. coli. Burge e Hunter (1990) observaram que a bactria no era mais detectada aps 50 dias de incubao. Ducluzeau et al. (1976) no encontraram o microrganismo aps 4 dias de incubao. Em estudo de Lucas e Ducluzeau

(1990), o tempo de sobrevivncia encontrado foi de menos que 40 dias. Kerr et al. (1999) compararam os resultados desses estudos com os seus e sugeriram que E. coli O157:H7 pode sobreviver por mais tempo em gua mineral que outras cepas de E. coli.

Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas aeruginosa um bastonete Gram-negativo, aerbio, membro da famlia Pseudomonadaceae. Produz um pigmento azul-

esverdeado, chamado piocianina (WHO 2003) e pode ser encontrada no ambiente, especialmente em vegetais. A populao, em geral, resistente infeco por P. aeruginosa, porm, esta bactria representa risco para indivduos de sade debilitada, especialmente crianas e idosos (Hardalo e Edberg 1997). Uma vez que P. aeruginosa capaz de crescer abundantemente at em guas puras e um patgeno oportunista, sua ocorrncia em gua mineral deve ser evitada. Assim, h duas razes para monitorar P. aeruginosa em gua mineral. De um lado, como indicadora da vulnerabilidade ou controle deficiente do ambiente de envase e, de outro, pelo fato de ser um patgeno oportunista (Leclerc e Moreau 2002). A presena de P. aeruginosa indica contaminao da fonte por matria orgnica ou contaminao durante o envase. No perodo de armazenamento, a multiplicao pode conduzir a nveis altos de P. aeruginosa na gua envasada, representando risco para os consumidores (Legnani et al. 1999). P. aeruginosa causa doenas simples a moderadas em indivduos saudveis. Vrios membros do grupo esto envolvidos em infeces tanto em animais como em humanos. Causa infeces secundrias em feridas por queimaduras, pneumonias e infeces do trato urinrio em ambiente hospitalar e infeces em feridas cirrgicas. A bactria , ainda, responsvel por septicemia, meningite e infeces de stios de drenagem resultantes de trauma. Pacientes imunocomprometidos ou com fibrose cstica so propensos colonizao com morfotipos capsulados de P. aeruginosa, que tm sido

associados com infeces pulmonares progressivas nestes indivduos (WHO 2003). Infeces veiculadas pela gua esto associadas com locais quentes e midos, como piscinas em ambientes internos. As doenas resultam em exantemas e pstulas ou infeces do canal auditivo externo (WHO 2003). P. aeruginosa encontrada em fezes, solo, gua e esgoto. Trata-se de um microrganismo predominantemente ambiental e a gua um reservatrio ideal. A bactria prolifera-se em sistemas de distribuio de gua e em piscinas de spas (WHO 2003). gua contaminada com o microrganismo pode contaminar alimentos e produtos farmacuticos, causando sua deteriorao, o que pode conduzir transmisso secundria por esses produtos (WHO 2003). A presena de P. aeruginosa em gua potvel indica uma sria deteriorao na qualidade bacteriolgica e freqentemente associada com alteraes no sabor, odor e turbidez. Pode estar tambm associada com reduo nas taxas de vazo em sistemas de distribuio e elevao da temperatura da gua. P. aeruginosa pode causar infeces secundrias devido gua contaminada, mas no responsvel por infeces intestinais decorrentes de ingesto (WHO 2003).

Enterococos Enterococos so bactrias Gram-positivas, anaerbias facultativas, que ocorrem isoladamente, aos pares ou em cadeias curtas. So encontrados em fezes humanas e de animais, mas em menores nmeros que os coliformes totais ou fecais, sendo mais resistentes que estes (WHO 2003). Os enterococos eram parte do grupo dos Streptococcus fecais, mas atualmente so classificados separadamente. H 19 espcies includas neste grupo, sendo que as predominantes no intestino so Enterococcus faecalis, E. faecium, E. durans e E. hirae (WHO 2003). Estas bactrias so capazes de sobreviver em guas salgadas e vivem to bem quanto os patgenos em ambientes recreacionais. So utilizadas

como indicadores de contaminao fecal e, geralmente, no representam riscos para a sade, quando ingeridas (Reynolds 2003). Os enterococos apresentam um grande nmero de vantagens como indicadores sobre os coliformes totais e at sobre E. coli, incluindo o fato de no crescerem no ambiente, mas poderem ali sobreviver por longos perodos. Embora possam ser encontrados nas fezes humanas em menor nmero que os coliformes fecais, ocorrem em quantidade suficiente para serem detectados (WHO 2003). Enterococos so detectveis por mtodos simples e de baixo custo. Sua presena na gua no constitui evidncia de poluio fecal, mas pesquisas recentes indicaram que a maioria (84%) dos enterococos isolados de gua tinha realmente essa origem. A sua ocorrncia pouco freqente ou em pequenos nmeros em fontes de gua limita seu uso como indicador da eficincia do tratamento de gua potvel (WHO 2003) O principal valor dos enterococos na avaliao da qualidade da gua como indicador adicional da eficincia do tratamento ou como indicador secundrio, ao ser realizada uma segunda avaliao devido deteco de coliformes ou E. coli em sistemas de distribuio. Estas bactrias fornecem dados suplementares valorosos sobre a qualidade bacteriolgica em sistemas de gua natural, porque raramente se multiplicam na gua (WHO 2003).

Clostridium perfringens Clostrdios so bastonetes Gram-positivos e anaerbios, que produzem estruturas de sobrevivncia, ou esporos, capazes de resistir a condies ambientais como temperatura, pH, UV, assim como a processos de tratamento e desinfeco da gua. O membro mais comum do grupo, Clostridium perfringens, normalmente encontrado em fezes, embora em nmeros bem inferiores que E. coli (WHO 2003). Esporos de C. perfringens so geralmente de origem fecal e esto sempre presentes em gua de esgoto, enquanto clulas vegetativas parecem no se reproduzir em sedimentos aquticos, ao contrrio de muitas bactrias indicadoras. C. perfringens encontrado em maiores contagens em fezes de

animais como ces do que em humanos e geralmente aparece em pequenos nmeros ou est ausente em outros animais de sangue quente (WHO 2003). O microrganismo um indicador confivel da sobrevivncia de vrus e cistos de protozorios em gua tratada. Sua presena ali, sugere deficincias na remoo pelo tratamento, falha no processo de desinfeco ou recontaminao aps o tratamento (WHO 2003).

Bactrias heterotrficas O termo bactria heterotrfica engloba todas as bactrias que usam nutrientes orgnicos para crescimento. Essas bactrias esto universalmente presentes em todos os tipos de gua, em alimentos, solo, vegetao e ar (Allen et al. 2004). O grupo inclui os microrganismos isolados por mtodos particulares, cujas variveis incluem composio do meio, tempo e temperatura de incubao e tipo de inoculao do microrganismo no meio. Outros termos utilizados para este grupo de bactrias em gua so contagem padro em placas e contagem total em placas (WHO 2003). A contagem de bactrias heterotrficas baseia-se no princpio de que cada clula, ou grupos de clulas da mesma espcie, se desenvolve no gar, formando uma colnia macroscopicamente visvel, possibilitando, deste modo, uma enumerao das bactrias presentes na amostra (American Public Health Association - APHA 1992). A contagem de bactrias heterotrficas no exigida pela RDC n 275 (Brasil 2005b), mas um parmetro utilizado para determinao da potabilidade da gua. A Portaria n 518 (Brasil 2004) determina um limite de 500 UFC/mL de bactrias heterotrficas em guas destinadas a consumo humano. A presena de altos nmeros de bactrias heterotrficas em guas envasadas pode ser decorrente da microbiota natural da fonte. Estas bactrias podem multiplicar-se aps o envase, resultando em altas contagens. A ausncia de um desinfetante residual, como o cloro, e perodos longos de armazenamento temperatura ambiente, ou mais alta, podem resultar em elevao do nmero de microrganismos at o consumo. As contagens

microbianas atingem um pico aps uma semana de armazenamento e mantm-se constantes aps esse perodo (Li et al. 2001). Vrios gneros de bactrias heterotrficas tm sido encontrados em gua envasada, incluindo Achromobacter, Acinetobacter, Aeromonas,

Alcaligenes, Arthrobacter, Caulobacter, Corynebacterium, Flavobacterium e Pseudomonas (Manaia et al 1990). Algumas destas bactrias heterotrficas produzem fatores de virulncia e podem agir como patgenos oportunistas (Pavlov et al 2004). Estudos com gua de torneira, filtrada e no filtrada, mostraram associao entre contagens altas de bactrias heterotrficas e gastrenterites (Payment et al 1991). Os indivduos que so especialmente suscetveis a infeces por bactrias heterotrficas so aqueles de pouca idade, os imunologicamente debilitados, os idosos, os transplantados, as gestantes, os portadores de doenas imunossupressoras, como a AIDS, alm de pessoas submetidas quimioterapia (Ehlers 2004). O mtodo de contagem de bactrias heterotrficas em placas determina a qualidade microbiolgica geral da gua. A incubao geralmente realizada a 37 C por 48 horas. As especificaes de qualidade ao redor do mundo permitem contagens de bactrias heterotrficas de at 100 UFC/mL (WHO 2003) e, em alguns pases, como o Brasil (Brasil 2004 Portaria n 518), de at 500 UFC/mL. Anlises regulares de bactrias heterotrficas servem para determinar a qualidade da gua aps armazenamento. O teste, simples e de baixo custo, fornece resultados em tempo relativamente curto e um dos indicadores mais sensveis e confiveis de falhas no processo de desinfeco (WHO 2003). A contagem de bactrias heterotrficas detecta bactrias de origem fecal, assim como microrganismos autctones de ambientes aquticos, que podem causar desde alteraes organolpticas a infeces oportunistas (WHO 2003). Patgenos oportunistas esto naturalmente presentes no ambiente e o consumo ou exposio gua, contendo grandes nmeros de bactrias heterotrficas, pode levar a doenas como gastrenterites e infeces de pele e

mucosas, particularmente em pessoas cujo sistema imune est comprometido (WHO 2003).

Tratamento de gua mineral A adoo de medidas que impeam a contaminao da gua mineral imprescindvel uma vez que, no Brasil, a gua mineral pode passar apenas por filtrao, no sendo permitido o uso de substncias qumicas (Brasil 2005a). Isto importante uma vez que h estudos indicando que a utilizao de cloro para tratamento de gua pode trazer prejuzos sade. Mais especificamente, foi evidenciado que a exposio de pessoas e animais aos trialometanos, compostos resultantes da reao entre o cloro e matria orgnica presente na gua, pode elevar o risco de desenvolvimento de cncer (Morris 1992), abortos espontneos e malformaes fetais (Swan et al. 1998).

Mais segurana para o consumidor de gua mineral Para garantir populao uma gua mineral de boa qualidade, a Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria (ANVISA), vinculada ao Ministrio da Sade, est elaborando uma nova regulamentao sobre Boas Prticas de Fabricao para indstrias de gua mineral (ABINAM 2005). A consulta pblica da ANVISA, perodo em que a sociedade e entidades podem apresentar sugestes ao novo regulamento, foi encerrada no dia 25 de janeiro de 2005. A medida pretende padronizar os procedimentos de controle da qualidade sanitria da gua industrializada, em todas as etapas do processo, incluindo captao, distribuio, rotulagem, armazenamento,

transporte e exposio venda (ABINAM 2005). Ainda com o objetivo de oferecer segurana ao consumidor, a ABINAM instituiu, em conjunto com um dos mais conceituados institutos de certificao de qualidade de alimentos do mundo, a NSF National Sanitation Foundation, com sede nos Estados, um programa de qualificao das fontes, com vistas implantao do Selo ABINAM de Qualidade (ABINAM 2003). Vinte e cinco fontes brasileiras participam do processo, orientadas e auditadas pela NSF. Dez dessas fontes j esto na fase final de certificao. O

processo envolve no apenas as fontes, mas tambm os produtores de garrafes e de tampas, que esto sendo certificados pelo IQB (Instituto de Qualidade do Brinquedo); os fabricantes de mquinas de higienizao de garrafes; os produtores de bebedouros e os distribuidores de gua mineral (ABINAM 2003). Aps a concesso do selo, a prpria NSF se encarregar de auditar periodicamente as fontes, para verificar a continuidade dos processos de controle de qualidade (ABINAM 2003).

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ARTIGO 2 AVALIAO MICROBIOLGICA DE AMOSTRAS DE GUA MINERAL NATURAL, SEM GS, ENVASADAS, COMERCIALIZADAS EM GOINIA/GO _______________________________________________________________

Ana Paula Rodrigues Corra Guimares; lvaro Bisol Serafini* Departamento de Microbiologia, Imunologia, Parasitologia e Patologia do Instituto de Patologia Tropical e Sade Pblica da Universidade Federal de Gois. E-mail: anapaula_rcg@yahoo.com.br * Endereo para correspondncia: Rua 235 esq. 1a. Avenida, 3 andar/Sala 422. Setor Universitrio. CEP 74605-050, Goinia/GO. E-mail:

abisol@iptsp.ufg.br

Resumo Amostras de 15 marcas de gua mineral natural, sem gs, envasadas, foram examinadas quanto contaminao por coliformes totais, coliformes fecais, Escherichia coli, bactrias heterotrficas, Pseudomonas aeruginosa,

enterococos, clostrdios sulfito-redutores, Clostridium perfringens e Salmonella sp, atravs do mtodo da membrana filtrante. Dentre as quinze marcas analisadas, seis (40%) estavam contaminadas por algum dos microrganismos pesquisados. Destas seis, todas (100%) apresentaram contaminao por coliformes totais, cinco (83%) por coliformes fecais, quatro (67%) por bactrias heterotrficas e em uma (17%) das marcas observou-se contaminao por Pseudomonas aeruginosa. As outras nove (60%) marcas analisadas

mostraram-se em conformidade com o que determina a legislao brasileira a respeito da qualidade microbiolgica de gua mineral. A ocorrncia de contaminao denota falhas no processamento do produto, que devem ser corrigidas, uma vez que a legislao brasileira no permite o tratamento de gua mineral e esta deve ser microbiologicamente segura, evitando prejuzos sade do consumidor. Descritores: gua mineral envasada, qualidade microbiolgica, coliformes, Pseudomonas aeruginosa, bactrias heterotrficas.

Abstract Samples from 15 bottled natural mineral water brands were examined to determine contamination by total coliforms, fecal coliforms, heterotrophic bacteria, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, enterococci, sulphite reducing clostridia, Clostridium perfringens and Salmonella sp, using

membrane filter technique. Amongst the fifteen analyzed brands, six (40%) were contaminated by at least one of the searched microorganisms. Of those six brands, all (100%) showed contamination by total coliforms, five (83%) by fecal coliformes, four (67%) by heterotrophic bacteria and in one (17%) of the brands it was observed contamination by Pseudomonas aeruginosa. The other nine (60%) analyzed brands were in compliance with that the brazilian legislation determines regarding the microbiological quality of mineral water. The contamination occurrence denotes imperfections in the processing of the product, that must be corrected, because the brazilian legislation does not allow the treatment of mineral water, which must be microbiologically safe, preventing damages to the consumers health. Key words: bottled mineral water, microbiological quality, coliforms,

Pseudomonas aeruginosa, heterotrophic bacteria.

Introduo gua mineral natural, conforme a Resoluo de Diretoria Colegiada (RDC) n 274 de setembro de 2005, do Ministrio da Sade, aquela obtida diretamente de fontes naturais ou por extrao de guas subterrneas, caracterizada pelo contedo definido e constante de determinados sais minerais, oligoelementos e outros constituintes, considerando as flutuaes naturais (Brasil 2005b). De acordo com a Associao Brasileira das Indstrias de guas Minerais ABINAM, entre 1997 e 2001, o setor de guas minerais registrou crescimento acumulado de 104%. O consumo por indivduo, que era de 13,2 litros/ano em 1997, passou para 24,9 litros em 2001(ABINAM 2002). Em 2002, o consumo per capita chegou a 27 litros/ano. O Brasil encontra-se na sexta posio no mercado mundial de gua mineral (ABINAM 2003). A explicao para o aumento do consumo de gua mineral em certos setores da populao a associao do produto a um elevado grau de pureza (Eiroa et al. 1996). Existe, ainda, a percepo de que seu consumo representa um estilo saudvel de vida e de que o produto relativamente seguro (Cowman e Kelsey 1992). Entretanto, a ocorrncia de distrbios

gastrintestinais, em decorrncia do consumo de guas minerais, tem motivado o estudo de sua qualidade microbiolgica (Hunter 1993). A ocorrncia de doena de veiculao hdrica envolvendo gua mineral foi documentada em 1974, em Portugal, quando gua mineral envasada, no carbonatada, foi considerada o veculo de transmisso de clera, provocando a internao de 2.467 pessoas e 48 mortes (Blake et al. 1977, Gonzalez et al. 1987). As guas minerais quando atravessam uma superfcie de rocha e terra para alcanar determinado nvel perdem grande parte da microbiota bacteriana e da matria orgnica em suspenso (Hiluy et al. 1994). Contudo, no so estreis, sendo nelas encontrados microrganismos autctones, existentes antes de qualquer processamento (Coelho et al. 1998). Pertencem a esse grupo as bactrias dos gneros Pseudomonas, Acinetobacter, Alcaligenes, Flavobacterium, Micrococcus e Bacillus. Porm, a maior preocupao com a

possvel presena de patgenos, como Vibrio cholerae, Shigella sp, Aeromonas hidrophila, Plesiomonas shigelloides, vrus entricos, protozorios e patgenos oportunistas, como Pseudomonas aeruginosa (Varnam e Sutherland 1994). Outro tipo de microbiota bacteriana que pode ser encontrado na gua mineral, mas no proveniente da fonte, composto de bactrias alctones, que contaminam o produto durante as etapas anteriores ao engarrafamento, durante o processamento ou so oriundas do ambiente (Coelho et al. 1998). A microbiota alctone inclui uma grande variedade de bactrias saprfitas, bem como patgenos humanos (Fleet e Mann 1986). A contaminao da gua mineral pode ocorrer na fonte, no envase (devido natureza do processo ou reutilizao de recipiente no devidamente higienizado), ou no transporte e armazenamento, no caso da embalagem no ser absolutamente estanque (Instituto Nacional de Metrologia, Normalizao e Qualidade Industrial INMETRO 1997). As bactrias do grupo coliforme so consideradas os principais indicadores de contaminao. Os coliformes totais incluem bactrias que pertencem, principalmente, aos gneros Citrobacter, Enterobacter, Escherichia e Klebsiella (Companhia de Tecnologia de Saneamento Ambiental - CETESB 2002). Coliformes so bastonetes Gram-negativos, aerbios ou anaerbios facultativos, que fermentam a lactose, com produo de cido e gs, temperatura de 32C a 35C, em um perodo de 24 a 48 horas (American Public Health Association APHA 2001). Os coliformes fecais, subgrupo dos coliformes totais, fermentam a lactose em temperaturas mais elevadas, de 44,5C a 45,5C, sendo tambm chamados de termotolerantes (U. S. Food and Drug Administration FDA 2002). Os coliformes totais esto largamente espalhados na natureza. Todos os membros do grupo podem ocorrer em fezes de humanos, mas alguns podem tambm estar presentes em fezes de outros animais, solo e outras fontes no humanas. Os coliformes fecais tm, mais freqentemente, origem fecal. Entretanto, englobam gneros, como Klebsiella, que no necessariamente

habitam o intestino. E. coli o coliforme fecal mais relacionado a fezes humanas e de animais de sangue quente, sendo recomendado como melhor indicador de contaminao fecal, em relao aos demais coliformes (U. S. Environmental Protection Agency - USEPA 2004). A presena do grupo de bactrias coliformes totais denota a ocorrncia de uma interferncia externa na gua mineral, j que este no faz parte da microbiota autctone da mesma (INMETRO 1997). Para indicar poluio sanitria, a contagem de coliformes fecais mostrase mais significativa que o uso dos coliformes totais, pois esto mais restritos ao trato intestinal de animais de sangue quente. A determinao da concentrao dos coliformes assume importncia como parmetro indicador da possibilidade da existncia de microrganismos patognicos, responsveis pela transmisso de doenas de veiculao hdrica, tais como febre tifide, febre paratifide, disenteria bacilar e clera (CETESB 2002). A legislao brasileira vigente, explicitada pela RDC n 275 de setembro de 2005 (Brasil 2005c), estabelece que a gua ser condenada quando houver a presena de coliformes fecais em qualquer quantidade. A determinao do nmero de unidades formadoras de colnias de bactrias heterotrficas no exigida pela RDC n 275 (Brasil 2005c), mas indicada como parmetro capaz de avaliar as condies higinicas do processo de captao, aduo, armazenamento e envase, na linha de produo ou condies de estocagem no ponto de venda. Um elevado nmero de bactrias heterotrficas pode comprometer a aceitabilidade do produto devido s alteraes das caractersticas organolpticas e reduo do prazo de validade (Tancredi et al. 2002). A contagem de bactrias heterotrficas utilizada para avaliar a qualidade microbiolgica geral de guas engarrafadas (World Health Organization - WHO 2001). Atualmente, a legislao brasileira em vigor, a RDC n 275 (Brasil 2005c) do Ministrio da Sade, que regulamenta as caractersticas

microbiolgicas para gua mineral, determina ausncia de Escherichia coli, exigindo ainda contagens, com limites estabelecidos, para coliformes totais, enterococos, Clostridium sulfito-redutores e Pseudomonas aeruginosa.

vigilncia

rotineira

da

qualidade

bacteriolgica

da

gua

indispensvel, tendo em vista a necessidade de proteger a sade dos consumidores (CETESB 1984), uma vez que a gua de consumo humano um importante veculo de enfermidades de natureza infecciosa (Issac-Marquez et al. 1994). As doenas de veiculao hdrica so causadas, principalmente, por microrganismos patognicos de origem entrica - animal ou humana transmitidos basicamente pela rota fecal-oral, ou seja, so excretados nas fezes de indivduos infectados e ingeridos atravs da gua ou de alimento contaminado por gua poluda com fezes (Grabow 1996). Vrios estudos sobre a qualidade microbiolgica de gua mineral tm sido realizados no Brasil (Wendpap et al. 1999, Nascimento et al. 2000, Alves et al. 2002, Tancredi et al. 2002, SantAna et al. 2003, Silva e Calazans 2003, Giacometti et al. 2005) e em outros pases como Canad (Warburton et al. 1986), Estados Unidos (Breuer et al. 1990), Japo (Fujikawa et al. 1997), Argentina (Tamagnini e Gonzlez 1997), Taiwan (Tsai e Yu 1997), Frana (Defives et al. 1999), frica do Sul (Ehlers et al. 2004) e Grcia (Venieri et al. 2006). Tais estudos tm indicado alguns resultados preocupantes, que mostram que a qualidade das guas minerais comercializadas em vrios locais do mundo no merece, em certos casos, a confiana que, geralmente, lhe creditada pela populao. Tendo em vista este quadro, devem ser realizados exames peridicos das guas minerais, para determinar seu grau de segurana do ponto de vista bacteriolgico (CETESB 1984) e resguardar a sade dos consumidores. O presente estudo teve como objetivo avaliar a qualidade microbiolgica de marcas de gua mineral natural, sem gs, envasadas, comercializadas em Goinia, Gois, atravs da comparao do perfil microbiolgico das amostras coletadas com o padro de qualidade microbiolgica estabelecido pela legislao vigente. Os resultados obtidos foram encaminhados para a Vigilncia Sanitria do Municpio de Goinia, com o intuito de contribuir para o monitoramento da qualidade do produto comercializado na cidade.

Material e Mtodos Amostragem Foram analisadas amostras de 15 marcas de gua mineral natural, sem gs, originrias dos estados de Gois, Minas Gerais, Paran, Rio de Janeiro e So Paulo, comercializadas em embalagens de 500 mL e 1,5 L, coletadas em suas embalagens originais e lacradas. A coleta das amostras foi realizada com a colaborao da Vigilncia Sanitria Municipal de Goinia, em supermercados e lanchonetes da cidade, nos meses de abril e maio de 2004. As anlises microbiolgicas atenderam aos critrios e padres microbiolgicos estabelecidos pela RDC n. 54 (Brasil 2000), substituda, em 2005, pela RDC n 275 (Brasil 2005c). Esta substituio, porm, no promoveu modificaes quanto s caractersticas microbiolgicas e amostragem exigidas para gua mineral. Foram analisadas cinco unidades de cada uma das marcas avaliadas, conforme indicao da RDC n 275 (Brasil 2005c) para constituio de amostragem representativa. Uma vez constatada a presena de algum dos microrganismos pesquisados na primeira amostra, outro grupo de cinco unidades da marca, com mesma data de fabricao e volume foi analisado, para fins de confirmao, tendo sido avaliadas, no total, 105 unidades amostrais.

Preparo das Amostras As anlises microbiolgicas foram realizadas pela tcnica da membrana filtrante de acordo com American Public Health Association - APHA (1998), no Laboratrio de Microbiologia de Alimentos do Instituto de Patologia Tropical e Sade Pblica da Universidade Federal de Gois. No laboratrio, as amostras foram identificadas e homogeneizadas manualmente, por inverso da embalagem plstica, por 25 vezes consecutivas, na mesma angulao do brao. Alquotas de 100 mL de cada amostra, para cada parmetro microbiolgico, foram vertidas assepticamente em porta-filtros previamente esterilizados (Millipore) e filtradas em membranas de acetato de celulose

(Millipore) de 47 mm de dimetro e 0,45 m de porosidade. A seguir, com auxlio de pina especial de bordos achatados, as membranas foram introduzidas em meio de cultura especfico para a contagem de coliformes totais e fecais, bactrias heterotrficas, enterococos, Pseudomonas

aeruginosa, clostrdios sulfito-redutores e Clostridium perfringens e pesquisa de Escherichia coli e de Salmonella sp. Os resultados das contagens foram expressos em UFC/100 mL.

Contagem de coliformes totais e coliformes fecais Para a contagem de coliformes totais, as membranas resultantes da filtrao das alquotas de cada amostra foram colocadas em placas de Petri contendo gar Endo (Merck) e incubadas 35C durante 24 horas. A contagem de coliformes fecais foi realizada atravs da transferncia, a partir das placas de gar Endo, de cinco colnias tpicas, de colorao vermelha, para tubos de ensaio com caldo EC (Merck), contendo tubos de Durham invertidos. Estes tubos foram incubados em banho-maria por 24 a 48 horas temperatura de 44,5C. A ocorrncia de coliformes fecais foi indicada pela presena de gs no interior dos tubos de Durham.

Pesquisa de Escherichia coli A pesquisa de E. coli foi realizada utilizando-se as colnias provenientes das placas de gar Endo, positivas para coliformes fecais, aps inoculao em caldo EC incubado a 44,5oC, atravs do teste de IMViC (Indol, Vermelho de Metila, Voges-Proskauer e Citrato) (APHA 1998).

Contagem de bactrias heterotrficas As unidades de filtrao foram depositadas em placas de Petri contendo gar padro para contagem - PCA (Merck) e a incubao, por um perodo de 48 horas, foi realizada temperatura de 35C, enumerando-se os microrganismos aerbios mesfilos viveis.

Contagem de enterococos Para a enumerao dos enterococos utilizou-se o gar KF (Merck), acrescido de TTC (cloreto de 2,3,5-trifeniltetrazlio), com incubao a 37C, por 48 horas.

Contagem de Pseudomonas aeruginosa (Thornley 1960, modificado) Empregou-se o gar Cetrimide (Merck), com incubao a 35C durante 48 horas. As colnias tpicas de Pseudomonas aeruginosa apresentam colorao azul-esverdeada, devido produo do pigmento piocianina.

Contagem de clostrdios sulfito-redutores e Clostridium perfringens As membranas foram dispostas em placas contendo gar SPS (SulfitoPolimixina-Sulfadiazina) (Merck) e incubadas em jarra de anaerobiose a 43C por 48 horas. As colnias tpicas apresentam colorao enegrecida, sendo, posteriormente submetidas a provas bioqumicas para identificao de Clostridium perfringens atravs das provas de fermentao tempestuosa, motilidade, reduo de nitrato, liquefao da gelatina e fermentao da rafinose.

Pesquisa de Salmonella sp Concentrao Cada membrana resultante da filtrao de alquotas de 100 mL foi transferida para frascos contendo 250 mL de gua peptonada, incubados a 35C por 24 horas, para pr-enriquecimento. Enriquecimento seletivo Aps este perodo, foi transferido 1 mL de cada frasco para tubos de ensaio contendo 10 mL de caldo selenito-cistina e tambm para tubos de ensaio contendo 10 mL de caldo tetrationato, acrescidos de 0,2 mL de iodo e 0,1 mL de soluo verde brilhante, para enriquecimento seletivo. Estes tubos foram incubados a 35C por 24 horas.

Plaqueamento seletivo Aps a incubao, as culturas foram semeadas, pela tcnica de esgotamento de ala bacteriolgica, na superfcie de placas, em duplicata, contendo gar verde brilhante e gar xilose lisina desoxicolato, com incubao a 35C por 24-48 horas.

Confirmao preliminar Colnias tpicas foram inoculadas em tubos contendo gar trplice acar ferro, incubados a 35C por 24 horas. Foram empregadas as seguintes provas de identificao bioqumica: prova da oxidase, Voges-Proskauer e Vermelho de Metila, fermentao de carboidratos (dulcitol, glicose, inositol, maltose, manitol, ramnose, sorbitol e xilose), verificao da motilidade, deteco de beta-galoctosidase, descarboxilao da lisina, utilizao do malonato e citrato, desaminao da fenilalanina, produo de indol, urease e cido sulfdrico.

Resultados Dentre as quinze marcas analisadas, seis (40%) estavam contaminadas por pelo menos um dos microrganismos pesquisados. Destas seis, todas (100%) apresentaram contaminao por coliformes totais, cinco (83%) por coliformes termotolerantes, quatro (67%) por bactrias heterotrficas e em uma (17%) das marcas observou-se contaminao por Pseudomonas aeruginosa. Em trs (50%) dessas marcas observou-se contaminao simultnea por dois microrganismos, duas marcas (33,3%) apresentaram contaminao

concomitante por trs agentes e em uma (16,7%) delas foram encontrados quatro dos microrganismos pesquisados. Na segunda anlise realizada, os resultados foram semelhantes, com variaes nas contagens obtidas, mas no quanto aos microrganismos isolados. Nas outras nove (60%) marcas analisadas no foi observada contaminao pelos microrganismos pesquisados (Quadro I). Com relao procedncia das marcas em que foi constatada contaminao, duas (33%) so originrias do estado de Minas Gerais e quatro (67%) do estado de Gois. Quatro (26,7%) marcas apresentaram bactrias heterotrficas, mas em nmero inferior ao permitido para gua potvel, que de 500 UFC/mL (Brasil 2004). P. aeruginosa foi encontrada em uma das cinco unidades de uma das marcas analisadas. A contagem obtida foi de 05 UFC/100 mL. Uma segunda anlise foi realizada e a presena da bactria no foi observada novamente. Os resultados das contagens, em UFC/100mL, dos microrganismos encontrados em cada uma das marcas nas quais foi observada contaminao podem ser vistos na Tabela I. As contagens de Enterococcus, Clostrdios sulfito-redutores e

Clostridium perfringens e as pesquisas de Salmonella e Escherichia coli no forneceram resultados positivos nas amostras avaliadas.

Quadro I. Ocorrncia dos microrganismos pesquisados nas 15 marcas de gua mineral analisadas. Clostridium Coliformes Coliformes Bactrias Pseudomonas Escherichia Salmonella Enterococos Marcas sulfitototais fecais heterotrficas sp aeruginosa coli redutor 1 2 + + 3 + + 4 + 5 6 7 8 9 10 11 12 13 + + 14 + + 15 + + (+) : presente; (-) : ausente + + + + + -

Tabela I. Intervalos das contagens, em UFC/100mL, dos microrganismos encontrados em seis dentre quinze marcas de gua mineral comercializadas na cidade de Goinia/GO, avaliadas no 2 trimestre de 2004. Marcas 02 03 04 13 14 15
a b

Coliformes Totais Ia 38 a 916 897 a 998 204 a 852 46 a 94 854 a 986 96 a 188 IIb 08 a 842 873 a 985 616 a 832 04 a 54 768 a 976 96 a 194

Coliformes Fecais Ia 38 a 916 897 a 998 ND 46 a 94 854 a 986 96 a 188 IIb 08 a 842 873 a 985 ND 04 a 54 768 a 976 96 a 194

Bactrias Heterotrficas Ia 16 a 817 26 a 626 04 a 42 ND 01 a 12 ND IIb 03 a 54 15 a 170 02 a 05 ND 144 a 896 ND

P. aeruginosa Ia ND ND ND ND 05 ND IIb ND ND ND ND ND ND

: Intervalos das contagens obtidas na primeira amostra analisada : Intervalos das contagens obtidas na segunda amostra analisada

ND: Microrganismo no detectado

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Discusso Os resultados obtidos foram confrontados com os critrios

bacteriolgicos determinados pela RDC n 275 (Brasil 2005c), que dispe sobre o regulamento tcnico de caractersticas microbiolgicas para gua mineral natural e gua natural. Seis (40%) das marcas analisadas no atenderam aos padres exigidos (Brasil 2005c) devido s altas contagens de coliformes totais e termotolerantes detectadas e pelo fato de a contaminao ter sido evidenciada em todas as cinco unidades amostrais avaliadas de cada marca, quando, no mximo, uma delas pode apresentar contaminao, desde que dentro do limite permitido. Uma das marcas apresentou, ainda, contagem de P. aeruginosa acima do determinado pela legislao, embora em apenas uma das cinco unidades da amostra e somente na primeira anlise (Tabela I). As contagens encontradas para coliformes totais ultrapassaram o limite superior de 2 UFC/100mL estabelecido pela RDC n 275 em todas as marcas em que esse grupo de microrganismos foi encontrado. A menor contagem de coliformes totais obtida nas amostras foi de 4 UFC/100mL e a maior foi de 998 UFC/100mL (Tabela I). Conforme a RDC n 275, a utilizao de amostragem representativa, empregada neste estudo, permite avaliar a qualidade de um lote ou partida. Assim, os lotes avaliados das marcas identificadas com os nmeros 2, 3, 4, 13, 14 e 15 podem ser considerados imprprios para o consumo humano. Trabalhos semelhantes tm sido realizados no Brasil (Wendpap et al. 1999, Nascimento et al. 2000, Alves et al. 2002, Tancredi et al. 2002, SantAna et al. 2003, Silva e Calazans 2003, Giacometti et al. 2005) e em outros pases como Canad (Warburton et al. 1986), Estados Unidos (Breuer et al. 1990), Japo (Fujikawa et al. 1997), Argentina (Tamagnini e Gonzlez 1997), Taiwan (Tsai e Yu 1997), Frana (Defives et al. 1999), frica do Sul (Ehlers et al. 2004) e Grcia (Venieri et al. 2005). Em muitos deles, tal como ocorreu neste estudo, foi observada contaminao em gua mineral. A presena de coliformes totais, tal como ocorreu nesta avaliao, foi observada em estudos realizados por Warburton et al. (1986), Wendpap et al.

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(1999), Alves et al. (2002), Tancredi et al. (2002), SantAna et al. (2003), Silva e Calazans (2003), Venieri et al. (2006) e pelo INMETRO (INMETRO 1997). Os coliformes fecais foram igualmente detectados nos trabalhos do INMETRO (INMETRO 1997) e de Wendpap et al. (1999) e Silva e Calazans (2003). O mesmo no ocorreu nos estudos de Warburton et al. (1986), Fujikawa et al. (1997), Tamagnini e Gonzlez (1997), Tsai e Yu (1997), Alves et al. (2002) e Ehlers et al. (2004). A presena de P. aeruginosa foi tambm observada nos estudos de Tamagnini e Gonzlez (1997), Tsai e Yu (1997), Defives et al. (1999) Nascimento et al. (2000), Tancredi et al. (2002), Silva e Calazans (2003) e Venieri et al. (2006). A bactria, no entanto, no foi isolada nas anlises realizadas por Fujikawa et al. (1997). As bactrias heterotrficas foram encontradas em amostras de gua mineral analisadas por Breuer et al. (1990), Tsai e Yu (1997), Nascimento et al. (2000) e Ehlers et al. (2004). E. coli foi isolada de amostras de gua mineral avaliadas por SantAna et al. (2003), mas, assim como ocorreu no presente estudo, no foi detectada nos trabalhos de Warburton et al. (1986), Tamagnini e Gonzlez (1997) e Wendpap et al. (1999). Os enterococos no foram isolados neste e nos estudos de Fujikawa et al. (1997), Tsai e Yu (1997) e Ehlers et al. (2004), o que no ocorreu nas avaliaes realizadas por Giacometti et al. (2005) e Venieri et al. (2006) Os clostrdios sulfito-redutores foram isolados por Giacometti et al. (2005), mas, como ocorreu no presente trabalho, no foram encontrados nas amostras avaliadas por Ehlers et al. (2004). A ANVISA (Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria), no ano de 2002, realizou um estudo sobre a qualidade da gua mineral comercializada em todo o pas, como parte do Programa Nacional de Monitoramento da Qualidade Sanitria de Alimentos. Este estudo revelou resultados insatisfatrios em 75 (10%) das 715 anlises realizadas (Brasil 2002). No endereo eletrnico da Agncia (Brasil 2005a) consta, ainda, uma lista de Alimentos

Inutilizados/Advertidos que inclui duas marcas de gua mineral. Uma delas por

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ter apresentado contagem insatisfatria de coliformes totais e, a outra, por apresentar contagem de P. aeruginosa acima dos limites permitidos por lei. Segundo Stickler (1989), a verificao de coliformes totais na ausncia de E. coli, como ocorreu no presente estudo, pode indicar que a fonte est sendo contaminada com guas superficiais. Neste caso, a presena de enterococos ser o indcio de que os coliformes encontrados so de origem fecal. De acordo com Geldreich (1998), a gua de escoamento superficial, durante o perodo de chuva, o fator que mais contribui para a mudana da qualidade microbiolgica da gua subterrnea, podendo torn-la de risco sade. Gonzalez et al. (1982), em estudo realizado no Mxico, concluram que a presena de coliformes nas amostras das guas dos mananciais e domiclios estudados, teve relao direta com a presena de chuva, devido ao arraste de excretas humanas e de outros animais. Cogger (1988) acrescenta que a suscetibilidade da gua subterrnea contaminao, principalmente no perodo de chuva, deve-se percolao rpida dos microrganismos em sua direo, aliada ao fato de que o nvel da gua, durante esse perodo, aproximase da superfcie do solo, diminuindo sua capacidade filtrante. A presena de coliformes totais em gua e alimentos no evidncia definitiva de contaminao fecal porque pertencem a este grupo bactrias cuja origem direta no exclusivamente entrica, uma vez que possuem capacidade de colonizao ambiental, em especial do solo. Sendo assim, a presena de coliformes totais pode tambm estar relacionada a prticas inadequadas de sanitizao e processamento desses produtos, ou mesmo sua recontaminao aps estes procedimentos (Hitchins et al. 1984). Embora coliformes totais geralmente no causem doena, sua presena indica que ocorreram falhas, as quais poderiam possibilitar a contaminao do produto por microrganismos capazes de colocar em risco a sade do consumidor (Glanville 1994). Os coliformes fecais, devido sua baixa capacidade de colonizao ambiental, so indicadores mais eficientes de contaminao fecal, sendo sua presena em alimentos de maior importncia sanitria (Landgraf 1996).

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A presena de coliformes fecais indica srios riscos sade uma vez que vrios microrganismos potencialmente patognicos so encontrados nas fezes, podendo provocar no consumidor diarria, nuseas, dor de cabea, entre outros sintomas (Glanville 1994). Embora no seja exigida pela legislao vigente para gua mineral, alguns estudos indicam a contagem de bactrias heterotrficas, pois, quando presentes em contagens acima de 500 UFC/mL, podem inibir o crescimento de coliformes em meios de cultura, mascarando sua presena (Geldreich et al. 1978). Segundo Allen et al. (2004), tal inibio ocorre em meios base de lactose e a realizao da contagem de bactrias heterotrficas, em conjunto com a contagem de coliformes, necessria para determinar a real qualidade microbiolgica da gua, o que pode no ocorrer quando se pesquisa somente coliformes. Lechevallier e McFeters (1985) explicaram esse fato apontando que coliformes requerem uma maior quantidade de nutrientes para seu crescimento que as bactrias heterotrficas, sendo particularmente suscetveis

competio por nutrientes em ambientes oligotrficos como a gua potvel. Neste estudo, no entanto, a presena de bactrias heterotrficas parece no ter interferido na deteco de coliformes. O FDA (Food and Drug Administration), rgo norte-americano que regula alimentos e medicamentos, indica que, quando guas envasadas esto livres de microrganismos de significado em sade pblica e so engarrafadas de acordo com as normas de boas prticas de fabricao, a presena de bactrias heterotrficas, parte da microbiota daquela gua, normalmente no representar risco sade, porque estes microrganismos no colonizam o trato digestivo humano (Federal Register 1993) Edberg et al. (1997) destacam que as bactrias autctones da gua mineral no apresentam fatores de virulncia importantes, tornando sua presena em gua potvel irrelevante para a sade pblica, exceto em caso de indivduos mais severamente imunocomprometidos. A constatao da presena de P. aeruginosa em gua mineral, como ocorreu em amostra de uma das marcas analisadas, preocupante por vrios motivos. Este microrganismo um importante patgeno oportunista (Leclerc e

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Moreau 2002), com capacidade de multiplicar-se em guas com contedo reduzido de nutrientes (Moreira et al. 1994), podendo alterar seu sabor, cor e turbidez (Stickler 1989). Alm disso, por apresentar cpsula, P. aeruginosa pode colonizar equipamentos industriais, sendo um indicador da higienizao dos mesmos (Warburton e Dodds 1992). Segundo Legnani et al. (1999), a presena de P. aeruginosa indica contaminao da fonte ou durante o envase. Durante o perodo de armazenamento, a multiplicao do microrganismo pode atingir nveis altos no produto envasado, representando risco para o consumidor, especialmente para os que tm sade debilitada, para crianas ou idosos. Leclerc e Moreau (2002) destacam que a capacidade de adaptao de Pseudomonas deve-se ao fato de que as bactrias do gnero no requerem vitaminas ou aminocidos especficos e podem utilizar diferentes fontes de carbono para seu crescimento, sendo comuns em guas subterrneas. A presena de microrganismos patognicos ou oportunistas na gua mineral natural pode desencadear infeces mais ou menos graves, dependendo do estado de imunidade do consumidor. Alm disso, a ausncia de bactrias decorrentes de contaminao fecal no justifica a ausncia de microrganismos com poder patognico, como P. aeruginosa, que tem condies de sobrevivncia especfica no meio hdrico (Nascimento 1999). Os consumidores devem ser alertados de que a gua mineral no necessariamente mais segura que a gua encanada. Ambas podem conter os mesmos microrganismos (Warburton 2000) e so igualmente passveis de contaminao (Calugay 2000). Bridgman et al. (1995) afirmaram que o monitoramento peridico da qualidade microbiolgica da gua e a observao das medidas de proteo das fontes privadas so fatores muito importantes para a preveno das doenas de veiculao hdrica. Segundo a Organizao Mundial da Sade - OMS (WHO 2000), alguns microrganismos que normalmente so de pequeno ou nenhum significado em sade pblica podem atingir nveis elevados em guas engarrafadas. Isso pode representar risco, uma vez que seu significado para a sade pblica pode no estar ainda bem esclarecido, especialmente para indivduos suscetveis.

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Em relao s crianas com poucos anos de vida, a OMS recomenda a fervura da gua engarrafada, que no estril, por um minuto, antes de seu uso na preparao de frmulas infantis. Estudos publicados por alguns pesquisadores endossam a preocupao da OMS. Mavridou (1992) demonstrou que a contagem de bactrias heterotrficas pode saltar de menos de 1 UFC/mL, no dia do envase, para valores na ordem de 104 a 105 UFC/mL aps 18 dias. Morais e da Costa (1990) verificaram multiplicao semelhante em intervalo de 7 a 15 dias, sem alteraes significativas nas contagens posteriores. Leclerc e da Costa (1998) observaram o mesmo aumento nas contagens, mas 3 a 7 dias aps o envase. Loy et al. (2005) verificaram aumento na densidade bacteriana da ordem de 10 para 10
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do quinto ao nono dia aps o envase, com estabilizao da

contagem total de clulas aps esse perodo. Uma vez que a multiplicao de bactrias na gua mineral engarrafada foi comprovada por esses estudos e que a legislao brasileira no permite o tratamento do produto, autorizando apenas sua filtrao, preciso adotar prticas rigorosas para evitar sua contaminao. Conforme escreveu Warburton (2000), a gua engarrafada pode ser consumida por indivduos suscetveis a doenas como idosos, crianas, gestantes e

imunocomprometidos e, por esse motivo, deve ser segura. A presena de coliformes totais e fecais, na ausncia de E. coli, como ocorreu neste estudo, no evidncia de contaminao fecal, mas indica falhas no processamento da gua mineral, que podem ser porta de entrada para patgenos, cuja presena no investigada. As contagens aqui obtidas podem ter alcanado os valores encontrados na fase de armazenamento do produto. De qualquer forma, pode-se apontar que houve falhas no processamento, que ocasionaram uma elevada porcentagem (40%) de marcas que podem ser consideradas imprprias para consumo humano. Assim, indicase uma fiscalizao mais rigorosa com relao ao cumprimento das leis vigentes, para evitar que produtos com qualidade microbiolgica insatisfatria coloquem em risco a sade do consumidor.

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Agradecimentos

Vigilncia Sanitria do Municpio de Goinia/GO, pela colaborao na coleta das amostras e ao Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico CNPq (Processo no 132126/2004-4), pelo apoio financeiro.

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