INTRODUCCIN La espectrofotometra de masas es una tcnica analtica que servir para para identificar compuestos qumicos y cuantificar compuestos

y aclarar su composicin y estructura de la muestra y obtener informacin del peso y algunas veces la estructura del analitos. Es una tcnica de impacto electrnico, algunas de las molculas ionizadas del analito explotan en una variedad de fragmentos ionizados, el patrn de fragmentacin resultante as como los iones residuales constituyen el espectro de masas. En principio, el espectro de masas de cada compuesto es nico y puede ser usado como se huella qumica para caracterizar el analito. Principio de la espectrofotometra de masas Es una tcnica analtica que proporciona informacin cualitativa (estructura) como cuantitativa (masa molecular o concentracin) de las molculas analizadas previamente convertida en iones. Las molculas forman parte generalmente una mezcla hetergama que no requiere necesariamente una separacin previa, y se someten a una fuente de luz donde se ionizan y adquieren una carga positiva negativas. Los iones atraviesan el analizador hasta alcanzar diferentes partes del detector de acuerdo a su relacin m/Z. una vez en contacto con el detector, se genera seales, se genera seales que son registradas en un sistema informtico y representadas en un espectro de masas que muestra la abundancia relativa delas seales en funcin de sus relacin m/z. FUNDAMENTOS TERICO Utiliza el movimiento de iones en campos elctricos y magnticos para clasificarlos de acuerdo a su relacin masa carga. La espectrometra de masas se basa en la separacin de partculas moleculares o atmicas por su diferente masa por un campo electrnico y magntico. Brinda informacin cualitativa y cuantitativa acerca de la composicin atmica y molecular de materiales inorgnicos y orgnicos. El proceso de la espectrometra de masas comprende bsicamente cuatro etapas: Ionizacin de la muestra. Aceleracin de los iones por un campo elctrico. Dispersin de los iones segn su masa/carga. Deteccin de los iones y produccin de la correspondiente seal elctrica.

INSTRUMENTACIN EN E.M. Bsicamente un espectrmetro de masas costa esencialmente de las siguientes partes: Sistema de entrada de muestras. Cmara de ionizacin. Acelerador. Analizadores. Detector. Sistema de entrada de muestras. Sistema de entrada de muestras, un micromol o menos de muestra se convierte al estado gaseoso por calentamiento a unos 400C y se introduce lentamente en la cmara de ionizacin. La finalidad del sistema de entrada es permitir la introduccin de una muestra representativa en la fuente de iones con la mnima perdida de vaco. Tipos de sistemas de entrada: Sistemas indirectos de entrada: en el cual la muestra se volatiliza externamente y se introduce en la regin de ionizacin que est a baja presin. El sistema de entrada es normalmente de vidrio para evitar posibles prdidas por adsorcin. Entrada por sonda indirecta: los lquidos y los slidos no voltiles se pueden introducir en la regin de ionizacin mediante un soporte para muestra o sonda, el cual se inserta a travs de un cierre de vaco. El sistema de cierre se utiliza para controlar la cantidad de aire que entra despus de la insercin de la sonda en la regin de ionizacin. Las sondas tambin se usan cuando la cantidad de muestra es limitada ya que se pierde mucha menos cantidad. Sistemas de entrada cromatrogrficos y de electroforesis capilar: es un tipo de sistema de entrada especial, est indicado su uso cuando al espectrmetro de masa va acoplado un sistema de cromatrografa de gases o de lquidos de alta eficacia o a columnas de electroforesis capilar que permiten la separacin y determinacin de los componentes de mezclas complejas. CMARA DE IONIZACIN Las fuentes de iones de los espectrmetros de masas, tienen todas unas caractersticas comunes, pese a la variabilidad de tipos existente y es que todas transforman los componentes de una muestra en iones.

En muchos casos el sistema de entrada y la fuente de iones estn combinados en un nico componente. En todos los casos, se obtiene un haz de iones positivos o negativos (normalmente positivos) que posteriormente se acelera hacia el interior del analizador de masas o sistema separador a travs del acelerador. La formacin de iones del analito es el punto de arranque de arranque de un anlisis por espectrometra de masas. El aspecto de los espectros de masas para distintas especies moleculares, depende en gran medida del mtodo utilizado para la formacin de los iones. Estos mtodos los podemos dividir en dos categoras: Fuentes de fase gaseosa: en estas primero se volatiliza la muestra y luego se ioniza. Estn generalmente restringidas a compuestos trmicamente estables que tengan puntos de ebullicin menores de unos 500C. En la mayora de los casos, estos requerimientos limitan la utilizacin de las fuentes de fase gaseosa a compuestos con pesos moleculares menores de unos 103 Daltons. Son aplicables a muestras no voltiles y trmicamente inestables (Harvey, 2002, 486) Normalmente los espectrmetros de masas estn equipados con accesorios que permiten intercambiar ambos tipos de fuentes. Son aplicables a compuestos que tienen pesos moleculares superiores de 1000 Dalton. Fuentes de desorcin: es estas la muestra en estado slido o lquido, se transforman directamente en iones gaseosos. Son aplicables a muestras no voltiles y trmicamente inestables Normalmente los espectrmetros de masas estn equipados con accesorios que permiten intercambiar ambos tipos de fuentes. Son aplicables a compuestos que tienen pesos moleculares superiores de 100000 Dalton. Las fuentes de iones se pueden clasificar tambin en fuentes duras y fuentes blandas. Fuentes duras: comunican suficiente energa a las molculas para que estn en un estado de energa altamente excitado. La relajacin posterior, implica la rotura de las uniones produciendo iones fragmentados. Su espectro da lugar a muchos picos y nos da informacin acerca de la naturaleza de los grupos funcionales e informacin estructural de los analitos. Fuentes blandas: dan lugar a poca fragmentacin y el resultado es un espectro con muy pocos picos dndonos informacin til ya que nos permite la determinacin exacta del peso molecular de la molcula o molculas TIPO NOMBRE Y ACRNIMO AGENTE IONIZANTE Impacto de electrones (EI) electrones energticos Fase Ionizacin qumica (CI) iones gaseosos reactivos Gaseosa Ionizacin por campo (FI) electrodo de elevado potencial Desorcin por campo (FD) electrodo de elevado potencial Ionizacin por electronebulizacin (ESI) campo elctrico elevado Desorcin/ionizacin asistida por una matriz haz de lser (MALDI) Desorcin Desorcin por plasma (PD) fragmentos de fisin del 252Cf Bombardeo con tomos rpidos (FAB) haz de tomos energticos

Espectrometra de masas de iones haz de iones energticos secundarios (SIMS) Ionizacin por termonebulizacin (TS) elevada temperatura Clasificacin de los distintos tipos de cmaras de ionizacin, indicando sus nombres y acrnimos y especificando cada sus agentes ionizantes. TIPOS DE CAMARAS DE IONIZACIN FUENTES DE FASE GASEOSA Impacto de electrones (EI). Se somete a la muestra a una temperatura elevada (normalmente mediante un filamento caliente de wolframio o de renio) como para producir un vapor molecular, el cual posteriormente se ioniza bombardeando las molculas originadas con un haz de electrones de elevada energa. Pese a sus desventajas, esta tcnica es la que se ha usado para determinar la mayora de los espectros que componen las colecciones de espectros. Fuentes de ionizacin qumica (CI). En la ionizacin qumica los tomos gaseosos de la muestra (tanto de un sistema de entrada indirecto como de una sonda caliente) se ionizan al colisionar con los iones producidos al bombardear con electrones un exceso de gas reactivo (normalmente metano). Normalmente se utilizan iones negativos, aunque la ionizacin qumica de iones negativos se utiliza ocasionalmente en aquellos analitos que contienen tomos muy electrnegativos. FUENTES DE DESORCIN En las dos ltimas dcadas se han desarrollado numerosos mtodos de ionizacin por desercin para tratar muestras no voltiles o termodinmicamente inestables. Estas tcnicas prescinden de la volatilizacin y de la posterior ionizacin y en su lugar se suministra energa a la muestra slida o lquida de diversas maneras, de modo que se provoca la formacin directa de iones gaseosos. Como consecuencia se obtienen espectros muy simplificados. Fuentes de desorcin por campo (FD). Esta fuente de ionizacin usa un emisor con mltiples puntas, similar al usado en las fuentes de ionizacin por campo. En este caso el electrodo se coloca sobre una sonda que puede retirarse y recubrirse con una disolucin de la muestra, despus de reinsertarla la ionizacin se produce tras proporcionar un potencial elevado a este electrodo. En ocasiones es necesario calentarlo hacindole pasar una corriente pero puede ocurrir una degradacin trmica antes de completarse la degradacin. Desorcin/ionizacin por lser asistida por una matriz (MALDI). Esta tcnica de reciente descubrimiento nos permite calcular pesos moleculares exactos de extractos de biopolmeros polares en un intervalo de masas moleculares de varios cientos de miles de Daltons. En esta tcnica se mezcla una disolucin acuoso/alcohlica de la muestra con un exceso de una sustancia matriz que absorbe la radiacin. La disolucin resultante se evapora en la superficie de una sonda metlica que se utiliza para la introduccin de la muestra. La mezcla slida se expone a la accin de un haz de lser pulsante, provocando la sublimacin del analito a iones que son introducidos en un espectrmetro de tiempo de vuelo para el anlisis de masas (Creel, Howart, 1993, 336-342). Ionizacin por electronebulizacin (ESI/MS). Esta tcnica se ha convertido en una de las ms importantes para el anlisis de biomolculas de pesos superiores a 100.000 Daltons. Se realiza en condiciones atmosfricas de presin y temperatura. La disolucin de la muestra se bombardea a travs de una aguja capilar de acero inoxidable a un flujo de algunos microlitros por minuto. Las agujas se mantienen a un potencial de

varios kV con respecto al electrodo cilndrico que rodea a dicha aguja. La niebla de finas gotitas cargadas resultantes pasa a travs de un capilar de desolvatacin donde se produce la evaporacin del disolvente y de las molculas del analito y donde estas adquieren la carga. Debido a que las gotitas se vuelven ms pequeas por la evaporacin del disolvente, su densidad aumenta producindose la desorcin de los iones en la atmsfera gaseosa. Fuentes de bombardeo con tomos rpidos (FAB). Con este tipo de fuentes, las muestras en un estado condensado, a menudo en una matriz de una disolucin de glicerol, se ionizan por bombardeo con tomos de xenn o argn de elevada energa. Tanto los iones positivos como negativos del analito son expulsados de la superficie de la muestra por un proceso de desorcin. El haz de tomos rpido se obtiene pasar iones acelerados de argn o xenn de una fuente o can de iones a travs de una cmara que contiene tomos de argn o xenn a una presin de unos 10-5 torr. Setos experimentan una reaccin de intercambio de electrones en resonancia con los tomos obtenindose un haz de tomos de alta energa. (Plascencia, 2003, 13) Desorcin por plasma (PD). El deterioro del 252Cf produce dos fragmentos de fisin que viajan en direcciones opuestas. Un fragmento golpea la muestra anulando entre 1-10 iones analticos. El otro fragmento golpea un detector y desencadena la puesta en marcha de la adquisicin de datos. Este mtodo es especialmente interesante para molculas largas de origen biolgico. Espectrometra de masas de iones secundarios (SIMS). Un haz de luz ionizado primitivo como 3He+,16O+, o 40Ar+ es acelerado y enfocado hacia la superficie de la muestra y chisporrotea entrando dentro de la fase gas. Aproximadamente el 1% del material chisporroteado entra en forma ionizada, el cual ya puede ser analizado. SIMS tiene la ventaja que puede ser continuamente chisporroteado desde la superficie y determinar las concentraciones analticas en funcin de la distancia desde la superficie original (perfil de profundidad) Sistema acelerador. En el sistema acelerador las partculas ionizadas producidas por el impacto de los electrones son obligados a atravesar una primera ranura aceleradora por una pequea diferencia de potencial. Entre esta primera y una segunda ranura existe una diferencia de potencial muy elevada que imprime a las partculas su velocidad final. Una tercera ranura acta como colimador del haz de partculas. Analizadores de masa. Para la separacin de iones con diferente relacin m/e se dispone de varios dispositivos. Lo ideal es que el analizador fuera capaz de distinguir entre diferencias muy pequeas de masa. Adems, los analizadores deberan de permitir el paso del nmero suficiente para producir corrientes inicas fciles de medir. Al igual que sucede con los monocromadorespticos, a los que los analizadores son anlogos, estas dos propiedades no son compatibles y se debe de llegar a un equilibrio que est regido por la resolucin del espectrmetro de masa. Existen diferentes tipos de analizadores de masas: Analizadores de sector magntico: los analizadores de sector magntico utilizan un imn permanente o un electroimn para hacer que el haz procedente de la fuente de iones se desplace con una trayectoria circular de 180, 90 o 60. Estos analizadores tambin son llamados de enfoque simple.

Diagrama esquemtico de un analizador de masas de sector magntico equivalente a los utilizados en espectrometra de masas, recalcar la ubicacin del sector magntico Espectrmetros de doble enfoque: este trmino se usa en los espectrmetros en los cuales las aberraciones direccionales y las aberraciones de energa de una poblacin de iones se minimizan simultneamente. El doble enfoque se consigue utilizando combinaciones de campos magnticos y electrostticos cuidadosamente seleccionados. Espectrmetro de masa cuadrupolar: son normalmente menos caros y ms robustos que los de sector magntico, adems tambin ofrecen la ventaja de emplear tiempos de barrido pequeos (<100ms), lo cual es particularmente til para realizar barridos de picos cromatrogrficos en tiempo real. Son, con diferencia los ms utilizados hoy en da (Plasencia, 2003, 15).

Diagrama de un espectrmetro de masa cuadrupolar,que es uno de los tipos de analizadores de masa ms utilizados enespectrometra de masas dado su bajo precio y robustez. Transformada de Fourier (FT): Como sucede con los instrumentos de infrarrojo y de resonancia magntica nuclear, los espectrmetros de masas de transformada de Fourier proporcionan mejores relaciones seal/ruido, velocidades mayores y sensibilidad y resolucin ms elevadas.

La parte fundamental de un instrumento de transformada de Fourier es una trampa de iones en la cual los iones circulan en rbitas bien definidas durante largos periodos. Tales cavidades se construyen aprovechando el fenmeno de resonancia inica ciclotrnica. La resolucin es espectrometra de masas de transformada de Fourier est limitada por la precisin en la medida de la frecuencia ms que por las rendijas o las medidas de campo. Es posible alcanzar una resolucin extremadamente elevada (superior a 106) dado que las medidas de frecuencia se pueden realizar con elevada precisin. Detectores. Los iones procedentes del sistema acelerador llegan al detector el cual generalmente est constituido por un ctodo emisor que al recibir el impacto producido por las partculas cargadas emite electrones. Estos electrones son acelerados hacia un dinodo el cual emite varios electrones ms al recibir el impacto de cada electrn. Este proceso se repite varias veces hasta obtenerse una cascada de electrones que llega al colector logrndose una corriente fuertemente amplificada, por un procedimiento muy similar al que se utiliza en los tubos fotomultiplicadores. La corriente obtenida puede amplificarse de nuevo por procedimientos electrnicos y se lleva a un sistema registrador. Aplicaciones de E. M. Las aplicaciones son tan numerosas y abarcan tantos campos que resulta complicado citarlas todas, a continuacin veremos las ms caractersticas: Elucidacin de la estructura de molculas orgnicas y biolgicas. Determinacin del peso molecular de pptidos, protenas y oligonucleicos. Identificacin de los compuestos de cromatogramas en capa fina y papel. Determinacin de secuencias de aminocidos en muestras de polipptidos y protenas. Deteccin e identificacin de especies separadas por cromatrografa y electroforesis capilar. Identificacin de drogas de abuso y sus metabolitos en sangre, orina y saliva. Control de gases en enfermos respiratorios durante los procesos quirrgicos. Pruebas para confirmar la presencia de drogas en sangre de caballos de carreras y en atletas olmpicos. Datacin de ejemplares en arqueologa. Anlisis de partculas en aerosoles. Determinacin de residuos de pesticidas en alimentos. Control de compuestos orgnicos voltiles en el agua de suministro Vamos a ver ahora de un modo ms extenso las principales aplicaciones de esta tcnica. Aplicaciones cualitativas Determinacin del peso molecular de todas las sustancias que pueden volatilizarse Determinacin de la formula molecular. Si el instrumento es de gran resolucin bastar la determinacin precisa de su masa molecular para poder atribuirle una frmula emprica. Otras veces puede determinarse por la relacin entre las alturas del pico correspondiente a la masa patrn y la de los picos de los istopos. Existe una tercera forma que sera con la regla del nitrgeno, segn la cual todas las sustancias orgnicas con peso molecular par deben de contener un nmero par o ningn tomo de N y los de nmero impar deben de contener un nmero impar. Por el contrario los fragmentos moleculares por rotura de enlace, tienen una masa impar si contienen cero o nmero par de tomos de N y masa par si el nmero de tomos de N es impar.

Identificacin de compuestos por su fragmentacin patrn: la fragmentacin de la mayor parte de las molculas produce un gran nmero de picos que permiten la identificacin de numerosos compuestos y el reconocimiento de ciertos grupos funcionales de ellos. Se han descrito una serie de reglas generales que rigen los procesos de fragmentacin, los cuales son de gran utilidad para la determinacin de los espectros.

CONCLUSIONES La Espectrometra de masas pueda resultar de ayuda a los lectores y les ayude a entender este complejo instrumento y poder aplicar con una mayor efectividad. De este trabajo me importara destacar de esta tcnica desde sus comienzos hasta la actualidad donde es un instrumento especializado y aplicado para diferentes campos Resultando as el conocimiento e informacin de la estructura molecular. Teniendo as una alta aplicacin en tantos campos tan variados como en la medicina, criminalstica, farmacutica Bibliografa Miguel ngel Sogorb Snchez, Eugenio VilanovaGisbertT.A. Geissman