INSTITUTO TECNOLGICO SUPERIOR DE CALKINI EN EL ESTADO DE CAMPECHE

NOMBRE DE LA CARRERA: INGENIERA BIOQUMICA SEXTO SEMESTRE

NOMBRE DE LA ASIGNATURA: CINTICA QUMICA Y BIOLGICA

Resumen de la unidad 4
NOMBRES DE ALUMNOS: MAY CANUL JORGE ISMAEL PUC CANUL CLARA ESMERALDA UC KU RITA RAMONA KU ZI FREDDY MANUEL PECH HUCHIM LUIS ALBERTO

DOCENTE: ING. NUBIA COB CALAN GRUPO: A CALKINI, CAMPECHE

NDICE Introduccin 4. Cintica microbiana 4.1. Teora y prctica del crecimiento microbiano. 4.1.1. Crecimiento celular y fisin binaria. 4.1.2. Sintess del peptidoglicano y divisin celular. 4.1.3. Crecimiento de poblaciones. 4.2. Curva de crecimiento. 4.2.1. Curva de crecimiento. 4.3. Modelos cinticos simples de crecimiento. 4.3.1. Crecimiento difuso. 4.3.2. Crecimiento esferular. 4.3.3. Otros. 4.4. Efecto de las condiciones ambientales y nutricionales sobre el crecimiento microbiano. 4.4.1. Concentracin de sustrato. Ecuacin de Monod. 4.4.2. Temperatura. Ecuacin de Arrhenius. 4.4.3. Efecto de pH. 4.4.4. Inhibicin por sustrato, producto y metabolitos intermediarios. 4.5. Modelos cinticos complejos de crecimiento. 4.5.1. Qu son los modelos cinticos complejos de crecimiento? Conclusiones Bibliografa

INTRODUCCIN La cintica de crecimiento microbiano constituye una de las operaciones ms utilizadas por la ingeniera alimentaria y la biotecnologa, por lo tanto, es menester conocer los diferentes mecanismos de crecimiento, as como, la forma de cuantificacin de los mismos, sus formas de aplicacin, las ventajas y desventajas de los diferentes mtodos, y sobre todo el monto econmico de cada uno de ellos. Por tanto, el siguiente documento trata de proporcionar una informacin general acerca de los diferentes mecanismos de reproduccin bacteriana, as como de dar una idea acerca de la utilizacin de los mismos, sus caractersticas, especificaciones, y un anlisis de las ventajas y desventajas de cada uno de ellos. "El crecimiento de clulas, microorganismos, clulas vegetales y animales, puede mirarse bajo dos aspectos o tipos de crecimiento reproductivo. Clulas individuales o poblacin de clulas en crecimiento sincronizado para estudio del ciclo de vida celular. Procesos en laboratorio. Divisin estocstica de la poblacin, o divisin al azar. La divisin celular se efecta luego de un aumento en el tamao de la clula, duplicacin del ncleo, divisin celular, divisin citoplasmtica (salva los organismos centicos). De sta manera una clula da nacimiento a dos clulas hijas de tamao idntico y conteniendo los mismos elementos estructurales y potencialidades. En el caso de las levaduras, y otros microorganismos, se presenta una variante que es ka gemacin o botn. Se forma una pequea protuberancia que aumenta progresivamente de tamao, luego se produce la divisin en el ncleo y migra hacia el botn. Finalmente crece hasta un tamao suficiente y posteriormente se separa formando otra clula idntica a la madre. Las clulas hijas, sin importar el procedimiento de divisin celular, deben heredar todo el potencial gentico y son idnticas.

4. CINTICA MICROBIANA 4.1. TEORA Y PRCTICA DEL CRECIMIENTO MICROBIANO. En microbiologa la palabra crecimiento se define como un incremento en el nmero de clulas. El crecimiento es un componente esencial de la funcin microbiana, ya que en la naturaleza cualquier clula tiene un periodo de vida finito y la especie se mantiene como resultado del crecimiento continuo de la poblacin. El conocimiento de cmo las poblaciones bacterianas se amplifican rpidamente es muy til para el diseo de mtodos de control del crecimiento microbiano. 4.1.1. CRECIMIENTO CELULAR Y FISIN BINARIA. Los procesos bioqumicos del crecimiento celular bacteriano suponen no menos de 2000 reacciones de una gran variedad de tipos. Algunas de estas reacciones son transformaciones de la energa. Otras suponen la biosntesis de pequeas molculas, las unidades bsicas de las macromolculas, as como los diversos cofactores y coenzimas necesarios para las reacciones enzimticas. Sin embargo, las principales reacciones celulares sintticas consisten en reacciones de polimerizacin, por las que los polmeros (macromolculas) se forman a partir de los monmeros. Fisin binaria En la mayora de los procariotas, el crecimiento de una clula individual contina hasta queje divide en dos clulas nuevas, un proceso que se denomina fisin binaria. Durante el ciclo de crecimiento, todos los constituyentes celulares aumentan, de modo que cada clula hija recibe un cromosoma completo y suficientes copias de todas las macromolculas, monmeros e iones inorgnicos, como para existir como clula independiente. El DNA replicado entre laS dos clulas hijas depende de la unin del DNA a la membrana durante la divisin, la segregacion real de las dos copias es facilitada por la formacin de septo. El tiempo necesario para completar un ciclo de crec miento celular en las bacterias es muy variable y depende de varios factores, tanto nutricionales como genticos.

El control de la divisin celular es un proceso complejo y parece estar ntimamente relacionado con sucesos que ocurren durante la replicacin del cromosoma. Protenas Fts y el piano de la divisin celular Estas protenas son esenciales para la divisin celular normal y se han llamado protenas Fts (del ingls filamentous temperature sensitive, que describe las propiedades de las clula; con mutaciones en los genes que las codifican). Las protenas Fts estn distribuidas universalmente entre procariotas, incluyendo Archaea, y tambin se han encontrado protenas de este tipo er las mitocondrias y cloroplastos. Resulta interesante que FtsZ muestre similitudes estructurales con la tubulina una protena importante en la divisin celular de los eucariotas. Las protenas Fts forman en la clula un aparato de divisin que se flama divisoma, cuya forma comienza con la unin de molculas de FtsZ formando un anillo alrededor del cilindro celular hacia adentro el centro de la clula. . El divisoma parece dirigir la sntesis de nuevos materiales de membrana y de pared celular en las dos direcciones hasta que la clula alcanza aproximadamente el doble longitud original. La replicacin del DNA ocurre antes de que se forme e anillo de FtsZ. El cese de la sntesis de DNA parece ser la seal para la formacin del anillo, y esta estructura aparece precisamente en el espacio situado entre los nucleoide duplicados, la protena MreB forma bandas filamentosas en espiral en el interior de la clula, debajo de la membrana citoplasmtica. Parece que es cito esqueleto de MreB determina de alguna manera la forma celular generando una fuerza contra la membrana citoplasmtica 4.1.2. SNTESIS DEL PEPTIDOGLICANO Y DIVISIN CELULAR. La capa de peptidoglicano acta como una malla antiestrs, a modo de cubierta de neumtico. Durante el crecimiento celular la sntesis del un

nuevo peptididglicano supone el transportador, una molcula

corte controlado del pep tidoglicano preexistente por las autolisinas y la insercin "simultnea de precursores. En este proceso interviene un lipdica llamada bactoprenol.

El bactoprenol es un alcohol muy hidrofbico

de C S5 que se une a la unidad precursora del (Figura 6,5a}. El

peptidoglica no N-acetilglucosamina/N-acetilmurmico/ pentapptido

bactoprenol transporta estas unidades es tructurales a travs de la membrana convirtiendo a los precursores en lo suficientemente hidrofbicos para atravesarla; Una vez en el periplasma, el bactoprenol conecta con enzimas que inseran los precursores en el pun to de crecimiento de la pared celular y catalizan la forma cin de los enlaces glicosdicos. Transpeptidacin: la diana de la penicilina El paso final de la sntesis de l peptidoglicano conocido como transpeptidacin, es la formacin de los puentes interpeptdicos entre unidades de cido murmico de cadenas adyacentes de glicano desde el punto de vista medico la transpeptidacin es importante porque es la reaccin inhibida por el antibitico penicilina. Se han identificado en el periplasma de las especies de Bacteria Gram negativas varias protenas de unin a la penicilina, al menos una de las cuales es una Fts, cuando la penicilina se une a ellas dejan de ser catalticamente activas. En ausencia de nueva sntesis de pared por estas protenas no funcionales, se produce la lisis celular debido a la accin continuada de las autolisinas que debilitan la pared. Al final del peptidoglicano precursor hay inicialmente dos molculas de D-alanina, pero una desaparece durante la reaccin de transpeptidacin suministrando la energa necesaria para hacer posible la reaccin (recurdese que la transpeptidacin ocurre fuera de la membrana, donde no existe ATP disponible). En Bacteria Gram positivas, donde por lo general se presenta un puente interpeptdico de pentaglitina, el enlace ocurre a travs de dicho puente, implicando a una L-lisina de un pptido y a una D-alanina del otro. Durante el crecimiento celular la nueva pared se sintetiza in sertando nuevas unidades de glicano en el preexistente. Un al cohol de cadena larga llamado bactoprenol facilita el transporte de las nuevas unidades a travs de la membrana para incorpo rarse a la pared celular en crecimiento. La transpeptidacin fija a los precursores en la malla de peptidoglicano.

4.1.3. CRECIMIENTO DE POBLACIONES. Como hemos dicho, el crecimiento se define como un aumento en el nmero de clulas microbianas de una poblacin; tambin puede medirse como un incremento de la masa celular. La velocidad de crecimiento es el cambio en el nmero de clulas o en la masa celular experimentado por unidad de tiempo. Durante el ciclo de divisin celular, todos los componentes estructurales de la clula se duplican. El intervalo para la formacin de dos clulas a partir de una supone una generacin y el tiempo transcurrido para que esto ocurra se llama tiempo degeneracin. Durante cada generacin, tanto el nmero de c lulas como la masa celular se duplican. Los tiempos de generacin varan ampliamente entre los distintos micro organismos. Muchas bacterias tienen tiempos de genera cin comprendidos entre 1-3 horas, pero unas cuantas crecen muy rpidamente y se dividen en tan slo 10 minutos mientras que otras tardan varios das. Adems, el tiempo de generacin de un microorganismo determinado tambin es funcin del medio de cultivo utilizado y de las condiciones de incubacin empleadas. Una caracterstica del crecimiento exponencial es que la velocidad del aumento del nmero de clulas es inicialmente lenta pero incrementa cada vez ms con el tiempo. Esto determina que en las ltimas etapas el aumento del nmero de clulas sea realmente explosivo. los primeros 30 minutos de crecimiento la velocidad de produccin de clulas es de una clula cada 30 minutos. Sin embargo, entre las 4 y 4,5 horas de crecimiento, la velocidad de produccin de clulas es considerablemente mayor, 256 clulas cada 30 minutos. Una consecuencia prctica del crecimiento exponencial es que cuando un producto no estril, como la leche, se deja en condiciones que permiten el crecimiento microbiano unas cuantas horas, durante las primeras fases del crecimiento exponencial el efecto no es muy relevante, mientras que si se deja durante el mismo tiempo en fase exponencial tarda el resultado es desastroso para el producto 4.2. CURVA DE CRECIMIENTO. 4.2.1. CURVA DE CRECIMIENTO. La curva de crecimiento pue de dividirse en distintas fases llamadas fase de latencia, fase exponencial, fase estacionaria y fase de muerte.

Fase de latencia Cuando se inocula una poblacin microbiana en un medio fresco, por lo general el crecimiento no comienza inmediatamente sino slo tras un periodo de tiempo que constituye la fase de latencia, la cual puede ser breve o larga dependiendo de la procedencia del cultivo y de las condi ciones de crecimiento. La fase de latencia tambin ocurre cuando se transfiere una poblacin de un medio rico a otro medio ms pobre. Para que ocurra crecimiento en un medio de cultivo parti cular, las clulas deben tener un equipo enzimtico completo que permita la sntesis de los metabolitos esenciales ausentes en el medio. Al pasar a otro medio, se necesita tiempo para la sntesis de las nuevas enzimas. Fase exponencial La fase exponencial de crecimiento ya ha sido comentada. Es una consecuencia del hecho de que cada clula se divide para formar dos, cada una de las cuales va a formar otras dos, y as sucesivamente. En general, las clulas en creci miento exponencial estn en el estado fisiolgico ms sano y, por ello, las clulas tomadas en el punto medio del cre cimiento exponencial son a menudo las ms indicadas para estudios enzimticos y estructurales. La mayora de los microorganismos unicelulares crecen exponencialmente pero las velocidades del crecimiento ex ponencial son muy variables. La velocidad de crecimiento est influenciada por las condiciones ambientales (tempe ratura, composicin del medio de cultivo, etc.) as como por las caractersticas genticas del organismo. Por lo general, los microorganismos procariticos crecen ms rpido que los eucariticos; y los eucariotas de pequeo tamao lo hacen ms rpido que los de mayor tamao. Fase estacionaria Lo que generalmente sucede es que un nutriente esencial del medio de cultivo se usa y llega a ser un factor limitante del crecimiento; o bien acumulan en el medio algunos productos de desecho que hacen que cese el crecimiento exponencial. Frecuentemente ocurren ambas cosas. Al producirse esto, la poblacin alcanza la fase estacionaria. En la fase estacionaria no hay aumento ni descenso neto en el nmero de clulas. Aunque no suele haber crecimiento en la fase estacionaria muchas funciones celulares continan, como el metabolismo energtico y algunos procesos biosintticos. En algunos casos puede ocurrir un lento crecimiento durante la fase estacionaria; algunas clulas de la poblacin crecen, pero otras

mueren y los dos procesos se equilibran de modo que no hay aumento ni disminucin en el nmero de clulas (este fenmeno se llama crecimiento crptico). Fase de muerte Si la incubacin contina despus de que la poblacin haya alcanzado la fase estacionaria, las clulas pueden continuar vivas y metablicamente activas, pero tambin pueden mo rir. Si ocurre esto ltimo, se dice que la poblacin est en fase de muerte. La velocidad de muerte celular es mucho ms lenta que la de crecimiento ex ponencial.

4.3. MODELOS CINTICOS SIMPLES DE CRECIMIENTO. 4.3.1. CRECIMIENTO DIFUSO. El crecimiento difuso es un mtodo de identificacin que se debe al desarrollo de tcnicas para el entrenamiento de estos sistemas a partir de datos medidos. Este mtodo ofrece una forma muy estructurada de formulacin del conocimiento, y la posibilidad de incorporar conocimiento que no sea obtenido de datos del proceso. Otra propiedad importante de los modelos difusos es su capacidad de representar sistemas no lineales. De lo anterior se deriva que es ventajosa su aplicacin a plantas no lineales difciles de modelar y donde la experiencia humana est disponible con calidad suficiente, aportando conocimiento sobre el sistema. Comprobamos que el crecimiento difuso posee un gran potencial para procesos nuevos o poco conocidos, brindando potencialidades para desarrollar modelos de prediccin as

como para mejorar el conocimiento de las caractersticas no conocidas del proceso. La exactitud numrica de los modelos es comparable con otros resultados 4.3.2. CRECIMIENTO ESFERULAR. 4.3.3. OTROS. 4.4. EFECTO DE LAS CONDICIONES AMBIENTALES Y NUTRICIONALES SOBRE EL CRECIMIENTO MICROBIANO. 4.4.1. CONCENTRACIN DE SUSTRATO. ECUACIN DE MONOD. El crecimiento y funcionamiento de los microorganismos depende fundamentalmente de que las reacciones metablicas se puedan llevar a cabo. De estas reacciones es que las clulas obtienen la energa y los materiales para las diferentes funciones en sus procesos de vida. Tomando esto en cuenta, podemos resumir en base a lo ya discutido que los factores que ayudan al desempeo de los microorganismos durante los procesos asociados a la biotecnologa son presencia y concentracin adecuada de sustratos y nutrientes (vitaminas, minerales, etc.) necesarios para el metabolismo, ausencia de compuestos qumicos que interfieran con las enzimas, concentracin baja de productos que inhiban las enzimas durante el proceso, as como las condiciones adecuadas que permitan el transporte de los nutrientes al interior de las clulas, esto incluye distribucin adecuada de los nutrientes mediante un mezclado efectivo, actividad de agua, concentracin de compuestos que afecten la presin osmtica (como sales). La ausencia de microorganismos que compitan en el consumo del sustrato y produzcan compuestos indeseados o compuestos que afecten el metabolismo del microorganismo utilizado esto est ntimamente relacionada a las condiciones aspticas durante el manejo de los microorganismos. A travs de la oxidacin de un sustrato y la reduccin de otro se obtiene energa y poder reductor para mantener las actividades celulares, estas reacciones son usualmente aceleradas por la accin de las enzimas producidas dentro de la clula. La velocidad a la cual un determinado contaminante es removido depende de dos concentraciones, la

primera corresponde a la concentracin del catalizador, en este caso de la biomasa activa. La segunda corresponde a la concentracin de los sustratos primarios que sirven de donador de electrones. La ecuacin de Monod es la ms usada para describir la cintica del crecimiento microbiano. En ella se relaciona la velocidad especfica de crecimiento microbiano con la concentracin de un sustrato donador de electrones limitante. = tasa de crecimiento especfico, t-1 X= Concentracin de biomasa activa, mg/La t= tiempo, t S=concentracin del sustrato limitante, mg/L q= mxima tasa de crecimiento especfico, mgDQO/mgSSV K= constante de saturacin media, concentracin de sustrato (S) a la mitad de la mxima tasa de crecimiento (= q/2)mg/L.

4.4.2. TEMPERATURA. ECUACIN DE ARRHENIUS. La temperatura ejerce dos tipos de efectos opuestos sobre los organismos vivos. A medida que se eleva la temperatura, las reacciones qumicas y enzimticas de la clula son ms rpidas y el crecimiento se acelera. Sin embargo, por encima de una cierta temperatura algunas protenas particulares pueden sufrir daos irreversibles. En consecuencia, dentro de un cierto margen, un aumento de temperatura supone un incremento en el crecimiento y en el metabolismo hasta un punto en que tienen lugar las reacciones de in activacin. Por encima de tal punto, las reacciones celulares caen rpidamente a cero. As, para cada organismo existe una temperatura mnima por debajo de la cual no es posible el crecimiento, una temperatura ptima a la que se produce el crecimiento ms rpido, y una temperatura mxima por encima de la cual no es posible el crecimiento (Figura 6.16). La temperatura ptima est siempre ms cerca de la mxima que de la mnima. Estas tres temperaturas, que se llaman temperaturas cardinales o fundamentales, generalmente son caractersticas de cada tipo de organismo, pero no son completamente fijas, pues pueden

ser ligeramente modificadas por otros factores del ambiente, en particular por la composicin del medio. La ecuacin de Arrhenius es una expresin matemtica que se utiliza para comprobar la dependencia de la constante de velocidad (o cintica) de una reaccin con la temperatura a la que se lleva a cabo esa reaccin, de acuerdo con la expresin:

donde: k(T): constante cintica (dependiente de la temperatura) A: factor preexponencial Ea: energa de activacin R: constante universal de los gases T: temperatura absoluta [K] Para ser usada como modelo de regresin lineal entre las variables K y T 1, esta ecuacin puede ser reescrita como:

4.4.3. EFECTO DE PH. Las bacterias tienen un pH ptimo en el que el crecimiento es mximo, suele estar en torno a 7, aunque hay bacterias adaptadas a otros rangos. En su metabolismo, las bacterias suelen modificar el pH del medio mediante la adicin de sustancias producto de su metabolismo, por lo que para un correcto desarrollo biolgico, debera tamponarse el medio de crecimiento. La acidez o alcalinidad de una solucin se expresa por su pH en una escala en la que la neutralidad es pH 7. Los valores de pH por debajo de 7 son cidos y los mayores de 7 son

alcalinos (o bsicos). Es importante tener en cuenta que el pH es una funcin logartmica; por ello, un cambio en una unidad de pH representa un cambio de diez veces en la concentracin de hidrogeniones. As, el vinagre (con pH cercano a 2) y el amoniaco domstico (con pH prximo a 11) difieren en una concentracin de hidrogeniones de mil millones de veces. Cada organismo tiene un rango de pH dentro del cual es posible el crecimiento y normalmente posee un pH ptimo bien definido. La mayora crece en un margen de pH de 2-3 unidades. La mayora de los ambientes naturales tienen un valor de pH entre 5 y 9, y los organismos con pH ptimos de este orden son los ms comunes. Slo unas cuantas especies pueden crecer por debajo de 2 o por encima de 10. Cuando se considera para cada organismo particular el requerimiento de un pH especfico para el crecimiento, hay que tener en cuenta que el pH ptimo representa slo el pH del medio extracelular; el pH intracelular debe permanecer prximo a la neutralidad para evitar la destruccin de las macromolculas celulares que son sensibles al cido o al lcali. 4.4.4. INHIBICIN POR SUSTRATO, PRODUCTO Y METABOLITOS INTERMEDIARIOS. 4.5. MODELOS CINTICOS COMPLEJOS DE CRECIMIENTO. 4.5.1. QU SON LOS MODELOS CINTICOS COMPLEJOS DE CRECIMIENTO?

CONCLUSIONES El conocimiento de la cintica de crecimiento de los microorganismos es de sumo inters en el campo industrial, ya que permite conocer la manera de reproduccin de las bacterias, permitiendo desarrollar mtodos de catalizacin e inhibicin de stos y de prevencin en caso de que el crecimiento sea en una forma desproporcionada y peligrosa. Adems este conocimiento ayuda en diferentes campos, como por ejemplo, el alimenticio, en el cual el conocimiento de la cintica de crecimiento microbiano es un parmetro que indica la forma en que se deben colocar los preservantes en un producto determinado. en general las aplicaciones de ste tema son innumerables y ya se han detallado con bastante amplitud en puntos anteriores.

BIBLIOGRAFA FREEMAN, BOB A; MICROBIOLOGA DE BURROWS 22A EDICIN, EDITORIAL INTERAMERICANA, ESPAA 1986. PAGS. 57-62 FSICO QUMICA, IRA LEVINE, MC GRAW HILL, 3 EDICIN, 1993 QUMICA GENERAL, LINUS PAULING, MADRID, 1960. QUMICA FSICA, WALTER MOORE, BARCELONA, 1953.