ESPECTROFOTOMETRA DE ABSORCIN (ZONA VIS)

DETERMINACIN DE NO2I.

OBJETIVOS Encontrar el analtico para la solucin coloreada de NO2-. Elaborar la curva de calibracin. Determinar la cantidad de NO2- en muestra de embutidos.

II. FUNDAMENTO Se basa en la interaccin de la Energa Radiante con la materia, reforzada por la Ley de Lambert y Beer por la cual existe una relacin entre la intensidad de la luz incidente y la transmitida en funcin de la concentracin de la sustancia. III. MARCO TERICO Composicin de los Nitritos Los nitritos son sales o steres del cido nitroso (HNO2). En los nitritos inorgnicos se encuentra el anin NO2-. En la naturaleza los nitritos se forman por oxidacin biolgica de las aminas y del amonaco o por reduccin del nitrato en condiciones anaerbicas. En la industria se pueden obtener al disolver N2O3 en disoluciones bsicas. Los nitritos forman parte de muchas formulaciones de sales para salar carnes, como nitrito potsico y nitrito sdico. Cobran importancia dada su capacidad de mantener un color rojizo deseado en la materia prima ya que reaccionan con la hemoglobina. Sin embargo la concentracin debe ser baja ya que hay sospechas que favorecen el desarrollo de cncer. Adems por su interaccin con la hemoglobina resultan txicos. Origen El nitrato de sdio se obtiene por neutralizacin de bases de sodio (e.j. hidrxido sdico = NaOH o carbonato sdico Na2CO3) con cido ntrico HNO3. Es un subproducto en la sntesis del cido ntrico donde se forma al absorber el dixido de nitrgeno en una disolucin de carbonato sdico: Na2CO3 + 2 NO2 -> NaNO3 + NaNO2 + CO2 Fuentes Adems existen yacimientos importantes naturales de esta sal en Chile de donde recibe tambin la denominacin de "Sal de Chile" o "Nitrato de Chile". Propiedades Se trata de una sustancia incolora, ligeramente higroscpica y altamente oxidante. Es altamente soluble en agua de ah su utilidad para la aplicacin en los alimentos. Mezclado con sustancias orgnicas puede provocar explosiones. El nitrato es slo ligeramente txico pero puede ser transformado en nitrito con actividades fisiolgicas mayores y ms dainas. Debido a su contenido en nitrgeno se utiliza como fertilizante. Como conservante en la industria alimenticia y en la mezcla de sales empleada para tratar la carne en su conservacin. Aparentemente el constituyente principal es el nitrito ms que el nitrato.

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Aplicacin en las carnes curadas Los Nitritos forman en la carne oxido ntrico que reacciona con los compuestos hemo para dar nitrosomioglobina, pigmento responsable del color rosa de las carnes curadas. La evaluacin organolptica permite inferir tambin que el nitrito contribuye al sabor de la carne dado a su efecto antioxidante.

IV. PARTE EXPERIMENTAL 4.1. Reactivos

Solucin patrn de NO2- (1000 g/ mL). Solucin de Sulfanilamida. Solucin de N-Naftilendiamida. Agua destilada. Solucin de cido Brico al 5%. Solucin de Acetato de Zinc al 30%. Solucin de Ferrocianuro de Potasio al 15%.

4.2. Materiales Espectrofotmetro Jenway 6405 UV/VIS Beakers de 100ml, 200ml y 500ml. Fiolas de 50ml (por lo menos 5). Kitasato de 200ml. Embudo de vidrio. Mortero y piln. Papel filtrante. Pipetas de 1ml, 2ml, y 5ml.

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4.3. Elaboracin de la curva de calibracin 4.3.1. Preparacin de la solucin hija( dilucin de la solucin patrn): En una fiola de 100 mL se agrega 1 mL de solucin patrn y se enrasa con agua destilada. La concentracin ser de 10 ppm. * Este procedimiento es realizado porque la concentracin de la solucin patrn es muy alta comparada con las concentraciones de las soluciones que se desean obtener. 4.3.2. Preparacin de soluciones de NO2 a diferentes concentraciones: En 5 fiolas de 50 mL cada una, preparar soluciones de nitrito a diferente concentracin. CDIGO B I II III IV SOLUCIN DE NO2 (ppm) 0 0.1 0.2 0.4 0.8

Para la preparacin de las soluciones antes mencionadas se parte de la solucin hija. Para ello empleamos las siguientes cantidades:

CDIGO B I II III IV

mL DE SOLUCIN HIJA DE NO2 (10 ppm) 0 0.5 1.0 2.0 4.0

* Medir la cantidad de solucin con pipeta volumtrica y verterla en la fiola, segn sea el caso. * Enrasar las 5 fiolas hasta los 50 mL con agua destilada. * No olvidar codificar las fiolas. NOTA: En el caso del blanco(B), la totalidad de su contenido es agua destilada. A cada solucin (5 fiolas) agregar 1 mL de Solucin de Sulfanilamida y 1 mL de Solucin de N-Naftilendiamida, agitar. 4.3.3. Determinacin del Lambda analtico tomando los estndares II y III en el rango de 450 a 650 nm: Introducir las 3 muestras en cada una de las celdas ( Blanco, solucin II y III). Calibrar el espectrofotmetro con el Blanco. Elegir en el men la opcin ESPECTRO y analizar las soluciones II y III.

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II
(nm) 450 460 470 480 490 500 510 520 530 Abs 0.191 0.187 0.188 0.207 0.228 0.254 0.287 0.312 0.331

Determinacin del Lambda analtico

0.4 0.35 0.3 0.25

Abs

540
550 560 570 580 590 600 610 620 630 640 650 660

0.335
0.322 0.291 0.258 0.213 0.153 0.124 0.105 0.091 0.084 0.08 0.078 0.086

0.2 0.15 0.1 0.05 0 450 460 470 480 490 500 510 520 530 540 550 560 570 580 590 600 610 620 630 640 650 660

Longitud de onda (nm)

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III
(nm) 450 460 470 480 490 500 510 520 530 Abs 0.251 0.255 0.268 0.305 0.347 0.399 0.458 0.507 0.539

Determinacin del Lambda analtico

0.6 0.5 0.4

Abs

540
550 560 570 580 590 600 610 620 630 640 650 660

0.544
0.52 0.466 0.397 0.314 0.219 0.169 0.137 0.121 0.112 0.106 0.104 0.112

0.3 0.2 0.1 0 450 460 470 480 490 500 510 520 530 540 550 560 570 580 590 600 610 620 630 640 650 660

Longitud de onda (nm)

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(nm) 450 460 470 480 490 500 510 520 530

Abs II 0.191 0.187 0.188 0.207 0.228 0.254 0.287 0.312 0.331

Abs III 0.251 0.255 0.268 0.305 0.347 0.399 0.458 0.507 0.539 0.52 0.466 0.397 0.314 0.219 0.169 0.137 0.121 0.112 0.106 0.104 0.112

Determinacin del Lambda analtico

0.6 0.5 0.4

III II

550 560 570 580 590 600 610 620 630 640 650 660

0.322 0.291 0.258 0.213 0.153 0.124 0.105 0.091 0.084 0.08 0.078 0.086

Abs

540

0.335

0.544

0.3 0.2 0.1 0

450 460 470 480 490 500 510 520 530 540 550 560 570 580 590 600 610 620 630 640 650 660

Longitud de onda (nm)

Conclusin: El analtico es 540 nm.

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4.3.4.Determinacin de la Absorbancia con Longitud de onda de 540 nm: Colocar en las celdas del espectrofotmetro las 5 soluciones. En el men principal elegir la opcin FOTOMTRICA y calibrar con 540 nm para hallar la absorbancia de las soluciones. Absorbancias B 0 I 0.060 II 0.201 III 0.407 IV 0.775

4.3.5. Elaborar la curva de calibracin para NO2-:

Cc (ppm) 0 0.1 0.2 0.4 0.8

Abs 0 0.06 0.201 0.407 0.775

Curva de calibracin
0.8 0.7 0.6 0.5

y = 0.9903x - 0.0085 R2 = 0.996

Abs

0.4 0.3 0.2 0.1 0 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8

Concentracin (ppm)

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4.4 Pre-Tratamiento de las muestras Se tritur 5g de muestra para obtener molculas analizables. Se llev a un vaso de precipitado donde se le agregaron 100 mL de agua destilada, 5 mL de cido Brico y se agit hasta llegar a un color homogneo. Se llev a bao mara por 15 min. en agitacin, donde se le aadi 2 mL de Acetato de Zn al 30% y 2 mL de Ferrocianuro de K al 15%.

Se procedi a enfriar y a filtrar en un matraz Erlenmeyer con la ayuda de una bomba para reducir el tiempo. El filtrado se llev a un vaso de precipitado y se le aadi un volumen de agua destilada hasta 150 mL.

Se tom 50 mL de la solucin anterior y se deposit en una fiola donde a su vez se le aadi 1 mL de solucin Sulfanilamida y 1 mL de solucin de N-Naftiletilendiamida.

4.5. Determinacin de NO2 con cada muestra en ppm: 4.5.1. Hot-Dog Puesto que el resultado de absorbancia para el hot-dog a una = 540 nm fue de 0.070, reemplazando en la frmula resultante del anlisis de regresin, la concentracin en ppm de NO2sera: Dado que: X = Cc Y = Abs Abs = 0.9903(Cc) - 0.0085 0.070 = 0.9903 (Cc) - 0.0085 Cc = 0.0793 ppm <> 0.0793 g/mL

Pero al ser este valor uno contenido en una solucin de 50mL, el clculo del valor real ser: 0.0793 g/mL * 50 mL = 3.965 g de NO2-

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0.0793 g/mL * 50 mL = 3,965 g de NO2 X

-

3,965

g de NO2 50 mL 150 mL

X= 11,895 g de NO2 X
-

11,895 g de NO2

5 g muestra 1000 g muestra 2379 g de NO2

-

X=

2379 g de NO2 Kg

x 1 mg 1000 g

2,379 mg/Kg

4.5.2. Jamonada
Por otro lado, si analizamos, la absorbancia para la Jamonada a una = 540 nm fue de 0.041, reemplazando en la frmula resultante del anlisis de regresin, la concentracin en ppm de NO2sera:
Dado que: Y = Abs X = Cc Abs = 0.9903(Cc) - 0.0085 0.041 = 0.9903 (Cc) - 0.0085 Cc = 0.050 ppm <> 0.050 g/mL

Pero al ser este valor uno contenido en una solucin de 50Ml, el calculo del valor real ser:
2,5 g de NO2 50 mL 150 mL 7,5 g de NO2
-

0.050 g/mL * 50 mL = 2,5 g de NO2 X

-

X=

7,5 g de NO2 X

5 g muestra 1000 g muestra 1500 g de NO2

-

X=

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1500 g de NO2 Kg

x 1 mg 1000 g

1,5 mg/Kg

V. DISCUSIN:

Segn la norma tcnica NTP 201.007:1999, El mximo de nitrato en embutidos es de 0.05% (500ppm). En la prctica se determin que para Hot-dog y la jamonada se encontraban por debajo de este lmite obtenindose 2.38 y 1.5 ppm respectivamente.

VI. CONCLUSIONES: Se encontr un valor de 2.379 ppm de nitritos en la muestra de hot-dog. Se encontr un valor de 1.5 ppm de nitritos en la muestra de Jamonada. Se determin en el anlisis de nitritos que la longitud de onda para su determinacin fue de 540nm. Se determin que nos nivels de nitritos en las dos muestras se encontraban por debajo de los maximos permisibles. VII. BIBLIOGRAFA NTP 201.007:1999 Carne y Productos Crnicos. INDECOPI.

http://toxicologia-alimentos.blogspot.com/2009/04/panorama-actual-sobre-nitratos-y.html