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Investigador principal:

CARLOS A. IREGUI CASTRO DMV DVM.

Investigadores:
EDUARDO HERNNDEZ, M.V. NGELA JIMNEZ, M.V. ANDRS PULIDO, M.V. ALBA LUC~A REY, M.V. MSC JAlR COMAS, M.V LUIS CARLOS PENA, M.V MIGUEL RODR~GUEZ, M.V

UNIVERSIDAD

NACIONAL
DE COLOMBIA
liberto& Orden

FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y DE ZOOTECNIA


GRUPO DE FISIOPATOLOG~A VETERINARIA

MINISTERIO DE AGRICULTURA Y DESARROLLO RURAL

lndice general
PRESENTACI~N 1. CALIDAD DE AGUAS 1.1 PARMETROSF~SICOS 1.2. PARMETROS QU~MICOS

1.3. CONTAMINACI~N 1.4. CORRECTIVOS A LA CALIDAD DEL AGUA 1.5. CANTIDAD DEL AGUA 2. NUTRICIN Y ALIMENTACIN PECES DE 2.1. Exigencias nutricionales y niveles en dietas para
crecimiento

2.2. PARMETROS UTILIZADOS PARAMEDIRLOS


EFECTOS DE LAS DIETAS EN LOS PECES

2.3. ALIMENTACI~N 3. DISENOY CONSTRUCCIN DE ESTANQUES 3.1. S E L E C C I ~ DELSITIO N 3.2. DISENO 3.3. CONSTRUCCI~N
4. CONCEPTOS BSICOS DE SANIDAD PISC~COLA 5. PRINCIPIOSPARA LA TOMA Y ENVIO DE MUESTRAS PARAEL DIAGN~STICO ICTIOPATOL~GICO 5.1. RECOMENDACIONES GENERALES 5.2. ENV~ODE MUESTRAS 6. CARACTER~STICAS MANEJO SANITARIO Y DEL PRODUCTIVO DE LA GRANJA MODELO DE TlLAPlA

CARACTER~STICAS GENERALES MANEJO DE REPRODUCTORES COSECHA DE LARVAS AMBIENTE ACUTICO REVERSI~NSEXUAL PRELEVANTE ALIMENTO EN LA SANIDAD EVALUACI~N CL~NICA MANEJO DE MORTALIDAD CONCLUSIONES 7. OTRASTCNICAS EMPLEADAS EL EN DIAGN~STICO ICTIOPATOL~GICO: CULTIVOS CELULARES Y PCR 7.1 CULTIVOS CELULARES C O M O TCNICA DE DIAGN~STICO ENFERMEDADES DE VIRALES EN PECES. 7.2 TCNICA DE PCR (Reaccin en Cadena de la Polimerasa) BIBLIOGRAF~A

Este Manual de Sanidad Acucola es complementario al "Primer mapa epidemiolgico de las lesiones y enfermedades de los peces en Colombia" publicados como resultado del proyecto de investigacin "Construccin de un mapa epidemiolgico de las principales entidades patolgicas presentes en diferentes regiones del pas y en las principales especies pisccolas productivas e inicio de las bases para su prevencin y control" financiado por el Ministerio de Agricultura y Desarrollo Rural. Se trata de una recopilacin de gran parte de la informacin contenida en cinco boletines publicados por nuestro grupo en el marco del proyecto "Sistematizacin y Caracterizacin Productiva y Sanitaria de Explotaciones Pisccolas de Pequeos Campesinos en los Departamentos de Meta, Casanare, Cundinamarca, Huila y Tolima", financiado por PRONATA, pero tambin es una ampliacin que recoge los resultados posteriores a dicho proyecto, en la que se incluyen temas como: la forma como se elaboraron los cultivos celulares primarios a partir de tejidos de trucha arco iris, con el fin de establecer una tcnica de diagnstico para enfermedades virales de peces en el pas.

Adicionalmente se ilustran los resultados de Biologa Molecular que hacen parte del estudio financiado por el Ministerio de Agricultura: se estableci la tcnica para diagnstico e investigacin de la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) para dos gneros de bacterias frecuentes en casos de enfermedad en las distintas especies cultivadas en el pas, son ellas: la Aeromonas hydrophila y el Flexibacter psycrophilum. Tambin con los mismos fines, se estableci la tcnica de P R para el Streptococcus C sp. hasta ahora aislado en el pas; pero adems, se complement tal

hecho con la identificacin de la especie hasta ahora actuante en nuestro medio, se trata del Streptococcus agolactiae. Tambin se describen las caractersticas de maneio sanitario y productivo de una de las granjas modelo escogida dentro del marco del estudio. Reiteramos nuestro principio de percepcin integral de la enfermedad, para ello tenemos en cuenta desde la rentabilidad de las empresas pisccolas, pasando por el debido cuidado ambiental hasta la entrega final de protena de alta calidad, inocua para el consumidor final. En consecuencia, la medicina que pretendemos practicar es eminentemente de poblaciones, con una aproximacin al diagnstico, la prevencin, el control y el tratamiento de las patologas. Como se desprende del contenido de este Manual y de las recomendaciones del "Primer Mapa", el manejo de los problemas sanitarios acuticos lo hacemos poniendo especial nfasis en el anlisis del entorno de los peces.

1 . CALlDAD DE AGUAS
La calidad del agua est dada por el conjunto de propiedades fsicas, qumicas y su interaccin con los organismos vivos: microscpicos y macroscpicos, estos ltimos pueden ser los peces pero tambin los camarones, etc. Aunque parece obvio, un estanque con agua de buena calidad producir ms que un estanque con mala calidad, sin embargo, es poco lo que hace la mayora de piscicultores por mantener una buena calidad del agua. En este documento se analizarn los ms importantes factores ambientales que afectan a la comunidad de un estanque y la forma de controlarlos para obtener los mejores rendimientos. Existen tres grupos de componentes (elementos) que se pueden encontrar en cualquier agua, aunque en diferentes cantidades cada uno de ellos segn el tipo de aguas: fsicos, qumicos y biolgicos (micro y macroorganisrnos). Ellos no son completamente independientes el uno del otro; por ejemplo: la cantidad de oxgeno (que es un componente qumico), se considera el elemento ms importante de la calidad de un agua, depende de la intensidad de la luz (variable fsica) y de la cantidad y calidad de las plantas macro y microscpicas que hay en el agua. Otro ejemplo es la cantidad de desechos (residuos) que resultan despus de que los alimentos han sido utilizados por el pez: materia fecal, orina y respiracin, estn relacionados con la densidad de los animales y el manejo de la alimentacin.

Temperatura

(TO)

Los peces son ectotermos, esto quiere decir que no controlan su temperatura, su temperatura vara con la del agua, y la temperatura de sta va a influir de manera notoria en su metabolismo, si el pez es cultivado en aguas muy fras su metabolismo va a descender y su desarrollo ser ms lento. Cada especie de pez requiere de una temperatura ptima para su adecuado desarrollo, crecimiento y reproduccin, las especies de aguas clidas se cran mejor a temperaturas superiores a 25C.

Luz

En el agua hay algas microscpicas, ellas son las productoras primarias de materia orgnica por medio de la fotosntesis cuando reciben luz solar, de ah el gran papel que juega el sol en los procesos biolgicos dentro del agua.

Evaporacin
La evaporacin es un proceso que acta como regulador de la temperatura del agua, adems, iunto con la filtracin, son los causantes de la disminucin del volumen del agua de un estanque. La prdida de agua por evaporacin vara considerablemente de una regin a otra, con la poca del ao y con la presin atmosfrica (vara con la altura sobre el nivel del mar). El viento ejerce un importante papel al causar turbulencia del agua y aumenta de esta manera el rea de evaporacin.

Turbidez
La turbidez del agua est dada por el material en suspensin bien sea mineral u orgnico; el grado de turbidez vara dependiendo de la naturaleza, tamao y cantidad del material que se encuentre flotando en el agua. En acuicultura la turbidez originada por los microorganismos es necesaria. Entre ms microorganismos y minerales mayor la turbidez, ste parmetro (variable) se puede medir mediante el denominado ((disco secchin, el cual consiste en un disco de aproximadamente 30 cms. de dimetro dividido en cuadrantes pintados en blanco y negro, est amarrado a una cuerda calibrada y tiene un peso, de tal manera que le permite hundirse fcilmente en el agua. La visibilidad del disco secchi rara vez excede de un metro en sistemas productivos para peces; para determinar la visibilidad del disco secchi hay que permitir que descienda hasta que desaparezca y anotar esta profundidad. Contrario a la turbidez causada por los microorganismos, la cual es benfica para los peces de un estanque, existe la turbidez causada por partculas de arcilla en suspensin que actan como filtro de los rayos solares y disminuyen la productividad primaria del estanque y por consiguiente disminuye la actividad fotosinttica del fitoplancton y la produccin de oxgeno. Cuando el agua es reutilizada hay que tener especial cuidado con crementos de los peces o por el alimento no consumido. la

materia en suspensin, que es originada en su mayor parte por los ex-

Color

El color del agua est dado por la interaccin entre la incidencia de la


luz y la impureza del agua; aguas incoloras en das soleados aparecen azules.

El color del agua es alterado por los factores fsicos, qumicos y biolgicos, por ejemplo, la mayora de los florecimientos del fitoplancton tienden a dar una coloracin verde. Aguas con alto contenido de hierro, tienden a ser rojizas. El color ms comn del agua est dado por el material vegetal en descomposicin, el cual produce un color t o caf claro muy caracterstico del agua con alto contenido de humus. Adems, estas aguas por lo general son cidas. El color en s no afecta a los peces, pero s restringe la penetracin de los rayos solares y disminuye de esta manera la productividad del estanque.

Oxgeno disuelto La funcin ms urgente que debe cumplir todo organismo vivo es la respiracin. A travs de ella, tal organismo toma oxgeno y elimina dixido de carbono. En piscicultura las aguas deben tener cantidades adecuadas de oxgeno. La cantidad aproximada de oxgeno disuelto para el cultivo de peces debe ser mayor de 7ppm (7mg/L). Aunque los peces pueden resistir cantidades de oxgeno disuelto de 5 ppm, es conveniente no dejar que los niveles en el agua de salida sean inferiores de 6,5ppm.

Se debe tener presente que la cantidad de oxgeno disuelto en el agua que entra en el estanque es mayor que la cantidad de oxgeno disuelto en el agua de salida, pues parte de este oxgeno es consumido en la respiracin de los peces, y parte en los procesos de descomposicin de la materia orgnica y en la respiracin de los vegetales.

Fuentes de oxgeno. El oxgeno es disuelto en el agua por difusin


desde la atmsfera y por la fotosntesis. La difusin desde la atmsfera se produce cuando se presentan vientos o por medios artificiales como los aireadores. La creacin de turbulencia por medios artificiales incremento el contacto entre el agua y el aire lo cual permite la captacin de oxgeno por parte del agua. Todos los acuicultorestienen en cuenta la respiracin de los organismos de su inters, lo cual trae un significativo impacto sobre el nivel de oxgeno disuelto en el estanque, pero a menudo no tienen en cuenta que los otros organismos presentes en los estanques tambin respiran y consumen oxgeno. Durante el da, con la fotosntesis se produce oxgeno que es utilizado por la demanda respiratoria de los animales, mientras que durante la noche, tanto plantas como animales continan respirando sin que haya nuevos aportes de oxgeno al agua (Figura 1). La solubilidad del oxgeno en el agua (capacidad de disolverse en el agua), depende principalmente de la temperatura, la presin atmosfrica y la salinidad. Se debe tener en cuenta que a mayor temperatura, altitud y salinidad, menor solubilidad del oxgeno. A veces puede haber mucha cantidad de oxgeno en el agua (sobresaturacin), esta se puede deber a una alta productividad primaria de plantas en el estanque o por

Algunos efectos de la disminucin de oxgeno sobre los organismos de un estanque: Los peces generalmente no se alimentan con niveles bajos de oxgeno, en estos ca-

e
o

.. .

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sos la mayora de las especies suben a la superficie del agua a tomar oxgeno y se observan constantemente boqueando. Las bajas en el nivel de oxgeno generalmente suceden durante las pocas de altas temperaturas (poca seca). As mismo, el metabolismo de los organismos en el estanque se incrementa en esta po-

~or*dJbl.
Figura 1.

ca y demandan ms oxgeno. Paradjicamente tambin corresponde a la poca de mayor iluminacin solar, cuando se incrementa la fotosntesis y la produccin de oxgeno, pero los volmenes de agua son menores. S puede aumentar el oxgeno agregando agua con un buen nivel de oxgee no o por aireacin. En el primero, es necesario que el agua caiga al estanque por un salto ancho, de esta manera se ampla el rea de contacto y as se captar ms oxgeno del aire. Por aireacin, el agua se bombea fuera del estanque y se devuelve al mismo por aspersin. Otro mtodo es introduciendo aire por bombeo dentro del agua. S recomienda efectuar la aireacin e solo cuando sea necesaria o cuando se advierta una real deficiencia de oxgeno.

pH o Potencial de Hidrgeno. El valor del pH nos indica si el agua es neutra, cida o bsica, y s expresa en e una escala que vara entre O y 14. Si el pH es 7 indica que es neutra, o sea que no es ni cida ni bsica, es la ideal para la produccin de peces. Un agua con pH por debajo de 7 es cida, y por encima de 7 es bsica, se admiten pequeas desviaciones del pH 7: entre 6.0 y 7.2. El valor del pH durante el da vara mucho. Hacia las horas del medio da tiende a llegar al ptimo de 7, porque hay bastante oxgeno producido por las plantas por la alta fotosntesis durante toda la maana, adems el CO, es bajo; a medida que transcurre la tarde el pH se estabiliza pero apenas oscurece, las plantas y los peces continan respirando pero no hay luz para la fotosntesis, entonces disminuye el oxgeno y aumenta el CO,, el cual vuelve el agua cida (pH menos de 7). Los menores valores se alcanzan a la madrugada, cuando vuelve a salir el sol. Efecto del pH sobre los peces. Cambios bruscos de pH como consecuencia del traslado de peces de un estanque a otro con marcadas diferencias de pH pueden causar la muerte. Las aguas cidas irritan las branquias de los peces, las cuales tienden a cubrirse de moco llegando en algunos casos a su destruccin. En aguas cidas ricas en hierro se produce un precipitado de hidrxido frrico (un compuesto de hierro y agua) en las branquias de los peces, stas adquieren un color marrn oscuro y pueden morir por asfixia. Finalmente, el pH y la temperatura juegan un papel muy importante con respecto al amonaco que es un producto muy txico, este ltimo en pH cido se transforma en amonio forma ionizada, la cual no es txica. Lo

contrario ocurre en pH alcalinos y temperaturas altas, donde el amonio se vuelve txico. Compuestos nitrogenados. Los compuestos nitrogenados tales como el amonaco y los nitritos tienen carcter txico. Estos compuestos se originan como producto del metabolismo (la digestin, la respiracin, etc.) de los peces y dems organismos acuticos y son liberados durante la descomposicin que hacen las bacterias sobre la materia orgnica animal o vegetal producto de su metabolismo. Los dese-

Arnoniaco
,

Nitrito

chos nitrogenados son transformados de amonaco a nitratos (Figura 2).

Figura 2

El amonaco en el agua se presenta de dos formas: amonaco no ionizado (NH,), que es txico, y el in amonio (NH;) que no es txico, a menos que su concentracin sea demasiado alta. Los niveles txicos del amonaco no ionizado para exposiciones de corta duracin por lo general estn entre 0.6 y 2 mg/L. Los efectos subletales se manifiestan en valores entre 0.1 y 0.3 mg/L. El pH y la temperatura regulan la proporcin de amonaco total que existe en la forma no ionizada. Dixido de carbono (CO,) El dixido de carbono es el gas que resulta de la respiracin de los animales y de las plantas en su proceso de fotosntesis en ausencia de energa radiante (luz solar).

El CO, tiene importancia en acuicultura debido a que tambin es esencial para la fotosntesis en presencia de la energa radiante e influye en el pH del agua, porque cuando el dixido de carbono aumenta va a formar cidos y esto hace que el pH disminuya, es decir, que el agua se vuelva cida. Puede llegar a ser txico, aunque los peces pueden tolerar concentraciones altas, siempre y cuando el nivel de oxgeno disuelto sea alto. El dixido de carbono afecta a los distintos organismos disminuyendo la capacidad de la sangre para captar el oxgeno. En los peces, la intoxicacin por CO, se reconoce porque primero presentan problemas de equilibrio, luego signos de adormecimiento y disminucin de la frecuencia respiratoria, adems, los peces permanecen en la superficie. La concentracin de C , en el agua esta determinada por la respiracin O de los peces y las plantas, la fotosntesis y la descomposicin de la materia orgnica. Durante el da, a travs del proceso de fotosntesis, hay consumo de CO, pero a su vez hay produccin por respiracin de los organismos animales. En los estanques ricos en fitoplancton, el consumo de COZ puede ser tan alto que su concentracin puede llegar a cero. Durante la noche cesa la fotosntesis, no se consume ms COZ, pero contina la respiracin de las plantas y los peces, y por consiguiente la liberacin de COZal agua de modo que vuelve a subir su concentracin, alcanzando el mnimo en las primeras horas de la tarde (3:OOpm a 4:OOpm) y el mximo en la noche (1 2 de la noche). Alcalinidad total y dureza total La alcalinidad corresponde a la concentracin total de bases (sustancias alcalinas) en el agua expresada como mg/Lde carbonato de calcio (CUCO,)
y est representada por iones de carbonato y bicarbonato. La capacidad

amortiguadora del pH en el agua (para que esta no sea cida) est dada

17 1j

por la presencia de estos dos iones, lo que quiere decir que si una gran cantidad de carbonato y bicarbonato est presente en el agua, el pH se mantendr estable. La dureza total se define como la concentracin de iones bsicamente calcio (Ca) y magnesio (Mg), y se expresa en mg/L de carbonato de calcio equivalente. Otros iones divalentes contribuyen a la dureza, pero son menos importantes.

El agua se clasifica segn su dureza de acuerdo con la siguiente tabla


Tabla 1

- -

75
-

- 150
-

1S- 300 O:

--

--

Moderadamente dura

--

Dura

--

30[) o ms

Muy dura

Para el cultivo de organismos acuticos, las meiores aguas con respecto a estos dos parmetros (alcalinidad y dureza), son las que tienen valores muy similares entre si. Si se presentan valores diferentes, tales como alcalinidad mas alta que la dureza, el pH puede incrementarse a niveles muy altos durante ~erodos alta fotosntesis, ya que en la fotosntesis de hay consumo de dixido de carbono y esto hace que incremente el pH. Los mejores niveles de alcalinidad total y dureza total para acuicultura estn entre 20 y 300 mg/L. Si los valores de estos dos parmetros son baios se pueden incrementar mediante encalamiento, pero si es lo contrario, no existe un mtodo prctico para bajarlos.

Aunque no es un parmetro propio de la calidad del agua, es importante enunciarlo debido a las graves consecuencias que ocasiona la contaminacin bien sea de origen industrial, agrcola o por pesticidas. Estos ltimos son los ms frecuentes y pueden alcanzar los estanques va escorrenta o por el viento. Los niveles de toxicidad aguda para muchos insecticidas de uso comn estn en el orden de los 5 a los 10 microgramos por litro, concentraciones mucho ms baias pueden ser txicas luego de una exposicin prolongada. Aun cuando los peces no mueran, se pueden producir daos irreversibles a largo plazo a las poblaciones de peces de medios contaminados con pesticidas. Adems, se puede afectar la cadena trfica (alimenticia) del estanque y por consiguiente el crecimiento de los peces. Finalmente, estos txicos van a ingresar a la cadena alimenticia del humano, con graves repercusiones para la salud y evi, dentemente, para la buena imagen de la piscicultura.

Es importante cuando se va ha escoger el terreno para el establecimiento de un proyecto de acuicultura, verificar que la cuenca que va abastecer los estanques est libre de contaminacin.

1.4. CORRECTlVOS A L CALlDAD DEL AGUA A


Remocin de C , O

El CO, puede removerse del agua mediante la aplicacin de hidrxido


de calcio Ca (OH),, el cual se aplica a razn de 1.68 mg/L por cada mg/

L de CO, a eliminar. Su aplicacin debe efectuarse con cuidado debido a


que incrementa el pH del agua.

Alcalinidad Las aguas con niveles bajos de alcalinidad son poco productivas debido a la poca presencia de dixido de carbono y de bicarbonato. Adems, aguas de alcalinidad baja generalmente son fuertemente cidas y no presentan condiciones adecuadas para que vivan los organismos acuticos. De otro lado, el fondo de los estanques de baja alcalinidad es cido y permite que el lodo absorba el fsforo de los fertilizantes y no estara disponible para la productividad primaria. Por consiguiente, la adicin de cal a estanques de baia alcalinidad incrementa el pH del agua, facilita la solubilidad del fsforo hacindolo disponible para la productividad primaria, e incrernenta el CO, disponible para la fotosntesis. La cantidad de cal a suministrar a un estanque debe estar de acuerdo a la alcalinidad total, si est por encima de 20 mg/L no es necesario encalar,

si est por debajo de este valor se recomienda utilizar cal agrcola a una
cantidad de 200 a 400 g por metro cuadrado. Adems es una prctica que se hace cuando se va a abonar para facilitar la disolucin del fsforo. En estanques donde los peces van a depender nicamente del alimento concentrado no es necesario encalar, ya que stos no van a necesitar aguas productivas que les suministren el alimento natural. La aplicacin de cal es ms prctica hacerla cuando el estanque est desocupado, pero se puede hacer con el estanque lleno. La cal apagada Ca (OH), y la cal viva son meiores neutralizantes que la cal agrcola; sin embargo, su aplicacin en grandes cantidades incrementa el pH y se recomienda para eliminar peces despus de drenar los estanques.

Disminucin de la turbidez Como ya se vio, el principal causante de la turbidez es la arcilla en suspensin la cual limita la penetracin de los rayos solares y por consiguiente la fotosntesis y la productividad de un estanque. La turbidez se puede controlar por varios mtodos. El ms usual es la aplicacin de alumbre (sulfato de aluminio, Al, (S0,),.14H20), recomienda aplicar alumbre a razn de 35 - 40 mg/L. el cual hace que las partculas de arcilla floculen y se precipiten al fondo. Se Cuando se aplica este compuesto hay que tener en cuenta que se produce una reaccin cida que disminuye el pH y afecta la alcalinidad, por consiguiente en alcalinidades menores de 20 mg/L es necesario encalar. Otro mtodo es aplicar paja seca a razn de 2.000 en mostrar resultados y puede durar varias semanas. Oxgeno disuelto Por lo general, cuando el C , es alto, el nivel de oxgeno es muy bajo. Los O mtodos ms efectivos son la aireacin mediante sistemas mecnicos bien sea aireador de paleta o propela. Esto, sin embargo, demanda costos de energa.

4.000 kg/Ha o

estircol de vacuno a razn de 2.000 kg/Ha. Este tratamiento se demora

1.5. CANTlDAD DEL AGUA


La cantidad del agua nos indica la proporcin de peces que podemos sostener, sin dejar de pensar en su calidad. Se debe disponer de un caudal mnimo, con base en el cual se ajustar la produccin, cantidad de peces y tamao de los estanques.

Aforo: se debe realizar en pocas de poco caudal, para determinar la mxima capacidad de carga durante esa poca. Mtodo de aforo: se utiliza un flotador. En la quebrada o ro se elige un tramo recto de seccin longitudinal aproximadamente constante y tan regular como sea posible, se mide una longitud (L) de ms o menos 10 m., sealando los dos extremos con estacas. Del primer extremo parte el flotador, se registra el tiempo por cronmetro del momento de paso por el segundo extremo Conociendo la longitud y el tiempo en segundos, se tiene la velocidad superficial.

Vs= velocidad superficial. L= longitud (10 mts). t= tiempo en segundos que dura el flotador en llegar de un extremo al otro

Velocidad media. Vm =

C x Vs

C = Coeficiente de correccin, el cual depende de la naturaleza de las


paredes del cauce y de la profundidad media de ste, es una constante con un valor medio de 0.8 Entonces el caudal ser: Q = S x Vm. Donde S = altura del agua x ancho del cauce y Q =caudal

El objetivo de acceder a un programa controlado de nutricin y alimentacin es conseguir un rpido aumento de peso de los animales en el menor tiempo posible y con los menores costos, cubriendo las necesidades metablicas de todos los animales, teniendo en cuenta los requerimientos especficos de alimentos, el alimento natural disponible y el suministrado. Existe variada gama de hbitos alimenticios entre las especies cticas presentes en nuestro medio, lo cual reviste gran importancia al momento de elegir el o los alimentos a suministrar. De acuerdo a las preferencias alimenticias, se ha propuesto clasificar los peces segn sus hbitos en los siguientes grupos:
m

Carnvoros: tienen predileccin por organismos vivos, variando desde organismos planctnicos hasta pequeos mamferos. Requieren alto porcentaje de protena en la dieta.

m
i

Herbvoros: prefieren alimentos vegetales ricos en fibra y baios en protena y energa. Omnvoros: hay predileccin alimenticia variable segn la disponibilidad de alimento, especialmente frutos y semillas. Planctfagos o filtradores: consumen fito y zooplancton, filtrndolo del agua y concentrndolo por medio de las branquiespinas. Detrvoros: consumen detritus orgnicos del fondo del estanque.

2.1. EXlGENClAS NUTRlClONALES Y NlVELES EN DIETAS PARA CREClMlENTO


A medida que las explotaciones pisccolas crecen, se hace necesario
meiorar la rentabilidad de las mismas en cuanto a mayor productividad a menores costos. Para que el desarrollo de los peces sea efectivo, debe

considerarse, de un lado, los requerimientos nutricionales de las especies cultivadas en cuanto a energa, protenas, Ipidos, vitaminas y minerales, y de otro, la disponibilidad de las materias primas, su costo y su digestibilidad.

Protena

Es el componente dietario de ms importancia, debido a que es el constituyente bsico de las clulas, es fuente de energa y es fundamental para el crecimiento de los peces. Como ingrediente es el componente ms costoso. Adems de la cantidad de protena es importante su calidad, sta depende de su composicin de aminocidos, que son las subunidades constituyentes de la protena. Existen dos tipos de aminocidos, los esenciales, que el pez debe tomarlos en la dieta ya que no los puede producir, y los no esenciales, que el pez los puede producir. De este modo, una dieta rica en aminocidos esenciales es de meior calidad que una dieta muy rica en protena pero deficiente en estos aminocidos. Altos niveles de protena en la dieta, aun tratndose de protena rica en aminocidos esenciales, superiores a los requerimientos para una especie en particular, son inconvenientes en razones de costos y por eficiencia en el aprovechamiento, adems, los desechos resultantes del metabolismo de la protena causan problemas de contaminacin de las aguas. Niveles de protena por encima del ptimo en la dieta de peces, disminuyen significativamente la conversin alimenticia en la dieta, posiblemente debido a un desvo de la protena en la produccin de energa por excrecin de los aminocidos absorbidos en exceso.
O

La tilapia alcanza la tasa mxima de crecimiento cuando es alimentada con dietas bajas en protena bruta (PB), que es la protena total contenida en la dieta (menos de 30%), mientras que un 31,6% es un nivel ptimo para el crecimiento de juveniles de cachama blanca.

Lpidos
Son necesarios como fuente de energa y de cidos grasos esenciales. Existen cidos grasos que el pez no los sintetiza y por lo tanto se constituyen, al igual que la protena, en elementos vitales en la dieta. La funcin principal de los cidos grasos es ser la mayor fuente de energa para el msculo de los peces, adems son importantes en la formacin de las membranas de todas las clulas del organismo. Aunque los Ipidos son nutrientes de bajo costo en las dietas, los altos niveles en las dietas causan problemas durante el proceso de peletizacin de los concentrados y producen rancidez durante el almacenamiento, con lo que inducen disminucin en el consumo de alimento, adems, los lipidos producen efectos adversos sobre las canales, por exceso de deposicin de grasas. Para tilapias se considera que un 12% de Ipidos en la dieta genera un mximo crecimiento, mientras que para juveniles de cachama blanca se estima que un 4% de grasas con una combinacin de carbohidratos del 20 al 36%, genera un ptimo crecimiento.

Carbohidratos
No se conoce cules son sus requerimientos en la dieta de peces, pero si no estn presentes, se catabolizan (destruyen)protenas, aminocidos o cidos grasos esenciales para producir energa, por lo que se cree que los carbohidratos se requieren para aumentar la eficiencia en el uso de la protena, as como para disminuir la excrecin de nitrgeno del catabolismo (destruccin) de los aminocidos y de este modo evitar la contaminacin del agua. Los carbohidratos por lo tanto son necesarios como una fuente energtica econmica y aumentan la palatabilidad de los alimentos. En general su nivel vara con las especies, su proporcin puede oscilar entre 3040% para omnvoros y entre 10-20% para carnvoros. En cachama blanca se usan niveles hasta del 36%. Los peces omnvoros asimilan mejor los carbohidratos que los carnvoros, en estos ltimos altos niveles de carbohidratos disminuyen el crecimiento y se acumulan en el hgado, pudiendo llegar a causar la muerte. La celulosa no tiene valor energtico para los peces y por eso un exceso en la dieta puede tener un efecto negativo.

Energa
Los peces deben recibir raciones que satisfagan sus necesidades energticas adecuadamente, las cuales son encaminadas a mantener el metabolismo bsico, crecimiento, reproduccin, etc. Desde el punto de vista energtico, los peces son ms eficientes que los organismos de sangre caliente, ya que no gastan energa para termorregulacin (man-

tener la temperatura corporal alrededor de 37C en mamferos),excretan los residuos nitrogenados en forma de amonio por difusin bronquial, sin gastar energa convirtindolos en cido rico o rea, para ser eliminados por va renal como los animales terrestres, adems, el desplazamiento por nado de los animales en el agua hace que el gasto de energa sea menor que en organismos terrestres. La energa debe tener un nivel ptimo para el pez, un exceso causa disminucin en la ingesta de alimento y acmulo de grasa corporal, mientras que un defecto hace que se utilice la protena como fuente de energa y se desaproveche para el crecimiento. La energa digestible (ED) corresponde a la parte de la energa, del total contenida en el alimento (energa bruta, EB), que es absorbida por el organismo. La ED de una racin generalmente es mayor cuando la partcula del alimento es ms fina despus de la molienda, y un alimento estrudizado causa una mayor desintegracin de las partculas que un alimento peletizado, por lo tanto en este ltimo la ED es menor. Se deben tener en cuenta los siguientes factores en el requerimiento energtico:
-

A temperaturas altas del agua, los requerimientos energticos son mayores, puesto que el metabolismo de los peces es ms alto. Animales ms pequeos requieren proporcionalmente ms energa
que los de mayor tamao. Los requerimientos energticos aumentan durante la reproduccin. La mala calidad de agua y factores estresantes aumentan los requerimientos energticos para el mantenimiento.

Relacin protena/energa en las dietas Para que un pez alcance su mximo crecimiento, el ritmo de deposicin de protena en la musculatura debe ser alto, esto se logra cuando las dietas tienen energa y protena de alta digestibilidad, en niveles y proporciones adecuadas. En general, se sabe que una relacin protena/energa (mg PB/kCal) para tilapia niltica es de 103, para tilapia roja es de 93,8, carpa comn es de 108 y trucha arco iris es de 105. Minera les Cumplen funciones en el pez como la formacin de huesos y dientes, metabolismo energtico, y otra serie de funciones vitales para los animales como: la formacin de sangre, funcionamiento del sistema nervioso, etc. S subdividen en dos: los macrominerales, que se necesitan en cantidae des altas y son el calcio, magnesio, potasio, cloro y sodio y los microminerales, que son exigidos en bajas cantidades como el hierro, manganeso, zinc, cobre, yodo y selenio. En general, las dietas poseen una adecuada concentracin de estos nutrientes que permiten el buen funcionamiento orgnico de los peces. Vitaminas

Se requieren las mismas vitaminas que en mamferos, y actan como


componentes en muchas reacciones qumicas en el metabolismo de los

peces y son importantes para el crecimiento, la reproduccin y la salud de los peces. Normalmente las raciones comerciales al momento de ser preparadas deben ser suplementadas con vitaminas para que contengan las concentraciones adecuadas para una buena nutricin de los peces.

2.2. PARAMETROS UTILIZADOSPARA MEDIR LOS EFECTOS DE LAS

DIETAS EN LOS PECES


Tasa de conversin de alimento TCA: Se obtiene determinando el
alimento consumido en gramos (g), el cual se divide aritmticamente por la ganancia de peso vivo en gramos (g). Este valor indica cunto alimento se ha suministrado para cada unidad de peso ganado.

Tasa especfica de crecimiento TEC: Se calcula restndole el logaritmo


natural del peso inicial del pez al logaritmo natural del peso final en un determinado periodo de tiempo dado en das, el logaritmo natural se determina en una calculadora de funciones con la tecla "ln". El resultado de la resta se divide por el nmero de das evaluados, es decir, desde el da en que se tom el peso inicial hasta el da que se calcul el peso final del pez y el resultado de esta divisin se rnultiplica por 100. Este valor estima la tasa de crecimiento diario o ganancia media de peso por da.

Eficiencia de utilizacin de protena EUP: Se determina dividiendo


aritmticamente la ganancia de peso vivo del pez (g) por los gramos de protena total consumida por el pez para ganar dicho peso, los gramos de protena se obtienen calculando el total de la comida consumida por el pez y se multiplica por el porcentaje de protena de la dieta, as por ejemplo, si se suministra un concentrado de 45% de protena, y el pez ha consumido 300 g de concentrado durante el

tiempo calculado, entonces 300 g x 0.45= 135 g, que indica la protena total consumida por el pez. La EUP indica cunto se ha ganado en peso vivo por unidad de protena consumida.

En los ambientes naturales los peces suplen sus necesidades alimenticias de las fuentes presentes en el medio, por ejemplo: fitoplancton, zooplancton, etc., fuentes que les proporcionan los niveles de energa, protena, vitaminas y minerales necesarios para sus exigencias nutricionales. Los tipos de alimentos que consume un pez pueden cambiar a medida que crece; es especialmente notorio el consumo de alimentos de tipo natural como zooplancton y fitoplandon por la mayora de especies de peces durante las primeras semanas de vida, razn por la cual reviste especial importancia la prctica de abonar los estanques antes y/o durante las primeras semanas del cultivo. A medida que aumenta la biomasa (el peso vivo de los animales) del estanque, la disponibilidad de este tipo de alimento disminuye y se hace necesario suministrar alimento exgeno (concentrado o suplemento) para satisfacer las necesidades nutricionales. Mtodos de alimentacin Alimento natural. Los individuos sometidos a este rgimen alimenticio, basan su crecimiento en el consumo de organismos vivos y/o plantas habitantes normales del agua. En este tipo de alimentacin es importante tener en cuenta que el crecimiento de los animales va a depender de la productividad de la fuente de agua y de la densidad de siembra, a

mayor densidad disminuye proporcionalmente la cantidad de alimento disponible y por consiguiente el crecimiento. Si se desea incrementar la cantidad de alimento natural disponible en la fuente de agua, se pueden utilizar compuestos orgnicos y/o inorgnicos denominados fertilizantes, los cuales al actuar como fuente de nutrientes para las poblaciones animales y vegetales microscpicos, contribuirn a aumentar el alimento disponible para los peces. En acuicultura se utiliza principalmente el fertilizante inorgnico NPK (nitrgeno, fsforo, potasio) en sus distintas presentaciones; cumple la funcin de estimular el crecimiento de los organismos autotrofos (organismos que son capaces de elaborar su propio alimento, como las plantas) presentes en el medio, tambin se emplean los fertilizantes orgnicos como los excrementos animales, desechos vegetales, humus, etc, stos estimulan el crecimiento de organismos heterotrofos (bacterias y protozoarios). Alimento suplementario. Usualmente se recurre a este tipo de alimentacin cuando aun con fertilizacin, el alimento natural no es suficiente para un adecuado crecimiento de los animales. En este tipo de alimentacin, los requerimientos alimenticios son suplidos por la combinacin de alimento natural y subproductos animales o vegetales dispuestos en grnulos o pellets. Alimentacin completa. A diferencia de las anteriores estrategias, se basa en el suministro externo de alimento de alta calidad nutricional y con una composicin balanceada, este alimento se suministra seco, extrudizado o en forma de pellet (estas dos ltimas formas se refieren a presentaciones del alimento concentrado, las cuales les permiten mayores tiempos de flotacin). Esta forma de alimentacin permite un correc-

to desempeo de los animales en condiciones de altas densidades de siembra y aunque no se prescinde del alimento natural, se asume que el aporte de ste al crecimiento de los animales es casi nulo. S presume que este tipo e de alimento balanceado contiene los nutrientes apropiados para cada especie. Al establecer un plan de alimentacin, se deben tener en cuenta los siguientes criterios con el objeto de obtener un correcto aprovechamiento del alimento suministrado: Comportamiento alimenticio y capacidad digestiva de las especies de peces cultivadas: es importante conocer los hbitos alimenticios y dietas de origen natural, rapidez y lugar (superficie, zona media de la columna de agua "pelgico" o fondo) con que consumen el alimento. Los anteriores factores sumados al tipo de unidad productiva que se est manejando (estanque en tierra, cemento o jaula), determinarn

si el alimento a utilizar deba ser flotante, tener poca flotacin o irse al


fondo rpidamente. Exigencias nutricionales: cada especie tiene diversas exigencias nutricionales, por lo cual es importante conocer los requerimientos especficos de elementos como protena bruta, aminocidos esenciales (AAE), cidos grasos esenciales (AGE),vitaminas, minerales y energa para la(s) especie(s) de trabajo, estos generalmente se encuentran en tablas o trabaios cientficos hechos con las especies ms comerciales, en caso de no hallarse los datos para la especie con la cual se esta laborando, pueden utilizarse los de la especie ms cercana filogenticamente. Fase de desarrollo: cada fase tiene unas exigencias nutricionales diferentes: postlarvas, alevinos, peces en crecimiento, reproductores.

Disponibilidad de alimento natural y nivel de produccin que se desea: es importante observar esta variable al momento de planear la cosecha pues una buena evaluacin del sistema productivo permite establecer un indicativo de la necesidad de formular raciones completas o suplementarias.

Es importante tambin tener en cuenta un especial cuidado en cuanto al


manejo del alimento, para lo cual es aconsejable prestar atencin a los siguientes tpicos: Evaluacin inicial de la calidad de los concentrados: se debe observar la fecha de fabricacin y periodo de validez; aspectos fsicos de la racin (compactacin, tamao grnulos que componen el pellet, uniformidad de los grnulos o pellets, dimetro de los mismos, etc.). Almacenamiento de los concentrados: es ideal almacenarlos sobre estibas de madera, en sitios secos, ventilados, protegidos del sol directo, insectos y roedores. No debe almacenarse por ms de 3 meses, lo ideal es consumirlo antes de 30 das. Ajuste del tamao de grano: este debe estar de acuerdo a la especie
y el tamao de los peces y debe examinarse con cierta frecuencia.

Niveles y frecuencia de alimentacin. Existen mltiples factores que determinan el nivel y frecuencia de alimentacin: especie cultivada, tamao y edad, temperatura del agua, oxgeno disuelto, etc. En condiciones ideales de temperatura y parmetros del agua, se han establecido las siguientes frecuencias y proporciones de alimentacin segn el tamao de los peces: (Tabla 2)

Tabla 2.
Nmero suministro alimento / dia Proporcin alimento a suministrar segn % peso vivo determinado al muestre0 (biomasa)
-

Fase desarrollo

15

20

Alevinos recrla

Es importante tomar muestras del estanque por lo menos una vez al


mes para recalcular su biomasa; brevemente: se toma aproximadamente el 5% de la poblacin y se establece el peso total, luego se divide entre el nmero de animales tomados y este es el peso individual, cuando se multiplica este dato por el nmero estimado de animales sembrados, obtenemos la biomasa total. Horario y sitio de alimentacin: se recomienda que los peces sean alimentados en horarios en que la temperatura del agua sea aceptable (se encuentre entre los rangos de supervivencia) para la especie seleccionada y exista una concentracin de oxgeno alta (> 5 mg/L). Se debe suministrar en sitios de fcil acceso para los peces, libres de objetos que impidan su movimiento.

3. DISENO Y CONSTRUCC~ON ESTANQUES DE


Jorge Enrique Crdoba Pea - Acuicultor. Podramos definir un estanque como un cuerpo de agua generalmente de pequeo tamao, construido por el ser humano, para fines acuiculturales. Un estanque esta constituido por: la cubeta o espacio contenedor del agua, los diques o muros que lo limitan en su contorno y el fondo. Esta dotado adems de una o varias entradas controladas de agua, as como de salidas que permiten su drenaje.

3.1. SELECCINDEL S1770


Para la construccin de un estanque debemos tener en cuenta varios factores en el momento de elegir el sitio de construccin: Agua. Suelo.

= Topografa
Localizacin. Agua. Agua -cantidad. Desde el punto de vista del agua para la construccin

de estanques, varios factores son determinantes. El suministro de agua debe ser regular, es decir que haya disponibilidad del recurso durante todo el ao. El volumen disponible deber permitir el llenado del estanque, el mantenimiento de los niveles y los recambios necesarios programados por manejo o en emergencia. Un caudal mnimo de 4 L/.seg/ Ha. es recomendado para el cultivo de peces de aguas clidas.

Un factor de creciente importancia son las normas que sobre el uso del agua se han dictado, ellas regulan y condicionan el uso, el volumen, las caractersticas de los vertimientos y en gran parte el costo del agua para un cultivo de peces.

Agua -costo. Varios son los factores que determinan el costo del suministro de agua a los estanques. El tipo y diseo de la toma de agua, el sistema de conduccin, pero en particular si el sistema utiliza aguas suministradas por gravedad o por el contrario si son bombeadas.
Otro aspecto dentro del costo a tener en cuenta son las tasas retributivas por el uso del agua, las cuales son proporcionales al volumen utilizado. Estas tasas estn controladas regionalmente por las Corporaciones Autnomas y por los Distritos de Riego en los sitios donde se les ha delegado esta responsabilidad.

Suelo
Los suelos se caracterizan por varias propiedades entre las cuales mencionaremos: Permeabilidad y Textura por su importancia para la retencin del agua adems de Plasticidad y Compactacin por su importancia desde el punto de vista constructivo. La permeabilidad de un suelo la determina el contenido de arcillas del mismo, suelos con contenidos menores al 20% de arcillas no son aconsejables para la construccin de estanques ya que deben ser tratados para evitar las prdidas de agua, lo cual es costoso. Texturas de suelo arcillosas o arcillo-limosas son las ms aconsejables para la cra de peces ya que minimizan las perdidas de agua por filtracin.

Son muy importantes los usos anteriores que se le hayan dado al suelo ya que aplicaciones de pesticidas e insecticidas as como vertimientos de parasiticidas, pueden generar concentraciones letales de sustancias qumicas que pondran en peligro nuestra inversin. S recomienda la toma de e muestras de suelo para anlisis en laboratorio para determinar la residualidad de sustancias txicas, particularmente DDT, organoclorados y fosforados. Topografa La topografa, que describe la forma del terreno, es un factor decisivo en el diseo del estanque, actuando en muchas ocasiones como variable limitante en el tamao y forma del mismo.

Es la topografa la que determina la cantidad de tierra a mover, siendo este el factor de mayor costo en la construccin del estanque. La construccin en terrenos planos requiere de menos movimiento de tierra.
La seleccin de terrenos que no se inunden en los periodos de lluvia y que sean drenables por gravedad son dos aspectos bsicos a evaluar desde el punto de vista de la topografa del sitio. Idealmente el terreno debe ser relativamente plano con una pendiente que permita el suministro de agua por gravedad y el drenaje del estanque. Si el suministro de agua debe realizarse por bombeo el cabezal hidrulico debe ser mnimo. Localizacin Algunos aspectos relacionados con la ubicacin del sitio pueden pesar a favor o en contra de la seleccin del mismo para la construccin de estanques, ya que pueden representar ventajas competitivas para el desarrollo de la actividad diaria. Entre stas tenemos:

Proximidad a Mercados Proximidad a rutas de transporte Proximidad a centros poblados Disponibilidad de Energa Acceso a personal capacitado. Contacto con personas vinculadas al sector en el rea.

En el diseo de los estanques se deben abordar los siguientes aspectos: Tamao Forma Profundidad Ancho de muros Borde Libre Pendiente de Muros Pendiente de Fondo Drenajes Orientacin Las caractersticas citadas dependen de varios aspectos relacionados con la biologa de la especie a cultivar, el estadio de desarrollo en que se encuentre, el tamao de la explotacin y la topografa del terreno. Regularmente la forma de estanque mas usada es la rectangular donde el largo es 2 a 4 veces el ancho, esta forma permite normalmente un buen flujo de agua a travs del estanque, cuando la medida del largo es mayor a 5 veces el ancho, estamos hablando de canales, los cuales permiten un buen fluio de agua, pero son ms exigentes en el movimiento de tierra.

La profundidad del estanque (P) para el engorde de especies de aguas clidas no debe ser menor a setenta centmetros, para evitar la presencia de plantas acuticas y el crecimiento de malezas cerca de los orillales. Profundidades entre 1-3 metros son aconsejables para la mayora de las especies de aguas clidas. La altura de los diques (H) esta complementada con lo que se denomina Borde Libre (BL), que corresponde a la distancia vertical entre el nivel mximo de llenado y la altura de la corona del dique, este valor no debe ser inferior a

0,3 m para prevenir el desborde de aguas en pocas de lluvias intensas o por


algn descuido en el control de aguas de ingreso al estanque. El ancho de la corona del muro (A) depender del uso programado para la misma, el ancho mnimo recomendado es de 2 metros y 4 metros si se va a transitar sobre el muro.

P
La pendiente de los muros tanto interiores como exteriores debern tener una rela2-3H
Fgiura 3.

cin 2- 4: 1 respecto a la altura para evitar la erosin de 10s mismos. El fondo de los estanques no debe ser plano, una pendiente del 2-10%es recomendada para facilitar el drenaje y las labores de mantenimiento de fondos. Los drenajes de los estanques para el cultivo de peces deben ubicarse en el punto mas bajo de tal manera que este pueda ser drenado totalmente. El tamao del drenaje depende del tamao del estanque y deber permitir la evacuacin en el tiempo adecuado segn la labor programada, ya sea un traslado o una cosecha final de peces.

Un estanque de 1000 m3 con una tubera de 6 pulgadas de dimetro tarda entre 6-8 horas para drenar, mientras que el mismo estanque con una tubera de 3 pulgadas tardara de 25-30 horas para evacuar sus aguas. De la misma manera, un adecuado drenaie es necesario para poder evacuar aguas en las operaciones de recambio de emergencia en los estanques. La orientacin de los estanques en el terreno deber tener en cuenta la direccin de los vientos predominantes en la regin. Estanques orientados en la direccin del viento permiten un patrn de circulacin de aguas ms eficiente y cuerpos de agua de caractersticas ms homogneas, sin embargo en estanques de mayor tamao puede presentarse erosin en los muros por la accin del agua movida por el viento, a estos muros se les debe procurar defensas que mitiguen la accin elica.

Por ultimo, al abordar la construccin del estanque debe asegurarse el retiro de la primera capa del terreno para evitar el exceso de materia orgnica en los diques del estanque, esta labor denominada descapote se realiza sobre los primeros 10 cms. del terreno. Sobre la base de los clculos del volumen de tierra necesario para la armada de los diques se realiza el corte y acarreo del material y se procede al armado de los muros. La compactacin del material es un punto crtico en la construccin ya que de la eficiencia de esta operacin depender la vida til del dique. Una compactacin inadecuada permitir la erosin mas rpida del los muros y su deterioro. Aunque normalmente se utiliza el peso de la maquinaria de corte y acarreo como herra-

mienta de compactacin de los muros, esta no es la ms adecuada. La herramienta sealada para esta labor se conoce con el nombre de rodillo pate-cabra el cual consiste en un rodillo metlico con protuberancias que ejercen presin a manera de puntos sobre el terreno. Antes de emprender la construccin de su estanque, consulte con su servicio de asistencia tcnica. Los tcnicos de las UMATAs podrn orientarlo en la planificacin y diseo de sus estanques pisccolas o contrate los servicios de un experto en la materia cuya experiencia sea garanta para no cometer costosos errores en la seleccin del sitio, diseo y construccin de sus estanques pisccolas.

4 CONCEPTOS BSICOSDE SANlDAD P~SC~COLA .


ENFERMEDAD
Manifestaciones fsicas, y a veces en el comportamiento, que son anorrnales, visibles, y que son el producto de desarreglos en cualquier animal (hospedero), como consecuencia de la INTERACCIN l con agentes extrade os (etiologa ="causau) o por desrdenes propios del mismo animal. La enfermedad slo la sufre el hospedero (animal), MUY RARAVEZ es el producto de una sola "causa". En consecuencia, encontrar un microorganismo, una sustancia daina o una deficiencia o exceso de un nutriente, slo indica la presencia o ausencia de dicho microorganismo, sustancia o nutriente, en ningn caso significa ENFERMEDAD.

Presencia de un microorganismo POTENCIALMENTE daino dentro del hospedero, es decir, no son visibles ni comportamientos anormales ni signos.

Daos (lesiones)en los rganos o tejidos del hospedero: inflamacin, hemorragias, muerte de clulas, aumento en el nmero o en el tamao de las mismas.

'CAUSA " (ETIOLOG~A):


Escribimos causa entre comillas, porque es un trmino que se presta para muchas confusiones, sin embrago, se continua utilizando comn-

mente. Creemos de todas formas que es necesario, as sea en forma mnima, no dejar pasar la oportunidad de problematizarlo. En consecuencia tambin usamos una expresin mas correcta: etiologa. Entonces definimos etiologa como la sustancia, microorganismo, elemento, etc. que es capaz de INDUCIR enfermedad. Ntese que tampoco usamos la expresin "producir" enfermedad. An ms, la presencia de microorganismos por lo general se debe mirar desde el punto de vista "CAUSA O EFECTO": esto es: los microorganismos muchas veces estn en el hospedero y pueden no estar induciendo LESIN o PATOLOG~A an ENFERMEDAD, sencillamente estn ah, porque ese es o su sitio habitual de estar, en ese caso se podran considerar como un efecto. Tambin pueden estar INVOLUCRADOS tales microorganismos en la y induccin de PATOLOG~A ENFERMEDAD pero no como CAUSA PRIMARIA sino como "OPORTUNISTAS"; esto es, hay otros factores predisponentes que hacen ms susceptible al hospedero al ataque de microorganismos oportunistas, son esos factores predisponentes los que se deben corregir primero antes de hacer uso de la teraputica para destruir el microorganismo.

GRUPOS DE ETIOLOGIS

('Causas"):

Vivos: virus, bacterias, parsitos, etc. Fisicoqumicos: desrdenes en parmetros de la calidad del agua como temperatura, pH, oxgeno disuelto, nitritos, nitratos, amonio, etc. Qumicos extraos: pesticidas, herbicidas, colorantes (Verde de Malaquita), fijadores (formol), etc. Nutricionales: exceso o defecto de nutrientes. Genticos.

MORBlLlDAD
Porcentaje de enfermos en una poblacin

MORTALIDAD
Porcentaje de muertos en una poblacin

POBLAU~N
Existen varias posibilidades de definirla: una poblacin puede ser una granja, regin, nacin, grupo de naciones geogrficamente asociadas y mundial.

PATOGENlClDAD
Es la habilidad de un agente para inducir enfermedad, la medida de la
patogenicidad es la proporcin de animales que fueron infectados y que al final resultan enfermos.

VIRULENCIA
Agresividad del agente, capacidad de producir casos graves o fatales en proporcin al nmero total de casos enfermos, o meior, es el grado de patogenicidad

ENFERMEDAD TRANSMISIBLE
Cualquier enfermedad causada por un agente infeccioso que se disemina por la transmisin de este agente, de un reservorio o un hospedero infectado a otro hospedero susceptible. Esta transmisin se da directamente de un animal o persona infectada, o indirectamente a travs de un hospedero intermediario que puede ser un vecfor (animales invertebrados) o de un objeto inanimado

FUENTE DE INFECCIN
Aquella que sirve como ambiente natural y sitio de multiplicacin de un agente, y de la cual por una ruta u otra puede infectar a otro individuo susceptible. La fuente de infeccin debe distinguirse claramente de la fuente de contaminacin, un eiemplo de esta ltima es la que produce un escape de un pozo sptico a un abastecimiento de agua. Los animales actan como fuente de infeccin a partir de casos clnicos agudos y a partir de portadores "sanos".

PORTADOR SANO O ASINTOMATICO


Un animal se puede infectar durante el curso de una infeccin o tambin lo puede hacer en la fase de convalecencia o postconvalecencia en una poblacin, sin embargo, dicho animal te de infeccin. no manifiesta la enfermedad pero queda infectado temporal o permanentemente y acta como fuen-

TRANSMISION DIRECTA
Transferencia directa del agente infeccioso de un portador sano o uno enfermo a un animal susceptible por contacto directo.

T R A N S M I S I ~ INDIRECTA N
Vehculos: objetos inanimados o materiales contaminados Vector: invertebrado que propaga la enfermedad entre un hospedero enfermo a otro susceptible. Estos se clasifican en:

1. Vedor Mecnico: es el simple traslado mecnico del agente infeccioso. Por medio de un insecto por contaminacin de sus patas o trompa o por pasaje a travs de su tracto gastrointestinal, sin multiplicacin o desarrollo del microorganismo.

2. Vector Biolgico: cuando es necesaria la multiplicacin, desarrollo


cclico o una combinacin de ambos en el invertebrado vector antes de que pueda transmitir la forma infectante del agente o etiologa que ha adquirido de un animal infectado o enfermo a otro. El artrpodo se hace infectante despus de que el agente tiene un perodo de incubacin

S trata de la recoleccin permanente y dinmica de informacin sobre e el estado de salud o enfermedad de una poblacin y de los factores relacionados con ella; cuando se detecta enfermedad la vigilancia epidemiolgica tambin se encarga de aplicar medidas de control y evaluar la eficacia de ellas. Conceptos importantes en vigilancia epidemiolgica: Endemia: Enfermedad clnicamente manifiesta o no, que se presenta en forma regular en una zona y afecta a una determinada poblacin. Epidemia/ Brote: Aparicin en una comunidad o regin de casos de una enfermedad claramente excesivos con respecto a lo que cabe esperar en condiciones normales

1. La enfermedad en animales de produccin casi nunca es un problema individual, por lo general es un asunto de poblacin, que puede estar estratificada por edades.

2. No existe una sola "CAUSA", a lo sumo la enfermedad es de ORI-

GEN MULTICAUSAL. Esto es an mas cierto en animales acuticos.


3. En consecuencia, el DIAGNSTICO no puede seguir siendo
"UNICAUSAL", debe ser INTEGRAL. Esto es: se deben establecer procedimientos que abarquen la totalidad de los factores que intervienen en todo el sistema de produccin, desde la tir mapas

REGIN (deben exisEPIDEMIOLGICOS), pasando por el CLIMA, manejo de

la granja, aguas y uso ADECUADO de LABORATORIOS. Mandar una muestra de cualquier cosa, un animal, animales muertos, etc. es una prdida de tiempo y dinero.

4. Enfermedad no es solo un BROTE Y MORTALIDAD GRAVE durante


dicho brote. El concepto de ENFERMEDAD debe ser una preocupacin permanente en explotaciones tal como lo es la RENTABILIDAD. Hoy se habla mas de gestin de salud y prevencin antes que de tratamiento de enfermedades. Puede ser que algunas enfermedades nunca se presenten y otras sean muy frecuentes. En todo caso debe existir un MONITOREO (vigilancia epidemiolgica) permanente desde el Pas hasta la granja a fin de que las primeras en verdad nunca ingresen y las segundas puedan ir siendo disminuidas y controladas en el tiempo: en esencia debe haber un cambio de actitud hacia el TIEMPO en que percibimos las enfermedades.

5. La enfermedad en el menor de los casos es un asunto de GRANJA, por lo general es un asunto de REGIN algunas veces de NACIN y
o MULTINACIONAL: por consiguiente debe haber un cambio de actitud hacia el ESPACIO en que concebimos las enfermedades.

6. La enfermedad casi nunca es un problema personal, es un problema


COMUNITARIO: del productor, de las granjas, de las agremiaciones, de los productores de insumos para animales, de importadores y exportadores, de laboratorios privados, de las INSTITUCIONES del Estado y de las UNIVERSIDADES. En definitiva: la enfermedad es un ASUNTO NACIONAL, no exclusivamente PERSONAL ni ESTATAL.

7. Para las enfermedades infecciosas cada vez se alejan ms las posibilidades de soluciones MGICAS; bien sean ellos el desarrollo de nuevos productos,

ANTIBITICOS VACUNAS vale millones de Dlao

res sin que su eficacia est asegurada.

8. La industria ACU~COLA una de las que tiene mayores posibilidaes


des de EXPORTAR; afuera en el extranjero no les gustan los alimentos ni con QU~MICOS microorganismos potencialmente dainos.

9. La salud social y econmica de Colombia en gran medida dependern de las exportaciones.

PRINCIPIOS PARA LA TOMA Y ENV~O MUESTRAS PARA EL DE DIAGN~STICO ICTIOPATOL~GICO


5.1. RECOMENDAClONES GENERALES
Los sistemas pisccolas deben ser cada vez mas productivos y eficientes, esto implica tener un mayor conocimiento de todos los factores que intervienen en una explotacin; dentro de stos, la sanidad de los animales, toma especial importancia dada la intensificacin de los cultivos que propicia la mayor aparicin de enfermedades. Como un intento parcial para prevenir, disminuir o controlar los problemas sanitarios se hace indispensable conocer la situacin real de la granja, lo cual se logra a travs de las siguientes medidas: Llevar constantemente registros completos de todos los parmetros productivos y sanitarios de la granja, incluyendo la mortalidad diaria en cada uno de los estanques, jaulas o divisiones de la explotacin. Para esto cada productor puede idear sus propios formatos que se ajusten a sus caractersticas especficas. E esencial crear la conciens cia en el personal de la empresa de la importancia de estos datos para asegurar una toma constante y correcta de los mismos. Monitorear peridicamente la situacin sanitaria de los peces, as aparentemente no se este presentando ningn problema. Muchas patologas pueden pasar inadvertidas en la explotacin, pero debido a mltiples factores ocasionan brotes espordicos o incipientes de signos clnicos o mortalidad; desafortunadamente el productor tiende a acostumbrarse a esta situacin y termina por reportar esto como algo 'normal', sin darse cuenta que all puede radicar en gran medida parte de las prdidas detectadas al final de un ciclo de cultivo.

Dichos monitoreos consisten en el envo adecuado de animales a un laboratorio calificado para su anlisis y diagnstico. Con estos resultados se puede intentar conocer los factores que afectan la presentacin de estas mortalidades crnicas y tomar a tiempo las medidas apropiadas para su prevencin y control. Recurrir pronto a ayuda calificada en caso de algn cambio en el comportamiento normal de los peces o en brotes agudos y severos de mortalidad. E importante tomar conciencia de que gran parte de s las medidas a tomar en estos casos, especialmente las de tipo teraputico, deben partir de un diagnostico preciso y confiable. Toda decisin de este tipo que se adopte de forma apresurada y sin un fundamento claro solo trae consigo mayores perdidas econmicas, demora en el diagnostico preciso y en la toma de las medidas apropiadas y considerable impacto medio ambiental. De la premura y sensatez con la cual se actu en estos casos, depende en buena parte el xito para enfrentar y salir del problema. Llevar a cabo un monitoreo frecuente de los principales parmetros fisco-qumicos del agua de la explotacin (temperatura, oxgeno, amonio y nitritos). El productor debe procurar conocer el comportamiento del ciclo diario y estaciona1 de estas variables para detectar cualquier cambio y prever la aparicin de alguna alteracin asociada a ellas. En la actualidad existen muchos mtodos econmicos y de aceptable confiabilidad para efectuar tales mediciones.

5.2. ENM'O DE MUESTRAS


Obtencin de la historia clnica. Toda muestra a enviar al laboratorio debe ir acompaada de una historia clnica del caso. Existen muchos tipos de forrnatos para remitir una historia y aunque es importante mencionar todos los detalles posibles, existen algunos datos que siempre deben estar prestantes, dicha informacin es la siguiente: Informacingeneral de la explotacin:que permita ubicarla geogrficamente y determinar el tipo de cultivo empleado, direccin, telfono, tipo de explotacin, extensin, especie(s) cultivada(s), alimentacin, etc. Poblacin afectada: determinar la su peso o tiempo de cultivo. Mortalidad observada: establecer el numero total de animales muertos, asociados al problema, al momento de realizar la remisin de muestras. Aclarar la fecha de inicio (y terminacin) de la mortalidad y la hora del da en la cual es ms evidente.
(S)

especie (S) que est (n) presen-

tando la signologa clnica o la mortalidad, su nmero aproximado,

Signos clnicos presentes: alteraciones en el comportamiento normal del pez (disminucin en el apetito, depresin, boqueo, nado anormal, etc), las caractersticas externas anormales (erosin o enrojecimiento de las aletas, ulceraciones de la piel, palidez de las branquias, etc). Tratamientos realizados: sealar todas las medidas teraputicas o de manejo que se hayan utilizado para disminuir la presentacin de la mortalidad o de los signos clnicos y enunciar los resultados obtenidos.

Caractersticas fisco-qumicas del agua: especificar si se llev a cabo algn tipo de anlisis a los parmetros fsico-qumicos del agua. Es importante sealar cualquier cambio en las caractersticas generales del agua (color, olor, etc). Cambios recientes: en las actividades rutinarias de cultivo (cambio de alimento, siembra de eiemplares nuevos, etc) que eventualmente pudieran relacionarse con el inicio del problema.

Seleccin de la muestra.
Los animales a muestrear deben ser tomados del sitio donde la mortalidad o los signos clnicos sean predominantes. Las muestras enviadas en la etapa terminal del problema, cuando solamente quedan unos pocos animales sobrevivientes, tiene pocas posibilidades de xito para el diagnostico y reduce las posibilidades de brindar una ayuda efectiva. El nmero de animales a enviar varia segn el tipo de anlisis, pero generalmente es aceptable un mnimo de 5 y un ideal de 10 o mas ejemplares. Siempre se deben incluir animales afectados y animales aparentemente normales (en una proporcin de 3 a 1, aprox.). Los animales seleccionados como normales no deben tener ninguna afeccin aparente, tener buen apetito y buen reflejo de huida. Debido a la posibilidad zoontica de algunas enfermedades, es decir, el posible contagio de los humanos con organismos patgenos de los peces, debe acostumbrarse el uso de guantes adecuados para todas las labores de manipulacin.

Tipo de muestra. Animales vivos. Dado que con este tipo de muestra es posible realizar todos los procedimientos necesarios para llegar al diagnostico, ES LA MEJOR FORMA DE ENVIAR UNA MUESTRA AL LABORATORIO. Aunque se tiene la conviccin errnea que realizar este tipo de envos es algo complejo, se podr observar aqu que este procedimiento es muy sencillo, econmico y de un gran valor diagnostico. Lo mas importante es tener ciertas precauciones y actuar con rapidez y eficiencia; para ello se recomienda que antes de empezar la manipulacin de los animales se tengan listos todos los materiales necesarios como son, entre otros: la historia clnica, el instrumental, los implementos para el envo (bolsas, cajas, hielo, etc) a fin de disminuir al mximo el tiempo de manejo de los peces. La forma de remitir los ejemplares puede tener algunas variaciones, pero el procedimiento indicado aqu es el comnmente aceptado. S deben utilizar e bolsas de polietileno de grueso calibre (del mismo tipo que las usadas para el envo de alevinos); es recomendable la utilizacin de doble bolsa y revisarlas previamente para prevenir cualquier alteraciny accidente en el transporte. Se llena un 1/3 de la bolso con agua de buena calidad, del mismo tipo de la utilizada en el cultivo; esto es importante para evitar cambios bruscos en el pH, la temperatura y la alcalinidad. S introducen los peces, se e llena el espacio restante de la bolsa con oxgeno o aire en su defecto, y se cierra de un modo estable y seguro. Se revisa la ausencia de fugas de aire o agua, se introduce en una caja de cartn y se sella y rotula apropiadamente (como un envo de correo). Para viajes prolongados es aconsejable rodear la bolsa con hielo y aislar la caja trmicamente con icopor, con el obieto de lograr la mayor sobrevivencia de los peces

El nmero de ejemplares por bolsa depende de muchos factores como la especie y talla de los animales, la temperatura del agua, el tamao de la bolsa, la duracin en el periodo de captura y en el transporte al laboratorio, etc., sin embargo, una medida de referencia general puede ser el no exceder los 500g de biomasa por bolsa (1 0 animales de 50 g, por ejemplo). Como se mencion previamente, siempre se deben enviar peces normales. Estos deben enviarse en una bolsa aparte o ser identificados apropiadamente dentro del grupo (un pequeo corte en el extremo de la aleta caudal puede ayudar). Los animales afectados no deben seleccionarse muy moribundos o agnicos ya que muy seguramente llegaran muertos a su destino. Finalmente, es importante no olvidar introducir la historia en una de las cajas, protegida apropiadamente contra la humedad.

Animales fijados. Cuando el envo de animales vivos no es posible por alguna


circunstancia, es posible remitir los peces en formalina preparada apropiadamente. Es importantetener en cuenta que de esta forma se limita el valor diagnstico de la muestra ya que sta solamente puede ser procesada para histopatologa (ya que no es posible el aislamiento bacteriolgico, por ejemplo). Idealmente se debe utilizar formalina bufferada al 3.7%, la cual puede conseguirse en cualquier laboratorio de diagnstico. Si esto no es posible, mezclar 9 partes de agua destilada por una parte de formalina se ~ u e d e n comercial (la cual viene usualmente al 37%). Se utilizan diversos tipos de envase con tapa rosca y de un tamao proporcional a los peces a muestrear. Normalmente se usan de vidrio pero los de plstico suelen ser ms econmicos, seguros y livianos . La rapidez en todo el procedimiento es factor crucial para el xito. Los animales seleccionados siempre deben estar vivos al momento de la

manipulacin, ya sea que estn prximos a su muerte pero aun con movimientos respiratorios. Ejemplares muertos, as sea recientemente, no sirven para el proceso. Una vez los peces son capturados, se deben introducir en una solucin anestsica para su insensibilizacin. Los anestsicos mas comunes son la tricaina (finquel o M S - 2 2 2 ) y la quinaldina, dosis a efecto. Si no se dispone de stos, se puede emplear un recipiente con hielo para asegurar una pronta inconciencia y muerte del animal. Es aconsejable no realizar este procedimiento a todos los peces seleccionados al mismo tiempo, ya que mientras se procesan los primeros, los ltimos empezaran a morir. Cuando los animales cesan la respiracin se procede a su sacrificio mediante un corte en la medula espina1 en la parte posterior de la cabeza, un poco por delante de la aleta dorsal. Los animales mas pequeos (1 -2 g o menos) deben ser introducidos inmediatamente en la solucin de formol. A los peces un poco mas grandes (menores a 5 g) antes de introducirlos se les practica una incisin leve en la parte ventral del abdomen, teniendo la precaucin de exponer los rganos abdominales sin lesionarlos. Los ejemplares mayores de este tamatio deben ser procesados de la siguiente forma: se colocan sobre uno de sus costados, se les realiza una incisin ventral desde la mandbula hasta el ano, se continua el corte hasta arriba y adelante siguiendo los limites dorsales de la cavidad abdominal y se comunica con el primer corte justo antes del oprculo, sin lesionar ningn rgano; de esta forma se retira todo el costado de la pared abdominal y se exponen todas las vsceras. En tilapias es conveniente incidir adems la membrana que divide la cavidad abdominal de la cavidad renal. Posteriormente, mediante una ieringa con una aguja muy fina (de insulina) se inyecta una

pequea cantidad de la misma solucin de formol en varias porciones en el intestino y en el estmago. Finalmente, se retiran los oprculos y se meten los peces en el frasco, asegurndose que todos los tejidos queden inmersos en formol. Es aconsejable no efectuar ningn otro tipo de manipulacin a los tejidos. Los frascos deben ser rotulados apropiadamente anotando la fecha y lugar de toma y similar a lo descrito anteriormen, te, acompaarse de una historia adecuada.

Animales congelados. Este tipo de muestra es de valor limitado ya que


eventualmente sirven solo para bacteriologa, virologa y toxicologa (no para histopatologa). En los casos que se considere esta forma de envo, las muestras deben ser remitidas adecuadamente congeladas y aisladas trmicamente, evidentemente que no servirn para anlisis histopatolgico.

6 CARACTER~STICAS . DEL MANEJO SANITARIO Y PRODUCTlVO

DE LA GRANJA MODELO DE TILAPlA


Carlos Mario Franco - Mdico Veterinario, Granja: Tilapez Cartago-Valle

CARACTER~STICAS GENERALES
Aguas lluvias Bajos recambios Estanques en tierra Inversin de sexo en hapas

MANEJO DE REPRODUCTORES
Aplicacin de larvicida y10 desinfeccin del lago. Evaluacin de Insectos predadores,caracoles, etc. Baja densidad: 2/m2 Temperatura estable Evaluacin de condicin corporal

COSECHA DE 2 RVAS . 4
Implementos de pesca desinfectados Larvas en agua limpia y clida. Bao control protozoos Temperatura estable

AMBIENTE ACU TICO


Estabilidad de Temperatura y pH Estimular cadena trfica (fertilizacin qumica) Aprovechar indicadores biolgicos. Evitar contaminacin con materia fecal de otras especies y/o lixiviados. Aerobio

1571

REVERSION SEXUAL
Temperatura estable Control de materia orgnica. Fertilizacin qumica Buena frecuencia de alimentacin. Tamao de partcula Evaluar registro diario Protena mxima 35% Anillos concentradores

PRELEVA NTE
Desinfeccin del lago y/o correctivos Antes de cosechar, estabilizar el nuevo medio (temperatura) Agua filtrada y fertilizada Control de insectos predadores y plantas invasoras

ALlMENTO EN LA SANlDAD
Almacenamiento adecuado Proteccin adecuada contra el calor y el sol Composicin (aminocidos, grasas, relacin energa-protena) Tipo (% protena) Energa (dietas isocalricas) Tamao de partcula (destruir alimento en relacin con el tamao de los peces).

EVALUACI~N L ~ N I C A C
Observacin y anlisis del registro diario Observacin del lote (comportamiento) Evaluacin del comportamiento del medio acutico (qu ha predispuesto a un brote?)

Comparar con otros lotes existentes y en registro Ubicacin de la hapa? Densidad / ambiente Cantidades y forma de alimento.

MANEJO DE MORTALlDAD
Recoleccin constante, conteo y registro. Depositarla en agua con desinfectante (formol), proteger del sol Adecuada disposicin de los cadveres. Evitar contaminacin de aguas e implementos

CONCLUSlONES
Desinfeccin de suelos de lagos. Evaluacin contenido del fondo (insedos-caracoles,etc). Y su correctivo. Manejar adecuadamente el ambiente acutico (recordar que es un medio vivo) Desinfeccin constante de implementos de pesca, botas trabaiadores, hapas, jaulas. No aplicar "tratamientos" de rutina sin necesidad. Evaluar alteracin del ambiente del pez (factores predisponentes) y rregirlo. Buen diagnostico clnico y de laboratorio (correlacionarlos) Tratamientos de acuerdo al ciclo biolgico del agente etiolgico. Elegir el medicamento y dosis adecuada. Frecuencia y duracin del tratamiento. Baos funcionan mejor en: diagnstico precoz, menos costosos, menos contaminantes, menor resistencia.
CO-

7.1 CULTIVOS CELULARES COMO TCNICA DE D I A G N ~ S T I C O ENFERDE

MEDADES VlRALES EN PECES.


Fransue Granados. Mdico Veterinario En la actualidad, enfermedades como la necrosis pancretica infecciosa (IPN), la necrosis hematopoytica infecciosa (IHNV), el linfocystis (LV), el rabdovirus de alevinos (PFR), la viremia de verano de la carpa (SVCV) y la septicemia hemorrgica viral (VHSV) encuentran en el desarrollo de cultivos primarios y a partir de stos, las lneas celulares, la base de su estudio. En nuestro laboratorio a partir de casos evaluados por histopatologa de piscifactoras de trucha arco iris (Onchorynchus mykiss), se ha sospechado de la presencia de IPNV en el pas, por lo cual se dio inicio al desarrollo de un cultivo primario como primer paso para la implementacin de esta tcnica en el diagnstico de enfermedades virales en nuestro medio. La tcnica que se ha venido adelantando se basa en la obtencin de un grupo de clulas originarias de bazo y rin de juveniles de trucha arcoiris (Onchorynchus mykiss) y su mantenimiento en medios de cultivo como Leibovitz- 15, medio esencial mnimo (MEM) o RPMl suplementados, para su posterior enfrentamiento a muestras sospechosas, una vez se finaliza el enfrentamiento las muestras deben ser evaluadas por microscopia invertida y/o electrnica. Rutinariamente se preparan muchos tipos de cultivos celulares en vertebrados, y la informacin en peces era limitada o no exista, ahora se sabe que el cultivo de tejidos de peces telesteos in vitro requiere condiciones de cultivo especiales, como el manejo de la temperatura y

el pH al igual que la variacin de algunos componentes de los medios para controlar la salinidad, lo que ha permitido que se desarrollen cultivos primarios a partir de branquias (Verbost et al.; 1994 Fernndez, et al., 1995), aletas (Bejar, et al., 1997), bazo y tejido hematopoytico (Verbost et al., 1994; Ganassin and Bols, 1996; FlaTio, et al., 1998; Ganassin et al., 2000), leucocitos (Johansen and Sornmer, 1995; Camacho, y Burbano, 1999),vsceras y cerebro (Isshiki, et al., 2001), entre otros. Las tcnicas de cultivo al igual que sus condiciones son muy variables por lo cual se hace necesario, de acuerdo al equipo de trabaio y materiales con los que se cuenta, la estandarizacin de ellas. En lo que tiene que ver con el diagnstico de IPNV, se han propuesto algunos protocolos para el desarrollo de cultivos primarios a partir de rganos hematopoyticostales como bazo y rin craneal (Ganassinand Bols, 1996; Flao, et al., 1998; Ganassin, 2002), estos protocolos han variado a lo largo de las investigaciones, pero la base terica de preparacin se mantiene. E as como se obtuvieron clulas de bazo y su progenie s con estructura de teiido hematopoytico, caracterizadas por una adherencia parcial a la base de los frascos de cultivo y formacin de racimos, alcanzando a cubrir un 75% de sta (confluencia incompleta).

En esta seccin queremos agradecer sinceramente la asesora del doctor Jorge Almansa, como responsable del Laboratorio de Virologa de CORPOfCA, CEISA.

7.2 T C N ~ C A PCR (Reaccin en Cadena de la Polimerasa) DE


La PCR es una tcnica para la sntesis ((invitron de secuencias especficas de ADN. Permite multiplicar el ADN presente en diferentes muestras biolgicas, obtenindose millones de copias de una determinada secuencia de ADN. En poco tiempo esta tcnica ha conseguido ser ampliamante utilizada no slo en la gentica molecular, sino en otras muchas ciencias (Mas et al., 2001). La tcnica ha llegado a convertirse en una importante herramienta de diagnstico de enfermedades infecciosas tanto en humanos como en animales, varios autores han reportado la identificacin de microorganismos de importancia en sanidad acucola por esta tcnica (Wakabayashiand Izumi, 1997; Cepeda y Santos, 2000; Gibello et al., 2001).

El procedimiento se basa en la amplificacin de una secuencia especfica


del ADN bacteriano por accin de una enzima termoestable: Taq polimerasa. El ADN bacteriano es sometido a la repeticin de un ciclo de amplificacin conformado por tres pasos: desnaturalizacin del ADN de doble cadena, hibridacin de los primers o cebadores y extensin o elongacin del cebador por accin de la polimerasa. Tras la serie de ciclos, el resultado que se obtiene es la amplificacin exponencial del fragmento de ADN seleccionado. La deteccin del producto se hace por electroforesis en gel de agarosa
y tincin con bromuro de etidio.

En nuestro laboratorio se practica esta tcnica para confirmar el diagnstico de algunas bacterias de importancia en sanidad acucola: Flavobacteriurn psychrophilurn, Aeromonas hydrophila y para determinar la especie de Streptococcus spp. hasta ahora aislado en brotes de morbimortalidad en Colombia.

Bejar, J., Borrego, J.J., lvarez, M.C.1997. A continuos cell line from the culture rnarine fish gilt-head seabream (Sparus aurota L.). Aquaculture. 150: 143-153. Camacho-Garzn, J. & Burbano C.1999. Tcnica para el cultivo In vitro de linfocitos de peces. Dahlia.3:69-79. Candan, A. 2002. First report on the diagnosis of infectious pancreatic necrosis (IPN) based on reverse transcription polymerase chain reaction ( RT-PCR) in Turkey. Bull Eur Ass Fish Patho1.22:45-47. Cepeda C. y Santos Y. 2000. Rapid and low-level toxic PCR- based method for routine identification of Flavobacteriurn psychrophilum. lnternatl Microbiol. 3: 235-238. Diagnosis Manual for Aquatic Animals Diseases.2000.01E. Fernandes, M.N., Eddy FB Penrice W.S.1995. Primary cell culture from gills explants of rainbow . trout. J Fish Biol. 47:641-651. Flao, E., Lpez-Fierro, P, lvarez, F.,Rasquin, B., V.illeno, A. 1998. Splenic cultures from rainbow trout, Onchorhynchus rnykiss: establishment and characterization. Fish & Shellfish Immunology. 8:589-606 Ganassin, R. C., Bols, N. C.1996. development of long-term rainbow trout spleen cultures that are haemopoietic and produce dendritic cells. Fish and Shellfish Immunology. 6: 1734. Ganassin, R. C., Schirmer, K., Bols, N. C.2000 . Cell and tissue culture. In Experimental Models. Copyright02000Academic press. Pp63 1-659. Gibello A, Blanco MM, Dominguez L y Fernndez J . Utilizacin de la PCR para el diagnsF tico en Ictiopatoioga. www.revisthaquatic.com. Nov 2001. Isshiki, T., Nagano, T., Suzuki,S.2001 .Infectivity of aquabirnavirus strains to various marine fish species. Dis Aquat Org.46:109-1 14. Johansen, L.H.,Sommer, A.I. 1995. Multiplication of infedious pancreatic necrosis virus (IPNV) in head kidney and blood leucocyfes isolated from Atlantic salmon, Salmo salar L. J Fish Dis.18:147-156

Kennedy-Stoskopf, S. Chapter 11. Immunology. 1993. In STOSKOPF, M.K. Fish Medicine. Ed. W.B. SAUNDERS. Roberts, R.J. 2001. Fish Pathology. 3a Edition. Ed. W.B. SAUNDERS. Verbost, PM., Flik, G., Cook, H. lsolation of gills. In Biochemistry and Molecular Biology of Fishes. Elsevier Science B.V .Machachta and Mommsen Eds. Vol 3.1 994, pp.239-245. Wakabayashi H and lzumi S.1997. Use of PCR to detect Cytophaga psychrophila from apparently healthy juvenile ayu and Coho Salmon Eggs. Fish Pathology 32:169-173.

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