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Describir la dinmica de los sistemas de membrana explicando: a) Vesculas de transporte: transportan protenas recientemente sintetizadas y lpidos desde el retculo endoplasmtico hasta el complejo de Golgi, de cisterna a cisterna dentro del complejo de Golgi, y desde el complejo de Golgi hasta su destino final dentro de la clula o la superficie celular. Se forman por gemacin a partir de un compartimiento membranoso. Estas vesculas se mueven a travs del citoplasma de manera dirigida, con frecuencia a lo largo de vas formadas por elementos del citoesqueleto, y luego se fusionan con la membrana de un compartimiento diferente que acepta tanto la carga soluble de la vescula como su envoltura membranosa. b) Va biosinttica (secretoria): va en la cual se sintetizan materiales en el retculo endoplsmico o en el complejo de Golgi, se modifican durante su paso a travs del complejo de Golgi y se transportan en el citoplasma a diferentes destinos, como la membrana plasmtica, un lisosoma, o la vacuola ms grande de una clula vegetal. Gran parte de los materiales sintetizados en el retculo endoplsmico o en el complejo de Golgi estn destinados a ser descargados (secretados). La va biosinttica secretoria incluye flujo de lpidos, carbohidratos y protenas. c) Secrecin regulada: se secretan y almacenan materiales en granulos secretorios rodeados de membrana en las regiones perifricas del citoplasma y slo se descargan en respuesta a un estmulo apropiado. La secrecin regulada ocurre, por ejemplo, en clulas que producen y liberan hormonas o enzimas digestivas y en clulas nerviosas que liberan sustancias neurotransmisoras. d) Va endoctica: lleva materiales del exterior de la clula (y desde la superficie de la membrana celular) a compartimientos como los endosomas y lisosomas localizados en el interior de la clula. Qu tcnicas se utilizan para la localizacin de molculas en la clula? R: Por autorradiografa, por aislamiento de fracciones subcelulares y por estudio de mutantes genticos. Con respecto a la tcnica de pulso y caza (o seguimiento de pulsos): a) Quines la realizaron por primera vez? R: James Jamieson y George Palade b) Qu tipo de informacin aporta? R: se pueden seguir los movimientos de molculas recin sintetizadas observando la onda de material radiactivo que se desplaza a travs del citoplasma de la clula de un sitio al siguiente. En qu ao fueron desarrolladas las primeras tcnicas de fraccionamiento celular y quienes las desarrollaron? R: fueron desarrolladas en los decenios de 1950 y 1960 por Albert Claude y Christian De Duve. Qu son los microsomas? R: son un grupo heterogneo de vesculas membranosas que pertenecen al sistema endomembrana (principalmente retculo endoplsmico y complejo de Golgi) Qu tipo de informacin se puede obtener de la tcnica de fraccionameinto celular? R: suministran datos acerca de la composicin bioqumica de estas estructuras. Las vesculas derivadas de diferentes organelos membranosos (ncleos, mitocondrias, membrana plasmtica, retculo endoplsmico, etc.) tienen diferentes propiedades que permiten separarlas entre s, mtodo denominado fraccionamiento celular. Qu organismos han sido especialmente tiles para estudios genticos y por qu? R: Las levaduras son particularmente adecuadas para estudios genticos, ya que tienen un nmero relativamente pequeo de genes (en comparacin con otros tipos de eucariotes); son organismos unicelulares relativamente pequeos que pueden crecer en cultivo y se desarrollan como clulas hapoides. Da un ejemplo de algn tipo de estudios genticos donde se hayan utilizado las levaduras. R: En el transcurso de casi dos decenios, los investigadores aislaron docenas de diferentes mulantes en los cuales prcticamente se han fraccionado todos los pasos de la va secretoria. Muchos de los genes encargados de estos efectos fueron clonados y las protenas codificadas, aisladas y secuenciadas. El aislamiento de protenas de las levaduras motiv investigaciones exitosas de protenas homologas en sistemas de mamferos. Qu es el Retculo Endoplasmtico (RE)? R: es una red interconectada de tubos aplanados y sculos comunicados entre s, que intervienen en funciones relacionadas con la sntesis proteica, metabolismo de lpidos y algunos esteroides, as como el transporte intracelular. Se encuentra en la clula animal y vegetal pero no en la clula procariota. Es un orgnulo encargado de la sntesis y el transporte de las protenas.

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10. Con respecto al RE: a) En cuntos y cules tipos se divide? R: se divide en dos categoras muy amplias: retculo endoplsmico rugoso (RER) y retculo endoplsmico liso (REL). b) Cul es la diferencia morfolgica entre el (REL) y el (RER)? R: El RER consta de la presencia de ribosomas unidos en el. El RER aparece como un organelo membranoso extenso compuesto principalmente de sacos aplanados (cisternas) separados por un espacio citoslico. El REL no tiene ribosomas unidos. Los elementos membranosos del REL son tpicamente tubulares y forman un sistema interconectado de tuberas que se incurvan a travs del citoplasma en el cual se presentan. c) Cul es la forma de los sculos membranosos del REL y del RER? R: El RER aparece como un organelo membranoso extenso compuesto principalmente de sacos aplanados (cisternas) separados por un espacio citoslico. El REL no tiene ribosomas unidos. Los elementos membranosos del REL son tpicamente tubulares y forman un sistema interconectado de tuberas que se incurvan a travs del citoplasma en el cual se presentan. d) Qu tipo de microsomas se forman a partir del REL y RER cuando las clulas son homogenizadas? R: Cuando las clulas son homogeneizadas, los fragmentos REL forman vesculas de superficie lisa, en tanto que las vesculas formadas por fragmentos RER son de superficie rugosa e) Qu tipo de clulas son especialmente ricas en RER? R: Las clulas que secretan gran cantidad de protenas, como las del pncreas o de las glndulas salivales/ poseen extensas regiones de RER. 11. Menciona las funciones del REL.

R: Sntesis de hormonas esteroides, desintoxicacin en el hgado de compuestos organicos (barbitricos y etanol), liberacin de glucosa a partir de la glucosa 6-fosfato en clulas hepticas, secuestro de iones calcio dentro del espacio cisternal. En gnadas y corteza suprarrenal realizan la sntesis de hormonas esteroides. En el hgado destoxifican varios tipos de compuestos orgnicos como barbitricos o etanol. Liberacin de glucosa a partir de glucosa 6-fosfato va glucosa 6-fosfatasa. Tambin secuestran los iones calcio (Ca2+) y lo liberan regularmente en algunas clulas (retculo sarcoplasmtico de las clulas musculares) Tiene como funcin la sntesis de lpidos. 12. Dnde se localiza el citocromo P-450 y cul es su funcin? R: se localiza en el hgado. Tienen capacidad de oxidar miles de diferentes compuestos hidrfobos y convertirlos en sustancias ms hidrfilas y ms fciles de excretar. 13. Qu importancia tiene la glucosa-6-fosfatasa? R: En tanto el azcar permanezca en estado fosforilado, no puede dejar la clula heptica; la membrana plasmtica es impermeable a los azcares fosfato. La glucosa-6-fosfatasa de las membranas REL elimina el grupo fosfato y genera molculas de glucosa que finalmente se desplazan hacia la corriente sangunea, donde se transportan a los tejidos del cuerpo. 14. En qu tipo de clulas se efectuaron las primeras investigaciones acerca de la funcin del RER? R: se efectuaron en clulas que secretan gran cantidad de protenas, como las clulas acinares del pncreas o las clulas secretorias de moco del revestimiento del conducto digestivo. 15. Qu tipo de protenas se sintetizan en ribosomas unidos al RER? R: a) protenas secretadas por la clula; b) protenas integrales de membrana, y c) protenas de ciertos organelos, incluyendo complejo de Golgi, lisosomas, endosomas y vacuolas de plantas. 16. Cules son los destinos de las protenas que se forman en ribosomas libres (no unidos al RER)? R: a) protenas destinadas a permanecer en el citoplasma (como las enzimas glucolticas o las protenas del citoesqueleto); b) protenas perifricas de la superficie interna de la membrana plasmtica (como espectrinas y anquirinas, que slo se unen dbilmente a la superficie de la membrana), y c) protenas que normalmente se encuentran en corpsculos microscpicos, cloroplastos y mitocondrias. 17. Cmo puede la clula distinguir entre los RNAm que deben ser traducidos en ribosomas unidos al RER, de los RNAm que deben ser traducidos por ribosomas libres? R: depende de la informacin contenida en la porcin N terminal del polipptido, que es la primera parte que surge del ribosoma durante la sntesis de protena. Sugirieron que las protenas secretorias contienen una secuencia de seales especial en el N terminal que provoca la unin del ribosoma con una membrana del RE y el desplazamiento del polipptido naciente al interior del espacio cisternal del RE. Esta hiptesis, conocida como hiptesis de la seal. 18. Qu explica la hiptesis de la seal? R: 19. Quines y en qu ao propusieron la hiptesis de la seal? R: Gunter Blobel, Bernhad Dobberstein y David Sabatini en 1971 20. Explica cmo ocurre la sntesis de protenas de secrecin y lisosomales segn la hiptesis de la seal utilizando la figura 8-9 del texto.

21. Para qu se requiere el GTP y su hidrlisis durante la sntesis de protenas sintetizadas en ribosomas adheridos al RER? R: La liberacin de la PRS de la secuencia de seales requiere el enlace de GTP a la protena enlazada a GTP, en tanto que la liberacin de la PRS del receptor de la PRS, que permite el inicio de la translocacin, requiere la hidrlisis del GTP enlazado.

22. Cul es la funcin de la peptidasa de la seal (seal peptidasa)? R: elimina la porcin N terminal que contiene el pptido

de seal mediante la peptidasa seal enzima

proteoltca. 23. Cul es la funcin de las proteindisulfuro isomerasa y de las chaperonas presentes en la luz del RER? R: La proteindisulfuro isomerasa cataliza la formacin y reordenamiento de enlaces disulfuro entre residuos de cistena de la cadena del polipptido. -Las Chaperonas como la BiP y la Calnexina reconocen y se unen con protenas no plegadas o mal plegadas y les dan su estructura tridimensional correcta. 24. Dnde ocurre la biosntesis de membrana? R: En el RE 25. En cul superficie del REL se localiza el sitio activo de las enzimas que participan en la sntesis de membrana? R: Las enzimas implicadas en la sntesis de fosfolpidos son protenas integrales de membrana del RE con sus sitios activos enfrentando al citoplasma. 26. Cul es la funcin de las flipasas? R: translocan activamente las molculas de los lpidos a travs de la bicapa. Mueven activamente ciertos fosfolpidos desde una capa de la membrana a la otra. Estas enzimas pueden participar en el establecimiento de la asimetra de los lpidos y tambin revertir la velocidad de los lentos movimientos pasivos que ocurren a travs de la membrana. 27. Qu factores participan para que las membranas de diferentes organelos posean una composicin lipdica notablemente diferentes? R: La mayor parte de los organelos poseen la capacidad de modificar los lpidos ya presentes en una membrana, convirtiendo un tipo de fosfolpido (como la fosfatidilseridina) en otro (p. ej., fosfatidilcolina o fosfatidiletanolamina). Cuando las vesculas se forman por gemacin de un compartimiento, algunos tipos de fosfolpidos pueden ser incluidos de manera preferencial en la membrana de la vescula en formacin, en tanto que otros tipos no se incluyen. Las clulas contienen protenas para intercambiar con fosfolpidos cuya funcin es transportar fosfolpidos especficos a travs del citoplasma acuoso de un tipo de compartimiento de membrana a otro. Estas enzimas pueden facilitar el desplazamiento de fosfolpidos especficos desde el RE a otros organelos, incluyendo mitocondrias y cloroplastos. 28. Explica cmo ocurre la sntesis de protenas integrales de membrana segn el esquema de la figura 8-11. R:

29. Con respecto a las protenas de membrana: a) Qu caractersticas tienen las secuencias para detener la transferencia (secuencias de alto)? R: las protenas integrales contienen uno o ms tramos de aminocidos hidrfobos que sirven como secuencia para detener la transferencia, las cuales impiden movimientos adicionales de la protena dentro de la cmara cisternal. Se ha postulado que la translocacin de la secuencia que detiene la transferencia en la protena que reviste el canal abre lateralmente dicho canal y permite que la parte hidrfoba del polipptido naciente penetre a la bicapa de lpidos. La figura 8-11 muestra la sntesis del tipo ms sencillo de protena integral, la que slo contiene un segmento transmembrana, cuyo N terminal se localiza en el lado cisternal de la membrana del RE y cuyo C terminal se encuentra en el lado citoplsmico. b) Qu son las isoformas? R: La misma protena puede aparecerse en dos versiones (isoformas), una soluble y la otra enlazada a la membrana. Estas protenas tienen la misma secuencia de seales y la misma secuencia primaria, excepto por la presencia de un tramo transmembrana hidrfobo en la protena de membrana, ausente en la forma soluble. Esta diferencia determina si la protena forma parte de la membrana o ser secretada al espacio extracelular. c) Qu diferencia hay entre una isoforma soluble de su correspondiente asociada a membrana? R: por la presencia de un tramo transmembrana hidrfobo en la protena de membrana, ausente en la forma soluble. Esta diferencia determina si la protena forma parte de la membrana o ser secretada al espacio extracelular. 30. Con respecto a la Glicosilacin de protenas: a) Cuntas formas de fijacin de cadenas de carbohidratos a protenas (glicosilacin) pueden ocurrir y cules son? R: 2 tipos: N-glicoprotenas y O-glicoprotenas. las cadenas de carbohidratos pueden fijarse a una protena mediante uniones N (al tomo de nitrgeno de un residuo asparagina) o uniones O (al tomo de oxgeno de un residuo serina o treonina [o un residuo hidroxicolina en la colgena]). b) En qu aminocidos ocurre la N-glicosilacin y en cules la O-glicosilacin? R: uniones N (al tomo de nitrgeno de un residuo asparagina) o uniones O (al tomo de oxgeno de un residuo serina o treonina [o un residuo hidroxicolina en la colgena]). c) Qu tipo de enzimas catalizan la formacin de oligosacridos? R: la enzima glicosiltransferasa. d) En qu molcula se forma primeramente el oligosacrido? R: dolicol fosfato e) Qu unidades aqumicas repetidas forman las molculas del dolicol? R: es una molcula hidrfoba construida con ms de 20 unidades isopreno. f) Cul es la funcin de la oligosacariltransferasa? R: os az cares se a aden a la molcula de dolicol fosfato una a la vez en el orden apropiado que indican las glucos transferasas enlazadas a la membrana. Cuando se une el glcido a la protena siempre lo hace por el extremo NH2- de la asparagina, ese proceso se realiza en un solo paso y la enzima que lo lleva a cabo es la oligosacaril transferasa que se encuentra en la membrana del RE. g) Qu partes del RE se conocen como elementos de transicin? R: La superficie del borde apical de las cisternas RER de ordinario es lisa, o sea, desprovista de ribosomas. Estas partes del RE se conocen como elementos de transicin, los cuales son sitios para formar el primer grupo de vesculas de transporte en la va biosinttica, vesculas que son dirigidas hacia el complejo de Golgi. 31. Quin y cundo se descubri el Complejo de Golgi? R: el bilogo italiano Camilo Golgi en 1898. Con respecto a la estructura del Complejo de Golgi. a) Qu elementos forman su estructura? R: tiene morfologa caracterstica que consiste en cisternas aplanadas, discoides, con rebordes amplios relacionados con vesculas y tbulos. Se divide en cuatro compartimientos funcionalmente distintos; las

cisternas cis, media y trans; y la red trans de Golgi (RTG) b) Cuntos sculos pueden formar un apilamiento? R: la pila de Golgi contiene menos de ocho cisternas.
c) Qu rango de tamao tienen los sculos? R: de 0.5 a 1.0 m d) Cuntas pilas de sculos pueden existir en una clula?

R: una clula individual puede contener desde unas cuantas hasta varios miles de pilas, segn el tipo de clula. e) Cules cisternas forman la regin cis y cules la regin trans? R: las ms prximas al RE se consideran en la cara cis, en tanto que las cisternas del extremo

opuesto de la pila se encuentran en la cara trans. Con respecto al Golgi: I. Cul regin se tie con osmio? R: el osmio impregna de manera preferencial la cara cis. II. Dnde se localiza la manosidasa II y cul es su funcin? R: se concentra en la cisterna meda, su funcin es eliminar los residuos de maosa. III. Dnde se localiza la Difosfatasa de mansido y cul es su funcin? R: desdobla dinucletidos (p. ej., UDP), luego que dona sus azcares se observa preferencialmente en la cara trans. g) Nombra las 4 secciones funcionales distintas del Golgi. R: las cisternas cis, media y trans; y la red trans de Golgi (RTG). f) 32. Para explicar el transporte de materiales a travs del complejo de Golgi se han propuesto dos hiptesis o modelos Cules son y en que consiste cada una de ellas? R: Modelo de maduracin de las cisternas: propone que cada cisterna cis "madura" para convertirse en una cisterna trans. Modelo de transferencia de materiales: sostiene que las cisternas de una pila de Golgi permanecen
en su sitio como entidades estables reunidas por un armazn de protenas. Los materiales se desplazan a travs de la pila de Golgi, desde la cara cis a la red trans de Golgi mediante vesculas formadas por gemacin de un compartimiento de la membrana que se fusionan con un compatimiento vecino. 33. Describe el experimento de James Rothman y Lelio Orci que apoya el modelo de transferencia de materiales en el Golgi a travs de vesculas. R: se prepararon dos muestras de fracciones de membrana derivadas del complejo de Golgi de clulas cultivadas de ovario de cobayo chino (OCC). Una fraccin ("fraccin donadora") se obtuvo de clulas infectadas con virus de la estomatitis vesicular, carecan de la enzima que transfiere el azcar Nacetilglucosamina transferasa. La otra fraccin ("fraccin aceptora") se obtuvo de clulas tipo nativo no infectadas que s contenan la enzima que transfiere el azcar. Cuando las dos fracciones se mezclaron con todos los factores solubles y tambin N-acetilglucosamina marcada con istopos radiactivos en las condiciones requeridas para la formacin y transferencia de vesculas, se observ aparicin de radiactividad en el dominio luminal de la protena VSV-G por adicin progresiva de N-acetilglucosamina. Esto slo puede ocurrir si las membranas donadoras que contienen VSV-G son transportadas a membranas aceptoras que contienen N-acetilglucosamina transferasa. Consideraremos ahora con mayor detalle el mecanismo de transporte de vesculas. 34. Cul es la funcin de la FAR (Factor de Adenosilacin de Ribosa)? R: participa en el proceso de reconocimiento entre la membrana vesicular y su objetivo especfico.