You are on page 1of 36

INTRODUCCIN

La costa de Sinaloa, Mxico se extiende por varios cientos de kilmetros en parte a lo largo del Ocano Pacfico y en otro parte a lo largo del golfo de California. La agricultura intensiva se practica en campos cerca de la costa; hay cerca de 32 diversos cultivos frutas, vegetales y cereales debido al clima adecuado y a las facilidades de irrigacin, lo cul hace que esto sea una actividad exitosa. La pesca y el cultivo de camarones tambin son muy importantes, en aguas ocenicas y lagunas costeras, pero su produccin ha estado disminuyendo recientemente. Reportes anteriores han divulgado la presencia de residuos de plaguicidas en estos hbitats acuticos y demandan que estos plaguicidas son los que se han usado para preservar las cosechas de parsitos e insectos que atacan los cultivos agrcolas y que representan un riesgo para el camarn y los peces que habitan estos ambientes (Rosales et al., 1985; Galindo et al., 1987; Galindo et al., 1992). Ensenada del Pabelln es un ecosistema costero situado en la costa del estado de Sinaloa, el cul se considera entre los ms productivos en la regin, con volmenes importantes de peces, moluscos bivalvos, y camarn peneido. Este ltimo es el recurso ms importante debido a su valor comercial en el mercado internacional. Este sistema lagunar, se encuentra rodeado por tierras extensas, en donde se practica la agricultura intensiva y cantidades considerables plaguicidas son aplicadas. Estudios anteriores han divulgado la presencia de residuos de plaguicidas en los ecosistemas acuticos, principalmente BHC, malatin, forato, metoxicloro y paratin (Banderas, 1994). Estos plaguicidas podan presentar un riesgo para el camarn. Tambin, reportes anteriores han demostrado que concentraciones subletales de algunos plaguicidas causan alteraciones fisiolgicas y bioqumicas (baja en enzimas tales como la AChE y las transaminasas GOT y GPT) en el camarn expuesto (Galindo-Reyes, et al., 1997; Galindo-Reyes, et al., 1996; Rosales, et al., 1985). Couch (1979), propone utilizar a los camarones peneidos como indicadores de salud de los ecosistemas estuarinos debido a su distribucin cosmopolita a travs de regiones templadas, subtropicales y tropicales. Se ha reportado que los camarones peneidos son en general bastante ms sensibles a los efectos txicos y ecolgicos de muchos contaminantes en comparacin con peces y

moluscos (Couch, 1978) y que, adems, son capaces de acumular contaminantes tanto en experimentos de exposicin en laboratorio como en campo. Litopenaeus vannamei es omnvoro epibentnico que desempea una importante funcin ecolgica y es el camarn de cultivo ms popular en este sistema lagunar (Galindo-Reyes, et al., 1997). En base a lo anterior surgi la necesidad de precisar el estado actual de contaminacin del sistema Lagunar Ensenada Pabelln y a travs de esta investigacin se busc detectar la presencia de los nuevos plaguicidas utilizados actualmente en los cultivos aledaos al Sistema y por otro lado revisar si an persisten restos de los plaguicidas de lenta descomposicin que se utilizaron en el pasado en el cultivo de algodn, cuyo uso actualmente ya est prohibido y que han sido reportados en estudios previos (GalindoReyes, et al., 1997; Galindo-Reyes, et al., 1996). Por otra parte, se pretendi generar registros que contribuyesen a las decisiones respecto a las acciones futuras para regular el uso de plaguicidas a lo largo de la cuenca de los ros y as poder reducir su efecto en el ecosistema. Queda claro que el monitoreo de los niveles de contaminacin en la Ensenada el Pabelln es de suma importancia porque en ella desembocan ros que a su paso arrastran plaguicidas que pueden afectar el medio natural de las especies que en ella habitan y el desarrollo del cultivo del camarn en dicha zona.

OBJETIVO
El objetivo de este estudio es determinar la concentracin de plaguicidas presentes en agua, sedimento y en camarn Litopenaeus vannamei (msculo) provenientes del sistema lagunar Ensenada del Pabelln, as como tambin medir la actividad acetilcolinesterasa (AChE) en msculo y hemolinfa de camarn como biomarcadores de la exposicin a plaguicidas y medir las actividades de catalasa (CAT), glutatin deshidrogenasa (GSH y GSSG), Glutatin transferasa (GST), Etoxirresorrufina-Odesetilasa (EROD) y Glutatin peroxidasa (GPX) en hepatopncreas de camarn como biomarcadores de Estrs Oxidativo.

MATERIALES Y MTODOS
rea de Estudio Ensenada del Pabelln es un ecosistema costero situado en la costa del estado de Sinaloa, dentro del golfo de California, de Mxico, entre los 24 20 latitud N y los 107 20 y 107 55 longitud O (Figura 1).

2 3 4 5 6

Punto de Muestreo

Figura 1. Ubicacin geogrfica del Sistema Lagunar Ensenada del Pabelln.

Este sistema esta localizado en una regin semirida y subhmeda, con una temperatura anual promedio de 24 C. Hay dos estaciones: la estacin de secas de Noviembre a Junio y la estacin de lluvias de fines de Julio a Octubre. La precipitacin

anual promedio es aproximadamente 653 mm con un 75 % de la precipitacin ocurriendo en Julio, Agosto y Septiembre (INEGI, 1992). Fisiogrficamente, el cuerpo lagunar principal es de forma alargada y relativamente estrecha, con su eje mayor paralelo a la costa. Con una extensin de 360 Km 2, es una laguna costera somera que comunica al mar a travs de dos bocas, una permanente y otra temporalmente abierta. La laguna Ensenada Pabelln abarca 13,400 Ha, longitud de 28 Km, ancho mximo de 13 Km con valor medio de 10 Km y profundidad de1.5 Km (Gonzlez-Valdivia, 2008). Ensenada del Pabelln es un ecosistema que posee una gran variedad de hbitats incluyendo bosques de manglares, pantanos, lagunas de agua dulce y sistemas de agua salada. Este sistema lagunar tambin posee una gran diversidad biolgica, por ejemplo mangles, algas, bacterias, esponjas, moluscos (ostras, caracoles y almejas) crustceos (camarones y cangrejos), peces, tortugas, delfines y aves marinas. Desde el punto de vista ecolgico estas reas son adems muy importantes, por su funcin como vivero de una gran variedad de especies incluyendo algunas en peligro de extincin por ej. tortugas marinas y cocodrilos, por mencionar algunos (Flores-Verdugo, 1990). Colecta de la Muestra Se realiz una colecta de muestra de agua, sedimento y organismos 2 veces por mes durante un ao (Noviembre de 2009 a Octubre de 2010), con la finalidad de que se abarque la temporada tanto de secas como de lluvias dando un total de 24 repeticiones por punto de muestreo. Los puntos de muestreos se seleccionaron a lo largo de toda la zona del sistema lagunar buscando de preferencia que se encontraran cerca de lugares con actividad agrcola, de escorrentas naturales (ros, arroyos, canales, etc.) o descargas agrcolas que desembocan en el sistema; con estas consideraciones, se eligieron un total de seis puntos (Figura 1). Las muestras de agua se colectaron en botellas de vidrio color mbar debidamente identificadas (nombre del colector, fecha, hora y sitio de coleccin). La muestra se colect a contracorriente a una profundidad intermedia entre la superficie y el fondo del lecho segn lo estipulado en la gua de toma de muestras para residuos de plaguicidas por Mejas y Jerez en 2006 (Figura 2). El tamao de la muestra fue de un litro y otro adicional para mantenerse como reserva. Una vez extradas las muestras se conservaron en hielo durante el transporte (<6 horas), y se almacenaron a 4 C en el laboratorio de cromatografa del Centro de Investigacin en Alimentacin y Desarrollo,

A.C. (CIAD) Unidad Mazatln donde se realiz la extraccin de los plaguicidas antes de 48 horas.

Figura 2. Procedimiento de la toma de muestra de agua.

En el caso del sedimentos, el muestreo se realiz ubicando lentamente el muestreador sobre el sedimento, luego se empuj hacia abajo de manera vertical hasta alcanzar la profundidad deseada. Cuidadosamente se retir y extrajo el cilindro, poniendo de inmediato la tapa en ambos lados para evitar prdida de la muestra (Figura 3). El cilindro que contiene la muestra se introdujo en un envase de tefln o de vidrio, y fue transferido a la hielera para mantenerlo a 4 C durante su transporte al laboratorio de cromatografa en CIAD, Unidad Mazatln. Se requieren tres o cuatro submuestras en cada punto para obtener inferencias estadsticas vlidas (Mejas y Jerez, 2006). En la etiqueta debe incluirse el nombre del sitio de muestreo, fecha, profundidad de muestreo y nombre del colector.

Figura 3. Muestreo superficial de sedimentos utilizando un muestreador tipo van Veen Grab.

El camarn blanco (Litopenaeus vannamei) fue capturado en el sistema Lagunar Ensenada de Pabelln mediante el uso de atarraya, los organismos capturados tuvieron un peso de 10.5 1.2 cm y pesaron 12.3 1.1 g, se identificaron como juveniles y en estado de intermuda. Se seleccionaron 50 organismos al azar en cada punto de muestreo a 10 de los cuales se les extrajo 150 L de hemolinfa usando una microjeringa colocndola en tubos eppendorf de 1.5 mL y se mantuvieron en hielo seco a 4 C para su transporte al Laboratorio de Ecotoxicologa del CIAD, Unidad Mazatln, para el anlisis de las actividades enzimticas de AChE. En el caso de las actividades enzimticas de CAT, GSH, GSSG, GST, EROD y GPX sern determinadas en el hepatopncreas el cual ser extrado de 20 camarones colocado en tubos eppendorf y congelado en nitrgeno lquido para su transporte al Laboratorio de Ecotoxicologa en CIAD, Mazatln, donde se mantendr a -80 C hasta su anlisis. Los otros 40 organismos fueron sacrificados y se les diseco parte del msculo (1 g/cada organismo) para formar una muestra compuesta, finalmente la muestra compuesta se coloc en aluminio para el anlisis de plaguicidas manteniendo las muestras a 4 C durante su transporte al Laboratorio de Cromatografa del CIAD, Unidad Mazatln. Se colectaron camarones vivos de un cultivo de camarn que se encontraran dentro del mismo rango de peso y medida, en una laguna costera situada en el sur de Sinaloa, Escuinapa de Hidalgo (Figura 4). Este cuerpo de agua fue elegido para usarse como punto control porque residuos de plaguicidas no han sido detectados en esta rea (datos no publicados). Los especmenes fueron mantenidos 1 semana para la aclimatacin en los acuarios del laboratorio suministrados con agua de mar filtrada. La temperatura y la salinidad fueron controladas mantenindolas iguales que las de su granja original: 26 C 1 y 35 1 PPM. Durante este perodo, los camarones fueron alimentados (3-5 % su peso hmedo/da) con un alimento comercial, hasta su posterior anlisis (plaguicidas y actividades enzimticas). A su vez tambin se tomaron muestras de agua y de sedimento para ser utilizadas como control.

Figura 4. Localizacin de la laguna costera de Escuinapa de Hidalgo, sur de Sinaloa, Mxico.

Las fechas en que se colectaron las muestras de agua, sedimento y camarn (msculo y hemolinfa) se observan a continuacin en el cuadro 1.

Determinacin de los plaguicidas en las muestras: Para seleccionar los plaguicidas a ser analizados se realiz un estudio de los plaguicidas utilizados en la zona, tanto actualmente como histricamente, para lo que se dise una encuesta (Anexo 1), se levant la informacin en campo y luego se realiz la tabulacin y anlisis de los datos. Dicho estudio identific las familias de agroqumicos y las cantidades que las personas de las comunidades aledaas a la zona de estudio utilizan en sus actividades agrcolas.

Cuadro 1. Cronograma de toma de muestra. Mes Ao Nmero de muestreo 1 Noviembre Diciembre 2009 2009 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 Fecha 12/11/2009 29/11/2009 04/12/2009 21/12/2009 03/01/2010 23/01/2010 02/02/2010 25/02/2010 04/03/2010 29/03/2010 11/04/2010 30/04/2010 06/05/2010 27/05/2010 13/06/2010 29/06/2010 14/07/2010 28/07/2010 09/08/2010 27/08/2010 08//09/2010 25/09/2010 07/10/2010 26/10/2010

Enero

2010

Febrero

2010

Marzo

2010

Abril

2010

Mayo

2010

Junio

2010

Julio

2010

Agosto

2010

Septiembre

2010

Octubre

2010

En base a lo anterior los pesticidas seleccionados para ser analizados fueron los siguientes: ORGANOCLORADOS: Lindano (-HCH), op-DDE, pp-DDE, op-DDT, pp-DDT, op-DDD, pp-DDD, Aldrin, heptacloro, BHC (alfa y beta), metoxicloro, Hexaclorobenceno (HCB), captn, Endosulfn (alfa, beta y sulfato), clorotalonil, triadiemefn, clordano (cis-, trans-, oxy-), dieldrin y endrin. ORGANOFOSFORADOS: Ometoate, Diazinn, Dimetoate, clorpirifos etil, clorpirifos metil, malatin, paratin metlico, etin, carbofenotin, gutin, metamidofos, cadusafos y fenitrotin. ORGANONITROGENADOS: Ciromazina, metalaxil, cimoxanil, oxadixil, fenpropatrin, carbaril, carbofurn, pirimicarb, promecarb, piriproxifen, propamocarb y trifloxystrobin. PIRETROIDES SINTTICOS: Permetrina (cis- y trans-), Cipermetrina (cis- y trans-), Esfenvalerato, Ciflutrin, Lambda Cialotrina y Deltametrina. Equipos: Cromatgrafos de gases (VARIAN), rotaevaporadores (BCHI), licuadora a prueba de explosin (WARING BLENDER), balanza granataria (OHAUS), balanza analtica (AND) y material de vidrio requerido. Materiales de referencia: Los materiales de referencia usados fueron de calidad analtica y pureza certificada (>99%), los cuales fueron surtidos por CHEM SERVICE, se asegur la renovacin peridica de los mismos y su conservacin a temperatura abajo de 0 C y libre de humedad. En lo que se refiere a los solventes que se usaron fueron de calidad grado plaguicida (Honeywell).

Extraccin de Plaguicidas en las Muestras de Agua

Preparacin de la Muestra: Se filtr la muestra de agua a travs de un papel filtro, para eliminar slidos solubles suspendidos. Se agreg 50 mL de solucin amortiguadora de fosfatos a 2 M y se ajust pH a 7 en un potencimetro Daigger usando HCl 0.1 M o NaOH 0.1 M (EPA 507, 1995; EPA 508, 1995).

Extraccin de los Plaguicidas: Se realiz una extraccin lquido-lquido, se coloc la muestra en un embudo de separacin de 2 L, se aadieron 150 g de cloruro de sodio y se agit hasta disolver, se realizaron 3 extracciones con 60 mL de cloruro de metileno, recolectando un volumen final de 180 mL. En cada una de las extracciones se agit durante 2 minutos, dejando reposar 10 minutos como mnimo hasta la separacin de las fases, finalmente se filtr el extracto orgnico a travs de sulfato de sodio anhidro y se colect en un Kuderna danish de 500 mL unido a un tubo concentrador de 10 mL (EPA 507, 1995; EPA 508, 1995). Reconcentracin de los Plaguicidas: El extracto de la muestra se evapor en un bao de vapor de anillos concntricos a una temperatura de 95 5 C, y se reconcentr usando 150 mL de ter de petrleo, seguido de 30 mL de acetona, se dej el extracto final a 2 mL de acetona (EPA 507, 1995; EPA 508, 1995).

Extraccin de Plaguicidas en las Muestras de Sedimento


Preparacin de la Muestra: Las muestras fueron congeladas en seco a 0 C durante 36 h en un liofilizador Labconco. Despus, se trituraron las muestras en un mortero, y se cribaron a travs de 100 M para obtener un sedimento de material homogneo. Las muestras, se pusieron a -20 C hasta su anlisis (Villaverde, 2008). Extraccin de los Plaguicidas: Se pes 10 0.2 g de muestra analtica en vaso de licuadora y se agregaron 350mL de una solucin de extraccin agua-acetona al 35% (v/v), se licu por dos minutos a alta velocidad y se filtr con vaco en embudo de porcelana bchner con papel filtro previamente acondicionado con acetona grado plaguicida (Luke y Doose, 1983). Particin: Se tom una alcuota de 40 mL del filtrado y se transfiri a un embudo de separacin de 1 L, conteniendo 7 g de cloruro de sodio, se agregaron 50 mL de cloruro de metileno y 50 mL de acetona, se agit vigorosamente por 1 minuto. Se dejaron separar la capa acuosa (capa inferior) de la capa orgnica (capa superior), se dren la capa acuosa a un embudo de separacin de 500 mL. Se filtr la capa orgnica a travs de un embudo de vidrio conteniendo 70 g de sulfato de sodio anhidro y se colect el filtrado en un matraz kuderna danish, se agregaron 50 mL de cloruro de metileno a la fase acuosa y se agit vigorosamente por 1 minuto, se dejaron separar las capas, se filtr la capa orgnica (capa inferior) a travs del embudo de vidrio con sulfato de sodio, se agregaron 50 mL de cloruro de metileno a la capa acuosa y se agit vigorosamente

por un minuto, se dejaron separar las capas, se dren la capa orgnica a travs de sulfato de sodio, y por ltimo se enjuag el embudo de sulfato de sodio con 30 mL de cloruro de metileno. Se agregaron 2 perlas de calentamiento al matraz kuderna para controlar la ebullicin (Luke y Doose, 1983). Reconcentracin de los Plaguicidas: El extracto de la muestra se evapor en un bao de vapor de anillos concntricos a una temperatura de 95 5 C, y se reconcentr usando 150 mL de ter de petrleo, seguido de 30 mL de acetona, se dej el extracto final a 2 mL de acetona (EPA 507, 1995; EPA 508, 1995). Eliminacin de Azufre: El extracto se coloc en un vaso de precipitado con 5 g de cobre previamente activado (con acido ntrico al 20%), se sonic por 5 min, y se pas por un embudo con sulfato de sodio anhidro granular, se enjuag con 30 mL de acetona y posteriormente se evapor a sequedad con nitrgeno y finalmente se resuspendi en 2 mL de hexano.

Extraccin de Plaguicidas en las Muestras de Tejido (msculo de camarn)


Preparacin de la Muestra: Las muestras fueron molidas hasta homogenizar como lo indica PAM 102-A (PAM, 1994). Extraccin de los Plaguicidas: Se colocaron en un vaso de licuadora (Waring, Modelo 7010) 50 0.2 g de la muestra preparada de acuerdo a PAM 102-A, se agregaron 25 mL agua destilada y se dejaron reposar 5 min. A continuacin se le agregaron 10 mL de solucin amortiguadora de fosfatos (fosfato monobsico y fosfato dibsico 2M, pH 7) y 100 mL de acetonitrilo, se licu por 2 min a alta velocidad. Se filtr al vaco usando un embudo bchner con filtro de papel watman # 41 acondicionado con 10 mL de acetonitrilo colectando el filtrado en matraz kitazato. En un frasco se colocaron 10 g de NaCl y se agreg el filtrado, se agit para disolver y despus se agit vigorosamente por 1 min. Se pas a una probeta de 250 mL y se dej reposar por 30 minutos para separar la fase acuosa de la orgnica (Lee et al., 1991). Reconcentracin de los Plaguicidas: Se tom una alcuota de 20 mL de la capa orgnica y se filtraron en sulfato de sodio anhidro en un embudo de vidrio, se lavo el sulfato con 5 mL de acetonitrilo, todo el filtrado se colecto en un matraz bola de 50 mL. Se evapor a sequedad en un rotaevapordor con vaco moderado y una temperatura de 40C, el residuo se redisolvi en 2 mL de hexano.

Determinacin de lpidos: Para llevar a cabo la determinacin del contenido de lpidos se procedi a extraerlos del tejido muscular mediante la tcnica de Schmidt (1995). Primero se homogeniz el tejido completo para posteriormente tomar 1g del homogenizado, el cual se coloc dentro de un mortero, se agregaron 7g de sulfato de sodio anhidro y se mezclaron con el tejido hasta que ste se encontr totalmente seco y sin grumos. Posteriormente, la muestra se sec en un horno a 60C durante media hora, despus se retir del horno y se esper 10 min en un desecador para proceder a pesarla y obtener as el peso seco del tejido. La muestra seca se coloc en una columna de vidrio a la cual previamente se le coloc un tapn de fibra de vidrio procurando que la muestra quedara bien empacada. Se agregaron 1.5 mL de ter de petrleo asegurndose de remover las burbujas de aire, esto se repiti dos veces acondicionando as la columna. En seguida se procedi a eluir la columna con 5 mL de mezcla ter de petrleo/acetato de etilo (9:1 v/v) manteniendo el goteo a un flujo de 1-2 mL/min y la fraccin eluida se recolect en un crisol a peso constante. Esta operacin se repiti una vez ms, en esta ocasin se dej drenar la columna y se procedi a lavar con 2 mL de acetato de etilo por dos ocasiones. Todas las fracciones se combinaron en el mismo crisol. Los crisoles se introdujeron en el horno a 100 C durante 2 horas para evaporar el solvente y se pesaron en una balanza analtica. Se volvieron a introducir en el horno durante 1 hora y se pesaron de nuevo hasta obtener peso constante o una diferencia de 0.0001 g. El porcentaje de lpido extrable se calcula utilizando la siguiente frmula: % Lpidos = 100 x (1- peso residual de lpidos)

Identificacin y Cuantificacin de Plaguicidas en las Muestras de Agua, Sedimento y Tejido (msculo de camarn)
En todos los casos el reconcentrado se dividi en dos alcuotas de 1 mL a una se le realiz una limpieza segn lo indicado en Manual Analtico de Plaguicidas (PAM, por sus siglas en ingls) de la Administracin de Drogas y Alimentos (FDA, por sus siglas en ingls), en la seccin 302-C1 (Anexo 2) y se inyect 1 L de muestra en el Cromatgrafo de Gases con detector de captura de electrones (ECD) para determinar

los compuestos organoclorados y piretroides sintticos y 1 L en el detector de conductividad electroltica (ELCD) para confirmar la presencia de los contaminantes; mientras que de la otra alcuota se inyect directamente 2 L de muestra en el Cromatgrafo de Gases con detector fotomtrico de flama pulsada (PFPD) para determinar los compuestos organonitrogenados y organofosforados, y 2 L en el detector termoinico especfico (TSD) para confirmar la presencia de los plaguicidas. Para la identificacin de los compuestos se compararon los cromatogramas obtenidos en las muestras con cada una de las mezclas de estndares a identificar. Todas las sustancias identificadas se confirmarn con la inyeccin de los extractos en dos columnas con polaridad diferente y al menos en un detector diferente (mismas que no debern producir desviaciones en los tiempos de retencin mayores al 30 %), para ver caractersticas de las corridas cromatogrficas ver Anexo 3. El mtodo de cuantificacin que se utiliz fue el de estndar externo (PAM, 1994) (seccin 3.5.2).

Control de Calidad de los Mtodos Analticos


En cada uno de los mtodos se siguieron los procedimientos para asegurar un control de calidad y validar las determinaciones analticas del laboratorio basadas en lo enmarcado por la USEPA, 1995 las cuales fueron las siguientes: 1) Determinacin de la recuperacin del estndar interno (clorpirifos metil es usado, por poder ser detectado en todos los sistemas) en cada set de muestras, 2) monitoreo del rea o altura de los estndares, 3) inclusin de blancos de reactivos y 4) utilizacin de muestras fortificadas en el laboratorio y muestras de referencia a diferentes concentraciones para evaluar la capacidad inicial y su recuperacin. Los lmites de deteccin para los plaguicidas analizados tuvieron una variacin de 0.0002 a 0.0046 mg/kg, 0.00352 a 0.0146 mg/kg y 0.0006 a 0.00140 mg/L, para sedimento, tejido y agua, respectivamente. Determinacin de las actividades enzimticas en las muestras: Las muestras preservadas de msculo y hemolinfa de camarn fueron utilizadas para determinar la actividad de Acetilcolinesterasa y el hepatopncreas fue descongelado y utilizado para la determinacin de las actividades de catalasa (CAT), glutatin deshidrogenasa (GSH y GSSG), Glutatin transferasa (GST), Etoxirresorrufina-O-desetilasa (EROD) y Glutatin peroxidasa (GPX).

Determinacin de Actividad Acetilcolinesterasa

La determinacin de AChE en msculo y hemolinfa de camarn fue hecha siguiendo el procedimiento propuesto por Ellman et al., 1961 el cual emplea el sustrato anlogo Acetiltiocolina; y la liberacin de tiocolina por la accin de la enzima es medida seguida de la reaccin con el cido 5.5'-ditiobis-2-nitrobenzoico (DTNB) para formar el anin de cido tionitrobenzoico, dando un color amarillo como resultado. Esta reaccin de color se mide espectrofotomtricamente a 412 nm y la actividad de AChE se obtiene relacionando los cambios de la absorbancia de las muestras con la actividad especifica/minuto/mg de protena total. A continuacin se presenta la reaccin que se lleva a cabo (Ellman et al., 1961):

AChE Yoduro de Acetilcolina Tiocolina + Acetato cido tionitrobenzoico (Color amarillo)

Tiocolina + DTNB

Esquema 1. Reaccin de Ellman para la medicin de actividad de Acetilcolinesterasa (Ellman et al., 1961). Determinacin de la concentracin de protena en msculo y hemolinfa: Se determin por el mtodo Bradford (1976) con seroalbmina bovina como patrn.

Determinacin de Actividad Enzimtica de CAT, GSH, GSSG, GST, EROD y GPX

Preparacin de la muestra: Las muestras de hepatopncreas de camarn se pesaron y homogeneizaron con un homogeneizador Ultraturrex, en tampn 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 que contena 1 mM EDTA, a razn de 4 mL/g. La rotura se realiz en tres periodos de 30 s separados por intervalos de 30 s en hielo, se centrifug 20 min a 9000 g para eliminar los restos celulares gruesos y la capa de grasa. Los sobrenadantes fueron ultracentrifugados 1 h a 105000 g. Las fracciones fueron distribuidas en alcuotas y almacenadas a 80 C hasta su anlisis. Determinacin de glutatin (GSH y GSSG): Las muestras de hepatopncreas de camarn se pesaron y homogeneizaron usando un Potter-Elvehjem con pistn de tefln

en 0,25 M cido perclrico, a razn de 10 mL/g de tejido. Los homogeneizados se centrifugaron 4 min a 28000 g, y los sobrenadantes se filtraron (filtro de 0.2 m) y se analizaron mediante HPLC. El contenido de glutatin se determin por HPLC con deteccin electroqumica. Para determinar las formas solubles de glutatin reducido (GSH) y oxidado (GSSG), se utiliz un sistema de HPLC (Hewlett Packard 1100, Waldbronn, Alemania), con una columna de fase reversa Supelcosil LC-18 (0,46 25 cm, partculas 5 m; Supelco, Bellefonte, PA, USA). La fase mvil fue 0.15 M fosfato sdico, pH 2.0, que contena 1% metanol (GSH) 2 % metanol (GSSG) y el flujo isocrtico de 1 mL/min. Se utiliz un detector electroqumico Coulochem II (ESA, Bedford, MA, EEUU) con una clula analtica 5010 y una guarda clula 5020 con los siguientes potenciales: para GSH, guarda clula 0.9 V, detector 0.8 V; para GSSG, guarda clula 1.1 V, detector 1.025 V. La escala completa fue de 50 A para GSH y de 1 A para GSSG. Las reas de los picos se analizaron con el software Beckman System Gold. El estado redox del glutatin se expres como el cociente 2 GSSG/ GSH (Ruiz-Laguna et al., 2001). Determinacin de Catalasa: La actividad se ensay espectrofotomtricamente (Beckman DU 650), a 30 C, midiendo la disminucin de absorbancia a 240 nm ( = 43,6 mM-1 cm-1) debida a la desaparicin del perxido de hidrgeno, segn la reaccin: 2 H2O2 2 H2O + O2 La mezcla de reaccin contena 17 mM tampn fosfato potsico, pH 7, 20 mM H2O2 y 20 L de extracto citoslico, en un volumen final de 1 mL. La reaccin se midi 1 min a intervalos de 10 seg, integrando la pendiente observada. Como inhibidor especfico de la catalasa se emple 1 mM azida sdica (Beers and Sizer, 1952). Determinacin de la Glutatin Peroxidasa: El GSSG, generado por la reaccin catalizada por la glutatin peroxidasa (GPX), es reducido a GSH por un exceso de actividad glutatin reductasa, segn la reaccin: GPX R-OOH + 2 GSH R-OH + GSSG + H2O GR GSSG + NADPH + H+ 2 GSH + NADP+

R-OOH + NADPH + H+ R-OH + NADP+ + H2O La actividad GPX se determin espectrofotomtricamente a 37 C midiendo el descenso de absorbancia a 340 nm ( = 6,22 mM-1 cm-1) debida a la oxidacin del NADPH. La mezcla de reaccin contena 55 mM tampn fosfato potsico, pH 7,0, 1 mM EDTA, 0,24 Ude glutatin reductasa de levadura, 1 mM GSH, 0,15 mM NADPH, 2 mM hidroperxido de cumeno y 20 l de extracto citoslico en un volumen final de 1 ml. Antes de aadir el NADPH y del perxido, la muestra se incub 5 min a 37 C para activar la peroxidasa. La oxidasa independiente de perxido se determin tras aadir NADPH, restndose de la obtenida en presencia del perxido para determinar la actividad peroxidasa neta. La reaccin se midi 5 min a intervalos de 30 seg integrando la pendiente observada entre 0.5 y 5 minutos (Floh and Gnzler, 1984). . Determinacin de Glutatin Transferasa: La actividad se espectrofotomtricamente a 30 C, siguiendo el aumento de absorbancia a 340 nm ( = 9,6 mM -1 cm-1), correspondiente a la formacin de un complejo entre el glutatin reducido (GSH) y el 1cloro-2,4-dinitrobenceno (CDNB), segn la reaccin: GSH + CDNB CDNB-SG + HCl La mezcla de reaccin contena 0,2 M tampn fosfato potsico, pH 6,5, 2 mM GSH, 2 mM CDNB, y 20 L de extracto citoslico en un volumen final de 1 ml. Tras incubar 2 min a temperatura ambiente la reaccin se inici aadiendo 20 l de 100 mM CDNB. La reaccin se midi 2 min a intervalos de 12 seg, integrando la pendiente observada (Habig et al., 1974). Determinacin de la Etoxirresorrufina-O-desetilasa (EROD): El ensayo se basa en la desetilacin de la 7-etoxirresorrufina segn la reaccin:

La actividad EROD se determin fluorimtricamente (Perkin Elmer, modelo LS 50B) a 530 nm de de excitacin y 585 nm de emisin. La mezcla de ensayo contena 96 mM Tris-HCl, pH 7,8, 3,32 M 7-etoxirresorufina, y 20 L de preparacin microsomal, en 1 mL de volumen final. La reaccin se inici aadiendo 10 L de 0,2 mM NADPH y

se incub 60 min a 30 C, pasado lo cual las muestras se metieron en hielo deteniendo la reaccin. La actividad se midi como nanomoles de resorufina producidos en 3600 segundos. La cuantificacin absoluta se realiz usando resorufina como patrn (Fernandes et al., 2002). .

Anlisis Estadsticos

En el caso de la concentracin de plaguicidas se representaron como la media de los datos desviacin estndar de 5 repeticiones de las muestras analizadas se representan posteriormente se realiz una prueba de ANOVA con p< 0.05. Todos los experimentos de actividades enzimticas fueron realizados por triplicado y los anlisis estadsticos fueron realizados con una prueba ANOVA con p< 0.05. La significacin estadstica de los resultados se ensay por el test Dunnett o el test Bonferroni segn se indica en cada caso. La correspondencia entre variables biolgicas y contaminantes se analiz mediante correlacin de Pearson. Todas las pruebas estadsticas se analizaron con un 5% de confianza usando el software MINITAB versin 15. Previamente, se comprob la normalidad de los datos y la homogeneidad de varianza.

RESULTADOS Y DISCUSIN

Imaginando un escenario de contaminacin de lo ms deplorable:

CONCENTRACIN DE PLAGUICIDAS EN SEDIMENTO, AGUA Y CAMARN

Se detect la presencia de pp DDT en ms del 80% de las muestras de sedimento siendo la concentracin ms alta encontrada la de 6.2084 ng/g, y la ms baja de 0.478685 ng/g, teniendo como promedio 1.755441 ng/g, el pp DDE (metabolito de degradacin del DDT) en cambio, apareci en el 100% de las muestras de sedimento la

concentracin vari de 0.783818 ng/g a 35.955931 ng/g, con un promedio de 9.545934 ng/g, el pp DDD (otro metabolito de degradacin del DDT) apareci en el 85% de las muestras con rangos de 0.4774229 a 9.106858 ng/g con un promedio de 2.4923248 ng/g, estos resultados coinciden en cuanto a frecuencia con los obtenidos por Gonzlez-Valdivia en (2008) que detect pp DDT en un 50%, pp DDE un 90% , y pp DDD en un 95% de muestras de sedimento analizadas provenientes de granjas de camarn cercanas al sistema lagunar Ensenada de Pabelln. Otros plaguicidas organoclorados que aparecieron con menor frecuencia fueron BHC alpha y BHC beta que slo fueron encontrados en una sola muestra con concentraciones de 0.283181 y 0.669645 ng/g respectivamente. Chlorpyrifos fue el nico plaguicida organofosforado detectado en las muestras de sedimento, estuvo presente en el 12% de las muestras, con una concentracin que estuvo en el rango de 0.601 a 1.074 ng/g y un promedio de 0.833 ng/g.

El cuadro 2 muestra las concentraciones promedio de los compuestos detectados (hipteticas), cabe mencionar que en el caso de sedimento todas las concentraciones detectadas correspondieron al punto 1 (los dems puntos mostraron slo niveles trazas de algunos plaguicidas por lo cul no se reportaron) que es donde se ubica la desembocadura del Ro Culiacn, en el cul desembocan canales y drenes agrcolas por lo que arrastra residuos de plaguicidas que llegan al sistema lagunar y que pueden afectar la salud de la flora y fauna que se desarrolla en este ecosistema, las concentraciones detectadas en el caso del DDT y sus metabolitos, son indicativos de contaminacin antropognica ya que este compuesto tuvo un amplio uso no slo en la agricultura si no que tambin se uso mucho en control de vectores de enfermedades, esto y aunado a sus propiedades fsico-qumicas que le permiten permanecer en el ambientes por muchos aos hacen que se presente de manera ubicua en el ambiente y se ha comprobado que genera dao an en pequeas concentraciones tales como adelgazamiento de la cscara del huevo en aves y efectos cancergenos (RiveroRodrguez et al., 1997).

Cuadro 2: relacin de muestreos, plaguicidas detectados en sedimento y sus concentraciones en ng/g.


Muestreo 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 Promedio Mximo Mnimo pp DDE 5,142518 11,791518 9,46 4,422167 16,014025 9,548008 7,036276 9,005544 11,791518 7,79693 30,973234 5,785969 3,163985 35,955931 14,880457 1,436533 0,783816 0,881561 4,569016 6,945016 3,0806 9,54593438 35,95591 0,783816 pp DDE 1,30488 3,6559124 2,61956 1,449789 4,24716 2,220537 1,4799 2,074927 2,12603 1,484091 6,574803 0,477429 ND 9,106858 1,734006 0,865953 ND ND 1,193573 1,415487 0,830951 2,4923248 9,106858 0,477429 pp DDT ND 1,500573 1,019473 0,78056 1,831943 0,754377 0,478645 0,560465 0,551465 1,835215 3,704795 ND ND 6,208478 1,839306 ND ND ND ND ND ND 1,75544125 6,208478 0,478645 BHC alfa ND ND ND ND ND 0,283181 ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND 0,283181 BCH beta ND ND ND ND ND 0,669645 ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND 0,669645 Clorpirifos 1,008632 ND ND 0,601949 ND 0,879066 0,702519 ND ND ND ND ND ND 1,07456 0,732983 ND ND ND ND ND ND 0,83328483 1,07456 0,601949

ND= No Detectado

Los contaminantes organoclorados son compuestos lipoflicos que al ingresar en el ambiente acutico pueden ser adsorbidos en el sedimento y partculas suspendidas, o ser incorporados a los organismos mediante las branquias o la piel por organismos

pequeos, por lo general plancton, invertebrados y peces para posteriormente ser ingeridos por organismos de mayor tamao como peces grandes y mamferos, esto explica la alta presencia de DDT y sus metabolitos en sedimento del sistema (Addison, 1982). Los resultados muestran la presencia de plaguicidas en el 81% de las muestras de agua analizadas (hipotticamente), de las cuales el 14.6% corresponde a muestras del punto 2, el 11.8% a muestras del punto 4 y el 73.6% a muestras del punto 1, se observa que al igual que en sedimentos el punto 1 resulta ser el ms contaminado quizs por las mismas razones mencionadas anteriormente. Los plaguicidas detectados en agua fueron lindano (0.001 - 0.012 gL-1), heptacloro (0.001 - 0.073 gL-1), endosulfn (0.001 - 0.156 gL-1), DDT (0.015 - 0.286 gL-1), diazinn (0.015 - 0.124 gL-1), clorpirifos etil (0.015 - 0.065 gL-1), permetrina (0.001 0.589 gL-1), paratin metlico (0.015 - 0.004 gL-1), ciromazina (0.01 - 0.196 gL-1), etin (0.015 - 0.0189 gL-1), carbofenotin (0.015 - 0.0099 gL-1), lambda cialotrina (0.001 - 0.0212 gL-1), pirimicarb (0.01 - 0.0772 gL-1), malatin (0.015 - 0.0087 gL1

) y aldrin (0.001 - 0.4622 gL-1) [Figura 5].

Figura 5. Frecuencia de los detectados muestras analizadas. El que endosulfn segn es de un los las plaguicidas en de las agua

organoclorado encuestas

realizadas

an se sigue usando ampliamente en el Valle Agrcola aledao a la zona de estudio, los ingredientes activos de los productos comerciales de este comopuesto consisten en una mezcla de dos isomeros, es decir, aproximadamente 67 y 32.5% de -endosulfn y endosulfn grado tcnico, respectivamente (Tomlin, 2002). En suelo y agua, el tiempo de degradacin (DT50) para la prdida de la mitad de la cantidad original del endosulfn es aproximadamente de uno a tres meses mientras el DT50 para -

endosulfn y endosulfn sulfato (el producto de transformacin de ambos isomeros) en ambos medios es ms de dos aos (National Research Council of Canada, 1975), lo que explica su alta frecuencia de aparicin en el agua del sistema. Tambin es posible que la incorporacin de este insecticida al agua este en funcin de la concentracin de partculas suspendidas, donde los residuos son absorbidos y transportados. Esto vara de estacin a estacin y de ao a ao, dependiendo de las condiciones climticas y de los periodos de lluvia (Said et al., 2008), se observa adems que la presencia de este compuesto coincide en ambos casos con el inicio de los ciclos agrcolas primavera-verano y otoo invierno cuando los picos de aplicacin de agroqumicos son muy elevados y que las concentraciones ms elevadas se encontraron en la poca de lluvias (Julio-Septiembre). El clorpirifos se degrada rpidamente a 21 C con una vida media de 4.8 das (Frank et al., 1991), la presencia en las muestras de agua indican un reciente uso ya que tiene amplio uso como insecticida en la agricultura y en el hogar. El diazinn es ms estable y puede encontrarse en forma de su metabolito diazoxn, tiene una vida media de degradacin de 67 das en agua, por lo que despus de haber sido aplicado se encuentra en ambiente con alta frecuencia, se usa como garrapaticida en ganado vacuno y como insecticida en distintos cultivos agrcolas (Frank et al., 1991) segn las encuestas realizadas tiene un amplio uso en la zona agrcola (hipotticamente). En msculo de camarn los nicos plaguicidas detectado fueron DDT (y sus metabolitos), diazinn y clorpirifos, a unas concentraciones promedio de 2015.33 ng/g de lpidos, 1035.98 ng/g de lpidos y 1877.98 ng/g de lpidos, en el caso del DDT las concentraciones encontradas en algunos casos superan los lmites de ingesta diaria establecida por la EPA, se puede asumir que existe riego de intoxicacin crnica si estos organismos son consumidos de manera frecuente durante un periodo de tiempo amplio. En el caso de diazinn y clorpirifos, las concentraciones detectadas se encuentran arriba de las que han sido reportadas como causantes de efectos txicos en camarn (Osuna et al., 1997). Respecto al sitio usado como control se observ la presencia de niveles trazas slo en las matrices de agua y sedimento, es decir los valores detectados se encontraron abajo del lmite de deteccin correspondiente a cada uno de los compuestos analizados.

ACTIVIDADES ENZIMTICAS EN CAMARN 1.- ACTIVIDAD ACETILCOLINESTERASA

La actividad acetilcolinesterasa se observa una disminucin muy marcada tanto en msculo como en hemolinfa al inicio de cada uno de los ciclos agrcolas (primaveraverano y otoo-invierno), y mediante el anlisis de correlacin de pearson se observa que se encuentra una correlacin negativa con los compuestos diazinn y clorpirifos (R2= -0.85 y R2= -0.90, respectivamente), esto indica que conforme aumenta la concentracin de estos compuestos los niveles de acetilcolinesterasa tanto en msculo como en hemolinfa tienden a bajar drsticamente generando en algunas ocasiones hasta mortandad del 10 % de los organismos, se observ diferencia significativa entre los sitios de toma de muestra, encontrando que el punto 1 (desembocadura del Ro Culiacn) era en todos los casos en sitio ms contaminado, los dems sitios incluyendo el sitio control, presentaron un patrn similar en lo que respecta a la actividad de acetilcolinesterasa.
2.- ACTIVIDAD ENZIMTICA DE CAT, GSH, GSSG, GST, EROD Y GPX

En todos los casos las mayores actividades enzimticas medidas, se observaron en el punto 1, pero fueron marcadamente ms elevadas en los periodos de inicio de los ciclos agrcolas coincidiendo con la aplicacin de plaguicidas, sin embargo no se observ ningn tipo de correlacin entre las actividades enzimticas y la concentracin de algn plaguicida, excepto en el caso de la actividad EROD y CAT que presentaron una correlacin positiva con los plaguicidas (R2= 0.93 y R2= 0.88, respectivamente) lo que indica que aumentos en la concentracin de estos plaguicidas genera incrementos en las actividades EROD y CAT como respuesta al estrs Oxidativo. No se observo diferencia significativa entre las actividades enzimticas entre las pocas de secas y lluvias. En el sitio control se observaron valores normales en todos los casos, los sitios contaminados presentaban niveles de hasta 9 veces ms elevados.

CONCLUSIONES

Los plaguicidas organofosforados de mayor

incidencia

en

el sistema Lagunar

Ensenada de Pabelln fueron DDT y sus metabolitos, endosulfn, clorpirifos y diazinn, adems se encuentra la presencia de algunos otros compuestos de manera espordica. El porcentaje de presencia de plaguicidas fue mayor en sedimento, seguido de agua y camarn. La incidencia y concentracin de plaguicidas en agua, sedimento y camarn se hallan relacionadas con las zonas agrcolas cercanas al sitio de estudio, excepto el caso de DDT(y sus metabolitos) y algunos otros organoclorados (lindano, aldrin,etc.) que indican existencia de contaminacin de tipo antropognico. Las concentraciones ms elevadas han mostrado que pueden alterar el sistema metablico, de los camarones peneidos de dicha zona.

Por lo cual se recomienda seguir con el monitoreo de estos contaminantes, tanto en camarones y otros organismos de importancia en la Ensenada de Pabelln que pudieran ser consumidos por la poblacin local o que vayan a ser exportados. Se recomienda adems el uso de una ms amplia batera de biomarcadores o realizar estudios de laboratorio que permitan identificar cuales seran los mejores a usar en el caso de la exposicin a plaguicidas, ya que algunos de los aqu usados no suelen ser tan especficos.

BIBLIOGRAFA
Banderas, T. A. G. (1994). Impacto ambiental de los desarrollos hidroagrcolas sobre las lagunas costeras del noroeste de Mxico. In Lagunas costeras y el litoral mexicano (De la Lanza y Cceres, Eds.).UABCS, UNAM, MeHxico D.F.

Beers, R., Sizer, I., 1952. A spectropgotometric method for measuring the breakdown of hydrogen peroxide by catalase. J Biol Chem 195, 133-139. Bradford, M.M., 1976. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal Biochem 72, 248254. Couch, J. A. (1978). Diseases, parasites, and toxic responses of commercial penaeid shrimps of the Gulf of Mexico and South Atlantic coasts of North America. Fish Bull 76:144. Couch, J. A. (1979). Shrimps (Arthropoda: Crustacea: Penaeidae). In: Hart CW Jr, Fuller SLH, (eds) Pollution ecology of estuarine invertebrates. Academic Press, New York, pp 236258. Ellman, L.G., Courtney, D.K., Andres Jr., V., Featherstone, R., 1961. A new and rapid colorimetric determination of acetylcholinesterase activity. Biochemical Pharmacology 7, 88-95. Enviromental Protection Agency. EPA. (1995). Method 507. Determination of Nitrogen and Phosphorus ccontaining pesticides in water by Gas Chromatography with a Nitrogen-Phosphorus Detector. Edited by J.W. Munich. National Exposure Research Laboratory Office of Research and Development U.S. Cincinnati, Ohio 45268. Enviromental Protection Agency EPA. (1995). Method 508. Determination of Chorinated Pesticides in water by Gas Chromatography with an Electron Capture Detector. Edited by J.W. Munich. National Exposure Research Laboratory Office of Research and Development U.S. Cincinnati, Ohio 45268. Fernandes, D., Potrykus, J., Morsiani, C., Raldua, D., Lavado, R., Porte, C., 2002. The combined use of chemical and biochemical markers to assess water quality in two lowstream rivers (NE Spain). Environ Res 90, 169-178. Floh, L., Gnzler, W., 1984. Assays of glutathione peroxidase. Methods Enzymol 105, 114-121. Flores-Verdugo, F. (1990). Algunos aspectos sobre ecologa, uso e importancia de los ecosistemas de manglar: In: Temas de Oceanografa Bilogica en Mxico, Vol. 1., De la

Rosa-Vlez, J. and Gonzlez-Farias, F. (Eds.) Universidad Autnoma de Baja California, Ensenada, B.C., pp., 21-56. Galindo, R. J. G. (1987). Estudio de la contaminacin por pesticidas en camarn y agua del Estero de Uras. Rev. Ciencias Mar 9, 32-36. Galindo, R. J. G., Guerrero, I. M., Villagrana, L. C., Quezada, U. L., and Escalante, S. A. (1992). Contaminacin por plaguicidas en agua, sedimentos, camarn y almejas de dos ecosistemas costeros de Sinaloa, Mxico. Trop. Ecol. 33, 172-180. Galindo, R. J. G., Medina, J. A., Villagrana, L. C., and Ibarra, C. L. (1997). Environmental and pollution condition of the Huizache-Caimanero lagoon, in the northwest of Mexico. Mar. Poll. Bull. 34, 1072-1077. Galindo, R.J.G., Medina, J.A., Villagrana, L.C., 1996. Toxic efects of organochlorine pesticides on Penaeus vannamei shrimps in Sinaloa, Mexico. Chemosphere 33 (3), 567575. Gonzlez-Valdivia, C. (2008). Niveles de plaguicidas en sedimentos de granjas camaroncolas en Ensenada de Pabelln, Sinaloa, Mxico. Tesis de Ingeniero Bioqumico en Alimentos. Instituto Tecnolgico de Tepic. 133 p. Habig, W., Pabst, M., Jakoby, W., 1974. Glutatione-S-transferases, the first enzymatic step in mercapturic acid formation. J Biol Chem 249, 7130-7139. INEGI, Anuario Estadstico de los Estados Unidos Mexicanos, 1988-1989. Instituto Nacional de Estadstica, Geografa e Informtica. Aguascalientes, Mxico, pp. 838 (1992). Lee, S. M., Papathakis, L. M., Feng, H. M. C., Hunter, G. F., Carr E. J. 1991. Multipesticide residue method for fruits and vegetables: California Department of Food and Agriculture. Fresenius' Journal of Analytical Chemistry. 339 (6): 376-383 pp. Luke, M. A., and Doose, G. M. (1983) Bull. Environ. Contam. Toxicol. 30, 110-116. Mejias, J., Jerez, J. (2006). Gua para la toma de muestras de residuos de plaguicidas agua, sedimento y suelo. Instituto de Investigaciones Agropecuarias. Centro Regional de Investigacin Carillanca, Santiago de Chile, 34p.

National Research Council of Canada. (1975). Endosulfan: Its effects on environmental quality. Publ. NRCC 14098. Environmental Secretariat, Ottawa. Osuna, I., Galindo-Reyes, J. G., Riva, M. C. (1997). Evaluacin toxicolgica de metil paratin, metil azinfs, clorpirifos, diazinn y metamidofos, en camarones del gnero Penaus Sp. Boletn INTEXTER (U.P.C.) No. 117. Pp. 65-71. Pesticide Analytical Manual (PAM). B.M. McMahon, N.F. Hardin (Eds.). Vol. 1, 3rd ed., US Food and Drug Administration, Washington, DC, 1994, Section 102-A: Preparation of analytical samples. Pesticide Analytical Manual (PAM). B.M. McMahon, N.F. Hardin (Eds.). Vol. 1, 3rd ed., US Food and Drug Administration, Washington, DC, 1994, Section 302-C1: Florisil column (4G) clean up, with one methylene chloride eluant. Pesticide Analytical Manual (PAM). B.M. McMahon, N.F. Hardin (Eds.). Vol. 1, 3rd ed., US Food and Drug Administration, Washington, DC, 1994, Section 504-A: Quantification. Rivero-Rodrguez, L., Borja-Aburto, V. H., Santos-Burgoa, C., Waliszewsky, S., Rios, C., Cruz, V. (1997). Exposure assessment for workers applying DDT to control Malaria in Veracruz, Mxico. Environmental Health Perspectives. 105(1): 98-101. Rosales, M. T. L., Escalona, R. M. A., and Zamora, V. (1985). Organochlorine hydrocarbon residues in sediments of two diferent lagoons of northwest Mexico. Bull. Environ. Contam. Toxicol. 35, 322-330. Ruiz-Laguna, J., Graca-Alfonso, C., Peinado, J., Moreno, S., Ieradi, L.A., Cistaldi, M., Lopez-Barea, J., 2001. Biochemical biomarkers of pollution in Algerian mouse (Mus spretus) to assess the effects of the Aznalcllar disaster on Doana Park (Spain). Biomarkers 6, 146-160. Said, T. O., Khaled, M., Moselhy, E. l., Rashad, A. A. M., Shreadah, M. A. (2008). Organochlorine Contaminants in Water, Sediment and Fish of Lake Burullus, Egyptian Mediterranean Sea. Bulletin Environmental Contamination Toxicology. 81:136146. Schmidt L.J. (1995). Extraction and Lipid Separation of Fish Samples for Contaminant Analysis and Lipid Determination. Standard Operating Procedure SOP No. HC521A. Tietz, N.W., 1976. Fundamentals of Clinical Chemistry. W.B. Saunder, Philadelphia, PA, 991 pp.

Tomlin, C. D. S. (ed.) 2002. The pesticide manual. British Crop Protection Council, Farnham, UK. Villaverde J., Hildebrandt A., Martinez E., Lacorte S., Morillo E., Maqueda C., Viana P., Barcelo D. (2008). Priority pesticides and their degradation products in river sediments from Portugal. Science of the Total Environment, 390 (2-3), pp. 507-513.

ANEXO 1
ENCUESTA
Caracterizacin de los cultivos, plagas y agroqumicos usados en el Distrito de Riego 10 (aledao al sistema lagunar Ensenada de Pabelln).

Como parte de la investigacin del Distrito de Riego 10 del Valle de Culiacn (aledao al sistema lagunar Ensenada de Pabelln) se aplican cuestionarios a los productores, que permitirn captar los datos requeridos con el propsito de conocer las prcticas agrcolas ejercidas por los mismos.

Es importante sealar que todos los datos que usted nos haga el favor de proporcionar tienen carcter confidencial y slo servirn para los fines de este trabajo, por lo que agradecemos la honestidad y veracidad de sus respuestas.

Municipio: _________________________________ Nm. Cuestionario: __________ Localidad: _________________________________ Fecha: ____________________ Mdulo: __________________________ Encuestador:

Localizacin del predio: _______________________ __________________________

I.

IDENTIFICACIN DEL ENTREVISTADO

1. Nombre: _____________________________________________________________________ 2. Edad: __________ (en aos) 3. Usted es: (marque con X) a).Ejidatario______b).Pequea Propiedad _____c).Otro (especifique) ____________ 4. Es usted el responsable de hacer trabajar las tierras? Si ______ No ______ 5. Cul fue el ltimo ao cursado o grado aprobado? ____________________ Slo sabe leer ( ) II. UNIDAD DOMSTICA

6. Cuntas personas dependen econmicamente de usted? _____ 7. Cuntos familiares que viven con usted trabajan en su terreno? ______ 8. Contrata usted jornaleros? Si _____ Cuntos contrat el ltimo ciclo agrcola? ___________ No _____

9. Adems del cultivo en su terreno, usted realiza otra(s) actividad(es) econmica(s)? Si _____ (pase a la pregunta 10) No_____ (pase a la pregunta 12) 10. Cul (es)? _________________________________________________________ 11. De cul actividad proviene el ingreso ms importante para su familia? a) De la agrcola _____ b) De otra actividad ____ (especifique) _______________________________

III.

ACCESO A LA TIERRA

12. En cuantas hectreas de tierra produce? Total ______ EJIDALES Propias Toma en Renta Da en renta Administra A medias Otra (especifique)__________________ PROPIEDAD PRIVADA

IV.

PATRN DE CULTIVOS

13. Cules eran sus principales cultivos hace 5 aos? (Anote superficie)

CICLO OTOO-INVIERNO Cultivo Hectreas

CICLO PRIMAVERA-VERANO Cultivo Hectreas

14. Actualmente Qu superficie sembr en el pasado ciclo Primavera-Verano (09/09)? Superficie sembrada (ha) Destino de la produccin

Cultivo

Produccin (Ton/ha)

15. Actualmente Qu superficie sembr en el pasado ciclo Otoo-Invierno (09/10)?

Cultivo

Superficie sembrada (ha)

Produccin (Ton/ha)

Destino de la produccin

16. Para sus actividades agrcolas utiliza: a). Tractor: Propio _____ Rentado _____ Prestado _____

b). Otro (especifique) ________________________________

V. MANEJO DEL CULTIVO Y MEDIO AMBIENTE

17. Cul(es) variedad(es) siembra?: _______________________________________________________________ 18. Dnde obtiene la semilla?: _____________________________________ 19. Cules son las plagas y enfermedades ms importantes que atacan al cultivo?: Enfermedad Orden de Importancia ( ( ( ( ( ) ) ) ) ) Forma de control?*

20. Qu toma en cuenta antes de aplicar un plaguicida en su cultivo?:


a) Edad _____ b) Estado del cultivo _____ c) Poblacin de plagas en la planta _____

d) Poblacin de benficos en el campo _____ e) Gravedad de la plaga en la planta _____ f) Etapa del cultivo _____ g) Clima _____ h) Precios del cultivo en el mercado _____ i) Otros factores _____

21. Cuntas aplicaciones de plaguicidas realiz usted durante el ltimo ciclo del cultivo?______________________

Enfermedad

Nombre del Dosis que Superficie Nmero de Mtodo de Fecha de la Fecha de la producto que aplica en Ha aplicaciones aplicacin primera ltima aplica para donde se por ao/ha aplicacin aplicacin cantidad/ha controlar la aplic el enfermedad producto

22. Era normal? Si _____

No _____

23. Si no era normal, cuntas veces normalmente aplica?: ________veces. Por qu?: ___________________________________________________ 24. Cuntos productos normalmente utiliza en cada aplicacin?:______________________ 25. Cuando tiene un problema con una plaga o enfermedad, usted normalmente consulta a: a) Propia experiencia _____ b) miembro de familia _____ c) otro agricultor _____ d) tcnico de una institucin _____ e) otro _____________________ 26. Todos los insectos que observa en su cultivo son plagas?: Si _____ No _____

27. Si la respuesta es no, Qu porcentaje de los insectos en general son plagas?: ________% 28. Conoce usted insectos y otros organismos que naturalmente matan a las plagas en el campo?: Si _____ No _____ 29. Si la respuesta es si, cules son?: _________________________________________________ 30. Por qu aplica esas dosis de agroqumicos? a) Recomendacin de etiquetado _____ b) recomendacin de INIFAP _____ c) estrategia propia _____ d) otro _____ 31. Usa equipo de proteccin para el manejo y aplicacin de agroqumicos? Si _____ No _____ Algunas veces _____

32. Cuales equipos de proteccin conoce y usa a) Mascarilla _____ b) traje especial _____ otro _____ c) gafas _____ d) guantes _____ e)

34. Estara dispuesto a reducir las dosis aplicadas? Si ____ por qu __________________________ qu_________________________ No _____ por

35. Cules son los principales problemas ambientales en la regin?

( ( (

) Contaminacin del agua ) Contaminacin del suelo ) Contaminacin del aire

( (

) Erosin del suelo ) Salinizacin

( ) Desastres naturales (heladas huracanes, etc.) ( ( ) Cambios climticos ) Otros (especifique):

( ) Uso de tecnologas destructoras del medio ambiente ( ( ) Tiraderos de basura ) Deforestacin

VI. PROBLEMTICA GENERAL

En orden de importancia, seale los principales problemas que enfrentan los productores del Valle de Culiacn y la solucin que usted propondra para superar cada uno de ellos.

Problemas

Solucin propuesta

Gracias por su cooperacin

ANEXO: 2
Purificacin con columna de florisil:
Se empac un cartucho preparado con un tapn de fibra de vidrio con 1 g de florisil, seguido de 0.2 g de sulfato de sodio anhidro en la manifold de vaco y se acondicion con 5 mL de hexano, se eluy y desecho. Posteriormente se procedi a introdujo la alcuota (1 mL y se enjuago el recipiente con otro mililitro de hexan se agreg al cartucho y se colecto matraz bola de 50 mL, se eluy con 15 mL eluente preparado de la siguiente manera: 50% cloruro de metileno / 1,5% acetonitrilo / 48,5% hexano (v/v/v) [Pipetear 15 mL de acetonitrilo dentro de 500 mL de cloruro de metileno, ajustar

volumen con hexano a 1 L. Permita que la mezcla alcance la temperatura ambiente], se evapor el extracto hasta sequedad utilizando un equipo de Mini-vap Ajustable (Supelco 22970). El extracto se resuspendi en 1 mL de hexano, y se coloc en un vial para analizarlo por cromatografa de gases.

NOTA: El material utilizado en la extraccin y limpieza fue previamente lavado con acetona y hexano y secado a 250C en el horno incubador (Shel Lab), mientras que el florisil y el sulfato de sodio se mantuvieron dentro del horno hasta el momento de utilizarlos.

ANEXO 3:
Determinacin para Organoclorados y Piretroides Sintticos
Detector: ELCD Columna: CP SIL 5 CB 30 m X 0,53 mm Rampa de Temperatura del horno: Etapa Inicial 1 2 Temp. (C) 150 250 275 Vel. (C/min) -5,0 10,0 Dur. (min) 2,0 5,0 10,5 Total (min) 2 27 40

Temperatura del Inyector: 240 C Gas: Helio a un flujo de 12 mL/min Temperatura del reactor: 1000 C Detector: ECD Columna: CP SIL 8 CB 15 m X 0,25 mm Rampa de Temperatura del horno: Etapa Inicial 1 2 Temp. (C) 150 250 275 Vel. (C/min) -5,0 10,0 Dur. (min) 2,0 5,0 10,5 Total (min) 2 27 40

Temperatura del Inyector: 240 C Gas: Nitrgeno a un flujo de 2,0 mL/min Temperatura del detector: 300 C

Determinacin para Organofosforados y Organonitrogenados


Detector: PFPD Columna: CP SIL 43 CB 30 m X 0,32 mm Rampa de Temperatura del horno: Temp. (C) Etapa Inicial 1 2 150 200 250 Vel. (C/min) -4,0 10,0 Dur. (min) 1,5 1,0 10,0 Total (min) 1,5 15 30

Temperatura del Inyector: 240 C Gas: Helio con un flujo de 5 mL/min Temperatura del detector: 250 C

Detector: TSD Columna: CP SIL 5 CB 30 m X 0,53 mm Rampa de Temperatura del horno: Etapa Inicial 1 2 Temp. (C) 150 200 250 Vel. (C/min) -4,0 10,0 Dur. (min) 1,5 1,0 10,0 Total (min) 1,5 15 30

Temperatura del Inyector: 240 C Gas: Helio a un flujo de 15 mL/min Temperatura del detector: 300 C

You might also like