EVALUACIN DEL PROCESO DE OBTENCIN DE ALCOHOL CARBURANTE POR SACARIFICACION FERMENTACION SIMULTANEA SSF UTILIZANDO ALMIDN DE YUCA EVALUATION

PROCESS FUEL ETHANOL SSF METHODOLOGY FOR USING CASSAVA STARCH

Recibido para revisar agosto 17 de 2009, aceptado septiembre 24 de 2009, versin final octubre 29 de 2009

LUS HERAZO HERAZO

Ing. Agroindustrial, Universidad de Sucre, lherazo@unisucre.edu.co

BRYDYZ MAZZY RUIZ

Ing. Agroindustrial, Universidad de Sucre, bmazzy@unisucre.edu.co

JAIRO SALCEDO MENDOZA

Ing. Qumico, Esp,Candidato a Doctor, Universidad de Sucre, jairo.salcedo@unisucre.edu.co

JORGE HERNANDEZ RUYDIAZ

Ing. Agroindustrial,Candidato a Magister, Universidad de Sucre, ruydiazjotae@yahoo.com.co

RESUMEN: La produccin de alcohol carburante comprende, adems del tradicional proceso de fermentacin alcohlica, procesos adicionales de separacin para obtener el etanol libre de agua. Actualmente se emplean mtodos novedosos que reducen las operaciones del proceso convencional, constituyndose en una importante alternativa frente a los combustibles fsiles. El objetivo de esta investigacin fue la evaluacin del proceso de obtencin de alcohol carburante a travs de la sacarificacin-fermentacin simultnea (SSF) utilizando almidn de yuca de la variedad Mtai 8. Inicialmente, se realiz la evaluacin de la hidrlisis del almidn de yuca utilizando la enzima STARGEN 001, posteriormente se procedi con evaluacin del proceso de obtencin de alcohol (SSF), usando la enzima STARGEN 001 y el fermento ETANOL RED. En el proceso de sacarificacin para una concentracin de 24 % p/v de sustrato se obtuvo un equivalente de dextrosa (ED) de 8.203. Mientras, que en proceso SSF para una concentracin de sustrato del 32% p/v se obtuvo una concentracin de alcohol del 8.44% v/v. Los resultados demuestran que es posible obtener productividades similares a los del proceso convencional que permiten aumentar as la eficiencia del proceso mediante la reduccin de los tiempos y los costos de produccin.

PALABRAS CLAVE: STARGEN 001, Almidn de yuca, Sacarificacin-Fermentacin Simultanea (SSF), ETANOL RED, etanol ABSTRACT: The production of fuel ethanol includes in addition to traditional alcoholic fermentation process, additional processes apart for water-free ethanol. Novel methods are currently used to reduce the operations of the conventional process, becoming an important alternative to fossil fuels. The objective of

this research was to assess the process of fuel ethanol through simultaneous saccharification-fermentation (SSF) using cassava starch variety Mtai - 8. For this assessment was to hydrolysis kinetics of saccharification of starch using the enzyme STARGEN 001, by measuring the production of reducing sugars expressed as dextrose equivalent (ED) and the subsequent evaluation of the process of fuel ethanol through SSF, adding the enzyme STARGEN 001 and ETHANOL RED ferment determine the concentration of reducing sugars, cell growth, and concentrations of ethanol, using a categorical factorial experimental design randomized single individual in 2 blocks and 8 levels, with three replications. Saccharification stage for the biggest ED were obtained for the concentration of 24% w / v with 8.203 units, while most alcohol production in the SSF is presented for the solution of 32% w / v with 8.44% v / v . The results show that it is possible to obtain products similar to those of the conventional process for increasing the efficiency of the process by reducing time and production costs.

KEYWORDS: Fuel ethanol, Cassava starch, Simultaneous Saccharification-Fermentation (SSF).

1. INTRODUCCIN
El almidn es el nico carbohidrato producido universalmente en pequeos grnulos de forma variable, relacionando su forma con el contenido de amilosa y amilopectina [1]. Su hidrlisis en medio acuoso tiene como finalidad la transformacin de estos polmeros en azcares sencillos. Esta hidrlisis puede ser realizada por va qumica o enzimtica [2]. La hidrlisis enzimtica es una tcnica de modificacin en la cual se rompen los enlaces -1,6 presentes en el almidn para liberar cadenas mas cortas como dextrinas, maltosa y glucosa [3]. Finalizada esta etapa es posible el proceso de conversin de la glucosa en etanol por fermentacin alcohlica como mtodo tradicional. Adems del proceso tradicional, existen procesos convencionales, que aunque mas eficientes que el anterior, requieren de etapas separadas como la licuefaccin y la sacarificacin, intensivas en la adicin de energa trmica y estabilizadores, que aumentan los costos y minimizan la cantidad de etanol producido [4]. Estos inconvenientes han permitido la aparicin de procesos simultneos de sacarificacin fermentacin (SSF), mediante la aplicacin de complejos enzimticos comerciales de alfa y glucoamilasas capaces de generar actividades de cavitacin rpida de almidn granulado [4]. Ante la disponibilidad de estas tecnologas se ha comparado la obtencin de etanol por el proceso SSF

utilizando STARGEN 001, con un proceso convencional que usa la combinacin de 2 enzimas comerciales DG1 y DG2 y como sustrato maz, alcanzndose concentraciones de etanol similares, representando avances pues se diminuyen los requerimientos energticos por la SSF [5] [6]. De igual forma se ha evaluado la influencia de la concentracin de azcares reductores y la dosificacin de enzimas sobre la productividad y concentracin final de etanol, bajo el proceso SSF a partir de almidn de yuca, comparndose con un control con caractersticas de sacarificacin-fermentacin independientes (SHF) determinndose que slo el factor concentracin inicial de sustrato presenta efecto sobre la productividad de etanol, demostrando la viabilidad tcnica al reducir los tiempos y necesidades de energa en la produccin de alcohol carburante [7]. Los problemas que plantea el uso de combustibles fsiles para satisfacer la creciente demanda de energa han obligado a buscar otras fuentes de suministro [8]. Colombia no es ajena a esta problemtica, al ser un pas vulnerable en hidrocarburos, debido a las limitaciones de los programas de exploracin, ausencia de nuevos hallazgos importantes y disminucin de las reservas, obliga a diversificar las fuentes energticas que contribuyan a un desarrollo sostenible en materia de combustibles [9]. En el presente trabajo se evala el comportamiento del complejo comercial de

amilasa STARGEN 001 y el fermento ETANOL RED en la produccin de alcohol carburante a partir de almidn de yuca. 2. MATERIALES Y MTODOS 2.1 Obtencin del Almidn. La yuca variedad M-tai fue adquirida en la Asociacin de Productores de Yuca de las Sabanas de Sucre y Crdoba- APROYSA. Para la produccin del almidn se utilizo el mtodo propuesto por la FAO 2007. Este procedimiento consiste en la recepcin de las races cosechadas en un tiempo inferior a 48 horas, seguido de un lavado y pelado para eliminar la tierra, la epidermis y las impurezas. El rallado, la extraccin de la lechada, la sedimentacin, el secado natural y el acondicionamiento hasta obtener un granulo de tamao homogneo [10]. La determinacin de la humedad ese realizo por el mtodo ICONTEC 2002 [11].

2.2 Cintica Enzimtica de la Hidrlisis de Almidn de Yuca. Se realizo en un reactor con capacidad de 4 litros, con control de temperatura y de velocidad de mezclado. Se Prepararon 8 soluciones de almidn en agua destilada a concentraciones de 12, 16, 20, 24, 28, 32, 36 y 38% p/v, agregando 0.218 ml del complejo comercial de amilasa STARGEN 001 y ajustando el pH en un rango de 4 a 4.5 con cido sulfrico diluido. El proceso se realizo a una temperatura de 30 C y a 250 rpm, se dejo reaccionar durante 3 horas y se tomaron muestras cada 20 minutos por triplicado. La produccin de azucares reductores se midi a travs del mtodo del acido dinitrosalicilico (DNS) propuesto por Miller 1959, usando un espectrofotmetro Merck SQ 118 V 1.70 a 585 nm [12].

Al igual que en la etapa de evaluacin cintica el proceso se efecto en un reactor con capacidad de 4 litros, con control de temperatura y de velocidad de mezclado. Se prepararon 8 soluciones de almidn en agua destilada a concentraciones de 12, 16, 20, 24, 28, 32, 36 y 38% p/v, agregando 0.218 ml del complejo comercial de amilasa STARGEN 001 y del fermento ETANOL RED en una concentracin de 0.3 g/l. Se llevo a cabo durante 48 horas, tomando muestras por triplicado cada 2 horas durante las 10 primeras horas de reaccin, luego se tomaron muestras a las 22, 34 y 48 horas. Durante esta etapa se determino la concentracin de azucares reductores por el mtodo descrito por Miller en 1959 [12], el crecimiento celular se determino por la concentracin de biomasa en g/lt con cmara de Neubauer por el mtodo descrito por Alfenore et al [13], y las concentraciones de etanol en %v/v por medio del mtodo de la cmara de Winnick descrito por Lujan y Salcedo [14]. Para determinar la significancia estadstica se utiliz un diseo experimental factorial categrico nico individual aleatorizado en 2 bloques y 8 niveles, tres repeticiones para un total de 48 corridas experimentales. El anlisis de los datos se realizo con el software Statgraphics Centurin Demo II.

3. RESULTADOS Y DISCUSIN 3.1 Cintica Enzimtica de la Hidrlisis de Almidn de Yuca La evaluacin cintica del proceso de hidrlisis enzimtica en soluciones de almidn de yuca de la variedad Corpoica Mtai - 8, se determin monitoreando las velocidades inciales de reaccin como son la degradacin de sustrato, y la produccin de azucares reductores expresados en equivalentes de dextrosa (ED), como lo muestran las figuras 1 y 2. En la figura 1 se observa que durante el proceso de sacarificacin con la enzima STARGEN 001 a temperatura ambiente y

2.3 Evaluacin del Proceso Sacarificacin Fermentacin Simultneo SSF.

Figura 2. Concentracin de equivalentes de dextrosa (ED) para los primeros 60 minutos del proceso. Figure 2. Concentration of dextrose equivalent (ED) for the first 60 minutes of the process.

durante 3 horas se generaron mayores cantidades de ED en las soluciones de 24 y 20 % p/v, con valores de 8.203 y 7.326 unidades de ED respectivamente; y los menores valores para las soluciones de 38 y 36 % p/v con 2.548 y 2.712 unidades de ED.

Para visualizar de forma ms especifica el comportamiento de las velocidades de reaccin, se tomaron los datos obtenidos durante los primeros 60 minutos de esta etapa, como se muestra en la figura 2; en la que se aprecia una relacin creciente con respecto al tiempo, en cuanto a la produccin de ED. Durante los primeros 20 minutos las soluciones de 24, 28 y 32 % p/v presentaron un comportamiento similar con una accin enzimtica rpida, con ED de alrededor de 2.5, mientras que para las de 12, 16 y 20 % p/v, el comportamiento fue inverso al anterior con ED alrededor de 0.5. Despus de este primer periodo se presento una activacin de forma progresiva para las soluciones de 12, 16 y 20 % p/v. Las concentraciones de 36 y 38 % p/v, muestran una tendencia casi constante a lo largo de este periodo en la produccin de ED pero menor que las antes descritas. El ajuste del proceso de hidrlisis enzimtica aun modelo matemtico como el que muestra la ecuacin (1), permiti la determinacin de sus parmetros, describiendo la cintica enzimtica de la STARGEN 001 sobre los grnulos de almidn. Al ajustar los datos al modelo este presenta un R2 de 84,4331% en la produccin de azucares reductores, lo cual permite determinar que este modelo representa confiablemente el proceso. La ecuacin (1) toma la forma que muestra la ecuacin (2).

Figura 1. Concentracin de equivalentes de dextrosa con respecto al tiempo. Figure 1. Dextrose equivalent concentration versus time.

Lo anterior demuestra que la produccin de de ED no es estrictamente proporcional a la concentracin de las soluciones, pues a niveles muy altos se afecta la velocidad de conversin de la enzima.

V =

[43.52 2.828 * S + 0.04697 * S ]

2

[ 0.3817 * S ] * Exp [ 0.1351*S ]

( 2)

evaluadas. Creciente para las soluciones de 12, 16, 20 y 24% p/v, alcanzando valores mximos de 12,343 ED para el 12% p/v.

V = velocidad inicial de reaccion ( g / l ) S = concentrac ion de sustrato (% p / v )

La ecuacin (2) muestra que la velocidad de produccin de azucares reductores expresados en unidades de equivalentes de dextrosa, est ligado a la concentracin inicial de sustrato, la cual inhibe progresivamente la actividad de la enzima. Para validar el modelo propuesto se compararon las cinticas de formacin de ED de forma experimental producida por el reactor con la simulada por el modelo, presentando un nivel de significancia del 95 % y un error estndar del 4.668%, como lo muestra figura 3. En donde la lnea continua representa los datos simulados y los puntos representan los datos experimentales.
Figura 4. Produccin de Equivalentes de Dextrosa en el Proceso (SSF). Figure 4. Production of dextrose equivalent in the process (SSF).

Grfica del M odelo Ajustado 0,2 0,16 0,12 vel 0,08 0,04 0 12 17 22 27 sustra 32 37 42

Para las concentraciones de 28, 32, 36 y 38% p/v, la evolucin de los ED nos es tan marcada como en las anteriores. Para 28 y 32 % durante las 10 primeras horas, los ED alcanzan valores de 2,169 para la concentracin del 28%. Sin embargo para el final del proceso en todas estas concentraciones los niveles de ED alcanzan 0,195 unidades. Esta variabilidad se da en forma continua durante el proceso SFS por la adicin del fermento ETANOL RED que convierte la glucosa en etanol.

Figura 3. Comparacin experimental y simulada de la cintica de sacarificaron de almidn de yuca. Figure 3. Comparison of experimental and simulated kinetics saccharified cassava starch.

Concentracin de alcohol durante el tiempo SFS. Los resultados obtenidos se muestran en la figura 5. En esta se observa que los valores mximos de produccin de alcohol, se presentan para las concentraciones 32, 28 y 24 % p/v, con 8.44, 8.14 y 6.97 % v/v y las menores producciones para las concentraciones de 16 y 12 % p/v con 2.52 y 2.05 % v/v respectivamente al final de las 48 horas destinadas al proceso.

3.2 Evaluacin del Proceso Sacarificacin Fermentacin Simultneo SSF. Equivalentes de Dextrosa (ED): La figura 4 describe los resultados obtenidos durante el proceso de SSF, presentando comportamientos diferentes en este parmetro para las concentraciones

ellas efectan gracias a su metabolismo. aprecia que a mayor concentracin almidn utilizado mayor es el nmero microorganismos obtenidos durante proceso de SFS.

Se de de el

Figura 5. Produccin de alcohol en % v/v en el proceso SSF. Figure 5. Production of alcohol in% v / v in the SSF process.

Los valores mximos registrados en la investigacin, estn por encima de los reportes de Len y Tllez [15], los cuales obtuvieron una concentracin de etanol de 6,4% v/v, con una concentracin de almidn de yuca del 18% p/v utilizando un proceso convencional. De igual forma los resultados obtenidos en las concentraciones de 32 y 28% p/v son similares a los reportados por Bohrquez y Madero [16], quienes evaluaron los rendimientos en litros de alcohol/kg de almidn de yuca a partir de un proceso de hidrlisis y posterior fermentacin del almidn, con valores de 8,4, 8,08 y 7,8 % v/v para concentraciones de 16%, 10% y 13% p/v respectivamente pero con tiempos de procesos mucho mayores. Crecimiento celular del fermento ETANOL RED: Los resultados se presenta en la figura 6. En donde se observa que su comportamiento. Para las ocho concentraciones fue muy parecido durante las 48 horas de fermentacin, notndose que en las primeras 10 horas del proceso de SFS la produccin de biomasa fue rpida alcanzando valores entre 12,2 a 12,7 g/lt. A partir de este periodo, la produccin de clulas se mantuvo relativamente constante para cada concentracin, ya que durante este periodo las clulas del fermento ETANOL RED presentan mayores necesidades nutricionales, influenciadas directamente por la multiplicacin y el crecimiento celular, adems de la transformacin de azcares en alcohol que

Figura 6. Crecimiento celular (g/lt) en el proceso SSF. Figure 6. Cell growth (g /l) in the SSF process.

Con base en los resultados anteriormente descritos se establece la interaccin existente entre estos parmetros. En donde es claro que la produccin de azucares reductores expresados como ED y el crecimiento de microorganismos aumenta durante las primeras 10 horas, mientras que la formacin de producto expresado como produccin de etanol en % v/v aumenta permanentemente durante todo el proceso de SSF. Este comportamiento no es valido para las soluciones de 36 y 38 % p/v en donde la produccin de ED disminuye y la produccin de etanol solo muestra aumentos significativos durante estas primeras 10 horas, mantenindose ambos parmetros relativamente constantes hasta completar las 48 horas del proceso. Estos resultados dejan ver la relacin entre el consumo de sustrato (ED) para la formacin de producto (OH- %v/v) y crecimiento celular (g/lt) Estas interacciones muestran, que las mayores producciones de etanol se presentan para las concentraciones de 28 y 32% p/v con 8.14 y 8.44 % v/v respectivamente, sin embargo la formacin de ED solo alcanza las 0.3 unidades para estas soluciones, ya que altas formaciones de producto estn ligadas a altos consumos

de azucares reductores. Un comportamiento contrario a este muestran las concentraciones de 12 y 16 % p/v que registran los menores valores de formacin de producto con 2.05 y 2.52 % v/v respectivamente y los mayores valores de formacin de azucares reductores con 12 y 12.4 unidades. Lo anterior refleja que la produccin de etanol es funcin de la concentracin de almidones, siendo bsico para la formacin de azucares reductores por parte de la enzima amilasa, pero no directamente proporcional, pues esta disminuye su velocidad de conversin como resultado de la inhibicin por altas concentraciones de sustrato, como lo muestran los resultados de las concentraciones de 36 y 38 % p/v, que a pesar de sus altos valores no presentaron las mayores producciones de etanol (3,27 y 3,21 % v/v) esto debido a la poca produccin de azucares reductores por parte del complejo comercial de amilosa STARGEN 001 que es el sustrato de los microorganismos para la transformacin a alcohol. 4. CONCLUSIONES

La produccin de etanol a partir de almidn de yuca por la metodologa de SSF y en comparacin con el mtodo tradicional disminuye el consumo de energa y reduce los tiempos, aumentando la eficiencia del proceso. La velocidad de formacin de etanol es funcin de la concentracin de biomasa y la velocidad de crecimiento de la misma.

5.

RECOMENDACIONES.

Es necesario adelantar invistagaciones similares utilizando otros tipos de sustratos, obtenidos de materias primas provenientes de la regin caribe colombiana que permitan su comparacin en el proceso de SSF. Realizar un estudio que permita determinar la eficiencia exergtica de estos procesos de SSF en la produccin de alcohol carburante y compararlo con los mtodos tradicionales.

Las velocidades inciales de reaccin en el proceso de hidrlisis enzimtica, estn relacionadas directamente con la concentracin de sustrato, la cual inhibe progresivamente esta actividad.

6. AGRADECIMIENTOS. Los autores agradecen a las directivas acadmicas de la Universidad de Sucre por permitir el uso de los equipos de la Planta Piloto de Operaciones Unitarias Sede Perico para la realizacin de esta investigacin.

En el proceso de SFS, la produccin de equivalentes de dextrosa (ED) disminuye notablemente a lo largo del proceso, debido a su conversin en etanol.

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El desarrollo celular se da de forma exponencial, tal como ocurre en estos procesos, mostrndose una disminucin en la velocidad de crecimiento a mediada que transcurre el tiempo.

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