Ultrasonificacin Generacin de intensas ondas snicas en medio lquido.

Se transmite una corriente elctrica a un sistema mecnico que la convierte en vibraciones de alta intensidad generndo ondas ultrasnicas que forman millones de microburbujas que se expanden y colapsan contra las clulas: CAVITACIN. Choque de ondas rompe membranas y an enlaces covalentes. Mayor accin por adicin de esferas de vidrio. El Sonicador tiene dos forma de operar, por Pulsos: Las Vibraciones de ultrasonido pueden transmitirse en una solucin en un rango de 0,1 a 0,9 pulsos por segundo, permitiendo una adecuada sonicacin sin generacin importante de calor y Continuo: Puede ser usado de forma contnua por hasta 15 minutos. Con este sistema se puede lograr la ruptura de levaduras entre 3 y 10 minutos o de E.Coli con 40 segundos. Presneta los siguientes inconvenientes: alta generacin de calor de las muestras que se mantienen en congelamiento, los tejidos duros (piel o tendn) se deben macerar previamente; se pueden generar radicales libres, el dao por oxidacin de radicales libres puede minimizarse adicionando cisteina, ditiotrteitol o algn otro componente -SH en el medio. Por Radicales Libres: Lesin en membrana celular, aberraciones, cromosmicas menores y cambios de tipo Fisiolgicas. Uso en Transferencia de DNA plasmdico en Protoplasmos y clulas intactas; con expresin temporal de un gen testigo. Flexible: Protoplasmos, Clulas en Suspencin y en fragmentos de tejido con la misma sencillez.

Sonicacion

Aplicacion de frecuencia superiores a 20 kHz Aparicion de areas de compresion/enrarecimiento/cavidades colapso de cavidades ondas de choque dano celular Aplicacion continua o discontinua Eficacia dependiente de: Tipo de microorganismo: diversidad Gram ->Gram + Bacilos > Cocos pH Temperatura Fuerza ionica del medio Tiempo de exposicion Densidad de la celula Uso a pequena escal, NO a gran escala: Elevados requerimientos de energia Dificultad de transmision de la energia Problemas de disipacion del calor producido

Los molinos de perlas, consisten en una cmara cilndrica vertical u horizontal, con un eje central movido por motor, que soporta una coleccin de discos excntricos u otros elementos de agitacin (Figuras 11y 12). Dicha cmara se llena hasta el nivel deseado con perlas de vidrio o acero para provocar la accin de molienda. Los molinos horizontales no requieren un mecanismo para la retencin de las perlas a la entrada del fluido, la que se localiza por encima por encima del nivel de perlas en la cmara. En la parte de salida se han empleado tres tipos de sistemas de retencin de perlas: plato perforado, ranura vibrante y disco rotando muy prximo al plato, con un conducto de salida en el mismo (Fig. 13). De ellos, los dos ltimos son los que menos problemas de ensuciamiento presentan.

Figura 11 Molino de perlas con cmara vertical (De Chisti y Moo-Young, 1991).

Figura 12. Molino de perlas con cmara horizontal (De Chisti y Moo-Young, 1991) Para un funcionamiento correcto de estos equipos, la perla ms pequea debe ser por lo menos 1.5 veces el tamao de la h holgura en el sistema de retencin de perlas. Los molinos horizontales, adems de la ventaja en relacin con el sellaje en la entrada, tienen un rendimiento de ruptura superior al del vertical, a causa de que en los verticales el flujo hacia arriba tiende a fluidizar las perlas en algn grado y eso reduce la eficiencia de molienda.

La cintica de la ruptura celular en los molinos de perlas depende de la construccin del molino. En las mquinas en que predomina el flujo pistn, se ha encontrado que la cintica de ruptura es de primer orden, mientras que en las mquinas cuya construccin permite un retromezclado significativo, la ruptura celular se desva considerablemente del comportamiento de primer orden

MORTERO Y MANO Es un mtodo convencional de rompimiento por friccin. Pueden emplearse materiales abrasivos como cuarzo, vidrio molido, arena, o materiales silceos. La masa celular contenida en un volumen de buffer se mezcla con un volumen de medio moledor (0.5 1). La friccin sobre las clulas genera calor que puede afectar la actividad que se desea estudiar. Actualmente se dispone de homogenizadores ms sofisticados que emplean el mismo principio, pero que permiten controlar el nivel de friccin y la temperatura del proceso, son conocidos como potters. Los principales problemas de esta tcnica son: la eficiencia baja cuando se usan pequeas cantidades de medio moledor cuando es baja la concentracin celular; la friccin genera calor y pueden presentarse alteracin en las protenas