INFORME DE PRCTICA NMERO 3 INTRODUCCIN La prevencin y control de la infeccin requiere de unas actuaciones que van desde una serie

de normas generales de asepsia hasta las actuaciones de profilaxis en el personal sanitario, pasando por la desinfeccin y esterilizacin del material que se utiliza para el diagnstico y tratamiento de los pacientes que acuden a los servicios sanitarios. La esterilizacin es la destruccin o eliminacin completa de toda forma de vida microbiana (incluidos hongos y bacterias esporuladas). Puede llevarse a cabo por procesos fsicos o qumicos. La desinfeccin es el proceso que elimina todos o prcticamente todos los grmenes presentes en los objetos inanimados. La antisepsia comparte los mismos objetivos del anterior pero referidos a grmenes presentes en piel, mucosas u otros tejidos vivos. OBJETIVOS Aprender la tcnica para la preparacin y esterilizacin del material de laboratorio usado en microbiologa. Conocer las diferencias de asepsia, esterilizacin, desinfeccin y antisepsia. Conocer los desinfectantes y antispticos, as como los usos que se dan y los materiales a los que se aplican.

MARCO TERICO La esterilizacin es un proceso esencial para el funcionamiento de un hospital, en el cual se deben utilizar todos los instrumentos quirrgicos, implantes y muchos otros dispositivos absolutamente esterilizados. La desecacin y la congelacin eliminan muchas especies de bacterias, pero otras simplemente permanecen en estado vegetativo. El calor seco o hmedo elimina todas las bacterias combinando adecuadamente factores como la temperatura a la que se someten y el tiempo de exposicin. Se puede esterilizar por calor seco en estufas a ms de 160 C durante media hora, o por calor hmedo en autoclaves a 120 C durante 20 minutos y a presin superior a la atmosfrica. La ebullicin a 100 C no elimina todos los grmenes patgenos (entre los que no slo estn incluidos las bacterias sino tambin virus y levaduras). Otro medio habitual de esterilizacin, utilizado para objetos no resistentes al calor, son los medios qumicos: el cido fnico, iniciador de la era de la antisepsia (vase Fenol), el cido cianhdrico (vase Cianuro de hidrgeno), el xido de etileno, la clorhexidina, los derivados mercuriales, los derivados del yodo (especialmente la povidona yodada) y muchas otras sustancias. El alcohol etlico no produce esterilizacin completa. Otro medio de esterilizacin actual son las radiaciones ionizantes (beta, gamma). 1. Calor seco. Para el material de vidrio y de metal. Estos objetos se someten a una temperatura de 170C durante al menos 90', envueltos en papel o aluminio. 2. Calor hmedo. Se utiliza para soluciones acuosas y plsticos. Este material se somete a una temperatura de 120C durante 20' en una atmsfera de vapor de agua a elevada presin, que evita la ebullicin. Se consigue en el autoclave. 3. Filtracin. Para esterilizar soluciones termolbiles, a las que se hace pasar a travs de un filtro con un tamao de poro que permite el paso de la solucin, pero no de los microorganismos.

4. Esterilizacin qumica. para esterilizar material (generalmente algunos tipos de plstico) que son termolbiles. Se utilizan sustancias como el xido de etileno, que se eliminan una vez finalizado el proceso de esterilizacin. 5. Radiacin. La radiacin UV o las radiaciones a o g pueden utilizarse para esterilizar habitaciones o algunos plsticos. DESINFECCIN: Mtodos: Calor: por ebullicin (hervir agua u otro medio de cultivo lquido a 100 C). Destruye las formas vegetativas de los microorganismos. Puede aplicarse a alimentos y a instrumentos delicados que no soportan el calor intenso como los citoscopios. Radiaciones ultravioleta: lmparas germicidas (accin bactericida y viral). Ultrasonidos. No son muy eficaces como bactericidas. Se utilizan para la extraccin de enzimas y agentes bacterianos o para la liberacin de materia orgnica adherida a fmites antes de su desinfeccin por otro mtodo. Filtracin del aire y flujo laminar. La filtracin del aire mediante mascarilla o tapando los tubos de cultivo con algodn graso o utilizando filtros de HEPA acoplados al aire acondicionado. El flujo laminar hace pasar el aire en forma vertical, horizontal u oblicua y se utilizan junto a los filtros HEPA, en quirfanos y zonas de pacientes con alto riesgo de infeccin para mantener una zona libre de microorganismos. Desinfeccin qumica. Actualmente se denominan germicida, ya que son sustancias que realizan la funcin desinfectante (en objetos inanimados) y, tambin la antisptica (destruye microorganismos en tejidos vivos). Segn sobre el germen sobre el que acta el desinfectante se le denomina fungicida, viral, bactericida, etc.

PRINCIPALES ANTISEPTICOS Y DESINFECTANTES 1) OXIDANTES: a. Derivados clorados. Hipoclorito de sodio, cloraminas y cido hipocloroso. Son irritantes de piel y mucosas y existe una tendencia a sustituirlo por otros productos. b. Povidona Yodada: En forma de solucin jabonosa y tpica. Esta forma de yodo no irrita ni mancha y ha sido ampliamente aceptada en los ltimos aos para una gran variedad de aplicaciones preventivas (solucin jabonosa para lavado de manos y bao prequirrgico) y teraputicas (curacin de heridas). 2) REDUCTORES: GLUTARALDEHDO AL 2%. A pesar de su toxicidad, sigue siendo el producto de referencia en desinfeccin de alto nivel. 3) ALCOHOLES: Aunque su accin antimicrobiana es moderada resultan muy tiles en combinacin con otros antispticos (alcohol yodado). 4) OTROS PRODUCTOS: GLUCONATO DE CLORHEXIDINA AL 4% Es un agente bactericida tpico eficaz contra grmenes Gram (+) y Gram (-), pero de mayor eficacia sobre los primeros. CONCLUSIONES La importancia de este laboratorio no solo se basa en la observacin y aprendizaje de la Esterilizacin, desinfeccin, manipulacin e identificacin de materiales, sino de comprender la importancia de los microorganismos y cmo influyen directamente en nuestras vidas. Los grandes hombres de ciencia que se aventuraron a descubrir este mundo oculto, nos proporcionaron todos sus descubrimientos, por los cuales

dedicaron prcticamente toda su vida y que hoy con instrumentos y tcnicas modernas podemos observar, practicar y realizar en los laboratorios. Gracias a estas tcnicas de esterilizacin e desinfeccin, tanto bilogos, como qumicos y cientficos en general han podido identificar, clasificar, para luego estudiar detalladamente, a la inmensa variedad de microorganismos existentes en todos los lugares, Inimaginables que se puedan encontrar. CUESTIONARIO 1. Cules son los mtodos de esterilizacin ms usados en microbiologa? En qu tipo de materiales se aplica cada uno? Los mtodos ms usados corrientemente en los laboratorios microbiolgicos son: Calor rojo (flameado): Los instrumentos tales como las asas y alambres de siembra y varillas secas se esterilizan calentndolas en la llama del mechero bunsen hasta que se ponga rojo. Calor seco (aire caliente): Se aplica en un horno calentado elctricamente que se controla mediante termostatos y que estn provistos de un gran ventilador circulante que asegura la uniformidad de la temperatura en todas las partes del contenido. Los equipos modernos pueden llevar la temperatura al nivel requerido, este dispositivo salvaguarda y protege al personal de quemaduras accidentales. El material que puede esterilizarse por este mtodo incluye placas petri, matraces, pipetas de vidrio y objetos de metal. El aire no es buen conductor del calor, por lo que las estufas deben cargarse sin apretar el contenido, de forma que queden abundantes espacios para permitir que circule el aire caliente. Cuando se calculan los tiempos de funcionamiento para el equipo de esterilizacin por aire caliente, deben considerarse tres periodos. El periodo de asenso de temperatura, que es el tiempo necesario para que toda la carga alcance la temperatura de esterilizacin; puede llevar alrededor de una hora. Los periodos de mantenimiento a las diferentes temperaturas de esterilizacin recomendadas son 160C durante 45 minutos, 170C durante 18 minutos, 180C durante 7 minutos y 190C durante 1 minutos. El periodo de enfriamiento, que se realiza gradualmente para prevenir la rotura del material de vidrio como consecuencia de un descenso demasiado rpido de temperatura; este periodo lleva dos horas. Vapor a presin (calor hmedo): Se realiza mediante la esterilizacin en autoclave. Las bacterias se matan ms fcilmente por el calor hmedo que por calor seco. El vapor mata las bacterias por desnaturalizacin de protenas. Una condicin de seguridad convenida para la esterilizacin es utilizar vapor a 121C durante 15 a 20 minutos. El aire tiene influencia importante en la eficacia de la esterilizacin, porque su presencia modifica la relacin presin/temperatura, adems, la existencia de bolsas de aire impedir la penetracin del vapor, debe de eliminarse todo el aire primero todo el aire que rodea y penetra en la carga antes de que pueda comenzar la esterilizacin por vapor. Vapor fluente (tyndallizacin): Esterilizacin por accin discontinua del vapor de agua, se basa en el principio de Tyndall Las bacterias que resisten una sesin de calefaccin, hecha en determinadas condiciones, pueden ser destruidas cuando la misma operacin se repite con intervalos separados y en varias sesiones. Se efecta por medio del autoclave de Chamberland, dejando abierta la vlvula de escape, o sea funcionando a la presin normal. Puede tambin realizarse a temperaturas ms bajas, 56 u 80 para evitar la descomposicin de las sustancias a esterilizar, por las temperaturas elevadas.

2. Explique cules son las diferencias entre los procesos de esterilizacin, desinfeccin y asepsia. ESTERILIZACIN: Es el conjunto de procedimientos que destruyen los grmenes, impiden su desarrollo y evitan la contaminacin; este trmino se aplica en general a los objetos fcilmente manipulables No existen grados de esterilizacin; un elemento est estril o no lo est, es decir que los trminos bien y mal esterilizados son ilgicos, pues si pensamos que algo est bien esterilizado basta con que digamos que est estril, y si pensamos que est mal esterilizado es porque contiene alguna forma de vida microbiana convirtindose en fuente de infeccin, por lo tanto no est estril. Es imprescindible que durante la esterilizacin se deterioren lo menos posible los materiales que sometemos a dicho proceso. DESINFECCIN: Es la destruccin de formas vegetativas de microorganismos en objetos inanimados y no necesariamente esporas. Se realiza por mtodos qumicos fsicos. ASEPSIA: El prefijo "a" significa negacin, falta o ausencia; y "sepsis" infeccin o contaminacin; por lo tanto el trmino asepsia se define como la ausencia de materia sptica, es decir la falta absoluta de grmenes.

3. Mencione y esquematice los tipos de autoclave que existen, indicando el fundamento de su funcionamiento. TIPOS DE AUTOCLAVE nicamente deben usarse autoclaves diseados para trabajo de laboratorio y que puedan recibir carga mixta. Los autoclaves de carga porosa y los esterilizadores de lquidos embotellados son raramente satisfactorios para el trabajo de laboratorio. Existen dos variedades de autoclave de laboratorio: El tipo de olla a presin. Los modelos de desplazamiento de la gravedad con descarga automtica de aire y vapor condensado. OLLA A PRESION: Se utilizan todava en muchas partes del mundo. El tipo ms comn es un aparato para agua hirviendo a presin. Tiene una cmara vertical de metal provista de una tapa metlica fuerte que se aprieta y cierra hermticamente mediante un aro de goma. Se disponen en la tapa una espita para la salida del aire y del vapor, un indicador de presin y una vlvula de seguridad. El agua del fondo del autoclave se calienta mediante mecheros de gas exteriores, un calentador elctrico de inmersin o un serpentn de vapor. INSTRUCCIONES PARA EL FUNCIONAMIENTO: Debe haber agua suficiente dentro de la cmara. Se carga el autoclave y se aprieta la tapa manteniendo la espita de descarga abierta. Se ajusta seguidamente la vlvula de seguridad a la temperatura requerida y se conecta la fuente de calor. Cuando el agua hierva, fluir vapor por la espita de descarga, arrastrando con l el aire existente en la cmara. Se deja que salgan libremente el aire y el vapor hasta que se haya eliminado todo el aire. Puede comprobarse que se ha eliminado fijando un extremo de un trozo de tubo de goma a la espita de descarga e introduciendo el otro extremo en un cubo u otro recipiente similar que contenga agua. El vapor se condensa en el agua y las burbujas de aire salen a la superficie; cuando se ha eliminado todo el

aire de la cmara, cesa el burbujeo en el cubo. Cuando se ha alcanzado esta fase, se cierra la espita de descarga de aire vapor y se quita el tubo de goma. La presin del vapor se eleva en la cmara hasta que la presin deseada, generalmente 1,054 kg/cm2, se alcanza y fluye vapor por la vlvula de seguridad. Cuando la carga ha alcanzado la temperatura requerida, se mantiene la presin durante 15 minutos. Al trmino del perodo de esterilizacin, se apaga el calentador y se deja que el autoclave se enfre. Se abre la espita de descarga de aire vapor muy lentamente una vez que el indicador de presin ha llegado a cero (presin atmosfrica). Si la espita se abre demasiado pronto, cuando el autoclave est todava bajo presin, cualquier lquido que haya en su interior (medios de cultivo lquidos, etc.), hervir de forma explosiva e incluso pueden explosionar las botellas que contengan lquidos. Se deja que el contenido se enfre. Segn la naturaleza de los materiales que se estn esterilizando, el perodo de enfriamiento necesario puede ser de varias horas para que los grandes frascos de agar se enfren hasta 80C y puedan cogerse con la mano sin riesgo. AUTOCLAVES CON ELIMINACION DEL AIRE POR DESPLAZAMIENTO DE LA GRAVEDAD: Estos autoclaves estn por lo general dispuestos horizontalmente y son de forma rectangular, permitiendo que la cmara se cargue ms fcilmente. Puede utilizarse un sistema de bandejas y carretilla. El dibujo situado ms abajo presenta en forma esquemtica un tipo de autoclave de desplazamiento de gravedad, revestido de una camisa. Autoclaves similares pueden construirse sin camisa. La puerta debe tener un mecanismo de seguridad que impida pueda ser abierta mientras la cmara est bajo presin. La camisa que rodea al autoclave est compuesta de una pared externa que encierra un espacio estrecho alrededor de la cmara, que se llena con vapor a presin para mantener la pared de la cmara templada. El vapor penetra en la camisa desde la fuente principal que se halla a alta presin, a travs de una vlvula que

reduce la presin hasta el nivel de funcionamiento. La presin de funcionamiento se mide en un indicador de presin independiente fijado a la camisa. Esta camisa tiene un drenaje independiente para eliminar el aire y la condensacin. El vapor penetra en la cmara de la misma fuente que suministra el vapor a la camisa. Se introduce de forma tal que es desviado hacia arriba y llena la cmara desde la parte superior hacia la inferior, impulsando as al aire y al condensado a fluir en el fondo de la cmara por el desplazamiento de la gravedad. El desage est provisto de filtros para impedir que se obture por residuos. El desage lleva generalmente un termmetro para registrar la temperatura del vapor que fluye. La temperatura registrada por el termmetro del desage es generalmente inferior a la de la cmara. La diferencia debe determinarse mediante ensayos con termopares. Tambin cuenta con una vlvula sensible al vapor. La vlvula automtica de vapor o sensible al vapor est diseada para asegurar que nicamente se retiene dentro de la cmara vapor saturado y que el aire y el lquido condensado, se eliminan automticamente. Recibe el nombre de near-to-steam sensible al vapor porque se abre si la temperatura desciende unos 2C por debajo de la del vapor saturado y se cierra alrededor de los 2C por encima de la temperatura del vapor saturado. El sifn funciona por expansin y contraccin de un fuelle metlico que abre y cierra una vlvula. El desage descarga en un embudo, de tal forma que hay una separacin entre el desage y el embudo. Esta disposicin asegura que no retroceder agua contaminada desde la tubera a la cmara. INSTRUCCIONES PARA EL FUNCIONAMIENTO: Si el autoclave est provisto de camisa, esta camisa debe llevarse a la temperatura de funcionamiento en primer lugar. Se carga la cmara, se cierra la puerta y se abre la vlvula de vapor, dejando que la corriente de vapor entre la parte superior de la cmara. El aire y el agua de condensacin fluyen a travs del desage del fondo. Cuando el termmetro del desage llegue a la temperatura requerida, debe dejarse un tiempo adicional para que la carga alcance dicha temperatura. Este tiempo debe determinarse inicialmente y peridicamente para cada autoclave, como ya se indicar ms adelante. Salvo que se haga esto, es poco probable que la carga se esterilice. Se prosigue el ciclo del autoclave para el tiempo de mantenimiento. Cuando se ha completado, se cierran las vlvulas de vapor y se deja que el autoclave se enfre hasta que el indicador de temperatura seala 80C. No debe abrirse el autoclave hasta este momento. Al principi s entreabrir o abrir muy ligeramente y se mantendr en esa posicin durante varios minutos para permitir que salga el vapor y se enfre posteriormente la carga.

BIBLIOGRAFA http://es.scribd.com/doc/28511179/EsterilizaciOn-DesinfecciOn-y-Tratamiento-de-Los-Materiales http://html.rincondelvago.com/autoclave.html http://www.monografias.com/trabajos24/esterilizacion-laboratorio/esterilizacion-laboratorio.shtml http://www.slideshare.net/jesusarriagac/asepsia-medios-de-esterilazion-y-desinfeccion http://personal.us.es/cruzrojo/esterilizacion.pdf