Uso General del Laboratorio

Normas generales de uso del laboratorio

Para el desarrollo de las prcticas es conveniente tener en cuenta algunas normas elementales que deben ser observadas con toda escrupulosidad. 1. Antes de realizar una prctica, debe leerse detenidamente para adquirir una idea clara de su objetivo, fundamento y tcnica. Los resultados deben ser siempre anotados cuidadosamente apenas se conozcan. 2. El orden y la limpieza deben presidir todas las experiencias de laboratorio. En consecuencia, al terminar cada prctica se proceder a limpiar cuidadosamente el material que se ha utilizado. 3. Cada grupo de prcticas se responsabilizar de su zona de trabajo y de su material. 4. Antes de utilizar un compuesto hay que fijarse en la etiqueta para asegurarse de que es el que se necesita y de los posibles riesgos de su manipulacin. 5. No devolver nunca a los frascos de origen los sobrantes de los productos utilizados sin consultar con el profesor. 6. No tacar con las manos y menos con la boca los productos qumicos. 7. Todo el material, especialmente los aparatos delicados, como lupas y microscopios, deben manejarse con cuidado evitando los golpes o el forzar sus mecanismos. 8. Los productos inflamables (gases, alcohol, ter, etc.) deben mantenerse alejados de las llamas de los mecheros. Si hay que calentar tubos de ensayo con estos productos, se har al bao Mara, nunca directamente a la llama. Si se manejan mecheros de gas se debe tener mucho cuidado de cerrar las llaves de paso al apagar la llama. 9. Cuando se manejan productos corrosivos (cidos, lcalis, etc.) deber hacerse con cuidado para evitar que salpiquen el cuerpo o los vestidos. Nunca se vertern bruscamente en los tubos de ensayo, sino que se dejarn resbalar suavemente por su pared. 10. Cuando se quiera diluir un cido, nunca se debe echar agua sobre ellos; siempre al contrario: cido sobre agua. 11. Cuando se vierta un producto lquido, el frasco que lo contiene se inclinar de forma que la etiqueta quede en la parte superior para evitar que si escurre lquido se deteriore dicha etiqueta y no se pueda identificar el contenido del frasco. 12. No pipetear nunca con la boca. Se debe utilizar la bomba manual, una jeringuilla o artilugio que se disponga en el Centro. 13. Las pipetas se cogern de forma que sea el dedo ndice el que tape su extremo superior para regular la cada de lquido. 14. Al enrasar un lquido con una determinada divisin de escala graduada debe evitarse el error de paralaje levantando el recipiente graduado a la altura de los ojos para que la visual al enrase sea horizontal.

15. Cuando se calientan a la llama tubos de ensayo que contienen lquidos debe evitarse la ebullicin violenta por el peligro que existe de producir salpicaduras. El tubo de ensayo se acercar a la llama inclinado y procurando que sta acte sobre la mitad superior del contenido y, cuando se observe que se inicia la ebullicin rpida, se retirar, acercndolo nuevamente a los pocos segundos y retirndolo otra vez al producirse una nueva ebullicin, realizando as un calentamiento intermitente. En cualquier caso, se evitar dirigir la boca del tubo hacia la cara o hacia otra persona. 16. Cualquier material de vidrio no debe enfriarse bruscamente justo despus de haberlos calentado con el fin de evitar roturas. 17. Los cubreobjetos y portaobjetos deben cogerse por los bordes para evitar que se engrasen.

Manejo y Uso del Microscopio

El Microscopio ptico compuesto
PARTES DE UN MICROSCOPIO PTICO

Sistema ptico o OCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador. Ampla la imagen del objetivo. o OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparacin. Ampla la imagen de sta. o CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparacin. o DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador. o FOCO: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador. Sistema mecnico o SOPORTE: Mantiene la parte ptica. Tiene dos partes: el pie o base y el brazo. o PLATINA: Lugar donde se deposita la preparacin. o CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular, binocular, .. o REVLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar, cambiar los objetivos o TORNILLOS DE ENFOQUE: Macromtrico que aproxima el enfoque y micromtrico que con correcto.

MANEJO Y USO DEL MICROSCOPIO PTICO

1. Colocar el objetivo de menor aumento en posicin de empleo y bajar la platina completamente. Si el m recogi correctamente en el uso anterior, ya debera estar en esas condiciones. 2. Colocar la preparacin sobre la platina sujetndola con las pinzas metlicas. 3. Comenzar la observacin con el objetivo de 4x (ya est en posicin) o colocar el de 10 aumentos (10x) es de bacterias. 4. Para realizar el enfoque:

a. Acercar al mximo la lente del objetivo a la preparacin, empleando el tornillo macromtrico. E mirando directamente y no a travs del ocular, ya que se corre el riesgo de incrustar el objetivo pudindose daar alguno de ellos o ambos. b. Mirando, ahora s, a travs de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la preparaci

macromtrico y, cuando se observe algo ntida la muestra, girar el micromtrico hasta obtener u 2. Pasar al siguiente objetivo. La imagen debera estar ya casi enfocada y suele ser suficiente con mover u micromtrico para lograr el enfoque fino. Si al cambiar de objetivo se perdi por completo la imagen, e volver a enfocar con el objetivo anterior y repetir la operacin desde el paso 3. El objetivo de 40x enfo distancia de la preparacin y por ello es fcil que ocurran dos tipos de percances: incrustarlo en la prep descuidan las precauciones anteriores y mancharlo con aceite de inmersin si se observa una preparaci enfoc con el objetivo de inmersin. 3. Empleo del objetivo de inmersin:

a. Bajar totalmente la platina. b. Subir totalmente el condensador para ver claramente el crculo de luz que nos indica la zona qu visualizar y donde habr que echar el aceite. c. Girar el revlver hacia el objetivo de inmersin dejndolo a medio camino entre ste y el de x40 d. Colocar una gota mnima de aceite de inmersin sobre el crculo de luz. e. Terminar de girar suavemente el revlver hasta la posicin del objetivo de inmersin. f. Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la lente toca la gota de a momento se nota como si la gota ascendiera y se adosara a la lente. g. Enfocar cuidadosamente con el micromtrico. La distancia de trabajo entre el objetivo de inmer preparacin es mnima, aun menor que con el de 40x por lo que el riesgo de accidente es muy g h. Una vez se haya puesto aceite de inmersin sobre la preparacin, ya no se puede volver a usar e sobre esa zona, pues se manchara de aceite. Por tanto, si desea enfocar otro campo, hay que ba repetir la operacin desde el paso 3. i. Una vez finalizada la observacin de la preparacin se baja la platina y se coloca el objetivo de girando el revlver. En este momento ya se puede retirar la preparacin de la platina. Nunca se objetivo de inmersin en posicin de observacin. j. Limpiar el objetivo de inmersin con cuidado empleando un papel especial para ptica. Compro el objetivo 40x est perfectamente limpio. MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES

1. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posicin de observacin, la parte mecnica de la platina no sobresale del borde de la misma y dejarlo cubierto con su funda. 2. Cuando no se est utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto con su funda para evitar que daen las lentes. Si no se va a usar de forma prolongada, se debe guardar en su caja dentro de un armar del polvo. 3. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy suavemente con un papel con un papel de ptica. 4. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se est utilizando el microscopio. 5. Despus de utilizar el objetivo de inmersin, hay que limpiar el aceite que queda en el objetivo con pa para ptica o con papel de filtro (menos recomendable). En cualquier caso se pasar el papel por la lent sentido y con suavidad. Si el aceite ha llegado a secarse y pegarse en el objetivo, hay que limpiarlo con alcohol-acetona (7:3) o xilol. No hay que abusar de este tipo de limpieza, porque si se aplican estos dis exceso se pueden daar las lentes y su sujecin. 6. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macromtrico, micromtrico, platina, revlver 7. El cambio de objetivo se hace girando el revlver y dirigiendo siempre la mirada a la preparacin para de la lente con la muestra. No cambiar nunca de objetivo agarrndolo por el tubo del mismo ni hacerlo

observando a travs del ocular. 8. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algn lquido, secarlo con u mancha de aceite, limpiarla con un pao humedecido en xilol. 9. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesin prctica y, al acabar el un tcnico un ajuste y revisin general de los mismos.

Preparacin de colorantes
1. Acido-Alcohol: (decolorante para tincin Ziehl-Neelsen)
o o

2.

3.

4.
5.

6.

7.

8.

9.

cido clorhdrico concentrado ..........................................................3 ml Etanol 95% ....................................................................................97 ml Azul de metileno: Colorante de contraste para tincin de flagelos. o Azul de metileno................................................................................1 g o Agua destilada...............................................................................100 ml Azul de metileno de Loeffler: Tinciones simples. o Solucin de hidrxido potsico al 1%.................................................1 m o Azul de metileno, sol. saturada en etanol al 95%...............................30 m o Agua destilada...............................................................................100 ml Colorante para esporas: o Solucin acuosa saturada de verde malaquita Colorante para flagelos de Leifson: o Solucin A Fucsina bsica .........................................................................1,2 Etanol 95%.............................................................................100 o Solucin B cido tnico................................................................................3 Agua destilada.........................................................................100 o Solucin C Cloruro sdico..........................................................................1,5 Agua destilada.........................................................................100 Para preparar la solucin de uso, se mezclan cantidades iguales d A, B y C y se guarda en frasco cerrado hermticamente en la nev estable durante varias semanas. Cristal violeta: Para tincin Gram y tincin simple. o Cristal violeta (violeta de genciana)....................................................0,5 o Agua destilada.................................................................................100 m Eosina: Para observacin de clulas sanguneas. o Eosina...............................................................................................0,3 g o cido actico glacial......................................................................0,025 m o Agua destilada...................................................................................100 m Fucsina diluida: Para tincin Gram y tincin simple. o Fucsina fenicada de Ziehl-Neelsen......................................................10 m o Agua destilada.................................................................................100 m Fucsina fenicada de Ziehl-Neelsen: Para tincin cido-alcohol resistente.

Fucsina bsica......................................................................................1 g Etanol 95%........................................................................................10 m Fenol 5% en solucin acuosa............................................................100 m 10. Hematoxilina: Para observacin de clulas sanguneas. o Hematoxilina.........................................................................................2 g o Agua destilada......................................................................................1 l 11. Lactofenol: Para preparaciones microscpicas en fresco de mohos. o cido lctico.....................................................................................100 m o Fenol................................................................................................100 g o Glicerol.............................................................................................200 m o Agua.................................................................................................100 m 12. Lactofenol al Azul Algodn: Para preparaciones en fresco y tinciones de moho o Solucin de azul algodn Sol. saturada de azul algodn (azul anilina soluble)..................... Glicerol.....................................................................................10 Agua.........................................................................................80 Mezclar esta solucin con lactofenol a partes iguales 13. Lugol: Solucin de yodo para tincin Gram. o Yodo...................................................................................................1 g o Yoduro potsico..................................................................................2 g o Agua destilada.................................................................................300 m 14. Orcena A: Tincin de cromosomas. o Orcena................................................................................................2 g o cido actico.....................................................................................45,8 o cido clorhdrico 1 mol/l......................................................................8,3 o Agua..................................................................................................45,8 15. Orcena B: Tincin de cromosomas. o Orcena................................................................................................2 g o cido actico.....................................................................................55 m o Agua..................................................................................................55 m 16. Safranina: Colorante de contraste para tincin Gram (preferible a la fucsina) y o Safranina.........................................................................................0,25 g o Agua destilada..................................................................................100 m 17. Sudn III: Tincin especfica de grasas. o Alcohol etlico...................................................................................100 m o Sudn III...................................................................................hasta satur
o o o

18. Verde de metilo actico: Igual composicin que la eosina (num. 7)

Preparacin de un frotis bacteriano

Se denomina frotis a la extensin que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o cultivo con objeto de separar lo ms posible los microorganismos, ya que si aparecen agrupados en la preparacin es muy difcil obtener una imagen clara y ntida. Este frotis debe ser posteriormente fijado al vidrio del portaobjetos para poder aplicar los mtodos habituales de tincin que permiten la observacin al microscopio de las bacterias sin que la muestra sea arrastrada en los sucesivos lavados. La fijacin de una extensin bacteriana hace que las bacterias queden inactivadas y adheridas al vidrio alterando lo menos posible la morfologa y bacteriana y las posibles agrupaciones de clulas que pudiera haber. REALIZACIN DEL FROTIS 1. Colocar una pequea gota de agua en el centro de un portaobjetos limpio. Es necesaria muy poca cantidad de agua, por lo que se puede usar el asa de siembra, ya que en el extremo curvo de su filamento queda retenida una mnima gota de agua, que resulta suficiente. 2. Flamear el asa de siembra, tomar, en condiciones aspticas, una pequea cantidad del cultivo bacteriano en medio slido y transferirlo a la gota de agua. Remover la mezcla con el asa de siembra hasta formar una suspensin homognea que quede bastante extendida para facilitar su secado. Si la muestra se toma de un cultivo en medio lquido, no es necesario realizar los dos primeros pasos ya que basta con colocar y extender una gota de la suspensin bacteriana, que se toma con el asa de siembra, directamente sobre el portaobjetos. 3. Esperar hasta que el lquido se evapore o acelerar su evaporacin acercando el porta a la llama del mechero. En este caso hay que tener mucha precaucin de no calentar demasiado el porta pues las clulas pueden deformarse o romperse. FIJACIN DE LAS BACTERIAS AL PORTAOBJETOS 4. Por calor: Pasar tres veces el portaobjetos por la llama durante unos segundos. Dejar enfriar el porta entre los pases. 5. Con metanol (para bacterias procedentes de medio lquido). Aadir unas gotas de metanol sobre la extensin completamente seca. Golpear el portaobjetos por su canto con cuidado contra la mesa de trabajo para retirar de inmediato el exceso de metanol. Esperar a que el metanol se evapore completamente. Una vez realizado el frotis y fijadas las bacterias, las preparaciones pueden ser observadas al microscopio, aunque carecen de contraste. Lo normal es continuar con el proceso de tincin. TINCIN DEL FROTIS BACTERIANO

6. Cubrir el frotis con abundante colorante y dejarlos actuar durante el tiempo que indique el protocolo de cada tincin concreta. Suele oscilar entre 1 y 5 minutos. En ocasiones el colorante tie slo en caliente, por lo que el tiempo que dure su actuacin se deber sostener el portaobjetos con unas pinzas sobre la llama del mechero para que humee el colorante, pero teniendo mucho cuidado de que no llegue a hervir ya que se producira la destruccin de las clulas. 7. Lavar la preparacin con agua para eliminar el colorante. Esta operacin se realiza inclinando el portaobjetos y aplicando el chorro de agua en su parte superior de manera que resbale sobre el frotis, pero sin que vaya dirigido directamente sobre l, pues podra arrastrar parte del frotis consigo. Eliminar la mxima cantidad de agua de los portaobjetos golpendolos por su canto con cuidado contra la superficie de la mesa de trabajo. 8. Secar el porta presionando entre dos papeles de filtro, pero en ningn caso se debe frotar el porta. 9. Observar la preparacin al microscopio llegando hasta el mximo aumento. Si se quiere montar de forma definitiva no se debe usar ahora el aceite de inmersin. MONTAJE DEFINITIVO DE LA PREPARACIN La tcnica siguiente es de aplicacin para cualquier preparacin microscpica que se desee montar de forma definitiva. Se anotar en un extremo del portaobjetos el contenido de la preparacin, la fecha y, en su caso, el nombre del alumno. 10. Pasar sucesivamente los portaobjetos por las siguientes soluciones mantenindolos un mnimo de 5 minutos en cada bao. La serie de alcoholes puede modificarse en funcin de la disponibilidad de los reactivos, pero el objetivo es que la preparacin quede totalmente deshidratada. Escurrir bien el reactivo antes de introducirlo en el siguiente bao. a. b. c. d. e. Alcohol de 70 Alcohol de 95 Acetona pura Acetona-xilol (1:1) Xilol

11. Montar la preparacin. Emplear blsamo de Canad, euparal o algn medio de montaje sinttico. Utilizar preferiblemente cubreobjetos de 22x22 mm Observacin de bacterias OBJETIVOS 1. Realizar una tincin simple de bacterias procedentes de distintas muestras naturales. 2. Realizar dos tipos de fijaciones bacterianas y saber en qu casos se

recomienda una u otra. 3. Observar la morfologa bacteriana y aprender a distinguir los distintos tipos de agrupaciones que existen. 4. Practicar con el microscopio al mximo aumento y con el correcto empleo del aceite de inmersin. MATERIAL

Mechero Bunsen o de alcohol Asa de siembra o aguja enmangada Pinzas Portaobjetos Muestras bacterianas de origen natural: yogur, vinagre, sarro dental, suelo, etc.

Colorantes para tincin: a) Solucin de cristal violeta al 1% b) Solucin de safranina al 0,5% c) Azul de metileno al 1% Microscopio y aceite de inmersin

BACTERIAS DEL YOGUR El yogur es un producto lcteo producido por la fermentacin natural de la leche. A escala industrial se realiza la fermentacin aadiendo a la leche dosis del 3-4% de una asociacin de dos cepas bacterianas: el Streptococcus termophilus, poco productor de cido, pero muy aromtico, y el Lactobacillus bulgaricus, muy acidificante. En esta preparacin se podrn, por tanto, observar dos morfologas bacterianas distintas (cocos y bacilos) y un tipo de agrupacin (estreptococos, cocos en cadenas arrosariadas). Adems, el tamao del lactobacilo (unos 30m de longitud) facilita la observacin aunque no se tenga mucha prctica con el enfoque del microscopio. 1. Realizar el frotis disolviendo una mnima porcin de yogur en una pequea gota de agua. 2. Fijar con metanol para eliminar parte de la grasa. 3. Teir con un colorante cualquiera de los arriba indicados durante 1-2 minutos. 4. Observar al mximo aumento del microscopio. BACTERIAS DEL VINAGRE El vinagre es una solucin acuosa rica en cido actico resultante de la fermentacin espontnea del vino o de bebidas alcohlicas de baja graduacin. La acetificacin del vino es producida por bacterias aerbicas del cido actico, principalmente Acetobacter aceti, aunque tambin Gluconobacter. Se trata de bacilos rectos con flagelos polares. 1. Tomar con una aguja enmangada una pequea porcin de madre de vinagre natural o de la telilla que se forma sobre la superficie de los vinos agriado. 2. Extender la muestra en el portaobjetos con una gota de agua y hacer el frotis. 3. Dejar secar y fijar con calor.

4. Teir 2-3 minutos, lavar el exceso de colorante y secar. BACTERIAS DEL SARRO DENTAL El sarro dental es un depsito consistente y adherente localizado sobre el esmalte de los dientes. Est constituido principalmente por restos proteicos, sales minerales y bacterias junto con sus productos metablicos. La flora bacteriana de la cavidad bucal es muy variable dependiendo de las condiciones que se den en el momento de hacer la preparacin, pero suelen abundar bacterias saprfitas, pudindose observar gran variedad de morfologas: espiroquetas, cocobacilos, diplococos y bacilos. 1. Con una aguja enmangada tomar una pequea porcin de sarro dental y disolverla en una gota de agua sobre el portaobjetos. 2. Dejar secar y fijar con calor. 3. Teir 2-3 minutos, lavar el exceso de colorante y secar. BACTERIAS DEL SUELO La variedad de bacterias que pueden aparecer en una muestra de suelo es prcticamente infinita, muchas de ellas no cultivables en los laboratorios y algunas, incluso, desconocidas para los microbilogos. Para recoger la muestra y hacer el frotis basta con dejar parcialmente enterrado en vertical un portaobjetos en la tierra de una maceta o de un jardn. Despus de varios das, las bacterias se habrn adherido al vidrio y slo habr que fijarlas por calor y teirlas con un colorante cualquiera. Previamente hay que limpiar los bordes del portaobjetos, as como la parte que no se va a teir.

Gemacin de levaduras
MATERIAL

Microscopio Portaobjetos Cubreobjetos Levadura

Agua azucarada Aguja enmangada Lactofenol-safranina

TCNICA 1. Disolver con ayuda de una aguja enmangada un poco de levadura sobre un porta que contenga 2 o 3 gotas de agua ligeramente azucarada. 2. Colocar el cubreobjetos y observar al microscopio. 3. Repetir los pasos anteriores mezclando sobre el portaobjetos la suspensin acuosa de la levadura con una gota de lactofenol-safranina. Con este procedimiento se consigue una doble finalidad: o Ver mejor las clulas de las levaduras, teidas por la safranina. o Retrasar un poco el desprendimiento de las clulas hijas gracias a la accin desfavorable del fenol para la vida normal de las levaduras. RESULTADOS Las siguientes fotos han sido obtenidas a partir de preparaciones teidas con azul de metileno y no con lactofenol-safranina.

Observacin microscpica de hongos

OBJETIVOS 1. Realizar preparaciones en fresco y en cinta adhesiva de distintas especies de mohos. 2. Observar la morfologa de los hongos y distinguir entre hifas septadas y no septadas y entre distintos tipos de esporas y las estructuras que las originan MATERIAL

Microscopio Portaobjetos y cubreobjetos (22x22 mm) muy limpios y desengrasados con alcohol Aguja enmangada o lanceta

Trozo enmohecido de fruta o pan o un cultivo de hongos Solucin de lactofenol al azul algodn Cinta adhesiva transparente

PREPARACIN EN FRESCO DE MOHOS TCNICA 1. Colocar sobre un portaobjetos una gota de solucin de lactofenol no demasiado grande para evitar que el cubreobjetos flote y la preparacin quede demasiado gruesa. Realizar la misma operacin en otro portaobjetos que se usar para lavar la muestra. 2. Tomar el material a observar en una mnima cantidad con agujas finas o lancetas procurando arrancarlo desde la base y disponerlo con cuidado sobre la gota de uno de los portaobjetos. Con esta especie de lavado se consigue desprender el exceso de conidios que casi siempre llenan estas preparaciones y que impiden ver lo que realmente interesa, los conidiforos. 3. Transportar el material con la lanceta a la gota del segundo portaobjetos que ser ya el definitivo. Si se trata de hongos con picnidios (estructuras globosas tapizadas en su interior por los conidiforos), se aplastarn stos ligeramente sobre la gota o se seccionarn con un bistur. 4. Con agujas muy finas se distribuye el material en la gota de manera que no quede amontonado. 5. Colocar el portaobjetos poco a poco y empezando por un lado para evitar que se formen burbujas entre los dos vidrios. PREPARACIN EN CINTA ADHESIVA TCNICA 1. Colocar sobre un portaobjetos una gota de solucin de lactofenol no demasiado grande para evitar que el cubreobjetos flote y la preparacin quede demasiado gruesa. 2. Cortar un trozo de cinta adhesiva transparente de aproximadamente 2cm.

3. Tocar con el lado adhesivo de la cinta la superficie de la fruta o el pan enmohecidos o el borde de una colonia de hongo de un cultivo. En la zona central de una colonia puede haber una excesiva concentracin de esporas. 4. Pegar la cinta adhesiva sobre la gota del portaobjetos. 5. Eliminar el colorante sobrante con un papel de filtro. RESULTADOS Moho del Jitomate

REPRODUCCIN ASEXUAL EN LEVADURAS Y OBSERVACIN DE GAMETOS EN FLORES

INTRODUCCIN: Una cuartilla sobre las caractersticas de la reproduccin asexual y la sexual. OBJETIVO: Que el alumno observe en el microscopio la gemacin en levaduras como ejemplo de reproduccin asexual y gametos en plantas como ejemplo de clulas sexuales.

MATERIAL: Microscopio ptico Microscopio de diseccin Portaobjetos Cubreobjetos Goteros Agujas de diseccin Cajas Petri

Bistur Pulque Flor con estructuras femeninas y masculinas PROCEDIMIENTO: 1. Elabora una preparacin con una gota de pulque sobre el portaobjetos, coloca encima un cubreobjetos y observa a 10x y 40x, encontrars levaduras (hongos unicelulares) localiza aquellas que estn en gemacin, en la misma preparacin podrs observar bacterias en forma de filamentos ondulados, registra ambas observaciones en tus resultados. 2. En una caja de Petri realiza con ayuda de tu profesora la diseccin del ovario de flor para observar vulos, realiza tus observaciones en el microscopio de diseccin. 3. En las anteras de la flor podrs obtener polen, recoge un poco con una aguja de diseccin, colocalo en un portaobjetos, adele una gota de agua, un cubreobjetos y observa a 10x y 40x, registra tus observaciones RESULTADOS: Observa y realiza esquemas o toma tus fotografas, recuerda poner nombre a todas las estructuras observadas. CONCLUSIONES: Qu aprendiste en la prctica?, mnimo media cuartilla. CUESTIONARIO: 1. Cules son las principales diferencias entre reproduccin asexual y sexual? 2. Qu son las levaduras 3. Por qu estn presentes en el pulque? 4. Por qu encontramos tambin bacterias? 5. Qu gametos observaste en la flor?

1. Que cada alumno y alumna del grupo conozca su grupo sanguineo y el factor rh. 2. Presenciar la tcnica que se utiliza para determinar el grupo sanguineo. (Esta determinacin debe ser realizada por el profesor o profesora) 3. Interpretar dicha tcnica

Solucin anti-A Solucin anti-B Solucin anti-D(anti Rh) Tarjetas de identificacin

Material punzante estril Algodn Agua oxigenada Una gota de sangre

1. Colocar en la tarjeta una gota se suero anti-A, una de anti-B, una mezcla de anti-A y anti-B, y una gota de anti-D, cada una en su casilla correspondiente, como se indica en la FIGURA 1.

FIGURA 1

2. Pinchar la yema del dedo, previa desinfeccin con alcohol o agua oxigenada. Depositar una gotita de sangre en cada casilla y mezclar con los sueros. FIGURA 2.

FIGURA 2 3. Observar los resultados. El grupo sanguineo del individuo corresponder con el de la casilla en la que la sangre haya coagulado. Si el individuo es del grupo AB, la sangre coagular en las tres primeras casillas. Adems, si la sangre coagula en la casilla "anti-D", el individuo ser Rh positivo, de lo contrario ser Rh negativo. Personalmente, prefiero hacer la determinacin del factor Rh en un porta, en el que puedo observar mejor la coagulacin sanguinea. FIGURA 3.

FIGURA 3 En las tarjetas de la FIGURA 4, se puede observar el aspecto que presentan dos casos opuestos. En la tarjeta superior se observa que no existe coagulacin en ninguna casilla. Las tres primeras corresponden a los sueros del grupo sanguineo, por lo que interpretamos que esta persona pertenece al grupo O, la cuarta es la del factor Rh, y al no existir coagulacin interpretamos que es Rh negativo. En la tarjeta inferior, vemos coagulacion en todas las casillas, por lo que de una forma similar interpretamos que el alumno es del grupo sanguineo AB y Rh positivo. (Nota: El grupo sanguineo
AB es poco frecuente, y en el anlisis a 45 alumnos y alumnas, solamente sali en una alumno)

FIGURA 4

El "quiz" de esta prctica se encuentra en los glbulos rojos. Los glbulos rojos o hemates son clulas sanguineas, por lo tanto todos los tenemos. Sin embargo,

en la membrana de los glbulos rojos pueden existir unas proteinas especiales: son las glucoprotenas A y B. As, un glbulo rojo puede tener protena A, protena B, tener ambas o no tener ninguna. De manera que un individuo tendr grupo sanguneo A si sus glbulos rojos tienen la glucoprotena A en su membrana, siguiendo el mismo criterio para el resto de los grupos (si no existe protena, entonces ser de grupo sanguineo O). Estas protenas corresponderan a lo que denominan antgenos. Ahora bien, en el plasma sanguineo tenemos anticuerpos. Evidentemente, un individuo del grupo A no podr tener anticuerpos anti-A, pues sto no sera viable (la sangre coagulara). As :

los individuos los individuos los individuos los individuos

A tendrn anticuerpos anti-B B tendrn anticuerpos anti-A AB no tendrn anticuerpos de este tipo O tienen los dos tipos de anticuerpos.

Grupo sanguineo

AB

Glbulos rojos

En la membrana En el plasma

Antgeno A Anti-B

Antgeno B Anti-A

Antgenos A y B No anticuerpos

No antgenos Anti-A y Anti-B

De la misma manera, el factor Rh es otra protena que existe en los glbulos rojos de algunas personas. Su nombre viene del mono en el que fue descubierta, el macacco rhesus. El factor Rh positivo es un factor hereditario dominante. Este asunto tiene especial importancia en donaciones de sangre. Como hemos visto, un individuo A tiene en su plasma anticuerpos anti-B, as que no podr recibir sangre de un individuo B, pues estos anticuerpos provocaran la coagulacin de la sangre del donante en los vasos sanguineos de la persona

receptora. En la siguiente tabla vemos las compatibilidades a la hora de donar y recibir sangre. Como vemos, el grupo AB puede recibir de cualquier otro grupo y de s mismo, as que se llama "receptor universal". El grupo O ,sin embargo, puede donar a cualquier grupo, as que se conoce como "donante universal"

RECEPTOR
grupo A grupo B grupo AB grupo O D O grupo A SI NO SI NO N grupo B NO SI SI NO A NO SI NO N grupo AB NO T grupo O SI SI SI SI E

Observacin de clulas sanguneas

MATERIALES

Microscopio Portaobjetos Mechero de alcohol Lanceta estril Cubeta de tincin

Frasco lavador Alcohol absoluto Hematoxilina Eosina

TCNICA 1. Con la lanceta estril realizar una puncin en un pulgar. 2. Depositar una gota de sangre en la parte central de un portaobjetos. 3. Colocar un portaobjetos como indica el dibujo y deslizarlo sobre toda la superficie del porta de manera que se pueda obtener una fina pelcula de sangre.

4. Colocar el frotis de sangre sobre la cubeta de tincin y aadir unas gotas de alcohol absoluto y dejar que el alcohol se evapore para fijar la preparacin.

5. Cubrir con unas gotas de hematoxilina y dejar actuar durante 15 minutos. Evitar la desecacin del colorante agregando ms lquido. 6. Lavar la preparacin y aadir unas gotas de eosina dejndola actuar 1 minuto. 7. Volver a lavar hasta que no queden restos de colorante. 8. Dejar secar aireando el porta o bien al calor muy lento de la llama del mechero. 9. Observar al microscopio. OBSERVACIN MICROSCPICA (foto) Al microscopio se vern con un dominio predominante los glbulos rojos, hemates o eritrocitos teidos de color rojo por la eosina (foto). No tienen ncleo y son ms delgados por el centro que por los bordes. Los glbulos blancos o leucocitos se identifican fcilmente por la presencia de ncleo, teido de morado por la hematoxilina. Hay varias clases de leucocitos:
1. Linfocitos (foto): de tamao aproximado al de los glbulos rojos, tienen un solo

ncleo que ocupa casi todo el glbulo. 2. Monocitos: son los leucocitos mayores, poco frecuentes normalmente, ncleo grande, redondo, son los ms mviles y su funcin principal es la fagocitosis. 3. Polimorfonucleares (foto): ncleo fragmentado o arrosariado. Pueden ser eosinfilos, con abundantes granulaciones teidas de rojo por la eosina, neutrfilos y basfilos. Las plaquetas no son visibles ya que precisan una tcnica especial de tincin.

Mitosis en clulas de raz de cebolla

MATERIALES Microscopio Frasco lavador Portaobjetos Mechero de alcohol Cubreobjetos Tijeras Lanceta estril Papel de filtro Cubeta de tincin Vaso de precipitados Aguja enmangada Vidrio de reloj Pinzas Orcena A Palillos

Orcena B

TCNICA 1. Llenar un vaso de precipitados con agua y colocar un bulbo de cebolla sujeto con dos o tres palillos de manera que la parte inferior quede inmersa en el agua. Al cabo de 3-4 das aparecern numerosas raicillas en crecimiento de unos 3 o 4 cm de longitud. 2. Cortar con las tijeras unos 2-3 mm del extremos de las raicillas y depositarlo en un vidrio de reloj en el que se han vertido 2-3 ml de orcena A. 3. Calentar suavemente el vidrio de reloj a la llama del mechero durante unos 8

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minutos, evitando la ebullicin, hasta la emisin de vapores tenues. Con las pinzas tomar uno de los pices o extremos de las raicillas y colocarla sobre un portaobjetos, aadir una gota de orcena B y dejar actuar durante 1 minuto. Colocar el cubreobjetos con mucho cuidado sobre la raz. Con el mango de una aguja enmangada dar unos golpecitos sobre el cubre sin romperlo de modo que la raz quede extendida. Sobre la preparacin colocar unas tiras de papel de filtro, 5 o 6. Poner el dedo pulgar sobre el papel de filtro en la zona del cubreobjetos y hacer una suave presin, evitando que el cubre resbale. Si la preparacin est bien asentada no hay peligro de rotura por mucha presin que se realice. Observar al microscopio.

OBSERVACIN MICROSCPICA (foto x150 / x600) Se realizar a fuertes aumentos. La orcena A reblandece las membranas celulares y la B completa el proceso de tincin. Con la presin sobre el porta de la preparacin se logra una extensin y difusin de las clulas del meristemo de la cebolla. La preparacin presenta el aspecto de una dispersin de clulas por todo el campo que abarca el microscopio. Se observan clulas en diversas fases o estados de divisin celular. Se ven los cromosomas teidos de morado por la orcena. El aspecto reticulado as como el mayor tamao de algunos ncleos corresponde a las clulas que se encontraban en los procesos iniciales de la divisin mittica. Ver secuencia completa

Observacin de clulas de tejido adiposo

MATERIAL

Microscopio Porta y cubreobjetos Bistur o escalpelo Frasco lavador

Cubeta de tincin Tocino u otra grasa animal Formol Sudn III

TCNICA 1. Con ayuda de un bistur, cortar una finsima capa de grasa, colocarla en un porta y cubrirla con unas gotas de formol. Dejar actuar 4 minutos. 2. Lavar la muestra con agua y cubrirla con unas gotas de Sudn III. Dejar actuar unos 5 minutos.

3. Volver a lavar la preparacin con agua, cubrirla con un cubreobjetos y observar al microscopio.

Extraccin "casera" de ADN

(y comparacin con el protocolo normalizado)
La presente prctica se puede realizar perfectamente en una cocina normal de una casa. Es ms, en un laboratorio de un centro de enseanza media es frecuente que no se disponga de aparatos o reactivos necesarios para llevarla a cabo y que, por el contrario, siempre hay en una cocina (nevera con congelador, batidora, hielo, etc.) MATERIAL Y REACTIVOS

Muestra vegetal Agua (destilada o mineral) Sal de mesa Bicarbonato sdico Detergente lquido o champ Alcohol isoamlico a 0C

Batidora Nevera Colador o centrfuga Vaso Tubo de ensayo Varilla fina

FUNDAMENTO La extraccin de ADN de una muestra celular se basa en el hecho de que los iones salinos son atrados hacia las cargas negativas del ADN, permitiendo su disolucin y posterior extraccin de la clula. Se empieza por lisar (romper) las clulas mediante un detergente, vacindose su contenido molecular en una disolucin tampn en la que se disuelve el ADN. En ese momento, el tampn contiene ADN y todo un surtido de restos moleculares: ARN, carbohidratos, protenas y otras sustancias en menor proporcin. Las protenas asociadas al ADN, de gran longitud, se habrn fraccionado en cadenas ms pequeas y separado de l por accin del detergente. Slo queda, por tanto, extraer el ADN de esa mezcla de tampn y detergente, para lo cual se utiliza alcohol isoamlico, probablemente el nico reactivo de esta prctica que no suele haber en una cocina. REALIZACIN 1. Preparar el tampn con los siguientes ingredientes y mantener en la nevera o en un bao de hielo triturado: o 120 ml de agua, si es posible destilada y si no mineral. No usar agua del grifo. o 1,5 g de sal de mesa, preferiblemente pura. o 5 g de bicarbonato sdico. o 5 ml de detergente lquido o champ. 2. Elegir la muestra que va a proporcionar el ADN entre los vegetales que pueda

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haber en la cocina (cebolla, ajo, tomates, etc.) y cortarla en cuadraditos. Triturar la muestra con un poco de agua en la batidora accionando las cuchillas a impulsos de 10 segundos. As se rompern muchas clulas y otras quedarn expuestas a la accin del detergente. Mezclar en un recipiente limpio 5 ml del triturado celular con 10 ml del tampn fro y agitar vigorosamente durante al menos 2 minutos. Separar despus los restos vegetales ms grandes del caldo molecular hacindolo pasar por un colador lo ms fino posible. Lo ideal es centrifugar a baja velocidad 5 minutos y despus pipetear el sobrenadante. Retirar 5 ml del caldo molecular a un tubo de ensayo y aadir con pipeta 10 ml de alcohol isoamlico enfriado a 0C. Se debe dejar escurrir lentamente el alcohol por la cara interna del recipiente, teniendo ste inclinado. El alcohol quedar flotando sobre el tampn. Se introduce la punta de una varilla estrecha hasta justo debajo de la separacin entre el alcohol y el tampn. Remover la varilla hacia delante y hacia atrs y poco a poco se irn enrollando los fragmentos de mayor tamao de ADN. Pasado un minuto retirar la varilla atravesando la capa de alcohol con lo cual el ADN quedar adherido a su estremo con el aspecto de un copo de algodn mojado.

RESULTADOS El producto filamentoso obtenido de la extraccin no es ADN puro ya que, entremezclado con l, hay fragmentos de ARN. Una extraccin "profesional" se realiza aadiendo enzimas que fragmentan las molculas de ARN e impiden que se unan al ADN. Resulta curioso comparar este mtodo de extraccin con el correspondiente protocolo que siguen los laboratorios de anlisis: Protocolo QIAGEN de purificacin de ADN

Diseccin de un pez MATERIAL

Tijeras Escalpelo Cubeta de diseccin

Pez seo (trucha) Aguja enmangada Pinzas

TCNICA

Introduce el pez en la cubeta de diseccin y obsrvalo detenidamente tratando de reconocer las partes ms importantes de su anatoma externa. Realiza un dibujo en el apartado de observaciones. Corta el oprculo y observa en el interior las branquias.

Haz un corte rectangular en un lado; empieza cortando la aleta pectoral . Desde el arranque de dicha aleta y siguiendo una lnea recta, corta hasta la altura del ano (situado delante de la la aleta anal). Realiza ahora un corte vertical hasta llegar al ano. Corta despus desde el ano paralelamente al primer corte hasta llegar a la altura de la base de la aleta pectoral. Termina realizando un corte vertical. Retira el trozo de musculatura y quedarn a la vista las vsceras del pez. Realiza un segundo dibujo.

Estudio del cariotipo humano

Se denomina cariotipo al conjunto de cromosomas de una especie determinada. Su determinacin se realiza observando durante la metafase la dotacin cromosmica de una clula y la obtencin de una fotografa de esta observacin permite investigaciones genticas sobre ese individuo o esa especie. REALIZACIN 1. La figura siguiente representa un cariotipo humano.

2. Recorta cada uno de los cromosomas. 3. Agrpalos de acuerdo con su tamao, forma y bandas de tincin. 4. Identifica cada pareja de homlogos ayudndote del cariotipo ordenado de la figura.

5. Pega cada pareja en una plantilla vaca como la de la figura anterior.

Reconocimiento de lpidos
MATERIALES

Tubos de ensayo Gradilla Varillas de vidrio Mechero Vasos de precipitados Pipetas

Solucin de NaOH al 20% Solucin de Sudn III Tinta china roja Eter, cloroformo o acetona Aceite de oliva

1. SAPONIFICACIN FUNDAMENTO Las grasas reaccionan en caliente con el hidrxido sdico o potsico descomponindose en los dos elementos que las integran: glicerina y cidos grasos. stos se combinan con los iones sodio o potasio del hidrxido para dar jabones, que son en consecuencia las sales sdicas o potsicas de los cidos grasos. En los seres vivos, la hidrlisis de los triglicridos se realiza mediante la accin de enzimas especficos (lipasas) que dan lugar a la formacin de cidos grasos y glicerina. TCNICA . Colocar en un tubo de ensayo 2ml de aceite y 2ml de NaOH al 20%. . Agitar enrgicamente y colocar el tubo al bao Mara de 20 a 30 minutos. . Pasado este tiempo, se pueden observar en el tubo 3 fases: una inferior clara que contiene la solucin de sosa sobrante junto con la glicerina formada, otra intermedia semislida que es el jabn formado y una superior lipdica de aceite inalterado.

2. TINCIN FUNDAMENTO Los lpidos se colorean selectivamente de rojo-anaranjado con el colorante Sudn III. TCNICA 1. 2. 3. 4. 5. Disponer en una gradilla 2 tubos de ensayo colocando en ambos 2ml de aceite. Aadir a uno de los tubos 4-5 gotas de solucin alcohlica de Sudn III. Al otro tubo aadir 4-5 gotas de tinta roja. Agitar ambos tubos y dejar reposar. Observar los resultados: en el tubo con Sudn III todo el aceite tiene que aparecer teido, mientras que en el tubo con tinta, sta se ir al fondo y el aceite no estar teido. 3. SOLUBILIDAD FUNDAMENTO Los lpidos son insolubles en agua. Cuando se agitan fuertemente en ella se dividen en pequesimas gotas formando una emulsin de aspecto lechoso, que es transitoria, pues desaparece en reposo por reagrupacin de las gotitas de grasa en una capa que, por su menor densidad, se sita sobre el agua. Por el contrario, las grasas son solubles en disolventes orgnicos, como el ter, cloroformo, acetona, benceno, etc. TCNICA 1. 2. 3. 4. Poner 2ml de aceite en dos tubos de ensayo. Aadir a uno de ellos 2ml de agua y al otro 2ml de ter u otro disolvente orgnico, Agitar fuertemente ambos tubos y dejar reposar. Observar los resultados: Se ver cmo el aceite se ha disuelto en el ter y, en cambio no lo hace en el agua y el aceite subir debido a su menor densidad. CUESTIONES 1. 2. 3. 4. 5. Qu son los jabones? Cmo se pueden obtener los jabones? Por qu en la saponificacin la glicerina aparece en la fase acuosa? Qu enzima logra en el aparato digestivo la hidrlisis de las grasas? Indica lo que ocurre con la mezcla aceite-Sudn III y aceite-tinta y explica a qu se debe la diferencia entre ambos resultados.

6. Qu ocurre con la emulsin de agua en aceite transcurridos unos minutos de reposo?Y con la de benceno y aceite?A qu se deben las diferencias observadas entre ambas emulsiones?