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Animal Biodiversity and Conservation 32.

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Filogeografa: aplicaciones en taxonoma y conservacin O. DomnguezDomnguez & E. Vzquez Domnguez

DomnguezDomnguez, O. & VzquezDomnguez, E., 2009. Filogeografa: aplicaciones en taxonoma y conservacin. Animal Biodiversity and Conservation, 32.1: 5970. Abstract Phylogeography: applications in taxonomy and conservation. Phylogeography is defined as the discipline that studies the principles and processes that determine the geographical distribution of genealogical lineages. Two of the study areas where phylogeographic approaches are used more and more frequently are taxonomy and conservation. In this review we first present a general description of phylogeography and then discuss how research in taxonomy and conservation has been addressed when using phylogeographic approaches, emphasising in particular the limitations that need to be considered. We include relevant examples of studies with animals in order to help readers acquire the sense and scope of such applications and select the ap propriate study design to meet these objectives. Key words: DNA, Biogeography, Genetic structure, Genealogy. Resumen Filogeografa: aplicaciones en taxonoma y conservacin. La filogeografa se define como la disciplina que estudia los principios y procesos que gobiernan la distribucin geogrfica de los linajes genealgicos. Dos de las reas de estudio donde se utilizan aproximaciones filogeogrficas cada vez con mayor frecuencia son la taxonoma y la conservacin. En esta revisin presentamos primero un resumen general sobre filogeografa y posteriormente discutimos cmo se han llevado al cabo estudios de taxonoma y conservacin empleando aproximaciones filogeogrficas, enfatizando sobre todo las limitaciones que deben considerarse. Incluimos ejemplos relevantes de estudios con animales que permitirn a los lectores conocer el sentido y alcance de dichas aplicaciones y disear adecuadamente estudios con estos objetivos. Palabras clave: ADN, Biogeografa, Estructura gentica, Genealoga. (Received: 6 X 08; Conditional acceptance: 17 II 09; Final acceptance: 31 III 09) Omar DomnguezDomnguez, Lab. de Biologa Acutica, Fac. de Biologa, Edificio "R" planta baja, Ciudad Universitaria, Univ. Michoacana de San Nicols de Hidalgo, Morelia, Michoacn, Mxico. Ella Vzquez Domnguez, Depto. de Ecologa de la Biodiversidad, Inst. de Ecologa, Univ. Nacional Autnoma de Mxico, Apartado Postal 70275, Ciudad Universitaria, Mxico DF, 04510, Mxico. Corresponding author: Ella VzquezDomnguez. Email: evazquez@ecologia.unam.mx

ISSN: 1578665X

2009 Museu de Cincies Naturals

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La filogeografa La filogeografa parte de la idea de que la gran mayora de las especies en la naturaleza exhiben cierto grado de estructura gentica asociada con la geografa. Esta estructura puede ser muy compleja, como en especies que habitan reas de fuerte acti vidad tectovolcnica o paleoclimtica, o de menor complejidad, como el caso de poblaciones con tasas altas de migracin o cuyo aislamiento, hablando en tiempos geolgicos, es relativamente reciente (e.g. ltima glaciacin). De esta forma, es posible detectar la estructura filogeogrfica entre poblaciones cuando la dimensin genealgica es analizada a la par de los eventos geolgicos y geogrficos. Es decir, la estructura filogeogrfica refleja la interaccin entre los procesos demogrficos y genealgicos y la dinmica de los procesos de la tierra (geolgicos o climticos). As, la filogeografa se define como la disciplina que estudia los principios y procesos que gobiernan la distribucin geogrfica de los linajes genealgicos (Avise et al., 1987; Avise, 2000). Este anlisis conjunto de aspectos filogenticos, de gentica de poblaciones y de biogeografa en poblaciones naturales, ha tenido repercusiones importantes en las reas de biologa evolutiva, ecologa y conservacin. Dado que la filogeografa implica el estudio de los aspectos histricos de la actual distribucin de los linajes genealgicos, es considerada como una sub disciplina de la biogeografa histrica, la cual integra conceptos y tcnicas de biologa molecular, gentica de poblaciones, demografa, sistemtica filogentica, etologa y paleontologa (Avise, 2000); o bien es mencionada como parte de la biologa evolutiva, siendo un puente entre la microevolucin (relacio nes tocogenticas) y la macroevolucin (relaciones jerrquicas). Asimismo, dado que en filogeografa se analizan genealogas genticas para determinar el impacto de los eventos histricos en la composicin y estructura gentica de poblaciones actuales, ha logrado revolucionar la interpretacin conjunta de patrones y procesos de la ecologa, la biogeografa y la gentica de poblaciones. A pesar de que la filogeografa se ha utilizado comnmente como una herramienta para esclarecer patrones histricos y evolutivos entre po blaciones de una misma especie, las aproximaciones filogeogrficas tambin pueden ser tiles para inferir procesos demogrficos histricos como flujo gnico, ta mao efectivo poblacional, secuencias de colonizacin, cuellos de botella y tambin para determinar fronteras entre especies e identificar unidades de conservacin (Avise et al., 1987; Avise, 2000, 2008; Freeland, 2005; VzquezDomnguez, 2002, 2007). De esta forma, el estudio de la distribucin geo grfica de linajes genealgicos ha sido ampliamente usado para describir eventos histricos, como frag mentacin de hbitats o expansin del rango de distribucin de especies y poblaciones, eventos de mi gracin, vicarianza, o extincin de linajes gnicos, as como otros procesos que afectan la estructura de las poblaciones o que causan especiacin en un contexto espacial y temporal (Hardy et al., 2002). Adems, el estudio comparado de los patrones filogeogrficos de

varias especies o poblaciones codistribuidas permite plantear hiptesis sobre posibles eventos comunes, por ejemplo de vicarianza o dispersin, e identificar las causas geolgicas, ecolgicas o etolgicas que pudieron haber influido en ellos (Arbogast & Kenagy, 2001; Zink, 2002; Lanteri & Confalonieri, 2003). Actualmente los estudios filogeogrficos en espe cies animales se basan principalmente en secuencias de ADN mitocondrial (ADNmt), dado que presenta una alta tasa de mutacin, no recombina y su herencia es casi exclusivamente materna (Lanteri & Confalonieri, 2003). Las variantes (secuencias) de ADNmt, conoci das como haplotipos, registran la historia matrilineal de eventos mutacionales, los cuales pueden conec tarse de un modo filogenticamente inteligible en un filograma o mejor llamado, rbol de genes (Avise, 2000, 2008). En los albores de la filogeografa, dicho filograma se superpona con la distribucin geogrfica de las poblaciones de estudio, lo que permita hacer una descripcin de la reconstruccin filogeogrfica (Avise, 2000). Desde entonces se han desarrollado mltiples formas de anlisis grficos, los cuales incorporan los filogramas, el modelo evolutivo de coalescencia y valores estadsticos de probabilidad (VzquezDomnguez et al., en prensa y referencias incluidas). La coalescencia es un proceso estocstico que describe la forma en que los eventos genticos poblacionales determinan la forma de la genealoga de las secuencias de genes muestreados, y se basa en la hiptesis de que todos los individuos de una poblacin natural coalescen en un ancestro comn (fig. 1). En esencia, es un modelo retrospectivo que traza todos los alelos de un gen dentro de una muestra poblacional hacia un ancestro comn ms reciente (Hudson, 1990, 1998; Nordborg, 2000). La teora de coalescencia ha tenido la virtud de permitir la unin conceptual y analtica de la gentica de poblaciones y la filogenia, haciendo que el foco de estudio de ambas reas sea precisamente el rbol de genes (Nielsen & Beaumont, 2009). Sin embargo, el uso exclusivo del ADNmt en algunos casos puede ser arriesgado, ya que implica un nico locus, el cual puede estar ligado a seleccin, puede presentar introgresin o puede que no sea posible identificar su dispersin entre poblaciones como con secuencia de diferencias etolgicas o ecolgicas entre hembras y machos o entre especies (Avise, 2008; Vz quezDomnguez et al., 2009); todo ello puede implicar limitaciones en el momento de hacer la reconstruccin de historias poblacionales (Avise, 2000). Por ello, cada vez con ms frecuencia se aplica el uso combinado y comparativo de genealogas obtenidas de datos de ADNmt y ADN nuclear (ADNn). El uso de genes nucleares conlleva a su vez problemas, por ejemplo aquellos inherentes a la recombinacin, as como el hecho de que cada locus (que en algunas especies suelen ser ms de dos), muestre historias evolutivas independientes (Zhang et al., 2005). Para enfrentar este problema existen dos aproximaciones de anlisis: 1) hacer reconstrucciones y comparaciones de ms de un gen, con lo cual, en caso de existir congruencia en las historias filogeogrficas tratadas, se incrementa la probabilidad de que la historia filogeogrfica que se

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Coalescencia hacia el ancestro comn t1

Atrs en el tiempo

n generaciones

t2

Barrera al flujo gentico

Tamao poblacional

Seleccin natural

Barrera

Flujo gnico

B C n individuos

Tiempo de coalescencia

Fig. 1. Relacin evolutiva (genealgica) de cuatro haplotipos (individuos) dentro de una poblacin. Los linajes de los haplotipos pueden rastrearse hacia atrs en el tiempo y as identificar eventos coalescentes que sucedieron a diferentes tiempos (t1 y t2). Por ejemplo, los haplotipos A y B tienen su ancestro comn ms reciente (ACMR) dos generaciones atrs (primer evento coalescente; ancestro sealado con un asterisco), mientras que el ACMR de los haplotipos A, B y C (doble asterisco) se da cuatro generaciones atrs (segundo evento coalescente). Barreras fsicas o cualquier factor que limita el flujo gnico entre individuos o poblaciones, adems de caractersticas como tamao poblacional, seleccin natural y flujo gnico, determinan en gran medida los patrones de coalescencia (modificado de VzquezDomnguez et al., en prensa). Fig. 1. Evolutionary relationship (genealogical) of four haplotypes (individuals) within a population. Haplotype lineages can be traced back in time to identify coalescent events that occurred at different times (t1 y t2). For example, haplotypes A and B have their most recent common ancestor (MRCA) two generations back (first coalescent event; ancestor indicated with an asterix), while the MRCA of haplotypes A, B and C (double asterix) is four generations back (second coalescent event). Physical barriers or any factor that limits gene flow between individuals, together with parameters like population size, natural selection and gene flow, greatly determine the coalescent patterns (modified from VzquezDomnguez et al., in press).

obtiene sea de la especie y no del gen (Avise, 2000); y 2) realizar comparaciones filogeogrficas entre ms de una especie codistribuida, con lo cual se evala si existen patrones filogeogrficos concordantes (Avise, 2000, 2008; Arbogast & Kenagy, 2001; Zink, 2002; VzquezDomnguez et al., en prensa). En trminos analticos, la filogeografa se concibe en general en dos reas que difieren bsicamente en la forma de anlisis (Hey & Machado, 2003). La primera se basa fundamentalmente en una idea grficodescriptiva, donde las ramificaciones de un

rbol se analizan bajo una (o varias) hiptesis de la historia biogeogrfica de los organismos, y que se sustenta en mtodos de reconstruccin filogentica de rboles de genes; o bien, en la construccin de redes de haplotipos, las cuales se basan en la re construccin de rboles multibifurcados arreglados a manera de redes de haplotipos bajo mtodos filogenticos o mtodos de coalescencia. En ambos casos las interpretaciones de eventos y procesos asociados a la distribucin de los organismos se realiza despus de que se tienen los rboles o redes

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resultantes (Nielsen & Beaumont, 2009; Templeton, 2009). La segunda rea descansa en fundamentos estadsticos y matemticos de demografa y estructura poblacional, basados en teora de coalescencia, fen menos estocsticos y estadstica computacional, donde los modelos de anlisis incluyen hiptesis que se ponen a prueba, utilizando mtodos basados en verosimilitud, particularmente de Inferencia Bayesiana (Knowles & Maddison, 2002; Nielsen & Beaumont, 2009). Ambas aproximaciones se utilizan cada vez con ms frecuencia de forma combinada y complementaria, con las ventajas y desventajas propias de cada una; una revisin ms detallada de estos mtodos va ms all del objetivo del presente trabajo, pero existe amplia informacin en la literatura (e.g., ver Emerson et al., 2001; Knowles & Maddison, 2002; Hey & Machado, 2003; Avise, 2008; Nielsen & Beaumont, 2009; Templeton, 2009; Vzquez Domnguez et al., en prensa). Cabe aadir que se ha sealado que una forma adecuada de evaluar historias de divergencia simultnea (filogeografa comparada), es a travs del uso de mtodos basados en simulaciones, e.g. aproximaciones de verosimilitud o bayesianas ya que, como stos utilizan estadsticos de resumen, tienen mayor flexibilidad para manejar modelos complejos, por ejemplo como los esperados al analizar conjuntos de datos filogeogrficos (para una explicacin detallada ver Hickerson et al., 2006). Hay dos reas de estudio donde se utilizan aproximaciones filogeogrficas cada vez con mayor frecuencia, pero que sin embargo no existe, hasta donde sabemos, una revisin publicada donde es pecficamente se aborden dichas aplicaciones de la filogeografa: por un lado en la taxonoma, bsica mente en el uso de la filogeografa para el recono cimiento y establecimiento de lmites entre especies y, por otro lado, su uso especfico en biologa de la conservacin, sobre todo en la definicin de unidades de conservacin y manejo. Libros como el de Avise (2000) y el de Freeland (2006) incluyen ejemplos de estudios filogeogrficos que han permitido sugerir la existencia de especies distintas; asimismo, en Avise (2000; pp. 268276) se hace mencin sobre Unidades Evolutivas Significativas (ver explicacin ms adelante) y da ejemplos de algunos estudios filogeogrficos asociados a dicho concepto de conservacin. Indudablemente numerosos estudios filogeogrficos han reportado resultados taxonmicos o de conservacin, y aqu presentamos una revisin de estas aplicaciones. Los ejemplos que presenta mos son exclusivamente de fauna (vertebrados e invertebrados); debemos hacer notar que existen muchos casos donde se ha usado la filogeografa en plantas para resolver preguntas taxonmicas y de conservacin, pero dichos ejemplos quedan fuera del alcance de la presente revisin. La filogeografa en el mbito de la taxonoma La filogeografa puede tambin ser usada como una herramienta de anlisis en estudios taxonmicos. En sistemtica, los taxa son el punto de partida para la

clasificacin biolgica y los estudios filogenticos. Sin embargo, cuando el taxn se convierte en la unidad para el estudio de entidades evolutivas, se complica poder encontrar las fronteras y atributos de la unidad evolutiva, es decir el taxn, ms cuando la respuesta puede variar en el organismo o grupo de organismos de que se trate (Hey & Machado, 2003). Los con ceptos de especie acuados en los ltimos 40 aos son conflictivos y en ocasiones contradictorios, por lo que en realidad aun no existe un concepto nico. En este sentido, la filogeografa, combinada con otros mtodos usados en la taxonoma tradicional, puede aportar informacin de las fronteras entre especies o poblaciones. El concepto filogentico de especie se define como el agrupamiento mnimo de individuos, de poblaciones o grupos de poblaciones que son diagnosticables por un nmero dado de caracteres compartidos, y dentro de los cuales hay un patrn claro de ances tradescendencia (Cracraft, 1983; McKitrick & Zink, 1988; Nixon & Wheler, 1990; Davis & Nixon, 1992); esto es, la unidad taxonmica mnima que puede ser analizada desde un punto de vista filogentico. Este concepto filogentico de especie puede ser analizado con cualquier tipo de caracteres homlogos, y bajo este concepto es donde recae el uso de caracteres moleculares en la delimitacin de especies. As, al delimitar una especie bajo el concepto filogentico es necesario poder identificar las fronteras por arriba de las cuales el arreglo filogentico representa entidades biolgicas independientes (relaciones jerrquicas) y, por debajo de ellas, donde la jerarquizacin es in adecuada (relaciones tocogenticas o genealgicas) (Goldstein et al., 2000). Actualmente se utilizan con ms frecuencia caracteres moleculares como una herramienta importante, aunque no exclusiva, en la delimitacin de especies (Avise & Ball, 1990). Sin embargo, este concepto filogentico de especie, uti lizando caracteres moleculares, ha sido criticado por la problemtica de distinguir la historia de los genes de aquella de las especies (Sites & Crandall, 1997). Tambin por el hecho de que comnmente en las reconstrucciones filogenticas se usa un solo locus, lo cual puede arrojar reconstrucciones filogenticas errneas como resultado de los polimorfismos dentro de la especie (Templeton, 2001). Por ello, es comn que con el uso de diferentes caracteres se obtenga un diagnstico de unidades evolutivas diferentes dentro de una misma especie (ver Crother, 1990; Smith, 1992; Moore, 1995). El concepto de especie utilizando caracteres mo leculares se define como un grupo de organismos o poblaciones que presentan monofilia recproca, los cuales son candidatos a ser identificados como unidades evolutivas independientes. Esta definicin es prcticamente igual al concepto monofiltico de especie acuado por Donoghue (1985). Sin embargo, la monofilia recproca, entendida en el contexto de rboles de genes, no es el nico concepto implci to. El problema persiste en cuanto a en qu nivel jerrquico es aplicable la monofilia recproca para la delimitacin de especies, o si es una mera represen tacin de unidades dentro de una especie. As, se

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ha sealado que el uso de relaciones filogenticas intraespecificas es inapropiado para la delimitacin de especies (Goldstein et al., 2000). Es decir, una de sus mayores dificultades es delimitar la frontera entre las relaciones tocogenticas y jerrquicas, lo cual es un tema debatido en todos los mbitos donde la filogeografa es aplicable. Sin embargo, existen ejemplos donde han podido detectarse es pecies diferenciadas o crpticas evaluando relaciones filogenticas intraespecificas: Richlen et al. (2008) estudiaron el dinoflagelado Gambierdiscus toxicus, responsable del sndrome de la ciguatera; evalua ron filogenticamente 28 aislados a lo largo de su distribucin global (con varias regiones del DNA ribo somal adems de caracteres morfolgicos; tabla 1). Encontraron cuatro linajes diferentes separados por distancias genticas considerables, uno de los cuales es morfolgicamente diferente y ms acorde con la especie Gambierdiscus belizeanus; los otros tres linajes son considerados especies crpticas. En otro estudio, mtodos taxonmicos tradicionales no haban podido resolver la sistemtica del complejo del insecto B. rhodani (Ephemeroptera). Utilizando el gen mitocondrial COI, Williams et al. (2006) ob tuvieron dos grupos monofilticos que consisten de un haplogrupo mayor y un segundo clado de seis haplogrupos ms pequeos y diferentes entre s. La divergencia de los haplogrupos es de 0,23% (den tro), mientras que entre stos es de 89%, valores que superan por mucho el intervalo reportado para otros insectos, lo que consideraron como evidencia de la existencia de especies crpticas dentro del complejo (tabla 1). Por otra parte, Templeton (2001) menciona que los rboles de genes tienen el potencial de encontrar los lmites entre la evolucin intra e interespecifica, con los cuales es entonces posible delimitar especies. Por ello, este autor acu el trmino de especie "cohesiva". Este concepto es descrito como un linaje evolutivo cuyas fronteras pueden ubicarse a partir de las fuerzas genticas y evolutivas que crean una cohesin reproductiva en la comunidad (Templeton, 1999). Asimismo, Templeton (2001) denomina un linaje evolutivo como una poblacin o grupo de poblaciones reproductivas con suficiente historia de relaciones de ancestriadescendencia, la cual presen ta sus propias trayectorias y tendencias evolutivas. Por ello una especie es definida como un linaje o un grupo de linajes evolutivos que pueden presentar intercambio gentico y/o cohesin ecolgica. Un ejem plo de esto es el estudio con la serpiente Hypsiglena torquata, de la cual se reconocen 17 subespecies. Con mtodos filogeogrficos y ADNmt se evaluaron 178 individuos y se encontraron seis especies: una nueva, dos de las previamente reconocidas como subespecies y las otras tres son linajes polimrficos, ampliamente distribuidos, compuestos por mltiples especies (Mulcahy, 2008; tabla 1). Con base en di chos resultados se seala que deben mantenerse las subespecies encontradas como diferentes, dado que son geogrficamente cohesivas, morfolgicamente discretas y pueden representar especies incipientes (Mulcahy, 2008).

Templeton (2001, 2008, 2009) propone el uso del Anlisis de Clados Anidados (NCA por sus siglas en ingls) como un mtodo de anlisis riguroso y con criterios adecuados para evitar confundir rboles de haplotipos con aquellos de poblaciones o especies, ya que con el NCA es posible identificar los efectos del flujo gentico recurrente y los eventos histricos que han afectado a toda una poblacin, los cuales pueden tener asociacin geogrfica en los rboles de genes. La prueba ms fehaciente que arroja el NCA para inferir que las muestras en cuestin se derivan de linajes evolutivos independientes es cuando, a travs del anlisis, se infieren uno o ms eventos de fragmentacin. Otro atributo que Templeton (2001, 2009) menciona como til del NCA es que incorpora aspectos de polimorfismo interespecfico, sorteo de linajes y eventos de hibridacin, lo que representa una ventaja al momento de delimitar especies. Otro aspecto importante del NCA es que los linajes evolu tivos se infieren de patrones filogenticos que tienen un valor estadstico y no como un patrn absoluto (Templeton, 2001, 2009). El NCA ha sido criticado (Petit, 2008), en particular porque se presume resulta en un alto porcentaje de falsos positivos y de falsos negativos. Templeton (2008) ha demostrado que dichos porcentajes son mucho menores cuando se evalan casos reales; tambin ha evaluado el uso del NCA con multilocus y otra propuesta de anlisis co nocida como mtodo Computacional de Aproximacin Bayesiana (ABC por sus siglas en ingls) para probar hiptesis filogeogrficas, resaltando la ventaja de usar ambos mtodos (Templeton, 2009). La polmica del NCA no se ha resuelto, por lo que se recomienda una revisin detallada de las opiniones a favor y en contra de su uso, para tener bases fundamentadas cuando se decida utilizar este mtodo (ver Knowles, 2008; Petit, 2008; Nielsen & Beaumont, 2009; Templeton, 2004, 2008, 2009 y referencias incluidas). Una crtica sobre el uso exclusivo de anlisis filo geogrficos para ubicar las fronteras entre especies est relacionado con uno de los conceptos bsicos en la teora de coalescencia que es la herencia uniparental y la no recombinacin del gen utilizado (en caso de estar representado exclusivamente por ADNmt). Por ello, las relaciones de los rboles mitocondriales pueden representar equivocadamente las relaciones entre poblaciones o especies. Se ha sugerido que genes mitocondriales por s solos no son suficientes para diagnosticar especies, ya que dichos caracteres se fijarn ms rpido que los nucleares, por lo que pueden no reflejar la "verda dera" frontera entre especies (Avise & Ball, 1990). Con base en lo anterior, se recomienda tambin el uso de datos nucleares, los cuales permiten corro borar o rechazar la hiptesis obtenida con genes mitocondriales, o bien, la utilizacin de otro tipo de caracteres (e.g. morfolgicos o etolgicos). Farias & Hrbek (2008) realizaron un amplio estudio filogeo grfico y de gentica de poblaciones del gnero de peces Symphysodon del Amazonas, donde pudieron probar hiptesis sobre la relacin entre unidades taxonmicas y los procesos que generaron diver sificacin dentro del gnero combinando anlisis

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Tabla 1. Ejemplos de aplicaciones de la filogeografa en taxonoma y conservacin: P. Pregunta; Mm. Marcador molecular; Ma. Mtodo de anlisis; Ref. Referencia. Table 1. Examples of phylogeographic applications in taxonomy and conservation: P. Question; Mm. Molecular marker; Ma. Analysis method; Ref. Reference. Taxonoma Acris spp. P Mm Ma Ref P Mm Ma Ref P Mm Ma Ref P Mm Ma Ref P Mm Ma Ref Fronteras entre especies, biogeografa, evolucin del comportamiento y conservacin de la rana "cricket" Fragmento del gen mitocondrial citocromo b, genes nucleares tyrosina, proopiomrlsnovortin y el inton 4 dr betacristalin rboles filogenticos y Fst Gamble et al., 2008 Historia evolutiva y diversificacin del genero de peces disco Regin control y exn 3 del gen RAG1 rboles filogenticos, anlisis de clados anidados (NCA), Fst, parmetros de diversidad gentica, anlisis de neutralidad, anlisis de mismatch y prueba de Mantel Farias & Hrbeck, 2008 Fronteras geogrficas y taxonmicas dentro de la serpiente nocturna americana Nad4 y tRNAs rboles filogenticos, red de haplotipos y taxonoma Mulcahy, 2008 Delimitacin de especies crpticas de este complejo de insectos Citocromo oxidasa subunidad I rboles filogenticos Williams et al., 2006 Generar una hiptesis robusta de clasificacin del dinoflagelado Regin hipervariable D8D10 del rDNA LSU y 18 rDNA SSU y morfolgicos de la teca rboles filogenticos, mapeo de caracteres morfolgicos en la filogenia Richlen et al., 2008 Hypsiglena torquata

Symphysodon spp.

Baetis rhodani

Gambierdiscus toxicus

filogenticos, NCA y demogrficos. Identificaron tres grupos monofilticos, que corresponden a dos gru pos morfolgicos de Symphysodon aequifasciatus, y a uno previamente no reconocido. Los procesos asociados con dicha diferenciacin son fragmen tacin en el pasado entre grupos y flujo gentico restringido dentro de los mismos (Farias & Hrbek, 2008; tabla 1). En otro ejemplo donde se utilizaron mltiples genes al evaluar los lmites entre espe

cies de las ranas "cricket" norteamericanas Acris crepitans y A. gryllus (tabla 1), Gamble et al. (2008) mostraron que la distribucin actual de las subes pecies de A. crepitans, definidas morfolgicamente y por vocalizaciones, no coinciden con los linajes evolutivos encontrados en su anlisis. Encontraron tambin grupos filogeogrficos distintos dentro de ambas especies, pero adems una especie diferente dentro de stos, Acris blanchardi.

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Tabla 1. (Cont.) Conservacin Zapus hudsonius preblei P Mm Ma Ref P Mm Ma Ref P Mm MA Ref P Mm Ma Ref P Comprobacin de estatus taxonmico a travs de anlisis filogeogrficos del roedor ADNmt y microsatlites ndices de diversidad gentica y molecular, pruebas de agrupamiento, rboles de distancia, Fst, anlisis molecular de varianza (AMOVA), rboles filogenticos, NCA King et al., 2006 Reconstruir relaciones genealgicas de la tortuga gigante y su historia de colonizacin en dos islas de las Galpagos ADNmt y microsatlites ndices de diversidad gentica y molecular, estimaciones de divergencia, anlisis demogrficos, distribucin mistmach, NCA, pruebas de asignacin Beheregaray et al., 2003 Evaluacin de las ESUs y niveles taxonmico (subespecie) del elefante asitico ADNmt ndices de diversidad molecular, rboles filogenticos, AMOVA, estimacin de divergencia, anlisis de mismatch Fleischer et al., 2001 Determinar si el paisaje a escala regional influye en la diferenciacin morfolgica y gentica en especies altamente vgiles como el halcn cola roja Microsatlites y caracteres morfolgicos ndices de diversidad gentica y molecular, pruebas de asignacin, rboles de distancia, Fst, modelaje para estimacin tiempo divergencia, componentes principales y prueba de Mantel Hull et al., 2008 Estado de conservacin, influencia de eventos histricos y recientes en la distribucin geogrfica y ubicacin de unidades de conservacin y manejo del perezoso del bosque atlntico brasileo Mm Ma Ref P Mm Ma Ref Regin control y citocromo oxidasa subunidad I rboles filogenticos, ndices de diversidad gentica y molecular, anlisis de varianza molecular, Fst, red de haplotipos, anlisis de clados anidados y prueba de Mantel LaraRuiz et al., 2008 Identificacin de unidades de conservacin de pez dulceacucola Microsatlites Diversidad gentica, impacto relativo de la deriva y la mutacin paso a paso, cuellos de botella, ndice de endogamia DomnguezDomnguez et al., 2007 Zoogoneticus quitzeoensis Bradypus torquatus Buteo jamaicensis Elephas maximus Geochelone nigra

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La filogeografa en el mbito de la conservacin Lo mismo que en la taxonoma, la filogeografa es una herramienta importante en la biologa de la conservacin. La idea de proponer polticas de conservacin en unidades por debajo del nivel de especie utilizando datos moleculares cobr impor tancia significativa cuando se acu el concepto de Unidades Evolutivas Significativas (ESUs por sus siglas en ingls; Ryder, 1986). A la fecha, el anlisis de la diversidad gentica por arriba del nivel de es pecie est ms o menos bien definido con base en mtodos filogenticos, sin embargo, el representar adecuadamente la diversidad gentica por abajo del nivel de especie es un tema an en discusin, y es precisamente aqu donde la filogeografa puede ser una herramienta importante. Esta idea de conservacin a nivel infraespecfico pretende identificar de manera precisa unidades de manejo que reflejen la importancia evolutiva de los linajes dentro de las especies, para con ellos crear programas efectivos para la conservacin de espe cies en riesgo (Avise & Hamrick, 1996). Por ello, la informacin gentica heredable ofrece una forma de delinear dichas unidades de conservacin, y provee un contexto evolutivo a partir del cual desarrollar es trategias y definir prioridades de conservacin (King & Burke, 1999; Pertoldi et al., 2007). En este sentido, desde que se reconoci a la diversidad gentica como el nivel basal de la biodiversidad (como fue recomendado en la Convencin Sobre la Diversidad Biolgica en Brasil, 1992), se ha desarrollado la gentica de la conservacin de manera exponencial. En la actualidad es comn encontrar trabajos que usan caracteres moleculares para priorizar especies o poblaciones para su conservacin. La gentica de la conservacin, de forma general, trata de hacer inferencias de eventos genticos que son relevantes para el conocimiento y conservacin de la diversidad. Ello parte de la base de un conoci miento amplio de la diversidad biolgica (incluyendo el reconocimiento de especies o unidades evolutivas independientes), hasta el conocimiento del tama o efectivo de las poblaciones (el cual difiere del concepto de un tamao poblacional censal usado en ecologa), la depresin gentica por endogamia o por exogamia, cuellos de botella, el efecto de la fragmentacin y el flujo gentico dentro y entre las poblaciones y la reduccin en la adecuacin de las especies. En esencia, la gentica de la conservacin pretende, con base en la informacin gentica y evolutiva que conlleva, no slo identificar aquellas especies en peligro de extincin, sino los eventos que han podido afectarlas y cmo revertirlos, pero sobre todo intenta aportar las bases para conservar no slo las especies (con la problemtica que im plica su "correcta" identificacin), sino las unidades evolutivas dentro de ellas, con lo que es posible preservar los procesos evolutivos previamente no considerados en conservacin pero indispensa bles para la permanencia de las especies a largo plazo, y los factores evolutivos asociados (Crandall

et al., 2000; Moritz, 2002; Pertoldi et al., 2007). Sin embargo, existe una fuerte polmica en relacin a cmo usar la informacin gentica en la identificacin de "grupos operativos" en conservacin, la cual, de forma prctica, se enmarca dentro de tres grandes rubros: la viabilidad de las poblaciones a largo plazo (Loeschecke et al., 1994), la identificacin de uni dades biolgicas para su proteccin (Moritz, 1994; Amato et al., 1995) y la identificacin de las relaciones histricas entre poblaciones (Avise & Hamrick, 1996; VzquezDomnguez, 2002). Se han acuado diversas definiciones para nombrar estos "grupos operativos", dentro de las cuales la ms usada en estudios filogeogrficos enmarcados en un contexto de conservacin es el ya mencionado concepto de las ESUs (Moritz, 1994, 2002). Este concepto ha sido incluso incorporado a la legislacin ambiental de diversos pases como una forma de identificar poblaciones distintas con fines de conservacin, aunque su definicin y ope ratividad no son universalmente aceptados (Pennock & Dimmick, 1997). El primer concepto de ESU fue acuado por Ryder (1986), quien lo defini como un grupo de organismos que han estado asilados de otros grupos de la misma especie por un periodo de tiempo suficiente para haber desarrollado di vergencias genticas significativas entre ellos. Ms tarde, Moritz (1994, 2002) define una ESU como un grupo de individuos o poblaciones que presentan monofilia recproca para marcadores mitocondriales y divergencias significativas en frecuencias allicas en loci nucleares, pudindose referir a poblaciones, especies o subespecies, y considerando tambin el tiempo de aislamiento de dichas poblaciones. Algunas de las principales crticas mencionadas a estas aproximaciones es que ningn mtodo filogentico es tan poderoso como para poder in ferir una filogenia correcta, ms cuando se trata de poblaciones dentro de una misma especie, y que por el contrario lo que se genera es una hiptesis con una cierta probabilidad de que lo sea. De igual forma, las variaciones estocsticas pueden generar arreglos errneos en un rbol de poblaciones, por lo que la monofilia recproca no siempre denota aisla miento histrico (Crandall et al., 2000; Domnguez Domnguez et al., 2008). En este sentido, el tamao poblacional es un factor importante para que se d la monofilia recproca; as, si imaginamos el ejemplo donde una especie es dividida en dos poblaciones por una barrera, si una de las poblaciones aisladas es pequea, el tiempo que tiene que transcurrir para que califique como una ESU es mucho menor que en el caso de que la poblacin aislada sea de mayor tamao (Neigel & Avise, 1986). Esto es an ms marcado en trminos genticos, ya que la mayora de las especies o poblaciones con importancia para la conservacin son naturalmente pequeas, han sufrido un declive en su tamao poblacional, han sido fragmentadas o simplemente perturbadas (Pearse & Crandall, 2004). Tambin se considera que el concepto de ESU no hace suficiente nfasis en el potencial de las especies para maximizar el xito evolutivo mediante

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el mantenimiento de la diversidad adaptativa (Lynch et al., 1999), y que un planteamiento exclusivamente gentico tiene graves riesgos en el reconocimiento del potencial adaptativo y la adecuacin. Se ha mencionado tambin que si cualquier linaje evolutivo perfectamente diagnosticable tiene que ser elevado al nivel de especie, entonces el concepto de ESU est de ms (Vogler & De Salle, 1994). Existen sin embargo muchos ejemplos donde se ha utilizado este concepto para propuestas y/o polticas de conservacin. La fauna de las islas ocenicas ha sido una fuente importante de estudios genticos y de conservacin. Por ejemplo, las tortugas gigantes de las Galpagos (Geochelone nigra) comprenden una linaje que radi de manera rpida junto con la evolucin del archipilago, historia que se ha podido detallar utilizando ADNmt y microsatlites. Se ha observado que las poblaciones tienen mar cada divergencia gentica, historias demogrficas contrastantes y estructura filogeogrfica profunda, consistente con la historia geolgica y biogeogrfica de las islas. Dada la separacin evolutiva tan antigua, se han propuesto cuatro ESUs (dos en Santa Cruz, una en Pinzn y una en San Cristbal; Beheregaray et al., 2003). En otro ejemplo no insular, se conoce que el elefante asitico (Elephas maximus) presenta poblaciones muy reducidas y fragmentadas, tanto por factores histricos como por dispersin reciente mediada por el hombre. Un estudio filogeogrfico muestra dos clados que se separaron hace cerca de 1,2 millones de aos, donde los individuos de los dos clados estn presentes en todas las localidades de estudio, excepto Indonesia y Malasia; stos ltimos estn en linajes basales, por los que se les confiere estatus de ESUs (Fleischer et al., 2001). El uso de marcadores moleculares altamente variables en la conservacin de especies en peligro y su uso en planes de manejo ha llevado tambin a la implementacin de nuevos conceptos en la bio loga de la conservacin, por ejemplo las Unidades de Manejo (MUs por sus siglas en ingls). Estas unidades intentan integrar la diversidad gentica y la demografa de distintas poblaciones, las cuales tienen que ser manejadas de manera independiente para asegurar la viabilidad de una ESU (Moritz, 2002). Un ejemplo que combina la propuesta de ESUs y MUs es el trabajo con la especie de perezoso del bosque atlntico brasileo, Bradypus torquatus, la cual est en grave peligro por la prdida del 93% de su rea de distribucin original. En un estudio gen tico y filogeogrfico de las poblaciones remanentes ms grandes, se encontr que dichas poblaciones estn aisladas reproductivamente y son altamente divergentes, resultado de fragmentacin aloptrica. As, se definieron al menos dos unidades evolutivas independientes, adems de que poblaciones sepa radas por ms de 100 km deben ser consideradas unidades de manejo diferentes (LaraRuz et al., 2008; tabla 1). Por otro lado, uno de los mtodos ms recientes que se han desarrollado dentro de la gentica de poblaciones para fines de conservacin es la com binacin de anlisis filogeogrficos, la gentica del

paisaje ("landscape genetics") y las aproximaciones estadsticas, que en conjunto permiten definir la es tructura poblacional a lo largo de la distribucin y la historia demogrfica de las poblaciones, identificando las poblaciones que deben ser conservadas junto con su distribucin geogrfica (Manel et al., 2003; Storfer et al., 2007). Bajo este enfoque, Hull et al. (2008) evaluaron los patrones de diferenciacin y hbitat entre dos subespecies (oriental y occidental) del hal cn cola roja Buteo jamaicensis (tabla 1). Utilizaron microsatlites y caracteres morfolgicos y encontraron un patrn de aislamiento por distancia entre los sitios de anidacin en el oeste. Dada la alta capacidad de dispersin de esta especie, dicho patrn sugiere que preferencias de hbitat especficas a las poblaciones y no a la especie , limitan la migracin y resultan en estos patrones filogeogrficos. La diversidad biolgica incluye la variacin gentica entre especies y dentro de las especies, tanto en poblaciones geogrfica y genticamente separadas como a nivel de individuos dentro de cada poblacin. Sin embargo, el encontrar un mtodo que permita la correcta identificacin de dichas unidades es prcticamente imposible, dada la gran diversidad de posibilidades que hay en la naturaleza, e incluso, dada la carencia de mtodos adecuados o la correcta aplicacin de los existentes. Por ello, en el proceso de la identificacin de unidades de conservacin se debe tener clara la divisin de la diversidad biolgica en dos componentes: aquella resultante del aislamiento histrico y aquella que tiene que ver con la evolucin adaptativa (Moritz, 2002; VzquezDomnguez, 2002, 2007). Una historia peculiar a este respecto es el caso del roedor Zapus hudsonius preblei, subespe cie considerada como amenazada en la legislacin norteamericana, que en un momento fue cuestionada taxonmicamente y se propuso que se eliminara de la lista de especies en peligro. En un estudio filogeo grfico reciente con microsatlites y dos regiones de ADNmt, el cual incluy NCA, se concluy que cada subespecie de Zapus hudsonius era distinta genticamente y que sus haplotipos correspondan directamente con la distribucin disyunta de cada una (King et al., 2006; tabla 1). Es importante mencionar que el uso exclusivo de datos moleculares para definir las estrategias de con servacin dentro de una especie puede ser altamente arriesgado. Para que los conceptos tericos de la gentica de la conservacin puedan ser de utilidad en los planes de conservacin, stos tienen que ser prcticos en su aplicacin. Los datos obtenidos de esta manera deben ser cuidadosamente evaluados junto con datos histricos, ecolgicos, sociales y de distribucin, con la finalidad de obtener una perspec tiva ms acertada y realista (Crandall et al., 2000). Recientemente se han incorporado otras fuentes de informacin a la identificacin de grupos operacio nales para conservacin, como lo es la distribucin espacial de la diversidad gentica, datos taxonmicos y fenotpicos, los servicios ecolgicos y ambientales, datos biogeogrficos, aspectos socioeconmicos y datos etolgicos (Doadrio et al., 1996; Dodson et al., 1998; Luck et al., 2003; Manel et al., 2003; Green,

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2005; DomnguezDomnguez et al., 2007, 2008). Por ejemplo, para la conservacin de la diversidad de peces dulceacucolas en particular, Doadrio et al. (1996) acuaron el concepto de Unidad Operativa de Conservacin (OCU por sus siglas en ingls), el cual es definido como una rea continua limitada por fronteras geogrficas bien definidas y habitada por una o ms poblaciones que comparten el mismo patrn gentico. Conclusiones Los estudios filogeogrficos indudablemente han ayudado a la sistemtica para reconocer y esta blecer lmites entre especies, sobre todo a nivel de especie y de subespecie. Asimismo, la aplicacin de mtodos de anlisis filogeogrficos ha sido una herramienta muy poderosa en estudios de biologa de la conservacin, significativamente permitiendo evaluar el potencial evolutivo de las especies. En particular, con base en los resultados obtenidos a travs de anlisis filogeogrficos, ha sido posible probar hiptesis biogeogrficas, describir procesos demogrficos y evolutivos que resultan en unidades poblacionales diferenciables, as como inferir proce sos que han determinado el origen, distribucin y mantenimiento de la biodiversidad, informacin indis pensable en taxonoma y conservacin. Es evidente que ello ha sido posible no slo a travs del uso de mtodos tradicionalmente filogeogrficos, sino que es necesario incorporar aquellos de la gentica de poblaciones y gentica del paisaje, de demografa y de coalescencia, adems de la utilizacin de di versos genes y particularmente de ADNmt y ADNn, en combinacin con caracteres morfolgicos, etol gicos, ambientales, etc. De esta forma, con estudios filogeogrficos como los descritos, se ha logrado precisar la taxonoma de especies y subespecies de forma adecuada, y tambin se han podido hacer propuestas significativas en conservacin y manejo de especies animales, indistintamente si stas son de amplia distribucin o restringidas y en peligro. Referencias Amato, G., Wharton, D., Zainuddin, Z. Z. & Powell, J. R., 1995. Assessment of conservation units for the Sumatran rhinoceros (Dicerorbinus sumatrensis). Zoo Biology, 14: 395402. Arbogast, B. S. & Kenagy, G. J., 2001. Comparative phylogeography as an integrative approach to historical biogeography. Journal of Biogeography, 28: 819825. Avise, J. C., 2000. Phylogeography. Harvard Univ. Press, Cambridge. 2008. Phylogeography: retrospect and prospect. Journal of Biogeography, 36: 315. Avise, J. C., Arnold, J., Ball, R. M., Bermingham, E., Lamb, T., Neigel, L. E., Reeb, C. A. & Saunders, N. C., 1987. Intraspecific phylogeography: The mitocondrial DNA bridge between population ge

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