PRUEBAS BIOQUMICAS A continuacin se describe la batera mnima de pruebas bioqumicas a usar para la identificacin de un determinado microorganismo.

Es ms que sabido que la identificacin de un microorganismo a partir de una cepa aislada de una muestra suele realizarse a partir de datos recaudados como la morfologa del microorganismo, la morfologa de las colonias en un medio slido, pero sobre todo a partir de la presencia o ausencia de ciertas enzimas que dirigen el metabolismo de las bacterias, estas enzimas pueden detectarse mediante medios especiales a los que se le incorporan sustratos sobre los cuales pueden reaccionar, junto con un indicador que puede detectar la utilizacin de este sustrato o la presencia de productos metablicos especficos, este tipo de pruebas se denominan pruebas bioqumicas, puesto que determinan el perfil bioqumico de una especie bacteriana

AGAR CITRATO DE SIMONS Empleado para la identificacin bacteriana en base a la utilizacin de citrato como nica fuente de carbono y energa, adems el citrato contiene fosfato de amonio, como nica fuente de fosfato y azul de bromotimol como indicador de pH, el cual vira de color verde a azul en medio bsico, las sales de fosfato forman un sistema buffer en el medio, mientras que el magnesio presente es un cofactor enzimtico. El cloruro de sodio proporciona el balance osmtico necesario en el medio. Se inocula por estra y es la primera prueba en realizarse para evitar la contaminacin con otras fuentes de carbono correspondientes a otros medios. Por prueba positiva da como resultado un color azul en el medio debido a la alcalinidad crecimiento bacteriano en el medio a pesar de mantenerse el color verde. En tanto un resultado negativo mantiene el color verde debido a que no hay un desarrollo bacteriano y por tanto no hay cambio de color. El metabolismo del citrato en las bacterias se realiza con la enzima citrato permeada, a travs del ciclo del cido tricarboxlico. El citrato se desdobla progresivamente dando oxalacetato y piruvato. Este ltimo, en presencia de un medio alcalino da origen a cidos orgnicos que, al ser utilizados como fuente de carbono producen carbonatos y

bicarbonatos alcalinos. El medio entonces vira de verde a azul como indicativo de la utilizacin del citrato permeada. UREA Es un medio basado en la utilizacin de la enzima ureasa como base de la identificacin bateriana. Entre sus ingredientes contiene: extracto de levadura, como nica fuente de carbono, nitrgeno, vitaminas y cofactores, aportando los nutrientes esenciales para el desarrollo bacteriano. Las sales de fosfato constituyen el sistema buffer, el rojo de fenol es el indicador de pH y la urea es el sustrato para la enzima ureasa. Las bacterias que tienen la enzima ureasa, utilizan el nitrgeno de la urea, hidrolizndolo, liberando amoniaco y dixido de carbono. Estos productos metablicos alcalinizan el medio, haciendo virar el indicador rojo de fenol del amarillo a rojo. En un resultado negativo el medio permanece del mismo color amarillo.

MIO Prueba bioqumica semislida de color purpura usada para la identificacin de tres factores, que son la movilidad, la actividad de la ornitina descarboxilasa y la produccin de indol. En este medio la inoculacin se realiza por picadura. La presencia de extracto de levadura, peptona y triptena hacen que sea un medio altamente nutritivo. A la par que la triptena aporta cantidades suficientes de triptfano, sustrato de la enzima triptofanasa, para la deteccin de produccin del indol. La dextrosa es el hidrato de carbono fermentable, la ornitina es el sustrato para la deteccin de la enzima ornitina descarboxilasa, el prpura de bromocresol es el indicador de pH, que en medio alcalino es de color prpura y en medio cido es amarillo. La deteccin de estos tres parmetros se realizan de la siguiente manera: La movilidad se detecta de acuerdo a la turbidez o crecimiento del medio difundido ms all de la lnea inoculada, un resultado negativo el crecimiento solo es a lo largo de la lnea de picadura. La reaccin positiva a ornitina, se debe a la fermentacin de la glucosa que reduce el pH del medio produciendo una condicin cida que permite que el prpura vire a amarillo. Esta acidez es el medio perfecto para que la enzima ornitina descarboxilasa descarboxile la ornitina presente.

El indol es producido a partir del triptfano por la enzima triptofanasa, y es determinado positivo cuando se produce una coloracin roja al agregar el reactivo de Kovac Erlich, en dado caso que el anillo producido por el reactivo sea de color amarillo la prueba se considera negativa. Ornitina: positiva si se observa un color prpura en el fondo del medio y negativa si se genera Color amarillo color violceo en la superficie del medio.

AGAR HIERRO DE KLIGER Es utilizado para le identificacin bacteriana en base a la fermentacin de glucosa y lactosa, as como la produccin de cido sulfhdrico y gas. La inoculacin se realiza por picadura y estra. Entre los ingredientes que posee se encuentran: peptona de carne y triptena, que aportan los nutrientes necesarios para el crecimiento bacteriano. Lactosa y glucosa en este caso los hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio sustrato necesario para la produccin de cido sulfhdrico. El citrato de hierro y amonio es la fuente de iones de Fe 3+, que se combinan con el cido sulfhdrico para producir sulfuro de hierro de coloracin negra. El rojo de fenol es el indicador de pH, mientras que el cloruro de sodio provee el balance osmtico. Debido a color amarillo en medio cido. Los resultados son dados ya sea por: Un pico alcalino (rojo) y un fondo cido (amarillo): Que representa la fermentacin de la glucosa. Un Pico cido (amarillo) y un fondo cido (amarillo): fermentacin de glucosa y lactosa. Pico alcalino (rojo) y fondo alcalino (rojo): el microorganismo no fermentan estos azcares. En tanto la presencia de burbujas o rompimiento del medio indica que el microorganismo es productor de gas. Y el color negro en el fondo del medio indica la produccin de cido sulfhdrico. la fermentacin de azcares acidifica el medio, sta se puede detectar con el indicador rojo de fenol, el cual vira al

AGAR DE HIERRO Y LISINA Es una prueba bioqumica a base de agar slido color violeta utilizado especialmente para la identificacin de Salmonella, que se fundamenta en la descarboxilacin y/o desaminacin de la lisina y en la produccin de cido sulfhdrico. Resultados positivos a la descarboxilacin de la lisina son indicados por un pico y fondo de coloracin violeta; en tanto uno negativo presenta un pico violeta y un fondo amarillo. En tanto la desaminacin de la lisina arroja un resultado positivo cuando se presenta el pico color rojizo y fondo de color amarillo. Considerndose a su vez un resultado negativo mientras el pico no sea rojo y el fondo amarillo, otra combinacin de colores tambin nos indica una prueba negativa por ultimo la produccin de cido sulfhdrico se identifica por el ennegrecimiento de la prueba, especialmente en lmites de pico y fondo, la ausencia de este color negro en el medio indica la ausencia de dicho cido. Entre sus ingredientes se encuentra la peptona y el extracto de levadura, que aportan los sustratos necesarios para el crecimiento bacteriano. La glucosa es el hidrato de carbono fermentable y la lisina es el sustrato utilizado para detectar la presencia de las enzimas descarboxilasa y desaminasa. El citrato de hierro y amonio y tiosulfato de sodio son los indicadores de la produccin de cido sulfhdrico, mientras que el prpura de bromocresol tambin es un indicador pero de pH, el cual es de color amarillo a pH menor o igual a 5.2 y de color violeta cuando es igual o mayor a 6.8. Cuando el microorganismo descarboxila la lisina, se produce la amina cadaverina, que alcaliniza el medio y esto produce el viraje del indicador al color violeta. La descarboxilacin de la lisina tiene lugar en un medio cido, por lo que es necesario que la glucosa se vea previamente fermentada. Esta desaminacin tiene lugar debido a la formacin de un cido alfa-ceto-carbnico, el cual en conjunto con la sal de hierro y bajo la influencia del oxigeno forman un color rojizo en la superficie del medio.

SIM La capacidad de ciertas especies bacterianas para liberar azufre de los aminocidos que contienen azufre u otros compuestos en forma de H2S es una caracterstica importante para su identificacin, aunado a esto esta prueba considera dos parmetros previamente mencionados como los son la movilidad y la produccin de indol cuyos resultados se interpretan de manera semejante que para la prueba MIO, es decir observando la turbidez producida en el medio y el cambio de color producido por el reactivo de Kovac. El parmetro es un sulfuro insoluble de un metal pesado que produce un precipitado negro en el medio. El H2s se produce mediante tres pasos, primero la liberacin de sulfato a partir de la cistena o trisulfato por la accin enzimtica bacteriana, posteriormente el acoplamiento de sulfito (S2-) con un ion de hidrogeno (H1) para formar H2S y por ltimo la deteccin de H2S por hierro, bismuto o plomo, para producir sulfitos insolubles de metales pesados que aparecen como un precipitado negro.