Diego Gaete Alarcn 24.

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Medicina 2 Guido Ruiz

RECEPTORES II En esta clase haremos algunas consideraciones de los distintos tipos de Receptores que ya nombramos y clasificamos la clase pasada. *REPASO Clasificacin segn estructura de ligando endgeno que acta sobre Receptores Fisiolgicos Protena Pptido Lpido (Hormona Esteroidal) NO Amina

Clasificacin funcionalidad Fisiolgicos

en de

funcin de la los Receptores

Canales Acoplados a Protena G Enzima JAK-STAT (citoquina) Accin Nuclear (Glicero corticoides de h. esteroideas)

Aminocido Otros (Hormonas Tiroideas) Ligando endgeno: sustancia liberada por una clula para comunicarse con otra de tejidos adyacentes o lejanos. Los Receptores que son Canales Inicos y que dependen de un ligando (por eso son receptores), lo que hacen es aumentar la conductancia a un in o la entrada y salida de un in, los que habitualmente estn separados entre cationes y aniones; lo que distingue la funcionalidad del canal, ms all del tomo, es la carga. De ese modo, hay canales de cationes (aumentan la conductancia al Sodio, Calcio y Potasio) canales de aniones (Cloruro). Hay otros canales que tambin son especficos de Calcio, como el NMDA, pero eso no implica que bien pueda aumentar la conductancia al Sodio, es decir no existe un grado de especificidad muy elevado. Los canales dependientes de ligando dentro de los cuales vamos a nombrar: Canal Ligando Ion asociado Nicotnicos (N) acetilcolina Sodio GABAA GABA Cloruro NMDA y AMPA glutamato Calcio 5HT3 serotonina Sodio Lo que hacen normalmente los Ligandos, al unirse a los canales, es abrirlos y de ese modo favorecer el desplazamiento de los iones a favor del gradiente de concentracin que exista en la membrana celular. Esto genera normalmente efectos a nivel tisular que se evidencian en milisegundos, una cosa a considerar es que puede ser que la accin de un ligando sobre un canal no produzca ningn efecto evidenciable. Por ejemplo, muchas veces se est liberando desde una neurona pre-sinptica GABA que acta sobre una neurona post-sinptica que tiene receptor GABAA y no se observa nada como efecto tisular, a menos que alguien mida el potencial de la membrana (a partir de un experimento de PATCH-CLAMP), solo de ese modo se podra reconocer que la membrana est hiperpolarizndose luego de la apertura de canales de Cloruro. Sin embargo, si alguien observa el tejido no se va a

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evidenciar absolutamente nada. S se evidenciar un efecto, si sobre la misma neurona postsinptica acta luego un aminocido excitatorio o acta acetilcolina, en el sentido de que no se va a producir el efecto esperado para ese neurotransmisor porque la neurona post-sinptica est hiperpolarizada. Ese es un efecto tpico de Neuromodulacin: si uno tiene una neurona post-sinptica y una neurona pre-sinptica, y sobre la neurona post-sinptica se est liberando GABA y acta sobre sus receptores, y eso lo que produce es la entrada de Cloruro producir que la neurona se Hiperpolarice. Si estando hiperpolarizada recibe el influjo de Glutamato, el Glutamato muy probablemente si tendr un efecto despolarizador sobre la neurona post-sinptica, pero va a ser mucho menor que el que tendra si no estuviera actuando el GABA sobre la neurona secundaria. Sin embargo, la sola accin del GABA pareciese no tener efecto.

En Neurociencias, a eso se le llama Neuromodulacin, en el que un determinado neurotransmisor pareciera no tener ningn efecto sobre una neurona pero lo que hace es modular el efecto de otro neurotransmisor. En general, la apertura de estos canales lo que condiciona es hiperpolarizacin o despolarizacin de la membrana y ello es extremadamente til en el SNC y tambin, en el caso de 5HT 3, a nivel de sistema nervioso entrico. El hecho de que la activacin de estos receptores produzca respuestas en milisegundos permite que se produzcan las activaciones e inhibiciones propias del control elctrico en el SNC. Sin embargo, el hecho de que se abra un canal y que aumente la entrada de Calcio por ejemplo, o que se abra un canal y aumente la entrada de Sodio, puede condicionar la activacin de una va, en este ejemplo la va de la protena quinasa C, y esa va va abrir otra va llamada MEK, que genera un segundo mensajero (factor de transcripcin) llamado ERK y condiciona en el ncleo cambios en la expresin de protenas.

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Con esto se quiere sealar que no solo se puede cambiar la polaridad de la membrana, sino que incluso es posible, sobre todo si hay una sobrestimulacin de los canales dependientes de ligando, generar cambios adaptativos a esta sobrestimulacin, que muchas veces tienden a ser cambios que refuerzan sinapsis y por ende refuerzan patrones neuronales y que permiten las adaptaciones que condicionan el aprendizaje. Si bien los efectos sobre la polaridad de la membrana a nivel tisular que se observan luego de la activacin de los canales inicos se observan en milisegundos, obviamente los efectos a nivel transcripcional que tienen estos so observan ms tarde y se prolongan por mucho ms tiempo; se observan de minutos a horas, luego de que ha habido una estimulacin muy elevada de una neurona sobre los canales dependientes de ligando de esa neurona. Esto fundamentalmente ocurre sobre los canales dependientes de ligando excitatorios como la acetilcolina o como el glutamato. El receptor NMDA es un receptor de Glutamato, y se llama as solo por su agonista sinttico de mayor especificidad. El N-metil-D-aspartato no es una molcula endgena, de hecho es un aminocido dextrgiro, los cuales no existen a nivel fisiolgico y es una molcula que ha demostrado alta especificidad por el receptor y que permite reconocerlo y determinarlo, pero no es el ligando endgeno, el ligando endgeno es el glutamato. Receptores Ligados a Protena G. son normalmente estimulados por: Aminas: Aminocido descarboxilado. Receptor Ligando D Dopamina 5HT3 Serotonina* H Histamina / Adrenalina *La serotonina tiene solo receptores metabotrpicos, excepto uno que es el 5HT3. Aminocidos: llamados metabotrpicos porque en un comienzo pensaba que solo existan los canales y estos; y se crea que eran los nicos que controlaban el metabolismo; lo cual no es as, pero se mantiene el nombre. Ej. El receptor metabotrpico del Glutamato es mGlu. Pptidos: existe una gran familia de pptidos que son Ligandos ya sea como neurotransmisores o como hormonas. (Vasopresina, oxitocina, pptidos opioides, angiotensina, glucagn, calcitonina). Lpidos: Eicosanoides, derivan del acido araquidnico (20 carbonos), ellos son Leucotrienos (LT), Prostaglandinas (PG) y Tromboxanos (TX).

Estos Ligandos se unen a distintos sitios de los receptores ligados a protena G. Normalmente las molculas ms pequeas se unen a sitios que estn en los dominios transmembrana. Por ejemplo, las aminas y los aminocidos tienen un sitio de unin a nivel de los dominios transmembrana. Las molculas grandes como los pptidos (20-40 aminocidos) tienen sitios de unin por fuera, hay que darse cuenta de que la relacin en tamao pptido-receptor es muy similar.

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Medicina 2 La llegada de una amina o aminocido al receptor, por muy pequeo que sea, genera un cambio conformacional en el receptor; ese cambio conformacional consiste en estabilizar al receptor en un nivel de energa especfico durante ms tiempo que el que su propio equilibrio indicara (recordemos que el receptor es una protena con distintos niveles de energa relacionada a la estructura terciaria). En ese estado es capaz de relacionarse con una protena de membrana, que es un heterotrmero que se llama Protena G (se llama as porque la subunidad tiene una propiedad GTPasa intrnseca). Normalmente cuando no est unida al receptor, la molcula asociada a una subunidad es una molcula de GDP. Entonces llega el aminocido, la amina o el pptido al receptor y cambia su conformacin; y en ese estad el receptor es capaz de interaccionar con una protena G.

El encuentro genera un cambio conformacional a su vez en la protena G; la protena G intercambia GDP por GTP, porque es ms alta la concentracin de GTP cerca de la membrana y se disocian las otras dos subunidades de la protena G que se van por su lado y que tienen actividad regulatoria muy importante. Luego que se produce ese intercambio, la subunidad de la protena G activa, puede interaccionar con diversas enzimas dianas. Dependiendo de la naturaleza de la subunidad s va a actuar sobre el ATP estimulando la sntesis de AMPc o una subunidad i va actuar inhibiendo la sntesis de AMPc.

Si es una q va a actuar sobre otra enzima que se llama Fosfolipasa C (PLC), la cual regula la sntesis de dos mediadores muy importantes, los cuales son el Diacilglicerol (DAG) y el Inositol Trifosfato (IP3), que estn vinculados con las concentraciones y el metabolismo interno intracelular del Calcio. Llegado el momento, la subunidad se cansa, y como tiene una actividad GTPasa intrnseca libera un fsforo y vuelve a ser GDP y as, unida a GDP, se puede encontrar con otras subunidades y que tambin andan deambulando por la membrana y vuelven a constituirse en una protena G lista para interaccionar con otro receptor acoplado a protena G.

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Hay algunas protenas G que son capaces de abrir canales que son las que se llaman Protena G o. Una vez que se estimula la accin de la Adenilato Ciclasa (AC) porque la subunidad s genera un cambio conformacional estimulante sobre la enzima adenilato ciclasa, aumenta la sntesis de AMPc, luego de eso, el AMPc estimula a una Proteina Quinasa dependiente de AMPc que es la Protena quinasa A; esa protena quinasa genera muchas cascadas distintas de fosforilacin, se fosforilan directamente receptores, se fosforilan otras protenas quinasas, se fosforilan canales y otras enzimas como por ejemplo la fosfodiesterasa. La misma protena quinasa es capaz de activar a la fosfodiesterasa, que son las encargadas de catalizar el paso de AMPc a 5AMP y de ese modo detener su propia sealizacin (feedback negativo).

Va Fosfolipasa C. Se cataliza el paso de Fosfatidil Inositol (PIP3) a Inositol Trifosfato (IP3) y Diacilglicerol (DAG). El Inositol trifosfato aumenta la salida de Calcio del Retculo Endoplsmico y aumenta las concentraciones de Calcio intracelular, el aumento de Calcio intracelular abre canales de Calcio en la membrana dependientes de Calcio intracelular, por lo tanto entra ms Calcio. Cuando hay mucho Calcio ste se asocia a la Calmodulina, y se activa la Calmodulina por la va de la protena quinasa C, que es activada por DAG; en ese momento se genera uno de los segundos mensajeros ms importantes que existen a nivel intracelular que es el complejo CalcioCalmodulina. Lo ms importante que hace el complejo Calcio-Calmodulina es unirse a protenas estructurales del citoesqueleto y generar movimiento celular, tropismo, y movimientos del citoesqueleto sobre todo a nivel de Actina y de Sinapsina. Este movimiento del citoesqueleto es el que permite que cualquier otro ligando que est en vesculas se libere.

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Entonces axiomticamente uno podra decir, no hay liberacin de ningn ligando que est en vesculas a menos que haya habido un aumento de Calcio Intracelular que haya permitido ese oleaje del citoesqueleto. Lo que hace el complejo Calcio-Calmodulina es activar protenas del citoesqueleto y generar un oleaje que hace que los grnulos que contienen cualquier otra cosa (adrenalina) se liberen. Adems de eso el complejo activa una serie de otras enzimas por ejemplo Oxido Ntrico Sintasa, aumentando la sntesis de oxido ntrico. En este punto hemos hablado de AMPc, Diacilglicerol, Inositol trifosfato, Calcio y varias protenas quinasas (PKA, PKC); todos estos y muchas molculas que se activan luego de la activacin de un receptor acoplado a protena G son conocidos como segundos mensajeros. Es un trmino genrico que sirve para denominar a todos estos mediadores intracelulares cuya concentracin o cuya activacin aumenta luego de la llegada de un mediador extracelular que se entiende como primer mensajero, al cual nadie llama primer mensajero o ligando exgeno. Normalmente la activacin de un receptor acoplado a protena G provoca fosforilaciones que van a condicionar movimientos del citoesqueleto, movimientos celulares, fosforilacin de receptores, fosforilacin de canales, cosas que ocurren rpidamente y que regulan finamente el metabolismo y la actividad celular, esos cambios se evidencian en segundos. Por ejemplo, si alguien se aplica SALBUTAMOL por algn Asma o complicacin del tracto respiratorio, la broncodilatacin se siente de inmediato, ese es un efecto tpico de un receptor acoplado a Protena G. Puede a travs de un receptor acoplado a protena G regularse la sntesis de protenas? S, por medio de factores de transcripcin, como el CREB, el cual es capaz de activarse en el citosol y traslocarse al ncleo. En el DNA hay secuencias de regulacin y secuencias de expresin. Las secuencias de regulacin habitualmente estn reguladas por una serie de protenas; en la cadena de DNA hay una ensalada de protenas alrededor que se pueden imaginar como un LEGO, una de las secuencias se llama Response Element, que es la que responde a los Factores de Transcripcin. Todos los factores de transcripcin se sintetizan afuera del ncleo y son traslocados al ncleo, un segundo mensajero es un factor de transcripcin y las protenas unidas tambin son un factor de transcripcin; hay algunos receptores que son factores de transcripcin para los

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cuales el ligando, por ejemplo Hormonas Tiroideas, tienen un receptor (de hormonas tiroideas) que suele estar asociado al receptor de retinoides formando un dmero. El receptor de hormonas tiroideas es en s un factor de transcripcin y puede estar acoplado al DNA o asociado al receptor de retinoides y como factor de transcripcin alrededor del DNA y puede estar actuando sobre su elemento de respuesta que se llama TRE (Thyroid hormone response element), pero lo que se tiene que unir es la hormona tiroidea, fundamentalmente la T3. T3 tambin sera un factor de transcripcin, el receptor tambin. Existen Co-activadores y Corepresores, que pueden estar activos o no, los cuales tambin pueden ser entendidos como factores de transcripcin en otro sistema. El factor de transcripcin de la va del Calcio y de la va del AMPc es un factor que se ve activado fundamentalmente por la va de la protena G, otro muy importante es el ERK. CREB es un factor de transcripcin unido a un elemento de respuesta llamado CRE, hay protenas que se pueden unir a CREB, la ms importante de todas es CBP (CREB Binding Protein). La va del elemento de respuesta para la protena G (la va del Calcio o del AMPc) se puede activar de muchas maneras, esta va es una de las principales para los receptores acoplados a protena G y depende fundamentalmente del AMPc y tambin del Calcio; la otra va que tambin es muy importante y que depende fundamentalmente del Calcio es la va MEK. Los receptores que son dueos de la va MEK son enzimas. De una manera bsica, podramos dibujar un receptor que es una enzima como un dmero, los receptores que son enzimas tienen como ligando fundamentalmente a Insulina y a Factores de Crecimiento.

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La actividad cataltica que tienen es llamada Tirosina quinasa. Se llama actividad cataltica tirosina quinasa porque por la va de la protena G las fosforilaciones normalmente son en residuos de Serina y Treonina, pero en esta va las fosforilaciones son normalmente en residuos de Tirosina. Las fosforilaciones en residuos de Tirosina demandan mayor exposicin entre el sustrato y la enzima, para eso es necesario que las enzimas y los sustratos tengan dominios de reconocimiento que se van a llamar SH2 y SH3. La primera Tirosina quinasa que se determin fue la del Rous Sarcoma Virus (RSV), a partir de all se determin que las enzimas Tirosina quinasa tenan dominios de reconocimiento que permitan un mayor tiempo de asociacin entre enzima y sustrato y un reconocimiento tal que permita la fosforilacin de residuos de tirosina, esos dominios son no catalticos, solamente hacen que encajen como deben encajar las dos protenas (enzima y sustrato) y se llaman S (de sarcoma virus) H (de homologa, son secuencias homlogas a las que tiene el Rous Sarcoma Virus): SH 2 y SH3. El receptor Tirosina Quinasa y todas las enzimas que veremos, incluyendo las que llegan al ncleo (como los factores de transcripcin), tienen dominios SH2 o SH3, o ambos. Una vez que llega la Insulina o un Factor de Crecimiento, nuestro receptor se autofosforila. El receptor de Insulina es un dmero estable, los Factores de Crecimiento suelen ser monmeros que van por la membrana asociados a un chapern y que dimerizan, y ese dmero se vuelve estable por la unin del ligando (Factor de Crecimiento). De los receptores tirosina quinasa el nico que es un dmero estable siempre es el receptor de Insulina. Luego de la fosforilacin se acta directamente sobre un sustrato, el primer sustrato que se determin para el receptor de Insulina se le denomin Sustrato para el Receptor de Insulina (IRS). IRS es otra protena que es una enzima tambin que se fosforila, posee dominios SH2 y SH3 y posee actividad tirosina quinasa. Dependiendo del Factor de Crecimiento hay algunas molculas que varan. Finalmente se llega a activar una protena G pequea en esta va llamada Protena G Ras, que activa un factor activado por la protena Ras que se llama Raf, que es quien activa una quinasa que se llama MEK (MAPK/ERK quinasa, que es la quinasa de la MAPK para la va ERK). A travs de la MEK, se activa la MAPK (protena quinasa activada por mitgeno) y se llega a un segundo mensajero que se llama ERK (quinasa regulada exracelularmente). Antiguamente cuando se empezaron a estudiar estos segundos mensajeros se determinaron que eran segundos mensajeros que aumentaban cuando haba proliferacin celular, cuando haba un mitgeno (factor de crecimiento que aumenta la mitosis). Luego de que se activa ERK, se trasloca al ncleo, donde acta sobre un elemento de respuesta que se llama SRE (Serum Response Element) y a partir de all se generan los genes de expresin temprana (ONCOGENES) como c-Fos y c-Jun, que estn muy asociados a proliferacin celular tanto fisiolgica como patolgica, y son los primeros genes que se activan cuando hay aumento de la proliferacin celular. As como mediante la activacin de un receptor asociado a protena G lo que se consigue es hacer una regulacin fina del metabolismo, mediante esta va se consigue una regulacin mucho ms drstica del metabolismo y regular la proliferacin y diferenciacin celular; este proceso se evidencia de minutos a horas.

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*Tiempos Canales (milisegundos)/ Receptor acoplado a protena G (segundos)/ Receptor que es enzima (minutos a horas) Lo que no se vio: Receptores JAK-STAT de citoquinas; Toll-Like de IL-1, IL-8 y patrones asociados a patgenos; Receptor de Oxido Ntrico. El oxido ntrico es un gas de vida media corta (milisegundos), se libera y se va. El oxido ntrico es producido por una enzima que se llama NOS (oxido ntrico sintasa), la cual cataliza el paso de LArginina a Oxido Ntrico ms Citrulina. La NOS es activada por el complejo Calcio-Calmodulina. El oxido ntrico se libera y acta sobre una fibra muscular lisa (por ejemplo), como la fibra muscular lisa de la vasculatura arterial y arteriolar, y al actuar sobre la fibra muscular lisa, como el NO es un gas difunde y a nivel del citosol se une a su receptor, que es una enzima con actividad Guanilato Ciclasa, o sea aumenta el paso de GTP a GMPc. El receptor tiene un tomo de Fierro, porque tiene un grupo Hem como la Hemoglobina, y la llegada del oxido ntrico interacciona con ese grupo y genera un cambio conformacional en el receptor que produce GMPc. El GMPc activa una protena quinasa dependiente de GMPc que se llama PKG. La protena quinasa G por varios mecanismos propuestos disminuye la concentracin de Calcio intracelular y activa trasportadores de Calcio al interior del Retculo endoplsmico, entonces entra el Calcio que estaba en el citosol nuevamente al Retculo endoplasmtico y esa entrada de Calcio, disminuye la concentracin intracelular de Calcio que cierra canales de Calcio que estaban abiertos por el Calcio que haba en el citosol. De ese modo disminuye el Calcio intracelular drsticamente, no habiendo Calcio intracelular no se puede formar el complejo Calcio

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Calmodulina, por lo tanto no se produce la contraccin de la fibra muscular lisa. De ese modo en NO produce relajacin de la fibra muscular lisa.

Esta va es muy importante para comprender el efecto de la Nitroglicerina y los nitratos, utilizados en el tratamiento de la angina pectoris, porque aumentan la capacidad coronaria; tambin es importante para comprender el mecanismo de los frmacos utilizados actualmente en la disfuncin erctil como el Sildenafil, porque el Sildenafil y sus derivados lo que hacen es inhibir a la fosfodiesterasa involucrada en el paso de GMPc a 5GMP, asi se prolonga el tiempo de dilatacin de la musculatura lisa (en este caso la cavernosa). Por su grado de especificidad bajo se generan los efectos adversos.