CADENA RESPIRATORIA

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Material elaborado por: J. Monza, O. Borsani, L. Batista y S. Signorelli La cadena respiratoria se abastece de poder reductor Las clulas eucariotas y procariotas obtienen energa, principalmente bajo forma de ATP, a partir del poder reductor (o H2) presente en las molculas de glcidos, lpidos y aminocidos, entre otras. Como se observa en la figura 1, el aceptor final de los H2 es el O2, se trata de un ejemplo de clula aerobia. Sin embargo, hay otros tipos de clulas en que los aceptores finales de H2 son molculas diferentes del O2, esas clulas son anaerobias y fermentativas. Ahora vamos a centrar el estudio en clulas aerobias. Los azcares, cidos grasos y aminocidos cuando son oxidados (degradados) proveen de poder reductor, de manera ms o menos directa, a la cadena respiratoria (Figura 1). As, se reducen cofactores como el NAD y el FAD dando inicio a la transferencia del poder reductor (H2) hasta el aceptor final, que en los organismos aerobios es el O2 (Figura 1). La variacin de energa de los electrones desde los precursores reducidos (aminocidos, glcidos y cidos grasos) hasta el agua, es un proceso exergnico, que impulsa la reaccin endergnica de sntesis de ATP a partir del ADP y P (Figura 1 y 2).

Figura 1. Diagrama que muestra la convergencia del poder reductor (H2) desde molculas reducidas (aminocidos, glcidos y cidos grasos) hasta el oxgeno. Parte de la energa liberada se conserva como ATP.

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El ATP es un mononucletido que acumula la energa A travs de los transportadores de la cadena respiratoria ocurren reacciones de xido reduccin, que liberan la energa necesaria para la sntesis de ATP, segn se representa en la Figura 1. Esta molcula es el reservorio de energa comn en animales, vegetales, hongos y bacterias. El ATP est formado por adenina, ribosa y tres grupos fosfatos: es un nucletido trifosfato (Fig. 2). Tambin son mononuclotidos, pero mono y difosfato, el AMP y el ADP .

Figura 2. Molcula de ATP (adenosn trifosfato). AMP (adenosn monofosfato) y ADP (adenosn difosfato). Las flechas indican los enlaces fosfoanhidro y la energa contenida en ellos. La adenina (A) es una representacin de la molcula, y no su frmula.

La formacin de un enlace fosfoanhidro (entre dos P) es una reaccin fuertemente endergnica que requiere 7.5 Kcal (Figura 2). La hidrlisis de este enlace libera la misma cantidad de energa. De esta forma, en la transformacin del ATP en ADP se liberan 7.5 Kcal y un fosfato, y de ADP a AMP se liberan otras 7.5 Kcal y otro fosfato: la hidrlisis de ATP en AMP rinde entonces 15 Kcal. Otros mononucletidos, como los que aparecen en la figura 3, tienen otras bases: guanina el GTP, citosina el CTP, uracilo el UTP y timina el TTP. La sntesis de estos nucletidos trifosfato desde los monofosfato o difosfato respectivos requiere la misma cantidad de energa que la sntesis de ATP desde el AMP o ADP. Por lo tanto, la hidrlisis de los enlaces de alta energa de cualquier mononucletido rinde la misma cantidad de energa: de GTP a GMP o de TTP a TMP se liberan 15 kcal. Si bien hay otros mononucletidos capaces de conservar energa en sus enlaces fosforanhidro, el ATP es la molcula bajo la cual las clulas almacenan inicialmente la energa, y a partir de ella se forman en general los otros mononucletidos. Por ejemplo, mientras un ATP rinde ADP un GDT se fosforila a GTP, etc.

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Figura 3. Mononucltidos trifosfato. Los enlaces de alta energa (indicados con flecha) ocurren entre dos fosfatos con prdida de agua (fosfoanhidros). Su hidrlisis, es decir su ruptura con entrada de agua, libera la misma cantidad de energa.

La cadena respiratoria en las clulas eucariotas ocurre en mitocondrias La mitocondria en un organelo presente en las clulas de vegetales, animales y hongos, es decir en todas las eucariotas. Su nmero por clula es variable, y est limitada por dos membranas, una externa y otra interna. Estas membranas delimitan dos espacios: la cmara externa o espacio intermembrana y la matriz (Figura 4). En la membrana interna se localiza la cadena respiratoria, que consta de una serie de transportadores de electrones como el NAD, CoQ, citocromos y diversas enziamas. En las bacterias la cadena respiratoria est asociada a la membrana celular. La cadena respiratoria siempre est asociada a una membrana, porque para su funcionamiento es necesario un ordenamiento espacial bien definido de los transportadores y protenas que la integran, como se ver ms adelante.

Figura 4. Mitocondria. A Modelo de una mitocondria. (modificado de botanica.cnba.uba.ar) y B Microscopia electrnica de una mitocondria (tomado de genomasur.com). En la matriz hay ADN y ribosomas, que le permiten sintetizar algunas protenas necesarias para su funcionamiento: es un organelo semiautnomo.

Los transportadores de cadena respiratoria tienen diferente afinidad por los electrones A travs de la cadena respiratoria se dan reacciones de xido reduccin que se suceden desde el NAD y el FAD hasta el oxgeno (Fig. 5). Los electrones pueden ser captados o cedidos de diferentes formas: a. un electrn individualmente, b. un electrn unido a un protn; como un tomo de H, c. dos electrones unidos a dos protones; como dos tomos de H.

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En la figura 5 se representan los transportadores de la cadena respiratoria ordenados segn su potencial redox. La direccin del flujo de e-, indicada con una flecha, es desde los transportadores con menor afinidad por los e- (potencial redox ms electronegativo) a los de mayor afinidad (potencial redox ms electropositivo).

Figura 5. Esquema donde se representan los transportadores de la cadena respiratoria ordenados segn su afinidad creciente por los e-. Los e- fluyen desde los transportadores ms electronegativos a los ms electropositivos. NAD, nicotn adenn dinucletido; FAD, flavn adenin dinucletido; CoQ, coenzima Q o ubiquinona; cit, citocromos. Los ATP se representan para ilustrar la cantidad que se pueden formar, pero su posicin en el esquema es imprecisa.

La cadena respiratoria est integrada por trasportadores y protenas que forman loa complejos Una forma de analizar el funcionamiento de la cadena respiratoria es a travs de los complejos que forman los transportadores y las enzimas. El Complejo I (NADH - ubiquinona reductasa) es por donde ingresan la mayora de los electrones a la cadena. Los electrones son transferidos desde el NADH.H a la CoQ (Fig. 6), a travs del FMN (flavn mononucletido) que es parte del Complejo I. El esquema resume el proceso.

El Complejo II (succinato deshidrogenasa) es el otro punto de entrada de electrones a la cadena (Fig. 6), y en su transferencia entre el FAD y la CoQ no libera energa suficiente para bombear protones. Por esto se genera un ATP menos cuando la cadena comienza por el FAD respecto a cuando comienza por el NAD. El Complejo III (CoQ - citocromo c reductasa) recibe electrones de los Complejos I y II (Fig. 5 y 6). A partir de este paso se transportan electrones, y quedan libre los H+. El Complejo III

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involucra a los citocromos y la energa aportada por este Complejo para el bombeo de protones es suficiente para formar ATP (Fig. 7).

Figura 6. Representacin de los complejos que integran a la cadena respiratoria. Se indica la direccin del transporte de e- a travs de los complejos y de los H+ desde la matriz al espacio intermembrana, y desde este nuevamente a la matriz a travs de la ATPasa (Complejo V).

El Complejo IV (citocromo oxidasa) cataliza la formacin de H2O a partir de los 2 e-, O y 2H+. Este complejo contribuye con la generacin de un gradiente de protones suficiente para generar un ATP. Observar que el oxgeno se reduce a agua, mientras la energa liberada por los electrones permite la fosforilacin del ADP a ATP: el proceso se denomina fosforilacin oxidativa. El Complejo V, tambin anclado en la membrana mitocondrial interna, es la ATPasa o ATPsintasa (Fig. 6). Este complejo est formado por los componentes Fo y F1: a. Fo corresponde al canal protnico (Fig. 7). En presencia de oligomicina, un antibitico que se une a este canal, no ocurre el pasaje de H+, y por lo tanto se inhibe la sntesis de ATP. b. F1 contiene las unidades catalticas de la ATPasa, que permite sintetizar el ATP a partir del ADP y P (Fig. 6 y 7).

Matriz

Espacio intermembrana

Figura 7. Modelo de la ATPasa y canal protnico. Se indican los oligmeros que conforman el canal protnico (Fo) y a la ATPasa (F1). Tomado de ugr.es.

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En resumen: en la membrana mitocondrial interna se localizan los Complejos I al IV (NADH deshidrogenasa, succnico deshidrogenasa, coenzima-Q reductasa y citocromo c oxidasa) que transportan electrones, y el Complejo V que no est vinculado al transporte de e- como los otros, sino a la sntesis de ATP. La cantidad de ATP generado es distinta si los electrones ingresen por el Complejo I o II Por cada fosfato que se une al ADP para dar ATP se requiere energa que liberan los electrones, que son aceptados finalmente por el O2 con la consecuente formacin de H2O (Fig. 5 y 6). De esta forma se puede establecer una relacin entre el fsforo y el oxgeno P/O: Los electrones desde el NAD al O2 liberan energa suficiente para generar 3 ATP y consumen O2 (1 O) para formar H2O. En esta condicin la relacin P/O = 3/1= 3. Los electrones desde el FAD al O2 liberan energa suficiente para generar 2 ATP y consumen O2 (1 O) para formar H2O. En esta condicin la relacin P/O = 2/1= 2.

En resumen: la relacin P/O se refiere a cuantas molculas de fosfato son fijadas en relacin a la cantidad de oxgeno consumido. El resultado neto es que por cada NADH es posible generar 3 ATP (relacin 3/1), mientras que por cada FADH2 es posible generar 2 ATP (relacin 2/1). La variacin de energa libre en un proceso de oxidacin se puede cuantificar La variacin de energa libre (G) que se produce en las reacciones redox est relacionada con el potencial de reduccin estndar (E), cuando se transfieren electrones desde una molcula a otra. Se puede calcular el cambio de energa libre estndar de una reaccin redox a partir de la diferencia del potencial redox de los dos pares que participan en la reaccin, segn la frmula: G = - n . F. E n es el nmero de electrones transferidos; F la constante de Faraday (23.06 Kcal V-1 mol-1, 96.5 kJ V-1 mol -1) y E la variacin del potencial redox en voltios. La cadena respiratoria es un proceso fuertemente exergnico, pero hay prdidas de energa bajo forma de entropa en el acople entre el transporte de e- y la fosforilacin del ADP. Si se relaciona la cantidad de kcal que se conservan en los enlaces del ATP con la cantidad de energa que potencialmente se podra formar surge que alrededor del 40% de la energa se disipa.

La teora quimiosmtica explica cmo el gradiente protnico generado por la cadena respiratoria permite la sntesis de ATP La energa liberada por los electrones en la cadena respiratoria, es usada para el bombeo de protones desde la matriz mitocondrial hacia el espacio intermembrana (figuras 4 y 8). Este bombeo produce un gradiente de protones, y como consecuencia una desigualdad de cargas y de pH a ambos lados de la membrana interna. Como consecuencia del bombeo de H+, el pH de la matriz se vuelve alcalino respecto al del espacio intermembrana y se genera un gradiente qumico y elctrico. La fuerza protn motriz, consecuencia del gradiente, hace posible que los protones vuelvan a la matriz, de manera que el pH tiende a igualarse a ambos lados de la membrana. A medida que los H+ fluyen pasivamente de nuevo hacia la matriz a travs del canal Fo, el complejo enzimtico ATP sintasa utiliza la fuerza protn motriz para generar el enlace fosfoahidro entre el ADP y el P, y producir ATP. La membrana interna es impermeable a los iones, incluyendo a los H+, que slo pueden atravesarla mediante transportadores y por canales Fo - F1 (ATP sintasa).

En resumen: la fuerza protn motriz entre los dos compartimentos es el acontecimiento primario en la conservacin de energa. Con el flujo pasivo de H+ hacia la matriz a travs de la ATP asa se sintetiza ATP en cuyos enlaces fosfoanhidro se conserva la energa qumica.

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Figura 8. Modelo de la teora quimiosmtica o de Mitchel. Mientras los electrones transcurren por la cadena de transportadores desde el Complejo I hasta el O2, la energa liberada se usa para bombear H+ desde la matriz hacia el espacio intermembrana. Los H+ vuelven a la matriz a travs de los canales protnicos (Fo), que se abren como consecuencia del gradiente generado a ambos lados de la membrana interna. La energa liberada por los H+ al volver a la matriz es usada para sintetizar ATP, es decir, para generar enlaces fosfoanhidro entre el fosfato y el ADP. Adaptado de recursos.cnice.mec.es.

Los inhibidores de la cadena respiratoria impiden el pasaje de electrones Las molculas que actan como inhibidores impiden el flujo de e- entre los transportadores, y por lo tanto la sntesis de ATP. Estas molculas pueden actuar como venenos. El Amital (un barbitrico) o la Rotenona (un insecticida) bloquean el flujo de e- desde el NADH a la CoQ, mientras la Antimicina (un antibitico) lo hace entre CoQ y Cit b, y el cianuro, la azida y el monxido de carbono actan sobre la citocromo oxidasa. La aplicacin de estos inhibidores bloquea el pasaje de e- por la cadena respiratoria. De esta forma por detrs del punto de inhibicin los transportadores quedan reducidos. Como consecuencia de esto no se produce ATP porque no se genera el gradiente protnico, ni agua porque los e- no llegan a reducir al O2: la cadena est interrumpida.

Los desacopladotes de la cadena respiratoria no impiden el pasaje de electrones El Dinitrofenol (DNP) y la termogenina, entre otras molculas, pueden actuar como desacopladores, es decir desacoplan el transporte de e- de la sntesis de ATP. Los desacopladores disminuyen la generacin del gradiente de H+ porque permiten que los H+ difundan desde el espacio intermembrana hacia la matriz. La membrana mitocondrial interna se hace entonces permeable a los H+, lo que interfiere con la generacin del gradiente. En presencia de desacopladores se consume oxgeno, porque no est alterado el transporte de e- a travs de la cadena, pero se forman menos ATP porque no se establece normalmente el gradiente protnico.

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La termogenina es una protena presente en la membrana mitocondrial interna del tejido adiposo pardo. A travs de esta protena pasan los H+, de manera que se genera un gradiente protnico mucho menor, y por lo tanto la cantidad de ATP generado tambin es menor. Como consecuencia de este desacople entre el transporte de e- y la fosforilacin oxidativa, se libera energa como calor. El tejido adiposo pardo es abundante en animales que hibernan.

Inhibidores de la ATPasa Hay molculas que inhiben la sntesis de ATP, pero que no actan sobre la cadena respiratoria. Por ejemplo la oligomicina, un antibitico que interfiere en el transporte de protones. Esta molcula se une a la subunidad Fo de la ATPasa e impidie de esta forma el pasaje de H+. Bibliografa
Nelson y Cox, Lenhinger Principios de Bioqumica. Editorial Omega. Ediciones varias. Stryer, Lubert; Berg, Jeremy M.; Tymoczko, John L. Bioqumica: Stryer. Editorial Reverte. Ediciones varias. Link video: http://www.edumedia-sciences.com/es/a417-cadena-respiratoria