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Objectivos: - Preparao de esfregaos bacterianos - Colorao simples de esfregaos bacterianos - Identificao da morfologia e tipo de agrupamento de vrias espcies bacterianas
Introduo: A observao microscpica de bactrias, com o intuito de avaliar a sua morfologia, tamanho, tipo de agrupamento e outros detalhes, s possvel se prepararmos um esfregao bacteriano, e corarmos as bactrias nele presente. Um esfregao bacteriano representa uma preparao seca de clulas bacterianas fixas a uma lmina de vidro. Num esfregao bacteriano que tenha sido devidamente processado: (a) as bactrias so espalhadas ao longo da lmina, numa concentrao tal, que lhes permitem ficar adequadamente separadas umas das outras (b) as bactrias no saem da lmina durante as fases de lavagens dos processos de colorao (c) a forma das bactrias no distorcida Aps a obteno de um esfregao bacteriano, a colorao das bactrias torna-se necessria para observao microscpica uma vez que a maioria das bactrias transparente, no sendo possvel distinguir qualquer detalhe da sua morfologia. Ao utilizar tcnicas de colorao possvel aumentar o contraste, e assim identificar caractersticas celulares mais facilmente. A morfologia celular (forma, agrupamento, tamanho e estrutura) fornece informao preciosa na identificao bacteriana.
Colorao simples
Morfologia bacteriana: Forma: cocos bacilos (cocbacilos) vibries formas espiraladas Agrupamento: dois a dois (diplococos ou diplobacilos) ttradas e sarcinas/octetos em cadeia (estreptococos ou estreptobacilos) em cacho (estafilococos) em paliada
Colorao bacteriana: A colorao bacteriana baseia-se no princpio de que cargas contrrias se atraem, enquanto que cargas idnticas se repelem. Uma clula bacteriana transporta carga elctrica. Por exemplo, numa soluo aquosa, com pH prximo de 7, a maioria das bactrias apresenta uma carga negativa. As bactrias assim carregadas atraem molculas com cargas positivas, e repelem molculas com cargas negativas. Os corantes utilizados em bacteriologia so constitudos por sais de ies, que podem apresentar carga positiva ou negativa. Os corantes mais utilizados em microbiologia so os corantes bsicos: nos quais o grupo cromforo est carregado positivamente (Ex: cristal de violeta, safranina, azul de metileno, fucsina bsica). Os corantes cidos so, normalmente repelidos pelas bactrias devido carga negativa do seu grupo cromforo. Este tipo de corantes cora o background deixando as clulas transparentes (Ex: eosina, Rose bengal, fucsina cida).
Microbiologia geral - FFUC Colorao simples
Protocolo: Execuo de um esfregao bacteriano 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. Limpar e secar uma lmina de vidro Flamejar a lmina Marcar o lado da lmina em que vai fazer o esfregao Esterilizar a ansa Homogeneizar a suspenso bacteriana Destapar o tubo e flamejar o bucal do tubo Retirar uma ansa da suspenso bacteriana Voltar a flamejar o tubo, antes de o tapar Aplicar a ansa de produto na superfcie da lmina Estender a ansa do produto ao longo da lmina - Extenso Esterilizar a ansa Secar o esfregao com o calor da chama - Secagem Fixar o esfregao, atravessando 3 vezes a chama com lmina voltada para cima, e em posio oblqua - Fixao
Protocolo: Colorao Simples 1. Cobrir o esfregao com um dos seguintes corantes: Violeta de Genciana ou Fucsina de Ziehl dil. 2. Deixar actuar o corante durante 30 segundos 3. Eliminar o excesso de corante 4. Lavar o esfregao com gua 5. Secar o excesso de gua (com papel na parte de trs e o restante chama) 6. Colocar uma gota de leo de imerso sobre o esfregao 7. Observar ao microscpio com a objectiva de imerso, tendo o cuidado de abrir o diafragma e subir o condensador 8. Desenhar as clulas observadas
Colorao simples
Aluno: ___________________________________________________________________ N de aluno: ______________ Turma: __________ Data: ___ / ___ / ___
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Colorao simples