SEMINARIO BIBILIOGRFICO

MECANISMOS DE TRANSMISIN Y FACTORES DE RIESGO DE INFECCIN CON EL VIRUS DE LA DIARREA VIRAL BOVINA (VDVB) EN EL BOVINO.

Jos Antonio Rondn

Valdivia Chile 2010

1. INTRODUCCIN
La diarrea viral bovina (DVB) es un complejo de enfermedades asociadas a infeccin por el virus de la diarrea viral bovina (VDVB). La infeccin natural en el animal susceptible tiene como puertas de entrada principalmente las vas oral y nasal, actuando el bovino con infeccin aguda o con infeccin persistente

(IP) como fuente primaria de infeccin. La DVB est asociada con varios sndromes clnicos que van desde infeccin inaparente y seroconversin hasta enfermedad clnica severa y muerte (Tremblay 1996); es una enfermedad de distribucin mundial, endmica en la mayora de las poblaciones de bovinos, alcanzando una seroprevalencia entre 50 a 90%. Es responsable de importantes prdidas en la productividad de los rebaos en pases productores de ganado bovino, especialmente durante la gestacin y post parto (Lrtora 2003). Chile no escapa a esta realidad, y aunque para antes de 1986 slo existan evidencias de actividad viral mediante pruebas de seroneutralizacin, Reinhardt y col (1986) reportan el aislamiento e identificacin del VDVB en Chile por primera vez, a partir de muestras provenientes de terneros de un predio de la Regin de los Lagos. En cuanto a las prdidas econmicas que ocasiona en la poblacin bovina, de acuerdo a estudio realizado en Dinamarca, se ha estimado que con una incidencia anual de 34% de casos agudos de DVB, las prdidas anuales alcanzaron los 20 millones de US$ por cada milln de terneros ante los efectos de una cepa de baja virulencia, mientras que con una de alta virulencia e igual nivel de incidencia, las prdidas correspondieron a 57 millones US$ por cada milln de terneros, en consecuencia, el anlisis costo-beneficio de los programas de control es altamente dependiente del riesgo de nuevas infecciones bajo

diferentes circunstancias y de las cepas virales involucradas (Houe 1999). En el ao 2007, la Oficina Internacional de Epizotias (OIE) agreg a la DVB en la lista de enfermedades de notificacin obligatoria en ganado bovino (Ridpath 2010). La alta prevalencia y las consecuencias de la infeccin hacen que las medidas de control sean de fundamental importancia para los veterinarios, productores y autoridades sanitarias, razn por la cual es crucial conocer los mecanismos de transmisin y los factores de riesgo involucrados en el ingreso del VDVB a los rebaos y en diseminacin de la infeccin.

2. OBJETIVO DE LA REVISIN
Describir los mecanismos de transmisin y los factores de riesgo del VDVB, como elementos importantes en la epidemiologa de la enfermedad que determinan la presencia de infeccin en el ganado bovino.

3. MECANISMOS DE TRANSMISIN
En la epidemiologa de toda enfermedad infecto-contagiosa o transmisible, es importante considerar para su estudio la cadena epidemiolgica, la cual se refiere a la secuencia de elementos que se articulan en la transmisin de un agente a partir de la fuente de infeccin hasta el hospedero susceptible. En relacin con la DVB, los objetivos planteados en los estudios epidemiolgicos para describir la manera por la cual el virus se disemina dentro y entre rebaos son un desafo, as como los mtodos que determinan el estado de infeccin en los mismos y particularmente la identificacin de los animales con IP, inciden de manera relevante en la toma de decisiones relacionadas con las estrategias de control (Houe 1999). La clave dentro del control de la enfermedad consiste en prevenir la infeccin en fase temprana de la gestacin con el objetivo de evitar la

presencia de animales con IP en el rebao, puesto que constituyen los principales reservorios y fuentes de infeccin (Lindberg y Houe 2005). La transmisin del VDVB puede ser horizontal y a su vez directa o indirecta mediante la inhalacin y/o ingestin del virus proveniente de un animal infectado o de materiales contaminados, respectivamente (Smith y Grotelueschen 2004). Para comprender la complejidad del mecanismo de transmisin y diseminacin del VDVB en la poblacin bovina y sus consecuencias luego del ingreso en un rebao, se deben considerar las mltiples posibilidades que surgen de la interaccin entre las fuentes de infeccin, vas de transmisin y el hospedero susceptible, as como los elementos que integran cada rengln (figura 1), (Lindberg y Alenius 1999).

FUENTES DE

VAS DE TRANSMISIN

HOSPEDERO SUSCEPTIBLE Hemb

Bovino

Vertic

Fet Mach Directa

Bovino con infeccin aguda Otras

Terne Horizont Indirec Adul Hemb Prea Mach Pre-

Figura. 1. Transmisin del VDVB

3.1. FUENTES DE INFECCIN 3.1.1. Animales con infeccin persistente (IP): Los fetos que sobreviven a la infeccin con VDVBNC entre los 18 y 125 das de la gestacin, invariablemente desarrollan inmunotolerancia al virus y por consiguiente IP (Grooms 2004), condicin que fue descrita por primera vez en un toro aparentemente sano (Coria y McClurkin 1978); se estima que aproximadamente el 50% de los animales con IP pueden morir durante el primer ao de vida (Duffell y Harkness 1985, Smith y Grotelueschen 2004). En algunos rebaos con historial de DVB, la prevalencia de animales con IP puede ser 27% (Shimizu y Satou 1987); Ribeiro y Pereira (2004) encontraron que hasta un 24% de hembras con IP pueden alcanzar la edad reproductiva, produciendo invariablemente terneros con IP (Grooms 2004). Estudios en varios pases demuestran que la prevalencia de animales con IP es de 0,5 a 3% (Larson y col 2004), sin embargo, a pesar de su baja prevalencia, por el hecho de eliminar virus durante toda su vida y en altas cantidades a travs de sus secreciones, los animales con IP son considerados los principales reservorios del virus, siendo en consecuencia la principal fuente de infeccin dentro y entre los rebaos susceptibles (Grooms 2004, Smith y Grotelueschen 2004). La permanencia indefinida de la infeccin en los rebaos est directamente relacionada con la presencia, cantidad y supervivencia de animales con IP, as como el grado de contacto con animales susceptibles (Viet y col 2004). Bajo confinamiento y en estrecho contacto, un animal con IP puede infectar al 90% de la poblacin en un lapso de 4 meses (Houe 1995, 1999).

3.1.2. Animales con infeccin aguda: La infeccin aguda se presenta cuando un animal inmunocompetente es expuesto a una cepa del VDVB citoptico o no

citoptico (Givens y Waldrop 2004); se estima que el 70 a 90% de los casos cursan con infeccin subclnica (Bolin y Grooms 2004) con posterior generacin de respuesta inmune que elimina el virus, en caso contrario, puede cursar con depresin, inapetencia, erosiones y ulceraciones orales, disminucin en la produccin de leche, diarrea y muerte (Givens y Waldrop 2004). Los animales con infeccin aguda con o sin signos clnicos tambin eliminan virus (Houe 1995 y Tremblay 1996); poseen poca importancia como fuentes de infeccin puesto que eliminan virus en poca cantidad (5 a 75 CCID50/ml) (Kirkland y col 1991) y por tiempo no mayor a dos semanas (Larson y col 2004, Lrtora 2003, Lindberg y col 2004); sin embargo, el estado reproductivo (hembras gestantes o machos en servicio) o compromiso del sistema inmune (estrs, nivel nutricional, estatus inmune, enfermedades concomitantes) pueden condicionar la transmisin confiriendo importancia a los animales con infeccin aguda en la diseminacin de la infeccin por va horizontal. En rebaos cerrados y sin animales con IP se ha detectado seroconversin por presencia de infeccin aguda durante periodos de 10 meses o ms (Niskanen y col 2000). Tambin se han encontrado bovinos seropositivos con virus en sus leucocitos que bajo condiciones experimentales pueden expresarlos y adems poder transmitirlo mediante inoculacin de corderos con leucocitos de dichos animales (Gogorza y col 2005). No se debe subestimar la importancia de animales con infeccin aguda como fuente de infeccin y mantenimiento del VDVB dentro de una poblacin o rebao (Houe 1995), ya que pueden ser responsables del 93% de todas las infecciones congnitas que resultan en nacimiento de terneros con IP (Bronwlie y col 2000), en consecuencia y debido a que la probabilidad de que una hembra seronegativa

produzca un ternero con IP es muy alta, se estima que el 90% de ellos provienen de hembras que no poseen IP (Ribeiro y Pereira 2004).

3.1.3. Otras fuentes de infeccin. 3.1.3.1. Semen: El VDVB se elimina a travs del semen cuando los machos infectados alcanzan la edad reproductiva; los toros con IP eliminan virus en altas concentraciones durante toda su vida, siendo muy importantes como fuentes de infeccin, por el contrario, toros con infeccin aguda son considerados de poca importancia debido a que elimina virus en poca concentracin y por corto tiempo (Larson y col 20004). Los toros con IP pueden ser frtiles y producir semen de calidad aceptable, as, vacas seronegativas servidas por dichos animales o por inseminacin artificial se infectan, y slo se prean luego de hacerse seropositivas (Kirkland y col 1994). Kirkland y col (1991) encontraron que un toro con IP produjo 107,6 CCID50/ml (dosis infecciosa 50 en cultivo celular por ml) de virus en el lquido seminal, debido probablemente a replicacin viral en la prstata y vesculas seminales; toros con infeccin aguda pueden eliminar virus en cantidad de 5 a 75 CCID50/ml con aceptable concentracin, motilidad y morfologa de los espermatozoides. El virus puede ser aislado despus de desaparecer la viremia, pero no cuando se produce la seroconversin (Kirkland y col 1991). 3.1.3.2. Transferencia de embriones: El VDVB puede estar presente en la zona pelcida de embriones procedentes de hembras donantes con IP o con infeccin aguda. De igual modo, el embrin o la vaca receptora pueden infectarse cuando el suero fetal usado durante el proceso de transferencia est contaminado con el virus (Lrtora 2003). En razn de que el VDVB puede estar presente tanto en el

semen, embriones o reactivos de origen animal utilizados en el transplante de los mismos, son necesarias medidas de control que aseguren que dichas tcnicas inadvertidamente sean una fuente de infeccin que favorezca la transmisin del virus (Givens y Waldrop 2004). 3.1.3.3. Otras especies: Se ha detectado tanto VDVB y/o anticuerpos en ovinos, caprinos, porcinos, alpacas, llamas, guanacos, ciervos, renos y otros ungulados (Celedn y col 2001, Van Campen y col 2001, Lrtora 2003, Larson y col 2004); pudiendo ocurrir transmisin interespecie, pues el virus tiene la capacidad de cruzar dicha barrera (Smith y Grotelueschen 2004). 3.1.3.4 Fmites: Diversas herramientas y elementos contaminados con las secreciones de animales infectados han sido evaluados como potenciales vehculos en la transmisin del virus (Niskanen y Lindberg 2003, Larson y col 2004, Lindberg y col 2004), ello debe tenerse encuenta, ya que puede sobrevivir en heces durante 3 h a 35oC, 3 das a 20oC y hasta 3 meses a 5oC (Niskanen y Lindberg 2003). Las vacunas a virus vivo, las elaboradas con suero fetal bovino contaminado y los cultivos celulares usados en su elaboracin tambin contaminados (Givens y Waldrop 2004), as como medicamentos inyectables contaminados usados en forma colectiva en los rebaos, pueden ser importantes fuentes de infeccin (Niskanen y Lindberg 2003). Los lquidos fetales y loquios uterinos de animales con IP tambin son importantes fuentes de infeccin (Lindberg y col 2004).

3.2. VAS DE TRANSMISIN 3.2.1. Transmisin horizontal directa: El contacto directo de un animal susceptible con un animal con infeccin aguda o con IP, a travs de la va oro-

nasal, se considera como la manera ms efectiva de transmisin horizontal directa, principalmente cuando el contacto es estrecho (Lrtora 2003, Niskanen y Lindberg 2003). Es importante considerar las puertas de salida del virus como la ocular, nasal, oral, urogenital y fecal (Smith y Grotelueschen 2004. Las puertas de entrada oro-nasal y genital constituyen las principales y el resultado de la infeccin depende de la cantidad de virus presente (Givens y Waldrop 2004). El grado de transmisin depende de la proporcin de animales infectados y de susceptibles en las diferentes poblaciones, grupos etarios, sistemas de produccin y medidas de manejo (Viet y col 2004).

3.2.2. Transmisin horizontal indirecta: Si bien el contacto directo es la manera ms importante de transmisin, se deben conocer los factores involucrados en la transmisin de la infeccin por va indirecta, con el fin de disear e implementar las medidas necesarias dentro de un programa de control y/o erradicacin de la enfermedad. Esta forma involucra un vehculo animado o inanimado que permite poner en contacto al virus con el hospedero susceptible tales como fmites, frmacos de uso parenteral empleados en la administracin de tratamientos colectivos (Smith y Grotelueschen 2004), inseminacin artificial, transferencia de embriones lquidos fetales y uterinos (Grooms 2004). Algunos rumiantes silvestres han presentado seroconversin al VDVB en ausencia de vacunacin, en consecuencia, el compartir pasturas y fuentes de agua son tambin un medio de transmisin horizontal indirecta (Van Campen y col 2001). Aunque la va area no sea un mecanismo principal de transmisin y su frecuencia e intensidad no est muy clara, se ha demostrado en forma experimental transmisin del virus en distancias cortas ante condiciones

ambientales favorables desde animales con IP a travs de aerosoles por al aire expirado y/o por estornudos (Mars y col 1999, Lindberg y col 2004, Viet y col 2004). El VDVB ha sido transmitido experimentalmente mediante el uso de moscas hematfagas alimentadas de animales con IP y luego de animales sanos, con asilamiento del virus tanto de algunas moscas como de receptores seropositivos (Tarry y col 1991, Houe 1995).

3.2.3. Transmisin vertical: La transmisin transplacentaria sucede con alta eficiencia durante la gestacin de hembras seronegativas y dependiendo de la fase de la gestacin en que ocurre la infeccin resulta en disminucin de los porcentajes de preez, infertilidad, abortos, partos prematuros, muerte neonatal, nacimiento de terneros con IP o con malformaciones congnitas (Niskanen y Lindberg 2003, Viet y col 2004). Al realizar transferencia de embriones, puede sucede transmisin vertical si la hembra donante posee IP suceder si la hembra receptoras posee IP (Grooms 2004).

4. FACTORES DE RIESGO
Los factores de riesgo que favorecen la presentacin de la DVB determinan de modo directo, el grado de impacto que pueda tener en la poblacin bovina, incidiendo en la rentabilidad del negocio ganadero traducido en prdidas econmicas importantes que motivan la bsqueda constante de nuevos mtodos de manejo que redunden en minimizar al mximo las mismas. El anlisis costobeneficio de los programas de control es altamente dependiente del riesgo de nuevas infecciones bajo diferentes circunstancias y de las cepas virales involucradas (Houe 1999). Las cras que sobreviven a la infeccin con el

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VDVBNC durante el primer trimestre de la gestacin, al nacer presentan IP de por vida y a pesar de que estos casos representan entre 1 y 2% de la poblacin bovina, son un riesgo importante por cuanto eliminan manera continua partculas virales infecciosas al ambiente, adems los animales en el caso de los machos de alcanzar la edad reproductiva transmiten el virus y en el caso de las hembras producen animales con IP (Fray y col 2000), en consecuencia, representan un gran desafo por su baja prevalencia, lo cual hace difcil demostrar a los productores el nivel de riesgo que corren al momento de adquirir semen, embriones o animales. En relacin a la compra de animales, el riesgo o probabilidad de introducir un animal con IP al rebao puede ser estimado si se conoce la prevalencia de animales con IP en la poblacin de donde provendrn los animales a comprar; dicho riesgo es igual a 1 (la proporcin de animales sanos) nmero de animales introducidos, por ejemplo, si los bovinos con IP constituye el 2% (0,02) de la poblacin, la proporcin de sanos corresponde a 0,98; si se desea introducir 10 animales, entonces 1 (098)10 o 1 (0,82) o 0,18 lo cual equivale a 1 por cada 5; este mtodo asume que los animales con IP tienen una distribucin uniforme en la poblacin (Tremblay 1996). Los factores de riesgo se analizan de acuerdo al virus, al animal y ambientales.

4.1. VIRUS 4.1.1. Caractersticas del VDVB El VDVB pertenece al gnero Pestivirus dentro de la familia Flaviviridae. Todos los virus pertenecientes a dicha familia son esfricos, de 40 a 50 nm de dimetro; la partcula viral est constituida por una envoltura lipdica externa que rodea a una protena interna correspondiente a la cpside que contiene al genoma viral.

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La envoltura es pleomrfica en todos los virus pertenecientes al gnero Pestivirus y se deriva de la membrana de la clula infectada del hospedero, lo cual hace susceptible al virus a la accin de solventes orgnicos y detergentes. El genoma de todos los virus que conforman la familia Flaviviridae consiste de una cadena sencilla positiva-sense de RNA entre 9 y 12,3 kb que codifica para un nico marco abierto de lectura (ORF). Las protenas estructurales (E) son codificadas por el 5 terminal y las no estructurales (Ne) por el 3. El ORF se traduce como una larga poliprotena constituida secuencialmente por Npro-CErns-E1-E2-p7-NS2/3-NS4a-NS4b-NS5a-NS5b, la cual posteriormente es escindida en protenas individuales cuyas caractersticas se presentan en la tabla 1. Las protenas no estructurales participan tanto en el proceso de separacin de las protenas como en la replicacin de las hebras positiva y negativa de RNA. La protena Npro es una autoproteinasa, por tanto, escinde por si misma de la poliprotena; en el hospedero suprime la respuesta inmune innata, lo cual de acuerdo a lo sugerido por estudios, se debe a que impide la produccin de interfern tipo 1 por bloqueo de la actividad del factor 3 que regula al interfern. La protena Erns producida por la partcula viral infecciosa es luego secretada en forma soluble por la clula infectada para encontrarse libre en el suero de animales con infeccin aguda o con IP, con potencial uso para diagnstico por antgeno; se considera que previene la induccin de interfern por unin y degradacin de la doble cadena de RNA (Ridpath 2010).

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Tabla 1. Tamao, tipo, caracterstica y funcin de las protenas producidas por los virus de la DVB. Protena Tamao Tipo (kd) Npro 20 Ne nica Pestivirus Altamente conservada C 14 E Conservada del gnero Autoproteasa. respuesta hospedero Forma nucleocpside del virin Erns 48 E nica Pestivirus del gnero Protena membrana viral de Suprime del Caracterstica Funcin

inmune

Glicosilada. Secretada en Acta como ribonucleasa. forma soluble. Deteccin Suprime en pruebas de antgeno E1 25 E Glicosilada respuesta

inmune del hospedero. Protena membrana viral de

E2

53

Glicosilada. de

Produccin Protena post membrana.

viral

de Posee

anticuerpos

vacunacin con VM y epitopes con VVM P7 7 Ne dominantes

neutralizantes

Necesaria para producir Desconocida virus infeccioso

NS2/3

80

Ne

Altamente

conservada. RNA

helicasa.

Serina

Deteccin en pruebas de proteasa. Escinde por si antgeno. misma y ro abajo a las

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Inmunodominante. Produccin anticuerpos

protenas

Ne

de

la

de poliprotena viral post

vacunacin con VVM. En virus citoptico se

escinde en NS2 y NS3 NS4a 7,2 Ne Hidrofbica Cofactor proteasa. NS4b NS5a NS5b 38 55 81 Ne Ne Ne Hidrofbica Fosforilada Componente de replicasa Componente de replicasa RNA dependiente RNA polimerasa de serina

La protena E2 es el principal blanco de los anticuerpos neutralizantes, los cuales confieren proteccin post infeccin o vacunacin. Posee gran variabilidad gentica y antignica con presencia de regiones ricas en epitopes, lo que hace que pueda ser utilizada para estudiar la diversidad molecular y serolgica del VDVB. En relacin a las protenas no estructurales NS2 y NS3, la ms estudiada es la NS3 por estar asociada con la actividad ltica del VDVBC, ser altamente conservada e inmunognica por lo que es base de varias pruebas comerciales para deteccin de anticuerpos y del virus. Los anticuerpos contra NS3/NS2-3 no son neutralizantes, pero pueden tener un papel importante en la inmunidad de tipo celular. El VDVBNC no causa efecto citoptico en cultivo celular, persiste en la poblacin bovina principalmente en animales con IP. El VDVBC produce dao citoptico en cultivo celular, deriva del VDVBNC por mutacin o

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recombinacin, con escisin de la protena NS2/3 y posterior expresin de ambas por separado. Las mutaciones pueden ocurrir de modo espontneo por insercin de secuencias de protenas del hospedero, duplicacin de los genes virales o por mutaciones puntuales dentro de reas claves del genoma viral, por recombinacin con otras cepas virales bien naturales o de vacunas vivas atenuadas (Brownlie y col 2000). El nmero de veces que una mutacin puede ocurrir en una base en un da de replicacin viral puede exceder el milln durante el pico de la infeccin, cuando la carga viral puede ser de 102 a 104 partculas infecciosas por ml de plasma, ello supone inmensa posibilidad de crear nuevos virus, pero en la realidad no sucede, por cuanto la mayora de las mutaciones son deletreas para la supervivencia del virus, pero en cambio lo provee de posibilidades de adaptarse rpidamente a la respuesta inmune del hospedero en algunos casos, estableciendo infecciones crnicas o persistentes mediante diversos mecanismos; ello puede ciertamente prolongar la tasa de eliminacin viral favoreciendo su supervivencia en la naturaleza Grooms 2004). La supervivencia del VDVB tanto en el ambiente y en el hospedero son aspectos importantes para su diseminacin. En general, los Pestivirus poseen pocas posibilidades de sobrevivir fuera del hospedero (Tremblay 1996), en cuanto al VDVB es poco probable que persista en el ambiente por ms de dos semanas (Smith y Grotelueschen 2004), rpidamente pierden infectividad al contacto con solventes orgnicos y detergentes as como a pH fuera del rango de 5,7 a 9,3 (Tremblay 1996); pueden diferenciarse de otros virus de la familia Flaviviridae por su estabilidad ante un amplio rango de pH, siendo principalmente resistentes a valores bajos (Ridpath 2010), sin embargo, se hace menos resistente cuando la (Bolin y

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temperatura ambiental aumenta de 4 a 37oC. La infectividad del virus no es afectada por el congelamiento (Tremblay 1996).

4.1.2. Especies, biotipos y subgenotipos del VDVB Dentro del gnero existen 4 especies reconocidas; VDVB1, VDVB2, virus de la enfermedad de la frontera (VEF) y virus de la fiebre porcina clsica (VFPC) (Figura 2), sin embargo, se han propuesto especies adicionales (Tabla 2), destacando un nuevo Pestivirus aislado en Brasil a partir de suero fetal bovino; en adelante, otros aislados de Amrica del Sur y del Sureste Asitico han sido identificados y agrupados con dicho virus de acuerdo a anlisis filogentico. La similitud en la presentacin clnica con las dos especies del VDVB y debido a que tambin es capaz de producir bovinos con IP, ha permitido que algunos investigadores propongan que dicho virus sea denominado como VDVB3. Este nuevo aislado constituye un importante riesgo para los rebaos de bovinos donde se llevan programas de control contra los virus de la DVB con las actuales herramientas diagnsticas y vacunas, ya que ante la posibilidad de ingreso del propuesto VDVB3, probablemente pueden fallar en detectarlo y en evitar que cause infecciones.

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Flaviviridae

Especies de Pestivirus

Virus de fiebre porcina clsica Virus de la diarrea viral bovina Virus de la enfermedad de la frontera (VFPC) (VEF) (VDVB)

VDVB1

VDVB2

Biotipo

Biotipo

VDVBNC VDVBC Figura 2. Familia Flaviviridae.

VDVBC

VDVBNC

El VDVB1 y VDVB2 producen reaccin cruzada, pero pueden ser diferenciados por sus antgenos, ambos poseen dos biotipos diferentes; citoptico (VDVBC) y no citoptico (VDVBNC) (Figura 2) de acuerdo a la actividad de cada uno en el cultivo de clulas epiteliales (Ridpath 2010), el VDVBC induce la formacin de vacuolas con muerte celular in vitro, mientras que el VDVBNC que no causa lesiones aparentes (Bolin y Grooms 2004) es el ms predominante en la naturaleza, mientras que el VDVBC es raro, siendo aislado solamente en casos

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de una rara infeccin altamente fatal denominada enfermedad de las mucosas. El VDVBC deriva del VDVBCN por mutacin que da lugar a la escisin de la protena NS2/3 en NS2 y NS3 (Ridpath 2010); la protena NS3 es considerada como el marcador molecular y la responsable del efecto citoptico del virus, adems el VDVBC puede revertir a no citoptico perdiendo la capacidad de expresar la protena NS3, sin embargo, se han identificado algunos VDVBNC que aun conservando y expresando la protena NS3 no producen efecto citoptico (Bolin y Grooms 2004). El tipo de mutacin ms frecuente en la generacin de un biotipo es la recombinacin donde pequeos segmentos del cdigo gentico se insertan en el genoma de una cepa de un VDVBNC. El cdigo insertado puede provenir de otro VDVB o de la misma clula infectada del hospedero. Se debe tener presente que no todas las recombinaciones resultan en un VDVBC, ya que algunos no citopticos contienen inserciones y otros citopticos no. Por otro lado, el efecto citoptico in vitro no se correlaciona con la virulencia in vivo, ya que la mayora de casos clnicos severos de infeccin aguda de DVB estn asociados al VDVBNC; sin embargo, la significacin clnica de ambos biotipos dentro de los programas de control de DVB radica en que el VDVBNC al infectar al feto causa IP y no el VDVBC, por ello, ste ltimo es el usado en la elaboracin de vacunas a virus vivo modificado (VVM). Est bien caracterizado que existen cepas del VDVB2 de alta y baja virulencia, en consecuencia, en USA se usan cepas de baja virulencia en la elaboracin de vacunas a VVM, mientras que las cepas de alta virulencia son usadas como desafo para evaluar la eficacia de las vacunas. Actualmente, las cepas del VDVB ms virulentas caracterizadas pertenecen al VDVB2 y aunque existe variacin en la virulencia de las cepas del VDVB1, hay poca informacin

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disponible en la literatura (Ridpath 2010). La mayora de VDVB aislados son de baja virulencia y del biotipo no citoptico, lo cual es consistente con el hecho de que el virus est bien adaptado a su hospedero, sin embargo, la baja virulencia y supervivencia en el hospedero puede ser un proceso de seleccin en contra que favorezca la aparicin de mutantes ms aptas para replicarse a altos niveles que resulten en dominancia sobre la cepa originaria llegando a ser ms virulentas, causar dao tisular y mayor nivel de eliminacin lo cual puede explicar la aparicin peridica de cepas virulentas que causan grandes brotes de la enfermedad. La virulencia del VDVB constituye un factor de riesgo a considerar, y tal como se ha mencionado, el VDVB2 es el ms virulento, en consecuencia, se debe destacar que, a inicio de 1993 fue descrito un brote en Canad de una forma severa y atpica de infeccin por el VDVB de curso hiperagudo con alta morbilidad y mortalidad caracterizado por fiebre, neumona y muerte sbita en importante nmero de animales de todas las edades, causando la muerte de aproximadamente el 25% de los terneros en varias regiones. Los casos agudos se caracterizaron por un sndrome hemorrgico acompaado de severa

trombocitopenia, diarrea sanguinolenta, epistaxis, hemorragias en mucosas, hipema, hemorragias en puntos de inyeccin, pirexia, leucopenia y muerte, habindose asociado con el VDVB2 no citoptico (Bolin y Grooms 2004). Aunque las diferencias antignicas pueden ser usadas para diferenciar especies de Pestivirus, la determinacin de la secuencia de nucletidos es el mtodo ms confiable en su identificacin, y ms aun cuando las diferencias entre el genoma de ambas especies no se hallan en una u otra regin particular sino que se encuentran a lo largo de todo el genoma. Se debe destacar que la regin no

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traducida 5 es la ms usada para la deteccin y caracterizacin debido a que presenta patrones altamente conservados y adems son bien amplificados mediante la prueba de la cadena de reaccin de la polimerasa (PCR). El anlisis filogentico ha revelado subgenotipos agrupados dentro del VDVB1 en nmero de 12 (VDVB1a hasta VDVB1l); se han aislado e identificado otros subgenotipos en frica del Sur y Suiza no denominados aun, y dentro del VDVB2 se han identificado 2 (VDVB2a y VDVB2b) (Ridpath 2010). La similitud en la secuencia de bases entre el VDVB1 y VDVB2 es del 60% y en cuanto a los subgenotipos es del 80 al 85% (Bolin y Grooms 2004). Se ha determinado que diferentes subgenotipos son predominantes en diferentes regiones geogrficas, otros estudios han mostrado diferencias en neutralizacin cruzada, unin a anticuerpos monoclonales y respuesta en animales con IP a la vacunacin, sin embargo, la significancia clnica de la agrupacin en subgenotipos sigue siendo materia de discusin (Ridpath 2010).

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Tabla 2. Especies de Pestivirus, distribucin geogrfica y hospederos. Especies reconocidas VDVB1 Mundial: Con erradicacin en Rumiantes domsticos y algunas regiones de Europa VDVB2 silvestres, cerdo y conejo Distribucin geogrfica Hospedero

Mundial: Ms prevalente en Rumiantes domsticos y Amrica del Norte y Sur. Con silvestres, cerdo y conejo erradicacin en algunas regiones de Europa

VFPC VEF

Erradicada en USA y Canad Mundial

Cerdo, ovino y bovino Ovino, caprino, cerdo, bovino silvestres y rumiantes

Especies propuestas* Jirafa VDVB3 Kenia Jirafa

Amrica del Sur y Sureste Bovino Asitico

Berrendo Bungowannah

USA Australia

Antlope berrendo Cerdo

* Enumerados por orden creciente de divergencia filogentica.

4.2. ANIMAL El primer reporte de la DVB fue realizado por Olafson y colaboradores en 1946, describindola como una nueva enfermedad aparentemente transmisible del

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bovino, caracterizada por diarrea profusa en bovinos adultos; en adelante, el VDVB ha sido relacionado con un complejo de sndromes que afectan los sistemas reproductivo, respiratorio, gastrointestinal, circulatorio, linftico, musculoesqueltico, tegumentario y nervioso central (Brock 2004). La infeccin aguda por el VDVB en vacas no preadas, generalmente es inaparente para los productores, debido a ello, se estima que en el Reino Unido el 95% de los rebaos lecheros son seropositivos (Brownlie y col 2000). El VDVB al afectar el sistema inmune del animal infectado casando inmunosupresin, agrava el curso de enfermedades concomitantes y/o aumenta la susceptibilidad a otras afecciones como por ejemplo bronconeumona, diarrea y mastitis. La comercializacin de animales sin certificacin sanitaria constituye uno de los factores relevantes en el ingreso del VDVB a los rebaos a travs de animales con IP, con infeccin aguda o de hembras gestando fetos con IP (Lindberg y Alenius 1999, Valle y col 1999, MainarJaime y col 2001). Tambin puede ocurrir durante el transporte de animales, ferias, exposiciones y cualquier situacin que suponga contacto de animales portadores del virus con animales susceptibles. Otro elemento no menos importante significa el intercambio de terneros entre productores y/o adquisicin de animales jvenes de reemplazo, lo cual aumenta considerablemente el riesgo de introduccin de animales con IP por ser el grupo con mayor probabilidad de ser portadores de dicha condicin (Viet y col 2004). A pesar de que las infecciones por el VDVB son ms comnmente asociadas con el bovino, hay evidencias basadas en aislamiento y serologa sobre replicacin del virus en una amplia variedad de rumiantes domsticos y silvestres, siendo

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potenciales reservorios del virus para el ganado bovino susceptible (Van Campen y col 2001, Ridpath 2010). Dentro del riesgo de transmisin se debe considerar la cantidad del VDVB necesaria para constituir una dosis infectante, la cual difiere de acuerdo a la puerta de entrada en el animal susceptible. En relacin a ello, en un estudio realizado por Cook y col (1990) reportaron que la dosis infectiva (50%) del virus por inyeccin subcutnea, administracin intranasal y conjuntival fue de 0,27, 2.700 y 4.600 CCID50, mientras que Kirkland y col (1997), reportaron para la va intrauterina por inseminacin artificial una dosis infectiva (50%) equivalente a 501 a 1000 CCID50 . Tras la infeccin con el VDVB, los efectos y presentacin clnica en el animal susceptible adems del tipo de cepa viral actuante como se mencion anteriormente, depende de la especie de hospedero, edad, estatus inmune, fisiolgico y de la presencia de enfermedades concomitantes. Aunque el trmino de diarrea destaca en el nombre de la enfermedad, la afeccin respiratoria y reproductiva son las ms reportadas. La clnica reproductiva de la enfermedad se debe a la infeccin del feto, y el resultado de la misma depende de la fase de la gestacin en la cual ocurre, siendo de mayor impacto en la fase temprana; por ejemplo entre los 42 y 125 das de gestacin, puede resultar en reabsorcin fetal, momificacin, aborto, malformaciones congnitas o

nacimiento de animales con IP, los cuales eliminan virus durante toda su vida siendo los principales portadores y responsables del ingreso del virus dentro de poblaciones sanas y como se ha mencionado antes, son los nicos que al ser infectados por un VDVBC desarrollan enfermedad de las mucosas (Ridpath 2010). El riesgo de transmisin de la infeccin por parte de un animal con IP es mucho mayor por va horizontal y vertical, mientras que en uno con infeccin

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aguda es menor por va horizontal pero mayor por va vertical (Smith y Grotelueschen 2004). La presentacin clnica de la DVB observada resulta de la infeccin aguda y debido al efecto linfotrpico del virus se suprime la respuesta inmune innata con disminucin de los niveles de leucocitos circulantes reduciendo la resistencia a patgenos secundarios y aumentando la severidad ante infecciones secundarias. La interaccin del VDVB con patgenos secundarios, se cree es uno de los factores que contribuyen con el denominado complejo de enfermedad respiratoria del bovino (Ridpath 2010); en USA, el VDVB ha sido el virus aislado con mayor frecuencia en brotes de enfermedad respiratoria, adems, estudios experimentales sugieren que algunos aislados poseen mayor tropismo pulmonar siendo probablemente ms asociados con la enfermedad respiratoria bovina que otros (Bolin y Grooms 2004). Tras la infeccin natural de animales inmunocompetentes con cepas del VDVB poco virulentas, se produce una viremia transitoria con aparicin de anticuerpos sricos neutralizantes 2-3 semanas despus, con niveles mximos a la octava y dcima semana que pueden ser detectables durante meses; la presencia de anticuerpos neutralizantes es el principal indicador de una respuesta inmune eficiente (Potgieter 1995). En general, las vaquillas son ms vulnerables a la infeccin con el VDVB, aun cuando animales adultos pueden experimentar infeccin grave al ser infectados por genotipos ms virulentos. Los animales no vacunados, mal vacunados o con inmunidad disminuida, son los ms

susceptibles a la infeccin y manifestaciones clnicas. Por su parte, los vacunados pueden igualmente ser susceptibles, cuando el virus autctono difiere del vacunal.

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En toros infectados, el virus replica en la vescula seminal y en la prstata, por tanto, el semen proveniente de toros con infeccin aguda lo contiene hasta por dos semanas post infeccin, mientras que con IP lo elimina constantemente. La transferencia de embriones constituye otra forma de ingresar el virus sin tener movimiento de animales, sin embargo, al observar normas de bioseguridad en el manejo de la tcnica, el riesgo es muy pequeo, siempre que la zona pelcida est intacta, adecuado lavado de los embriones con suero de bovino proveniente de animales sanos, se puede obtener un ternero sano aun cuando provenga de una madre con IP (Tremblay 1996), esto se analiza en detalle en el siguiente aparte.

4.3. AMBIENTALES Y DE MANIPULACIN Los principales factores de riesgo corresponden a la introduccin en un rebao indemne de animales con IP y el fracaso e incompetencia en los programas de vacunacin (Palfi y col 1993). Para manejar el riesgo biolgico se deben considerar conceptos como bioseguridad, que se refiere a la implementacin de medidas destinadas a evitar la introduccin del agente causal de una enfermedad en un rea o pas determinado, mientras que la biocontencin se refiere a las medidas adoptadas para controlarlo una vez que ha ingresado (Smith y Grotelueschen 2004). En rebaos endmicos sin ningn tipo de programa de control, se ha estimado que un 7% de muertes fetales pueden ser atribuidas al VDVB (Rufenacht y col 2001), las mismas pueden ocurrir en cualquier momento de la gestacin, pero son ms frecuentes en el primer trimestre (Sprecher y col 1991). Se debe tener presente que la vacunacin previene la diseminacin del virus, pero no puede eliminarlo del rebao, esto se debe a la alta heterogeneidad de las cepas virales

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involucradas, no garantizando la total proteccin del feto a ser infectado y por otra parte, la no identificacin eficiente y eliminacin de los animales con IP del rebao favorecen la permanencia del virus dentro del mismo. Adems, en cuanto al tema de la vacunacin, el nivel de proteccin requerido para prevenir la infeccin aguda o la infeccin fetal es ampliamente desconocido, a pesar de que se ha mostrado que ttulos de 16 es requerido para reducir la enfermedad clnica y ms de 256 para prevenir la diseminacin sistmica. El diseo entonces de un programa de vacunacin exige que se consideren los estresores relacionados con la edad, fase de gestacin y periodos de mayor vulnerabilidad que afectan al animal disminuyendo su capacidad de respuesta a la vacunacin. Otros aspectos que deben observarse como posibles elementos que inciden en el riesgo de introduccin y ocurrencia de infeccin por el VDVB est referido con el nivel de circulacin de cepas virales, densidad de las poblaciones animales, movimiento de animales, contacto de susceptibles con animales de vida silvestre, nivel de cumplimiento de los productores con las medidas de bioseguridad establecidas dentro del programa de control y/o erradicacin segn sea el caso y tipo de unidades de produccin e industrias predominantes (Ridpath 2010). En un

estudio donde se introdujo el VDVB en un rebao susceptible, se present una tasa de abortos de 21% durante los siguientes 6 meses (Roeder y col 1986). El VDVB sobrevive a la criopreservacin y al procesamiento del semen, en consecuencia, constituye un importante factor de riesgo para vacas susceptibles sometidas a inseminacin artificial con semen procedente de toros con infeccin aguda y ms aun con IP (Givens y Waldrop 2004). Guerin y col (1992), reportaron que el semen congelado de un toro con IP result en disminucin

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significativa de la fertilidad, baja segmentacin y tasa de desarrollo del blastocito cuando al ser usado en la produccin de embriones. Es patente el riesgo de contaminacin de embriones utilizados para transferencia, pero ante un manejo adecuado como el lavado de los embriones con tripsina, el riesgo es muy bajo. Debido a que la zona pelcida del cigoto posee poros grandes que pueden permitir la penetracin parcial y posterior atrapamiento del virus en ellos, hace que el tratamiento con tripsina no sea totalmente efectivo, en consecuencia, se deben aplicar mtodos sensibles de uso rutinario que

garanticen la inocuidad de las gestaciones desarrolladas a partir de la fecundacin in vitro, como PCR en tiempo real para deteccin de RNA viral, con resultados ms confiables y de mejor interpretacin ante resultados negativos, cuando la prueba es realizada a partir de cultivos realizados de los diferentes elementos involucrados en el proceso. Algunas estrategias dirigidas a disminuir los riesgos de infeccin por el VDVB y otros patgenos incluyen: 1. Realizar pruebas tamiz a todo material de origen animal. 2. Lavado mecnico de ovocitos y lavado o tratamiento con tripsina de los embriones desarrollados. 3. Uso racional de antibiticos y antivirales. 4. Anlisis de patgenos de muestras de cultivo, maduracin y fecundacin in vitro. 5. Establecimiento y aplicacin de normas mnimas estndar de saneamiento en laboratorios y en mataderos (Givens y Waldrop 2004). Los detalles del diseo de un programa de vigilancia y/o de control varan de acuerdo a la regin o pas y para ser efectivos, deben contemplar medidas de

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bioseguridad y biocontencin dirigidas a evitar el ingreso o el control segn el caso, del VDVB al rebao (Smith y Grotelueschen 2004, Ridpath 2010). En resumen, la dinmica de la diseminacin dentro y entre los predios susceptibles tras el ingreso del VDVB depende de la combinacin de diversos factores y condiciones tales como: 1. Biotipo, genotipo y virulencia del VDVB involucrado. 2. Tamao, densidad, conformacin, sistema productivo y manejo del predio con el nmero de contactos entre los animales. 3. Poblacin de animales con IP existente en el predio. 4. Estatus sanitario, nivel inmunolgico de los animales y aplicacin de plan de vacunacin. 5. Edad, estrs y estado fisiolgico de los animales susceptibles. 6. Administracin de frmacos por va parenteral y prcticas de manejo de animales jvenes simultneamente con hembras gestantes seronegativas. 7. Uso de praderas compartidas o comunitarias. 8. Concentracin del virus en las secreciones. 9. Presencia de otras especies animales domsticas o silvestres. 10. Seleccin de reproductores, semen y hembras donadoras de embriones.

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5. CONCLUSIONES
El VDVB est presente en la mayora de las poblaciones de bovinos de todo el mundo con niveles de seroprevalencia generalmente mayor al 60%; Chile, que no escapa a esta realidad considerando que posee un importante rebao de bovinos de leche y carne, no dispone de estudios que indiquen el nivel de seroprevalencia que sirva como punto de partida para analizar en detalle la dinmica de la infeccin por el VDVB en el rebao nacional que permita determinar y jerarquizar los distintos factores de riesgo que pueden estar incidiendo en la presentacin o no de la infeccin. A pesar de los esfuerzos de erradicacin, las infecciones por el VDVB siguen siendo causa de importantes prdidas econmicas para los productores de todo el mundo, debido a que la presentacin clnica, patogenia de la infeccin y biologa del virus es compleja. La presencia y prevalencia del VDVB1 y VDVB2 as como de los diferentes subgenotipos vara por regin geogrfica y aunque las infecciones son asociadas principalmente al bovino, tambin pueden presentarse en una amplia variedad de rumiantes domsticos y silvestres con implicaciones econmicas, ecolgicas y de control. Aun cuando el mayor impacto econmico del VDVB se debe a la infeccin aguda, los animales con IP son la fuente ms comn del virus y responsables de su introduccin en los rebaos. Una de las herramientas que se dispone para el control y/o erradicacin es la vacunacin, la cual es efectiva para disminuir la diseminacin del virus dentro y entre las poblaciones de bovinos, pero es insuficiente como nica herramienta para tales propsitos si no se consideran los mecanismos de transmisin y los factores de riesgo involucrados dentro de la dinmica en la ocurrencia de

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infeccin que permitan disear e implementar medidas de bioseguridad dirigidas a evitarla o minimizarla al mximo.

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