PRACTICA DE LABORATORIO N 06 INTRODUCCIN La familia enterobacterioceae(enterobacterias) est constituido por un gran grupo herogneo de bastoncillos gran negativos cuyo

hbitat natural es el tubo digestivo del hombre y los animales la familia incluye muchos gneros (por ejemplo echerichacoli, salmonella son patgenas para los anucturaantimales.lasenterobacterias son anaerobias facultativas,fermentan gran variedad de carbohidratos,poseen una estigena compleja producen Se ubican en el intestino de los animales hay diferentes especies. Sonsaprofitas,por ejemplo Echerichacoli Debemos seguir los siguientes pasos para obtener un buen diagnstico y dar una solucin. de la enfermedad. COMO ADQUIRIR UNA MUESTRA. 1. tomar la muestra.

 En condiciones aspticas.  En envases estriles.  Empleando barreras de proteccin.

2. llevar al laboratorio. Realizando las siguientes tcnicas en el laboratorio una ellas es la tensin Gram y cultivo bacteriano. 2.1. TensinGram. Realizando la extensin, fijacin, coloracin, secado y observamoUtilizamoslossiguientes reactivos.

 Cristal violeta.  Lugol.  Alcohol acetona.

2.2. Cultivo bacteriano. El agar Mc Conkeyes un medio slido, diferencial y selectivo. Se usa para la discriminacin de bacterias con capacidad de fermentar la lactosa (Lac+ Y LAC -).Composicin g/l:

    

Peptona 20.0: fuente de nitrgeno y carbono para las Lac -. Lactosa 10.0: fuente de carbono para las Lac +. Sales biliares 2.5: le confiere carcter selectivo, inhibiendo el crecimiento de Gram +. Cloruro sdico 5.0: para mantener la tonicidad del medio (evitar osmosis). Rojo neutro 0.05: indicador que va hacer que el medio vire de coloracin. Si las bacterias son Lac +, producirn cidos derivados de la fermentacin que darn al medio

un aspecto rosceo; si por el contrario son Lac -, el medio se basificar por el uso de la peptona y se tornar amarillo.  Cristal violeta 0.001: interfiere junto con las sales biliares en la selectividad del medio.  Agar-agar 15.0: da consistencia al medio. LACTOSA POSTIVA LACTOSA NEGATIVA

Se siembra cada una de stas lactas en lactosa en los tubos de ensayo

TSI: color rosado

LIA: color violeta

CITRATO: color verde

INTERPRETACIN DE LA PRACTICA N 6

Aerobiopresencia de lactosa

Semiaerobico. Presencia de sacarosa

Anaerbico. Presencia de glucosa

RESULTADO DE LACTOSA POSITIVA TSIColor inicial Rosado Fondo rojoPico de flauta amarillolactosa (+) y sacarosa(-) Presento ennegrecimiento en del medio (+) H2Szucares y la formacin de gas y de H2S. la fermentacin a

LIACOLOR INICIAL VIOLETA EL resultado es de color superficie roja / fondo AMARILLO adem s se observa produccin de gas Y de H2S.

CITRATO: color azul tiene utilizado como fuente de carbono si indica color verde alcalinidad(-) si indica azul en acides (+)

AGAR MAC KONKEY Se divide

LACTOSA +

LACTOSA -

TSI A/A +-

LIA +

CITRATO +

TSI K/K --

LIA +

CITRATO -

TSI +A/A K/ K

Rojo -A/K

Amarillo/Rojo --

Rojo/amarillo ++ K/A

+ significa produccin de gas - Significa produccin de acido IDENTIFICACIN EL MICROORGANISMO

Bacteria Gram Lactosa TSI LIA CITRATO Positiva Positiva A/A ++ Bacteria Gram Lactosa TSI LIA CITRATO Negativa Negativa K/K - + +

En el primer cuadrado se trata de echerichiacoli En el segundo cuadrado se trata de salmonella PREGUNTAS 1. Realice un dibujo de una enterobacteria tpica mostrando los antgenos K (capsular),O(som tico),F(fimbrial).H(flagela)e empleadas en la serotificacion

2. Cul es la naturaleza de los antgenos capsulares , cual es su funcin que cum plen durante la infeccin. La entero toxina es un componente de lipopolisacaridos de la pared celular de las gramnegativos, cuando se libera, que componentes parecen y qu efectos tiene en el proceso infeccioso? Los antgenos k son externos relaciones con antgeno o sobre algunas de las entero bacterias algunas son polisacridos incluso los antgenosk de E coli otras son protenas. Los antgenos k

pueden inferir en laaglutacin mediante o, y quiz se relaciones con la virguela Las klebsielas forman capsulas que consisten en polisacridos (antgeno k) que cubren a los antgenos somticos (o, antgenos H).

3. Las fimbrillas estn presentes en la mayora de las cepas E.colienterotoxigenicas, permitiendo la fijacin a la mucosa del intestino delgado y tracto urinario; cual es el efecto patolgico de la fuerte unin a dichas mucosas? 4. Que son las entero toxinas, vero toxinas y factor citotoxico neutralizante ,en que se diferencia la actividad de cada uno de ellasLa informacin disponible indica que las enterotoxinas en los alimentos no son fciles de inactivar por el calor y que, a mayor cantidad presente, se requerir de mayor temperatura para disminuir la actividad de stas. Por ello, los tratamientos trmicos usuales aplicados a los alimentos, como la pasterizacin y la coccin, no garantizan que se destruyan. En consecuencia, se ha intentado la inactivacin de las enterotoxinas por otros medios y este artculo resea los puntos ms salientes de las investigaciones actuales.Escherichia coli enterohemorrgica o

verotoxignica (ECEH)
Artculo principal: Escherichia coli enterohemorrgica Vase tambin: Toxina Shiga

La convencin internacional de nomenclatura de patgenos ha recomendado el uso de STEC (Shiga Toxin Escherichia coli) para este grupo, debido a que estas bacterias producen una toxina citotxica para clulas Vero de cultivo de similaridad estructural a la toxina producida por Shigella dysenteriae. Las STEC producen verotoxinas que actan en el colon. Sus sntomas son: primero colitis hemorrgica, luego sndrome urmico hemoltico (lo anterior ms infeccin del rin, posible entrada en coma y muerte), y por ltimo,prpura trombocitopnica trombtica (lo de antes ms infeccin del sistema nervioso central). Esta cepa no fermenta el sorbitol y posee unfago, donde se encuentran codificadas las verotoxinas, tambin llamadas "Toxinas Shiga", no posee una fimbria formadora de mechones, en vez de esto posee una fimbria polar larga que usa para adherencia.

5. La enterocolitis causada por salmonella puede afectar a la mayora de animales, independiente de su edad, mencione cuales son los signos y sntomas que caracterizan a esta enfermedad? Los cerdos presentan una diarrea lquida amarillenta, inicialmente, que pasa a pastosa verdosa, raramente puede presentar sangre. Este cuadro puede durar entre 3 y 7 das y el animal recuperado puede volver a manifestar los signos luego de 10 a 20 das. En cualquier caso, la prdida de peso inmediata y retardada, es una de las

consecuencias mas importantes de prdidas econmicas y los animales permanecen como portadores del agente hasta su envo a faena. Los hallazgos de necropsia mas importantes se encuentran en ciego y colon (tiflocolitis), aunque el intestino delgado puede estar afectado, se observan restos adherentes gris amarillentos sobre una mucosa roja y lceras en 6. La salmonelosis septicmica puede aparecer en todos los grupos de edad , siendo ms frecuente en terneros ,potro y cerdos de menos de cuatro meces . Cul es la caracterstica ms resaltante que se observa en las orejas del cerdo infectados por salmonella cholerasicasy con qu enfermedadviral suele asociarse esta infeccin. 7. Cul es la especies de salmonella que frecuentemente se asocian a la salmonelosis en pollos? CONCLUCIONES

 Echerichia coli fermenta los tres carbohidratos lactosa, sacarosa, glucosa en el TSI
Produce gas y acido

 En el citrato cuando la bacteria lo utiliza al citrato cambia de color de verde a azul, y cuando no lo utiliza mantiene su naturaleza
BIOGRAFA

 Difco Manual, 9th Ed, (1953) pp. 166-168 (Table on p. 161.)  Microbiologa / Thomas D. Brock, Michael T. Madigan  Microbiologa / Michael J. Pelczar, Jr., Roger D. Reid
PRCTICA DE LABORATORIO N 08 TTULO:HONGOS: RECONOCIMIENTO Y DIFERENCIACIN DE SU MORFOLOGA INTRODUCCIN Los hongos son organismos eucarioticos y de mayor tamao que las bacterias, se distinguen de otros eucariontes. Son de nutricin hetertrofa, es decir depende de nutrientes orgnicos que son solubilizados por sistemas enzimticos especficos y son absorbidos a travs de su pared celular y membrana plasmtica. Estos organismos pueden ser unicelulares (levaduras) o multicelulares (mohos). Las levaduras son clulas de forma esfrica u oval, ampliamente distribuidas en la naturaleza. El cuerpo o estructura vegetativa caractersticos de los hongos filamentosos (mohos) se denomina talo, generalmente constituidos de hifas ramificadas que forman el micelio. FUNDAMENTO TERICO:

Hongos

 Microorganismos eucariontes.  Aerobios obligados o facultativos.  Poseen ncleo, membrana nuclear, retculo endoplsmico, mitocondrias y aparato
secretor.

 Secretan enzimas que descomponen gran variedad de sustratos orgnicos.  Conserva las caractersticas de las clulas eucariotas.  Pared celular rgida formada por polisacridos, polipptidos y quitina  Principal esterol de la membrana plasmtica: ergosterol  Son microorganismos eucariotas.

  Pueden existir en dos formas morfolgicas : Hongos filamentosos (mohos) (crecimiento

en hifas) y Unicelulares (levaduras)

 Ambas, alternan las dos morfologas

fisiolgicas.

anteriores de acuerdo a las condiciones

 Las

hifas

se

encuentran formando

estructuras ramificadas conocidas como micelio (Griego mykes, hongo).

 Las masas de micelio tienen la apariencia de fibras de algodn, puede ser Septado o
cenoctico

Tipos de hifas encontradas en hongos a. Cenocitica (aseptada) b. Septada con clulas uninucleadas c. Septada con clulas multinucleadas

 Las hifas que penetran al medio y absorben nutrientes son las hifas vegetativas.  Las hifas que se extienden por encima de la superficie del micelio y poseen las estructuras
reproductivas del moho son las Hifas areas. Identificacin

 El gnero y muchas veces la especie puede determinarse mediante el examen

microscpico de las morfologa de sus esporas reproductivas asexuales o conidios.

 Levaduras: Clulas nicas en forma esfrica o elipsoide. Se reproducen por gemacin.

Algunas yemas se alargan y se desprenden, llegando a formar pseudohifas. Reproduccin a. Reproduccin Asexual

 Representa el estado anamorfo del hongo  Se realiza mediante esporas asexuales o imperfectas:
a. Endospora : est en el interior del esporangio, el esporangio est en el extremo del esporangiforo y las esporas se liberan al romperse el esporangios. Cada esporangio puede contener 1 espora o muchas de ellas b. Exosporas: Producidas en estructuras externas, frecuentes en Ascomycetes y es el nico medio de reproduccin de los Deuteromycetes, constituye la base de identificacin de los

hongos, pproducidos por gemacin o segmentacin, la estructura que las origina se denomina conidiforo Gua para la observacin microscpica:

MAC

MACROCONIDIA

MIC CLA ART BLA LEV

MICROCONIDIA CLAMIDOSPORA ARTROSPORA BLASTOSPORA LEVADURA

I.

OBJETIVOS a. Reconocer las caractersticas morfolgicas de los hongos, considerando aspectos microscpicos y macroscpicos. b. Conocer la utilidad y emplear la tcnica de microcultivos. c. Conocer la utilidad y emplear la tcnica de coloracin de hongos.

II.

MATERIALES Y REACTIVOS Muestra: . Muestra biolgica: cultivos de hongos ambientales Materiales: y Cmara hmeda para microcultivo estriles y Asa micolgica y Mechero de alcohol y Varilla de coloracin y Pizeta y Bistur y pinzas Reactivos/ Medios de cultivo: y Alcohol y Colorante Azul de metileno o fucsina y y y Azul de algodn, Lactofenol Hidrxido de potasio al 10% y 40% Agar Sabouraud

Equipos: y Microscopio binocular ptico

III. METODOLOGA PARA REALIZAR LAS SIGUIENTES OPERACIONES NO OLVIDE EL USO DE GUANTES Y MASCARILLA.

A.Cultivo de hongos ambientales 1. Para cultivar hongos ambientales se deber exponer una placa Petri con agar Sabouraud al medio ambiente por 5 minutos. 2. Incubar a 23C o temperatura ambiente durante 7 das. B. Microcultivos 1. Acondicionar la cmara hmeda estril para microcultivos, empleando agar Sabouraud. 2. sembrar un inculo de cada una de las muestras problema, en las cmaras preparadas, empleando el asa micolgica. 3. Incubar a 25C por 3 a 5 das. C. estudio de la morfologa celular de los hongos. Observacin directa de microcultivos. 1. Observar directamente cada uno de los microcultivos directamente en el microscopio, empleando objetivos de 4x, 10x y 40x. 2. observar e identificar la morfologa microscpica. 3. observar y clasificar el micelio de las colonias de hongos. Coloracin 1. Preparar montajes en fresco con azul de algodn, lactofenol o hidrxido de sodio a partir de las muestras y microcultivos. 2. Observar en el microscopio con objetivos de 4x, 10x y 40x. 3. dibujar sus observaciones indicando la morfologa observada en cada caso, y el objetivo con el que se observa. D. Estudio macroscpico de las colonias de los hongos. 1. observar y describir las caractersticas de las colonias de hongos cultivados. 2. Esquematizar IV. RESULTADOS: Se ha tomado las muestras de los animales sospechosos de estos hongos que se han estudios en clase.

a)Preparacin de microcultivos. Cmara hmeda Consiste en tener una placa petri en la cual se puso un ngulo de vidrio, una lamina porta objetos con laminilla cubre objetos , a un costado algodn. Agar sabouraud. Este agar no contiene inhibidores es selectivos para mohos tiene u PH 5-6 La actividad consisti en preparar medios de cultivos .utilizando agar sabouraud en la cual a estar en estado solido se procedi a disover para servir en las placas . Una ves servidas se dejo solidificar y luego realizar los cortes al mismo,utilizando una escapula para colocar en las laminas que se utilizaron como cmaras humedas . Del mismo modo se sirvi en tubos de ensayoSEGUNDA PARTE

-------------------------------------------------------------------

-----------------------------------------------------------------------------

-----------------------------------------------------------------

--------------------------------------------------------------------------

-----------------------------------------------------------------

-------------------------------------------------------------------------------------

---------------------------------------------------------------------

---------------------------------------------------------------------------------------

----

----------------------------------------------------------------------------a. Morfologa celular e hongos

-------------------------------------------------------------------------------

1. T l F i :  Uni l l

M t :l l : O j ti : 40 R i :

t l l

t :l M l : O j ti : 40 R i :
    

i t l

 Pl

l l

noc ico

 

Muestra: aspergillus Clase: deuteromicetes bjetivo: x rgano reproductor:

       

Pluricelular tabicado

Muestra: penecillum Clase: deuteromicete bjetivo: x rgano reproductor:

Estructuras fngicas de reproduccin asexual:

2.-rganos de fijacin  rizoides

Muestra: rhizopus Clase: cigomycetes bjetivo: x

1. Por gemacin: yemas Clamidosporas

2 por fragmentacin de talo:astrospora

2. Por esporulacin: a) Comediasunicelulares: microconidia

b) Macroconidias pluricelulares

Esporangiosporas

Morfologa de Hongos inferiores: observar e identificar cada una de las partes observadas en: 1. Aspergillus

Clase: deutomicetos

2. Rhizopus Clase: cygomicetos

3.

Penicillium

Clase: deutomicetos

CUESTIONARIO 1. Cmo actan los colorantes y reactivos empleados sobre la clula fngica? 2. Qu criterios tomara en cuenta para la identificacin de las levaduras? 3. Cules son los principales gneros que causan micosis superficiales en animales domsticos. Y qu manifestaciones presentan los animales que las padecen? 4. Cules son las principales micosis sistmicas en ganado vacuno, equino y porcino, describa brevemente y mencione el agente etiolgico de las mismas. 5. Qu son las micotoxinas, qu gneros las producen? Las micotoxinas son compuestos ubicuos que difieren mucho en sus propiedades qumicas, biolgicas y toxicolgicas. La formacin de micotoxinas refleja que el moho ha alcanzado cierto grado de diferenciacin bioqumica, fisiolgica y a veces morfolgica. Se conocen unas 300 toxinas fngicas. Las micotoxinas son especficas. Cuanto ms compleja es la ruta biosinttica de estos metabolitos secundarios ms restringido es el nmero de especies de hongos productores de micotoxinas. Las especies ms importantes que la producen son: y Aspergillus y Aspergillus nonius y Penicillium y Penicilliumroqueforti 6. Mediante un grfico explique el ciclo de reproduccin sexual y asexual de los Basidiomicetes y Deuteromicetes.

Basidiomicetes

V. CONCLUSIONES VI. BIBLIOGRAFA.

ANEXOS