IMUNODIASNSTICO

DAS MICOSES
Resposta Imune contra fungos:
Imunidade Natural ou Inespecfica:
- Pele, Mucosas
- Ativao do Sistema Complemento
- Neutrfilos, Macrfagos e Clulas NK
Imunidade Especfica:
- Imunidade Humoral: IgG, IgM, IgA e IgE
- Imunidade Celular: Th1/Th2 Citocinas, macrfagos
MICOSES
Superficiais
Cutneas
Sub-cutneas
Sistmicas: Paracoccidioidomicose,
Histoplasmose
Oportunistas: Aspergilose, Candidase e
Criptococose
Paracoccidioidomicose
Micose sistmica que afeta principalmente
os pulmes podendo atingir outros rgos
Micose restrita a pases da Amrica Latina
principalmente: Brasil, Colmbia,
Venezuela e Argentina
Agente etiolgico: Paracoccidioides
brasiliensis
Paracoccidioides brasiliensis
Fungo dimrfico trmico: 25
o
C miclio,
37
o
C- levedura
Habitat: solo de florestas tropicais e
subtropicais
Forma de contgio: Inalao de condeos
Formas Clnicas
PCM Infeco: ausncia de sintomas e
reao positiva paracoccidioidina
PCM Doena: Aguda (juvenil)- mais
severa, evoluo rpida, atinge jovens de
ambos os sexos
Crnica Durao prolongada, leses
unifocais ou multifocais, prevalncia em
adultos do sexo masculino
Formas clnicas da PCM
Resposta Imunolgica na PCM
Forma aguda: produo de Ac
resposta imune celular
Forma crnica: produo de Ac
resposta imune celular
Antgenos liberados pelo P.
brasiliensis
Principal componente antignico:
gp43
Imunodominante
Liga-se a laminina
Eptopo para linfcitos T e B
100% soros de pacientes com PCM
reconhecem a molcula
Utilizado no diagnstico da PCM
Sorodiagnstico na PCM:
- Anticorpos do paciente
- Antgenos fngicos
Primeiros testes Extrato antignico
Reaes cruzadas Eptopos comuns
PCM, Doena de Jorge Lobo e
Histoplasmose
Evitar reaes cruzadas:
- Adsoro prvia dos soros com antgenos
ou clulas heterlogas
- Diluio do soro
- Utilizao de antgenos purificados ou
recombinantes
Testes utilizados
Fixao de complemento:
Uma das primeiras tcnicas utilizada
Necessita de laboratrio com tcnica bem
padronizada
Imunodifuso radial dupla:
Idealizada por Ouchterlony 1949 deteco de
anticorpos
Teste simples, acessvel a qualquer laboratrio
Elevada sensibilidade e especificidade
Pode-se titular o soro do paciente
Antgeno padronizado: Patrocinado pela
Sociedade Internacional de Micologia Mdica e
Animal: Cepa 339 exoantgeno de 7 dias em
meio peptonado
- Sensibilidade 80-90%
- Especificidade 98,9%
Resultados falso-negativos
Imunodifuso dupla
1 e 4: soros de
pacientes com PCM
2, 3, 5, e 6: soros
suspeitos
Titulao de soro de pacientes
com PCM
1: soro puro
2: soro 1:2
3: soro 1:4
4: soro 1:8
5: soro 1:16
6: soro 1:32
# 1996 Utilizao da gp43 em substituio ao
antgeno original 100% de sensibilidade
1: Gp43 purificada
2: Soros de pacientes
com PCM
O teste de ID altamente recomendado
para a sorologia na PCM
Outras micoses onde o teste recomendado:
-Histoplasmose
-Aspergilose
-Candidase
prudente utilizar os resultados da ID com
outras tcnicas e com os dados clnicos do
paciente.
ELISA
Utilizam antgenos brutos ou somticos
Reaes cruzadas Teste altamente sensvel
Teste deve ser interpretado com cuidado para fins
diagnstico
J foi utilizado a gp43 como Ag - Porm houve
tambm reaes cruzadas
ELISA no utilizado como tcnica
sorolgica de rotina:
Adsoro prvia do soro
Necessidade de ter antgenos heterlogos
Indivduos normais que habitam regies
endmicas podem apresentar ttulos semelhante ao
dos pacientes
Aconselhado:
Necessidade de saber com maior preciso os
nveis sricos de Ac anti-P.brasiliensis-
Seguimento sorolgico dos pacientes sob terapia
antifngica
ELISA de Captura
Altamente especfico para dosar anticorpos anti-
gp43 de P. brasiliensis
Detecta Ac at diluio 1:819.200
Soro heterlogo 1:51.200
Soros negativos em ID e ELISA clssico foram
positivos no ELISA de Captura
ELISA de captura
Seguimento sorolgico
Immunoblotting
Teste comprobatrio na PCM
Testes negativos na ID (falso-negativos)
No immunoblotting reagem positivamente
com Ags especficos como a gp43 e gp70
Seguimento sorolgico de pacientes sob
terapia
Western blot
Soro negativo na
imunodifuso
Western blot: Seguimento
sorolgico
3: antes do tratamento
2: seis meses de
tratamento
1: Doze meses de
tratamento
Pacientes imunodeprimidos
Diminui quantidade de anticorpos sricos
Deteco de antgenos em lquidos biolgicos
(soro, urina)
ELISA de competio
Immunoblotting
Radioimunoensaio
No momento a pesquisa de Ags circulantes est
restrita a poucos laboratrios, dificultando seu uso
na rotina.
HISTOPLASMOSE
Imunodifuso:
Filtrado de cultura da fase filamentosa de H.
capsulatum
Deve conter molculas antignicas
Banda M Glicoprotena de 70-94 kDa
Histoplasmose aguda ou crnica
Banda H Glicoprotena de 108-120 kDa
Histoplasmose disseminada Tende a desaparecer logo
aps tratamento e cura do paciente.
Positividade baixa: 65%
HISTOPLASMOSE
ELISA:
Ags de filtrado de cultura
Sensibilidade de 86%
Especificidade de 91%
# Imunodeficientes so negativos para o
teste
Deteco de Ags ELISA de competio
ASPERGILOSE
Imunodifuso:
Aspergiloma : 3 ou mais bandas de precipitao
Aspergilose broncopulmonar alrgica: At 2 bandas de
precipitao
Forma disseminada: Podem ou no aparecer bandas de
precipitao
IMMY: Ags para A. fumigatus, A. flavus, A. niger, A.
terreus, A. nidulans
Aglutinao:
Ag. Galactomanana I. Pasteur
CRIPTOCOCOSE
Aglutinao de ltex:
Detecta: Ag capsular
Material: Lquor ou soro
Detecta: 0,63 ng/ml sorotipos A e B e 2,5 ng/ml dos
sorotipos C e D
Tempo do teste: 40 minutos
Pode ter reao com fator reumatide