You are on page 1of 4

Mecanismos de infeccin de patgenos bacterianos en peces salmondeos Pedro Smith Unidad de Patologa de Animales Acuticos Departamento de Patologa Animal

Facultad de Ciencias Veterinarias y Pecuarias Universidad de Chile. El propsito de esta presentacin es revisar los mecanismos de infeccin que se describen para algunas bacterias patgenas mediante los cuales stas pueden colonizar y penetrar las barreras epiteliales de los peces salmondeos para luego subsistir y multiplicarse en sus tejidos, superando las barreras inmunolgicas de estos animales acuticos. En medicina veterinaria de animales domsticos terrestres, como en la medicina de seres humanos, la prevencin de enfermedades infecciosas ha sido frecuentemente el resultado del conocimiento de los factores de virulencia de los patgenos actuantes. As por ejemplo, la identificacin de los factores de adherencia de Escherichia coli enterotoxignica (Smith et al., 1994), permiti desarrollar vacunas efectivas que impiden la adhesin del patgeno a la clulas blanco, permitiendo el control de la diarrea neonatal del bovino; por otra parte, con el conocimiento de las exotoxinas producidas por algunas bacterias, tales como Corynebacterium diphteriae y Clostridium tetani, se consigui preparar anatoxinas que actualmente se emplean exitosamente en programas inmunoprofilcticos. Dada la importancia econmica que tienen en el cultivo intensivo de especies salmondeas, esta exposicin se encuentra dirigida a los siguientes patgenos bacterianos: Aeromonas salmonicida, Renibacterium salmoninarum, Yersinia ruckeri y Piscirickettsia salmonis. Las tres primeras especies bacterianas se conocen desde hace 50 aos a lo menos (A. salmonicida desde 1894, R. salmoninarum desde 1930 y Y. ruckeri desde 1950) y se examinarn en conjunto, finalmente se discutir la informacin respecto a P. salmonis debido a su deteccin relativamente reciente (1989) y a su particular condicin de patgeno intracelular obligado. La primera relacin entre bacteria patgena y pez implica una interaccin de adherencia. Los procedimientos de adhesin de las bacterias y las primeras etapas de la colonizacin, han sido escasamente estudiadas en los peces. Es muy probable que, dadas las condiciones del ambiente acutico, la capacidad de adhesin puede ser crucial para lograr establecer un proceso infeccioso. En distintas bacterias de peces salmondeos se ha observado, en estudios in vitro, que stas son capaces de adherirse tanto a clulas como al mucus de los peces; esto entrega una evidencia indirecta de la potencialidad de colonizacin de las superficies corporales de estos hospederos, por parte de estos microorganismos. Respecto de los sitios de entrada de estas bacterias, existe bastante documentacin que indica que tanto las superficies branquiales como intestinales son importantes zonas de colonizacin, por donde posteriormente ingresan los microorganismos a sus hospederos.

Las branquias tienen algunas caractersticas, anatmicas y fisiolgicas, que las hacen muy efectivas para el cumplimiento de sus funciones respiratorias, osmoreguladoras y excretoras, pero, que a su vez, facilitaran la colonizacin y el ingreso de las bacterias. Entre las particularidades que contribuyen a que las branquias sean probablemente el sitio de entrada ms comn, se pueden mencionar: a) una gran superficie de interaccin con el medio externo b) una estrecha separacin entre el medio acutico y los capilares de la laminillas secundarias c) una gran irrigacin sangunea y d) el permanente flujo de agua que pasa a travs de ellas. En efecto, se ha demostrado que las branquias son el sitio de entrada de partculas inertes y de agentes patgenos bacterianos y virales. Se ha observado en experimentos con A. salmonicida que estas bacterias tanto vivas como muertas son incorporadas en las branquias y, en el caso de Y. ruckeri, se ha descrito este mismo fenmeno al emplear bacterias inactivadas. Para R. salmoninarum no se ha documentado el ingreso por esta va; pero, es probable que ello ocurra debido a que se producen infecciones sistmicas con esta bacteria luego de baar los peces con suspensiones de dicho microorganismo. La infeccin por la ruta gastrointestinal (GI) en peces de estados post larvales, cuando ya se han desarrollado las secreciones gstricas, presenta problemas para algunos patgenos. Para A. salmonicida, aunque es posible reproducir la enfermedad va per os, la va GI es le es hostil y probablemente no es la ruta que emplea en la naturaleza. Para otros patgenos, sin embargo, esta va no parece presentarles dificultades; as, la enfermedad bacteriana del rin se establece fcilmente, alimentando a los salmones con materiales infectados con R. salmoninarum. Es probable que Y. ruckeri tambin invada a los salmones a travs de la va GI, debido a que se les puede infectar exitosamente, administrando oralmente la bacteria. En el caso de la piel de los peces salmondeos, no exista hasta ahora una demostracin concluyente de que este tejido intacto pudiese ser empleado como sitio de ingreso de algn patgeno; no obstante, para el caso de P. salmonis, lo hemos logrado documentar recientemente, como se describir ms adelante. Se ha descrito sin embargo que A. salmonicida puede aislarse desde mucus de la piel lo cual sugiere que esta ruta de infeccin debiera ser considerada para este patgeno. Otra va de infeccin de importancia es a travs de la ova, siendo R. salmoninarum la nica bacteria en que se ha demostrado consistentemente, se transmite dentro de estos gametos fertilizados, sin embargo crecientes evidencias sugieren que otros microorganismos, como Flavobacterium psychrophilum (Ekman et al., 1999) y P. salmonis tambin emplean este mtodo de infeccin (Larenas et al., 1999). Cualesquiera sea la va de ingreso de estos patgenos, la diseminacin de ellos ocurre principalmente a travs de la circulacin sangunea de los peces infectados. Los microorganismos se transportan a travs de la sangre en forma libre; pero, en el caso de R. salmoninarum, una proporcin importante de stos lo hacen incorporados dentro de fagocitos, principalmente monocitos. La capacidad de estas bacterias de resistir las actividades sricas y fagocticas, que se presentan en la circulacin sangunea de los peces como parte de sus mecanismos defensivos, son caractersticas de importancia para el xito en esta etapa de diseminacin del proceso infeccioso. Algunos autores han descrito que la presencia de la estructura proteica denominada capa A se asocia a las cepas ms virulentas de A.

salmonicida, la cual le conferira una proteccin contra la actividad bactericida del suero de los peces. La presencia de altos niveles de cido silico en A. salmonicida se relaciona con la prevencin de la activacin del sistema del complemento por la va alterna. Estudios in vitro e in vivo han mostrado que las cepas avirulentas de A. salmonicida son susceptibles a la ingestin y destruccin por macrfagos en tanto que las cepas virulentas no lo son. Adicionalmente, A. salmonicida produce una toxina caracterizada como una fosfolipasa de 25kDa de peso molecular que tiene una elevada actividad leucocitoltica. Por su parte, Y. ruckeri parece resistir los procesos fagocticos aunque los mecanismos que utilizara se desconocen. En cuanto a R. salmoninarum, esta especie sobrevive in vivo y se multiplica dentro de los fagocitos. Las caractersticas nicas de su pared celular pueden contribuir a su resistencia a la accin fagoctica. La protena de superficie p57 tambin puede cumplir un papel en este sentido ya que es un potente inhibidor de la explosin respiratoria que tiene lugar en los fagosomas de los macrfagos. Por otra parte, al estudiar las infecciones intracelulares de R. salmoninarum, se ha observado que muchas de estas bacterias son capaces de escaparse previo a la fusin del fagolisosoma, para entonces localizarse en el citoplasma de los fagocitos, y de este modo evaden la accin bacterioltica que tiene lugar en el fagosoma. Los patgenos para multiplicarse dentro del hospedero deben producir enzimas y otros factores que les permitan obtener sus nutrientes a expensas de ste. La adquisicin de hierro es importante para el desarrollo bacteriano y, en el caso de A. salmonicida, se le ha descrito la existencia de protenas de membrana externa (IROMP) que sirven de receptores para siderforos; estas protenas no se han detectado en R. salmoninarum. Las bacterias Y. ruckeri y A. salmonicida generan y exportan un importante nmero de productos extracelulares (ECPs) tales comos proteasas, hemolisinas y dermatotoxinas; adems, a A. salmonicida se le describe la produccin de citotoxinas. La variedad y potencia de estos ECPs es variable segn el grado de virulencia de las cepas. Por su parte, R. salmoninarum aparentemente no posee toxinas de efecto letal agudo sin embargo produce la protena p57 mencionada previamente, una proteasa de 100 kDa y un factor dermonecrtico de funcin poco conocida. La protena p57 parece ser un factor de virulencia importante ya que suprime la produccin de anticuerpos in vitro y, adems, parece inducir una tolerancia inmunolgica in vivo. Recientemente, se ha descrito que en infecciones experimentales en truchas arco iris (Oncorhynchus mykiss) y salmon chinook (Oncorhynchus tshawytscha), con una cepa de R. salmoninarum que tiene bajos niveles de la protena p57 en su superficie, denominada MT239, sta tiene una baja virulencia en comparacin con cepas que expresan concentraciones mayores de dicho antgeno (OFarrel et al., 1999). Los mecanismos de infeccin que presenta P. salmonis son menos conocidos que los de las otras bacterias aqu discutidas. En trabajos iniciales llevados a cabo en nuestro laboratorio se baaron peces, por tres minutos, en una suspensin de P. salmonis; en algunos de esos peces se les efectuaron lesiones en branquias y piel. En ninguno de los individuos estudiados, ya sea intactos o con lesiones, se logr reproducir la piscirickettsiosis, sin embargo estos s se infectaron ya que la bacteria se encontr en sangre, rin e hgado. Adems P. salmonis se detect, adherida a la superficie e incorporada al epitelio branquial, entre 45 y 90 minutos post bao de inmersin, para luego desaparecer desde los 180 minutos en adelante. En una investigacin subsiguiente, evaluamos diferentes rutas de entrada de P. salmonis en truchas arco iris (Oncorhynchus mykiss) clnicamente sanas y sin lesiones macroscpicas. Los mtodos

usados fueron: inyeccin intraperitoneal, inyeccin subcutnea, parche de contacto en piel, parche de contacto en branquias, intubacin intestinal e intubacin gstrica. La enfermedad se reprodujo con cada uno de esas rutas de infeccin empleadas y las mortalidades acumuladas obtenidas fueron 98, 100, 52, 24, 24 y 2 % respectivamente. En este ltimo trabajo se demostr que los principales sitios de ingreso de P. salmonis son las branquias y, sorprendentemente, tambin la piel en estado intacto. Esta capacidad patognica que ha demostrado P. salmonis parece ser muy particular ya que es el nico microorganismo patgeno de salmones en que se ha probado convincentemente que es capaz de penetrar la piel sin lesiones. Por otra parte la va gastrointestinal pareciera no ser una ruta usual de los procesos infecciosos originados por P. salmonis, ya que la mortalidad producida fue muy baja (2%) y en el anlisis microscpico de muestras de tejido se observ la bacteria fragmentada cuando se encontraba en la superficie gstrica. Estos hallazgos sugieren que puede ser importante investigar mtodos inmunoprofilcticos dirigidos a mejorar los niveles de inmunidad local en piel y branquias, como tambin sobre frmacos que acten a ese nivel, a fin depara evitar el ingreso de este patgeno a sus hospederos salmondeos. Agradecimientos Se agradece a las siguientes personas, ordenadas alfabticamente segn sus apellidos, debido a su valiosa contribucin en las investigaciones que dieron origen a los resultados que se incluyen en esta presentacin referidas a piscirickettsiosis: Jorge Contreras, John L. Fryer, Luis H. Garcs, Julio Larenas, Pablo Ojeda, Sandra Oyanedel, Basilio Prez y Patricia Pizarro.

Referencias seleccionadas Larenas, J., Prez, B., Hidalgo, L., Contreras, J., Smith,P. Vertical transmissionof Piscirickettsia salmonis in coho salmon (Oncorhynchus kisutch) under farming conditions. Abstract Book. 9th International Conference Diseases of Fish and Shellfish. 19-24th. September 1999. Rhodes Hellas. P069. OFarrel, C.L., Elliot, D., Strom, M.S., Winton, J.R., Landlot, M.L. In vitro and in vivo comparisons of virulent and attenuated Renibacterium salmoninarum strains. Abstract Book. 9th International Conference Diseases of Fish and Shellfish. 19-24th. September 1999. Rhodes Hellas. 0140. Smith, P. 1991. Aeromonas salmonicida cell surface characteristics by electrophoresis. M. Sc. theses. University of Stirling. Scotland. U.K. Smith, P., Zurita, L., Canale, F., Ferreira, A., Toro H. 1994. Elisa to determine antiK99 pilus antibody in the sera of normal and diarrhoeic calves. Veterinary Microbiology 40: 387-392. Smith, P., Pizarro, P., Ojeda, P., Contreras, J., Oyanedel, S., Larenas, J. Routes of entry of Piscirickettsia salmonis in rainbow trout Oncorhynchus mykiss.1999. Diseases of Aquatic Organisms 37: 165-172.

You might also like