[Año]

UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA

FACULTAD DE INGENIERIA QUIMICA Y
TEXTIL

LABORATORIO DE BIOQUIMICA Y
MICROBIOLOGIA

INFORME Nº3

PREPARACION DE MEDIOS DE
CULTIVO

CURSO : PI- 721 -A

INTEGRANTES : CONDOR SALAZAR, ENRIQUE

CORONEL ZARATE, H GIANINA
VIVANCO MUNAYCO, NELSON

PROFESORA : ING. JANET ROJAS OROSCO

2010-II
UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA
FACULTAD DE INGENIERIA QUIMICA Y TEXTIL

INDICE

Pág.

1. OBJETIVOS 3

2. FUNDAMENTO TEORICO 3

3. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL 5

4. RESULTADOS 7

5. CONCLUSIONES 8

6. RECOMENDACIONES 8

7. BIBLIOGRAFIA 8

8. ANEXO 9

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TRABAJO INTEGRADOR DEL CURSO 2
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INFORME DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA Y MICROBIOLOGIA Nº3

PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO

1. OBJETIVOS

Lograr una correcta preparación de medio de cultivo usado ( APD )

Aprender la técnica del vaciado del medio de cultivo en cajas de Petri y tubos
de ensayo además se saber la forma de trabajo en cada instrumento.
Realizar una buena presentación del medio de cultivo en el instrumento que lo
contenga.

2. FUNDAMENTO TEORICO

LOS MEDIOS DE CULTIVO

Uno de los sistemas más

importantes para la identificación
de microorganismos es observar su
crecimiento en sustancias
alimenticias artificiales preparadas
en el laboratorio. El material
alimenticio en el que crecen los
microorganismos es el Medio de
Cultivo y el crecimiento de los
microorganismos es el Cultivo. Para
que las bacterias crezcan
adecuadamente en un medio de
cultivo artificial debe reunir una
serie de condiciones como son:
temperatura, grado de humedad y
presión de oxígeno adecuado, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad.

Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento

necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante. La mayoría de
las bacterias patógenas requieren nutrientes complejos similares en composición a los
líquidos orgánicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos medios de cultivo
es una infusión de extractos de carne y Peptona a la que se añadirán otros
ingredientes. El Agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparación
de medios de cultivo. En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos
materiales de enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa,
bilis, etc. Los hidratos de Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para
incrementar el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentación
de los microorganismos que ayuden a identificarlos. El suero y la sangre completa se
añaden para promover el crecimiento de los microorganismos menos resistentes. Por
su aspecto físico.

Los medios de cultivo preparados pueden ser clasificados por su aspecto en:
Líquidos, Semisólidos, Sólidos. Y por su uso en: I.- Medios de cultivos básicos II.- Medios
de cultivos especiales como: mejorados, selectivos, diferenciales, de transporte.

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CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Para el aislamiento, estudio y clasificación de

los microorganismos, es necesario utilizar un medio de
cultivo en el que dispongan de las sustancias
orgánicas e inorgánicas necesarias indispensables
para el normal desarrollo de su metabolismo. En estos
medios, los microorganismos además de poder
multiplicarse, pueden manifestar características de
crecimiento y propiedades bioquímicas; aspectos de
gran importancia para su clasificación. Estos
preparados estériles que poseen los elementos necesarios para el desarrollo de un
microorganismo, se denominan medios de cultivos y pueden dividirse por su:

A) SEGÚN SU ASPECTO

Medios líquidos. Se emplean fundamentalmente

para cultivar los microorganismos y obtener
grandes cantidades de los mismos o bien la
producción de metabolitos específicos La
multiplicación bacteriana en los medios de
cultivos líquidos se manifiesta generalmente por
el enturbiamiento de éste; estimular y promover
la selección de algún o algunos
microorganismos e impedir que otros se
multipliquen; e identificar al microorganismo
estudiado mediante pruebas bioquímicas.

Medios semisólidos.- Se utilizan para

identificaciones bioquímicas y averiguar si el
germen estudiado es móvil. Los medios
semisólidos tienen una consistencia blanda.

Medios sólidos.- Se utilizan para obtener

colonias aisladas de microorganismos. Los
medios sólidos constituyen la mayor parte de
los medios de cultivo que se emplean en
Microbiología. , En los medios de cultivos sólidos la multiplicación bacteriana se
manifiesta por una formación macroscópica denominada colonia bacteriana,
que es el resultado de la multiplicación de una sola célula bacteriana.

B) SEGÚN SU USO

Medios de cultivos básicos. Se caracterizan por ser pobres en material nutritivo,

de manera que su uso es muy restringido, constituyen la base para la
preparación de otros medios. Como ejemplo pueden citarse el caldo
peptonado y el Agar-Agar corriente.

Medios de cultivos especiales. Entre estos se encuentran:

a) Medios mejorados. En general son los mismos medios básicos a los que se les
agrega una sustancia enriquecedora como sangre, suero, etc. El uso de
estos medios es universal y está orientado especialmente a obtener buen

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desarrollo de cualquier tipo de bacteria, se utilizan en primera instancia en

el aislamiento bacteriano, ya sea a partir de otros cultivos o de productos
patológicos. Los medios de este tipo de uso más frecuente son: Agar
tripticasa-sangre, caldo tripticasa, Agar chocolate, medio de Mueller-
Hinton.

b) Medios selectivos. Son medios que contienen sustancias que impiden o

limitan el crecimiento de algunas especies microbianas y permiten el
desarrollo de otras. consiste en aislar un microorganismo de un sustrato que
contiene numerosas otras especies. Se incluyen en este grupo el agar cristal
violeta para el aislamiento de bacterias Gram (-) y el agar telurito de
potasio para el aislamiento de bacterias Gram (+).

c) Medios de cultivos diferenciales. Se emplean para demostrar alguna

propiedad bioquímica de la bacteria como degradación de hidratos de
carbono, proteínas, hidrólisis de la urea, etc., contienen indicadores de
ácido base, redox o sustancias que detectan cambios en el medio o en las
características típicas de las colonias el estudio en estos medios debe
realizarse empleando cepas bacterianas puras. Existen numerosos medios
de este tipo, de uso preferencial en la bioidentificación de bacilos Gram (-)
ya que ellos no tienen características muy distintivas en las colonias o
cultivos en general. Entre los de uso más corriente se encuentran: Agar
fierro-triple-azúcar (TSI agar Medio de SIM, Caldo glucosado fosfatado,
Voges-Proskauer o del rojo de metilo, Medio agar-citrato de sodio (Medio
de Simmons- Medio caldo urea,

d) Medios de transporte. Sirven para transportar los especímenes que

contienen a los microorganismos, del sitio de la toma del producto hasta el
laboratorio donde va a efectuarse el estudio. Estos medios impiden que se
altere la proporción original de la flora microbiana en los especímenes.

3. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

Lo que vamos a utilizar en el laboratorio son levaduras y hongos para hacer su

medio de cultivo. Para medio solido se utiliza una concentración de 15 g/L.
Para nuestras experiencias utilizaremos APD estandarizado que es 39g/L

Para nuestra experiencia se prepara 50 ml así que :

Así que para nuestra experiencia pesaremos 2g de APD

Para comenzar nuestra experiencia se limpia nuestra mesa de laboratorio se

pasa trapo para sacar el polvo y después de ello se pasa alcohol a la mesa de
trabajo, los tubos de ensayo y el matraz a utilizar en nuestra experiencia ya se
desinfecto en la práctica anterior. En nuestra práctica de laboratorio se utilizara
probeta que solo bastara lavarla con detergente y agua des ionizada para la
práctica

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Se midió 50 ml de agua desionizada en la probeta

y se vertió en el matraz junto con los 2g de APD,
luego se procede a la disolución mediante el baño
maría (la olla se llena con agua menos de la mitad
para que este cubierto el matraz) se quedara en
baño maría hasta desaparecer los grumos, todo
ello es con la finalidad de homogenizar nuestra
mezcla. (Fig a)

Luego se distribuye el contenido del matraz en los

tubos de ensayo aproximadamente se vierte 10 ml
en cada tubo y el resto se queda en el matraz.
Fig. a
Luego los tubos y el matraz con el medio de
cultivo preparado se colocan en la autoclave a
condiciones de presión de 15 psia, temperatura
120ºC por 45 minutos para que se esterilicen.
(Fig b)

Después del tiempo se saca los tubos y el matraz, a

los tubos de ensayo se cierra las tapas al salir de la
autoclave y se les da una ligera inclinación para
poder tener más área superficial al momento que
este se solidifique. Esta es la preparación del medio
de cultivo en un tubo de ensayo. (Fig c)

Se enciende el mechero para así poder tener un

radio de esterilización y poder verter el contenido
del matraz (medio de cultivo) a la caja Petri y es Fig. b
allí donde se espera que solidifique este medio.

Cuidadosamente se vierte el medio de cultivo

dentro de la caja Petri levantando solo una
pequeña parte de la tapa de la caja para así
minimizar la contaminación. (Fig. c)

Se deja enfriar las cajas Petri cerradas y cerca

del mechero para asegurar que se encuentren
un ambiente estéril y libre de bacterias que
contaminen en medio de cultivo. (Fig. d)
Fig. c

Fig. e Fig. d

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ESQUEMA DEL PROCEDIMIENTO

4. RESULTADOS

Se realizó la preparación de medios de

cultivo y se presentó en diferentes materiales,
en dos cajas Petri y en dos tubos de ensayo.
La elaboración del medio de cultivo fue
exitosa debido a que era homogéneo
además de no alterar su coloración ni
consistencia a lo largo del procedimiento
experimental.
Se logró adquirir los conocimientos necesarios
para la elaboración de medios de cultivo a
su vez de adiestrar en la elaboración del mismo.

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5. CONCLUSIONES

Los medios del cultivo son sistemas que tienen nutrientes, humedad, oxígeno y
un pH adecuado que permiten el crecimiento de un microorganismo.
Los tipos de cultivos dependen del tipo de microorganismo que se quiere criar
ya que cada tipo de microorganismo requiere un tipo de medio de cultivo
particular.
La caja Petri es el material que tiene mayor región de cultivo dando lugar a
que los microorganismos consuman y consigan alimentos rápidamente.
Los tubos de ensayos permiten variar el área de región de cultivo haciéndolas
más eficientes al momento de inclinarlas (1 cm por lado).
Los mecheros tienen un radio de esterilidad que nos garantiza que el
microorganismo no se contaminaran
Un proceso bioquímico hace abaratar costos porque no se utiliza presiones
altas ni mucha energía
La biotecnología hoy en día se en causa hacia la modificación genética como
los productos transgénicos
La biotecnología es la tecnología que se basa en la biología y que supone un
avance en la ciencia que además ya está más que introducida en campos
como agricultura, farmacia, ciencia de los alimentos, medioambiente y
medicina hoy en día.

6. RECOMENDACIONES

Para obtener buenos resultados mantenga ordenado y esterilizado sus

materiales.
Los medios de cultivos deben ser preparados pensando exactamente la
cantidad que se va a utilizar y siguiendo las instrucciones de la guía de
laboratorio.
Trabajar con el mechero bunsen para evitar que el cultivo se contamine, ya
que este proporciona un radio de protección.
Los tubos de ensayo no deben ser guardados verticalmente en la gradilla sino
colocarlos inclinados sobre una franela.
No destapar las cajas de Petri, sino hasta el momento que vayan a ser
utilizadas. Es conveniente colocarse un cubre bocas la persona que va a
realizar el vaciado y evitar hablar en todo momento para no contaminar el
medio de cultivo.
Es conveniente mantener el mechero encendido y trabajar cerca del área
estéril al momento del vaciado en las cajas de Petri. Levantar la tapadera de la
caja Petri con la mano izquierda , sin soltarla y sin retirarla demasiado de la
base de la misma caja mientras que con la mano derecha tomar el matraz
que contiene el medio de cultivo y realizar el vaciado de aproximadamente
15 ml. A 20 ml del medio de cultivo por caja procurando que no se forman
burbujas, se procede a tapar la caja inmediatamente

7. BIBLIOGRAFIA

Alcaraz Munguia Monica / Manual de Practicas de Microbiología / Universidad de

Colima / México / 2009.

Páginas web consultadas

http://www.solociencia.com/biologia/07092105.htm, 23.06 pm , 02 de mayo

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8. ANEXO

MICROBIOS ANTIGUOS SEPULTADOS EN GLACIARES PODRÍAN VOLVER A LA VIDA

(NC&T) El hallazgo es significativo porque los científicos no sabían hasta ahora con la
suficiente certeza si organismos congelados tan antiguos podrían revivir fácilmente o
por cuánto tiempo son viables las células bajo ciertas circunstancias después de ser
congeladas.
Kay Bidle, uno de los autores principales del estudio, y profesor de ciencias marinas y
costeras en Rutgers, y sus colaboradores Paul Falkowski (Rutgers), SangHoon Lee
(Instituto de Investigación Polar de Corea) y David Marchant (Universidad de Boston),
fundieron cinco muestras de hielo cuya edad era de entre 100.000 años y 8 millones,
para liberar los microorganismos atrapados en su interior.

Los investigadores querían averiguar cuánto tiempo podrían las células permanecer
viables y cuán intacto estaba su ADN en el hielo más reciente y en el más viejo.

Los microorganismos son más viables en el hielo joven que en el viejo, como podía
esperarse. En los experimentos, los investigadores trataron de hacerlos crecer en
medios de cultivo. Los microorganismos procedentes de hielo joven se duplicaban
cada dos días. En cambio, los microorganismos de las muestras de hielo más viejo
crecieron muy despacio, duplicando su cantidad tan sólo cada 70 días.

Los microorganismos del hielo más antiguo no sólo tardaban más en crecer: los
investigadores eran incapaces de identificarlos cuando crecían, porque su ADN se
había deteriorado. De hecho, el ADN en las cinco muestras examinadas mostró un
"declive exponencial" después de 1,1 millones de años, restringiendo así la
preservación geológica de microbios en ambientes helados y su posible intercambio
de material genético con los océanos, una preocupación creciente ante la amenaza
de derretimiento impuesta por el calentamiento global sobre bloques de hielo cuyo
interior potencialmente sembrado de material biológico desconocido ha
permanecido sellado durante miles o millones de años.

De todos modos, para la investigación, se escogieron los glaciares antárticos no sólo

porque contienen el hielo más antiguo del planeta, sino también porque las regiones
polares están expuestas a la mayor radiación cósmica. En ese sentido, es la radiación
cósmica la principal causa de que el ADN se descomponga en pedazos con el paso
del tiempo geológico. La mayor parte de los organismos no pueden reparar este
daño. Con menor incidencia de radiación cósmica, la preservación puede ser mejor.

Dado que el ADN se había deteriorado tanto en el hielo antiguo, por culpa de los
rayos cósmicos en buena medida, los investigadores también han llegado a la
conclusión de que aunque la preservación de microbios y sus genes en cometas, ricos
en hielo de agua, podría haber permitido la transferencia de material genético entre
planetas, debido a que el flujo de radiación cósmica en el espacio es
extremadamente alto, las posibilidades de que la vida en la Tierra hubiera sido
sembrada por material genético externo a nuestro sistema solar son remotas.

Las cinco muestras de hielo usadas en el experimento fueron tomadas de dos valles de
las Montañas Transantárticas.

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